甘蓝型油菜的遗传转化_杜建中

综述文章编号：１００９－０００２（２００８）０５－０７７２－０５

甘蓝型油菜的遗传转化

杜建中，孙毅，曹秋芬，郝曜山，刘龙龙，贺健

山西省农业生物技术研究中心，山西太原０３００３１

［摘要］甘蓝型油菜的各种外植体经遗传转化、组织培养后可以再生为转基因植株，但再生频率会因外植体的基因型、年龄、培养基添加成分和农杆菌共培养的不同而发生变化。转化方法包括农杆菌介导转化、基因枪法、花粉介导法、ＰＥＧ介导法等，其应用前景非常广阔。甘蓝型油菜的遗传转化在其品质改良、抗逆性提高、雄性不育系的获得和一些特殊性状方面都取得了很大成就。简要介绍甘蓝型油菜的再生体系建立、转化方法及所取得的部分成就。

［关键词］甘蓝型油菜；转化；无载体转化；农杆菌；性状改良

［中图分类号］Ｑ９４３．２［文献标识码］Ａ

ＧｅｎｅｔｉｃＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＲａｐｅｓｅｅｄ（ＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．）

ＤＵＪｉａｎ－Ｚｈｏｎｇ，ＳＵＮＹｉ，ＣＡＯＱｉｕ－Ｆｅｎ，ＨＡＯＹａｏ－Ｓｈａｎ，ＬＩＵＬｏｎｇ－Ｌｏｎｇ，ＨＥＪｉａｎ

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［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｃａｎｂｅａｃｑｕｉｒｅｄｆｒｏｍｖａｒｉｏｕｓｏｆｅｘｐｌａｎｔｓｏｆｒａｐｅｓｅｅｄ（ＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．）ｂｙｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｆｒｅｑｕｅｎｃｙｄｅｐｅｎｄｓｏｎｍｅｄｉｕｍｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ，ｇｅｎｏｙｐｅｓ，ａｇｅｏｆｅｘｐｌａｎｔｓａｎｄＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｃｏｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ．ＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｉｎｃｌｕｄｅｄＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ－ｍｅｄｉａｔｅｄ，ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｐｏｌｌｅｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ＰＥＧ－ｍｅｄｉａｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｅｔｃ．，ａｎｄｔｈｅｙｗｅｒｅａｌｌｐｒｏｍｉｓｉｎｇ．ＡｃｈｉｅｖｅｍｅｎｔｓｏｎｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＢ．ｎａｐｕｓｉｎｃｌｕｄｅｉｍｐｒｏｖｉｎｇｑｕａｌｉｔｙ，ｅｎｈａｎｃｉｎｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｓ，ｏｂｔａｉｎｉｎｇｎｕｃｌｅａｒｍａｌｅｓｔｅｒｉｌｉｔｙｓｙｓｔｅｍｅｔｃ．．Ｉｎｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅ，ｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓｓｅｓｏｎｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ，ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｓｏｍｅｃｏｎｔｒｉｂｕ－ｔｉｏｎｓｉｎｔｈｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｒａｐｅｓｅｅｄｗｅｒｅｄｉｓｃｕｓｓｅｄ．

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长久以来，人们通过驯化和修饰甘蓝型油菜（ＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．）品种以使其适应日益变化着的需求。今天，甘蓝型油菜已成为世界上重要的油料作物之一，有一系列的油菜品种可用于人类消费、动物饲料或用于食品或非食品业的加工。然而，甘蓝型油菜的生产时常会受到病虫害的威胁。如同翅昆虫蚜虫是一种最严重的油菜害虫，它通过饲用直接导致宿主植株生理功能的严重损坏；另一方面昆虫也可作为诸如烟草花叶病毒和花椰菜花叶病毒等重要病毒的载体间接引起油菜病害［１］。目前，控制病虫害的手段主要包括农药喷雾、栽培管理及生物防治等，这些措施的实施需要大量的人力和物力投入。值得注意的是，在控制病虫害取得最初的成功之后，由于害虫和病原体的繁殖周期快、能在较短时间内产生对农药的抗性，会导致油菜病虫害再度泛滥。因此，科学家们正在通过常规育种和遗传工程相结合的手段，力图提高甘蓝型油菜的产量、品质和抗逆性。遗传工程技术提供了把新基因导入并整合到受体植株基因组的机会和希望，尤其是那些能赋予受体植株抗虫性或抗病性的基因，而且这些基因在受体植株中的表达及遗传方式就像孟德尔遗传性状一样可被观察到［２］。也就是说，采用遗传工程手段，将外源基因导入受体而赋予或提高受体植株抗病虫害性能。自从Ｏｏｍｓ等［３］首次获得转基因甘蓝型油菜植株以来，甘蓝型油菜的遗传转化研究已取得很大进展，并且成绩斐然。李学宝等［４］通过油菜子叶外植体－农杆菌共培养法将苏云金杆菌杀虫蛋白（Ｂｔ）基因导入甘蓝型油菜，获得了抗甜菜夜蛾等幼虫的转基因植株。王新发等［５］用组成型表达几丁质酶和β－１，３－葡聚糖酶基因转化甘蓝型双低杂交油菜亲本恢复系和保持系，获得了转基因恢复系和保持系植株，对转基因植株进行菌核病菌丝体接种和大田自然侵染鉴定，筛选得到高抗菌核病的转基因育种材料。在此，我们将介绍甘蓝型油菜遗传转化体系的建立、转化方法，以及转化植株在品质改良方面所取得的成就。之所以强调甘蓝型油菜，是因为其研究成果具有先进性，受到人们的普遍重视。

