饮料中总糖的 测定
饮料中总糖的测定
测定总糖通常以还原糖的测定方法为基础，将食品中的非还原性双糖，经酸水解成还原性单糖，再按还原糖的测定法测定，测出以转化糖的总糖量。
若需要单纯测定食品中的蔗糖量，可分别测定样品水解前的还原糖量及水接后的还原糖量，两者的差再乘以校正系数0.95就是蔗糖量，即1g转化糖量相当于0.95g蔗糖量。
1.原理
样品除去蛋白质后，加入稀盐酸，在加热条件下使蔗糖水解转化为还原糖，再以直接滴定法或高锰酸钾法测定。还原糖测定原理是根据还原糖可以还原碱性酒石酸铜，生成氧化亚铜这一特性来决定的。碱性酒石酸铜溶液时有甲乙液混合而成。试剂甲为硫酸铜溶液，试剂乙为氢氧化钠与酒石酸钾钠的混合液。甲乙两中溶液的混合液与还原糖作用，在加热滴定时产生红色氧化亚铜，滴定终点可以借助次甲基兰做指示剂。次甲基兰在碱性溶液中（加热至沸腾）可被还原成无色。
2.仪器
！）恒温水浴箱
2）其他仪器同还原糖的测定
3试剂
1）6mol/L盐酸溶液
2）甲基红指示剂：称取0.1g甲基红溶于100Ml60%(体积分数)乙醇中。
3）200g/L氢氧化钠溶液
4）水解后的蔗糖标准溶液配制：
(A)称取105度烘干至恒重的纯蔗糖1.0000g，用蒸馏水溶解，转移入500毫升容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。此标准液1毫升相当于纯蔗糖2mg.
（B）吸取蔗糖标准液50毫升置于100毫升容量瓶中，加6mol/L5毫升在68---70度水浴中加热15min,冷去后加2滴甲基红指示剂，用200g/L的氢氧化钠中和至中性，加水至刻度，摇匀，此标准液1毫升相当于蔗糖1mg.
5）碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000毫升
6）碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000毫升，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
7）乙酸锌溶液：称取乙酸锌结晶21.9g，加3毫升冰醋酸，加水溶解至100毫升
8）106g/L亚铁氰化钾溶液
4测定方法
（1）样品处理(对于无蛋白质的饮料此处理步骤可以省略)
吸取果汁饮料样品10毫升于250毫升容量瓶中，加少量水摇匀，摇匀后加入5毫升乙酸锌溶液，混匀后放置2min,再加入5毫升亚铁氰化钾溶液，震摇，加水定容并摇匀后静置30min，用干滤纸过滤，弃
去初滤液，过滤液备用.
（2）标定碱性酒石酸铜溶液：
取经过水解的蔗糖标准液，按直接滴定法标定酒石酸铜溶液，具体步骤如下：
吸取5.00毫升碱性酒石酸铜甲液及5.00毫升碱性酒石酸铜乙液，置于250毫升锥形瓶中。加水10毫升，加入玻璃珠3粒，从滴定管加约9毫升水解后标准溶液，使其在2min中内加热至沸。趁沸以0.5滴/s的速度继续滴加糖液，直至溶液蓝色刚好退去为终点，记录消耗转化糖液的体积。平行操作3次，得出平均消耗转化糖液的体积。
计算每10毫升（甲、乙各5毫升）碱性酒石酸铜溶液相当于转化糖的质量（mg）,即
m2=V*( m1/0.95)
式中m1——1毫升蔗糖标准水解液相当于蔗糖的质量（mg）V——标定时消耗蔗糖标准水解液的体积（mL）
0.95——蔗糖换算为转化糖的系数
m2——10 mL碱性酒石酸铜溶液相当于转化糖的质量（mg）
（3）样品中总糖量的测定
吸取50毫升样品处理液置于100毫升容量瓶中，加6mol/L盐酸5毫升，在68---70度水浴中加热15min,冷却后加2滴甲基红指示剂，用200g/L氢氧化钠中和至中性，加水至刻度，混匀，按还原糖法中直接
滴定法或高锰酸钾法进行测定。
还原糖滴定方法如下
（A）样品溶液的与滴定：吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5毫升，置于150毫升三角瓶中，加水10毫升，玻璃珠2粒，控制在2min
内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样液，
趁沸以0.5滴/s的速度继续滴定至蓝色刚好退去为终点，记录
消耗样液的体积。
（B）样品溶液的滴定：吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5毫升，置于150毫升三角瓶中，加水10毫升，玻璃珠2粒，从滴定管中加
入比喻测定体积少1毫升的样液，使其在2min内加热至沸，趁
沸以0.5滴/s的速度继续滴定至蓝色刚好退去为终点，记录消
耗样液的体积。同法平行操作3次，得出平均消耗样液的体积。
（4）计算结果
样品中总糖（转化糖）的质量分数的计算公式为
w(总糖)= m2/【m*(50/V1)*（V2/100）×1000】*100%
式中w(总糖)——总糖的质量分数
m2——直接滴定法中10毫升碱性酒石酸铜相当于转化糖的质量（mg）
m——样品质量（g）
V1——样品处理液的总体积（mL）
V2——测定总糖量取用水解液的体积（mL）
5.说明
1）乙酸锌及亚铁氰化钾作为蛋白质沉淀剂
2）碱性酒石酸铜甲、乙液应该分别配置，分别贮存，不能事先混合贮存。
样品中转化糖的质量分数不宜过高及过低，需要根据预测加以调节，以0.1%为宜。
3）滴定至终点。指示剂被还原糖还原，蓝色消失，呈淡黄色，稍放置，接触空气中的氧，指示剂被氧化，会重新变成蓝色，此时不应再滴定。
4)在碱性酒石酸铜乙液中加入亚铁氰化钾，是为了使生成的Cu2O红色沉淀与之形成可溶性的无色络合物，使终点便于观察。
5）次甲基蓝是一种氧化剂。但是在测定条件下其氧化能力比Cu2+弱，故还原糖先与Cu2+反应，待Cu2+完全反应后，稍过量的还原糖才会与压甲基蓝发生反应，溶液蓝色消失，知识达到终点。
6）分析结果的准确性及重现性取决于水解的条件，要求样品在水解过程中，只有蔗糖被水解而其他化合物不被水解。
