兰州地区犬小孢子菌致病情况及药敏试验研究

钱靖，骆志成，魏玉平，周小黎

兰州大学第二医院，兰州（730030）

E-mail：xiaohouzi1953@https://www.360docs.net/doc/807219204.html,

摘要：目的对兰州地区犬小孢子菌的致病情况进行调查并观察其对抗真菌药物的敏感性。方法对兰州大学第二医院皮肤科门诊拟诊为真菌感染的患者调查其详细病史并进行取样、镜检、培养、鉴定后，留取感染病原菌为犬小孢子菌的标本并检测其对5种常见抗真菌药物的最小抑菌浓度。结果感染犬小孢子菌10岁以下儿童占到94. 54 %，85.45%表现为头癣，其中95.74 %为白癣。抗真菌药物的MIC范围如下，伊曲康唑0. 25～1μg/ml，益康唑0. 25～2μg/ml，特比萘芬0.01～0.04μg/ml，灰黄霉素0. 25～1μg/ml，氟康唑1 -～32 μg/ml。结论犬小孢子菌主要感染10岁以下儿童，主要表现为头癣（白癣）。犬小孢子菌对受试药物均敏感，其中伊曲康唑和特比耐芬的MIC值最小，推荐临床使用。经过调整的M38-A方案适用于包括犬小孢子菌在内的皮肤癣菌。

关键词：犬小孢子菌，微量稀释法，M-38A方案

犬小孢子菌（Microsporum canis bodin），异名羊毛状小孢子菌，归属于半知菌亚门-丝孢菌纲-丝孢菌目-丛梗孢科-小孢子菌属，为发外型亲动物型皮肤癣菌，存在于自然界及猫，狗，兔等动物毛皮上，可通过动物-动物，动物－人，人－人相互传染。胡沙沙[1]通过综合分析国外多名学者对世界范围内不同国家及地区有关犬小孢子菌所引起的流行病学调查后得出：除了个别地区或国家发病率较低外，犬小孢子菌在世界范围流行，发病率基本在浅部真菌病的前四位，且总体发病率有上升的趋势。而综合国内的流行病学研究可看出，犬小孢子菌是目前我国浅部真菌病特别是头癣的主要病原菌。它传染性强，在一定条件下还可在特定人群中出现暴发[2]。M-38A[3]是美国临床和实验室标准化研究所( clinical and laboratorys tand -ard institute，CLSI，即原NCCLS)于2003年发表的针对产孢丰富丝状真菌抗真菌药敏试验方案。此方案对实验条件做了严格要求，并对判读标准作了统一规定,被称为标准试验方案。本研究调查了兰州地区犬小孢子菌的致病情况，并应用微量液稀释法测定了不同抗真菌药物对本地区犬小孢子菌敏感性。

1 对象和方法

1. 1 实验菌株

对2007年7月～2007年12月在兰州大学第二医院皮肤科门诊拟诊为真菌感染的临床标本进行取样、镜检、培养、鉴定后，留取犬小孢子菌样本共55例。分别来自47例头癣及8例体癣。

1. 2 调查资料

包括患者姓名、性别、年龄、民族、病程、住址、周围有无头癣患者、动物接触史、是否由理发感染、发病月份及用药史，对生活质量的影响程度等。

1. 3 真菌学分离鉴定

每份镜检阳性标本接种于含氯霉素的沙堡葡萄糖琼脂斜面2管，置于28℃恒温培养箱内培养。通过观察菌落的形态、大小、生长速度、所产色素及镜下结构等进行菌种鉴定。对经以上程序判断为犬小孢子菌的菌株,再用米饭培养基进一步分离培养,根据镜下丰富的厚壁大

分生孢子鉴定到犬小孢子菌种的水平。

1. 4 药敏材料

培养基采用RPMI-1640液体培养基，购自上海生工，PH值为7.0。抗真菌药物灰黄霉素、氟康唑、伊曲康唑及氟康唑购自上海科恒公司，特比萘芬购自西安大唐药业公司。所有药物均以原料粉形式提供。

1. 5 质控菌株

为北大一院医院惠赠的ATCC-22019。

1. 6 药液配制

1) 储存液配制：依据M-38A方案配制上述药物的储存液,其中水溶性药物氟康唑溶于无菌水，其他脂溶性药物均溶于二甲基亚砜(DMSO)，并使DMSO终浓度<1%。各药物浓度范围为：灰黄霉素和氟康唑0. 125～64μg/mL，伊曲康唑、益康唑为0.313～16μg/mL，特比萘芬0.000 156～0. 08μg/mL。

2) 药敏板配制：将药粉使用RPMI-1640培养基稀释50倍后，依次倍比稀释为2倍终浓度，取100μL各浓度药液分别加入96孔细胞培养板第1到第10列各孔，取100μL不含药物的培养基加入第11列作为生长对照(阳性对照) ，取200μL培养基加入第12列作为阴性对照。

1. 7 抗真菌药物敏感性试验(M38-A方案)

1) 真菌菌悬液制备：所有受试菌接种在PDA培养基，28℃培养10天使其活化，加入含

有1%吐温80的生理盐水冲洗，将有孢子和菌丝片断的菌悬液吸出适当粘磨，血细胞计数器计数0.4～5×106 cfu/ml。

2) 液体培养基的接种：将菌悬液用RPMI-1640液体培养基稀释50倍，得到相当于2倍终

浓度的接种菌悬液。在96孔培养板除第12孔阴性对照孔外，其余各孔加入100μL菌悬液，28℃湿盒中培养，于第96小时（4天）时观察结果。

3) 结果判定：根据M-38A的要求进行。对于特比萘芬和伊曲康唑，最低抑菌浓度(MIC)定义为与生长对照相比，出现完全不生长时的最低药物浓度，氟康唑、灰黄霉素和益康唑MIC则定义为与生长对照相比，出现50%生长抑制时的最低药物浓度。选择在12：00-15：00时自然光线充足时，至少两人读取试验结果。

1. 8 统计结果

采用SPSS13.0统计软件求不同的抗真菌药物的MIC均值并进行Kruska-Wallis秩和检验，P＜0.05 为有统计学差异。

2 结果

2. 1 致病情况

1）一般资料 55 例犬小孢子菌感染患者，表现为头癣者47例（85.45%），体癣者8例（14.55%）。汉族40例(72.73%)，回族14例(25.45%)，藏族1例(1.82%)。年龄1～47岁，其中10岁以下者52 例(94.54 %) ，男40例（72.72%），女15例（27.27%）。家住城市者42例（76.36%），地县及农村者13例（23.63%），49例（84.09%）有2周到1年半不等的动物

（猫狗马兔）接触史，8例（14.55%）有与头癣患者接触史，亲兄弟，表兄妹，表姐妹同感染头癣各1例。

2）临床诊断头癣主要表现为白癣，共45例（95.74%）。脓癣2例（4.26%）,未见黄癣及黑点癣。体癣分别在双臂（3例），面部（4例）和躯干（1例）。2例有激素用药史而表现为不典型癣。

