生血散对小鼠骨髓造血功能的影响_胡致平

生血散对小鼠骨髓造血功能的影响_胡致平
生血散对小鼠骨髓造血功能的影响_胡致平

骨髓及其功能

1. 你了解骨髓及其功能吗? 骨髓是人体的造血组织,位于身体的许多骨骼内。成年人的骨髓分两种:红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞,血小板和各种白细胞(包括粒细胞、淋巴细胞和单核细胞)。血小板有止血作用,白细胞能杀灭与抑制各种病原体,包括细菌、病毒等。某些淋巴细胞能制造抗体。因此,骨髓不但是造血器官,它还是重要的免疫器官。黄骨髓主要是脂肪组织,当人体贫血时,它可以转化为红骨髓。 骨髓中的造血干细胞除了不断分化成熟,随时补充人体损耗的血球外,骨髓自身有损伤(如骨折、跌打损伤)时,亦能再生。若骨髓细胞不正常,就会导致“白血病”、“再生障碍性贫血”等血液疾病。 2. 捐献骨髓会影响身体健康吗? 捐献骨髓不会影响人的身体健康。许多人认为捐献骨髓是抽取脊髓,这完全是一种误解。骨髓移植需要的是人体内的红骨髓--造血干细胞。一个成年人的骨髓重量为3公斤,一名供髓者提供不足10克的骨髓造血干细胞就能挽救一名白血病患者的生命。因此不会减弱其免疫功能和造血能力。骨髓是再生能力很强的组织,一般健康者捐献造血干细胞后在十天左右即可补足所捐的干细胞量。 3. 健康者在多大年龄适合捐献骨髓? 健康者年龄在18至55岁均可捐献骨髓。 4. 什么是骨髓移植? 骨髓移植是指把骨髓中的造血干细胞从一个人体内移植到另一个人体内(一般是通过静脉输入)。确切他说,骨髓移植就是造血干细胞移植。 5什么人需要进行骨髓移植? 人体造血系统及免疫系统的严重疾病,如白血病(俗称血癌)。淋已瘤、再生障碍性贫血、地中海贫血、重症放射病等患者,继续生存的希望就是骨髓移植。我国每年约400万名各类疾病的患者等待着骨髓移植。 6捐献多少干细胞能救活一个人? 骨髓移植需要的是人体内的红骨髓--造血干细胞。一个成年人的骨髓重量约3公斤,一名供髓者提供10克的骨髓造血干细胞就能挽救一名白血病患者的生命。

血液学

造血器官:能够生成并支持造血细胞分化、发育、成熟的组织器官称为造血器官。人类造血器官起源于中胚层的原始间叶细胞。 MDS(骨髓增生异常综合征):是一组克隆性造血干细胞疾病,以髓系中一系或多系血细胞减少或发育异常、无效造血以及急性髓系白血病发病风险增高为特征。 外源凝血途径:是指参与凝血的因子不完全来自血液中,部分由组织中进入血液。组织因子由各种途径进入血液,TF进入血液后并启动凝血。 血管内溶血:由红细胞内在缺陷或外在因素所致,红细胞在血管内被直接破坏,血红蛋白进入血浆,临床以血红蛋白血症和血红蛋白尿为主要特征,获得性多见。 血涂片检验的重要性(两者关系):1、骨髓象相似而血象有区别:如溶血性贫血、缺铁性贫血和急性失血的骨髓象相似,但血象有区别;2、骨髓象有区别而血象相似:如传染性淋巴细胞增多症和慢性淋巴细胞白血病的血象中皆有小淋巴细胞增多,但前者骨髓中淋巴细胞稍增多,而后者骨髓中淋巴细胞却明细增多;3、骨髓象变化不显著而血象有显著异常:如传染性单核细胞增多症,其骨髓中的异性淋巴细胞少见,而血象中异型淋巴细胞常大于20%;4、骨髓象有显著异常而血象变化不显著:如多发性骨髓瘤、戈谢病、尼曼—匹克病,其骨髓中分别可见到特异性的骨髓瘤细胞、戈谢细胞、尼曼—匹克细胞,但血象中甚少见到; 5、血象中细胞较骨髓中细胞成熟:血象中血细胞来源于骨髓,因此白血病时血象中的白血病细胞较骨髓中成熟、轻易辨认,故结合血象可辅助诊断白血病细胞类型的判断。 G6PD缺陷症分型及实验室检查特点:1、临床分型:蚕豆病、急性溶血性贫血、新生儿高胆红素血症、先天性非球形红细胞性溶血性贫血。2、G6PD筛选试验:高铁血红蛋白还原试验、变形珠蛋白小体生成试验,中度异常测量G6PD活性降低,但溶血高峰期及恢复期活性可接近正常,故应离心去除衰老红细胞再进行测定,并定期复查。 急性早幼粒细胞白血病临床特点及实验室检查特点:1、临床特点:除发热、感染、贫血、浸润等急性白血病症状外,广泛而严重的出血为本病特点。以皮肤黏膜最明显,其次为消化道、泌尿道等,颅内出血最严重,为致死原因之一。2、检查特点:急性早幼粒细胞白血病,骨髓中异常早幼粒细胞≥ 30%(NEC),胞质内有大量密集甚至融合的粗大颗粒,常有成束的棒状小体。M3v为变异型急性早幼粒细胞白血病,胞质内颗粒较小或无。 微环境:由骨髓基质细胞、微血管、神经和基质细胞分泌的细胞因子等组成,是造血干细胞生存的场所,对造血干细胞的自我更新、定向分化、增殖及造血细胞增殖、分化、成熟调控起重要作用。 Moto cell(桑葚细胞、莫托细胞):形成地图样、葡萄状细胞。这些小球体称为russell小体,为球蛋白聚集产物,少时称ressell小体,多时称moto cell。通常为病例细胞,如MM。 骨髓活检适应证:1骨髓穿刺失败骨髓穿刺多次失败,临床怀疑骨髓纤维化、骨髓转移癌、多发性骨髓瘤、多毛细胞白血病、某些急、慢性白血病及骨髓硬化症等。2.全血细胞减少; 血象显示全血细胞减少,反复骨髓穿刺均为“血稀”或骨髓增生低下,病态造血,怀疑再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征及低增生性白血病的患者。3.特殊贫血; 某些贫血原因不明的发热、脾或淋巴结肿大、骨髓涂片检查不能确诊者。4.白血病治疗疗效的观察; 临床上有时骨髓涂片已达到完全缓解,但骨髓活检切片内仍可检出白血病性原始细胞簇,因此,在白血病的缓解后化疗及长期无病生存期间,应定期作骨髓双标本取材。倘若骨髓涂片未达复发标准,而切片内出现了异常原始细胞簇,提示已进入早期复发,应及时对症治疗 ALIP(幼稚细胞异常定位):原始\早幼粒细胞3~5个远离肾小梁聚集在一起,常见于MDS。热点现象:同一成熟阶段的幼稚红细胞所组成的细胞岛,多见于MDS。 高铁血红蛋白:正常人Hb含耳夹铁离子,与氧结合为氧合Hb,当Hb中铁丧失一个电子,被氧化为三价铁离子时,称为高铁Hb。失去运氧功能,且不稳定,易形成珠蛋白小体。正常人搞铁Hb仅占Hb汗了1%。