１遗传转化体系的建立

由于甘蓝型油菜容易进行组织培养操作，使得它成为探索以育种为目的的遗传转化技术的适合材料。研究人员通过改变培养基中激素的浓度与配比，筛选最佳培养条件，结合后文将要介绍的各种转化方法，建立了高效的遗传转化体系，获得了较高的再生率。林良斌等［６］以甘蓝型油菜湘油１３为试验材料，在优化培养基成分的基础上，用子房注射法将Ｂｔ毒蛋白基因导入油菜，

［收稿日期］２００７－１２－２３

［基金项目］山西省自然科学基金（２０００１０９６）；

山西省农业科学院高新项目（ＹＧＸ０７０３）

［作者简介］杜建中（１９６０－），男，硕士，副研究员，

（Ｅ－ｍａｉｌ）ｄｕｊｉａｎｚｈｏｎｇ１９６０＠１６３．ｃｏｍ

卡那霉素抗性植株的获得频率达到１２．８％。进而，甘蓝型油菜植株各部分组织都可以作为外植体进行组织培养，并成功得到了再生苗。这些外植体包括下胚轴［７］、子叶［８］、茎［９］、叶片［１０］、表皮及亚表皮细胞的薄细胞层［１１］、根［１２］、花药［１３］、小孢子［１４］和原生质体［１５］。组织培养涉及分子间复杂的相互作用，因此能否取得成功在很大程度上取决于经验及资料。几乎所有的能被想到的参数都必须进行研究，如培养基、基因型［６］、不同外植体及所用生长调节剂数量的变化等［１６］，但都要求起步材料应处于良好的生理状态。此外，用作外植体进行遗传转化的油菜组织还有叶圆盘［１７］、花柄［１８］、花粉［１９］、子叶节［２０］、种子［２１］、植株［２２］和茎节间［１８］。研究还发现，共试材料的年龄对再生率的影响也很大［２３］。Ｏｖｅｓｎａ等［２４］还报道了甘蓝型油菜种内及种间在再生能力方面的差异。

研究发现，有些材料易于再生，而另外一些材料则很难再生，甚至不能再生［２５］。Ｎａｒａｓｉｍｈｕｌｕ等［２６］报道，细胞质因子与再生能力有关。但是，即使再生困难的材料，在培养基中加入适量乙烯抑制剂和硝酸银，也能得到再生苗［２７］。有研究表明，硝酸银对苗的再生有很大作用，尤其当标记基因为卡那霉素时更是如此［２８－２９］。此外，在甘蓝型油菜的转化过程中，仍存在如下胚轴对与农杆菌的共培养非常敏感，甚至达到在后期培养过程中坏死程度的问题，其解决办法是在转化前对愈伤组织进行预培养，推迟植物毒素选择的开始时间［２４］，或者选用保育培养方法［３０］。预培养还有利于在ＤＮＡ合成和分裂时期伴随着ＤＮＡ整合而诱导细胞分裂［３１］。但是Ｊａｎｓｓｅｎｓ等［３２］报道，预培养时间过长会增加多拷贝转化体的频率，因此预培养的时间应尽量地短。

再生过程中玻璃化苗偶尔出现，直接影响转化过程。但ｄｅＢｌｏｃｋ等［３３］和钟蓉等［３４］先后报道，在培养基中降低细胞激动素和硝酸银的含量、增加琼脂粉含量可解决苗玻璃化的难题。

２转化方法

用于转化甘蓝型油菜的方法包括农杆菌介导法和ＤＮＡ直接吸收法，下面分别予以简单介绍。

２．１农杆菌介导的转化

最初甘蓝型油菜转化的研究主要集中在探索各种农杆菌菌株感染不同基因型甘蓝型油菜的能力。研究发现甘蓝型油菜对大部分胭脂碱农杆菌菌株比较敏感，转化效率较高，但这种敏感程度随品种而异；而对章鱼碱农杆菌菌株则不敏感，转化频率较低［３５］。农杆菌介导法是利用外植体在与携带目的基因的农杆菌进行共培养时，Ｔ－ＤＮＡ序列可整合到受体基因组并表达的现象，将目的基因与Ｔ－ＤＮＡ序列侧连，通过转化使目的基因导入并整合到受体基因组。

王景雪等［２６］利用农杆菌介导法转化甘蓝型油菜下胚轴，建立了油菜农杆菌介导的遗传转化体系。Ｃｌｏｕｇｈ［３６］把真空渗透转化法（ｖａｃｕｕｍｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ，Ｂｅｃｈｔｏｌｄ）［３７］演变为更简便的农杆菌介导ｆｌｏ－ｒａｌ－ｄｉｐ转基因方法，该法只须将农杆菌菌液与植株的花接触而不需要进行真空处理，所不同的是，在菌液中加入一种表面活性剂ＳｉｌｗｅｔＬ－７７，并首次应用该法转化拟南芥获得成功。

