益肺饮对A549人肺癌细胞株酶活性的实验研究
人肺癌A549细胞凋亡相关基因的表达及意义
摘要】目的比较耐顺铂的人肺腺癌细胞(A549DDP)凋亡相关基因的表达与亲代A549细胞的差异，探讨细胞凋亡与细胞耐药的发生机制。方法应用Oligo GE Array细胞凋亡基因芯片，检测A549和A549DDP细胞相关凋亡基因表达水平。结果A549DDP细胞表达BAD、BAG3、BFAR、CARD8、CASP6、GADD45、TNFRSF14、CD70、TRADD、TRAF1、TRAF3基因较亲代A549细胞显著增高(P<0.05),二者比值上调2倍以上。结论肺腺癌A549DDP细胞过表达上述凋亡相关基因，可能是导致细胞凋亡受抑、细胞耐药的主要原因。 【关键词】肺癌;凋亡基因;细胞凋亡;耐药 细胞耐药是导致化疗失败的主要原因。研究发现耐药的发生与细胞凋亡基因的异常表达密切相关。采用Oligo GE Array细胞凋亡基因芯片方法检测细胞凋亡相关基因，具有敏感性高、速度快和重复性好等优点。目前尚未见以Oligo GE Array细胞凋亡基因芯片方法检测A549细胞凋亡相关基因的报道。本文采用Oligo GE Array细胞凋亡基因芯片检测人肺腺癌亲代细胞与耐顺铂细胞(A549和A549DDP)凋亡相关基因,并对检测结果的临床意义进行初步分析，进一步探讨肿瘤细胞凋亡与耐药的发生机制。 1 对象与方法 1.1 对象人肺腺癌亲代A549细胞和耐顺铂的A549DDP细胞(华西医科大学新桥医院呼吸病研究所提供)。 1.2 方法 1.2.1 细胞培养人肺腺癌A549与A549DDP细胞,以含有10%胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5% CO2条件下培养,每2～3 d传代1次,初始密度为2×105/ml(2 ml/6孔板)。取对数生长期细胞进行实验。 1.2.2 凋亡基因检测按着Oligo GEArray基因芯片实验操作步骤进行(Oligo GEArray细胞凋亡基因芯片由上海康成生物科技有限公司提供)。 1.2.3 RNA 抽提Trizol一步法进行细胞总RNA的抽提。 1.2.4 RNA质量检测经变性琼脂糖凝胶电泳及紫外吸收测定法对RNA质量进行检测。 1.2.5 cRNA标记与合成首先合成cDNA，再合成cRNA，并对合成的cRNA进行标记和扩增，进而cRNA 纯化。 1.2.6 芯片杂交、化学发光检测、图象采集和数据分析。 1.3 统计学分析采用χ2检验。 2 结果 对芯片中114个与凋亡相关的基因检测时发现耐顺铂的A549DDP细胞表达凋亡相关基
肿瘤细胞株
Tca8113-P160人舌癌细胞株 TSCCA人舌鳞癌细胞株 CaES-17人食管癌细胞株 Ec109人食管癌细胞株 Hep-2人喉癌细胞株 SPC-A1人肺癌细胞株 A549人肺癌细胞株 GLC-15人肺腺癌细胞株 HAC-84人肺泡癌细胞株 ACC-M人唾液腺性肺癌高转移细胞株NCL-H446人肺癌细胞株 M14人肺癌细胞株 H460人大细胞肺癌细胞株 Calu-6人肺癌细胞系未分化癌细胞株 95-D人高转移肺癌细胞株 95-C人低转移肺癌细胞株 H292人表皮肺癌细胞株 DMS153人小细胞肺癌细胞株 PG49人肺腺癌细胞株 PG-BE1人肺巨细胞癌PG的高转移亚系PG-LH7人肺巨细胞癌PG的低转移亚系A2人肺腺癌细胞株 973人肺腺癌细胞株 LTEP-a-2人肺腺癌细胞株 Z-HL16C人胚肺成纤维细胞突变癌细胞株HS-746T人胃癌细胞株 AGS人胃腺癌细胞株 Hs746T人胃癌细胞株 MGC-803人胃腺癌细胞株 SGC7901人胃癌细胞株 BSG823人胃癌细胞株 T-24人移行细胞膀胱癌细胞株 BIU-87膀胱癌细胞株 HT-1376人膀胱癌细胞株 MG-63人成骨肉瘤细胞株 Saos-2人生骨肉瘤细胞株 HOS人骨肉瘤细胞株 U-2OS人骨肉瘤细胞株 OS-732人骨肉瘤细胞株 RPMI-8226人多发骨髓瘤 A-204人横纹肌肉瘤细胞株 HT1080人纤维肉瘤细胞株 HT-1080人纤维肉瘤细胞株 U251星形胶质瘤细胞株
DaudiBurkitts淋巴瘤细胞株 CA46Burkitts淋巴瘤细胞株 ACHN人肾癌细胞株 769-P人肾癌细胞株 A498人肾癌细胞株 786-O人肾透明细胞腺癌细胞株 SW13人肾上腺皮质瘤细胞株 Ketr-3人肾癌瘤株细胞株 RCC-krause人肾癌细胞株 SK-RC-42人肾癌细胞株 H4人脑神经胶质瘤细胞株 BT-325人脑多形性胶质母细胞瘤细胞株SGH44人脑胶质细胞瘤细胞株 TJ905人脑恶性胶质瘤细胞株 U-373MG人脑胶质瘤细胞株 SF126人脑瘤细胞株 SF17人脑瘤细胞株 SF763人脑瘤细胞株 SF767人脑瘤细胞株 SH-SY5Y人成神经细胞瘤细胞株 M17人神经母细胞瘤细胞株 LAN-5人神经母细胞瘤细胞株 SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞株 LAN-6人神经母细胞瘤细胞株 SK-N-DZ人成神经瘤细胞-骨髓 PC-3人前列腺癌细胞株 DU145人前列腺癌细胞株 LNCaP人前列腺癌细胞株LNCaPCloneFGC人前列腺癌细胞株 Tsu-Prl人非雄激素依赖型前列腺癌细胞株22RV1人前列腺癌细胞株 PC-3M1E8人前列腺癌细胞高转移亚系PC-3M2B4人前列腺癌细胞低转移亚系SW1990人胰腺腺癌细胞株 PANC-1人胰腺腺癌细胞株 PL45人胰腺导管腺癌细胞株 HPAC人胰腺癌细胞株 Panc03.27人胰腺癌细胞株 Panc08.13人胰腺癌细胞株 Panc10.05人胰腺癌细胞株 Panc05.04人胰腺癌细胞株 Panc02.03人胰腺癌细胞株 F56人腺癌细胞株 ACC-2人诞腺腺样囊性癌细胞株
热疗对人肺癌细胞凋亡的影响
