2009级农科院博士分子生物学复习资料

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1.Peptide bond(肽键):一个氨基酸的α-羧基和另一个氨基酸的α-氨基通过缩水反应,

脱去一个水分子,形成肽键。

2.Motif(结构模体):某些蛋白质的二级结构的肽段,在空间上互相接近,形成一个特殊

的空间构象,呈现出一个二级结构的聚集体,称之为结构模体或基序。

3.Domain(结构域):分子量大的蛋白质三级结构,常常由两个或数个球状或纤维状的区

域组成,每个区域的结构和功能相对独立,称为domain 。

4.Signal peptide(信号肽):各种新生分泌蛋白的N端有保守的氨基酸序列称信号肽。

5.Molecular chaperone(分子伴侣蛋白):结合非折叠的蛋白质,阻止未折叠好的蛋白质之间

形成无活性的聚集体,从而帮助多肽链有效折叠。

6.Cadherin(钙粘蛋白):属于同嗜性粘附,即相邻细胞上钙粘蛋白相互识别并结合,也

是胚胎期维系细胞间联合的重要分子。

7.Prion protein(朊病毒,Prp):引起一组人和动物神经退行性病变的病原体。它具有不

同于病毒复制方式的不依赖核酸的自身增殖能力。这类疾病具有传染性、遗传性或散在发病的特点。

8.Allosteric enzyme(别构酶):一些特定的小分子化合物(如代谢终产物)与酶分子的调节

亚基或部位结合时,可诱导和影响催化亚基或部位的空间结构改变,使催化活性增高或降低,称为别构效应(allosteric effect)。具有别构效应的酶称别构酶。

9.Ribozyme(核酶):是具有高效、特异催化作用的核酸,其作用主要参与核酸的剪接。

10.Isozyme(同工酶):同一种属中不同基因或等位基因编码的多肽链所组成的单体或寡聚

体,其理化性质及生物学性质不同,而能催化相同化学反应的酶。

11.Proteome(蛋白质组):由基因组表达的全部蛋白质。

12.Proteomics(蛋白质组学):是研究蛋白质组,即研究细胞内全部蛋白质的种类、含量及

活动规律的科学。

13.CDK(细胞周期蛋白依赖性酶):高等真核细胞周期的调节依赖于结构上相关的异二聚

体蛋白激酶家族完成,这些蛋白激酶有调节亚单位和催化亚单位两部分组成,调节亚蛋白称为细胞周期蛋白(Cyclin)。催化亚单位,称为细胞周期蛋白依赖性激酶。它单独存在时不表现酶活性,只有与细胞周期蛋白结合时才表现活性。

14.Cyclin(细胞周期蛋白):高等真核细胞周期的调节依赖于结构上相关的异二聚体蛋白

激酶家族完成,这些蛋白激酶有调节亚单位和催化亚单位两部分组成,调节亚蛋白称为细胞周期蛋白(Cyclin)。催化亚单位,称为细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)。

15.Oncogene(癌基因):是这样的一类基因,转导其表达产物进入真核细胞后能使细胞如

同肿瘤细胞一样永生化,可分为病毒癌基因和细胞癌基因两类。

16.Cell differentiation(细胞分化):在个体发育中,由相同的前体细胞经细胞分裂后逐渐

在形态、结构和功能上形成稳定性差异,产生各不相同的细胞类群的过程。

17.Transdifferentiation(转分化):已分化的细胞转变为另一种分化细胞,常见于慢性组织

损伤和再生。有些转化是间接的,即通过中介干细胞;也有的是直接转化,称转分化。

18.Stem cell(干细胞):是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞,在一定

条件下,它可以分化成多种功能细胞。

19.Apootosis(细胞凋亡):是机体细胞在正常生理或病理状态下发生的一种自发的、程序

化的死亡过程,起发生受到机体的严密调控。

20.Caspase(胱天蛋白酶):是胞内一种重要的效应蛋白;其活化可导致胞内底物的降解,

最终导致细胞死亡。

21.Death receptor(死亡受体):细胞表面有一类能结合细胞间凋亡刺激分子,并将信号传

导至胞内引起凋亡的受体。

22.Cell cycle(细胞周期):大多数真核细胞经过一系列有序的事件,使细胞的染色体得以

复制,并保证每个子代得到一套完整的染色体,这些有序的事件就构成细胞的细胞周期。

23.Tumor suppressor gene(抑癌基因):抗癌基因,正常细胞内存在基因编码产物能抑制细

胞转化和肿瘤发生的一类基因群。常见抑癌基因如Rb,P53.

24.Gene(基因):产生具有功能的转录体(RNAs)和蛋白质所必需的DNA节段(反转录病

毒RNA例外)。即DNA分子上的功能片断。

25.Shine-Dalgarno sequence(S-D序列):在原核生物mRNA起始密码AUG上游方向10

个碱基左右之前,有一段富含嘌呤的序列,这一序列以—AGGA—为核心,为SD序列,因能与核蛋白体30S小亚基中165rRNA3’端富含UCCU序列互补,又称核蛋白体结合位点。

26.Cis-acting elements(顺式作用元件):在基因内和基因外部有一些特定的DNA序列,与

结构基因表达调控相关,能够被基因调控蛋白特异性识别和识别,这些特定的DNA序列称顺式作用元件。

27.RNA editing(RNA编辑):真核生物转录后加工过程中,mRNA中由于碱基的插入、

缺失或置换而改变DNA模板来源的遗传信息,引起编码信息的改变,翻译出多种氨基酸序列不同的蛋白质,包括U→C,C→U;U的插入或缺失、多个G或C的插入等。

指遗传信息在mRNA水平上发生改变的过程。即RNA的编码序列与转录产生它的DNA 序列不同,转录后的RNA在编码区发生碱基的加入,丢失或转换等现象。

28.trans-acting factors(反式作用因子):能与顺式作用元件特异性结合,对基因表达的转录

起始过程有调控作用的蛋白质,称为基因特异性转录因子,在真核生物中,这些因子又称为反式作用因子。

29.housekeeping gene(管家基因):某些基因在一个个体的几乎所有细胞中持续表达,基本

不受环境因素的影响,通常被称为管家基因。

30.Restriction endonuclease(限制性核酸内切酶):是一类能识别双链DNA分子中的某种特

定核苷酸序列,并与其特异结合,并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类核酸内切酶。

31.RT—PCR(逆转录PCR):是以RNA为起始材料进行逆转录反应生成DNA,再以DNA

为模板进行PCR扩增,而获取目的基因或检测基因表达的技术方法。

32.Split gene(断裂基因):真核生物基因的编码序列往往被非编码序列所分割,呈现断裂状

的结构,故而也称断裂基因。

33.RNA干扰:能阻碍转录和翻译的一种小分子RNA,它的碱基顺序与ompF-mRNA的5’

末端附近的顺序互补。

34.First messenger (第一信使):细胞分泌的调节靶细胞生命活动的化学物质。如神经递质、

激素、生长因子等。

35.Secondary messenger(第二信使):细胞表面受体接受细胞外信号后转换而来的细胞内

信号称为第二信使。第二信使都是小的分子或离子。细胞内有五种最重要的第二信使:cAMP、cGMP、1,2-二酰甘油(diacylglycerol,DAG)、1,4,5-三磷酸肌醇(inosositol1,4,5-trisphosphate,IP3)、Ca2+等。???

