H7N9甲型流感病毒血凝素(HA)序列进化分析
H7N9甲型流感病毒血凝素（HA）序列进化分析
景涛1（11335080），黎镇祥1（11335084），洪仕秒2（11335058）
1中山大学生命科学大学院11级生物技术1班广州 510275
2中山大学生命科学大学院11级生物科学1班广州 510275
摘要： 2013年3月—4月在中国境内爆发了新型H7N9甲型流感病毒，造成了人员死亡和经济损失。2013年之前H7N9甲型流感病毒的宿主均为禽鸟，2013年新出现的新型病毒才具备感染人类的能力，这可能与病毒基因组中血凝素（HA）基因序列或其蛋白序列的变异密切相关。本研究选取HA蛋白编码基因及氨基酸序列为对象，通过比较新旧H7N9流感病毒HA的序列差异，构建进化树，并进行糖基化位点与裂解位点变异分析，研究新型H7N9甲型流感病毒的序列进化特征，试图寻找其或者人类感染能力的原因。结果显示，在HA进化树中新型病毒与旧病毒不在同一分支，并推测新型病毒可能从A/duck/Jiangxi/3096/2009(H7N9）毒株中重组获得HA片段或由该毒株进化而来。另外，新型H7N9流感病毒在糖基化位点和裂解位点上与A/duck/Jiangxi/3096/2009(H7N9）毒株并无差异，而需要从其他更多的角度分析新旧病毒的序列及性质差异。
关键词：H7N9甲型流感病毒；血凝素（HA）；序列进化；进化树；变异
甲型流感病毒（influenza A virus）是流感病毒的一种。该流感病毒的宿主有很多，如野生鸟类，驯养家禽、猪、马和人等温血动物。所有的甲型流感病毒的亚型都可以在野生鸟类中发现，其中一部分的甲型流感病毒可以对家禽和人等产生致病性[1]，引起流感大爆发和严重的家禽、人类死亡。历史上著名的流感大爆发均是由甲型流感病毒所造成的，包括1918年西班牙流感大爆发、1957年亚洲流感、1968年香港流感、从1996年开始流行了10年之久的H5N1流感、2009年猪流感大流行以及2013年开始中国流行的H7N9流感。甲型流感一旦在全球范围内爆发，必将给人类的健康带来重大的威胁
甲型流感病毒是反义单链RNA 病毒，通常为球状。根据其表面血球凝集素（hemagglutinin，HA）和神经氨酸酶（neuraminidase，NA）结构及编码基因特性的不同，又可分成许多亚型，如H1N1、H5N1、H7N9等。总共有18 种不同的H 抗原（H1-H18）和11 种不同的N 抗原(N1-N11)。无论是哪一种亚型的甲型流感病毒，其基因组均包含着八个片段，编码病毒的12 个蛋白[2]，各自执行独特的功能（表1）。甲型流感病毒拥有高度的变异能力，基因组可发生连续的变异和重组，产生新型病毒。
2013年3月至4月，我国上海、安徽、浙江、江苏等地先后出现甲型H7N9流感病毒感染患者，且重症患者病情发展迅速，可由重症肺炎快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症、感染性休克，甚至多器官功能障碍。资料显示，以上H7N9病毒为新型甲型流感病毒。NCBI（National Center for Biotechnology Information，美国国家生物技术信息中心）网站的Influenza Virus Resource数据库显示，早在1988年，美国明尼苏达州的一只火鸡体内即已发现H7N9甲型流感病毒。1988--2012年间，在全球范围内陆续发现多株H7N9甲型流感病毒，但宿主均为禽鸟。直至2013年3月份才首次发现能感染人类的H7N9病毒。
在甲型流感病毒的基因组中，Segment 4编码的血球凝集素（hemagglutinin，HA）决定着宿主的范围，在病毒进化中扮演着重要的角色。HA蛋白能够和宿主细胞表面的受体结合，介导膜融合，使病毒侵入宿主细胞[6]。因此我们选择H7N9甲型流感病毒的HA基因为研究对象，希望通过序列分析
表 1 甲型流感病毒各片段基因所编码的蛋白及其功能
片段编码蛋白功能
Segment 1 PB2 病毒mRNA 不断延长[3]
Segment 2 PB1 识别并裂解宿主mRNA 的帽子结构作为病毒转录的引物[3]
PB1-F2 诱导细胞凋亡[4]
Segment 3 PA 具有聚合酶的活性，发挥激酶或解旋酶的作用[5]
PA-X 减少病毒的致病性[6]
Segment 4 HA 决定宿主范围和严重程度[6]
Segment 5 NP 负责病毒的复制、转运、调节[7]
Segment 6 NA 负责催化唾液酸与糖蛋白之间糖苷键的水解
Segment 7 M1 外壳骨架，保护病毒核心
M2 帮助和激活HA 的融合功能[3]
Segment 8 NS1 抑制细胞干扰素的产生，抗凋亡[8]
NS2 促进新合成的核糖核蛋白出核，从而加速病毒产生
和比对，发现2013年之前发现的H7N9病毒（仅能感染禽鸟）与2013年发现的新型H7N9病毒（能感染人类）之间HA基因序列或蛋白氨基酸序列的差异，探求HA基因的进化特点，试图解释新型甲型流感病毒获得感染人类的能力的原因，并为有效预防控制H7N9流感病毒、降低病死率提供一定的理论依据。
1资料和方法
1.1 H7N9甲型流感病毒HA氨基酸序列的获得
从美国国家生物技术信息中心（NCBI，National Center for Biotechnology Information）网站上的流感病毒资源数据库（fluenza Virus Resource）（网址为https://www.360docs.net/doc/827423905.html,/genomes/FLU/D- -atabase/nph-select.cgi?go=database）查找H7N9甲型流感病毒编码HA蛋白的基因序列，并从中选出2013年之前检测到的序列14条（宿均来源于禽鸟）以及2013年之后检测到的序列13条（其中6条来源于禽鸟，7条来源于人类），下载FASTA，并推导成相应的蛋白质序列（表2）。
1.2 构建进化树
利用MEGA4.0软件，采用邻接法（neighbour-joining）和Kimura2-parameter模型构建进化树，自展值（bootstrap）为1000。
1.3 新型H7N9甲型流感病毒HA氨基酸序列变异分析
比对不同毒株HA蛋白的氨基酸序列，分析其抗原位点、糖基化位点和裂解位点等。由于进化树分析表明新型H7N9病毒（除了A/chicken/Rizhao/719b/2013(H7N9））HA序列同源性高达99%，以及这些新型病毒与毒株A/duck/Jiangxi/3096/2009(H7N9）进化关系最近，因此为了方便分析，仅选取新型H7N9病毒中最早被发现的一株A/Shanghai/02/2013(H7N9）作为代表与进化关系最近的毒株A/duck/Jiangxi/3096/2009(H7N9）进行HA氨基酸序列比对。流感病毒资源数据库（fluenza Virus
表2 H7N9甲型流感病毒HA序列来源
序号毒株GenBank登录号HA蛋白序列号
1 A/ruddy turnstone/DE/1538/2000(H7N9）ACD03594EU684261
2 A/mallard/Sweden/91/2002(H7N9）AAY46211AY999981
3 A/blue-winged teal/Ohio/566/2006(H7N9）ABS89409CY024818
4 A/duck/Mongolia/119/2008(H7N9）BAH22785AB481212