·论著· 热疗对人肺癌细胞凋亡的影响 蒋东 李芳 葛锦峰 郑世营 【摘要】 目的 探讨热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞生长与凋亡的影响。方法 ＭＴＴ法检测热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞生长的抑制作用；流式细胞术观察热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞周期和凋亡的影响；ＲＴ－ＰＣＲ检测凋亡相关基因ｐ５３及Ｃａｓｅｐａｓｅ－３的表达。结果 热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９两种细胞的生长均有抑制作用。热疗可以明显改变人肺癌Ａ５４９细胞生长周期的分 布，Ｇ０／Ｇ１期细胞明显减少；但对人肺癌Ｈ１２９９细胞生长周期的分布影响不大。热疗能使Ａ５４９细胞ｐ ５３蛋白的表达明显增强，但不能诱导Ｈ１２９９细胞ｐ５３蛋白的表达。热疗能同时诱导Ａ５４９、Ｈ１２９９两种细胞Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白表达的增强，并且以Ａ５４９细胞的表达尤为明显。结论 热疗对两种肺癌细胞的生长均有抑制作用，可以增加细胞凋亡。ｐ５３基因可能在热疗诱导肺癌细胞凋亡和周期分布改变的过程中起主导作用。 【关键词】 热疗；肺癌细胞；ｐ ５３基因；凋亡【中图分类号】 Ｒ７３４ 【文献标识码】 Ａ 【文章编号】 ０２５３－３６８５（２０１２）１５－１７３７－０３Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ＪＩＡＮＧ Ｄｏｎｇ，ＬＩ Ｆａｎｇ，ＧＥ Ｊｉｎｆｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｕｒｇｕｒｙ，Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｏｏｃｈｏｗ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｕｚｈｏｕ２１５００６，ＣＨＩＮＡ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｏｆ Ａ５４９ａｎｄ Ｈ１２９９．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｎＡ５４９ａｎｄ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＭＴＴ，ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｏｆ Ａ５４９ａｎｄ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＦＡＣＳ，ａｎｄ ＲＴ－ＰＣＴ ｗａｓ ａｄｏｐｔｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ－ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓｏｆ ｐ５３ａｎｄ Ｃａｓｐａｓｅ－３．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ａ５４９ａｎｄ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｏｆ Ａ５４９ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｃｈａｎｇｅｄ ｂｙ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ｒｅｄｕｃｅｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｉｎ Ｇ０／Ｇ１ｐ ｈａｓｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ｗｈｉｃｈ ｏｆ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｎｏｔ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ｉｎ Ａ５４９ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｗａｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｗｈｉｃｈ ｉｎ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｎｏｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃａｓｐａｓｅ－３ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｂｏｔｈ Ａ５４９ａｎｄ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｉｎ Ａ５４９ｃｅｌｌｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｈａｓｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｃｉｒｃｌｅ ａｎｄ ｃａｎ ｉｎｄｕｃｅ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ，ｉｎｗｈｉｃｈ ｐ５３ｇｅｎｅ ｍａｙ ｔａｋｅ ａ ｒｏｌｅ．