骨髓造血功能差怎么办

骨髓造血功能差怎么办 骨髓的主要功能就是负责造血,一般成人的骨髓分为红和黄两种骨髓,不同颜色的骨髓代表的功能也不同,红色骨髓主要负责造红和白细胞以及血小板,而黄色骨髓负责杀菌和抑制身体中的病原体,当人体造血功能弱的时候会引起障碍性贫血,影响人体免疫力和抵抗力,那么骨髓造血功能差需要采取哪些措施来治疗呢? 充填在骨髓腔和骨松质的间隙内,分为红骨髓和黄骨髓两类,红骨髓内涵不同发育阶段的红细胞和某些白细胞及脂肪组织。 ★骨髓 ①藏于骨腔中的髓质。《素问·平人气象论》:“脏真下于肾,肾藏骨髓之气也。” ②指病在骨髓,喻疾病部位较深。《灵枢·寒热病》:“络脉 治皮肤,……经脉治骨髓、五脏。”

★什么是骨髓 骨髓是存在于长骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔,扁平骨(如髂骨、肋骨)和不规则骨(胸骨、脊椎骨等)的松质骨间网眼中的一种海绵状的组织,能产生血细胞的骨髓略呈红色,称为红骨髓。成人的一些骨髓腔中的骨髓含有很多脂肪细胞,呈黄色,且不能产生血细胞,称为黄骨髓。人出生时,全身骨髓腔内充满红骨髓,随着年龄增长,骨髓中脂肪细胞增多,相当部分红骨髓被黄骨髓取代,最后几乎只有扁平骨松质骨中有红骨髓。此种变化可能是由于成人不需全部骨髓腔造血,部分骨髓腔造血已足够补充所需血细胞。当机体严重缺血时,部分黄骨髓可转变为红骨髓,重新恢复造血的能力。 ★骨髓有什么作用 人体内的血液成分处于一种不断的新陈代谢中,老的细胞被清除,生成新的细胞,骨髓的重要功能就是产生生成各种细胞的

干细胞,这些干细胞通过分化再生成各种血细胞如红细胞、白细胞、血小板、淋巴细胞等,简单的说骨髓的作用就是造血功能。因此,骨髓对于维持机体的生命和免疫力非常重要。 1.增强有氧运动,可以增加造血干细胞活性 2.人体的造血组织有很强的代偿功能,当抽取部分骨髓后,造血干细胞会加快增殖,在一、二周内完全恢复原来的水平。因此,捐献者不仅不会影响自身的造血功能,反而使自身的造血系统得到了锻炼,更具备了生命的活力。

血液学重点)

1、卵黄囊是人类最初的造血组织。血岛是人类最初的造血中心。 2、造血正向调控的细胞因子:干细胞因子(SCF );集落刺激因子(CSF );白细胞介素3 (IL-3 )。造血负向调控的细胞因子:转化生长因子-B (TGF- B);肿瘤坏死因子-a B(TNF- a B);白血病抑制因子(LIF );干扰素 a B Y(interferon- a B Y IFN- a B Y ;趋化因子(CK) 3、有丝分裂是血细胞分裂的主要形式。巨核细胞则是以连续双倍增殖DNA的方式,属多倍体细胞。 4、血细胞发育成熟中的形态演变规律 (1 ).细胞胞体由大逐渐变小(巨核细胞相反,由小变大) (2).细胞浆颜色由深逐渐变浅(中幼红细胞阶段胞浆血红蛋白合成明显,故颜色发红) (3)?红系统胞浆中无颗粒,粒系统到中幼阶段颗粒开始岀现特异性颗粒(嗜中性,嗜酸性和嗜碱性)改 变 (4).中幼阶段核仁消失 5、原粒胞质少,透明天兰色,无颗粒,早幼胞质多含紫红色非特异性的嗜天青颗粒。 6、原红边际有钝状或瘤状突起,有核周淡染区,网织红内含嗜碱性物质, 7、单核细胞进入组织内形成巨噬细胞。 8、正常骨髓片中原巨核为0 (多为产板巨),一张正常血片中可见巨核细胞为7 —35个。 9、核发育落后于胞质,即幼核老质(巨幼红细胞贫血);胞质发育落后于核,即老核幼质(缺铁性贫血)。核质发育不平衡(Pelger- Hu et畸形) *MDS病态造血时,可出现小巨核细胞,核浆发育失衡(老浆幼核)、粒细胞中颗粒过少或过多、Pelger- Hu et 异常。 10、弥漫性血管内凝血时,红细胞可呈裂细胞 11、对红细胞膜起屏障和保持内环境稳定作用的是磷脂和胆固醇 12、过氧化物酶(pox )染色:阳性结果为胞质内出现棕黑色颗粒。正常时,原粒阴性,自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均呈阳性反应。嗜碱阴性,嗜酸阳性最强,单核只有幼单和单核呈弱阳性反应,其它除吞噬细胞有阳性外都是阴性反应。异常时,急粒原粒(+)。急性早幼粒(强+) 13、过碘酸---雪夫氏反应(糖原染色、PAS ):阳性结果为胞质内岀现红色颗粒、块状或呈弥漫状红色。急淋(+)粗颗粒块状;急粒(+)细颗粒均匀;急单(+)细颗粒弥散状。 14、碱性磷酸酶染色(NAP染色)成熟中性粒和巨噬(+),其他均(-)。积分值(NAP )指100个中性粒中阳性比例,参考以一个加号为基准,参考值是7 —51。 15、细菌性感染时NAP积分值增高。急性粒细胞白血病时NAP积分值减低,急性淋巴细胞白血病时NAP 积分值一般增高;再生障碍性贫血积分值增高,阵发性睡眠性血红蛋白尿积分值减低;再障(+),治疗有效下降。 16、慢粒与类白血病鉴别:慢粒的NAP积分值常为零,类白血病时NAP显着升高。 17、酸性磷酸酶染色(ACP ):戈谢病(+),尼克一皮克病(-);多毛细胞白血病(+)。 18、氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色(AS-D-NCE):为粒系细胞所特有,又称特异性酯酶染色。阳性结果:胞质内岀现