实验八 甘蔗汁中总糖及蔗糖含量的测定
实验八甘蔗汁中总糖及蔗糖含量的测定（费林法） 一、原理 蔗糖的测定常以还原糖的测定为基础，样品经前处理后，加入稀盐酸，在加热条件下使蔗糖水解转化为还原糖，再以斐林试剂法测定试样水解后的总还原糖量（即食品中的总糖）及水解前的还原糖量（食品原有的还原糖），两者之差再乘以校正系数0.95即为蔗糖量。 二、操作步骤： 1、样品处理 准确吸取10.00mL甘蔗汁移入100m L容量瓶中。缓慢加入5mL乙酸锌溶液及5mL10.6%亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，静置后过滤，弃去初滤液，收集滤液，即样品处理液。 2、标定碱性酒石酸铜溶液（费林试剂）： （1）准确吸取5.00mL碱性酒石酸铜甲液及5.00mL乙液，置于150mL锥形瓶中。 （2）加水10mL，加入玻璃珠数粒。 （3）从滴定管滴加约9mL葡萄糖（转化糖）标准溶液，2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去，记录消耗葡萄糖标准溶的总体积。 （4）同时平行操作三份，取其平均值。 3、水解前样品中还原糖含量的测定： 取样品处理液，按还原糖法测定水解前的还原糖含量。（同实验七） 4、样品总糖量的测定： （1）吸取10.00mL样品处理液置于100mL容量瓶中。 （2）加入6mol/L 盐酸5mL，在68～70℃水浴加热15min。 （3）迅速冷却后加2滴指示剂，用20% NaOH中和（甲基红指示剂：溶液颜色由红变黄；酚酞指示剂：由无色变浅粉红色），加水至刻度，混匀，按还原糖法测定水解后的总还原糖含量。（同实验七）
三、实验记录及处理： 碱性酒石酸铜溶液的标定 10ml碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖(转化糖)的质量mg。 葡萄糖标准溶液蔗糖标准溶液（转化糖） 标准溶液浓度 ρ,mg／ml 标定所耗标液的 体积V，ml 1 2 3 平均 1 2 3 平均 10mL碱性酒石酸 铜相当于葡萄糖 （转化糖）的质 量F，mg 公式:F1= ρ1× V1公式:F2 = ρ2× V2/0.95 食品中还原糖含量测定 水解前（试样原有还原糖）水解后(总糖) 试样量，ml 稀释过程 试样定容总体 积V，ml 样液预测总消 耗量V0，ml 样液正式滴定 总消耗量V1 ，ml 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 测得还原糖含 量，% 公式： 样品中还原糖 含量R1，% 总糖含量R2,% （以转化糖计） 蔗糖的含量，% 公式：蔗糖% = (R2-R1)×0.95 100 1000 V V m F % 计） 还原糖（以葡萄糖 1 ? ? ? = 或转化糖
食品中淀粉含量的测定
GB 5009.9-85 食品中淀粉的测定方法 本标准适用于各类食品中淀粉含量的测定。 第一法酶水解法 1 原理 样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖,再用盐酸将双糖 水解成单糖,最后按还原糖测定，并折算成淀粉。 2 试剂 2.1 0.5%淀粉酶溶液: 称取淀粉酶0.5g，加100mL水溶解,加入数滴甲苯或三氯甲烷, 防止长霉，贮于冰箱中。 2.2 碘溶液:称取 3.6g碘化钾溶于20mL水中,加入1.3g碘,溶解后加水稀释至100mL。 2.3 乙醚。 2.4 85%乙醇。 其余试剂同GB 5009.8—85《食品中蔗糖的测定方法》第2章。 3 操作方法 3.1 样品处理 称取2～5g样品,置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用50mL乙醚分5次洗除脂肪，再用 约100mL 85％乙醇洗去可溶性糖类,将残留物移入250mL烧杯内，并用50mL 水洗滤纸及 漏斗,洗液并入烧杯内,将烧杯置沸水浴上加热15min，使淀粉糊化,放冷至60℃以下，加 20mL淀粉酶溶液,在55～60℃保温1h，并时时搅拌。然后取1滴此液加1滴碘溶液,应不显现 蓝色,若显蓝色,再加热糊化并加20mL淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显蓝色为止。 加热至沸,冷后移入250mL容量瓶中，并加水至刻度,混匀,过滤,弃去初滤液。取50mL滤 液,置于250mL锥形瓶中,加5mL6N盐酸,装上回流冷凝器,在沸水浴中回流1h,冷后加2滴甲 基红指示液,用20%氢氧化钠溶液中和至中性,溶液转入100mL容量瓶中,洗涤锥形瓶,洗液 并入100mL容量瓶中,加水至刻度，混匀备用。 3.2 测定 按GB 5009.7-85《食品中还原糖的测定方法》4.2操作。同时量取50mL水及与样品 处理时相同量的淀粉酶溶液，按同一方法做试剂空白试验。 4 计算
总糖含量的测定
实验二总糖含量的测定 一、目的： 1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。 二、原理： 糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮 (C 14H 10 O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸 收，在150 μg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等 2.试剂： (1)葡萄糖标准液：l00 μg/ml (2)浓硫酸 (3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H 2SO 4 中。当日配制使用。 3.材料：淀粉 四、操作步骤 1.