【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｈｙｐｅｒｔｈｅｒｍｉａ；Ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ；ｐ５３ｇｅｎｅ；Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊｉａｎｇｓｕ Ｍｅｄ Ｊ，Ａｕｇ ｕｓｔ ２０１２，３８（１５）：１７３７－１７３９．］ 基金项目： 江苏省社会发展重大课题资助项目（ＢＳ２００５０４７）作者单位：２１５００６ 江苏省，苏州大学附属第一医院心胸外科（蒋东、葛锦峰、郑世营）；苏州大学基础医学与生命科学学院人体解剖与组织胚胎系（李芳） 通讯作者：郑世营 Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｙｚｈｅｎｇ８８＠ｖｉｐ ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ 近年来肿瘤热疗已成为继手术、 化疗、放疗、生物治疗之后的对肿瘤的第五类有效治疗手段。肺癌目前的发病率和死亡率在我国男性中较高，约６５％的肺癌患者确诊时已属晚期，失去手术机会，因而包括热疗在内的综合治疗在晚期肺癌的治疗中占有重要的地位。本研究以我们培养的Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞为实验对象，主要观察不同温度加热处理对ｐ５３表达情况不同的两种肺癌细胞生长、细胞周期和凋亡的影响，探讨热疗促肺癌细胞凋亡的机制。 材料与方法 一、材料 人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞株由苏州大学分子生物实验室提供。ＲＰＭＩ１６４０培养基（Ｇｉｂｃｏ），小牛血清（杭州四季青），逆转录试剂盒、Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶（立陶宛Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司），引物由南京金思特科技有限公司合成。 二、方法 １．细胞培养 人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞常规在含１０％小牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养液中，３７．０℃、５％ＣＯ２培养箱中培养，待细胞生长汇合达８５％时，用０．２５％胰酶消化， 按１∶３传代。实验时选取对数生长期细胞。 · ７３７１·江苏医药２０１２年８月第３８卷第１５期 Ｊｉａｎｇｓｕ Ｍｅｄ Ｊ，Ａｕｇｕｓｔ ２０１２，Ｖｏｌ ３８，Ｎｏ．１５
细胞凋亡在癌症治疗中的应用
细胞凋亡在癌症治疗中的应用 班级：08制药工程2班学号：20086868 姓名：王本竹 关键词：细胞凋亡肿瘤癌症抗癌药物抗药性 摘要生物体内各种组织细胞通过增殖与凋亡来维持数量的平衡。一旦这种平衡被打破就会导致一些疾病的产生，如癌症。细胞凋亡与癌症之间的关系为癌症的治疗提供了新思路。抗癌药物的研究经历了一个漫长的发展过程，尽管已对许多抗肿瘤药物的细胞目标有了一定了解，但对于药物与肿瘤作用后如何导致细胞死亡的确切机制尚不清楚。近年来的研究发现细胞凋亡是各种抗癌药物引发细胞死亡的主要方式，从而使得细胞凋亡与癌症之间的关系及细胞凋亡在癌症治疗中的作用成为抗肿瘤研究的新焦点。 1细胞凋亡 细胞死亡一般有两种方式，即细胞坏死(necrosis)和细胞凋亡(apoptosis)。细胞坏死通常发生在一群接触的细胞中，是由各种非生理因素，如局部缺血等引起的难以控制的一种破坏现象。它通过干扰细胞能量代谢，引起细胞渗透压不平衡，细胞质肿胀，最终由溶酶体酶导致细胞结构的不可逆性破坏并诱发局部的炎症反应。 细胞凋亡这一概念是1972年由Kerr和Wyllie等提出的。它是一种主动的、固有的程序化现象，故又称程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD)。许多生理性、非生理性的因素都可以引起细胞凋亡，如射线、高温、毒素及各种抗癌药物等。而坏死实质上是由于细胞周围环境产生严重的损伤性变化所诱发的，所以这两种过程在发生机制、形态学和生物化学等诸方面都不相同。凋亡的细胞由于失去细胞间相互联系而与邻近细胞分离，随后细胞表面释放出信号分子被吞噬细胞识别，因此凋亡不损伤周围的细胞。凋亡一般伴有明显的形态学特征，以细胞核的变化为主，表现为核浓缩、细胞浆中细胞器密集、胞膜突出、体积缩小、DNA断裂及形成凋亡小体。 在生物体的每种细胞中，细胞数量的控制都是通过增殖与死亡之间的平衡来完成的，细胞增殖是受到高度调控的。但是直至最近人们才认识到细胞死亡的调控与细胞增殖的调控一样复杂，而且多细胞组织中不同细胞似乎都是通过活化一种内部编程的自杀程序而导致凋亡的（1）。尽管不同的细胞之间有共同的死亡机制，但各种细胞发生凋亡的诱导信号各不相同。各种不同细胞甚至同一细胞不同阶段对凋亡诱导的难易程度、速度也各不相同，如静止期的T细胞在X光照射后迅速凋亡，而活化后的T细胞则不同，与胸腺中蛋白质紧密结合的未成熟T 细胞株对凋亡更为敏感（2）。 是什么导致了这些不同?越来越多的工作表明对凋亡的敏感性主要由Bcl-2、p53两种基因调控。p53基因位于17号染色体短臂上，长14～24 kb，编码一个由393个氨基酸组成的53 kD的蛋白质。p 53蛋白是细胞周期的“分子警察”，也是在DNA损伤后诱导凋亡的因子。p 53蛋白通过上调p 21蛋白来介导细胞周期停滞，p 21蛋白是各种细胞周期蛋白、CDK5(细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶)及细胞周期蛋白-CDK5复合物的抑制剂，细胞周期停滞可以为DNA修复赢得时间，另一方面，如果细胞内损伤已无法修复，则p 53蛋白促进细胞凋亡。Bcl-2基因发现于人类滤泡性淋巴瘤的14、18位染色体转换点，它可以阻断细胞的凋亡而不影响细胞增殖。它是Bcl-2家族中的一员，该家族中一些成员促进凋亡，