小鼠骨髓多染红细胞微核实验

小鼠骨髓多染红细胞微核实验 目的和意义 微核试验用于检测受试物在哺乳动物所引起的染色体或原红细胞有丝分裂器损伤,以确定该受试物有无诱变性。通过本次实验学习和掌握小鼠骨髓多染红细胞微核测定方法。 原理 正常细胞的有丝分裂的分裂中期,染色体均匀地排列在赤道板附近,到分裂后期便分成两份,分别向两极移动,并在末期分别形成两个子细胞的核。如果由于某种化学物质的作用而使分裂期的细胞染色体受到损伤,在中期就会观察到染色体断裂,在进入分裂后期时,这种断片落后于向两极移动的染色体而滞留在赤道板附近,当其它染色体分别形成子细胞核时,这些落后的断片便独立形成微核,如果纺锤体功能受损,也可产生微核。 由上可见,微核的出现和染色体畸变有密切相关性,同时微核的观察是在细胞的间期,不必分析中期相,这比分析染色体畸变要方便一些。进行骨髓细胞微核分析一般观察红细胞,记数嗜多染红细脑中微核出现率。 器材与试剂 1、器材 载玻片、推片、血细胞计数器、滴管、注射器、解剖剪、镊子、止血钳、晾片架、滤纸、电吹风机、染色缸、研钵、恒温水浴箱、光学生物显微镜(或荧光显微镜)。 2、试剂 小牛血清; 甲醇; 吉姆萨储备液:将1g 吉姆萨倒入研钵内,加入少许甘油混合研细,分次倒入剩余的甘油至66ml,转移到烧杯内(或试剂瓶内)。放入55~60℃水浴中并不断搅动至2h。取出冷却后加入60ml甲醇,混匀后置室温,2~3周后过滤,保存于棕色瓶内备用(存放时间越长染色效果越好)。 吉姆萨染色液:实验前取吉姆萨储备液与磷酸盐缓冲液(pH 6.8)1 : 9混匀。 磷酸盐缓冲液(pH 6.8) 阳性对照物:环磷酰胺。 操作步骤 一、试验动物及处理 1、动物的选择:选用小鼠,每组10只动物,雌雄各半。小鼠体重在18~20g,7~12w。 2、染毒途径:采用腹腔注射给药。 3、剂量选择:环磷酰胺按50mg/kg剂量染毒,同时设立阴性对照(空白对照)。 4、染毒次数和取样时间:采用30h给药法,即两次给药间隔24h,在第二次给药后6h处死动物采集骨髓。 二、骨髓液的制备和涂片 脱颈椎处死小鼠,立即取出胸骨,除去胸骨上的血液和肌肉,横向切断胸骨,暴露骨髓腔挤出骨髓,小心地涂布于载玻片一端的胎牛血清液滴里,混匀涂片。

白血病是由于骨髓的造血功能异常引起的

1.在早春低温时为了让水稻种子早发芽,稻农常将种子置于流动的河流或溪水中浸泡一段时间。下列激素中与这种做法相关性最大的是(脱落酸)A.脱落酸 B.细胞分裂素 C.赤霉素 D.生长素 2.下列过程,哪些不是发生在内环境中的生理生化反应(①神经递质和激素的合成③丙酮酸氧化分解成二氧化碳和水⑥蛋白质在消化道中的消化分解) ①神经递质和激素的合成②抗体和抗原的特异性结合③丙酮酸氧化分解成二氧化碳和 水④神经递质和突触后膜受体的作用⑤乳酸与碳酸氢钠作用生成乳酸钠和碳酸 ⑥蛋白质在消化道中的消化分解 A.②④⑤ B.②⑤⑥ C.①③④ D.①③⑥ 3..如图是基因突变鼠和正常鼠运动对血糖浓度的影响。根据图中信息,基因突变鼠出现 图中状况的原因最可能是() A.胰岛B细胞受损B.甲状腺被切除 C.无法将血糖转换成肝糖原D.体内细胞缺乏胰高血糖素的受体. 4..切除正常幼年狗的垂体后,短期内该狗血液中三种激素——促甲状腺激素释放激素(a)、 促甲状腺激素(b)、甲状腺激素(c) 的含量随时间的变化曲线最可能是() 5.根据所学知识,对图中d、e两点生长素浓度的分析合 理的是 ( ) A.若d点对应的浓度为a,则e点对应c点的浓度 B.若d点对应的浓度为b,则e点对应c点的浓度 C.若d点对应的浓度为a,则e点对应b点的浓度 D.若d点对应的浓度为c,则e点对应a点的浓度

6.下图是某一动物种群迁入一个适宜环境后的增长曲线图,图中曲线的标号与下列各点对应正确的一项是 ( ) ①②③④ A b a c d B d c b a C d b c b D c a d c ①种群数量最大的点②种群增长速率最快的点③该种群迁入后环境阻力明显增大是 从哪一点开始④既要获得最大的捕获量,又要使该动物资源的更新能力不受破坏,捕获后种群数量应该在图中的哪一点 7.下图表示某处于平衡状态的生物种群因某些外界环境变化导致种群中生物个体数量改变 时的四种情形,下列有关产生这些变化的原因的分析中,正确的是 () (1)若图①所示为草原生态系统中某种群,则a点后的变化可能原因是过度放牧 (2)若图②所示为某发酵罐中菌种数量,则b点后的变化原因可能是增加营养供应(3)图③中c点后发生的变化表明生态系统的抵抗力稳定性有一定限度 (4)图④曲线可用于指导海洋捕捞 A.只有一种说法正确B.有两种说法正确 C.有三种说法正确D.四种说法都正确 8.图示某些生物学概念间的关系,其中Ⅰ代表整个大圆Ⅱ包含Ⅳ。下列各项不符合关系的是A.Ⅰ体液Ⅱ细胞外液Ⅲ细胞内液Ⅳ淋巴 B. Ⅰ突触Ⅱ突触后膜Ⅲ突触前膜Ⅳ受体 C. Ⅰ核酸Ⅱ核糖核酸Ⅲ脱氧核糖核酸Ⅳ脱氧核糖核苷酸 D. Ⅰ免疫Ⅱ特异性免疫Ⅲ非特异性免疫Ⅳ体液免疫 9、部分生物学知识归纳如下,其中错误的是(多选)