5 A/Anas crecca/Spain/1460/2008(H7N9）CAY39406FN386467
6 A/blue-winged teal/Guatemala/CIP049-01/2008(H7N9）ADK71137CY067670
7 A/duck/Jiangxi/3096/2009(H7N9）AGQ80952KF258951
8 A/goose/Czech Republic/1848-K9/2009(H7N9）ACX53683GU060482
9 A/turkey/Minnesota/14135-2/2009(H7N9）AHA11483KF715076
10 A/wild duck/Korea/SH19-50/2010(H7N9）AGG53487KC609772
11 A/duck/Gunma/466/2011(H7N9）BAN16711AB813056
12 A/northern shoverl/Mississippi/11OS145/2011(H7N9）AGE08098CY133649
13 A/wild duck/Korea/CSM42-34/2011(H7N9）AGG53366KC609783
14 A/guinea fowl/Nebraska/17096-1/2011(H7N9）AFV33945JX899803
15 A/Taiwan/1/2013(H7N9）AGL43637KF018039
16 A/Shanghai/02/2013(H7N9）AGL44438KF021597
17 A/pigeon/Shanghai/S1069/2013(H7N9）AGR49734CY147172
18 A/chicken/Zhejiang/SD033/2013(H7N9）AGR49554CY147052
19 A/duck/Anhui/SC702/2013(H7N9）AGR49566CY147060
20 A/wild pigeon/Jiangsu/SD001/2013(H7N9）AGR49770CY147196
21 A/Jiangsu/2/2013(H7N9）AGO51387KF226105
22 A/chicken/Rizhao/719b/2013(H7N9）ARG33894 KF297293
23 A/chicken/Jiangxi/SD001/2013(H7N9）AGR49399CY146948
24 A/Huizhou/01/2013(H7N9）AGY41893KF667739
25 A/Hong Kong/470129/2013(H7N9）AHF20528 KF952508
26 A/Guangdong/03/2013(H7N9）AHH25174 KJ023067
27 A/Shanghai/01/2014(H7N9）AHK10800 KJ411975
Resource）上即提供比对工具。利用在线糖基化预测工具NetNGlyc 1.0 Server对上述两种H7N9病毒HA蛋白进行糖基化位点预测，阀值（Threshold）为0.5，找出新型H7N9病毒糖基化位点的变异。
2结果
2.1 H7N9甲型流感病毒HA基因进化树分析
通过对MEGA4.0软件对收集到的27条HA氨基酸序列进行多序列比对，绘制了进化树（图1）。
图1 H7N9甲型流感病毒HA基因推导的氨基酸序列进化树
从该进化树可得知，H7N9甲型流感病毒HA基因的进化大致可分为4大支：在美洲地区流行的6个毒株构成一个分支， 2013年之前在欧亚大陆发现的8个毒株构成一支，2013年新发现的毒株A/chicken/Rizhao/719b/2013(H7N9）则独自成支，而除此之外的所有在2013年之后爆发的H7N9毒株（宿主包括人和禽鸟）则另外构成一个分支。
上述结果说明，美洲大陆与欧亚大陆的H7N9病毒HA基因序列差异较大，进化方向有所不同。其原因可能为两地环境以及选择压力不同，并且两地的鸟类由于大洋相隔，很少发生远距离迁移，使两地的H7N9病毒无法进行基因交流。
所有2013年之后出现的H7N9病毒与2013年之前的H7N9病毒都不在同一分支，由此验证了这些新出现的病毒的确是新型H7N9病毒。这些新型病毒与欧亚大陆的旧病毒的进化距离较近，可能是由同种毒株进化而来。其中，新型病毒（除了A/chicken/Rizhao/719b/2013(H7N9））的HA序列与欧亚大陆旧病毒中的A/duck/Jiangxi/3096/2009(H7N9）毒株HA序列同源性最高，因此推测新型病毒很可能是从该毒株中重组获得重组HA基因或者由该毒株直接进化而来。另外，新型H7N9病毒（除了A/chicken/Rizhao/719b/2013(H7N9）），无论其宿主是人或者禽鸟，HA基因之间都具有很高的相似性，达99%以上，由此推测这些新型病毒属于同一种类型，可以在人类和禽鸟之间相互传染。而独立成支的毒株A/chicken/Rizhao/719b/2013(H7N9）的HA基因可能发生了较剧烈的重组和变异，经历了不同的进化途径。
2.2 HA蛋白氨基酸序列的变异分析
通过对新旧两种H7N9甲型流感病毒HA蛋白质氨基酸序列的比对，发现新型H7N9流感病毒（AGL44438）相对于2009年H7N9病毒毒株A/duck/Jiangxi/3096/2009(H7N9）（AGQ80952）在以下位点发生氨基酸改变：V11I、N56S、A66T、T130A、T173M、D183S、I188V、G195V、T198A、I211V、Q235L、N293S、N307D、E321R、T410N、R414K、M427I、N455D、R462K、A541V，共20个变异位点（图2）。
2.3 HA蛋白糖基化位点氨基酸序列变异分析
由图3、图4可知，新型H7N9流感病毒的糖基化位点与以往的旧毒株相比未发生变异和缺失，都含有5个潜在的糖基化位点：30NGT、46NAT、249NDT、421NWT、439NNT，其中可能性较大的位点是30NGT、46NAT和249NDT。
2.4 HA蛋白裂解位点变异分析
有文献[9]表明流感病毒在HA 蛋白质第340位氨基酸附近存在HA裂解位点。本研究发现新型H7N9流感病毒的HA裂解位点附近序列是IPKGRG，与毒株A/duck/Jiangxi/3096/2009(H7N9）
（AGQ80952）并无区别。
图3 旧型H7N9病毒HA蛋白（AGQ80952）糖基化位点预测
图4 新型H7N9病毒HA蛋白（AGL44438）糖基化位点预测
3讨论
通过本研究中构建的HA序列进化树，可以比较直观地了解2013年爆发的新型H7N9甲型流感病毒的进化地位，并由之推测新型毒株可能从A/duck/Jiangxi/3096/2009(H7N9）毒株中重组获得HA片段或由该毒株进化而来。
2009年时尚无发现H7N9人类感染病例，可推知此时的H7N9病毒并未获得感染人体的能力。而
直至2013年新型流感爆发，H7N9才开始感染人体。本研究试图从糖基化位点以及裂解位点分析新旧病毒HA氨基酸序列的差异，并找出H7N9开始感染人体的关键变异。序列比对结果显示新型病毒相比起A/duck/Jiangxi/3096/2009(H7N9）毒株发生了20个氨基酸变异，但不包括糖基化位点和裂解位点。20个氨基酸变异证明两种毒株的HA序列见确实存在差异，后续研究可从这20个氨基酸突变位点着手，从蛋白质的其他性质分子其差异，如HA蛋白二级结构和三级结构、HA蛋白疏水性，突变位点的电荷变化、HA的受体结合位点等。
另外，新型H7N9病毒的变异和人类感染能力的获得可能并不仅仅是由于HA蛋白的变异，其基因组编码的其他11个蛋白中某些变异位点可能也是新型H7N9病毒变异的关键所在。一系列的后续研究有待进行。