利用全基因组测序解析两个肺癌细胞系大规模不同类型的的
利用纳米孔测序技术解析肿瘤基因组结构变异、非整倍性 变异及肿瘤异质性 癌症是一种基因组疾病，除了染色体数目异常变异之外，还存在数千种大规模的缺失、重复和易位等变异。 图1 两个肺癌细胞系的全基因组测序。结果显示每个样本均有不同程度的重复、缺失和易位等变异。 a)H441细胞系b)A549细胞系 利用全基因组测序解析两个肺癌细胞系大规模不同类型的的缺失、重复、易位以及非整倍性变异的基因组图谱 同一患者的肿瘤细胞中经常发现DNA重组，正常细胞中则没有发现。这些重组包括不同类型的结构变异（SV）：拷贝数变异，染色体内及染色体间重组，以及转座子和其他外源序列的插入。很多重组不会直接导致癌症扩散，但是一些关键基因的改变能够促使肿瘤形成。癌症的SV分析可以用于表征特殊肿瘤类型，从而针对性地采用不同地治疗方式。癌症SV通常是复杂的或者大规模的基因重组，并且只能通过能够完整测到整个重组基因的长度长测序来解决。为了研究纳米孔长度长测序在揭示癌症SVs中的应用，我们对两个肺癌细胞系NCI-H441和A549进行了基因组DNA提取，文库制备并在GridIONTM上完成了测序。已知这两种细胞系都有大量的结构变异。NCI-H441和 A549的测序覆盖度分别为19.5X和15X。我们用ngmlr将测序结果与人类基因组序列进行比对，并参考图1制作了覆盖度分析图。覆盖度值与这些样品已公开的核型图非常接近。
图2 对两个细胞系染色体内和染色体间重组的进一步分析 a) A549的Circos图 b) KRAS基因的 SNPs c) H441的 KRAS基因重复 d) H441的Circos图 两个肺癌细胞系均在KRAS信号转导GTP酶基因中发生点突变，此外还有染色体内和染色体间重组 为了检测SV，我们用sniffles进行比对，若5个及以上reads仍不能确定其SVs 类型则排除。我们对每个细胞系作Circos图（图2），可以看到大量的染色体内和染色体间重组。除此之外，已知这两个细胞系都在12号染色体相邻位置的KRAS基因中具有非同义突变。A549在25245351（G12S）处发生C→T碱基转换，H441在25245350（坐标hg38）处发生C→A碱基颠换。这些突变都清晰的展现在测序数据中（图2b）。我们的reads检测到H441的C→A碱基颠换的比例约为2:1，与已经公布的H441细胞系12号染色体是三倍体结果一致。图2d展示了两个细胞系在12号染色体的12p12.1区域1kb区间的标准覆盖度。与A549相比，H441的KRAS基因及其周围区域具有更高的标准覆盖度。通过纳米孔技术测序，我们可以更加清晰地发现数量更多、长度更小的基因组重复。这些结果充分显示了纳米孔长度长测序可用于肿瘤基因组DNA分析，并能够鉴定比核型图分辨率更高的SVs。
肺癌组织凋亡相关基因的表达意义(一)
肺癌组织凋亡相关基因的表达意义(一) 作者：王述民，马颖艳，程庆书 【关键词】肺肿瘤；癌基因；TUNEL；免疫组织化学；基因表达 【Abstract】AIM:TodiscusstheexpressionsoftheapoptosisrelatedoncogenesFas,Bcl2,Baxandp53inlungcancertis suesandtheirsignificance,inordertoprovidethetheoreticalbasisforthemolecularbiologicalstudy.ME THODS：Theexpressionsofp53,Bcl2,BaxandFasproteinsin57casesoflungcancerweredetectedbytheimmuno histochemicaltechniqueandTUNEL.RESULTS：TheexpressionratesofBcl2,p53,Bax,Fasproteinsinlungcancertissueswere33%,69%,70%and28%,res pectively,andtheexpressionrateofeachapoptosisrelatedoncogenewasdifferentinlungcancertissues ofthedifferentpathologictypes.Therewasnodefiniterelationshipbetweenthelymphnodemetastasis andtheapoptosisrelatedoncogenes （P0.05）.Withtherisingofthepathologicstagingofthetumor,theexpressionsofp53andFasproteinsi ncreased,whiletheexpressionofBcl2decreased.Thereseemedtobenodefiniterelationshipbetweent heexpressionofBaxproteinandthepathologicalstaging（P0.05）.CONCLUSION：Therearetheapoptosisrelatedoncogeneexpressionsinlungcancertissues,andtheirexpressiondegree isrelatedwiththeirpathologicaltypes.Theoverexpressionsofp53andFasproteinsmaybeassociatedwit hthebadprognosisoflungcancer. 