36.Third messenger(第三信使):负责细胞核内信息传递的物质,是一类可与靶基因特异

序列结合的核蛋白,能调节基因的转录,又称为DNA结合蛋白。???

37.Receptor (受体):细胞膜或细胞内的一些天然分子,能够识别和结合有生物活性的化学

信号物质(配体,liganal),从而启动一系列信号转导,最后产生相应的生物学效应。

38.受体的分类:细胞内受体(intracellular receptors);

细胞表面受体(cell-surface receptors):离子通道型受体、G蛋白偶联型受体、催化型受体和偶联型受体。

39.Signalling domain (信号域):信号蛋白中保守的非催化结构域,能特异性结合另一蛋白中

的肽段(信号域配体),介导信号蛋白之间的相互作用。

40.PTK(酪氨酸蛋白激酶):是一类能催化蛋白酪氨酸残基磷酸化的蛋白激酶,共同特征

是羧基端具有典型的PTK结构,该酶可催化自身或底物磷酸化。有两种类型,一种是受体酪氨酸蛋白激酶RTK,二是非受体酪氨酸蛋白激酶。

41.RTK (酪氨酸蛋白激酶受体):直接装配在受体的胞内区,因此兼有受体和酶两种作用,

被称为酪氨酸蛋白激酶受体或受体酪氨酸蛋白激酶(receptor tyrosine kinase, RTK)。42.TNF(肿瘤坏死因子):由巨噬细胞分泌的一种小分子蛋白。有两种,TNF-α是一

种单核因子,主要由单核-巨噬细胞产生;TNF-β是一种淋巴因子,主要由T淋巴细胞分泌,TNF-α、TNF-β生物学作用极为相似。

43.PSTK(丝/苏氨酸蛋白激酶):在蛋白激酶催化的反应中,底物蛋白被磷酸化的氨基酸

残基主要为丝氨酸、苏氨酸的,被称为丝/苏氨酸蛋白激酶,其受体为丝/苏氨酸蛋白激酶受体。

44.JAK:指另一个酪氨酸蛋白激酶,该家族有四个成员:JAK1,JAK2,JAK3,Tyk2。它们的

分子量为120-140KD,不含SH2 和SH3 结构域,其C 端都有激酶区和激酶相关区(JH2 或假SH1),JAK家族成员介导细胞因子受体的跨膜信号转导。

45.CAMKⅡ(钙调蛋白依赖激酶Ⅱ):该酶底物很多,故又称多功能蛋白激酶全酶由50kD

的?亚基和??kD的?亚基组成,每个亚基都有催化部位和CaM结合部位,该酶活性除受Ca2+-CaM调节外,还受Ca2+/CaM依赖性自身磷酸化的调节,自身磷酸化导致两种结果:一是酶活性被激活;二是酶活性不再依赖Ca2+-CaM。这一性质在与学习、记忆有关的长时程增强(LTP)的诱导和维持上有关。

46.CAM(cell adhesion molecules, 细胞粘附分子)是细胞表面的一类糖蛋白分子,它们介

导细胞与细胞以及细胞与基质之间的粘附或相互作用,并具有信号转导功能。

47.SH2结构域:SH2 是80 年代后期在胞内信号转导蛋白中证实的第一个胞浆信号域,

最早是在与Src 癌基因家族产物同源的PTK 中发现的,由约100 个氨基酸残基组成。

由于该区不同于PTK 中催化区(SH1),故被命名为同源区-2(Src homology 2,SH2),存在于PTK,PTP的蛋白底物中及一些接头蛋白中,当PTK或RTK活化并自身磷酸化后,其中含PY基序和具有SH2的蛋白结合形成复合物。

48.SH3:存在于多种PTK及参与PTK信号转导的蛋白中,它还存在于骨架蛋白中,含有

SH3的蛋白也常常含有SH2.它由55-70 个氨基酸残基组成,能与约由10 个氨基酸残基组成的富含脯氨酸的基序结合,该基序即SH3 的配体具有核心的PXXP 共有序列。

49.PDZ 结构域:最早在突触后密集区蛋白PSD -95 中发现,含有保守的

Gly-Len-Gly-Phe(GLGF)基序。

50.PH(pleckstrin homology,PH)结构域最早由血小板蛋白普列克底物蛋白(pleckstrin)发

现而得名的。存在于苏氨酸蛋白激酶、PTK、激酶底物,PLCr61等蛋白中。该结构域由110 个氨基酸残基组成,含6 个亚区。

51.Signaling modules(信号转导模块):蛋白质-蛋白质直接或间接相互作用,形成信号转

导的蛋白质复合物,这种复合物称为信号转导模块(signaling modules)或称为细胞信号转导蛋白质模块(protein module in cellular signaling)。

52.MAPK信号通路的激活机制:通过磷酸化三级酶促级联反应

(MAPKKK---MAPKK---MAPK),酶与脚手架蛋白结合形成多酶复合物,使酶促反应按顺序进行。

53.CREB:CRE结合蛋白,它是第一个发现的与CRE结合的转录因子,可介导cAMP对

基因转录的调节。CREB以二聚体形式结合在特定的DNA序列上,但无转录激活作用,磷酸化是其活化的必要条件。

54.AP-1:活化蛋白质-1(activator protein-1, AP-1)是最广泛研究的癌基因产物之一,是Fos

和Jun蛋白家族中的一个二聚体。具有一个C-端到DNA结合结构域“亮氨酸拉链”二聚化界面,识别基因调节区的假回文序列。

55.MAPK(丝列原活化蛋白激酶):是指参与细胞内若干信号转导的重要级联过程的一系

列酶。它主要包括MAPKKK,MAPKK,MAPK三大类,组成一个依次激活的酶级联反应系列,MAPK与细胞生长和增值有关,生长因子为其配体。

56.P53:生物体所有组织都存在p53 蛋白,进化上高度保守。在细胞水平维持遗传稳定性

起关键作用----肿瘤抑制蛋白。DNA 损伤时激活p53 蛋白,结合DNA 特异序列(p53 应答元件),上调靶基因的表达。在这些条件下,p53 诱导细胞生长停止或者程序性细胞死亡(凋亡)。这两种应答预防细胞群内遗传损伤的复制和扩增。

57.Receptor mediated endocytosis, RME:细胞外的分子与受体结合后,胞吞到细胞内,这

一现象称受体介导性胞吞,RME不仅为受体-配体复合物的解离所必需,而且还是细胞得以高效率、高选择性、快速地摄取细胞外亲水分子的唯一手段,因而具有重要的生物学意义。(P54)

58.NF-KB:未激活的NF-KB以异源或同源二聚体与它的抑制亚基IKba形成三聚体存在于

胞浆内。配体与受体结合后,通过TRAF家族接头蛋白的结合,激活NF-KB诱导蛋白激酶(NIK),NIK为一种PSTK,能激活IKB激酶,活化的IKK使IKB中的SER32和SER36磷酸化并使其降解。激活的NF-KB转入核内,诱导多种基因表达,参与免疫和炎症反应。