葡萄糖标准曲线的制作 取7支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ml）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（μg）0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min 取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管 吸光值。以标准葡萄糖含量（μg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.植物样品中总糖的提取： 精确称取0.5g，置于50 ml三角瓶中，加水15 m1，盐酸10ml，沸水浴20min，定容至100ml，得提取液。取10ml滤液定容至100ml 3.测定 吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空 平均值在标白管以等量蒸馏水取代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A 620 准曲线上查出葡萄糖的含量（μg）。 五、结果处理 C ×V总× D 样品含糖量（%）= ─────────────×100 W ×V测×106 其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（μg）， V总——提取液总体积（ml）， V测——测定时取用体积（ml）， D——稀释倍数， W——样品重量（g）， 106——样品重量单位由g换算成μg的倍数 六、注意事项： 该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。 七、思考题： 1.在从山芋粉中提取总糖时，加入盐酸的目的是什么？ 2.简述蒽酮比色法测定植物组织中总糖含量的原理。
果汁中总糖的测定
吉林化工学院 食品分析实验报告 实验名称果汁中总糖的测定 指导教师陈萍 班级食品0901 学号 09340136 姓名黄锡红 日期 2012.10.17
实验十七果汁中总糖的测定 一、目的与要求： 1、掌握食品中总糖的测定方法． 二、原理： 将一定量的碱性酒石酸甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。在加热条件下，以次钾基蓝作为指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀，待二价铜全部还原后，少过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，即为滴定终点。根据样液消耗量可计算出还原糖含量。 三、试剂 1、碱性酒石酸铜甲液：称取15克硫酸铜(CuSO4.5H20)及0.05克次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000毫升。 2、碱性酒石酸铜乙液：称取50克酒石酸钾钠及75克氢氧化钠，溶于水中，再加入4克亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000毫升，贮于橡胶塞玻璃瓶内。 3、盐酸 4、葡萄糖标准溶液：精密称取1.000克经过98-100℃干燥至恒重的纯葡萄糖，加水溶解后，加5毫升盐酸，并以水稀释至1000毫升，此溶液每毫升相当于lmg 葡萄糖。 5、6N盐酸：量取50毫升盐酗口水稀释至100毫升。 6、甲基红指示液：0.1％乙醇溶液。 7、20％氢氧化钠溶液。 四、操作方法： 1、样品处理：吸取样品10毫升，加水40毫升，在水浴上加热煮沸10分钟后，移入100毫升容量瓶中加水至刻度，混匀后备用。
取以上样液20毫升和30水毫升于l00毫升容量瓶中，加人5毫升6N盐酸，在68-70℃水浴中加热15分钟，冷却后，加2滴甲基红指示液，用20％氢氧化钠溶液中和至红色褪去，加水至刻度混匀。 2、标定碱性酒石酸铜溶液；吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5.0毫升，置于150毫升锥形瓶中，加水20毫升，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9毫升葡萄糖标准溶液，控制在2分钟内加热至沸,趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液兰色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同时平行操作三份，取其平均值，计算每：9毫升(甲乙液各5毫升)碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量(mg)． 3、样品溶液预测：吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5.0毫升，置于160毫升锥形瓶中，加水20毫升，玻璃珠两粒，控制在2分钟内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，等溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液兰色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积。 4、样品溶液测定：吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5.0毫升于150毫升锥形瓶中，加水20毫升，玻璃珠两粒，从滴定管滴加比预测体积少1毫升的样品溶液，使在2分钟内加热至沸，趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定直至溶液兰色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行测定三份，得出平均值消耗体积。 五、实验数据处理 1.原始数据如下表所示： 2. 消耗葡萄糖标准溶液的平均体积为 V=(12.32+11.91+11.90)÷3=12.04 mL，即相当于m=12.04mg， 又测定待测样品溶液的平均体积为V2=（4.93+5.21）÷2=5.07mL， 因为样品总量为100毫升，所以以100代替原公式的250，经推导m值不变，代入公式得：