【Keywords】lungneoplasms;oncogenes;TUNEL;immunohistochemistry;geneexpression 【摘要】目的：探讨肺癌组织中凋亡相关基因Fas，Bax，p53，Bcl2蛋白的表达意义，为进行肺癌的分子生物学研究提供理论依据.方法：应用原位末端DNA片段标记法（TUNEL），结合免疫组化技术对57例肺癌切除标本进行Fas，Bax，p53及Bcl2蛋白检测.结果：在肺癌组织中凋亡相关基因阳性率分别为：Fas28%，Bax70%，p5369%，Bcl233%，各基因在肺癌不同病理类型中表达率亦不同，且肺癌的淋巴结转移与调亡相关基因表达无明显关系（P0.05）.其中，p53，Fas随肺癌病理分期的升高而增加，Bcl2则随病理分期的升高而减少，而Bax 则与病理分期无明显关系(P0.05).结论：肺癌组织有调亡相关基因表达，其表达程度与肺癌的病理类型有关，p53,Fas表达可能与不良预后有关. 【关键词】肺肿瘤；癌基因；TUNEL；免疫组织化学；基因表达 肺癌的发病率逐年升高，从分子水平进一步阐明肺癌的发生和发展，对其防治具有一定的意义.Fas，Bax，p53及Bcl2均为凋亡相关基因，在肺癌组织中的表达情况报道尚少.我们应用原位末端DNA片段标记法（TUNEL），结合免疫组化技术，检测了57例肺癌石蜡包埋组织中Fas，Bax，p53，Bcl2蛋白的表达情况，探讨其彼此之间的关系及其与临床分期、预后的关系，为进一步进行肺癌的凋亡研究提供理论依据. 1材料和方法 1.1材料第四军医大学唐都医院胸外科手术切除标本57（男43，女14）例，年龄36~73（53.4±1.8）岁.其中小细胞肺癌14例，腺癌21例（低分化腺癌11例，高分化腺癌10例），鳞癌22例（低分化鳞癌10例，高分化鳞癌12例）.根据手术病理诊断按国际抗癌联盟分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期13例，Ⅲa期17例，Ⅳb期12例，Ⅴ期10例.SABC试剂盒购自广州华美公司，兔抗Fas多克隆抗体，鼠抗Bcl2mAb，兔抗Bax多克隆抗体及p53mAb均购自Doka公司，TUNEL试剂盒购自Sigma公司.常规100g/L甲醛固定，石蜡包埋，选取典型病变蜡块作为研究对象.肺癌组织学类型按WHO标准分类〔1〕. 1.2方法Fas，Bcl2，Bax，p53蛋白的表达均采用肺癌组织石蜡切片免疫组化染色SABC法〔2〕.TUNEL染色按试剂盒说明操作.光镜下从染色强度和阳性细胞比例两方面评价染色结果.
肺癌组织和肿瘤细胞系中BRG1的表达分析
肺癌组织和肿瘤细胞系中ＢＲＧ1的表达分析 摘要：BRGJ(brahma-related gene 1)是进化上高度保守的SWI／SNF染色质重塑复合物的成员之一，研究表明：BRGI具有抑瘤基因的特征，可能与肿瘤的发生发展有关,我们采用RT—PCR、NortherR杂交和Westemblotting证实：肺腺癌细胞系A549和鼻咽癌细胞系HNE2、HNE3、CNE1中无BRG1的表达，而肺鳞癌细胞系NCI—H520、永生化正常人支气管上皮细胞系HBE和鼻咽癌细胞系HONE1、HNE1、CNE2中有BRGJ的表达，同时，通过RT—PCR检测10例肺癌组织标本，发现60％(6/10)的肺癌组织中日BRG1的mRNA水平明显下调，而配对正常肺组织中BRG1，的mRNA表达未见改变,对29例肺癌组织和10例配对正常肺组织切片进行免疫组化染色，结果显示：肺癌组织中BRG1蛋白表达的阳性率为37.9％(11/29)，配对正常肺组织中BRG1蛋白表达的阳性率为90％(9/10)，两者的差异有显著性(P＜0.05)，这提示BRG1确实在肺癌组织及多种肿瘤细胞系中表达下调或缺失，在肺癌发病过程中可能起一定的作用。 关键词：BRG1；表达；肺癌；肿瘤细胞系 肺癌是目前全球发病率最高的恶性肿瘤，严重威胁人类的健康和生命,近年来我国肺癌的发病率和死亡率迅速上升，有人预计中国将成为21世纪的肺癌大国，肺癌一般分为4种主要的组织学类型：鳞癌、腺癌、大细胞癌和小细胞癌，前三者统称为非小细胞肺癌(NSCLC)，约占肺癌总数的75％，后者称小细胞肺癌(SCLC)，约占25％，肺癌的发生发展是一个多因素、多步骤的复杂过程，其中瘤基因和抑瘤基因发挥着至关重要的作用，已有研究显示，肺癌在临床前期就有大约10个分子事件，包括瘤基因myc、K-ras、EGFR、Her-2/neu、Bcl-2的激活与抑瘤基因p53、Rb、FHIT、p16的失活等，但这些基因在多种肿瘤中都普遍存在改变，还不足以完全解释肺癌发生发展的机制，因此有必要继续寻找和鉴定新的肺癌相关基因。 Girard等利用399个微卫星标记对肺癌细胞系及组织标本进行全基因组等位基因分析(allelotyping)，发现NSCLC中19p13区域存在高频率的杂合性丢失(LOH)，已知定位于19p13.3的抑瘤基因LKB1/STK11，在约30％-50％有19p LOH 的肺腺癌中失活，但定位于该区域的其他基因仍可能是肺癌的候选抑瘤基因，因为LKB1/STK11的突变目前只发现于肺腺癌中，而占NSCLC大多数的鳞癌中并未检测到LKB1/STK11的突变。 BRGl是1993年Khavari等利用果蝇的Brm(Brahma)DNA片段为探针，筛选Hela细胞cDNA文库而分离得到的一个人类基因，属于进化上高度保守的SWI/SNF染色质重塑复合物的成员之一，它由35个外显子和34个内含子组成，其转录本的大小约为5kh.BRG1蛋白由1613个氨基酸组成，共有4个结构域：I 脯氨酸富集区、Ⅱ电荷富集区、Ⅲ依赖DNA的ATP酶区、IV溴化区，其相对分子质量为205kD，是一种磷酸化核蛋白，主要以ATP依赖的方式通过破坏组氨酸一DNA的接触而调节基因的表达，通过放射杂交图谱分析，已将BRGl定位于19p13，
小细胞肺癌