3）真菌学鉴定 52例(94.55%)患者镜检阳性，镜下仅见菌丝者15例（28.85%）仅见孢子者6例（11.54%），孢子菌丝均有者31例（59.62%），培养阳性55例（100%）。

4）对生活质量影响

分为四个等级，按对生活质量的严重程度分为I，II，III，IV四级。I级为无影响，II 级为轻微影响，III级为有明显影响，IV级为有严重影响。I级5人（9.09%），均为10岁以内儿童。II级30人（54.54%），III级18人（32.72%），IV级2人（3.63%），均为成年女性。

5）就诊前用药情况

55例患者中，22例（40.00%）未曾进行治疗，19例(34.53%)曾自行使用激素（皮炎平等）治疗无效而就诊。4例(7.27%)曾使用“中药制剂”（具体不详）治疗。10例(18.18%)曾自行外用抗真菌药物（派瑞松等）后疗效欠佳而就诊。

2. 2 药敏试验

抗真菌药物有的MIC范围分别如下：伊曲康唑0.125～0.5μg/ml，益康唑0. 25～2μg/ml，特比萘芬0.01～0.04μg/ml，灰黄霉素 0. 5～2.0μg/ml，氟康唑1～32μg/ml。不同抗真菌药物对犬小孢子菌由微量稀释法测得的药敏结果经Kruskal-Wallis秩和检验有明显统计学差异。（表1）

表1 犬小孢子菌对不同药物MIC值比较及抗菌平均秩次结果

The result of mean rank and difference of MIC of M. canis from antifungal drugs

MIC（ug/ml）

药物范围均数MIC

50伊曲康唑 0.125～0.5 0.23 0.50

25～2 1.09 1.0 益康唑 0.

特比萘芬 0.01～0.04 0.029 0.02

5～2.0 0.99 0.80 灰黄霉素 0.

氟康唑1～32 13.7 8.0 χ2=246.276, P﹤0.001

3 讨论

我们的研究表明，目前兰州地区犬小孢子菌所致的疾病以头癣为主，再次证明了头癣与犬小孢子菌的密切关系。饲养宠物是导致发病的重要原因，故建议城镇居民不饲养宠物，已饲养者定期对宠物进行检查，以免传染到人。近年来牛桃香，王恩文等[4-5]相继报导兰州地区头癣临床诊断以白癣为主，感染菌种以犬小孢子菌为主，可见近年来一直是亲动物性的犬小孢子菌占据头癣致病的主导地位。推测这一现象除可能与环境、气候有关外，主要与近年来人们饲养宠物成风相关。我们还发现，传染动物除猫狗外，还可见家畜如兔和马，值得注意。另外，绝大多数患者（90.91%）感觉犬小孢子菌引发的皮肤癣菌病对生活质量有不同

程度的影响，说明治疗皮肤癣病的意义。60%的患者都曾在缺乏专业指导的情况下自行治疗，34.53%的患者曾使用含有激素成分的外用药物导致病情延误，这提示我们应该加强对本地区医学真菌病宣传普及工作，从而指导人们正确认识犬小孢子菌所致的医学真菌病。

M-38A方案是CLSI在继M-27A和M-38P方案后提出的针对产孢丰富的丝状真菌的药敏方案，此方案并未直接针对包括犬小孢子菌在内的皮肤癣菌，但寻找一种符合皮肤癣菌特点的药物敏感性试验方法验的标准化问题已成为国内外学者的共识。部分学者在M-38A的基础上改变实验参数如培养基的选择、实验条件，接种菌量、孵育温度和时间等，初步探索了针对皮肤癣菌的结果稳定、重复性较好的试验条件。如孵育温度以28-30℃，孵育时间以7-14天为佳。针对表皮癣菌产孢少的特点，有学者采用麦氏比浊法将菌悬液浓度调至0.5麦氏单位获得统一，或者采用酶标法用酶标仪在波长490nm下测定OD值，还可用分光光度计在530nm下调成65～70%透过率，然后再稀释100倍，取0.01m1接种于改良沙氏平皿培养基或PDA培养基每天观察菌落数具体计数[6]。为解决皮肤癣菌菌液计数和混匀的问题，有学者通过研磨器研磨，使较长的菌丝变短，在制备菌悬液时采用0. 85%的盐水含0.1%吐温80以增加盐水的表面张力，使菌丝和孢子分散，以利于接种和计数，也有文献提出将菌丝体用盐水冲洗混匀后直接比浊[7]。研究结果多近似，充分显示了M-38A方案的稳定性与可重复性。

我们的药敏试验结果显示，犬小孢子菌对5种受试药物均敏感，灰黄霉素、伊曲康唑、特比耐芬、氟康唑的MIC值范围与相关文献相近[7-8]。在临床用药中，应尽量选择MIC值小的药物。考虑到灰黄霉素的不良反应，推荐使用伊曲康唑和特比耐芬。

参考文献

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Pathogenicity Situation and Susceptibility Test of

Microsporum canis in Lanzhou District

Qian Jing, Luo Zhicheng, Wei Yuping, Zhou Xiaoli

The Second Hospital of Lanzhou University, Lanzhou (730030)

Abstract

Objective Study on the pathogenicity situation and broth microdilution antifungal susceptibility about Microsporum canis of Lanzhou district. Methods The patients who were suspected to be infected by superficial mycosis were questioned the history and were cultured on Sabouraud—chloramphenicol glucose agar (SDA) and incubated at 27 ℃，species being identified with growth rate of isolates, production and potential diffusion of pigment and direct microscopic examination．Selected the specimens of microsporum canis and approached the broth microdilution antifungal susceptibility testing condition for Microsporum canis to test the minimal inhibitory concentration(MIC) of 5 common antifungal drugs．Results Patients under 10-year-old occupied 94.

54 % in the whole specimens．Patients with tinea capitis occupied 85.45%，among whom 95.74% were suffered from tinea alba．The range of MIC are below：Itraconazole，0.25～1ug/ml，Econazole，0.25～2μg/ml，Terbinafine，0.01～0.04μg/ml，Griseofulvine，0.25～1μg/ml．Fluconazole，1～32 μg/ ml．Conclusion Majority of patients are less than 10-year-old．The main clinical type of tinea capitis (tinea alba)．All of the drugs are sensitive to Microsporum canis. The minimum of mean MIC are Itraconazole and Terbinafineare，which provides us a reference to use．Adjusted M38-A procedure can be used for the antifungal susceptibility test to dermaphytes (including Microsporum canis) in laboratories．