食品总糖的测定
总糖的测定 试剂的配制 1、0.3g/ml氢氧化钠溶液：称取30.0g氢氧化钠溶解后定容100ml。 2、0.01g/ml 甲基红指示剂：称取1.0g甲基红溶解后定容100ml. 3、葡糖糖标准滴定液：称取0.2000g葡萄糖（经100°C干燥至恒重），加蒸馏水溶解后，加入5.0ml盐酸后定容250ml。 4、斐林氏试剂 （1）甲液：称取7.5g硫酸铜及0.025g次甲基蓝于烧杯中用蒸馏水溶解后，移入容量瓶中，定容500ml。 （2）乙液：称取25.0g酒石酸钾，37.5 g氢氧化钠及2.0g亚铁氰化钾后于烧杯中用蒸馏水溶解后，移入容量瓶，定容500ml。斐林氏溶液的标定：分别吸取斐林氏甲液和乙液各5.00ml于三角瓶中，加入蒸馏水10ml，玻璃珠数粒。从滴定管滴加约10ml 葡萄糖标准溶液后2分钟内加热至沸，趁沸以每2秒每滴的速度滴加葡萄糖标准溶液。滴定至蓝色退尽为终点。平衡测定3份。计算每10ml斐林氏试剂混合液相当于葡萄糖的质量(A)。 计算：葡糖糖的重量g*滴定数(ml) A(g)== —————————————— 250 化验操作： （1）称取10.000 g样品，加入约100ml蒸馏水浸泡1---2小时后捣碎后定容250ml。过滤备用。 （2）吸取10.00ml滤液于三角瓶中，加入30ml蒸馏水及浓盐酸5.0ml，置于68—70°C水浴上10分钟，后取出冷却 至室温后加入甲基红指示剂两滴，再用0.3g/ml氢氧化钠 溶液调至中性，后用蒸馏水定容250ml，注入滴管中备 用。 （3）预备试验：吸取甲乙液各5.00ml于三角瓶中，在电炉上加热至沸，从滴管中滴入转化液至蓝色变为浅黄色为终 点。 正式试验：吸取甲乙液各5.00ml于三角瓶中，从滴管中 滴入转化液（较预备试验少1ml）后在电炉上加热沸腾1 分钟，再以30滴/分钟的速度滴定至浅黄色为终点。同 时平衡操作2份。计算结果： A*6250 试样中总糖含量%==——————————————*100 试样的重量g*滴定数（ml）
饮料中总糖的测定
饮料中总糖的测定 测定总糖通常以还原糖的测定方法为基础，将食品中的非还原性双糖，经酸水解成还原性单糖，再按还原糖的测定法测定，测出以转化糖的总糖量。 若需要单纯测定食品中的蔗糖量，可分别测定样品水解前的还原糖量及水接后的还原糖量，两者的差再乘以校正系数0.95就是蔗糖量，即1g转化糖量相当于0.95g蔗糖量。 1原理 样品除去蛋白质后，加入稀盐酸，在加热条件下使蔗糖水解转化为还原糖，再以直接滴定法或高锰酸钾法测定。还原糖测定原理是根据还原糖可以还原碱性酒石酸铜，生成氧化亚铜这一特性来决定的。碱性酒石酸铜溶液时有甲乙液混合而成。试剂甲为硫酸铜溶液，试剂乙为氢氧化钠与酒石酸钾钠的混合液。甲乙两中溶液的混合液与还原糖作用，在加热滴定时产生红色氧化亚铜，滴定终点可以借助次甲基兰做指示剂。次甲基兰在碱性溶液中（加热至沸腾）可被还原成无色。 2?仪器 !）恒温水浴箱 2）其他仪器同还原糖的测定 3试剂 1）6mol/L盐酸溶液
2）甲基红指示剂：称取0.1g甲基红溶于100MI60%（体积分数）乙醇中。 3）200g/L氢氧化钠溶液 4）水解后的蔗糖标准溶液配制： （A）称取105度烘干至恒重的纯蔗糖I.OOOOg,用蒸馏水溶解，转移入500毫升容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。此标准液1毫升相当于纯蔗糖 2mg. （B ）吸取蔗糖标准液50毫升置于100毫升容量瓶中，加6mol/L5 毫升在68---70度水浴中加热15min,冷去后加2滴甲基红指示剂，用200g/L的氢氧化钠中和至中性，加水至刻度，摇匀，此标准液1毫升相当于蔗糖 1mg. 5）碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000毫升 6）碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000毫升，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。 7）乙酸锌溶液：称取乙酸锌结晶21.9g,加3毫升冰醋酸，加水溶解 至100毫升 8）106g/L亚铁氰化钾溶液 4测定方法 （1）样品处理（对于无蛋白质的饮料此处理步骤可以省略） 吸取果汁饮料样品10毫升于250毫升容量瓶中，加少量水摇匀，摇匀后加
总糖的测定-蒽酮比色法教学提纲
总糖的测定-蒽酮比色 法