Tumorigenesis and Neoplastic Progression Evaluation of Circulating Tumor Cells and Serological Cell Death Biomarkers in Small Cell Lung Cancer Patients Undergoing Chemotherapy Jian-Mei Hou,*Alastair Greystoke,* Lee Lancashire,*Jeff Cummings,*Tim Ward,* Ruth Board,*Eitan Amir,?Sarah Hughes,* Matthew Krebs,*Andrew Hughes,? Malcolm Ranson,*??Paul Lorigan,?? Caroline Dive,*?and Fiona H.Blackhall*?? From the Clinical and Experimental Pharmacology Group,* Paterson Institute for Cancer Research,University of Manchester, Manchester;the Christie Foundation Trust,?Manchester;and the School of Cancer and Imaging Sciences,?University of Manchester,Manchester,United Kingdom Serological cell death biomarkers and circulating tu-mor cells(CTCs)have potential uses as tools for phar-macodynamic blood-based assays and their subse-quent application to early clinical trials.In this study, we evaluated both the expression and clinical signif-icance of CTCs and serological cell death biomarkers in patients with small cell lung cancer.Blood samples from88patients were assayed using enzyme-linked immunosorbent assays for various cytokeratin18 products(eg,M65,cell death,M30,and apoptosis)as well as nucleosomal DNA.CTCs(per7.5ml of blood) were quantified using Veridex CellSearch technology. Before therapeutic treatment,cell death biomarkers were elevated in patients compared with controls. CTCs were detected in86%of patients;additionally, CD56was detectable in CTCs,confirming their neo-plastic origin.M30levels correlated with the per-centage of apoptotic CTCs.M30,M65,lactate dehy-drogenase,and CTC number were prognostic for patient survival as determined by univariate https://www.360docs.net/doc/8d8721520.html,ing multivariate analysis,both lactate dehy-drogenase and M65levels remained significant.CTC number fell following chemotherapy,whereas lev-els of serological cell death biomarkers peaked at48 hours and fell by day22,mirroring the tumor re-sponse.A48-hour rise in nucleosomal DNA and M30levels was associated with early response and severe toxicity,respectively.Our results provide a rationale to include the use of serological biomark-ers and CTCs in early clinical trials of new agents for small cell lung cancer.