Keywords: Microsporum canis, broth microdilution method, M-38A procedure

作者简介：钱靖( 1980 - )，女，江苏无锡人，硕士研究生，主要从事医学真菌与真菌病的研究。

特殊细菌药敏试验规范化操作系列

特殊细菌药敏试验的规范化操作一、目前我国细菌药敏试验现状 20年以来，我国在卫生部和各地临床检验中心和检验学会的共同努力下引进CLSI药敏系列标准，使全国微生物实验室能在同一标准下进行质量控制活动。当前，微生物实验室对常见临床分离细菌的药物敏感试验的水平已有了显著的提高，但对特殊细菌的药敏试验的各个环节的规范操作还不能得到普及，对目前还无折点的细菌能否做药敏试验，以及如何判断细菌的药物敏感和耐药，仍然概念模糊，有待进一步规范和普及。目前常见错误做法：（一）铜绿假单孢菌的药敏判断标准用于其他非发酵细菌；嗜血杆菌的标准用于卡他莫拉菌等的错误做法时有发生。（二）借用同属细菌敏感标准（三）借用同类抗生素的敏感标准二、各菌属的药物敏感性报告及试验方法的CLSI药敏标准（一）“嗜麦芽”菌属药敏报告标准 1.CLSI对“嗜麦芽”纸片药敏判断标准药物名称纸片含量ug/片耐药 R 中介I 敏感S 米诺环素30 ≤1415-18 ≥19 左氧氟沙星 5 ≤1314-16 ≥17 复方新诺明 1.25/23.75 ≤1011-15 ≥16 2.CLSI对“嗜麦芽”稀释法判断标准药物名称S I R 替卡西林/棒酸≤16/232/2-64/2 128/2 头孢他定≤816 ≥32 米诺环素≤48 ≥16 左氟沙星 2 4 ≥8 复方新诺明≤2/38- 4/76 氯霉素≤816 ≥32（二）无折点细菌的药物敏感试验报告 1. 其他药物的敏感性报告: CLSI推荐的药物可以报告MIC值和敏感度（S、I、R），临床需要的其他药物的药敏试验报告可以直接报告MIC值但不报告S、I、R。 2. 不要用认为相近细菌的折点代替报告S、I、R，这会误导医生用药。

细菌分离培养及药敏试验方法及步骤

细菌分离培养方法及操作步骤无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基,37℃恒温培养24 h,观察其生长特性。目前细菌分离培养的常用方法有平板划线分离法、加热分离法与实验动物分离法。平板划线接种法这就是目前临床上最常用的分离接种方法。它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落(有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌),以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。具体操作: 1、右手持接种环,在酒精灯上火焰灭菌; 图1 病料采集图2 接种环灭菌 2、待接种环冷却后,挑取被检料少许,左手持琼脂平板,以食指为

支点,用拇指与无名指将平皿揭开一空隙。大约20℃时,迅速地将接种环轻轻地涂布在培养基的边缘。 3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。(注意:划线时,以腕力使接种环在琼脂平板表面划动,尽量不要划破培养基,划的线条要密,但不能重复旧线,以免培养物形成菌苔。) 图3 平板划线接种法 4、划线完毕,合上平皿盖,将琼脂平板倒置,放入37℃温箱内培养

18－24小时。注意:分离培养用的平板培养基应表面干燥,可于临用前置37℃孵育箱内30分钟,这样表面即干燥有利于分离培养,又使培养基预温,对培养某些较娇弱的细菌有利。细菌药敏试验方法操作步骤药敏试验就是抗菌药使用以前必不可少的一个基本环节,一个正确的药敏结果能够科学的指导养殖户用药,减少抗菌素使用的盲目性,从而减少养殖户损失。在临床实际生产中具备重要意义。 1、在“超净台”中,用经(酒精灯)火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物,以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式; 用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌,以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后,找到第二点划线至平皿的1/2,依次划线,直至细菌均匀密布于平皿。图4 接种环划线

各类细菌总结

病原学细菌各论总结衛卋琦 2014.04.01

第六章球菌葡萄球菌属链球菌属球菌肺炎球菌脑膜炎奈瑟菌奈瑟球菌属淋病奈瑟菌链球菌生物学性状形态染色G+ 培养特性营养要求高、不分解菊糖、不被胆汁溶解分类 1、按溶血现象：甲型溶血性链球菌α（多为条件致病菌）、乙型溶血链球菌β（致病力强）、丙型链球菌（一般不致病）； 2、按抗原结构：A∽V 20种，对人致病90%属A群； 3、按需氧量：需氧性、兼性厌氧性和厌氧性对人致病主要为前两者；抗原构造抵抗力不强 60℃ 30min可以杀死，对一般消毒剂敏感乙型溶血性链球菌对青霉素、红霉素、磺胺类药敏感致病性致病物质 1、致热外毒素； 2、链球菌溶血素：1、链球菌溶血素O（SLO）可引起心肌损伤，能加重心肌炎的病变；2、链球菌溶血素S（SLS）对白细胞、血小板和多种组织细胞有破坏作用； 3、M蛋白； 4、透明质酸酶； 5、链激酶使血块溶解或阻止血浆凝固，利于细菌扩散；重组链激酶已用于心肌梗死； 6、链道酶使脓液稀薄，利于细菌扩散；用于脓胸、输卵管炎等疾患，解除组织粘连；所致疾病1、化脓性感染 2、猩红热 3、风湿热和急性肾小球炎

免疫性感染后可获一定免疫力（主要为抗M蛋白抗体）。因其型别多，各型之间无交叉免疫作用，故常发生反复感染微生物学检查1、直接镜检 2、分离培养与鉴定 3、抗链球菌溶血素O抗体实验 4、分子生物学法防治原则积极治疗，减少传染源。对急性咽峡炎和扁桃体炎患者应早期、彻底治疗，防止风湿病和急性肾小球炎等疾病发生。对A群链球菌感染者首选青霉素G。传播途径飞沫肺炎链球菌生物学性状形态染色G+ 无鞭毛和芽胞有荚膜（人工培养无）培养特性兼性厌氧性，营养要求高。可分解菊糖，能被胆汁溶解。分类90个血清型 1-3致病力强抗原构造与分型荚膜多糖抗原 C物质抵抗力弱 56℃ 20min可杀死。有荚膜抗干燥。对一般消毒剂、青霉素、红霉素、林可霉素等敏感。致病性致病物质荚膜，有抗吞噬作用。所致疾病大叶型肺炎免疫性病后有牢固的型特异性免疫微生物学检查 1、直接涂片染色镜检 2、分离培养与鉴定 3、动物实验防治原则用荚膜多糖疫苗预防接种、治疗主要采用大剂量青霉素或林可霉素。奈瑟菌属项目脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌生物学性1、形态与染色：呈肾形或豆1、形态与染色：G-双球菌，与脑