4致谢
感谢何淼副教授、邓日强副教授、贺雄雷教授和任间教授在生物信息学课程上的教导和指点，同时感谢黄松健同学向本研究提供了MEGA4.0等软件及使用指导。
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9.流感病毒的快速检测方法
流感病毒的快速检测方法 一、RT-PCR快速诊断方法 （一）生物安全要求 （二）病毒核酸提取 （三）RT-PCR （四）PCR 产物纯化 （五）流感病毒RT-PCR检测引物 二、免疫荧光方法检测流感病毒 （一）原理 （二）标本处理 （三）间接免疫荧光法 （四）结果判断 三、实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）快速诊断检测 （一）基本原理 （二）实验试剂 （三）实验步骤 四、快速诊断试剂盒 流感的快速检测方法，与传统的病毒分离鉴定相比具有快速、简便的特点。因此常用于流感暴发时早期病原学检测用。流感的快速诊断包括直接和间接免疫荧光法、ELISA、RT-PCR、Real-Time PCR快速诊断速方法、流感快速诊断试剂盒等。这里介绍RT-PCR、Real-Time PCR、免疫荧光快速诊断速诊断方法和几种流感快速诊断试剂盒优缺点。无论那种快速诊断都无法代替传统的病毒分离鉴定方法。 一、RT-PCR快速诊断方法 核酸检测是一种鉴定流感病毒基因组的有力方法，即使基因组含量很低或死病毒也可以检测到。本章将介绍检测流感病毒的聚合酶链式反应（PCR）。 流感病毒的基因组是负链RNA，在进行PCR扩增前必须合成与病毒RNA 互补的DNA，即为cDNA。逆转录酶（RT）就是用于合成cDNA的多聚酶，因此，扩增流感病毒基因组的过程称为RT-PCR。 RT-PCR需要一对型别特异引物，四种脱氧核苷酸（dNTPs），RNA模板，逆转录酶及Taq DNA 多聚酶；首先由逆转录酶将病毒的RNA逆转录合成cDNA，然后再进行聚合酶链反应经25～30个循环，使DNA产物达到倍增的效果。 （一）生物安全要求 生物安全级别与个人防护要求：生物安全二级实验室，防护要求与二级实验室的要求相同。并应遵守相应的生物安全规定。进行高致病性禽H5 RT-PCR快速检测时可以在生物安全二级实验室里进行，核酸提取在生物安全三级实验室的生物安全柜里完成。
时间序列分析与建模简介
第五章时间序列分析与建模简介 时间序列建模( Ｍodｅlｌｉng vｉａtime serｉes )。时间序列分析与建模是数理统计的重要分支，其主要学术贡献人是Boｘ和Ｊenkins。本章扼要介绍吴宪民和Pandit的工作，仅要求一般了解当前时间序列分析与建模的一些主要结果。参考书:“时间序列及系统分析与应用(美)吴宪民,机械工业出版社（１9８8)ＴP１3/６6。 引言 根据对系统观测得出的按照时间顺序排列的数据，通过曲线拟合和参数估计或者谱分析,建立数学模型的理论与方法，理论基础是数理统计。有时域和频域两类建模方法,这里概括介绍时域方法,即基于曲线拟合与参数估计（如最小二乘法）的方法。常用于经济系统建模（如市场预测、经济规划)、气象与水文预报、环境与地震信号处理和天文等学科的信号处理等等。 §５—1 ARＭA模型分析 一、模型类 把具有相关性的观测数据组成的时间序列{x k }视为以正态同分布白噪声序列{ a k }为输入的动态系统的输出。用差分模型ARMA （n,m) 为Φ(z-１）xｋ= θ(z-１）a k式
(5-１-1） 其中:Φ (z -1) ＝ １－ φ１ z -1－…- φｎ ｚ-n θ （z -１) ＝ 1－ θ1 z -1-…－ θm ｚ-ｍ 离散传函 式（５-1-2） 为与参考书符号一致,以下用Ｂ表示时间后移算子 即： B ｘk ＝ x k －１ Ｂ即z -1，B 2即z －２… Φ (Ｂ)=０的根为系统的极点,若全部落在单位园内则系统稳定；θ(B)＝0的根为系统的零点,若全部在单位园内则系统逆稳定。 二、关于格林函数和时间序列的稳定性 １．格林函数Ｇi 格林函数G i 用以把x ｔ 表示成a t 及ａt 既往值的线性组合。 式（５-1－3) G I 可以由下式用长除法求得： 例1．A Ｒ（1): ｘt - φ１x t-1 = ａ t x B B B a B B a a t t t j t j j ==-=+++=-=∞∑θφφφφφ()()()1111112210 )()()(111---=z z z G φθ∑∞=-=0j j t j t a G x
甲型H1N1流感病毒-病毒特征
甲型H1N1流感病毒-病毒特征 甲型H1N1流感病毒是A型流感病毒，携带有 H1N1亚型猪流感病毒毒株，包含有禽流感、猪流感和人流感三种流感病毒的核糖核酸基因片断，同时拥有亚洲猪流感和非洲猪流感病毒特征。医学测试显示，目前主流抗病毒药物对这种毒株有效。美国疾控机构的照片显示甲型H1N1流感病毒呈阴性反应。 甲型H1N1流感病毒-感染症状 甲型H1N1流感症状与感冒类似，患者会出现发烧、咳嗽、疲劳、食欲不振等。有报道说，美国2009年疫情中发现病例的主要表现为突然发热、咳嗽、肌肉痛和疲倦，其中一些患者还出现腹泻和呕吐症状；墨西哥发现病例还出现眼睛发红、头痛和流涕等症状。发病人群多为青壮年，而不是季节性流感的易感人群——老人和儿童，这与人禽流感非常相似。 甲型H1N1流感病毒-病毒预防 在预防方面，没必要扎堆去接种人流感疫苗，因为预防季节性流感疫苗对预防猪流感并无效果。正确的做法是养成良好的个人卫生习惯，充足睡眠、勤于锻炼、减少压力、足够营养；勤洗手，尤其是接触过公共物品后要先洗手再触摸自己的眼睛、鼻子和嘴巴；打喷嚏和咳嗽的时候应该用纸巾捂住口鼻；室内保持通风等。 1、减少到公共人群密集场所的机会； 2、保证饮食以及充足睡眠、勤于锻炼、勤洗手、室内保持通风等，养成良好的个人卫生习惯。 3、在烹饪特别是洗涤生猪肉、家禽（特别是水禽时）应特别注意。特别是有皮肤破损的情况。建议尽量减少接触机会； 4、可以考虑戴口罩，降低风媒传播的可能性； 5、定期服用板蓝根（可以考虑有一定规律性），大青叶、薄荷叶、金银花作茶饮。 6、特别注意类似临床表现，引起重视。特别是突发高热、结膜潮红、咳嗽、流脓涕等症状。 甲型H1N1流感病毒-感染治疗 据悉，"达菲"在感染后48小时内服用有一定疗效； 2、据悉，一般对病毒治疗，如：病毒灵，有一定疗效； 3、抗生素应对上呼吸道感染以及并发症； 4、解热镇痛药，如扑热息痛，对症治疗； 5、良好的休息，多喝水； 6、出现症状及时就诊正规医院为要。 新病毒可以抵抗一种便宜和广泛使用的流感药物金刚烷胺(amantadine)，但无法抵抗两种较新的抗病毒药物达菲 比禽流感更厉害的甲型H1N1流感
流感病毒的实验室检测方法及进展