(Am J Pathol2009,175:808–816; DOI:10.2353/ajpath.2009.090078) Small cell lung cancer(SCLC)is initially chemosensitive but invariably relapses with a chemoresistant pheno-type.1A number of molecularly targeted therapies have been evaluated attempting to improve outcome,but none have succeeded to date.2Ideally,early clinical trials should incorporate validated pharmacodynamic biomar-kers,conducted to good clinical laboratory practice,that demonstrate both proof of mechanism(drug hits target) and proof of concept(tumor responds to drug).3Al-though possible,serial biopsies are rare in SCLC,and the tissue obtained often insufficient for extensive molecular profiling.Thus,there is a pressing need for blood-based biomarkers that report therapeutic response. Assays of drug-induced cell death are potential proof of concept biomarkers for multiple therapeutics.4The M30Apoptosense and M65assays(Peviva,Bromma, Sweden)detect cytokeratin(CK)18,expressed in epi-thelial but not hematopoietic cells,and released into the blood following cytoskeletal disassembly and degrada-tion during apoptotic and/or necrotic cell death.5The M30antibody recognizes a caspase-cleaved neoepitope of CK18that is only revealed during apoptosis,whereas the M65assay detects full length and cleaved forms of CK18reporting apoptosis and necrosis.6Nucleosomal DNA(nDNA)results from cleavage of chromatin by apo-ptotic endonucleases into membrane bound DNA frag-ments that are phagocytosed by macrophages and sub-Supported by Cancer Research UK grant C147/A6058and European Union CHEMORES FP6contract LSHC-CT-2007-037665;Cancer Research UK China fellowship C480/A7421(to J.-M.H.);and a clinical pharmacology fel-lowship from Cancer Research UK and AstraZeneca Ltd.(to A.G.). J.-M.H.and A.G.contributed equally to this work. Accepted for publication April15,2009. Address reprint requests to F.Blackhall or Caroline Dive,Clinical and Experimental Pharmacology,Paterson Institute for Cancer Research, Wilmslow Road,Manchester,M204BX,UK.E-mail:fiona.blackhall@christie or cdive@https://www.360docs.net/doc/8d8721520.html,. The American Journal of Pathology,Vol.175,No.2,August2009 Copyright?American Society for Investigative Pathology DOI:10.2353/ajpath.2009.090078 808
小细胞肺癌概述
小細胞肺癌概述 以下資訊是小細胞肺癌的概述。如需詳細資訊，請致電1-800-ACS-2345，或瀏覽本協會網站：https://www.360docs.net/doc/8d8721520.html,。 何謂癌症？ 當身體某個部位的細胞開始不受控制地生長，即發生癌症。正常細胞會依序規律分裂和生長，但癌細胞不是。癌細胞會不斷增生，最後排擠掉正常細胞。雖然癌症有許多種類，但共通點就是細胞會不受控制地生長。 不同種類的癌症可能有不同的表現方法。例如，肺癌和乳癌就是兩種非常不同的疾病。這兩種癌症的病程不同，治療方法也不同。這就是為什麼癌症病患需要針對其癌症種類進行治療。 有時候，癌細胞會和腫瘤分離，經血液或淋巴系統擴散到身體其他部位。這些癌細胞可能會在新的部位停留，形成新的腫瘤。這種情形稱之為轉移。以這種方式擴散的癌症稱為轉移性癌症。 即使癌症已擴散至身體其他部位，它仍就以原發部位稱之。例如，如果前列腺癌擴散到骨骼，仍稱為前列腺癌。如果乳癌擴散到肺部，仍稱為乳癌。如果在治療之後，看來身體已經康復時又發生癌症，稱之為復發。 何謂小細胞肺癌？ 註：本文僅說明小細胞肺癌。小細胞肺癌的治療與非小細胞肺癌的治療非常不同，因此小細胞肺癌的大部分資訊並不適用於非小細胞肺癌。如果您不知道自己罹患哪一種肺癌，請詢問醫生，以確定所獲得的資訊正確。