药敏试验程序及步骤

药敏试验程序及步骤微生物标本的采集通常有血液、脑脊液、尿液、伤口的脓液、胸水腹水、粪便、痰液及泌尿生殖系统的分泌物。1）采集的一般原则： a早期采集 b 无菌采集注意对局部及周围皮肤的消毒，渎道底部采集的标本（外通道）正常菌群寄生部位采集的标本应明确目的菌，采用选择培养基。 C 不同菌不同采集方法 D 采集适量标本，量不应过少，注意采集不同时间不同部位标本，要全面有特征 E 安全采集 2）标本处理 2h送到检验处，部分菌应保温于一定环境中保存注意安全尤其对烈性传染病。有时可以直接用抽取标本的注射器如尸检组织、支气管洗液、心包液、痰、尿等标本要保存于4℃环境中，脑脊液保存于25℃ 3）各部位标本的采集及注意事项 A 血液皮肤消毒采血部位采血量采血次数采血时间不同动物有所不同血液应马上送检室温保存不可冷藏。配置的培养基血液和肉汤比为1：5～1：10 血液中常见的病原体引起的疾病有葡萄球菌菌血症，肠球菌菌血症、革兰隐性杆菌、厌氧菌菌血症真菌血症。 B 脑脊液采集脑脊液一般用腰椎穿刺术获得。采集后立即送检，一般不要超过1h，避免凝固和混入血液一般取3～5ml 35度保温送检不可至于冰箱保存做病毒检查时应放置冰块4度保存72h

常见细菌性脑膜炎如流行性脑脊髓膜炎肺炎球菌脑膜炎，链球菌脑膜炎等真菌性脑膜炎常见隐球菌脑膜炎假丝酵母菌脑膜炎等特别是免疫功能低下和恶性疾病患者易并发。如AIDS 恶性肿瘤严重糖尿病等流行性乙型脑炎是一种人兽共患病肠道病毒可见多种病毒引起脑膜炎和肺炎 c 脓液标本的采集首先用无菌生理盐水清洗脓液及病灶的杂菌，在采集标本，用针和注射器抽吸采取，再移入无菌容器立即送检也可用拭子在伤口深部采集渗出物，对于皮肤或下表皮的散播性感染，应采集病灶出边缘而非中央处的感染组织送检。脓肿标本以无菌注射器抽取为好，也可用排液法取得，先用70的酒精擦拭病灶部位，袋干燥后用以无菌刀切开排脓，以无菌拭子采取，不能及时送检可放冰箱冷藏，厌氧菌培养的标本只能放于室温下。厌氧菌感染的脓液常有腐臭味，采集和运送要注意不要接触空气，可直接针筒送检或置于厌氧运送培养基送检。外伤性创伤感染以葡萄球菌和链球菌多见，放线菌，结核分枝杆菌，大肠埃希菌，铜绿假单胞杆菌也常见。深部感染极易引起破伤风和气性坏死感染。烧伤创面最常见革兰阴性杆菌感染和革兰阳性球菌感染急性化脓性骨关节炎常由金黄色葡萄球菌感染溶血性链球菌肺炎链球菌感染所致慢性化脓性骨关节炎慢性骨髓炎常由结合分支杆菌感染所致。放线菌感染可发生在免疫功能下降时或由于拔牙口腔粘膜损伤一起的感染。 d痰液标本的采集自然咳痰法和支气管镜采集法对呼吸道感染诊断有重要意义，细菌性肺炎为下呼吸道感染最常见的类型。支原体肺炎常以不典型肺炎表现。真菌性肺炎和病毒性肺炎也常见。 E 粪便标本的采集用药前自然排便采集脓血粘液部分2～3g，粪便表面采样，液体便取絮状物1～2ml置于无菌容器内送检。细菌性痢疾细菌真菌病毒引起的胃肠炎细菌性食物中毒致病性大肠埃希菌的肠道感染幽门螺杆菌感染导致消化性溃疡，主要部位是十二指肠球部。 F 尿液标本采集采集清洁中段尿最好早晨取样，先清洗尿道口。必要时导尿或膀胱穿刺留尿样本采集容器要求清洁无菌、密封、加盖、防渗透、广口、容积大于50ml。主要主要经尿道口上行感染，极少数血道感染，可反映肾脏，膀胱，尿道，前列腺等处的炎症变化。

细菌耐药监测总结

2012年细菌耐药检测情况总结分析我院抗菌药物使用情况根据卫生部《抗菌药物临床应用指导原则》和2009年第38号文件“卫生部办公厅关于抗菌药物临床应用管理有关问题的通知”的相关规定，为进一步加强我院临床微生物监测与细菌耐药工作，建立、完善抗菌药物临床应用与细菌耐药预警机制。为此，检验科对今后我院临床抗菌药物的选用提出如下参考意见： 1、根据相关规定要求：（1）对主要目标细菌耐药率超过30%的抗菌药物，应及时将预警信息通报本机构医务人员。（2）对主要目标细菌耐药率超过40%的抗菌药物，应慎重经验用药。（3）对主要目标细菌耐药率超过50%的抗菌药物，应参照药敏试验结果选用。（4）对主要目标细菌耐药率超过75%的抗菌药物，应暂停该类抗菌药物的临床应用，根据追踪细菌耐药监测结果，再决定是否恢复其临床应用。 2、根据2012年细菌耐药性监测结果显示，全年细菌检出数80株，其中占细菌检出率前五位的细菌分别依次为大肠埃希菌（28.7%）、肺炎克雷伯菌（17.5%）、铜绿假单胞菌（15%）、阴沟肠杆菌（8.75%）和金黄色葡萄球菌（5%），该5种检出菌的检出率为74.95%，基本可以反应出我院常见致病菌的情况，总数以革兰氏阴性菌为主。该5种细菌也是我们主要监测的目标细菌。

3、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌在我院临床感染细菌检出率中最高，分别为28.7%与17.5%。两种细菌都属于肠杆菌科，临床分离菌株易产生超广谱β- 内酰胺（ESBLs）。产生ESBLs的克雷伯菌属和大肠埃希菌分离株，临床上可能对青霉素类、头孢菌素类或氨曲南治疗无效。我院分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对青霉素类、头孢菌素类的耐药性都很高，而对于加有β- 内酰胺抑制剂（舒巴坦、他唑巴坦）的复方制剂基本都敏感。大肠埃希菌对青霉素类和一、二代头孢菌素耐药率为60%，对三、四代头孢的耐药率为30%以上，对头孢西丁的耐药率为10%左右；肺炎克雷伯菌对青霉素类、头孢菌素类的耐药率在28%左右。因此，临床主要考虑该细菌引起的呼吸道感染、泌尿系统感染等情况时，选择青霉素类和头孢菌素类抗菌药物应慎重，尽可能参照药敏试验结果。 4、2012年全年检出的铜绿假单胞菌占到细菌总检出率的15%，对青霉素和一、二代头孢类普遍耐药，其中对三代耐药50%以上，但对头孢他啶100%敏感，对哌拉西林的敏感率为92%，对哌拉西林/他唑巴坦100%敏感，在临床用药中可以选择。对氨基糖苷类、喹诺酮类含β- 内酰胺抑制剂的复方制剂耐药率也都达到30%以上，部分达到50%。铜绿假单胞菌对碳青霉烯类的耐药率均在10%以下。 5、2012年检出的阴沟杆菌占到总检出率的8.75%，对一、二代头孢和头孢西丁基本耐药，对三代头孢35%左右耐药，对四代头孢27%左右耐药。 6、2012年全年金黄色葡萄球菌检查率为5%，检出率虽不高，但对药