举例说明蛋白质结构与功能的关系

简述真核细胞周期调控的主要分子机制

Caspase在细胞凋亡中的作用

细胞凋亡发生的主要途径

细胞凋亡和坏死的区别;检测凋亡细胞的主要方法

简述细胞粘附分子的分类和功能

简述真核细胞中蛋白质的主要定位信号

简述酶的活性调节主要方式

(完整版)分子生物学考博真题

中国疾控中心2005年分子生物学(博士) 一、名词解释 1.EST 2.YAC 3.Sense DNA 4.RNAi 5.Race 二、问答题 1、乳糖操纵子的结构。IPTG如何诱导结构基因表达? 2、正向突变、抑制突变及回复突变的定义及与突变的关系。 3、PUC18克隆载体的结构特征。 4、在做PCR过程中,常遇到的问题及解决方法。 5、已知蛋白A、B之间相互作用,C、D分别与A、B 相似,如何签定C、D之间的相互作用,两种方法说明之。 6、试用分子生物学相关知识建立动物模型的方法,如何建立病原生物学的动物模型。 军事医学科学院1995年分子生物学试题(博士) 1. Apoptosis的生物学意义及其调控基因。 2.基因转移的概念及基因转移载体应具备的条件。 3.原癌基因的功能及其转化为癌基因的机理。 4.人主要组织相容性抗原在细胞识别中的作用及原理。 5.染色体重排对生物体的影响及其主要类型。 6.噬菌体显示技术原理及其在生物学研究中的意义。 军事医学科学院1996年分子生物学试题(博士) 1.什么是原癌基因?它们怎样被反转录病毒激活? 2.什么是tumor supperssor gene?举例说明它的调控功能。 3.细胞染色体的异常如何导致癌基因的激活? 4 解释以下名词:(1) gene knock-out (2) molecular hybridization (3) restriction fragment length polymorphism (4) human genome project 5.G蛋白的结构特点信其功能. 6 .apoptosis的特征与其生理及病理意义,已知它的调控基因有哪些? 2006 协和生物化学与分子生物学专业博士试题 一、填空(24空24分) 1.---------年,由-------和-------(英文姓)首次提出了DNA的双螺旋模型,其结果发表在----杂志,他们提出的实验依据是-------和--------。 2.蛋白质浓度测定在--------nm, 原因是---------但有时候也在220nm处测量,原因是--------。 3.表皮生长因子受体具有-------酶的活性。 4.嗅觉、视觉、味觉和细胞膜上的------蛋白结合,这种受体具有-------的结构特点,产生的第二信使是。 二、名词解释(4题16分) 1. CpG island 2.CTD of RNA Pol II 3. SiRNA 三、问答题(4题40分) 1. 基因组DNA有时会产生G:T错配,DNA复制时有时会发生A:C错配,他们产

综述:进化论与进化生物学的发展

综述:进化论与进化生物学的发展自达尔文1859年发表《物种起源》(The Origin of Species)一书以来,“进化”(evolution)已逐渐成为生物学文献中出现频率最高的词汇之一,进化生物学(evolutionary biology)则成为当今生命科学中一个重要的前沿领域。 纵观150年来,随着科学界对生物进化现象的认识不断深化,人们对达尔文进化论的理解也随之不断深入,进化论自身也走过了曲折的发展之路。除了像其他任何一种科学理论一样需要补充和修正外,进化论还经受了来自科学领域之外的一次又一次挑战。今天,分子水平的生物进化研究正在蓬勃兴起,人们对进化论的兴趣有增无减,同时也提出了更高的要求,即以进化论为核心的进化生物学研究不仅应能够解释各种复杂生命现象,重建生物的自然历史,而且还应具有一定的预测性和应用潜力。因而,藉纪念达尔文(C. Darwin)诞辰200周年和《物种起源》出版150周年之际,回顾进化论与进化生物学的发展历程,将有助于我们全面了解该领域的科学理论与知识,并用于指导21世纪生命科学的研究。 进化论的科学本质 进化论从本质上改变了人们对地球生命现象的理解。进化论围绕生物多样性的起源与发展,引导人们探索各种生物之间的亲缘关系(或称进化谱系)。例如,作为地球生物的一员,人类究竟何时又是如何在地球上出现的?不同人种或不同人群之间关系如何?人类与其他生物(如细菌)有何种进化上的关联?如此等等,进化论为我们提供了科学的解释。 在进化论中,具有有益性状的生物存在差异的繁殖优势被称为自然选择(natural selection),因为是自然来“选择”提高生物生存与繁殖能力的性状。如果生物的突变性状降低其生存与繁殖能力的话,自然选择就会减少这些性状在生物群体中的扩散。人工选择也是一个类似的过程,但在这种情况下是人而不是自然环境使生物交配以选择理想的性状。最常见的莫过于通过人工选择来获得人们所需的家畜品系和园艺植物品种等。 迄今为止,支持进化论的证据层出不穷,从中华龙鸟化石的发现到酵母实验进化的分析,不胜枚举[1]。近年来比较突出的例子有加拿大北部“大淡水鱼”化石的发现。科学家们根据进化理论和化石分析预测出浅水鱼类向陆地过渡阶段的大致时间,随后他们将目光投向加拿大北部努维特地区的埃尔斯米尔岛,那里有大约37 500万年前的沉积岩。通过四年的努力,科学家们终于从岩层中发掘出命名为“Tiktaalik”(因纽特人的语言中意为“大淡水鱼”)的生物化石,它既具有许多鱼类特征,又具有早期四足动物的典型特征,而它的鳍包含骨骼,可形成类似于有肢动物的肢体,用来移动和支撑躯体[2]。“大淡水鱼”的发现证实了科学家们基于进化论的预测。反过来,对于进化论预测的证实也提高了达尔文理论的可信度。的确,每一种科学理论本质上都要具备对尚未观察到的自然事件或现象作出预测的能力。 另一个经典的例子是科学家们对特立尼达岛阿立波河中的虹鳉鱼进行的观察与实验。按照进化理论,不同时间尺度上的自然选择可能产生全然不同的进化效应。在仅仅几个时代的周期内,生物个体就有可能产生小规模的变异,可称之为微进化(microevolution)。科学家们发现,生活在阿立波河中的虹鳉鱼无论是其幼体还是成体均遭受较大鱼类的捕食,生活在河流上游小溪中的虹鳉鱼只有其幼体会被较小鱼类捕食,因而长期的进化过程导致该河流中的虹鳉鱼个体较小(更易于躲避捕食者),而溪流中的虹鳉鱼则个体较大(不易被较小的鱼类捕食)。科学家们将河流中的虹鳉鱼置于原来没有虹鳉鱼种群的溪流中,发现它们仅仅在20代后就进化出了溪流中虹鳉鱼的特性[3]。 毋庸讳言,在科学上,我们不可能绝对肯定地证明某种解释是完美无缺的,或者是终结性的。然而,迄今为止,许多科学解释已经被人们反复检验,不断增添的新观察结果或新的实验分析很难对其作出重大改变。换言之,科学界已广泛接受这些解释,它们是以观察自然世界获得的证据为基础的。进化理论就是其中一个代表。从这一点出发,我们可以明确地将