实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察

实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察 一、实验目的 了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法,掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。利用显微照相技术对所得切片进行照相。二、实验原理 染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。因此通过染色体分析,可以了解某一物种最基本的遗传指标。进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织,如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。如将秋水仙素注射到动物的腹腔内,经肠系膜吸收并可转运到骨髓,结果使正在分裂的细胞不能形成纺锤体,使得染色体停在中期状态,经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。这种制片方法是属于侵害性的,因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓,在临床上用于一些血液疾病的研究分析。对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片,方法基本一样。人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。 三、实验用具及材料 实验材料:体重20克左右的小鼠一只 实验试剂:0.075mKCl低渗液、固定液(甲醇:醋酸=3:1)、0.4%秋水仙素、改良苯酚品红溶液、二甲苯 实验材料:恒温水浴槽、纱布、烧杯、离心管2支、刀片、镊子、解剖盘、解剖剪、镊子、注射器、离心机、镜头纸 光学显微镜、带数码相机的光学显微镜 四、实验步骤 1腹腔注射秋水仙素溶液:在做实验前2~3小时,对实验用小鼠按0.1ml/20g小鼠的量对其进行0.4%的秋水仙素注射。 2取材:实验时,用断颈法迅速将小鼠处死,通过解剖取出股骨,用注射器吸取在37℃下保温的低渗液2毫升,将针头插入骨髓腔中冲洗骨髓,使冲洗液从股骨的另一端流出。 收集冲洗液到5ml刻度的离心管中。 3低渗:用吸管将冲洗液吹打几次,然后把离心管放在37℃恒温水浴槽内低渗20分钟。4固定:之后取出并加1ml的固定液,吹打之后放入37℃恒温水浴槽内固定10分钟。 5离心:然后将1000rpm离心10分钟,弃去上清。 6再固定:加入固定液继续固定10分钟(先吹打,再放入恒温水浴槽)。 7离心:再1000rpm的速度离心10分钟。弃去上清, 8制备细胞悬液:离心结束弃上清,最后留大约与沉淀等量的上清液, 9滴冰片:从冰箱里取出预冷的载玻片4块并排,手持吸管在载玻片上方向下滴片。 10干燥:让其自然晾干。 11染色:用改良苯酚品红溶液染色10分钟左右。 12去浮色:清水冲洗,风干。 13镜检:先用低倍镜找到一好的分裂相区域,然后转用高倍镜观察。 14观察和照相:用油镜观察,并选取良好的视野照相。 五、结果与讨论 1.观察结果 在考试的10分钟内拍摄了五张照片。我使用的是0号机,由于前面已经有人用过,所以没有太考虑图像设置的问题,结果拿到结果才发现,0号机的图片普遍偏小,放大就模糊了。

小鼠骨髓细胞染色体标本的制备

小鼠骨髓细胞染色体标本的制备 【目的要求】 1.掌握小鼠细胞染色体标本制备方法。 2.计数并观察小鼠骨髓细胞分裂中期染色体的数目及特点 【基本原理】 在骨髓细胞中,有丝分裂旺盛,因此不需要体外培养就可以直接得到中期细胞。骨髓细胞具有高度的分裂活性,经秋水仙素或秋水酰胺处理后,使分裂细胞阻断在有丝分裂中期,再经低渗处理、固定、滴片、染色等步骤,可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。 【实验用品】 1.器材:解剖刀、剪刀、镊子、注射器、离心机、离心管、恒温水浴箱、冰冷载玻片、酒精灯、大培养皿、显微镜、纱布,标签纸,记号笔等; 2.试剂0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)、0.075 mol / L KCI 溶液、Giemsa染液等。 3.材料:65-90天健康小鼠(生技09级72人,新华09生物技术36人,生科08级75人,生技08级70人,共253人,需购小鼠110只) 【方法与步骤】 1.前处理取材前3~4 h,向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动物种类不同而异,一般每克体重注射2~6μg,注射总量不宜超过2 ml(例如一只体重50 g的蟾蜍,若按4μg / g注射,需注射浓度为0.1%的秋水仙素溶液0.2 ml )。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期,增加中期分裂相的比例。 2.取骨髓细胞处死动物,用装有生理盐水的注射器反复冲洗出骨髓细胞,并用注射器筒轻轻吹打,使细胞团块分散,静置片刻、待大组织团块沉淀后,用吸管将骨髓细胞悬浮液移至离心管中,以1000 r / min 离心5~10 min,弃去上清液。 3.低渗根据骨髓细胞液的多少,加0.075 mol / L的KCI液5~6 ml,在37℃水浴箱中或室温下低渗20~30 min。低渗时间过长,易造成细胞破裂;时间过短,则染色体难以分散。4.预固定低渗完毕,立即加入1 ml 新配制的预冷Carnoy’s固定液,用吸管将细胞轻轻吹打均匀,进行预固定。然后以1000 r / min 离心8 min。 5.固定弃去上清液,加5~6 ml Carnoy’s液,轻轻吹打细胞,静置固定20 min。离心弃去上清液,再加5~6 ml Carnoy’s液,固定20 min。 6.制备细胞悬液离心弃去上清液,再加少许新鲜Carnoy’s固定液,用吸管将固定后的细胞吹散,并反复吹打混匀,制成浓集的细胞悬浊液。 7.准备载玻片滴片前1~2 h,将洁净的载玻片放在0~4℃冰水中,使其表面附有一层水膜。这样在滴片时,细胞悬液遇到载玻片上的冷水,染色体会迅速分散开来。 滴片法制备染色体标本 8.滴片取出预冷的载玻片,将其倾斜约30°放置。吸取细胞悬液,从距离载玻片40 cm 以上高度处滴至载玻片上2~3滴;滴片后立即用嘴或洗耳球对准滴片处轻微吹气;也可用镊子夹住载玻片、在酒精灯火焰上迅速过几下(见图),这样都有助于染色体分散和展开。9.干燥使滴片在室温下自然干燥,或在酒精灯火焰上烤干,也可用吹风机冷风吹干。10.染色待滴片充分干燥后,用pH 6.8的磷酸盐缓冲液稀释的Giemsa染液(Giemsa原液:缓冲液=1:10)染色30 min。然后自来水冲洗,空气干燥。镜检。 【结果观察】 1.在低倍镜下观察Giemsa染色后的中期分裂相形态。 2.选择分散适度不重叠染色体的分裂相,在高倍镜下进行观察。