·１９０·星堕墅墅盘查！！！！生篁！！鲞釜ｉ塑！里！』曼！！丛！！至！坠：！！塑！！！！：！！：堕！：！ 流感病毒的实验室检测方法及进展 李月越陈杭薇李兵 【摘要】流行性感冒（流感）是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，其在人群中蔓延快，且具有高发病率及致死率的特点。流感的诊断不仅要根据临床症状和体征，其确诊还有赖于实验室检查。流感病毒的检测技术大致分为４个方面，即病毒分离培养、血清学诊断、现代免疫学诊断及分子生物学诊断。现分别从以上几个方面对流感病毒实验室检测方法及进展进行综述。 【关键词】流感病毒；检测方法 Ｌａｂ帅ｔｏｒｉａｌｍｅｔｈｏｄｓ狮ｄｐ哪哪艄０ｆｄ咖ｔｉＩｌｇｉＩＩｆｌｕ眦ａｖｉｎ麟Ｕｙ访ｙ獬，ＣＨＥＮ协咒ｇ－讹ｉ，ＵＢｉ恕ｇ．＆加仃批，ｚｆｏ，尺Ｐｓ加ｍ￡ｏ删Ｍ毒ｄ觑九８，＆巧ｉ挖ｇＣＤｍ凇挖ｄ＆咒８ｍ￡Ｈｏｓｐｉ￡ｎＺｏ，ＰＬＡ，＆巧锄ｇ１００７００，吼ｉ御 （乃ｒｒ已ｓ户Ｄ行矗ｉ７２９口“腩ｏｒ：（ＨＥ小，Ｈ口ｎｇ一议，Ｐｉ 【ＡｂｓｔＩ’ａｃｔ】Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓｃａｕｓｅａｎａｃｕｔｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｄｉｓｅａｓｅｔｈａｔｓｐｒｅａｄｓｅｐｉｄｅｍｉｃａｌｌｙｉｎｔｈｅｈｕｍａｎｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．ＣｈａｒａｃｔｅｒｏｆＩｎｆｌｕｅｎｚａｉｓｈｉｇｈｍｏｒｂｉｄｉｔｙａｎｄｍｏｒｔａｌｉｔｙ．ＤｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｉｎｆｌｕｅｎｚａｄｅｐｅｎｄｓｏｎｎｏｔｏｎｌｙｃｌｉｎｉｃｉａｌｓｙｍｐｔｏｍｓａｎｄｓｉｎｇｓｂｕｔａｌｓｏｌａｂｏｒａｔｏｒｉａＩｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓ．Ｖｉｒａｌｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｓｅｒｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｉｍｍｕｍｏｌｏ—ｇｉｃａｌａｓｓａｙａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏＩｏｇｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓａｒｅｆｏｕｒｍｅｔｈｏｄｓｔｈａｔｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｅｄｆｏｒｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉａｌｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｅｓｏｆｄｅｔｅｃｔｉｎｇｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓａｒｅｓｕｍｍａｒｉｚｅｄｉｎｔｈｅｆ０１ｌｏｗｉｎｇｔｅｘｔ． 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓ；Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ 流行性感冒简称流感，是由流感病毒引起的急 性呼吸道传染病，传染性强，蔓延快，其抗原易变异， 对人群尤其是儿童、老年人及机体免疫力低下的人 群有较高的发病率及致死率，危害很大。流感病毒 分为甲、乙、丙三型，其中变异大的、危害重的主要是 甲型和乙型流感病毒，尤以甲型为主，常可引起较大 范围的流行［１］。 流感的诊断不仅要根据临床症状和体征，还需 要实验室检测来证实。病毒诊断技术大致分为４个 方面，即病毒分离、血清学诊断、现代免疫学诊断及 分子生物学诊断瞳］。现分别进行介绍。 ｌ病毒分离培养 病毒分离培养是诊断流感最可靠的方法之一。 因流感病毒能够在鸡胚中良好生长，所以早期多用 鸡胚分离流感病毒，一般用９日龄至１１日龄的鸡胚 通过羊膜腔或尿囊腔接种分离病毒，接种后２４～９６ｈ 收集鸡胚尿囊液，２４ｈ内死亡的鸡胚弃掉，用鸡的 红细胞检测尿囊液或细胞培养液的血凝活性来证实 病毒的增殖和存在，如初次分离不到病毒，可盲传２ 代再进行检测；但近年来，随着分子生物学技术的发 展，发现通过鸡胚所分离到的流感病毒，其抗原性与 原始标本有所不同，而通过马一达犬１肾细胞（ＭＤＣＫ） 作者单位；１００７００北京军区总院呼吸内科 通讯作者：陈杭薇．综述． 分离病毒的抗原性与原始标本相似，另外由于 ＭＤｃＫ细胞对“ｏ”相毒株的敏感性比鸡胚高很多， 故ＭＤＣＫ细胞已成为流感病毒分离不可缺少的一 种宿主系统，现亦得到较为广泛的应用；ＭＤＣＫ分 离的病毒在很多国家尚未批准用于疫苗生产，因此 病毒分离现同时采用鸡胚及ＭＤＣＫ细胞两套系 统口］。但无论是以上哪种方法对标本中病毒采集、 运输及保存条件要求均较高，病毒样品如能在４８ｈ 分离，可在４℃保存，如果样品要存放较长时间必须 低温冻存（一７０℃）；且要求标本中的病毒含量高， 必须达到鸡胚或ＭＤＣＫ培养法所需要的病毒含量， 分离培养较为复杂、耗时且不稳定，也不能在普通实 验室进行，要确诊需要较长时间，故对流感早期诊断 及临床指导意义不大。 Ｓｈｉｈ等Ｈ３将一种新的实验室培养技术——离 心培养技术（ｓｈｅｌｌｖｉａｌｃｕｌｔｕｒｅ，ＳＶＣ）应用于流感病 毒的培养，其与传统培养方法没有本质的区别，不同 点为在标本接种后进行长时间的低速离心，使标本 中含病毒的颗粒在外力作用下被压挤吸附于培养细 胞，从而大大缩短了培养时间并提高了敏感性。在 国内倪安平等口］亦采用ＳＶＣ技术快速诊断流感病 毒，结果显示该技术能在２４ｈ内获得流感病毒培养 结果，可以快速确诊流感患者。 郭元吉等［６３建立了一种流感快速诊断方法，具 体为：采集标本经成片ＭＤＣＫ细胞扩增，使细胞表万方数据
时间序列分析_最经典的
【时间简“识”】 说明：本文摘自于经管之家(原人大经济论坛) 作者：胖胖小龟宝。原版请到经管之家(原人大经济论坛) 查看。 1.带你看看时间序列的简史 现在前面的话—— 时间序列作为一门统计学，经济学相结合的学科，在我们论坛，特别是五区计量经济学中是热门讨论话题。本月楼主推出新的系列专题——时间简“识”，旨在对时间序列方面进行知识扫盲（扫盲，仅仅扫盲而已……），同时也想借此吸引一些专业人士能够协助讨论和帮助大家解疑答惑。 在统计学的必修课里，时间序列估计是遭吐槽的重点科目了，其理论性强，虽然应用领域十分广泛，但往往在实际操作中会遇到很多“令人发指”的问题。所以本帖就从基础开始，为大家絮叨絮叨那些关于“时间”的故事！
Long long ago，有多long？估计大概7000年前吧，古埃及人把尼罗河涨落的情况逐天记录下来，这一记录也就被我们称作所谓的时间序列。记录这个河流涨落有什么意义？当时的人们并不是随手一记，而是对这个时间序列进行了长期的观察。结果，他们发现尼罗河的涨落非常有规律。掌握了尼罗河泛滥的规律，这帮助了古埃及对农耕和居所有了规划，使农业迅速发展，从而创建了埃及灿烂的史前文明。 好~~从上面那个故事我们看到了 1、时间序列的定义——按照时间的顺序把随机事件变化发展的过程记录下来就构成了一个时间序列。 2、时间序列分析的定义——对时间序列进行观察、研究，找寻它变化发展的规律，预测它将来的走势就是时间序列分析。 既然有了序列，那怎么拿来分析呢？ 时间序列分析方法分为描述性时序分析和统计时序分析。 1、描述性时序分析——通过直观的数据比较或绘图观测，寻找序列中蕴含的发展规律，这种分析方法就称为描述性时序分析 ?描述性时序分析方法具有操作简单、直观有效的特点，它通常是人们进行统计时序分析的第一步。
甲型H1N1流感病毒的综述
文献综述 题目甲型H1N1流感病毒的综述学生姓名王月红 专业班级生物科学 10级一班 学号 201014010124 院系化学与生物学院 完成时间 2013年12月18日