用二价载体转化甘蓝型油菜，生根农杆菌和根瘤农杆菌可以同时使用，这样Ｒｉ质粒Ｔ－ＤＮＡ诱导转基因植物生根，载体Ｔ－ＤＮＡ携带目的基因整合到受体基因组中［３８－３９］。

虽然用子叶柄作为外植体能得到最有效的转化体系，但实际操作时使用较多的还是下胚轴，这是因为使用下胚轴操作方便，也能够产生较多的转化植株［４０］。

２．２ＤＮＡ直接吸收法

转化植物的另一种方法是ＤＮＡ的直接吸收。这个方法的优点是不依赖生物载体，直接将工程ＤＮＡ引进受体细胞，故部分解决了物质间的相互作用问题。当然，导入的基因片段仍须带有标记基因，如β－葡萄糖苷酶基因［４１］、潮霉素基因［４２］等。ＤＮＡ直接吸收法包括花粉介导法、ＰＥＧ介导法、显微注射法、基因枪法、激光微束穿刺法等。

杜春芳等［１９］以甘蓝型冬油菜品种晋油７号为受体，以载有ＧＵＳ基因的质粒ｐＢＩ１２１为供体，将质粒和花粉在７．５％的蔗糖等渗溶液中超声波处理，再将花粉授粉到柱头上，随着花粉管的萌发进入胚囊，参与有丝分裂，将外源质粒转入受体材料。本方法可避免繁重的组织培养操作，简单实用，而且转化率比农杆菌介导法大幅提高，可广泛应用于育种实践中。

ＰＥＧ介导法效率高，转化频率高。Ｇｏｌｚ等［４３］用ＰＥＧ介导法将来自Ｂ．ｎｉｇｒａ的潮霉素基因导入甘蓝型油菜，获得了潮霉素抗性植株。

显微注射法以原生质体为受体，将外源基因直接注入生物的生殖细胞中。林良斌等［４４］用子房注射法转化甘蓝型油菜，发现转化频率高达１２．８％。

业已证明基因枪法是一种能转化甘蓝型油菜，且转化率较高的技术。熊兴华等［４５］用基因枪法将反义脱饱和酶基因导入甘蓝型油菜，获得了转基因植株。

激光微束穿刺法是利用激光破坏细胞膜的通透性，从而使外源ＤＮＡ能够导入细胞内的技术。侯丙凯等［４６］首次报道利用激光微束穿刺法将杀虫蛋白基因导入油菜，并获得抗虫转基因植株的研究结果。

目前，ＤＮＡ直接吸收法也存在许多问题，如原生质体和小孢子的再生需要较长时间的组织培养过程。这就带来了产生亚克隆的潜在危险性。

乙酰丁香酮或类似酚类化合物可诱导农杆菌的毒力［４７］。进一步研究还发现，在共培养前或共培养过程中加入乙酰丁香酮能促进甘蓝型油菜的转化，提高转化速度［３９］。

３以育种为目的的转化

多年来，不断有研究报道甘蓝型油菜转基因的成就及生物技术在该领域中的杰出贡献，下面就此简单介绍。

３．１提高油的质量和含量

通过转化，使转化植株中的脂肪酸成分发生变化。这方面具有商业价值的第一个结果是将来自加利福尼亚海湾油菜种子中的月桂酸（１２∶０）载体蛋白引进受体植株，结果是转化体植株中月桂酸的积累量达到了５０％以上［４８］。Ｊｏｎｅｓ等［４９］将软脂酸（１６∶０）载体蛋白硫脂酶导入油菜，使转化油菜种子中软脂酸的比例增加，而硬脂酸（１８∶０）的比例降低。Ｋｎｕｔｚｏｎ等［５０］将种子特异性反义硬脂酰载体蛋白脱饱和酶导入油菜，转基因油菜中脂肪酸饱和程度会受到影响，硬脂酸（１８∶０）含量增加３０％。陈锦清等［５１］将反义ＰＥＰ基因导入油菜，转基因油菜植株中油的平均含量比对照提高６．４％～１８％。

３．２提高种子中的必需氨基酸含量

用富含甲硫氨酸的白蛋白基因转化油菜，转化植株种子中储藏蛋白的生物学价值得到提高，甲硫氨酸含量增加３３％［５２］。Ｆａｌｃｏ等［５３］将赖氨酸合成途径中对赖氨酸反馈调节不敏感的二氢吡啶甲酸合成酶（ＤＨＰＳＨ）基因和天门冬氨酸激酶基因插入油菜基因组中，这样转基因植株可绕过赖氨酸生物合成的反馈调节途径，从而使种子中赖氨酸含量提高５倍。

３．３降低芥子油苷

芥子油苷含量过高会降低其食用价值。传统育种技术可以去除脂肪族芥子油苷，但芳香族芥子油苷仍然存在。根据芥子油苷的色氨酸合成途径原理，将色氨酸脱氢酶基因导入油菜，转基因油菜种子中吲哚芥子油苷的含量降低到３％［５４］。