植物组织中总糖和还原糖含量的测定（蒽酮比色法）2010-5-24 一、实验目的 掌握蒽酮比色法测定总糖和还原糖含量的原理和方法，学会正确使用分光光度计。 二、实验原理 游离的己糖或多糖中的己糖基、戊糠醛及己糖醛酸在浓硫酸的作用下脱水生成糠醛衍生物，糠醛衍生物与蒽酮缩合成蓝色的化合物，在620nm处有最大吸收，在一定糖浓度范围内（200ug/ml），溶液吸光度值与糖溶液的浓度成线性关系。用酸将植物组织中没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，或直接提取植物组织中的还原糖，即可对植物组织中的总糖和还原糖进行定量测定。 三、实验材料 1．可见分光光度计、电子天平(1/100)、粉碎机、水浴锅、电炉。 2．研钵、量筒、三角烧瓶、烧杯、容量瓶、玻璃漏斗、试管1.5cm×15cm、刻度吸管、胶头滴管、pH试纸、坐标纸。 3．植物原料，如银耳、木耳、菜叶等。 四、实验试剂 1．蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于l000ml体积分数为80％的硫酸中，当日配制使用。 2．标准葡萄糖溶液(0.1mg／m1)：称取100mg葡萄糖，溶于蒸馏水并稀释至1 000ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。 3．6mol／L HCl溶液：50ml盐酸，加水至100ml。 4．10％NaOH溶液：称取10g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100ml。 五、操作步骤 1．葡萄糖标准曲线的绘制 取干净试管6支，按下表进行操作。以吸光度为纵坐标，各标准液浓度(mg／m1)为横坐标做图。 2．样品中还原糖的提取和测定 称取植物原料干粉0.1～0.5g，加水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约30ml的蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。于50℃水浴中保温半小时（使还原糖浸出），取出，冷却后定容至100ml。过滤，取lml滤液进行还原糖的测定：吸取lml总糖类溶液置试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4ml蒽酮试剂，沸水浴中准确加热10min，取出用自来水冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。（样品液显色后若颜色很深，其吸光度超过标准曲线浓度范围，则应将样品提取液适当稀释后再加蒽酮显色测定）。
总糖的测定
一. 总糖的测定 食品中的总糖主要指具有还原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在测定条件下能水解为 还原性的单糖的蔗糖（水解后为1分子葡萄糖和1分子果糖），麦芽糖（水解后为2分子葡萄糖）以及可能部分水解的淀粉（水解后为2分子葡萄糖）。还原糖类之所以具有还原性是由于分子中含有游离的醛基（-CHO）或酮基(=C=O)。 测定总糖的经典化学方法都是以其能被各种试剂氧化为基础的。这些方法中，以各种根据斐林氏溶液的氧化作用的改进法的应用范围最广。在这里我们主要给大家介绍铁氰化钾法，蒽铜比色法，斐林氏容量法。斐林氏容量法由于反应复杂，影响因素较多，所以不如铁氰化钾法准确，但其操作简单迅速，试剂稳定，故被广泛采用。蒽铜比色法要求比色时糖液浓度在一定范围内，但要求检测液澄清，此外，在大多数情况下，测定要求不包括淀粉和糊精，这就要在测定前将淀粉，糊精去掉，这样就使操作复杂化，限制了其广泛应用。 （一）铁氰化钾法 1.原理 样品中原有的和水解后产生的转化糖都具有还原性质，在碱性溶液中能将铁氰化钾还原，根据铁氰化钾的浓度和检验滴定量可计算出含糖量。其反应为下： C6H12O6+6K3[Fe(CN)6] + 6KOH →(CHOH)4·(COOH)2 + 6K4［Fe(CN)6］+ 4H2O 滴定终了时，稍过量的转化糖即将指示剂次甲基兰还原为无色的隐色体。 2．试剂 1）1％的次甲基兰指示剂2)盐酸（水解作用）3）10％和30％的NaOH溶液4）1％铁氰化钾（贮存特色瓶，临用前标定） 3．标定步骤 称蔗糖1.0000g→定容500ml→取此液50ml→于100ml容量瓶→加hcl5ml→摇匀→65-70℃水裕15分钟→取出冷却→用30％NaOH中和→加水于刻度→倒入滴定管中→取10ml1％铁氰化钾于锥形瓶中→加10％NaOH2.5ml加12.5ml的水加玻璃珠颗粒→加热至沸→保持一分钟→加次甲基兰1滴→立即以糖液滴足至蓝色退去为止，记录用量。 正式滴定比较滴定时少0.5ml糖液，煮沸1分钟，加指示剂一滴，再用糖液滴定至兰色褪去，计算铁氰化钾溶液的浓度。 A=(W·V)/(1000×0.95) A：相当于10ml铁氰化钾溶液的转化糖的量（克） V：滴定时消耗的糖液的体积
【精品】食用菌总糖含量测定方法
【关键字】精品 食用菌总糖含量测定方法 1 主题内容与适用范围 本标准规定了食用菌产品中总糖含量的测定方法。 本标准适用于黑木耳、银耳和茯苓三类食用菌中总糖的测定。本标准不适用于蛋白质含量高的其他菇类（蘑菇、香菇、平菇等）中总糖含量的测定。 2 引用标准 GB 12530 食用菌取样方法 GB 12531 食用菌含水量测定 3 方法提要或原理 黑木耳、银耳和茯苓中水溶性糖和水不溶性多糖经热稀盐酸彻底水解后转化成还原糖，还原糖可用费林氏容量法定量，以此计算出样品中总糖含量。 4 试剂 分析中，除另有说明，均限用分析纯试剂、蒸馏水或相当纯度的水。 4.1 氢氧化钠（GB 629）。 4.2 浓盐酸（GB 622）：密度1.18g/mL。 4.3 氢氧化钠（GB 629）溶液：6mol/L。 4.4 费林氏试剂
4.4.1 A液：溶解69.28g五水合硫酸铜（GB 665，CuSO4·5H2O）于水中，定容至1000mL，过滤后备用。 4.4.2 B液：溶解346g酒石酸钾钠（GB 1288，NaKC4H4O6·4H2O）和100g氢氧化钠（4.1）于水中，定容至1000mL，过滤后备用。 4.5 葡萄糖标准溶液：精确称取烘干的葡萄糖1.0000g，精确到0.0001g，用水溶解，加入5mL 浓盐酸（4.2），再以水配制成10g/L浓度溶液定容至1000mL，成为1g/L浓度溶液。 4.6 次甲基蓝（HG B33 94）指示液：10g/L。 5 仪器、设备 5.1 电热鼓风干燥箱。 5.2 小型植物粉碎机：备有1mm孔径的金属筛网。 5.3 玻璃研钵：备有研杵。 5.4 分样筛：备有孔径0.84mm（20目）筛子。 5.5 分析天平：感量0.0001g。 5.6 电热水浴锅。 5.7 广口瓶：带磨口。 5.8 滤纸：直径15cm。 5.9 玻璃三角漏斗：直径75mm。 5.10 圆底烧瓶：250mL，上部插有作回流用的30cm长玻璃管。 5.11 容量瓶：250、1000mL。 5.12 量筒：100mL。