肺泡灌洗液细菌培养及药敏结果分析

肺泡灌洗液细菌培养及药敏结果分析发表时间：2018-02-02T15:22:23.477Z 来源：《临床医学教育》2017年12月作者：邹单东韦柳华程红革[导读] 下呼吸道感染是临床较为常见的感染，病原菌种类多、耐药性强。广西医科大学第四附属医院广西柳州545005 [摘要] 目的：了解肺泡灌洗液中细菌种类及耐药情况，为临床合理用药提供依据。方法：美国Microscan Autoscan-4微生物分析仪对细菌作鉴定及药敏试验。结果：灌洗液细菌培养阳性率56.2%；195例细菌中革兰阴性菌占90.8%，革兰阳性菌占9.2%；主要细菌依次是铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌。主要革兰阴性菌对亚胺培南耐药率为0～15.1%，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶 (ESBLs)阳性率为62.5%、64.1%，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）检出率为60.0%，细菌多药耐药现象严重。结论：不同细菌对抗菌药物的耐药性不同，灌洗液细菌培养及药敏试验可为临床合理用药提供依据。 [关键词] 肺泡灌洗液；细菌分布；耐药性 [Abstract] Objection: in order to understand the type of bacteria and susceptibility test results in irrigating solution, and provide an according to rational use of drug for clinical.Methods: the instrument of identification and susceptibility test is Microscan Autoscan-4, USA.Result: the positive rate of irrigating solution is 56.2%; the Gram-negative bacteria has 90.8% in these 195 bacterias, and Gram-positive bacteria has 9.2%; the main type of these bacteria are Pseudomonas aeruginosa, Pneumonia crayresearch bacteria and baumanii . the tate of the bacterias, which resist to imipenem, is 0~15.1% in these Gram-negative bacterias; the rate of Pneumonia crayresearch bacteria and baumanii, which product ESBLs, is 62.5%、64.1%,respectively; and the rate of MRSA is 60.0%. and the phenomenon of multidrug resistant is Very serious.Conclusion: the drug resistance of bacteria is differrent, the bacterial culture and susceptibility test results of irrigating solution can provide basis of rational drug use for clinical. [Key words] irrigating solution; Bacteria distribution; drug resistanc 下呼吸道感染是临床较为常见的感染，病原菌种类多、耐药性强。目前病原诊断普遍采用痰培养，但因其易污染，痰液质量难以保障，临床价值有限。肺泡灌洗液与痰液相比，对下呼吸道感染诊断具有更高特异性和敏感性，同时细菌药敏结果对临床抗感染治疗更具价值【l】。因此，我们对2010年从肺泡灌洗液中分离到的195例细菌的药敏结果进行回顾性分析，以期为临床抗感染治疗提供依据，现将结果报道如下。 1 材料和方法 1.1 标本来源 251例灌洗液为2010年我院住院患者予以纤支镜支气管肺泡灌洗治疗后采集所得。同一患者多次分离到的细菌不重复计入。 1.2 细菌鉴定和药敏试验采用Microscan Autoscan-4微生物分析仪对细菌作鉴定和药敏试验。药敏试验判断标准、结果解释、MRSA、ESBLs检测参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准【2】。定期用标准菌株做药敏质量控制。 1.3 数据处理数据均由WHONET 5.4软件分析处理所得。 2 结果 2.1 细菌分布 251例灌洗液细菌培养阳性率为56.2%(141/251)。共分离细菌195例，革兰阴性菌占90.8%，革兰阳性菌占9.2%，细菌构成比见表1。 2.2药敏结果大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产ESBLs株为10例、25例，阳性率为62.5%、64.1%，MRSA 6例，检出率为60.0%。主要细菌对抗菌药物的耐药率，见表2。

药敏试验实验报告

药敏试验：用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test 法），和自动化仪器等。简介：体外抗菌药物敏感性试验简称药敏试验（AST），是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的试验。根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)近期推荐的标准，对非苛氧菌（肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、和其他非肠科杆菌、葡萄球菌属细菌、肠球菌属细菌）和苛氧菌（嗜血杆菌属细菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌和其他链球菌）选择常规药敏试验的首选药物（A 组抗生素）或临床使用的主要抗生素（B组抗生素）进行药敏试验。抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。随着新型致病菌的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参

考，并提高疗效。农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法，现简单介绍如下。实验步骤：实验材料普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做沙门氏菌可选择血清培养基。药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）细菌：待做药敏试验的细菌仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头实验准备 2.1 药敏片的准备：购买或自制 2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。 2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。

细菌分离培养及药敏试验方法及步骤

细菌分离培养方法及操作步骤无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基，37℃恒温培养24 h，观察其生长特性。目前细菌分离培养的常用方法有平板划线分离法、加热分离法和实验动物分离法。平板划线接种法这是目前临床上最常用的分离接种方法。它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落（有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌），以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。具体操作： 1、右手持接种环，在酒精灯上火焰灭菌；图1 病料采集图2 接种环灭菌 2、待接种环冷却后，挑取被检料少许，左手持琼脂平板，以食指为支点，用拇指和无名指将平皿揭开一空隙。大约20℃时，迅速地将接种环轻轻地涂布在培养基的边缘。

3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。（注意：划线时，以腕力使接种环在琼脂平板表面划动，尽量不要划破培养基，划的线条要密，但不能重复旧线，以免培养物形成菌苔。）图3 平板划线接种法 4、划线完毕，合上平皿盖，将琼脂平板倒置，放入37℃温箱内培养18－24小时。注意：分离培养用的平板培养基应表面干燥，可于临用前置37℃孵育箱内30分钟，这样表面即干燥有利于分离培养，又使培养基预温，对培养某些较娇弱的细菌有利。

细菌药敏试验方法操作步骤药敏试验是抗菌药使用以前必不可少的一个基本环节，一个正确的药敏结果能够科学的指导养殖户用药，减少抗菌素使用的盲目性，从而减少养殖户损失。在临床实际生产中具备重要意义。 1、在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。图4 接种环划线 2、以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。