人体解剖学复习题

人体解剖学复习题 一、选择题 1.成年以后不具有造血功能的骨髓存 在于() A 椎骨 B 肋骨 C 长骨髓腔内 D 股骨近侧端松质内 E 肱骨近侧端松质内 2.临床上不具有触诊意义的结构是() A 肋角 B 胸骨角 C 肩胛下角 D 骶角 E 以上都不是 3.肱骨骨折易发生于() A 肱骨中段 B 肱骨下段 C 外科颈 D 解剖颈 E 内上髁 4.肱骨体后面的浅沟称为() A 半月切迹 B 尺神经沟 C 结节间沟 D 桡神经沟 E 腕骨沟 5.不属于含气骨的是() A 额骨 B 蝶骨 C 筛骨 D 上颌骨 E 枕骨 7.脑膜中动脉入颅部位在() A 圆孔 B 茎乳孔 C 卵圆孔 D 棘孔 E 眶上裂 8.直立位时,最不易自然引流的鼻旁窦是() A 额窦 B 蝶窦

D 筛窦前、中群 E 筛窦后群 9.面神经通过() A 棘孔 B 圆孔 C 颈静脉孔 D 茎乳孔 E 筛孔 10.关节的基本结构是() A 关节面、关节囊、关节盘 B 关节面、关节腔、韧带 C 关节囊、关节腔、关节唇 D 关节唇、关节软骨、韧带 E 关节面、关节腔、关节囊 11.颈曲在何时形成() A 婴儿开始抬头时 B 幼儿开始坐起时 C 胚胎时期 D 出生后1~2周期间内 E 成年以后 12.全身最灵活的关节是() A 膝关节 B 肘关节 C 腕关节 D 肩关节 E 踝关节 13.参与构成椎管后壁的主要韧带是() A 后纵韧带 B 前纵韧带 C 棘上韧带 D 黄韧带 E 棘间韧带 14.不参与骨盆构成的是() A 骶、尾骨 B 髋骨 C 骶髂关节 D 髋关节 E 耻骨联合 15.助呼气的肌肉是() A 肋间外肌 B 胸大肌 C 胸小肌 D 前锯肌

如何提升造血功能

人体造血功能差怎么办?? 什么是造血功能障碍:造血功能障碍是指由于疾病因素或物理因素引起骨髓造血组织明显减少,造血功能低下或者部分衰竭,使得血细胞生成障碍,从而引起造血功能障碍,是临床上常见的疾病后遗症,如肿瘤的化学治疗、放射治疗,骨髓移植,化学药物毒性损伤和一些自身免疫性疾病包括免疫功能紊乱、再生障碍性贫血等。 蛋白质是生命存在的重要基础,成人每天需要蛋白质约75克。血液中最主要的物质就是各种蛋白质,尤其是红细胞,如果蛋白质供量不足,造血器官就无法生产出优质的血液,就会出现贫血而直接影响身体的健康,成人每天需要蛋白质约75克。 铁是血红蛋白中的主要成分,血红蛋白携带氧气和二氧化碳的功能是通过血红蛋白中的铁的结合作用来完成的,如果铁量不够,就会出现缺铁性贫血,成年人每天需要铁量为12毫克。叶酸对于蛋白质的生物合成有重要影响,如果供量不足,就会出现巨红细胞贫血,这也叫叶酸缺乏病,成人每天需要量为200微克,维生素B12、维生素C及其他多种微量元素和激素等,虽然在红细胞内含量不多,但对红细胞的成熟和铁的吸收等造血过程,都是不可缺少的物

质,BNSWHO细胞营养含有造血主要原料各种蛋白质、碳水化合物、铁、铜、叶酸、维生素C、维生素B12以及多种微量元素和激素等物质,治疗缺铁性贫血,补充红细胞含量,加速扩 大叶酸及蛋白质等微量元素和激素的供量。 如何防护与治疗: 寻找对造血功能具有保护作用的治疗剂、有益于患者的药物意义重大,BNSWHO中提取制备而成的小分子多肽富集物,基础为激活机体非特异性免疫,刺激骨髓干细胞的增殖和提升造血功能。造血干细胞是一种从血液或骨髓中分离出来,具有无限或较长期的自我更新能力,并具有多向分化潜能,能发生程序性凋亡的原始造血细胞,近期研究发现,它们可以诱导分为肌肉细胞、神经细胞、肝细胞、心肌细胞等非造血系统的组织细胞,可望用于多种组织再生和创伤修复治疗,成为现代医学异军突起的重要方向,引起了医学各个领域的密切关注。 禁烟禁酒,正确的日常饮食,比如不能喝咖啡,不能吃腥辣油腻的食物,以及适量的运动也能起到一定的防护作用,保持良好的心态,才能拥有一个健康的身体。 造血系统如何工作? 一般认为,造血干细胞及由其产生的处于中间发育阶段的多种祖细胞和处于终末阶段的各种成熟血细胞及衍生体

骨髓象分析

二、血象检查 当血液系统发生疾病时,血象、骨髓象中血细胞会发生质或量的改变,检验骨髓象同时必须检验血象,对确定诊断和鉴别诊断是十分必要的。 ㈠血片检查步骤及内容 1、染色(瑞姬氏、时间、避免偏酸或偏碱) 2、计数100个白细胞 ①粒系 ②红系 ③淋巴 ④浆细胞(异常时出现) ⑤单核细胞 ⑥巨核细胞 ⑦其他:有无寄生虫及其他异常细胞,如疟 原虫、恶组、淋巴瘤 3、计算结果 4、描述结果

㈡血片检查的重要性 1.不同疾病时,骨髓象相似而血象有区别。2.不同疾病时,骨髓象有区别而血象相似。 (传淋) 3.同一患者骨髓象变化不显著,血象有异常。 (传单) 4.同一患者骨髓象异常,血象无变化。(MM)5.血中细胞来源于骨髓,白血病细胞分化程度晚。

三、骨髓象检查 ㈠临床应用 1.适应症 ①血细胞减少或增多。 ②各种急慢性白血病。 ③各种类型的贫血。 ④不明原因的长期发热,肝、脾、淋巴结肿 大。 ⑤不明原因的骨痛、骨质破坏、肾功能异常、 黄疸、紫癜、出血。 ⑥恶性血液病化疗的疗效观察 ⑦细胞培养 2.禁忌症:血友病、晚期妊娠 3.主要作用:辅助诊断和疗效的观察 ㈡骨髓穿刺 1.穿刺部位 ①髂后上棘:第五腰椎向上3cm处。 ②髂前上棘:顶端后约1-2cm处。