甲型H1N1流感病毒的综述 摘要：2010年全世界爆发了一场影响空前的流感，甲型H1N1流行性性感冒病毒从美国，墨西哥传出，席卷了整个人类社会，回顾以往大规模流感爆发事件。西班牙流感，亚洲流感，禽流感等给全世界人们带来了恐慌，甚至死亡，科学在进步，社会的医疗水平在提高，但流感病毒无时无刻在进行着变异，因此我们需要深入了解这种可怕病毒的分子机构、功能组成、复制方式、致病机制，并对其预防免疫，使人类在此面对流感变异病毒是能够及时治疗。本文讨论的是甲型H1N1流感病毒。主要通过4个方面来讲述：1、什么是甲型H1N1流感病毒以及对流感病毒的研究。2 、甲型H1N1流感病毒致宿主细胞氧化与凋亡。3、宿主细胞蛋白对H1N1病毒复制的影响。4、病毒蛋白对宿主细胞间的关联。 关键词：甲型H1N1流感病毒；氧化损伤；凋亡；致病机制 引言：流行性感冒病毒，简称流感病毒，是一种造成人类及动物患流行性感冒的RNA病毒，在分类学上，流感病毒属于正黏液病毒科，它会造成急性上呼吸道感染，并借由空气迅速的传播，在世界各地常会有周期性的大流行。病毒最早是在1933年由英国人威尔逊·史密斯（Wilson Smith）发现的，他称为H1N1。H代表血凝素；N代表神经氨酸酶。数字代表不同类型。 在2009春爆发的严重危及人类健康。甲型H1N1病毒[1]属于正粘病毒科（0rthomyxoviridae），甲型流感病毒属（Influenza virus A），其遗传物质为RNA。典型病毒颗粒呈球状，直径为80 nm～120 nm，有囊膜。囊膜上有许多放射状排列的突起糖蛋白，分别是血凝素HA [2]、神经氨酸酶NA 和M2蛋白[3]。病毒颗粒内为核衣壳, 呈螺旋状对称, 直径为10nm。甲型H1N1病毒为单股负链RNA病毒，基因组约为13.6 kb，由大小不等的8 个独立片段组成。尽管不同亚型之间可以组成很多种流感病毒血清型，但是可造成人感染猪流感病毒的血清型主要有H1N1、H1N2 [4]和H3N2 5-6]。甲型H1N1流感病毒是A 型流感病毒，携带有H1N1亚型猪流感病毒毒株，包含有禽流感、猪流感和人流感三种流感病毒的核糖核酸基因片段，同时拥有亚洲猪流感和非洲猪流感病毒特征。医学测试显示，目前主流抗病毒药物对这种毒株有效。美国疾控机构的照片显示甲型H1N1流感病毒呈阴性反应。 流感是由流感病毒引起的人畜禽共患的感染性疾病。流感病毒传染性强，传播速度快，在人类历史上曾引发多次大流行，夺去了大量人的生命。流感是人类最大的瘟疫。流感危害养殖业的发展，造成养禽业毁灭性灾害。加强流感病毒基础理论研究，从分子水平上寻求防治流感的有效措施，研制长效、稳定、无毒副反应的新型流感疫苗，建立简便、特异、敏感的诊断技术及有效的抗病毒药物，已成为各国科技工作者孜孜以求的崇高事业。 一、对流感病毒的研究 1、流感病毒的基因结构及其编码的蛋白 流感病毒属正黏病毒科。呈多形性，有球形、杆状和丝状。甲型和乙型流感病毒的基因组由8条独立片段组成。每一条RNA基因都以核糖核蛋白复合体形式存在。每个片段两端都有相对保守的非编码序列，每个片段至少有一个开放式读码框架(ORF)。基因片段5端前的13个核苷酸高度保守，其序列为：3’-GGAACAAAGAUGAppp-5’，3’端也有12个高度保守的核苷酸，序列为：
2020年衡水中学高考生物真题分类汇编专题05：生物的变异与进化
2019年高考生物真题分类汇编专题05：生物的变异与进化 一、单选题（共7题） 1.（2019?江苏）下列关于生物变异与育种的叙述，正确的是（） A. 基因重组只是基因间的重新组合，不会导致生物性状变异 B. 基因突变使DNA序列发生的变化，都能引起生物性状变异 C. 弱小且高度不育的单倍体植株，进行加倍处理后可用于育种 D. 多倍体植株染色体组数加倍，产生的配子数加倍，有利于育种 2.（2019?江苏）我国生物多样性较低的西部沙漠地区生长着一种叶退化的药用植物锁阳，该植物依附在另一种植物小果白刺的根部生长，从其根部获取营养物质。下列相关叙述正确的是（） A. 锁阳与小果白刺的种间关系为捕食 B. 该地区生态系统的自我调节能力较强，恢复力稳定性较高 C. 种植小果白刺等沙生植物固沙体现了生物多样性的间接价值 D. 锁阳因长期干早定向产生了适应环境的突变，并被保留下来 3.（2019?江苏）下列关于种群和群落的叙述，正确的是（） A. 种群是生物进化的基本单位，种群内出现个体变异是普遍现象 B. 退耕还林、退塘还湖、布设人工鱼礁之后都会发生群落的初生演替 C. 习性相似物种的生活区域重叠得越多，对资源的利用越充分 D. 两只雄孔雀为吸引异性争相开屏，说明行为信息能够影响种间关系 4.（2019?江苏）人镰刀型细胞贫血症是基因突变造成的，血红蛋白β链第6个氨基酸的密码子由GAG 变为GUG，导致编码的谷氨酸被置换为缬氨酸。下列相关叙述错误的是（） A. 该突变改变了DNA碱基对内的氢键数 B. 该突变引起了血红蛋白β链结构的改变 C. 在缺氧情况下患者的红细胞易破裂 D. 该病不属于染色体异常遗传病 5.（2019?江苏）下图为初级精母细胞减数分裂时的一对同源染色体示意图，图中1~8表示基因。不考虑突变的情况下，下列叙述正确的是（） A. 1与2、3、4互为等位基因，与6、7、8互为非等位基因 B. 同一个体的精原细胞有丝分裂前期也应含有基因1~8 C. 1与3都在减数第一次分裂分离，1与2都在减数第二次分裂分离 D. 1分别与6、7、8组合都能形成重组型的配子 6.（2019?天津）叶色变异是由体细胞突变引起的芽变现象。红叶杨由绿叶杨芽变后选育形成，其叶绿体基粒类囊体减少，光合速率减小，液泡中花青素含量增加。下列叙述正确的是（） A. 红叶杨染色体上的基因突变位点可用普通光学显微镜观察识别 B. 两种杨树叶绿体基粒类囊体的差异可用普通光学显微镜观察 C. 两种杨树叶光合速率可通过“探究光照强弱对光合作用强度的影响”实验作比较 D. 红叶杨细胞中花青素绝对含量可通过“植物细胞的吸水和失水”实验测定 7.（2019?天津）多数植物遭到昆虫蚕食时会分泌茉莉酸，启动抗虫反应，如分泌杀虫物质、产生吸引昆虫天敌的挥发物质等。烟粉虱能合成Bt56蛋白，该蛋白会随烟粉虱唾液进入植物，抑制茉莉酸启动的抗虫反应，使烟粉虱数量迅速增长。下列叙述错误的是（） A. 植物产生挥发物质吸引昆虫天敌体现了信息传递调节种间关系的功能 B. 植食性昆虫以植物为食和植物抗虫反应是长期共同进化的结果
甲型流感病毒抗原检测试剂使用说明(胶体金)-Alere BinaxNOW
甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）使用说明书 【产品名称】 通用名称：甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法） 英文名称：Alere BinaxNOW? Influenza A＆B Card 【包装规格】 22人份/盒。 【预期用途】 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）是一种体外免疫层析试验，用于定性检测鼻咽拭子样本中的甲、乙型流感病毒核蛋白抗原，可快速地对甲、乙型流感病毒感染做出辅助鉴别诊断。 试验简介 流感是发生在呼吸道的具有高度传染性的急性病毒感染，它属于传染病范畴，可通过咳嗽或打喷嚏时排出的带有活病毒的气溶胶而在人与人之间传播。每年的秋季和冬季都可爆发流感1.甲型流感病毒的流行性比乙型流感病毒流行性要强，造成的病情也更严重，并且大多数严重的流感也都是由它引起的，而乙型流感则相对比较缓和。 针对甲、乙型流感的快速诊断试验对获取有效的抗病毒治疗是很有意义的。对流感做出快速诊断不但可减少病人住院的天数，减少抗菌素的使用，而且可减少病人的住院费用1。 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）提供了一种用鼻咽拭子标本对甲型和乙型流感进行简便快速诊断的方法，使用方便，结果快速，在急诊检验中提供的信息可帮助医生选择治疗方案并做出是否需要收住院的决定。 甲型流感病毒有许多亚型，有些亚型可在鸟类中发现3。1997年首次报道人类甲型禽流感（H5N1，主要发生于鸟类的一种流感病毒亚型），此后，在人群中出现了H5N1病例，使人们对H5N1关注起来，H5N1的变异使得它更易在人群间传播4，由于备案的禽流感感染病人比例很低，快速试验在该类病人治疗中利用度尚不得知。 【检验原理】 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）使用的是薄膜免疫层析技术，它利用具有高度敏感性的单克隆抗体来检测鼻咽拭子标本中的甲型和乙型流感病毒的核蛋白抗原这些单克隆抗体连同一种对照抗体分别被固定到膜支持物上，形成三条独特的线。膜支持物跟其他试剂/垫结合在一起构成检测条。检测条位于一个称作检测卡的书型铰链状的纸板中。 拭子标本需要进行预处理：用洗脱液、盐水或转移介质等将标本从拭子中洗脱出来，将标本加到检测条顶端，闭合检测卡，15分钟时根据是否出现紫红色样品线来报告结果。在有效试验中，蓝色对照线变为粉红色。 【主要组成成分】 提供的材料
七、生物的变异和进化
七.、生物的变异和进化 生物的变异 变异的原因 1、环境条件的改变（不可遗传变异） 2、在强烈的物理、化学基因影响下发生的基因突变和染色体畸变。 3、在有性生殖形成配子时，由于非同源染色体的自由组合和同源染色体的非姐妹染色单体间的片段交换而引起的基因重组。 基因重组(是生物变异的主要来源之一) 概念：具有不同遗传形状的雌、雄个体进行有性生殖时，控制不同性状的基因重新组合，导致后代不同于卿本类型的现象或过程。 注意：1、基因重组不能产生新基因，但能产生新的基因型。 2、S型肺炎双球菌使R型肺炎双球菌发生转化、转基因技术的原理也是基因重组。
3、精卵结合过程不是基因重组。 基因突变（是生物变异的根本来源） 概念：是指基因部核酸分子上的特定核苷酸序列发生改变的现象和过程。DNA分子中发生碱基的替换或缺失，而引起的基因结构的的改变，突变后的基因成为原基因的等位基因。 图例： A A T T C C G G T 正常复制 A A T T C C G G T T T A A G G C C A T T A A G G C C A 复制 A A A C T T C C G G T 出错 T T T G A A G G C C A A A T T C C G G C T T A A G G C C G 缺失 A T C C G G T T A G G C C A 基因突变的类型 根据基因对表现型的影响 1、形态突变：主要影响生物的形态结构，可从表现型的明显差异来识别。（如果蝇的红眼突变为白眼） 2、生化突变：影响生物代过程，导致某个生化功能的改变和丧失。（如苯丙酮尿症） 3、致死突变：导致个体活力下降，甚至死亡。 形态突变和致死突变都伴随有特定的生化过程改变，因此严格地讲，任何突变都是生化突变。 基因突变的特点 1、普遍性：无论高级动植物还是低等生物都会发生。 2、多方向性：一个基因可以产生一个以上的等位基因。 3、稀有性：对某一生物个体来说突变的频率很低，对某一个种群或一个物种来说，突变基
甲型流感病毒血凝素抗体说明书
甲型流感病毒血凝素抗体说明书 抗体名：甲型流感病毒血凝素抗体 抗体英文名：H1N1 Hemagglutinin 2 Antibody 应用范围：WB: 1:100-500 E: 1:500-1000 IP: 1:20-100 IHC: 1:100-500 IF: 1:100-500 产品用途：科研实验，用于免疫组化实验，WB实验，相应的标记抗体有HRP标记抗体，FITC标记，BIO等。产品用途：科研实验，用于免疫组化实验，WB实验，相应的标记抗体有HRP标记抗体，FITC标记，BIO等。 免疫原：Peptide derived from Influenza A Virus Hemagglutinin C-terminus. 标记物：无标记（PLlabs可供应生物素、酶、荧光素标记的抗体） 适应物种：Influenza A virus H1N1 靶点：H1N1 Hemagglutinin 2 浓度：1mg/ml 宿主：Rabbit 克隆性：多克隆 保存条件：保存于-20℃ 形态：液态 亚型：Rabbit Polyclonal IgG 规格：0.1ml Background： Influenza A virus is a major public health threat. Novel influenza virus strains caused by genetic drift and viral recombination emerge periodically to which humans have little or no
immunity, resulting in devastating pandemics. Influenza A can exist in a variety of animals; however it is in birds that all subtypes can be found. These subtypes are classified based on the combination of the virus coat glycoproteins hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) subtypes. During 1997, an H5N1 avian influenza virus was determined to be the cause of death in 6 of 18 infected patients in Hong Kong. There was some evidence of human to human spread of this virus, but it is thought that the transmission efficiency was fairly low. HA interacts with cell surface proteins containing oligosaccharides with terminal sialyl residues. 甲型流感病毒血凝素抗体的制备: 目的建立针对甲型流感病毒血凝素的通用抗体. 方法通过对流感病毒数据库中血凝素基因的分析,寻找保守的序列并合成多肽.将多肽耦联在载体匙孔血监蛋白(KLH)上,多次皮下免疫家兔,制备高效价抗体. 结果序列分析发现血凝素第二亚单位(HA2)上氨基端14个氨基酸极端保守,耦联多肽经4次免疫后效价达到1:80000,以免疫印迹方法证明此通用抗体能与流感病毒H1～H13亚型的血凝素蛋白特异反应. 结论通过寻找保守蛋白并耦联在合适载体上,免疫家兔获得了针对甲型流感病毒血凝素抗原的通用抗体. 甲型流感病毒血凝素抗体抗体的多样性：