食品中糖的测定
食品中糖的测定方法 对于糖的测定方法有很多，大致可分为三类 1.物理法，（1.旋光法,??2 .折光法,??3.比重法,） 2.物理化学法,(1.点位法, 2极普法, 3.光度法, 4.色谱法) 3.化学方法,(1.斐林氏法. 2.高锰酸钾法. 3.碘量法. 4.铁氰化钾法. 5.蒽铜比色法. 6.咔唑比色法) 共计三大种，在测定其他碳水化合物时，往往是使其水解为糖再进行测定。 一.??总糖的测定 食品中的总糖主要指具有还原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在测定条件下能水解为 还原性的单糖的蔗糖（水解后为1分子葡萄糖和1分子果糖），麦芽糖（水解后为2分子葡萄糖）以及可能部分水解的淀粉（水解后为2分子葡萄糖）。还原糖类之所以具有还原性是由于分子中含有游离的醛基（-CHO）或酮基(=C=O)。 测定总糖的经典化学方法都是以其能被各种试剂氧化为基础的。这些方法中，以各种根据斐林氏溶液的氧化作用的改进法的应用范围最广。在这里我们主要给大家介绍铁氰化钾法，蒽铜比色法，斐林氏容量法。斐林氏容量法由于反应复杂，影响因素较多，所以不如铁氰化钾法准确，但其操作简单迅速，试剂稳定，故被广泛采用。蒽铜比色法要求比色时糖液浓度在一定范围内，但要求检测液澄清，此外，在大多数情况下，测定要求不包括淀粉和糊精，这就要在测定前将淀粉，糊精去掉，这样就使操作复杂化，限制了其广泛应用。 （一）? ? 铁氰化钾法 1.原理：样品中原有的和水解后产生的转化糖都具有还原性质，在碱性溶液中能将铁氰化钾还原，根据铁氰化钾的 浓度和检验滴定量可计算出含糖量。其反应为下： C6H12O6+6K3[Fe(CN)6] + 6KOH →(CHOH)4?(COOH)2 + 6K4［Fe(CN)6］+ 4H2O 滴定终了时，稍过量的转化糖即将指示剂次甲基兰还原为无色的隐色体。 2，试剂 1）1％的次甲基兰指示剂 2)盐酸（水解作用） 3）10％和30％的NaOH溶液 4）1％铁氰化钾（贮存特色瓶，临用前标定） 标定步骤 称蔗糖1.0000g→定容500ml→取此液50ml→于100ml容量瓶→加hcl5ml→摇匀→65-70℃水裕15分钟→取出冷却→用30％NaOH中和→加水于刻度→倒入滴定管中→取10ml1％铁氰化钾于锥形瓶中→加10％NaOH2.5ml加12.5ml的水加玻璃珠颗粒→加热至沸→保持一分钟→加次甲基兰1滴→立即以糖液滴足至蓝色退去为止，记录用量。 正式滴定比较滴定时少0.5ml糖液，煮沸1分钟，加指示剂一滴，再用糖液滴定至兰色褪去，计算铁氰化钾溶液的浓度。 A=(W?V)/(1000×0.95) A：相当于10ml铁氰化钾溶液的转化糖的量（克） V：滴定时消耗的糖液的体积 W：称取纯蔗糖的量 1000：稀释比 0.95：换算等数 3．操作方法 稀释10g→用100ml水作溶液→于250ml容量瓶→加20％醋酸铅10ml→至沉淀完为止→加
总糖的测定方法
总糖的测定方法（斐林氏溶液快速测定法） 一、原理：酶制剂生产中需要测定发酵液中糖质原料的消耗情况，以便掌握发酵过程。葡糖糖、果糖、麦芽糖等为醛基、酮基或半缩醛基的糖都具有还原性，能使二价铜还原为一价铜，发酵液中的糊精、淀粉经过酸水解也能成为还原糖。可根据其还原性，用一定量的斐林氏溶液将葡萄糖完全氧化，过量的斐林氏溶液与碘化钾作用而析出碘，然后用硫代硫酸钠来滴定，查表求的发酵液中的糖含量。 二、试剂： 1、3N的盐酸溶液：浓硫酸一份加蒸馏水3份。 2、6N的氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠240.06克，溶解定容至1000毫升。 3、斐林氏溶液： A液：硫酸铜（五水硫酸铜）24克定容400毫升。 B液：酒石酸钾钠75克、氢氧化钠50克定容400毫升。 C液：碘化钾60克，定容200毫升。 A液、B液、C液混合为1000毫升溶液。 注意：配制时应按顺序配制，分别充分溶解，然后混合（A+B+C)摇匀备用。 4、4N的硫酸溶液：准确吸取化学纯浓硫酸111毫升于1000毫升的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。 5、0.05N的硫代硫酸钠溶液：精确称取化学纯的硫代硫酸钠12.41克与碳酸钠0.1克，用新沸初冷蒸馏水溶解定容1000毫升。（此溶液配置好后需隔一周才能使用，每月需标定一次）。 6、1%的酚酞指示剂：称取酚酞1克，溶于95%的乙醇中，定容至100毫升。 三、操作方法： 样品：吸取0.5毫升样品（发酵滤液），放入100毫升的三角瓶中（做两只可对照），加入3N的盐酸10毫升加热3分钟，冷却后滴入酚酞指示剂2滴，用6N的氢氧化钠溶液调至红色，再加入斐林氏溶液10毫升，煮沸3分钟，冷却后加入4N的硫酸10毫升，用0.05N的硫代硫酸钠滴定至奶油色为终点（在接近终点时加1%的指示剂，使之呈紫色）。 空白：在100毫升的三角瓶中加蒸馏水10毫升，然后加入斐林氏溶液10毫升煮沸3分钟，冷却后加入4N的硫酸10毫升，用0.05N的硫代硫酸钠滴定至奶白色。 四、计算：空白消耗0.05N的硫代硫酸钠的毫升数减样品消耗的0.05N的硫代硫酸钠的毫升数，然后查表。 表：
总糖的测定