细菌药敏试验

实训细菌的药物敏感性试验教学目标使学生掌握细菌药物敏感性试验的操作方法，能够利用本试验方法选择敏感药物治疗兽医临床常见的细菌性传染病。材料准备 1．器材：温箱、天平、打孔机、滤纸、无菌试管及吸管、镊子、接种环、酒精灯等。 2．试剂：蒸馏水。 3．培养基：普通琼脂平板。 4．菌种：金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的固体培养物。 5．药品：链霉素、金霉素、新霉素、红霉素等抗菌药物。 6．硫酸钡标准管：取1%~1.5%氯化钡0.5ml加1%硫酸溶液99.5ml，充分混匀即成，用前充分振荡。方法步骤将抗菌药物置于接种待检菌的固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内的扩散，抑制敏感细菌的生长，从而出现抑菌环。由于药物扩散的距离越远，达到该距离的药物浓度越低，由此可根据抑菌环的大小，判定细菌对药物的敏感度。（一）含药纸片的制备 1．滤纸片最好选用新华1号定性滤纸，用打孔机打成直径6mm的滤纸片，放在小瓶中或平皿中，在121.3℃灭菌15min，再置100℃干燥箱内烘干备用。 2．药液的配制用无菌蒸馏水将各药稀释成以下浓度：磺胺100mg/ml、青霉素100IU/ml、链霉素、金霉素、新霉素、红霉素、多粘菌素1000μg/ml。 3．含药纸片的制备将灭菌的滤纸片用无菌的镊子摊布于灭菌平皿中，按每张滤纸片饱和吸水量为0.01ml计算，50张滤纸片加入药液0.5ml。要不时翻动，使纸片充分吸收药液，浸泡1~2h后于37℃温箱中烘干备用。对青霉素、金霉素纸片的干燥宜采用低温真空干燥法，干燥后立即放入瓶中加塞，放干燥器内或置-20℃冰箱中保存。纸片的有效期一般为4~6个月。（二）测验方法 1．钩取金黄色葡萄球菌和大肠杆菌菌落各4~5个，分别接种于肉汤培养基中，37℃培养4~6h。 2．用灭菌生理盐水稀释培养菌液，使其浊度相当于硫酸钡标准管。装有以上两种成分的试管须相同，硫酸钡应用前需充分振动。 3．用无菌棉拭子蘸取上述肉汤培养液，在试管壁上挤压除去多余的液体，在琼脂培养基表面均匀涂抹。每种细菌分别接种1~2个琼脂平板。

细菌药物敏感试验实验报告

细菌药物敏感试验实验报告药物敏感性试验的基本原则 1药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药：天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2药敏试验测试的前提条件：实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3测试结果应准确：实验室应遵照CLSI文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理

体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。具体的专业要求 1标本类型临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。在规范临床送检的前提下，实验室进行药敏试验和报告药敏结果时，应首先考虑标本的特殊性。实际工作中需重点考虑的标本如下。 1．脑脊髓液：正常和疾病状态不能穿透血脑屏障的药物，常规不应报告。报告审核时，对于分离自脑脊髓液的菌，下列药物不能报告：仅有口服剂型的抗菌药物、一、二代头孢菌素(除外静脉用头孢呋辛)、头霉素类、克林霉素、大环内酯类、四环素类和喹诺酮类。

检验科细菌室实习小结

检验科细菌室实习小结 1、检验科细菌室实习小结细菌是的工作中，无菌操作很重要，不管是在细菌接种、鉴定还是药敏的时候，必须严格进行规范操作，否则将导致交叉污染，同时无菌操作也能更好的保护好自己。在实习和工作中一定要将理论联系实际，要善于思考，在观察菌落形态和细菌镜下形态时更应仔细认真，临床微生物的工作是一个经验积累的过程，要想成为一名优秀的检验医师，今后在微生物方面的学习中还得加倍努力。在细菌室实习生活结束之际，我要特别感谢细菌室的每一位老师，感谢他们耐心、和蔼的教导，是他们严谨、一丝不苟的科学态度教育了我，是他们团结协作、融洽的工作气氛感染了我。他们循循善诱给我讲解，他们耐心规范了我的操作，他们给予我很大的信任与鼓励，放手让我操作。而我能做的是在今后的学习和工作中带着一颗感恩的心认真负责地工作，培养高尚的职业道德、严肃的科学态度和一丝不苟的工作作风，使自己成为一名合格的检验专业的的优秀人员。祝福细菌室每一位老师工作顺利、阖家幸福。 2、检验科细菌室实习小结还记得，实习第一天的时候，老师就说，在细菌室，这短短的两个月时间是远远不够的。确实啊，我的细菌室实习是暂时告一段落了，但在微生物的学习之路还是很长的。现在我们所学到的仅仅只是入门啊！在实习和工作中一定要将理论联系实际，要善于思考，要严谨对待，临床微生物的工作即是一个不断积累经验的过程也是一个要随时更新知识的过程。要想成为一名合格的检验医师，今后在微生物方面的学习中还得加倍努力。在细菌室实习生活结束之际，我要特别感谢细菌室的每一位老师，感谢他们耐心、和蔼而又严厉的教导，是他们严谨、一丝不苟的科学态度教育了我，是他们团结协作、融洽的工作气氛感染了我。他们循循善诱给我讲解，他们耐心规范了我的操作，他们给予我