生物的变异与进化试卷
09届高三生物第一轮复习测试题 必修二生物的变异与进化 第I卷（选择题共55分） 一、选择题（每小题只有一个选项符合题意） 1．对某区域一个种群的某一性状进行随机抽样调查，假设该种群非常大，所有的雌雄个体间都能自由交配并产生后代，没有迁入和迁出，自然选择对该性状没有作用，也不存在突变。该种群中基因型AA、Aa、aa的个体分别有若干只，理论上Aa的基因型频率N为A．0≤N≤100%B．0＜N≤50%C．0≤N＜50% D．50%＜N＜100% 2．相同条件下，小麦植株哪一部位的细胞最难以产生新的基因 A．叶肉B．根分生区C．茎尖D．花药 3．下列与物种形成无关的是 A．不可遗传的变异B．地理隔离C．生殖隔离D．生态位分化 4．a基因纯合会导致某种生物胚胎致死，现已知该生物某自然种群中A的基因频率接近50%，则该种群中杂合子大约占 A．1% B．10% C．50% D．99% 5．关于人类遗传病的叙述不．正确的是 A．人类遗传病是指由于遗传物质改变而引起的疾病 B．人类遗传病包括单基因遗传病、多基因遗传病和染色体异常遗传病 C．21三体综合征患者体细胞中染色体数目为47条 D．调查人群中的遗传病最好选取群体中发病率较高的多基因遗传病 6．下列关于生物进化的叙述中，不正确 ．．．的是 A．一个生物物种可以发生单独进化 B．生物进化导致生物多样性的产生 C．共同进化可发生在不同物种之间 D．生物进化的实质是种群基因频率的改变7．要将基因型为AaBB的生物，培育出以下基因型的生物：①AaBb；②AaBBC；③AAaaBBBB；④aB。则对应的育种方法依次是 A．诱变育种、转基因技术、细胞融合、花药离体培养 B．杂交育种、花药离体培养、转基因技术、多倍体育种 C．花药离体培养、诱变育种、多倍体育种、转基因技术 D．多倍体育种、花药离体培养、诱变育种、转基因技术 8．长期使用某种抗生素后，病菌的抗药性增强，杀菌效果下降，原因是 A．抗生素诱发了病菌抗药性基因的产生 B．抗生素对病菌具有选择作用，使抗药性病菌的数量增加 C．抗生素能诱导病菌分解药物的基因大量表达 D．抗药性强的病菌所产生的后代都具有很强的抗药性 9．江苏里下河农科所通过如右图育种过程 培育成了高品质的糯小麦。相关叙述正 确的是 A．该育种过程中运用的遗传学原理是 基因突变 B．a过程能提高突变率，从而明显缩短
9.流感病毒的快速检测方法
一、RT-PCR快速诊断方法 （一）生物安全要求 （二）病毒核酸提取 （三）RT-PCR （四）PCR 产物纯化 （五）流感病毒RT-PCR检测引物 二、免疫荧光方法检测流感病毒 （一）原理 （二）标本处理 （三）间接免疫荧光法 （四）结果判断 三、实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）快速诊断检测 （一）基本原理 （二）实验试剂 （三）实验步骤 四、快速诊断试剂盒 流感的快速检测方法，与传统的病毒分离鉴定相比具有快速、简便的特点。因此常用于流感暴发时早期病原学检测用。流感的快速诊断包括直接和间接免疫荧光法、ELISA、RT-PCR、Real-Time PCR快速诊断速方法、流感快速诊断试剂盒等。这里介绍RT-PCR、Real-Time PCR、免疫荧光快速诊断速诊断方法和几种流感快速诊断试剂盒优缺点。无论那种快速诊断都无法代替传统的病毒分离鉴定方法。 一、RT-PCR快速诊断方法 核酸检测是一种鉴定流感病毒基因组的有力方法，即使基因组含量很低或死病毒也可以检测到。本章将介绍检测流感病毒的聚合酶链式反应（PCR）。 流感病毒的基因组是负链RNA，在进行PCR扩增前必须合成与病毒RNA互补的DNA，即为cDNA。逆转录酶（RT）就是用于合成cDNA的多聚酶，因此，扩增流感病毒基因组的过程称为RT-PCR。 RT-PCR需要一对型别特异引物，四种脱氧核苷酸（dNTPs），RNA模板，逆转录酶及Taq DNA 多聚酶；首先由逆转录酶将病毒的RNA逆转录合成cDNA，然后再进行聚合酶链反应经25～30个循环，使DNA产物达到倍增的效果。 （一）生物安全要求 生物安全级别与个人防护要求：生物安全二级实验室，防护要求与二级实验室的要求相同。并应遵守相应的生物安全规定。进行高致病性禽H5 RT-PCR快速检测时可以在生物安全二级实验室里进行，核酸提取在生物安全三级实验室的生物安全柜里完成。 （二）病毒核酸提取 1.实验材料及仪器
高考生物二轮复习 专题4 遗传、变异与进化3 生物的变异与进化
高考生物二轮复习专题4 遗传、变异与进化3 生物的变异与 进化 核心考点整合 考点整合一：生物变异的类型、特点及判断 1．生物变异的类型 2．三种可遗传变异的比较 项目基因突变基因重组染色体变异 适用范围生物 种类 所有生物自然状态下能进行有 性生殖的生物 真核生物 生殖 方式 无性生殖、有性生殖有性生殖无性生殖、有性生殖 类型自然突变、诱发突变交叉互换、自由组合染色体结构变异、染色 体数目变异 原因DNA复制（有丝分裂间期、 减数分裂第一次分裂的 间期）过程出现差错减数分裂时非同源染色体上 的非等位基因自由组合或同 源染色体的非姐妹染色单体 间发生交叉互换 内外因素影响使染色体 结构出现异常，或细胞 分裂过程中，染色体的 分开出现异常 实质产生新的基因（改变基因 的质，不改变基因的量）产生新的基因型（不改变基因 的质，一般也不改变基因的 量，但转基因技术会改变基因 的量） 基因数目或基因排列顺 序发生改变（不改变基 因的质） 关系基因突变是生物变异的根本来源，为基因重组提供原始材料。三种可遗传变异都为生物进化提供了原材料 3.染色体组和基因组 染色体组：细胞中的一组非同源染色体，它们在形态和功能上各不相同，但是携带着控制一种生物生长发育、遗传和变异的全部信息。其特点： （1）一个染色体组中所含的染色体大小、形态和功能各不相同。 （2）一个染色体组中不含有同源染色体，当然也就不含有等位基因。 （3）一个染色体组中含有控制该物种生物性状的一整套基因。
（4）二倍体生物的生殖细胞中所含有的一组染色体可看成一个染色体组。 （5）不同种的生物，每个染色体组所包括的染色体数目、形态和大小是不同的。 基因组：一般的定义是二倍体生物的单倍体细胞中的全套染色体为一个基因组，或是二倍体生物的单倍体细胞中的全部基因为一个基因组。对二倍体生物而言，基因组计划则为测定单倍体细胞中全部DNA分子的脱氧核苷酸序列，有性染色体的生物其基因组包括一个染色体组的常染色体加上两条性染色体。没有性染色体的生物其基因组与染色体组相同。 4．单倍体和多倍体的比较 单倍体是指体细胞中含有本物种配子染色体数目的个体。多倍体由合子发育而来，体细胞中含有三个或三个以上染色体组。对于体细胞中含有三个染色体组的个体，是属于单倍体还是三倍体，要依据其来源进行判断：若直接来自配子，就为单倍体；若来自受精卵，则为三倍体。 【例1】（2010·北京西城）如图示意某生物细胞减数分裂时，两对联会的染色体之间出现异常的“十字型”结构现象，图中字母表示染色体上的基因。据此所作推断中，错误的是 A．此种异常源于染色体的结构变异 B．该生物产生的异常配子很可能有HAa或hBb型 C．该生物基因型为HhAaBb，一定属于二倍体生物 D．此种异常可能会导致生物体的育性下降 [解析] 由图示可知，图中两对同源染色体间发生了染色体结构变异，A与b或a与B发生互换，由此可能产生HAa或hBb型的异常配子，据图可知，此细胞的基因型为HhAaBb，如果该生物体由受精卵发育而成，一定属于二倍体生物，如果由配子发育而成则只能属于单倍体生物；染色体结构变异，对生物体多数都是有害的，有可能引起生物体的育性下降。 [答案] C [知识总结] 基因突变、基因重组和染色体变异的相关问题 （1）关于“互换”问题。同源染色体上非姐妹染色单体的交叉互换，属于基因重组；非同染色体之间的互换，属于染色体结构变异中的易位。 （2）关于“缺失”问题。DNA分子上若干基因的缺失属于染色体变异；DNA分子上若干碱基对的缺失，属于基因突变。 （3）关于变异的水平问题。基因突变、基因重组属于分子水平的变化，光学显微镜下观察不到；染色体变异属于亚细胞水平的变化，光学显微镜下可以观察到。 （4）关于不同生物可遗传变异的类型问题。病毒的可遗传变异惟一来源是基因突变；细菌等原核生物不含染色体，所以不存在染色体变异。在真核生物中，上述三种类型都存在。 【互动探究1】（2010·江浦中学测试）下列有关变异的说法正确的是 A．染色体中DNA的一个碱基缺失属于染色体结构变异