３．４抗除草剂

通过遗传工程将除草剂抗性基因导入甘蓝型油菜后，转基因植株的特征之一是提高了对除草剂的抗性。ｄｅＢｌｏｃｋ等［２９］将ｂａｒ基因导入油菜，使得转基因植株的膦丝菌素（ｇｌｕｆｏｓｉｎａｔｅ）抗性提高。Ｍｉｋｉ等［５５］将乙酰羟酸合成酶基因的突变体导入油菜，后者获得了硫脲（ｓｕｌｆｏｎｙｌｕｒｅａ）和咪唑酮（ｉｍｉｄａｚｏｌｉｎｏｎｅ）的抗性。王景雪等［５６］将编码５－烯醇式丙酮酸莽草酸－３－磷酸合成酶（ＥＰＳＰＳ）的ａｒｏＡ－Ｍ１２基因和编码苏云金杆菌毒蛋白的Ｂｔｓｌｍ基因导入甘蓝型油菜优良品种湘油１５号中，获得了抗草甘膦的转基因植株。３．５抗真菌病害

几丁质酶能够分解真菌菌丝，因而含有几丁质酶的植物本身就具有了预防真菌侵害的天然机制。如何增加植物体内诸如这类酶的含量，提高植物对真菌病害的抗性，是遗传工程所要考虑的问题。用３５Ｓ－几丁质酶基因转化甘蓝型油菜，转基因植株中几丁质酶活性增高，同时立枯丝核菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ）引发的症状发生延迟［５７］。王新发等［５］将组成型表达几丁质酶和β－１，３－葡聚糖酶的基因转化甘蓝型双低杂交油菜亲本恢复系和保持系，获得了高抗菌核病的转基因育种材料。陈雁等［５８］将葡聚糖酶基因和植物蛋白ＡＰ２４的基因导入甘蓝型油菜，获得了抗菌核病的转基因植株。

３．６抗病毒病害

用来自病毒抗性材料的病原物进行抗性导入通常是很困难的［５９］。Ｚａｃｃｏｍｅｒ等［６０］将长度为１００ｂｐ的萝卜黄叶斑病毒（ＴＹＭＶ）非编码末端序列插入氯霉素乙酰转移酶（ｃａｔ）的下游，并用于转化甘蓝型油菜，获得了抗萝卜黄叶斑病毒的转基因植株。Ｋａｒａｎ等［６１］用ｓｈｐｘｏａ基因转化烟草，转基因植株抗黑胫病的能力比对照提高２５％～３０％。王苏燕等［６２］将锤头型核酶（ＲＺ）和核酶突变体（ｍＲＺ）基因导入甘蓝型油菜湘油８号，攻毒试验证明转基因植株表现出对花椰菜花叶病毒（ＣａＭＶ）的高度抗病性，７５％的植株不表现任何症状。

３．７抗虫

合成苏云金杆菌杀虫晶体蛋白的基因在植物体内能很好地表达，其转化甘蓝型油菜及后代均具有抗油菜菜粉蝶的能力［６３］。林良斌等［６４］用Ｂｔ毒性蛋白基因转化甘蓝型油菜湘油１３，转基因植株的抗虫性提高了７２％～９９％。官春云等［６５］将Ｂｔ基因导入油菜，获得了我国首个转基因抗虫油菜品系。

３．８授粉体系

对于甘蓝型油菜的Ｆ１代杂交种生产而言，控制好授粉体系是很重要的。应用花粉特异性启动子控制的嵌合ＲＮＡ酶基因、芽孢杆菌ＲＮＡ酶基因和ＲＮＡ酶Ｔ１可建立核雄性不育体系［６６－６７］。钟蓉等［２８］将ＴＡ２９－Ｂａｒｎａｓｅ（芽孢杆菌ＲＮＡ酶）雄性不育基因导入甘蓝型油菜浙优油１号和２１３３，９０％的转基因植株转化为雄性不育植株，而且８０％的植株在温度为２５℃时为雄性不育植株，证明这些不育植株可能属于温度敏感型。

３．９特种用途的转基因油菜

Ｍｉｓｒａ等［６８］用人类金属硫蛋白基因转化甘蓝型油菜，转化植株可在高浓度ＣｄＣｌ２土壤中萌发。用此方法可清除重金属对土壤的污染。

Ｖａｎｄｅｋｅｒｃｋｈｏｖｅ等［６９］用编码神经肽亮氨酸脑激素的序列取代甘蓝型油菜种子中储藏蛋白基因的序列，并侧连于胰蛋白酶切点，构建载体后导入油菜，在转基因种子中分离储藏蛋白，用胰蛋白酶消化，可获得脑激素。

４结语

植物转化的概念是组织培养再生和农杆菌、外植体等相关参数的综合，包括毒力诱导、Ｔ－ＤＮＡ激活转移和整合等。由于这些因素的相互作用，建立一个最佳试验条件是相当困难的。

非载体转化虽然可避免一些与农杆菌有关的变数，但同时也带来了新的变数。因此，选用哪种转化方法，要根据自己的经验和工作条件而定。

植物的遗传转化仍处于发展和探讨阶段。目前的主要任务是：在农杆菌介导方面，以建立最佳再生体系，提高转化频率，特别是不易转化的材料；在非载体转化方面，将众多的转化方法简化、优化，使在不需要特别设备和条件的基础上，有更多的研究人员能够在该领域发挥效用。