③胸骨:胸骨中线,相当第二肋间水平的胸 骨体上端。 ④小于3岁的小儿选择胫骨内侧 2.穿刺步骤 ①选择部位,②消毒、戴消毒手套、将 孔布盖于消毒的局部、孔布口对准穿刺部, ③注射麻醉药,④左手固定穿刺部位,右 手持穿刺针与骨面垂直旋转刺入,深度为 达骨膜后再刺入1cm左右,⑤拔出针芯, 接10ml注射器,轻轻负压抽取,抽取骨髓 液不超过0.2ml,立即涂片,⑥必要时再取 骨髓液0.5-2ml,作有核细胞计数,⑦拔出 穿刺针,压迫伤口敷以消毒纱布。 注意事项: ?穿刺术必须严格无菌操作,严防骨髓感染。初诊病人在治疗前做骨髓穿刺,死亡 病例应在死亡后半小时内进行。 ?抽吸骨髓液动作要缓慢,首次吸取0.2ml

放射医学技术技士(基础知识)模拟试题及答案

放射医学技术技士(基础知识)模拟试题及答案(一)放射医学技术技士(基础知识)模拟试题及答案一、下列 每一道考题下面有A、B、C、D、E 五个备选答案。请从中选择一个最佳答案,并在答题卡上将相应题号的相应字母所属的方框涂黑。 [试题1]组成肌腱的主要组织是 A、疏松结缔组织 B、致密结缔组织 C、网状组织 D脂肪组织 E、肌组织 [答案](B)答对率66.67% [试题2]下列关于骨构造的叙述,错误的是 A、由骨质、骨膜、骨髓构成 B、骨质分骨密质、骨松质两种 C、骨膜对骨有营养、再生和感觉作用 D红骨髓具有造血功能 E、成人骨干骨髓腔内的骨髓终生具有造血功能 [答案](E)答对率80.63% [试题3]下列位于颅后窝的结构是 A、筛孔 B、圆孔 C、卵圆孔 D棘孔

E、舌下神经孔 [答案](E)答对率49.55%[试题4]动眼神经出颅的部位是 A、圆孔 B、卵圆孔 C、棘孔 D眶上裂 E、视神经管 [答案](D)答对率64.86%[试题5]变移上皮分布于 A、血管的内表面 B、胆囊的内表面 C、气管内表面 D膀胱的内表面 E、胃的内表面 [答案](D)答对率64.71%[试题6]颈椎最主要的特征是 A、椎体较小 B、棘突分叉 C、有横突孔 D关节突不明显 E、椎孔较小 [答案](C)答对率49.17%

试题7]胸骨角平对于第几肋前端 A、第一肋 B、第二肋 C、第三肋 D第四肋 E、第五肋 [答案](B)答对率70.42% [试题8]与肱骨小头相关节的是 A、尺骨头 B、滑车切迹 C、鹰嘴 D冠突 E、桡骨头 [答案](E)答对率35.89% [试题9]关于胫骨的叙述,正确的是 A、位于小腿外侧 B、胫骨体呈圆柱形 C、上端膨大形成内、外侧髁 D两髁之间形成髁间凹 E、下端膨大外侧面形成外踝 [答案](C)答对率53.75% [试题10]一块椎骨的椎体和椎弓围成A、骶管裂孔

临床检验血液学配套试题及答案解析

第二章造血基础理论 一、选择题 A 型题 1. 血细胞由原始向成熟发育演变规律不正确的是 A. 胞体由大到小 B. 巨核细胞由小到大 C. 核染色质由紧密粗糙到疏松细致 D. 胞浆由少到多 E. 胞质内颗粒从无到有 2. 人体内具有多项分化能力的最早的造血细胞是 A. 红系祖细胞 B. 造血干细胞 C. 粒系祖细胞 D. 巨核系祖细胞 E. T淋巴系祖细胞 3. 成人在正常情况下产生红细胞、粒细胞和血小板的唯一器官是: A. 肝脏 B. 脾脏 C. 骨髓 D. 胸腺 E. 淋巴结 4. 关于造血祖细胞下述哪项是正确的 A. 具有多项分化能力 B. CD34+ CD38- C. CD34+ Lin- D. 分化能力较局限 E. 高度的自我更新能力 5. 胚胎期造血下列错误的是 A. 卵黄囊壁上的血岛是人类最初的造血中心 B. 肝脏造血是由卵黄囊血岛的造血干细胞迁移到肝脏而引起的 C 胚胎第五个月以后骨髓成为造血中心 D. 淋巴结不参与胚胎期造血 E. 胎肝的造血干细胞经血流入脾,在此增殖、分化和发育 6. 参与造血正向调控的细胞因子是 A. 干细胞因子和转化生长因子 B. 干细胞因子和趋化因子 C. 干细胞因子和集落刺激因子 D. 集落刺激因子和转化生长因子 E. 干细胞因子和干扰素 7. 正常成人骨髓造血分布区域下列不符合的是 A. 胸骨 B. 肋骨 C. 下肢股骨远心端 D. 脊椎骨 E. 颅骨 X 型题 8. 关于红骨髓下列正确的是A. 含大量发育的各阶段血细胞而呈现红色 B. 18岁后红骨髓仅存在于扁骨、短骨及长管骨的近心端 C. 红骨髓约各占骨髓总量的50%左右 D. 红骨髓是脂肪化的骨髓 E. 在正常情况下不再参与造血,但仍保留造血潜能 9. 血细胞分化是指 A. 分化过程是不可逆的 B. 分裂后产生新的子细胞在生物学性状上产生了新的特点 C. 通过特定基因的表达合成了特定的蛋白质 D. 血细胞失去某些潜能,转变为具有新功能细胞的过程 E. 分化后的新细胞与原来的细胞有了质的不同 10. 造血干细胞出现的表面标志是 A. Lin- B. CD38+ C. CD38- D. CD34- E. CD34+ 11. 造血干细胞的基本特征是 A. 对称分裂能力 B. 高度自我更新能力 C. 定向分化能力 D. 多向分化能力 E. 有明显的形态特征 12. 造血微环境包括: A. 网状细胞 B. 造血细胞 C. 基质细胞和基质细胞分泌的细胞因子 D. 骨髓微血管系统 E. 造血岛 13. 胚胎期参与造血的器官有: A. 骨髓 B. 肝脏 C. 胸腺 D. 脾脏 E. 淋巴结 14 髓外造血可发生在下述哪些情况: A. 婴幼儿严重贫血 B. 急性再障 C. 骨髓硬化症 D. 严重感染 E. 血友病 二、名词解释 1. 造血祖细胞 2. 血细胞分化 3. 髓外造血 4. 造血器官 三、问答题 1.试述造血微环境的作用。