FSPJLHJ001 黄酒总糖的测定廉-爱农滴定法 F_SP_JL_HJ_001 黄酒—总糖量的测定—廉-爱农滴定法 1 范围 本方法采用廉-爱农滴定法测定黄酒中总糖的含量。 本方法适用于黄酒中甜酒和半甜酒总糖量的测定。以g/L报告其结果，测定值保留三位有效数字。 2 原理 费林溶液与还原糖共沸，生成氧化亚铜沉淀。以次甲基蓝为指示液，用试样水解液滴定沸腾状态的费林溶液。达到终点时，稍微过量的还原糖将次甲基蓝还原成无色为终点，依据试样水解液的消耗体积，计算总糖含量。 3 试剂 3.1盐酸，ρ约1.14 g/mL 3.2盐酸溶液，6mol/L 量取50 mL盐酸，加水稀释至100 mL。 3.3 氢氧化钠溶液，200g/L 3.4 费林甲液：称取69.3g硫酸铜(CuSO4?5H2O)，加水溶解并定容至l000mL。 3.5 费林乙液：称取346g酒石酸钾钠及100g氢氧化钠加水溶解并定容至l000mL，混匀，过滤使用。 3.6葡葡糖标准溶液，2.5g/L 称取2.5000g经103℃～105℃烘干至恒重的无水葡葡糖（精确至0.1mg），加水溶解，并加5ml盐酸，再用水定容至1000mL。 3.7次甲基蓝指示液，10g/L 称取1.0g次甲基蓝，加水溶解并定容至100 mL。 3.8甲基红指示液，1g/L 称取0.10g甲基红，溶于乙醇并稀释至100 mL 。 4 仪器 4.1 感量为0.1mg的分析天平 4.2 感量为0.01g的分析天平 4.3 电热干燥箱 4.4 电炉：300W～500W 5 操作步骤 5.1标定费林溶液的预滴定 准确吸取费林甲、乙液各5.00mL于250mL锥形瓶中，加水30mL，混合后于电炉上加热至沸腾。滴入葡萄糖标准溶液（2.5g/L），待试液蓝色即将消失时，加入2滴次甲基蓝指示液（10g/L），继续用葡萄糖标准溶液滴定至蓝色消失为终点。记录消耗葡萄糖标准溶液的体积。 5.2费林溶液的标定 准确吸取费林甲、乙液各5.00mL于250mL锥形瓶中，加水30mL，混匀后，加入比预滴定体积少1mL的葡萄糖标准溶液，置于电炉上加热至沸腾，并保持沸腾2min，加入2滴次甲基蓝指示液，在沸腾状态下于1min内用葡萄糖标准溶液滴定至终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的体积。 费林溶液的浓度按下试计算：
实验五.总糖的测定doc
实验五?总糖的测定doc
实验五、总糖和还原糖的测定费林试剂比色法 、实验意义 掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。 二、实验原理 将一定量的碱性酒石酸铜甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应, 生成氢氧化铜沉淀： 2NaOH + CuSO 4 = Cu(OH) 2 > Na 2SO 4 所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的酒石酸钾钠铜： COOK COOK H —C-OH H-C —0 Cu(OHk4 1 '■ H-p-OH = 1 4厂0 x +2 H z 0 COO Na COOMa 在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾 钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解，其反应 如下： COOK 反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾(黄血盐)反应生成可溶 性复盐，便于观察滴定终点。 CU 2O + K 4Fe(CN)6 + H 20 — K 2Cu 2Fe(CN)6 + 2KOH (氧化亚铜) (淡黄色) 滴定时以亚甲基蓝为氧化一还原指示剂。因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱, 为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。根据样液量可计算出还原糖含量 、试剂和器材 1、试剂 ① 碱性酒石酸铜甲液：称取 15g 硫酸铜(CuSO 4 5H 2O )及0.05g 亚甲基 蓝，溶于 COOK H-C —OH 、 6 I ^CU H-C —OH / I C00PJ3 OHO H —C —OH I H-C-OH I CO OH 4(CHQH)/CU ：Q 胖 H 2CO 3 COOH
实验七 食品中总糖含量的测定
实验七食品中总糖含量的测定 1.实验目的 掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法。 2.实验原理 糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而 脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮 (C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈 蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸收， 在150 μg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶 性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在 30 μg左右就能进行测定，所以可做为微量 测糖之用。一般样品少的情况下，采用这 一方法比较合适。 3.仪器及材料 3.1仪器 可见分光光度计（752型）、可调试移 液器或移液管、电子分析天平、水浴锅、 电炉子、25mL具塞比色管 3.2试剂 标准葡萄糖储备液（1.0mg/ml）：称取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖1.0000g，配制成1000ml溶液，即得每ml含糖为1000μg的标准溶液。 