针对转基因植物的安全性问题，一方面需要研究人员确实负起责任，绝对不能滥用转化基因，并同时用科学知识去说服不了解情况的人们；另一方面，要进行大量的转基因作物安全性的研究工作，如转基因是否随花粉漂移，漂移距离如何，对人及动物有无毒害，对环境影响如何等。

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［２４］ＯｖｅｓｎａＪ，ＰｔａｃｅｋＬ，ＯｐａｔｒｎｙＺ．Ｆａｃｔｏｒｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇｔｈｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｙｏｆｏｉｌｓｅｅｄｒａｐｅａｎｄｃａｕｌｉｆｌｏｗｅｒｉｎｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉ－ｍｅｎｔｓ［Ｊ］．ＢｉｏｌｏｇｉａＰｌａｎｔａｒｕｍ，１９９３，３５（１）∶１０７－１１２．

［２５］ＭｕｒａｔａＭ，ＯｒｔｏｎＴＪ．ＣａｌｌｕｓｉｎｉｔｉａｔｉｏｎａｎｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｉｅｓｉｎＢｒａｓｓｉｃａｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌＴｉｓｓｕｅＯｒｇａｎＣｕｌｔｕｒｅ，１９８７，１１（２）∶１１１－１２３．

［２６］ＮａｒａｓｉｍｈｌｕＳＢ，ＰｒａｋａｓｈＳ，ＣｈｏｐｒａＶＬ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎ－ｅｒａｔｉｏｎｒｅｓｐｏｎｓｅｓｏｆｄｉｐｌｏｉｄＢｒａｓｓｉｃａａｎｄｔｈｅｉｒｓｔｎｔｈｅｔｉｃａｍ－ｐｈｉｄｉｐｌｏｉｄｐｒｏｄｕｃｔｓ［Ｊ］．ＰａｎｔＣｅｌｌＲｅｐｏｒｔｓ，１９８８，７（７）∶５２５－５２７．

［２７］ＣｈｉＧＬ，ＢａｒｆｉｅｌｄＤＧ，ＳｉｍＧ－Ｅ，ｅｔａｌ．ＥｆｆｅｃｔｏｆＡｇＮＯ３ａｎｄａｍｉｎｏｅｔｈｏｘｙｖｉｎｙｌｇｌｙｃｉｎｅｏｎｉｎｖｉｔｒｏｓｈｏｏｔａｎｄｒｏｏｔｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓｆｒｏｍｓｅｅｄｌｉｎｇｅｘｐｌａｎｔｓｏｆｒｅｃａｌｃｉｔｒａｎｔＢｒａｓｓｉｃａｇｅｎｏｔｙｐｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌＲｅｐｏｒｔｓ，１９９０，９（４）∶１９５－１９８．

［２８］ＭｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙＡ，ＡｒｕｍｕｇａｍＮ，ＮａｎｄａｋｕｍａｒＰＢＡ，ｅｔａｌ．Ａ－ｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｅｄｉａｔｅｄｇｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｏｉｌｓｅｅｄＢｒａｓｓｉｃａｃｏｍｐｅｓｔｒｉｓ：Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｆｒｅｑｕｅｎｃｙｉｓｓｔｒｏｎｇｌｙｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄｂｙｔｈｅｍｏｄｅｏｆｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌＲｅｐｏｒｔｓ，１９９２，１１∶５０６－５１３．［２９］王景雪，杜建中，荣二华，等．油菜下胚轴农杆菌介导法转化影响因素探讨［Ｊ］．华北农学报，２００５，２０（２）∶１２－１５．

［３０］ＲａｄｋｅＳＥ，ＡｎｄｒｅｗｓＢＭ，ＭｏｌｏｎｅｙＭＭ，ｅｔａｌ．ＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．ｕｓｉｎｇＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｌｙ

ｒｅｇｕｌａｔｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｒｅｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄｎａｐｉｎｇｅｎｅ［Ｊ］．ＴｈｅｏｒＡｐｐｌＧｅｎｅｔ，１９８８，７５（５）∶６８５－６９４．

［３１］ＫａｒｔｚｋｅＳ，ＳａｅｄｌｅｒＨ，ＭｅｙｅｒＰ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓａｔｖａｒｉｏｕｓｓｔａｇｅｓｏｆｔｈｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＳｃｉ，１９９０，６７（１）∶６３－７２．

［３２］ＪａｎｓｓｅｎｓＪ，ＳｏｎｖｉｌｌｅＡＤ，ＭｏｅｎｓＴ，ｅｔａｌ．ＧｅｎｅｔｉｃｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓｂｙＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｃ］∥ＷｏｒｋｓｈｏｐｏｎＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ－４．ＥＵＣＡＲＰＩＡＨｅｌｓｉｎｇｏｅ，１９９５．［３３］ｄｅＢｌｏｃｋ，ＢｒｏｕｗｅｒＤ，ＴｅｎｎｉｎｇＰ．ＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓａｎｄＢｒａｓｓｉｃａｏｌｅｒａｃｅａｕｓｉｎｇＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓａｎｄｔｈｅｅｘ－ｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｂａｒａｎｄｎｅｏｇｅｎｅｓｉｎｔｈｅｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，１９８９，９１（２）∶６９４－７０１．