结核分枝杆菌痰培养及耐利福平药敏试验分析

结核分枝杆菌痰培养及耐利福平药敏试验分析发表时间：2018-07-13T13:57:23.327Z 来源：《心理医生》2018年16期作者：张婷 [导读] 在进行结核分枝杆菌痰培养与耐利福平药敏试验的过程当中。（甘肃省临夏州疾病预防控制中心甘肃临夏 731100）【摘要】目的：研究结核分枝杆菌痰培养与耐利福平药敏试验的结果。方法：选择2016年1月—2017年10月临夏地区结核病定点医院接诊的痰涂片阳性病患200例，对所有病患都施以痰培养和耐利福平试验，并对其痰培养和药敏试验的结果进行综合分析。结果：本组200例病患当中，有195例痰培养提示阳性，占总比例的97.5%；有1例为涂阳培阴，占总比例的0.5%；有4例污染，占总比例的2.0%。患者耐利福平药敏试验的结果提示，新患者的耐利福平率为10.63%，复治者的耐利福平率为22.86%，初治失败者的耐利福平率为40.0%。结论：严格按照相关的标准和流程进行结核分枝杆菌培养与药敏试验，复治者与初治失败者明显比新患者多。【关键词】耐利福平；结核分枝杆菌；药敏试验；痰培养【中图分类号】R52 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）16-0106-02 在进行结核分枝杆菌痰培养与耐利福平药敏试验的过程当中，比较容易受多种因素的影响而出现涂阳培阴亦或者是污染的情况[1]，所以，在实际操作期间要严格按照相关的步骤和标准进行，全面落实标本的收集、接种与保存等环节。此研究，笔者将以200例痰涂片阳性病患（接诊于2016年1月—2017年10月）为对象，重点分析结核分枝杆菌痰培养与耐利福平药敏试验的结果，现作出如下报道。 1.资料与方法 1.1 一般资料 2016年1月—2017年10月临夏地区结核病定点医院接诊的痰涂片阳性病患200例，包含男性患者104例，女性患者96例；年龄在18～76岁的范围之内，平均（46.28±11.34）岁；复发者，35例；新患者，160例；初治失败者，5例；职业为农民者，92例；无业者，11例；工人；60例；离退休人员，37例。所有患者都自愿参与此研究，临床资料完整，依从性良好，获得医学伦理委员会批准。 1.2 纳入标准[2] （1）既往有结核病史且现痰涂片检查提示阳性。（2）痰涂片检查提示（++）-（++++）。（3）治疗5个月后痰涂片检查提示阳性。 1.3 方法将所选病例都转录到肺结核患者培养与药敏登记表中，并对患者的基本信息进行详细的记录，比如：性别、职业、来源以及痰检结果等。采集患者的痰标本，并将之置于冰箱中进行低温保存。根据临床要求对采集到的痰标本进行登记，并在生物安全柜中，同时采取分枝杆菌分离培养法，对痰标本进行规范化的处理。所有试验用品和废弃物都经高压蒸汽进行消毒灭菌处理。以结核杆菌涂片镜检的相关操作规程，对痰标本进行结核分枝杆菌痰培养，并将培养结果准确记录在化验单以及结核病细菌学实验室登记册上。痰培养选择使用改良罗氏培养基（由“省结核病实验室”提供），利用分枝杆菌分离培养法进行痰培养，同时根据分枝杆菌分离培养法的要求，对生长结果进行准确的记录，并报告结果。药敏试验时，选取经抗酸染色明确为结核分枝杆菌的阳性标本。培养基产自“省结核病实验室”，利用结核分枝杆菌药敏试验法，同时根据结核分枝杆菌药敏试验的标准，对结果进行记录和报告。 1.4 统计学分析用SPSS20.0统计学软件分析研究数据，t用于检验计量资料，即（x-±s），χ2用于检验计数资料，即[n（%）]，P＜0.05差异有统计学意义。 2.结果本组200例病患当中，痰培养提示阳性者有195例，占总比例的97.5%，当中有27例耐利福平，上述菌株都根据实验室的要求进行保存。新患者的耐利福平率为10.63%，初治失败患者的耐利福平率为40.0%，复发患者的耐利福平率为22.86%。经比较发现，新患者的耐利福平率明显低于初治失败患者以及复发患者，P＜0.05。本组的涂阳培阴率为0.5%（1/200），污染率为2.0%（4/200）。详见表。 3.讨论现阶段，肺结核病在我国临床上比较常见，属于是一种慢性传染性疾病，能经呼吸道进行传播，可对人类的生命健康造成较大危害[3]。因不合理亦或者是不规则化疗、贫困、病后监测力度削弱以及健康水平低下等因素的影响，可引发结核菌耐药的情况，从而导致获得性耐药、自然耐药、初始耐药以及原发性耐药[4]。所以，临床需要充分了解耐药结核菌株的形成情况，然后再为患者制定出具有较高针对性的结核病治疗方案以及结核病疫情防控方案。如此，方可有效降低结核病的发病率，提高患者临床病症控制的效果。此研究中，选择了200例痰涂片阳性病患，当中有35例为复发患者，占总比例的17.5%；有5例为初治失败患者，占总比例的2.5%；有160例为新患者，占总比例的80.0%。200例病患当中有92例为农民，占总比例的46.0%；有11例无业，占总比例的5.5%；有60例为工人，占总比例的30.0%；有37例为离退休人员，占总比例的18.5%。可见，农民感染结核病的概率明显高于无业人员、工人以及离退休人员，P ＜0.05，这和农民的生活习惯、营养状况与休息等因素密切相关。患者药敏试验的结果提示，新患者的耐利福平率为10.63%，复治患者的耐利福平率为22.86%，初治失败患者的耐利福平率为40.0%。经比较发现，复治患者以及初治失败患者的耐利福平率明显比新患者高，P ＜0.05，这和患者不合理亦或者是不规则化疗有着较密切的关系。涂阳培阴1例，原因为：（1）标本保存不恰当，在制作好痰涂片后，需将涂片放在冰箱中进行保存，并于24h内严格按照相关的标准和流程进行培养；（2）过处理，应利用浓度为4%的氢氧化钠溶液进行处理，用量为1～2倍体积，处理时间为20min[5]；（3）痰标本选择不恰当，需选择标本中干酪样亦或者是脓样的可疑部分；四，患者未停药，在进行结核分枝杆菌痰培养的过程当中，需要求患者停药；五，接种量比较小，通常情况下，每管的接种量应为0.1ml。污染4例，原因为：

临床细菌培养结果与药敏试验敏感性和耐药分析

临床细菌培养结果与药敏试验敏感性和耐药分析发表时间：2016-07-09T12:43:14.773Z 来源：《医师在线》2016年5月第9期作者：夏芳 [导读] 通过对药材水分、灰分及浸出物的考察，制定了土五加的检查成分，有效地控制药材质量，从源头进行监控，保证药材的来源。夏芳河南省南阳油田总医院河南南阳 473132 摘要：目的了解我院临床所送标本分离菌株的特征及耐药情况，为临床提供“经验”用药的依据。方法收集2015年1月—2015年10月我院临床各科送检的1782份标本所分离出的病原菌鉴定结果与药敏实验作分析。结果 1782份标本由21个科室所送标本组成，共检出阳性标本555例，检出率为31.1%。革兰氏阴性菌439株，占分离菌的79.1%；革兰氏阳性菌检出116株，占分离菌的20%。革兰氏阴性杆菌中以大肠埃希菌分离率最高，为25.4%，依次为铜绿假单胞菌11.5 % ，阴沟杆菌9.1% 肺炎克雷伯菌8.6% ，鲍曼不动杆菌5.2%；革兰式阳性球菌以表皮葡萄菌为主，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌阳性率为23.8%，耐甲氧西林凝固酶阴性球菌为44.1%，大肠埃希菌产ESBLS为66%，肺炎克雷伯菌产ESBLS为39.6%，奇异变形杆菌产ESBLS为50%，革兰氏阴性菌耐药相当严重，大部分耐药在50%以上。结论定期对临床所选标本的细菌培养和药敏鉴定结果进行分析，有助于临床合理用药，减少耐药菌的发生，降低医疗费用和改善医患关系有重要意义。关键词：细菌培养药敏试验抗生素的合理使用已是人们关注的焦点，而合理使用抗生素的前提对于临床医生来说，基于两点出发：一是经验性用药；二是在细菌培养后，在药敏的指导下用药。而我们所说的“经验”性用药，是建立在细菌培养和药敏的回顾性总结的基础上而言的，所以检验科的微生物室应及时的总结临床所送标本分离菌构成特征及耐药情况，为临床提供“经验”用药的依据，为减少耐药菌的产生，降低医疗费用和改善医患关系有重要意义。基于这一目的，我们收集了2015年1月至2015年10月我院临床各科送检的1782份标本所分离出的病原菌鉴定结果及药敏试验结果，报告如下：材料与方法一、标本来源：住院与门诊共计21个科室，所送检的标本包括：血、尿、便、痰、分泌物、引流物、穿刺液、胸腹水等共计1782份。二、材料与试剂：BACTEC9120全自动血培养仪、DL-96细菌鉴定系统、使用配套鉴定及药敏分析卡。三、方法：各种标本以无菌方法接种于相应的培养基中，至于全自动培养箱孵育，如有细菌生长则进行鉴定和药敏试验，细菌的分离、鉴定严格按全国临床检验操作规程进行，药敏试验采用纸片法和MIC法。四、统计学处理：用WHONET5.4统计软件进行处理和分析。结果一、1782份标本细菌的检出率 1782份标本由21个科室送检标本组成，共检出阳性标本555例，检出率为31.1%。临床各科送检标本数与检出率本次分离出的555株细菌，革兰氏阴性菌439株，占分离菌的79.1%；革兰氏阳性菌116株，占分离菌的20.9%。