医学分子生物学讲义复习重点

分子生物学 1.ORF 答:ORF是open reading frame的缩写,即开放阅读框架。在DNA链上,由蛋白质合成的起始密码开始,到终止密码为止的一个连续编码列,叫做一个开放阅读框架。 2.结构基因 答:结构基因(structural genes)可被转录形成mRNA,并翻译成多肽链,构成各种结构蛋白质或催化各种生化反应的酶和激素等。 3.断裂基因 答:基因是核酸分子中贮存遗传信息的遗传单位,一个基因不仅仅包括编码蛋白质或 RNA 的核酸序列,还包括保证转录所必需的调控序列、位于编码区 5 ' 端与 3 ' 端的非编码序列和内含子。真核生物的结构基因,由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成,去除非编码区再连接后,可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质,这些基因称为断裂基因(split gene)。 4.选择性剪接 答:选择性剪接(也叫可变剪接)是指从一个mRNA前体中通过不同的剪接方式(选择不同的剪接位点组合)产生不同的mRNA剪接异构体的过程,而最终的蛋白产物会表现出不同或者是相互拮抗的功能和结构特性,或者,在相同的细胞中由于表达水平的不同而导致不同的表型。 5.C值 答:基因组的大小通常以其DNA的含量来表示,我们把一种生物体单倍体基因组DNA的总量成为C值(C value)。 6.生物大分子 答:生物大分子指的是作为生物体内主要活性成分的各种分子量达到上万或更多的有机分子。常见的生物大分子包括蛋白质、核酸、脂类、糖类。 7.酚抽提法 答:酚抽提法最初于1976年由Stafford及其同事提出,通过改良,以含EDTA、SDS及无DNA酶的RNA酶裂解缓冲液破碎细胞,经蛋白酶K处理后,用pH8.0的Tris饱和酚抽提DNA,重复抽提至一定纯度后,根据不同需要进行透析或沉淀处理获得所需的DNA样品。 8.凝胶过滤层析 答:凝胶过滤层析也称分子排阻层析或分子筛层析,利用凝胶分子筛对大小、形状不同的分子进行层析分离,是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一。 9.多重PCR 答:多重PCR技术是在一个反应体系中加入多对引物,同时扩增出多个核酸片段,由于每对引物扩增的片段长度不同,可用琼脂糖凝胶电泳或毛细管电泳等技术加以鉴别。 10.荧光域值 答:荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值,它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上,一般荧光阈值的设置是基线荧光信号的标准偏差的10倍。 11.退火 答:温度突然降至37-58℃时,变性的DNA单链在碱基互补的基础上重新形成氢

《分子生物学大(综合)实验》课程介绍(精)

《分子生物学大(综合)实验》课程介绍 课程代码(学校统一编制) 课程名称分子生物学大(综合)实验 英文名称MolecularBiologyBigExperiment 学分:3修读期:第七学期 授课对象:生物科学、生物技术 课程主任:姓名、职称、学位 关洪斌,副教授,博士 课程简介 21世记是生命科学的世记,而分子生物学是带动生命科学的前沿科学。分子生物学是在生物大分子水平上研究细胞的结构、功能及调控的学科,在现代生物学学科发展中的重要性与不容置疑的带头作用是众所周知的。许多重大的理论和技术问题都将依赖于分子生物学的突破。随着分子生物学研究工作的不断深入,相关实验技术方法和技术日新月异的发展。为了适应分子生物学研究工作日益发展的需要,满足培养从事现代生物学研究,尤其是进行分子生物学研究的人才的需要,特设置分子生物学大(综合)实验课程。本课程的教学目标和基本要求是使学习者基本掌握分子生物学实验技术的基本原理和方法,教学内容包括TRIZOL试剂盒提取RNA、RNA质量的检测、RT-PCR和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测cDNA。通过本实验可提高学生的动手能力和创造性思维能力,较好地掌握分子生物学实验操作和技能,为今后独立进行科研工作打下坚实基础。 实践教学环节(如果有) 实验内容包括TRIZOL试剂盒提取RNA、RNA质量的检测、RT-PCR和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测cDNA。 课程考核 实验报告 指定教材 自编 参考书目 1.分子生物学实验指导高等教育出版社施普林格出版社,1999 2.彭秀玲,袁汉英等.基因工程实验技术.湖南科学技术出版社,1997 3.吴乃虎.基因工程原理(上下册).科学出版社,1998 4.F.奥斯伯等著:颜子颖,王海林译.分子克隆实验指南(第二版).科学出版社,1998 5.J.萨姆布鲁克等著:金冬雁,黎孟枫等译.精编分子生物学实验指南.科学出版社,1993

(珍贵)浙江大学05-12年博士医学分子生物学真题

2012浙江大学医学分子生物学(乙)回忆版: 一.名词解释(3分*5) 1.The Central Dogma 2.Telomere 3.nuclear localization signal, NLS 4.Protein Motif 5.Splicesome 二.简答题:(5分*9) 1.一个基因有哪些结构组成? 2.基因、染色体、基因组的关系? 3.表观遗传机制改变染色质结果的机制? 4.内含子的生物学意义? 5.什么是蛋白质泛素化?其生物学意义是什么? 6.蛋白质纯化的方法? 7.MicroRNA是什么?它如何发挥作用? 8.什么是全基因组关联研究(Genome Wide Association Studies,GWAS)?其研究目的是什么? 9.分子生物学研究为什么需要模式生物? 三.问答题:(10分*4) 1.人体不同部位的细胞其基因组相同,为什么表达蛋白质的种类和数量不同? 2.用分子生物学知识,谈谈疾病发生机制? 3.有一块肿瘤组织及癌旁组织,设计一个实验证明细胞内蛋白质在肿瘤发生发展中的作用? 4.目前,基因靶点研究已成为新药开发的用药部分,结合目前药物靶点在新药开发中的应用,谈谈你的建议和观点?

2011浙江大学博士入学考试医学分子生物学试题回忆 一、英文名解 1、冈崎片段: 2、反式作用因子: 3、多克隆位点: 4、micro RNA: 5、分子伴侣: 二、简答 1、蛋白质四级结构。 2、真核转录调控点。 3、表观遗传学调控染色质。 4、真核RNA聚合酶类型及作用。 5、基因突变。 6、组学概念及举例。 7、简述兔源多克隆抗体的制备。

分子生物学考博试题

分子生学(2)——专业基础 -------------------------------------------------------------------------------- 一、解释下列名词(每题5分,共40分) 1. 蛋白激酶(protein kinase) 2. 增强子(enhancer) 3. SH2结构域(SH2 domain) 4. 聚合酶链反应(PCR) 5. 基因治疗(gene therapy) 6. 变性蛋白质(denatrued protein) 7. 信号肽(signal peptide) 8. cDNA文库 二、问答题(选答四道题,共计60分) 1. 什么是蛋白质的一级、二级、三级、四级结构?它们依靠什么样的链和力建立起这些结构?它们之间的关系是 什么?(15分) 2. 简述重组DNA技术的定义、原理和主要过程,结合你的专业举出一个应用该技术的实例并说明其意义。(15分) 3. 简述癌基因与抑癌基因的定义,各举一例说明其在肿瘤发生中的作用。(15分) 4. 以乳糖操纵子(或称为乳糖操纵元)和色氨酸操纵子为例简述原核细胞基因表达调控原理。(15分) 5. 简述真核细胞基因表达调控的基本环节、主要的调控分子和调控方式。(15分) 注意:请选答四道题,多答者扣去得分最多的答题!!