［３４］钟蓉，刘玉乐，朱峰，等．ＴＡ２９－Ｂａｒｎａｓｅ基因导致油菜雄性不育的研究［Ｊ］．植物学报，１９９６，３８（７）∶５８２－５８５．

［３５］ＨｏｌｂｒｏｏｋＬＡ，ＭｉｋｉＢＬ．Ｂｒａｓｓｉｃａｃｒｏｗｎｇａｌｌｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｉｎｖｉｔｒｏｏｆｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｔｉｓｓｕｅ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌＲｅｐｏｒｔｓ，１９８５，４（６）∶３２９－３３２．

［３６］ＣｌｏｕｇｈＳＪ，ＳｔｅｖｅｎＪ，ＢｅｎｔＡＦ．Ｆｌｏｒａｌｄｉｐ：ａｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄｍｅｔｈｏｄｆｏｒＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ－ｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪ，１９９８，１６（６）∶７３５－７４３．

［３７］ＢｅｃｈｔｏｌｄＮ，ＥｌｌｉｓＪ，ＰｅｌｌｅｔｉｅｒＧ．ＩｎｐｌａｎｔａＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｒｉｕｍｍｅｄｉａｔｅｄｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒｂｙｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｏｆａｄｕｌｔＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＣｏｍｐｔＲｅｎｄＡｃａｄＳｃｉＰａｒｉｓ，１９９３，３１６∶１１９４－１１９９．

［３８］ＢｏｕｌｔｅｒＭＥ，ＣｒｏｙＥ，ＳｉｍｐｓｏｎＰ，ｅｔａｌ．ＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．（ｏｉｌｓｅｅｄｒａｐｅ）ｕｓｉｎｇＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓａｎｄＡ－ｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ－ａｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＳｃｉ，１９９０，７０∶９１－９９．［３９］ＣｈｒｉｓｔｅｙＭＣ，ＳｉｎｃｌａｉｒＢＫ．Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｋａｌｅ（Ｂｒａｓｓｉ－ｃａｏｌｅｒａｃｅａ），ｒａｐｅ（Ｂｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓ）ａｎｄｔｕｒｎｉｐ（Ｂ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓｖａｒ．ｒａｐｉｆｅｒａ）ｐｌａｎｔｓｖｉａＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａ－ｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＳｃｉ，１９９２，８７（２）∶１６１－１６９．

［４０］ＭｏｌｏｎｎｅｙＭＭ，ＷａｌｋｅｒＪＭ，ＳｈａｒｍａＫＫ．Ｈｉｇｈｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｔｒａｎｓ－ｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓｕｓｉｎｇＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｖｅｃｔｏｒｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌＲｅｐｏｒｔｓ，１９８９，８（４）∶２３８－２４２．

［４１］ＪｅｆｆｅｒｓｏｎＲＡ，ＫａｖａｎａｇｈＴＡ，ＢｅｖａｎＭＷ．ＧＵＳｆｕｓｉｏｎｓ：β－ｇｌｕ－ｃｕｒｏｎｉｄａｓｅａｓａｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｖｅｒｓａｔｉｌｅｇｅｎｅｆｕｓｉｏｎｍａｒｋｅｒｉｎｈｉｇｈ－ｅｒｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＥＭＢＯＪ，１９８７，６（１３）∶３９０１－３９０７．

［４２］石东乔，周奕华，胡赞民，等．基因枪法转移反义油酸脱饱和酶基因获得转基因油菜［Ｊ］．农业生物技术学报，２００１，９（４）∶３５９－３６２．

［４３］ＧｏｌｚＣ，ＫlｈｌｅｒＦ，ＳｃｈｉｅｄｅｒＯ．ＴｒａｎｓｆｅｒｏｆｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｔｏＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓｕｓｉｎｇｔｏｔａｌＤＮＡｏｆａｔｒａｎｓｇｅｎｉｃＢ．ｎｉｇｒａｌｉｎｅ［Ｊ］ＰｌａｎｔＭｏｌＢｉｏｌ，１９９０，１５（３）∶４７５－４８３．