时间序列分析简介与模型
第二篇 预测方法与模型 预测是研究客观事物未来发展方向与趋势的一门科学。统计预测是以统计调查资料为依据，以经济、社会、科学技术理论为基础，以数学模型为主要手段，对客观事物未来发展所作的定量推断和估计。根据社会、经济、科技的预测结论，人们可以调整发展战略，制定管理措施，平衡市场供求，进行各种各样的决策。预测也是制定政策，编制规划、计划，具体组织生产经营活动的科学基础。20世纪三四十年代以来，随着人类社会生产力水平的不断提高和科学技术的迅猛发展，特别是近年来以计算机为主的信息技术的飞速发展，更进一步推动了预测技术在国民经济、社会发展和科学技术各个领域的应用。 预测包含定性预测法、因果关系预测法和时间序列预测法三类。本篇对定性预测法不加以介绍，对后两类方法选择以下几种介绍方法的原理、模型的建立和实际应用，分别为：时间序列分析、微分方程模型、灰色预测模型、人工神经网络。 第五章 时间序列分析 在预测实践中，预测者们发现和总结了许多行之有效的预测理论和方法，但以概率统计理论为基础的预测方法目前仍然是最基本和最常用的方法。本章介绍其中的时间序列分析预测法。此方法是根据预测对象过去的统计数据找到其随时间变化的规律，建立时间序列模型，以推断未来数值的预测方法。时间序列分析在微观经济计量模型、宏观经济计量模型以及经济控制论中有广泛的应用。 第一节 时间序列简介 所谓时间序列是指将同一现象在不同时间的观测值，按时间先后顺序排列所形成的数列。时间序列一般用 ,,,,21n y y y 来表示，可以简记为}{t y 。它的时间单位可以是分钟、时、日、周、旬、月、季、年等。
一、时间序列预测法 时间序列预测法就是通过编制和分析时间序列，根据时间序列所反应出来的发展过程、方向和趋势，进行类推或延伸，借以预测下一段时间或以后若干年可能达到的水平。其容包括:收集与整理某种社会现象的历史资料；将这些资料进行检查鉴别，排成数列；分析时间序列，从中寻找该社会现象随时间变化而变化的规律，得出一定的模型，以此模型去预测该社会现象将来的情况。 二、时间序列数据的特点 通常，时间序列经过合理的函数变换后都可以看作是由三个部分叠加而成，这三个部分是趋势项部分、周期项部分和随机项部分。 1. 趋势性 许多序列的一个最主要的特征就是存在趋势。这种趋势可能是向下的也可能是向上的，也许比较陡，也许比较平缓，或者是指数增长，或者近似线性。总之，时间序列的趋势性是依据时间序列进行预测的本质所在。 2. 季节性/周期性 当数据按照月或季观测时，通常的情况是这样的:时间序列会呈现出明显的季节性。对季节性也不存在一个非常精确的定义。通常，当某个季节的观测值具有与其它季节的观测值明显不同的特征时，就称之为季节性。 3. 异常观测值 异常观测值指那些严重偏离趋势围的特殊点。异常观测值的出现往往是由于某些不可抗 1958 年自然灾害和1966年左右“文化大革命”对我国经拒的外部条件的影响。如1960 济的影响，造成经济指标陡然下降现象；1992年，我国银行紧缩政策造成的房地产业泡沫破灭，而使得房地产业的经济数据发生突然变化的例子等等。 4. 条件异方差性 所谓条件异方差性，表现出来就是异常数据观测值成群地出现，故也称为“波动积聚性”。由于方差是风险的测度，因此波动存在的积聚性的预测对于评估投资决策是很有用的，对于期权和其它金融衍生产品的买卖决策也是有益的。 5. 非线性 对非线性的最好定义就是“线性以外的一切”。非线性常常表现为“机制转换”(regime witches)或者“状态依赖”(State pendence)。其中状态依赖意味着时间序列的特征依赖于其现时的状态;不同的时刻，其特征不一样。当时间序列的特征在所有的离散状态都不一样时，就成为机制转换特性。 三、时间序列的分类 1. 按研究的对象的多少可分为单变量时间序列和多变量时间序列。 如果所研究的对象是一个变量，如某个国家的国生产总值，即为单变量时间序列。果所研究的对象是多个变量，如按年、月顺序排列的气温、气压、雨量数据，为多变量时间序列。多变量时间序列不仅描述了各个变量的变化规律，而且还表示了各变量间相互依存关系的动态规律性。 2. 按时间的连续性可将时间序列分为离散时间序列和连续时间序列。 如果某一序列中的每一个序列值所对应的时间参数为间断点，则该序列就是一个离散时间序列。如果某一序列中的每个序列值所对应的时间参数为连续函数，则该序列就是一个连续时间序列。 3. 按序列的统计特性可分为平稳时间序列和非平稳时间序列两类。
甲型流感病毒
甲型流感病毒 甲型流感病毒的是一种常见的流感病毒，它主要是容易发生变异同时主要的亚型的被称为一些禽流感，所以在日常生活中的也是一种急性的传染病，而且的感染后的症状的主要是表现一些高烧一些咳嗽，伴有一些肺炎和一些小功能障碍，所以日常生活中的一定要及时的进行治疗和预防。 主要是依靠病毒蛋白在人体中病毒的侵入人体。一定要及时的进行防治和预防，在日常生活中的一定要注意保持个人的卫生养成良好的卫生习惯，要经常的通风减少保持室内的清的空气。 流感病毒分为甲、乙、丙三型，甲型流感病毒最容易发生变异，流感大流行就是甲型流感病毒出现新亚型或旧亚型重现引起的。流感甲型病毒的表面抗原会经常发生细小变异，这种变异被称为“飘变”(drift)，形象地说，“飘变”就是病毒通过细小的变化伪装自己，从而达到躲避人体免疫系统识别的目的。甲型病毒“飘变”的结果是每年引发流感的毒株都有可能不同，人们每年都需要重新接种流感疫苗进行预防。“移变”(shift)指的是流
感甲型病毒发生突变，导致一种新的病毒“亚型”出现。因为人体内几乎没有抵御这种新生病毒的抗体，所以“移变”的结果往往会导致流感的全球性大爆发。 作用原理流感病毒通常依靠病毒蛋白某部分同人体中特定蛋白的结合来侵入人体，因为通过这样的结合，流感病毒能够抑制人体本身对病毒感染的自然防御体系，为病毒有效地在人体内复制铺平道路。 流感病毒分为甲、乙、丙三型。甲型流感病毒根据H和N抗原不同，又分为许多亚型，H可分为15个亚型(H1～H15)，N有9个亚型(N1～N9)。其中仅H1N1、H2N2、H3N2主要感染人类，其它许多亚型的自然宿主是多种禽类和动物。其中对禽类危害最大的为H5、H7和H9亚型毒株。一般情况下，禽流感病毒不会感染鸟类和猪以外的动物。但1997年香港首次报道发生18例H5N1人禽流感感染病例，其中6例死亡，引起全球广泛关注。1997年以后，世界上又先后几次发生了禽流感病毒感染人的事件。具有高致病性的H5N1、H7N7、H9N2、等禽流感病毒，一旦发生变异而具有人与人的传播能力，会导致人间禽流感流行，预示着禽流感病毒对人类已具有很大的潜在威胁。