一九九五年攻读博士研究生入学试题 分子生物学(2) 一、解释(30分) 1.单链构象多态性(SSCP) 2.Alu家庭(Alu family) 3.受体型酪氨酸激酶(RTK) 4.GTP酶激活蛋白(GAP) 5.亮氨酸拉链(Leucine zipper) 6.杂合性丢失(LOH) 二、简要说明怎样进行构建cDNA文库(10分) 三、举例说明细胞癌基因激活有哪几种方式(10分) 四、真核细胞内存在哪些第二信使?它们是怎样产生的?各有何作用?(10分) 五、已知抹香鲸和猪的胰岛素具有相同的氨基酸序列,然而某些抗血清却能将它们区别开来,这岂不与“蛋白质的一级结构决定其高级结构”的理论相矛盾吗?你如何解释?(10分) 六、小测验(30分) 1.圈出下列结构中处于同一肽键平面的原子(5分) 2.已知UMP在体内可循UMP-----dUMP------dTMP途径转变,那么为什么用氚标记的尿苷进行掺入实验时,只有RNA才被标记呢?(5分) 3.将完全用放射性同位素标记的双链DNA置于不含同位素的反应液中进行复制,那么经过两轮复制后DNA分子的放射分布状态如何?(5分) 4.将某种纯蛋白1mg进行氨基酸分析,得19.5ug的异亮氨酸(分子量=131.2),那么该蛋白质的最小分子量是多少?(5分) 5.设有一双链环状DNA,全部长度为100%(如下图),已知内切酶E1的切点在O,E2的切点

分子生物学综述

基于特定引物PCR的DNA分子标记技术研究进展 摘要: PCR是一种选择性体外扩增DNA的方法,分子标记是继形态标记、细胞标记和生化标记之后发展起来的一种比较理想的遗传标记技术。SSR、SCAR、SRAP 和TRAP是四种最新发展的基于特定引物PCR的新型DNA分子标记技术,具有简便、高效、重复性好等优点,已在遗传育种的种质资源等各个方面得到广泛应用。介绍了这四种分子标记的基本原理和特点,综述了它们在分子生物学研究中的应用。 关键词:分子标记SSR SCAR SRAP TRAP DNA分子标记技术的研究始于1980年,本质上是指能反映生物个体或种群间基因组某种差异的特异性DNA片段,DNA分子标记大多以电泳谱带的形式表现生物个体之间DNA差异,通常也称DNA的指纹图谱。与其他几种遗传标记相比具有的优越性有:大多数分子标记为显性,对隐性的农艺形状的选择十分便利;基因组变异及其丰富,分子标记的数量几乎是无限的;在生物发育的不同阶段,不同组织的DNA都可用于标记分析;分子标记揭示来自DNA的变异;表现为中性,不影响目标形状的表达,与不良性状无连锁;检测手段简单、迅速。目前DNA分子标记技术已有数十种,主要可分为4大类:基于分子杂交的DNA 分子标记技术;基于随机/特定引物PG R的DNA分子标记技术;基子限制性酶切与PCR技术的分子标记技术;基于芯片技术的DNA分子标记技术。概述新型的基于特定引物PCR的DNA分子标记技术,包括SSR,SCAR,SRAP和TRAP。目前这些I3;VA分子标记技术的应用仍具有相当的局限性,如何将它们有效地利用于分子生物学研究是函待解决的问。 1序列特异扩增区域SCAR 1. 1 SCAR标记的原理 序列特异扩增区域(sequence characterised am-plifiedreginn)简称SCAR标记,是1993年Paran和Michelma记[1]]建立的一种可靠、稳定、可长期利用的RAPD 标记技术。SCAR标记的基本流程:先用随机引物进行RAPD筛选,获取特异的RAPD标记,然后对标记进行克隆和测序,根据测定RADII标记两末端的序列设计一对引物,此引物通常包含有原来的RAPD引物序列,多为20-24,再用该引物对所研究的基因组DNA进行PCR扩增,这样就可以把与原来的RAPI3片段相对应的单一位点鉴定出来。 1. 2 SCAR标记的特点 SCAR标记方便、快捷、可靠,适合于大量个体的快速检测,结果稳定性好,重复性高。由干SCAR标记使用的引物长,因而试验的可重复性高,它克服了RAPD重复性欠佳的弱点,同时具有STS标记的优点,因此比RAPn及其他利用随机引物的方法在基因定位和作图中的应用要好,在分子标记辅助育种、种质资源鉴别等方面有着潜在的应用前景,SCAR标记是共显性遗传的。待检DNA间的差异可直接通过有无扩增产物来显示,这甚至可省却电泳的步骤。由于RAPD 扩增过程中错配几率较高,RAPD标记片段同源性高导致SCAR标记的转化成功

军事医学科学院分子生物学试题(博士)

军事医学科学院攻读博士学位研究生入学考试试题分子生物学2003年 名词解释: 超二级结构变构调节与变构酶真核生物DNA组装泛素与蛋白酶体 电子传递链与酶复合体端粒与端粒酶带正电的R基氨基酸SAM 问答题 1 稳定蛋白质结构的作用力有那些?球状蛋白质三维结构的特点 2 TPK的两类型,其信号转导途径有何不同? 3 真核生物基因组的结构特点,转录因子主要有哪些结构域,举到两例说明结构域的功能。 4 以核苷酸序列推测蛋白质氨基酸序列的步骤,并提出一种可以弥补该方法不足的方法。 5 指出SOD与谷胱甘肽过氧化物酶的类型及催化功能。. 军事医学科学院分子生物学试题(博士)2000年 1.如何发现/寻找新基因。 2.什么是蛋白质组?于基因组的区别?及其内容/策略? 3.名词解释:①基因knock out与knock in、②差异显示、③酵母双杂交、④gene chip 4.DNA结合域/激活域的几种结构motif(画简图)。 5.真核基因在原核表达的难题及对策。 军事医学科学院分子生物学试题(博士)1999年 1.基因治疗的种类及其优缺点? 2.基因组计划"四张图"进展,主要内容?后基因组计划主要内容? 3.DNA复制主要方式及所需的酶? 4.转录生成mRNA主要过程,涉及的调控序列及因子? 5.基因的分子生物学定义? 6.转座及其机理,作用(或后果)? 7.原癌基因是如何被激活的? 8.真核基因在原核表达有那些困难?外源基因在宿主表达需要哪些元件? 9.顺反子比例的基本机理? 10.转录的基本特征? 11.基因治疗外源基因导入方式 军事医学科学院博士入学考试试题生物化学1998年 一、名词解释(5*5分) 1 抗体酶2克隆动物3 PKC 4 线粒体ATP合成酶系5 G蛋白 二问答题(15*5分) 1 酶的竞争与非竞争抑制剂的区别?动力学上如何区别?