［４４］林良斌，官春云，李恂，等．子房注射法与农杆菌介导法转化甘蓝型油菜的比较研究［Ｊ］．生命科学研究，２０００，４（３）∶２３１－２３６．

［４５］熊兴华，官春云，李恂，等．基因枪法向甘蓝型油菜转移反义ＦＡＤ２基因的研究［Ｊ］．湖南农业大学学报（自然科学版），２００３，２９（３）∶１８８－１９１．

［４６］侯丙凯，宋桂英，王兰岚，等．利用激光微束穿刺法将杀虫蛋白基因导入油菜的研究［Ｊ］．激光生物学报，１９９９，８（４）∶２７０－２７４．

［４７］ＭｅｌｃｈｅｒｓＬＳ，ＲｅｇｅｎｓｂｕｒｇＴｕｉｎｋＡＪＧ，ＳｃｈｉｌｐｅｒｏｏｒｔＲＡ，ｅｔａｌ．ＳｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｏｆｓｉｇｎａｌｍｏｌｅｃｕｌｅｓｉｎｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｖｉｒｕｌｅｎｃｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．ＭｏｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９８９，３（７）∶９６９－９７７．［４８］ＶｏｅｌｋｅｒＴＡ，ＷｏｒｒｅｌｌＡＣ，ＡｎｄｅｒｓｏｎＬ，ｅｔａｌ．Ｆａｔｔｙａｃｉｄｂｉｏｓｙｎ－ｔｈｅｓｉｓｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄｔｏｍｅｄｉｕｍｃｈａｉｎｓｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｏｉｌｓｅｅｄｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９２，２５７（５０６６）∶７２－７４．

［４９］ＪｏｎｅｓＡ，ＭａｖｉｅｓＨＭ，ＶｏｅｌｋｅｒＴＡ．Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ－ａｃｙｌｃａｒｒｉｅｒｐｒｏｔｅｉｎ

（ＡＣＰ）ｔｈｉｏｅｓｔｅｒａｓｅａｎｄｔｈｅｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙｏｒｉｇｉｎｏｆｐｌａｎｔａｃｙｌ－ＡＣＰｔｈｉｏｅｓｔｅｒａｓｅ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，１９９５，７（３）∶３５９－３７１．

［５０］ＫｎｕｔｚｏｎＤＳ，ＴｈｏｍｐｓｏｎＧＡ，ＲａｄｋｅＳＥ，ｅｔａｌ．ＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢｒａｓｓｉｃａｓｅｅｄｏｉｌｂｙａｎｔｉｓｅｎｓｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｓｔｅａｒｏｙｌ－ａｃｙｌｃａｒｒｉｅｒｐｒｏｔｅｉｎｄｅｓａｔｕｒａｓｅｇｅｎｅ［Ｊ］．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，１９９２，８９（７）∶２６２４－２６２８．

［５１］陈锦清，郎春秀，胡张华，等．反义ＰＥＰ基因调控油菜籽粒蛋白质／油脂含量比率的研究［Ｊ］．农业生物技术学报，１９９９，７（４）∶３１６－３２０．［５２］ＡｌｔｅｎｂａｃｈＳＢ，ＫｕｏＣＣ，ＳｔａｒａｃｉＬＣ，ｅｔａｌ．ＡｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｏｆＢｒａｚｉｌｎｕｔａｌｂｕｍｉｎｉｎｓｅｅｄｓｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｃａｎｏｌａｒｅｓｕｌｔｓｉｎｅｎ－ｈａｎｃｅｄｌｅｖｅｌｓｏｆｓｅｅｄｐｒｏｔｅｉｎｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＭｏｌＢｉｏｌ，１９９２，１８（２）∶２３５－２４６．

［５３］ＦａｌｃｏＳＣ，ＧｕｉｄａＴ，ＬｏｃｋｅＭ，ｅｔａｌ．Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｃａｎｏｌａａｎｄｓｏｙ－ｂｅａｎｓｅｅｄｓｗｉｔｈｉｎｃｒｅａｓｅｄｌｙｓｉｎｅ［Ｊ］．Ｂｉｏｙｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９５，１３（６）∶５７７－５８２．

［５４］ＣｈａｖａｄｅｊＳ，ＢｒｉｓｓｏｎＮ，ＭｃＮｅｉｌＪＭ，ｅｔａｌ．Ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎｏｆｔｒｙｐｔｏ－ｐｈａｎｅｌｅａｄｓｔｏｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｌｏｗｅｒｉｎｄｏｌｅｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｃａｎｏｌａ［Ｊ］．ＰｒｏｃＮａｌｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，１９９４，９１（６）∶２１６６－２１７０．

［５５］ＭｉｋｉＢＬ，ＬａｂｂｅＨ，ＨａｔｔｏｒｉＪ，ｅｔａｌ．ＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓｃａｎｏｌａｃｕｌｔｉｖａｒｓｗｉｔｈＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｃａａｃｅｔｏｈｙｄｒｏｘｙａｃｉｄｓｙｎｔｈａｓｅｇｅｎｅｓａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｈｅｒｂｉｃｉｄｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ［Ｊ］．ＴｈｅｏｒＡｐｐｌＧｅｎｅｔ，１９９０，８０（４）∶４４９－４５８．

［５６］王景雪，赵福永，徐培林，等．油菜转抗草甘膦、抗虫基因获得双抗植株［Ｊ］．遗传学报，２００５，３２（１２）∶１２９３－１３００．

［５７］ＢｒｏｇｌｉｅＲ，ＢｒｏｇｌｉｅＫ．Ｃｈｉｔｉｎａｓｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓ：ａｍｏｌｅｃｕｌａｒａｐｐｒｏａｃｈｔｏｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｐｌａｎｔｄｅｆｅｎｃｅｒｅ－ｓｐｏｎｓｅｓ［Ｊ］．ＰｈｉｌｏｓＴｒａｎｓＢｉｏｌＳｃｉ，１９９３，３４２（１３０１）∶２６５－２７０．