常见细菌药物敏感性试验报告规范

常见细菌药物敏感性试验报告规范中国专家共识微生物学检验为感染性疾病的诊断、治疗和控制提供了必不可少的证据。因此微生物学检验报告是临床和实验室等多方共同关注的焦点。国内临床微生物学检验发展较为薄弱，报告存在着种种不足。同时，临床与实验室的沟通存在一定不足，密切协作非常必要。基于实际存在的问题，为规范国内临床微生物学检验药物敏感性试验报告，加强临床与实验室合作，发挥检验医师作用，特制订本共识，以期指导相关报告的规范化，减少错误，增加专业信息，提高服务质量，为临床医学诊、治、控提供坚实的科学依据。本共识限于常见细菌的药物敏感性报告。一、药物敏感性试验的意义和基本原则 (一)意义药物敏感性试验可以检测细菌对于抗细菌药物的敏感性，为临床用药、新药研究、监测耐药变迁、发现耐药机制等提供客观证据[1]。对于经验治疗，依据一方面来自医生自身的经验，一方面是实验室长期不断提供的数据积累。临床需要考虑不同感染的病原谱和常见病原对不同药物的敏感性；对于靶向治疗，特定分离株的具体药敏试验结果可以用于判断经验治疗选药合理性、经验治疗效果分析、调整治疗选药依据等。 (二)基本原则 1．药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药：天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药[2]。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献[3,4]。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2．药敏试验测试的前提条件[5]：实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3．测试结果应准确：实验室应遵照C L S I文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。二、具体的专业要求 (一)标本类型临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。

酵母样真菌药敏试验

一、目的：指导实验人员准确完成酵母样真菌药敏试验（微量稀释法）。二、适用范围：怀疑酵母样真菌感染患者三、检验原理： ATB FUNGUS 3试条包括16对杯状凹cupules。第一对不含任何抗真菌剂。用作阳性生长对照。另外的15对包含不同稀释度的5种抗真菌剂。用于测定最小抑菌浓度（MIC）和（或）区分临床敏感性。将准备好的待测酵母样真菌的悬浮液转移到培养基中，并接种到试条上。孵育后，我们可以通过肉眼判读，或者应用A TB仪器或miniAPI判读杯状凹中液体的生长情况。获得MIC(两性霉素B[AMB])，氟康唑[FCA],伊曲康唑[ITR],伏立康唑[VRC],5-氟胞嘧啶[5FC]),将菌株分为敏感、中介或耐药。四、职责：生物梅里埃实验人员准确完成酵母样真菌药敏试验（微量稀释法）试剂厂家：规格：25测试／盒内含物：-25个独立包装的A TB FUNGUS 3 试条，包括干燥剂 -25个孵育盖 -25安瓿A TB F2培养基 -25张结果记录单 -一份说明书五、储存条件及有效期：在包装盒上指示的有效期前，试条和培养基应在2-8℃下存放。有效期为12个月。六、工作程序： (一)试验的准备： 1、从包装中取出试条 2、在试条延长翼上记录下被测酵母菌株的编号（二）接种物的准备： 1、打开一个API?0.85%氯化钠培养基安瓿（或API培养悬液） 2、采集不超过4天的菌落，制备成浊度相当于2 McFarland的悬浮液 3、用McFarland试剂盒的标准浊度管比较，或使用ATB比浊仪DENSIMAT 4、此菌悬液必须在准备后立即使用 5、使用一移液管转移20ul此悬浮液到一A TB F2培养基的安瓿中（三）试验条的接种：手工接种： 1、用ATB电子移液管混匀A TB F2培养基，避免产生气泡 2、使用ATB电子移液管在每个杯状凹中加入135ul的ATB F2 培养基（大约3*104酵母菌/毫升或4*103酵母菌/杯状凹）

检验科2017年第一季度细菌药敏分析报告

检验科第一季度细菌药敏分析报告 2016年12月21日至2017年3月20日，我科共收集全院73例细菌培养与鉴定标本，共检出致病菌18例，其中排名前三的细菌分别是：第一，葡萄球菌6例；第二，链球菌5例；第三，肠杆菌、铜绿假单胞菌各2例。其余真菌、粘质沙雷菌、假单胞菌各一例。首先，从以上的细菌普来看，葡萄球菌和链球菌感染为我院感染的主要病菌，与近2年的细菌耐药性来看，每种病菌的对抗生素浓度和种数的耐受程度和都有所增加，这意味着将来的细菌感染治疗工作会越发困难。从第一季度的感染情况来看，链球菌的感染机率大幅上升，其耐药程度比以往也有所增加。链球菌主要通过飞沫传染，应对病人和带菌者及时治疗，以减少传染源。空气、器械、敷料等注意消毒。对急性咽峡炎和扁桃体炎患者，尤其是儿童，须治疗彻底，防止超敏反应性疾病的发生。由于细菌族别不同，对抗生素的敏感相应也不同，所以临床用药最好以药敏实验为指导。以上感染排列前三的细菌的详细耐药情况如下表：（6例葡萄球菌属耐药情况统计）抗生素名称青霉素红霉素诺氟沙星苯唑西林左氧氟沙星利福平耐药例数 5 5 3 3 2 2 抗生素名称青霉素红霉素万古霉素克林霉素阿莫西林氯霉素耐药例数 4 5 3 2 1 2

（5例链球菌属耐药情况统计）（2例肠杆菌属耐药情况统计）（2例铜绿假单胞菌属耐药情况统计）从以上表格可以清楚看出，这些致病菌除了他们的天然耐药性以外，对多种抗生素均产生耐药机制，这使得临床医生的用药范围大大受收到限制，同时也对治疗效果及治愈率带形成严重的负面影响。由此看来，我院医务工作者在这方面将面临巨大的困难和挑战。其次，真菌的感染是我院新增致病菌，以往感染率较高的肠杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌感染有所下降。这几种常见致病菌的感染逐渐减少，与医务人对这几类常见病菌认知程度的加深有很大的关系，这也是值得我们欣慰的一件事。综上所述，我们应该清楚的认识到我院感染病菌的发展趋势，正确、勇敢的面对当前感染病例医治的困难，共同努力遏制细菌感染和耐药菌的增加趋势。库车县第二人民医院检验科 2017年3月22日抗生素名称阿莫西林头孢西丁头孢噻吩庆大霉素替卡西林头孢呋辛耐药例数 2 2 1 1 1 1 抗生素名称复方新诺明庆大霉素氨苄西林头孢他啶头孢呋辛头孢西丁头孢噻吩耐药例数 2 2 2 1 1 1 1