分子生物学技术在土壤生物修复中的应用研究和展望剖析

分子生物学手段 在土壤污染生物修复中的应用 摘要: 污染土壤的修复技术主要有物理修复、化学修复和生物修复,文章 综述了分子生物学技术包括环境微生物群落降解基因分析、16S rRNA序列 分析技术以及荧光原位杂交技术在生物修复技术中跟踪污染土壤中降解微 生物行为、监测降解基因和微生物群落变化,揭示了其中的分子机制的应 用现状,对各项技术应用中需要注意的问题进行了讨论并对其发展前景进 行了展望。 关键词: 分子生物学;降解基因;16S rRNA;FISH Molecular biology techniques in bioremediation of soil: Current status and future Abstract:This review starts with a brief overview of the molecular biology techniques applied to the bioremediation of soil. The principles of the catabolic gene probe analysis of microbial community, 16S rRNA sequence analysis and fluorescent in situ hybridization (FISH) and their applications to monitoring the fate of contaminant-degrading microorganisms, detecting catabolic gene and analyzing the changes of microbial community in contaminated soil are highlighted. The problems and prospects of these techniques are discussed. Key words: molecular biology; catabolic gene; 16S rRNA; FISH

医学分子生物学

第一章总论 一、名词解释: 1.单体、有效部位2.一次代谢产物、二次代谢产物3.有效成分、无效成分 4.正相色谱、反相色谱5.水/醇法、醇/水法 二、填空题: 1.溶剂提取法中选择溶剂的依据__________。 2.色谱法按其基本原理分为________、________、________、________。 3.硅胶为________性吸附剂,适于分离________成分,化合物的极性越大,与吸附剂吸附得越____,越_____被洗脱下来。 4.凝胶色谱法分离天然产物中大分子时,主要依据化合物____________差异。 5.葡聚糖凝胶的商品型号是按其交链度大小分类,并以________表示。英文字母G代表________,后面的阿拉伯数字表示凝胶的吸水量再乘以________的值,如G-25的吸水量为________。 6.分配层析是利用各成分在的两相溶剂中不同而进行分离的层析方法。 7.聚酰胺吸附属于________吸附,是一种用途十分广泛的分离方法,特别适于分离________、________、________类化合物。 8.硅胶活化温度________,时间________,超过________丧失吸附力,硅胶含水量达________不能作吸附剂使用,只能作分配色谱。 9.中药液体制剂常采用“水提醇沉”法,水可以提取如糖类、_________、________、_______ 等成分,醇沉可以沉淀________、__________等物质。 10.使用混合溶剂重结晶时,一般是将样品先溶于__________的溶剂中,在加热的情况下滴加__________溶剂直至__________,再稍滴加__________溶剂使__________后让其渐渐析晶。 11.纸色谱的原理属__________,特别适合于________成分的分离鉴定,如_________、_________、__________等。 12.聚酰胺在含水溶剂中的吸附能力大致有三个规律①__________②__________③__________。 13.硅胶、氧化铝吸附剂的用量一般为试样量的__________倍,试样极性较小、难以分离者, 吸附剂用量可适当提高至试样量的__________倍。 14.TLC展开时,使组分R f值达到__________的溶剂系统可选用为柱色谱分离该相应组分的 最佳溶剂系统。 15.活性炭是__________吸附剂,对__________物质具有较强的吸附力,在水溶液中吸附力 __________,在有机溶剂中吸附力__________。 16.常见的极性有机溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇等,欲从水提取也重萃取极性成分,

2004年川大攻读博士学位研究生分子生物学试题

2004年川大攻读博士学位研究生分子生物学入学考试试题 一名词解释,每题3分,共30分 1.Motif基序:相邻的几个二级结构相互作用形成有规则的组合体称 为二级结构,是特殊的序列或结构的基本组成单元,又称为基序或摸体。 2.同源蛋白质:这些执行同一功能的蛋白质在进化过程中可能来自 同一祖先,称为同源蛋白质。 3.LCAT: 4.PKC:由1977年日本学者首次发现的一种依赖于磷脂和ca的蛋白 激酶,又称为C激酶,是丝氨酸、苏氨酸激酶,广泛分布于人和动物组织中,与肿瘤的形成有关。还参与了细胞信息传递如激素分泌,神经递质传导、细胞分泌和细胞增殖等。 5.ALU家族:是短的重复DNA序列,能被内切酶ALU识别和切割。人 单倍体基因组ALU家族超过106个拷贝,约占10%的基因组DNA。 各成员结构和长度大体相近,长约300bp,富含CG,有两个串联重复单体,在第170个碱基附近均有ALU位点(AGCT),各单体3端由polyA尾;串联重复两侧翼有7-10个bp短重复片段;左半130bp含两个RNAP3启动子;右半130bp单体结构相同或类似,但无启动子。ALU元件的复制可能对灵长类种属的形成有关。 6.PIC: 7.SSCP:单链构象多态性分析,单个或多个碱基突变可能影响单链 核酸分子的构象,在非变性聚丙烯酰胺电泳时,不同构象的核酸

分子常表现出不同的迁移率,电泳新生条带的出现反映了突变分子的存在。 8.腺病毒载体:该病毒在体外稳定,易于制备与纯化;也属大容量 载体;可插入6-8KB的外源基因;宿主细胞广泛,可感染分裂与非分裂细胞,此载体尤其适用于神经退行性疾病基因治疗;重组病毒在辅助细胞中可获高滴度的增值,外源基因表达高于RV载体10-100倍;该病毒不整合至宿主细胞染色质,无诱发癌变之嫌。 9.变性聚丙烯酰胺凝胶电泳:变性的page主要用于分离和纯化单链 DNA片段,这种凝胶在核苷酸碱基配对抑制剂,如尿素、甲酰胺和SDS存在的情况下聚合而成。PAGE既有分子筛效应,又有电荷效应,因此可根据电泳样品的分子大小,电荷多少及形状的差别分离核算片段。它特别适用于寡聚核苷酸分离和DNA序列测定。 聚丙烯胺酰胺凝胶是有单体丙烯酰胺在催化剂四甲基乙二胺和过硫酸铵的作用下,发生聚合反应。形成含有亲水性酰胺基侧链的脂肪簇长链,凝胶网孔的大小取决于聚合链的长度及交联度。10.mRNA差异显示:DD是目前筛选差异表达基因的最有效方法之一, 已成为研究肿瘤和疾病相关基因的重要手段。抽提细胞内mRNA,反转录成cDNA,然后经过随机PCR扩增,通过测序凝胶上电泳条带的比较筛选出不同表达的基因。回收这些DNA片段,经过增后作为探针,在cDNA或基因组DNA库中扫筛选到相关基因。 二简单题每题10分,共40分 1.简述胆固醇逆向转运途径及其生理意义

华科考博分子生物学历年真题汇总

华中科技大学同济医学院考博分子生物学(专业基础)简答题历年试题汇总 1.顺式作用元件有哪些,并加以解释。2015,2012考 2.人类基因组计划的4张图,各自的意义是什么? 3.癌基因激活的主要途径? 问答:1.什么是基因治疗,基因治疗的主要策略是什么?基因治疗的技术及主要内容,2015,2014,2013考 问答2.蛋白质组学的主要技术有哪些并解释?2015,2012考 2014简问答题 1.PCR原理,步骤,写出6种PCR衍生技术 2013,2014,2009考 2.何谓基因克隆?简述其基本过程。09年 3.重组DNA技术,问答题20分,14年考 4.举例说明基因表达的调控机制。题目太大,原核调控,真核调控?13年 问答5.人类基因定位的常用方法及原理。12年,09年考 简问6.简述反式作用因子的结构特点及作用方式 09年 简问7.简述逆转录病毒的结构特点 09年考 问答:真核细胞中基因表达的特异性转录调控因子是指什么?根据他们的结构特征可以分为哪些类型?它们和DNA相互识别的原理是什么?2013年考 问答:试述大肠杆菌中表达蛋白质产物的步骤。 2013年考 试比较克隆载体、原核载体和真核载体的特点 2012年考 2016年真题 英译中名词解释(20分) 反义RNA;操纵子;限制性核酸内切酶;选择性剪切;抑癌基因;基因诊断; RNA干扰;质粒; gene maping;管家基因 简答题。 真核基因组的结构和功能特点20分 分15人类基因组的结构特征. 原癌基因的特点15分 蛋白质组研究常用技术有那些,简介其作用。15分 当前基因治疗技术面临的技术问题有哪些?15分 以下为2001-2004年试题及网上答案 一、若要获得IL-2的基因工程产品,你应该怎么做? 基因工程是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术,是将外源基因通过体外重组后导入受体细胞内,使这个基因能在受体细胞内复制、转录、翻译表达的操作,又叫分子克隆,DNA重组技术。 1. 在GENBANK中检索IL-2的mRNA序列;在genecard里检索IL-2高表达的组织;同时检索一下有关文献; 2. 如果考虑使用原核表达系统(通常是大肠杆菌表达系统),将IL-2的成熟肽的基因序列找出(呵呵,我没有检索,不清楚是否有信号肽)进行分析;