基础医学概论试卷

一、单项选择题(每题1分,共50分) 1.具有造血功能的骨髓是()。 A 红骨髓B黄骨髓C白骨髓 D 红骨髓和黄骨髓 2.正常脊柱的生理性弯曲不包括()。 A 胸曲B腰曲C骶曲 D 尾曲 3.两侧胸锁乳突肌同时收缩,头将() A 向前点头B向后仰 C 偏向左侧 D 偏向右侧 4. 三对唾液腺是指()。 A 胰腺、腮腺和舌下腺 B 胰腺、腮腺和下颌下腺 C 腮腺、舌下腺和下颌下腺 D 腮腺、舌下腺和肾上腺 5.胆汁是由( )生成的。 A 肝脏 B 胆囊 C 肝门静脉 D 胆总管 6.在男性尿道的三个狭窄中,最狭窄处位于() A 尿道内口 B 尿道膜部 C 尿道外口 D 舟状窝 7. 二尖瓣附着于()的周缘上。 A心脏的右房室口 B 心脏的左房室口 C 心脏的主动脉口D心脏的肺动脉口 8. 眼球壁的中膜,从前往后分别为虹膜、睫状体和()三部分。 A 视网膜 B 玻璃体 C 脉络膜 D 晶状体 9. 在大脑皮质的功能区定位中,第一躯体运动区位于() A 中央后回和旁中央小叶后部B中央前回和旁中央小叶前部 C 额中回后部 D 颞横回 10. 下列器官中,不属于内分泌腺的是() A 甲状腺 B 肾上腺C松果体 D 舌下腺

11. 人体有四种基本组织,即上皮组织、结缔组织、肌肉组织和()组织。 A 血液B神经C骨与软骨D心脏 12. 下列关于成熟红细胞结构和功能的描述,错误的是() A 核大而圆,位于中央 B 无细胞器 C 细胞内充满血红蛋白 D 具有结合与运输氧气和二氧化碳的功能 13. 皮下脂肪属于()组织。 A 上皮组织 B 结缔组织 C 表皮组织 D 肌肉组织 14.受精的意义在于()。 A 激活了卵裂B恢复二倍体细胞 C 决定了性别 D 以上都对(A+B+C) 15. 细胞膜的物质运输有多种方式,但不包括() A 易化扩散 B 主动转运 C 入胞和出胞作用D复杂扩散 16. 在所有生命现象中,生命活动的基本特征是() A新陈代谢、能量转换和兴奋B生物电、兴奋性和生殖能力 C新陈代谢、兴奋性和生殖D反应性、兴奋性和反射活动 17. 人体生理功能的调节机制有三种,即() A信号调节、神经调节和能量调节B神经调节、体液调节和自身调节 C生物电调节、激素调节和心理调节D信号调节、反射调节和体液调节 18. 体温的调节中枢在()。 A 中脑B丘脑C大脑皮层D下丘脑 19.B型血是指红细胞膜上只有()凝聚原/血清中只含有抗()凝集素。A.A/B B. B/A C. A/A D. B/B 20. 心脏的每搏输出量是指() A一侧心室一次搏动所射出的血液量B一侧心室每分钟射出的血液量 B 两侧心室一次搏动所射出的血液量C两侧心室每分钟射出的血液量

小鼠骨髓染色体实验报告

实验课名称遗传学实验实验名称小鼠骨髓细胞染色体的制备与观察成绩________________ 姓名王大锤实验报告系列年级学号组别时间温度 实验原理及目的 实验目的 1、学习小鼠骨髓细胞染色体制片程序; 2、掌握空气干燥法制片方法; 3、观察了解小鼠的端着丝粒染色体的形态。 实验原理 1、染色体标本 制备染色体标本是细胞遗传学最基本的技术,优良的染色体制片是其它技术(如显带、原位杂交等)的先决条件。 2、骨髓细胞染色体 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。动物染色体制备最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。在骨髓细胞中,有丝分裂的指数很高,可以直接得到中期细胞而不必像血淋巴细胞或其它组织需要经过体外培养。 3、空气干燥法 指细胞经过秋水仙素处理、低渗处理、充分固定和滴片等步骤之后,使载片在空气中自然干燥的方法。 实验材料、仪器及试齐U 仪器: 光学显微镜,2mL注射器,5号针头,10mL刻度离心管,吸管,试管,试管架,载玻片,盖片,离心机,光学显微镜,解剖器具(解剖盘,剪子、镊子)。 材料: 小白鼠(Mus musculus 2n=40 ),体重约18-20g (65-90日龄),雌雄皆可。 试剂及其他: 秋水仙素溶液(100卩g/mL), 2%柠檬酸钠溶液,0.075M KCl,冰醋酸,甲醇,Giemsa原液, 0.01 M 磷酸缓冲液(PBS, pH 7.4)1?预处理生命与环境科学学院实验报告 进行秋水仙素处理。取骨髓前3-4h给小鼠经腹腔注入秋水仙素(100卩g/ mL)0.3-0.4mL。 2. 取骨髓 处死动物,立即取后肢骨。用剪刀剪掉、清除腿部的皮肤和肌肉,然后从股骨两端关节头处剪下股骨,立即用2%柠檬酸钠溶液冲洗干净。剪掉股骨两端膨大的关节头,使其露出骨髓腔,用吸有适当量的柠檬酸钠溶液注射器,从一端插入注射针头,将骨髓吹入10mL刻度离心管中,可反复吹洗数次,直至股骨变白为止。此时离心管中的细胞悬浮液可达4?6mL。 3. 低渗处理 将所获得的细胞悬浮液经1500rpm离心10min,吸去上清液;加0.075M KCl 6?8 mL ,立即将细胞团吹散打匀。室温下静止15 min。 4. 固定 低渗处理后的细胞,立即经1500rpm离心10 min。吸去上清液,沿管壁加7 mL 3 : 1甲醇冰醋酸固定液,马上吹散细胞团,使其在固定液中悬浮均匀。静止固定40 min。离心后弃去上清液。用1: 1甲醇冰醋酸固定液再次固定,20min后弃去上清液,仅留约约1mL的细胞团和上清液,摇匀制成细胞悬液。 5. 滴片和空气干燥 取事先在冰水中预冷的载玻片,滴1?2滴细胞悬液于粘有冰水的载玻片上,立即用吸管轻轻吹 气,使细胞迅速分散。将制片平放或45。斜放,待其自然干燥。 6. 染色 取经过空气干燥的染色体制片插入染色缸中,用Giemsa染液进行染色,将染液用吸管缓缓地加入,不要形成气泡。染色30min后,用蒸馏水冲洗。 7. 观察 ①在低倍镜下观察Giemsa染色之后的中期分裂相的形态。 ②在高倍镜下选择分散适度,不重叠的染色体的分裂相,在油镜下进行观察,获取图像。 ③观察小鼠染色体的端着丝点染色体的特征,识别着丝点、染色单体、染色体。 ④计算2n的染色体数目。寻找两性之间在核型上的差别。 实验步骤