肺癌是肺部病變引致的癌症。為瞭解肺癌，我們先來認識肺部的正常結構和功能。肺部 肺部是位於胸腔的兩個類似海綿的器官。右肺可分為3個部分，這些部分稱為肺葉。左肺有兩個肺葉，如下圖所示。左肺較小，因為心臟佔用了身體該側的部分空間。肺部負責將空氣送入和送出體內， 吸入氧氣並排出對人體無用的二氧化碳。 包覆肺部的內層稱為肋膜，用以保護肺臟，並可讓肺臟隨著呼吸起伏。氣管會將空氣往下帶入肺臟。氣管分成左右支氣管，而支氣管又分成更小的細支氣管。在這些細支氣管末端是稱為肺泡的小氣囊。 肺癌的發生與擴散 大多數肺癌都發生在支氣管內層，但也可能發生在肺部的其他部位。肺癌通常是經過多年形成的。首先，肺部可能發生癌前變化。這些變化不是塊狀或腫瘤，因此X 光檢查不出來，也不會產生症狀。 經過一段時間，這些處於癌前狀態的部位可能會發展成真正的癌症，它會釋出化學物質，在癌前狀態的部位周圍形成新的血管。這些新血管可供給癌細胞營養，使腫瘤得以形成。最後，腫瘤會越變越大，經X 光便可檢查出來。 過了一段時間，肺癌細胞可能會脫離並擴散至身體其他部位，這種情形稱為轉移。肺癌是一種致命疾病，因為癌細胞常在被發現之前即已擴散。 肺癌擴散的方式之一是透過淋巴系統。淋巴管類似血管，但所輸送的是淋巴液而非血液。淋巴液是透明的液體，其中包含組織的廢物和免疫系統細胞。肺癌細胞會進入淋巴管，開始在支氣管周圍的淋巴結以及左右肺之間的區域生長。當癌細胞進入淋巴氣管支氣管肺臟細支氣管 肺泡
小细胞肺癌的临床分期标准
小细胞肺癌的临床分期标准 文章目录*一、小细胞肺癌的临床分期标准*二、小细胞肺癌如何防治*三、小细胞肺癌饮食注意 小细胞肺癌的临床分期标准1、小细胞肺癌的临床分期标准局限器:局限期小细胞肺癌的特点是肿瘤局限于一侧胸腔内,包括有锁骨上或前斜角肌淋巴结转移和同侧胸腔积液。对局限期小细胞肺癌应进一步按TNM分期进行临床分期,以能更准确地对不同期别的病人施以个体化的最佳治疗。局限期SCLC以同步放化疗或化疗、放疗序贯治疗为主,同步放化疗优于序贯治疗,同步放化疗应尽早,并应给予预防性全脑放疗,预防性全脑放疗对生 存的益处显着。 广泛期:广泛期小细胞肺癌的特点是病变超过局限型范围。广泛期SCLC以化疗为主,择期行局部或转移灶治疗。 2、小细胞肺癌的病理生理 一般认为小细胞肺癌起源于支气管粘膜或腺上皮内的Kulchitsky细胞(嗜银细胞),属 APUD(amineprecursoruptakedecarboxylation)瘤。也有人认为其起源于支气管粘膜上皮中可向神经内分泌分化的干细胞。小细胞肺癌是肺癌中分化最低,恶性程度最高的一型。多发生于肺中央部,生长迅速,转移较早。光镜下,癌细胞小而呈短梭形或淋巴细胞样,胞浆少,形似裸核。癌细胞密集成群排列,由结缔组织加以分隔,有时癌细胞围绕小血管排列成团。电镜观察超微结构,
瘤细胞胞浆中含有典型的轴样神经内分泌颗粒,但颗粒的量多少不等,并证明和5-HT及ACTH有关。从免疫组织化学研究看,瘤细胞对NSE,5-HT,CgA,另有部分病例(10%)对Sy呈阳性反应,证明小细胞癌具有神经内分泌的功能。另外,在同一肿瘤中同时对CK 和EMA呈阳性免疫组织化学反应。 3、小细胞肺癌的发病原因 吸烟是肺癌的主要危险因素,SCLC与吸烟关系密切。根据对1970-1999年世界范围内吸烟与肺癌的汇总分析,肺癌与吸烟强度(吸烟量)和持续时间呈正相关,与SCLC的关系最为明显。 小细胞肺癌如何防治小细胞肺癌的预防胜于治疗,主要分为三级预防。 一级预防针对健康人群,主要包括不吸烟,远离二手烟污染。尽量避免室外空气污染、厨房油烟。选用环保型装修材料。营养均衡,多食谷物、蔬菜、水果。保持乐观、积极的生活态度,提高心理适应力。 二级预防早诊、早治针对高危人群,主要针对40岁以上长期吸烟者,吸烟20年以上,20岁以下开始吸烟机每天吸烟20支以上,经常接触煤烟、煤焦油和油烟者,接受过量放射线照射者(采矿者等)、慢性咳嗽、痰中带血者及有肺癌家族史者。高危人群最好能每年定期全面体检,有条件的行CT检查。如出现刺激性咳嗽、血痰火咯血等症状应及时医院就诊。
NCCN 2020.02 小细胞肺癌(中文)
肿瘤临床实践指南(NCCN Guidelines?) 小细胞肺癌（2020.v2） 1、NCCN小细胞肺癌指南2.2020版从1.2020版更新包括: SCL-E 1 of 4 度伐单抗联合化疗(依托泊苷联合卡铂或顺铂)已被作为首选一线治疗方案(第1类)，其次对于广泛的SCLC患者使用度伐单抗维持治疗 2、NCCN小细胞肺癌指南1.2020版（2.2019版）中的更新包括： 1.初始评估和分期（SCL-1） ●对于原发灶或转移灶活检或细胞学检查确诊小细胞癌或小细胞/非小细胞混合型腺癌的患者，初始评估内容作了2点修改和1点补充： ?CT平扫加增强扫描的检查部位在“胸部/腹部”基础上增加了“盆腔”；?PET-CT检查的指征，在原来“如果疑似局限期”基础上增加了一个指征：如果需要鉴别分期； ?新增“行分子谱分析（仅适用于未曾吸烟的广泛期患者）”，以帮助鉴别诊断和评估潜在的靶向治疗选择。 2.广泛期小细胞肺癌的初始治疗（SCL-5） ●对于在全脑放疗前接受系统性治疗的无症状脑转移患者，在每2个周期全身治疗后以及在治疗结束后应该复查脑MRI（首选）或CT平扫加增强扫描（SCL-6）。如果在系统性治疗期间出现疾病进展，则开始行全脑放疗。 3.初始治疗后的疗效评估和监测（SCL-6） ●新增1条对“预防性脑照射（PCI）”的脚注： ?在已经进行完全切除、病理分期为I-IIA（T1-2,N0,M0）的SCLC患者中，接受PCI的获益情况尚不清楚。参见“手术切除原则”（SCL-C）。 4.病理学检查原则（SCL-B） ●病理学评估中新增1条“复合型SCLC的定义”： ?复合型小细胞肺癌含SCLC和NSCLC两种组织学（鳞状细胞癌、腺癌、梭形/多形性、和/或大细胞）成分。不要求说NSCLC组织学成分的百分比最少需要多少；当有任何比例的NSCLC与SCLC一起出现时，就可称为复合型SCLC。 5.手术切除原则（SCL-C） ●有淋巴结转移的患者，术后辅助治疗方案根据淋巴结分期作了修改：