分子生物学课程论文

分子生物学课程论文

PCR技术发展与应用的研究进展 王亚纯 09120103 摘要:聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)是最常用的分子生物学技术之一,通过变性、退火和延伸的循环来完成核酸分子的大量扩增.定量PCR技术是克服了原有的PCR技术存在的不足,能准确敏感地测定模板浓度及检测基因变异等,快速PCR技术快速PCR在保证PCR反应特异性、灵敏性和保真度的前提下,在更短时间内完成对核酸分子的扩增.mRNA 差异显示PCR技术是在基因转录水平上研究差异表达和性状差异的有效方法之一.近年来已经开展了许多这三方面的研究工作,本文就定量PCR技术、快速PCR技术、mRNA差异显示PCR技术作一综述,以便更好地理解及应用这项技术。 关键字:定量PCR;荧光PCR;快速PCR;DNA聚合酶;mRNA差异显示PCR 0 前言 聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术由于PCR简便易行、灵敏度

高等优点,该技术被广泛应用于基础研究。但是,由于传统的PCR技术不能准确定量,且操作过程中易污染而使得假阳性率高等缺点,使其在临床上的应用受到限制[1]。鉴于此,对PCR产物进行准确定量便成为迫切的需要。几经探索,先后出现了多种定量PCR (quantitative PCR,Q-PCR)方法,其中结果较为可靠的是竞争性PCR和荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)。 随着生命科学和医学检测的不断发展,人们越来越希望在保证PCR反应特异性、灵敏性、保真度的同时,能够尽量缩短反应的时间,即实现快速PCR(Rapid PCR or Fast PCR)。快速PCR 技术不仅可使样品在有限的时间内可以尽快得到扩增,而且可以显著增加可检测的样品数量,显然,在大批量样本检测和传染病快速诊断等方面将会有重要的应用前景。例如,快速PCR在临床检测中可大大加快疾病的诊断效率;在生物恐怖袭击时能有效帮助快速鉴定可疑物中有害生物的存在与否;同时,由于PCR已经渗入到现代生物学研究的各个方面,快速PCR的实现必然可以使许多科学研究工作的进展显著加快,最终影

(完整版)分子生物学考博历年试题

2009年山东大学考博–分子生物学试题 by admin on 2010年01月25日· 2 comments in 专业真题 一、名词解释: 1、顺式作用元件; 2、模序与结构域; 3、岗崎片段; 4、Southern Blotting; 5、遗传密码的简并性和摇摆性 二、简答: 1、基因治疗中常用病毒载体类型及特点? 2、IP3-PKB介导的受体信号转导途径? 3、蛋白质(酶)活性的快速调节方法有哪些?举三例说明磷酸/脱磷酸化是酶活性快速调节的重要方式。 4、细胞死亡受体蛋白的分类,组成成员的作用? 5、细胞周期Cdk的调控作用。 6、原核生物DNA复制后随链合成中参与的酶和蛋白质及作用? 7、举出5种类型RNA并简述其作用。 三、论述: 1、原核生物和真核生物表达调控的层次有哪些?调控机制。 2、原核生物和真核生物DNA复制的起始、延长和终止有哪些不同点?复制过程参与的因子及功能? 08中科院分子生物学试题 1、表观遗传,及调控方式,还有蛋白质通过哪些共价修饰调控其功能? 2、蛋白质与DNA结合的方法和比较,EMSA和DNase1足迹法? 3、密码子改造研究新蛋白药物,原理,关键和方法 4、设计研究未知基因(预测两个跨膜区域)功能的实验方案(不低于4个) 5、质粒改造原则 6、诱导全能干细胞的方法,实验方案等。(去年的nature上发表的) 个人认为除了第二和五题之外,其它的题目都属于一骑绝尘的,要么会,要么不会,想蒙是绝对没门的。 这门专业课能及格,我想都不错了,特别是1,3,6题。 不知道大家做的如何,反正第一题,我是意思都没看懂,不知道连续的3问是不是指1个东西。还是最后1问是单独的,与前面的2问无关

现代分子生物学小论文

中国因大豆最新研究进展报告(专题三) 摘要:大豆是重要的油料作物和饲料作物,也是人类的主要食用蛋白和工业原料的来源。而转基因是一种将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中,由于导入基因的表达,引起生物体的性状的可遗传的修饰的现代技术。目前,越来越多的转基因技术运用到食品医药行业当中。大豆的转基因研究是国内外植物分子生物学研究的热点之一,通过将目的基因整合到大豆基因中,可获得抗虫大豆,其出油率也高于普通大豆。转基因大豆已成为世界大豆主产国大豆产业发展的主要动力。本文概述转基因大豆依据的主要理论,目前国内研究进展,转基因大豆的现状及其安全问题等等。 关键词:转基因大豆食品安全研究进展外源基因现状 前言:大豆是重要的油料作物和高蛋白粮饲兼用作物,含有丰富的蛋白质、脂肪和多种人体有益的生理活性物质。随着基因工程研究的升入,用转基因来改变大豆的性状已被广泛应用。转基因大豆最早的报道是1984年De Bloke等和Horsch 等的研究结果。1988年,McCabe和Hinchee分别用基因枪轰击大豆未成熟胚生长点和用农杆菌侵染大豆子叶节的方法获得转基因植株。1994年5月,美国孟山都公司培育的抗草甘膦除草剂转基因大豆首先获准在美国商业化种植。1997年,杜邦公司获得美国食品药物管理局批准推广种植高油酸转基因大豆。1998年AgrEvo公司研制的抗草丁膦大豆被批准进行商业化生产。转基因大豆品种的育成和推广是世界大豆科技史上具有里程碑意义的重大突破,已成为世界大豆发展生产的主流趋势。 1转基因大豆简介 转基因大豆最早来源于美国,1996年春,美国伊利诺伊西部许多农场主种植了一种大豆新品种,这种大豆是移植了矮牵牛的一种基因。这个新大豆品种可以抵抗杀草剂——草甘膦(毒滴混剂)。草甘膦会把普通大豆植株与杂草一起杀死。这是人类历史上第一次成功培育转基因大豆。 转基因大豆包括抗草胺膦转基因大豆,抗磺酰脲类除草剂转基因大豆,抗草甘膦转基因大豆等等。目前以抗草甘膦为目标而创制出的抗除草剂作物占绝对优势,其中尤以抗草甘膦大豆在世界范围内种植面积最广。 2转基因大豆的主要理论 2.1 转基因技术理论