［５８］陈雁，饶勇强，孟金陵．转双价广谱抗病基因创造甘蓝型油菜抗菌核病新品种的研究［Ｊ］．分子植物育种，２００３，１（４）∶４５７－４６３．

［５９］ＳｃｈｏｌｔｈｏｆＫＢＧ，ＳｃｈｏｌｔｈｏｆＨＢ，ＪａｃｋｓｏｎＡＯ．Ｃｏｎｔｒｏｌｏｆｐｌａｎｔｖｉｒｕｓｄｉｓｅａｓｅｂｙｐａｔｈｏｇｅｎｄｅｒｉｖｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，１９９３，１０２（１）∶７－１２．［６０］ＺａｃｃｏｍｅｒＢ，ＣｅｌｌｉｅｒＦ，ＢｏｙｅｒＪＣ，ｅｔａｌ．Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｔｈａｔｅｘｐｒｅｓｓｇｅｎｅｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅ３＇ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄｒｅｇｉｏｎｏｆｔｈｅｔｕｒｎｉｐｙｅｌｌｏｗｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ（ＴＹＭＡ）ｇｅｎｏｍｅａｒｅｐａｒｔｉａｌｌｙｐｒｏｔｅｃｔｅｄａｇａｉｎｓｔＴＹＭＶｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｇｅｎｅ，１９９３，１３６（１－２）∶８７－９４．

［６１］ＫａｚａｎＫ，ＣｏｕｌｔｅｒＫＣ，ＷａｙＨＭ，ｅｔａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｐａｔｈｏ－ｇｅｎｅｓｉｓ－ｒｅｌａｔｅｄｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｏｆｓｔｙｌｏｓａｎｔｈｅｓｈｕｍｉｌｉｓｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｔｏ－ｂａｃｃｏａｎｄｃａｎｏｌａａｎｄｉｔｓｅｆｆｅｃｔｏｎｄｉｓｅａｓｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＳｃｉ，１９９８，１３６（２）∶２０７－２１７．

［６２］王苏燕，叶寅，赵淑珍，田波．转基因油菜中核酶介导的对花椰菜花叶病毒的高度抗病性［Ｊ］．中国科学（Ｃ辑），１９９７，２７（５）∶４２６－４３１．［６３］ＭｅｔｚＴＤ，ＲｏｕｓｈＲＴ，ＴａｎｇＪＤ，ｅｔａｌ．Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｂｒｏｃｃｏｌｉｅｘ－ｐｒｅｓｓｉｎｇａＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｅｎｓｉｓｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌｃｒｙｓｔａｌｐｒｏｔｅｉｎ：ｉｍｐｌｉｃａ－ｔｉｏｎｓｆｏｒｐｅｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｍａｎａｇｅｍｅｎｔｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ［Ｊ］．ＭｏｌＢｒｅｅｄｉｎｇ，１９９５ｂ，１（４）∶３０９－３１７．

［６４］林良斌，官春云，周小云，等．外源基因在转基因抗虫油菜中的遗传行为［Ｊ］．湖南农业大学学报（自然科学版），２００２，２８（２０）∶１００－１０２．［６５］我国首个转基因抗虫油菜品系诞生［Ｊ］．世界热带农业信息，２０００，（６）∶２４．

［６６］ＭａｒｉａｎｉＣ，ｄｅＢｅｕｋｅｌｅｅｒＭ，ＴｒｕｅｔｔｎｅｒＪ，ｅｔａｌ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｍａｌｅｓｔｅｒｉｌｉｔｙｉｎｐｌａｎｔｓｂｙａｃｈｉｍａｅｒｉｃｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅｇｅｎｅ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９９０，３４７（６２９５）∶７３７－７４１．

［６７］ＤｅｎｉｓＭ，ＤｅｌｏｕｒｍｅＲ，ＧｏｕｒｒｅｔＪＰ，ｅｔａｌ．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｎｕｃｌｅａｒｍａｌｅｓｔｅｒｉｌｉｔｙｉｎＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，Ｃｙ－ｔｏｌｏｇｙ，ａｎｄＳｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｏＴｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，１９９３，１０１（４）∶１２９５－１３０４．

［６８］ＭｉｓｒａＳ，ＧｅｄａｍｕＬ．ＨｅａｖｙｍｅｔａｌｔｏｌｅｒａｎｔｔｒａｎｓｇｅｎｉｃＢｒａｓｓｉｃａｎａ－ｐｕｓＬ．ａｎｄＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＴｈｅｏｒＡｐｐｌＧｅｎｅｔ，１９８９，７８（２）∶１６１－１６８．

［６９］ＶａｎｄｅｋｅｒｃｋｈｏｖｅＪ，ＤａｍｍｅＪＶ，ＬｉｊｓｅｂｅｔｔｅｎｓＭＶ，ｅｔａｌ．Ｅｎｋｅ－ｐｈａｌｉｎｓｐｒｏｄｕｃｅｄｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｕｓｉｎｇｍｏｄｉｆｉｅｄ２Ｓｓｅｅｄｓｔｏｒ－ａｇｅｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９８９，７（９）∶９２９－９３２．