小鼠骨髓微核试验培训资料

小鼠骨髓微核试验

小鼠骨髓细胞微核试验 一、目的与要求 1. 熟悉微核的概念、微核的来源、体内微核试验的实验设计、微核试验检测的遗传学终点。 2. 学习和掌握小鼠骨髓细胞微核试验基本方法步骤,嗜多染红细胞及微核细胞镜下观察。 3. 了解微核试验数据整理、分析方法及结果的评价。 二、实验原理 微核与染色体损伤有关,是染色体或染色单体的无着丝点断片或纺锤丝受损伤而丢失的整个染色体,在细胞分裂后期遗留在细胞质中,末期之后,单独形成一个或几个规则的次核,包含在子细胞的胞质内,因比主核小,故称微核。 无论是断片还是整条染色体,其实质都是遗传物质,一但发生畸变,就有能形成遗传物质方面的问题,造成突变,因此,微核的检测实质上就是遗传物质突变的检测,现已被卫生部定为外来化合物毒理检测的—个必检指标。 微核试验是观察受试物能否产生微核的试验。主要可检出DNA断裂剂和非整倍体诱变剂。 传统的微核试验是体内试验,它观察骨髓嗜多染红细胞(PCE)中的微核。微核可位于多种细胞,但在有核细胞中难与正常核的分叶及核突出物区分,所以只有在无核的红细胞中才易辨认。在骨髓中无核的红细胞有嗜多染红细胞或称晚幼红细胞(呈灰蓝或浅蓝色)和成熟红细胞(呈粉红或桔红色)两种,正常情况下嗜多染红细胞占多数,所以观察骨髓嗜多染红细胞。PCE指在红细胞成熟之前,最后一次分离后数小时将主核排出而微核仍保留在细胞质中的细胞,

但由于嗜多染红细胞的胞质内含有核糖体,因此Giemsa染色呈灰蓝色,成熟红细胞的核糖体已消失,被染成淡橘红色,使嗜多染红细胞在染色上与正常RBC (NCE)有所不同。微核可以由染色体诱裂剂导致的染色体无着丝粒片段所构成,也可以由非整倍体诱发剂所导致的落后染色体形成。 三、实验设计 1. 动物选择:常用小鼠,体重18~20 g,7~12周龄,每组10只,雌雄各半。 2. 染毒途径:原则上与人接触化学毒物相同或相近的途径。 3. 染毒次数及取样时间:一般采用两次染毒或多次染毒。两次染毒:第1次染毒后24小时进行第2次染毒,6小时后取样;多次染毒:每天染毒1次,连续染毒5天,末次染毒后24小时取样。 4. 剂量选择:至少设置3个剂量组。高剂量组应达到不产生动物死亡的最大毒作用剂量。一般取受试样品1/5、1/10、1/20 LD50剂量。当受试样品的LD50大于5 g/kg时,可取5 g/kg为最高剂量,以下设3~5个剂量组。另设溶剂对照组(阴性对照组)和阳性对照组。阳性对照组可用环磷酰胺(50~100 mg/kg)或丝裂霉素C(10 mg/kg)腹腔注射1次。 四、操作步骤 1. 骨髓液的制备及涂片 颈椎脱臼处死小鼠,取胸骨,擦净血污,剔去肌肉,剪去骨骺,将骨髓挤于有一滴小牛血清的清洁载玻片一端,另取一块边缘整齐的载玻片,在血清上轻轻按摩,使骨髓完全混匀,然后以45~50度角快速推片,推片后在空气中晾干。 2. 固定 将推好晾干的骨髓片用甲醇溶液固定15分钟,晾干。

小鼠骨髓微核试验

小鼠骨髓细胞微核试验 一、目的与要求 1. 熟悉微核的概念、微核的来源、体内微核试验的实验设计、微核试验检测的遗传学终点。 2. 学习和掌握小鼠骨髓细胞微核试验基本方法步骤,嗜多染红细胞及微核细胞镜下观察。 3. 了解微核试验数据整理、分析方法及结果的评价。 二、实验原理 微核与染色体损伤有关,是染色体或染色单体的无着丝点断片或纺锤丝受损伤而丢失的整个染色体,在细胞分裂后期遗留在细胞质中,末期之后,单独形成一个或几个规则的次核,包含在子细胞的胞质内,因比主核小,故称微核。 无论是断片还是整条染色体,其实质都是遗传物质,一但发生畸变,就有能形成遗传物质方面的问题,造成突变,因此,微核的检测实质上就是遗传物质突变的检测,现已被卫生部定为外来化合物毒理检测的—个必检指标。 微核试验是观察受试物能否产生微核的试验。主要可检出DNA断裂剂和非整倍体诱变剂。 传统的微核试验是体内试验,它观察骨髓嗜多染红细胞(PCE)中的微核。微核可位于多种细胞,但在有核细胞中难与正常核的分叶及核突出物区分,所以只有在无核的红细胞中才易辨认。在骨髓中无核的红细胞有嗜多染红细胞或称晚幼红细胞(呈灰蓝或浅蓝色)和成熟红细胞(呈粉红或桔红色)两种,正常情况下嗜多染红细胞占多数,所以观察骨髓嗜多染红细胞。PCE指在红细胞成熟之前,最后一次分离后数小时将主核排出而微核仍保留在细胞质中的细胞,但由于嗜多染红细胞的胞质内含有核糖体,因此Giemsa染色呈灰蓝色,成熟红细胞的核糖体已消失,被染成淡橘红色,使嗜多染红细胞在染色上与正常RBC(NCE)有所不同。微核可以由染色体诱裂剂导致的染色体无着丝粒片段所构成,也可以由非整倍体诱发剂所导致的落后染色体形成。 三、实验设计 1. 动物选择:常用小鼠,体重18~20 g,7~12周龄,每组10只,雌雄各半。 2. 染毒途径:原则上与人接触化学毒物相同或相近的途径。

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