分子生物学综述论文(基因敲除技术)

现代分子生物学 课程论文 题目基因敲除技术 班别生物技术10-2学号 10114040220 姓名陈嘉杰 成绩

基因敲除技术的研究进展 要摘基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术,是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。此后经历了近20年的推广和应用,直到2007年10月8日,美国科学家马里奥?卡佩奇(Mario Capecchi)和奥利弗?史密西斯(Oliver Smithies)、英国科学家马丁?埃文斯(Martin Evans)因为在利用胚胎干细胞对小鼠基因金星定向修饰原理方面的系列发现分享了2007年诺贝尔生理学或医学奖。基因敲除技术从此得到关注和肯定,并对医学生物学研究做出了重大贡献。本文就基因敲除的研究进展作一个简单的综述。 关键词基因敲除、RNAi、生物模型、同源重组 前言 基因敲除又称基因打靶,该技术通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组,进行精确的定点修饰和基因改制,具有转移性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定遗传等特点。应用DNA同源重组技术将灭活的基因导入小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES cells)以取代目的基因,再筛选出已靶向灭活的细胞,微注射入小鼠囊胚。该细胞参与胚胎发育形成嵌合型小鼠,再进一步传代培育可得到纯合基因敲除小鼠。基因敲除小鼠模型的建立使许多与人类疾病相关的新基因的功能得到阐明,使现代生物学及医学研究领域取得了突破性进展。上述起源于80年代末期的基因敲除技术为第一代技术,属完全性基因敲除,不具备时间和区域特异性。关于第二代区域和组织特异性基因敲除技术的研究始于1993年。Tsien等[1]于1996年在《Cell》首先报道了第一个脑区特异性的基因敲除动物,被誉为条件性基因敲除研究的里程碑。该技术以Cre/LoxP系统为基础,Cre在哪种组织细胞中表达,基因敲除就发生在哪种组织细胞中。2000年Shimizu等[2]于《Science》报道了以时间可调性和区域特异性为标志的第三代基因敲除技术,其同样以Cre/LoxP系统为基础,利用四环素等诱导Cre的表达。该技术使目的基因的敲除在时间上可人为控制,避免了死胎或动物出生后不久即死亡等现象的出现。2004年该实验室Cui等又报道了第四代基因工程技术,即可诱导的区域性蛋白质敲除技术,用这一技术构建的模式动物可在几分钟内反转性地激活或敲除特定蛋白质的功能,从根本上改变了前三代基因敲除技术对蛋白质代谢速度的内在依赖性,达到空前的时间精度,成为目前功能基因组和功能蛋白质组研究最先进的工具之一。 1. 基因敲除技术简介 基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术,是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理,用设计的同源片段替代靶基因片段,从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展,除了同源重组外,新的原理和技术也逐渐被应用,比较成功的有基因的插入突变和iRNA,它们同样可以达到基因敲除的目的。 2.实现基因敲除的多种原理和方法: 2.1.1 利用基因同源重组进行基因敲除 基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初,胚胎干细胞(ES 细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985 年,首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年,Thompsson首次建立了

医学分子生物学复习总结学习资料.doc

医学分子生物学复习资料

蛋白质、糖蛋白与蛋白聚糖、脂蛋白、细胞信号传导 名词解释: 1、构型:指一个有机分子中各个原子特有的固定的空间排列。这种排列不经过 共价键的断裂和重新形成是不会改变的。不同构型之间相互转化会涉及化学键 的断裂,构型的改变往往使分子的光学活性发生变化。 2、构象:构成分子的原子和基团因为化学键的旋转而形成在三维空间的不同的 排布、走向。不同的构象之间可以相互转化而不涉及化学键的破裂。构象改变 不会改变分子的光学活性。 3、肽平面:肽键具有部分双键性质而不能自由旋转,这样C、N 原子同它们连接的 O、H和两个 Cα共六个原子就被约束在一个刚性平面上,这个平面被称为肽平面。 4、基序或模体:相邻的几个二级结构相互作用形成有规则的组合体称为超二级 结构,是特殊的序列或结构的基本组成单元,又称为基序或模体。 5、结构域:蛋白质的超二级结构进一步组合折叠成半独立紧密的球状结构域。 6、糖蛋白:在分子组成中以蛋白质为主,其一定部位以共价键与若干糖链(约4%)相连所构成的分子。 7、蛋白聚糖:蛋白聚糖是一类由蛋白质和糖胺聚糖通过共价键相连而成的化合物,其分子中的含糖量通常为50%~90%。 8、血脂:血浆所含的脂类统称为血脂,它包括甘油三酯、磷脂、胆固醇及游离 脂酸。 9、血浆脂蛋白:在血浆中血脂与蛋白质结合,形成血浆脂蛋白。 10、载脂蛋白:血浆脂蛋白中蛋白质部分称为载脂蛋白。 11、脂蛋白受体:脂蛋白受体是一类位于细胞膜上的糖蛋白,它们能以高亲和 性的方式与其相应的脂蛋白配体相互作用,介导细胞对脂蛋白的摄取和代谢, 从而进一步调节血浆脂蛋白和血脂的水平。 12、细胞通讯( cell communication):指一个细胞发出的信息通过介质传递 到另一个细胞产生相应反应的过程。

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2009 年山东大学考博–分子生物学试题by admin on 2010年01月25日·2 comments in专业真题 一、名词解释: 1、顺式作用元件; 2、模序与结构域; 3、岗崎片段; 4、Southern Blotting; 5、遗传密码的简并性和摇摆性 二、简答: 1、基因治疗中常用病毒载体类型及特点? 2、IP3-PKB 介导的受体信号转导途径? 3、蛋白质(酶)活性的快速调节方法有哪些?举三例说明磷酸 / 脱磷酸化是酶活性快速调节的重要方式。 4、细胞死亡受体蛋白的分类,组成成员的作用? 5、细胞周期 Cdk 的调控作用。 6、原核生物 DNA复制后随链合成中参与的酶和蛋白质及作用? 7、举出 5 种类型 RNA并简述其作用。 三、论述: 1、原核生物和真核生物表达调控的层次有哪些?调控机制。 2、原核生物和真核生物 DNA复制的起始、延长和终止有哪些不同点?复制过程 参与的因子及功能? 08 中科院分子生物学试题 1、表观遗传,及调控方式,还有蛋白质通过哪些共价修饰调控其功能? 2、蛋白质与DNA结合的方法和比较,EMSA和 DNase1足迹法? 3、密码子改造研究新蛋白药物,原理,关键和方法 4、设计研究未知基因(预测两个跨膜区域)功能的实验方案(不低于 4 个) 5、质粒改造原则 6、诱导全能干细胞的方法,实验方案等。(去年的nature上发表的) 个人认为除了第二和五题之外,其它的题目都属于一骑绝尘的,要么会,要么不会,想蒙是 绝对没门的。 这门专业课能及格,我想都不错了,特别是1, 3, 6 题。 不知道大家做的如何,反正第一题,我是意思都没看懂,不知道连续的 3 问是不是指 1 个东西。还是最后 1 问是单独的,与前面的 2 问无关

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