标准葡萄糖工作液(0.1mg/ml):100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml备用。 72%硫酸: 72mL 98% H2SO4加到28mL纯净水中，并不断搅拌。 0.1%蒽酮显色液: 0.1g蒽酮和1.0g硫脲，置于烧杯中，在搅拌状态下，缓慢加入100 ml 72%H2SO4 ，棕色瓶中低温存放两天，最好现配现用。 3.3材料 市售玉米粉 4.实验步骤 4.1样品处理 精确称取玉米粉0.200g置于锥形瓶中，加入少量温水充分溶解并定容至1000毫升，摇匀过滤备用。 4.2葡萄糖标准曲线的制作 取7支干燥洁净的试管，按表1顺序加入试剂，进行测定。以吸光度值为纵坐标，各标准溶液浓度(mg/ml )为横坐标作图得标准曲线。 表1 蒽酮比色法定糖--标准曲线的制作及样品检测 0 1 2 3 4 5 6 待测葡萄糖溶液标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 样品滤液1.0 蒸馏水/mL 补满定容2mL 蒽酮试剂10 10 10 10 10 10 10 10 迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。
总糖和还原糖的测定──费林试剂比色法
实验一 总糖和还原糖的测定（一）──费林试剂比色法 目的要求 掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。 实验原理 将一定量的碱性酒石酸铜甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀： 2NaOH + CuSO 4 = Cu(OH) 2 + Na 2SO 4 所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的酒石酸钾钠铜： 在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解，其反应如下： 反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。 Cu 2O + K 4Fe(CN)6 + H 2O K 2Cu 2Fe(CN)6 + 2KOH （氧化亚铜） （淡黄色） 滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。根据样液量可计算出还原糖含量。 2 O
试剂和器材 一、试剂 碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000ml。 碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g NaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000ml，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。 0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入1000ml容量瓶中，加入5ml浓HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000ml。 6mol/LHCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。 碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 6N NaOH：称取120gNaOH溶于500ml蒸馏水中。 0.1%酚酞指示剂。 二、材料 山芋粉 三、器材 电热恒温水浴锅，调温电炉，250ml锥形瓶，滴定管。 操作方法 一、样品中还原糖的提取 准确称取2g山芋粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加入50ml 蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。过滤，将滤液全部收集在100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。 二、样品中总糖的水解及提取 准确称取1g山芋粉，放在锥形瓶中，加入6mol/L HCl 10ml，蒸馏水15ml，在沸水浴中加热0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕。冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100ml，过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。 三、碱性酒石酸铜溶液的标定 准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5.00ml，置于250ml锥形瓶中，加蒸馏水10ml，加玻璃珠3粒。从滴定管滴加约9ml葡萄糖标准溶液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以每2s 1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。平行操作3次，取其平均值，按下式计算： =? F C V 式中：F──10ml碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的量，mg； C──葡萄糖标准溶液的浓度，mg/ml； V──标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积，ml。 四、样品糖的定量测定 (1) 样品溶液预测定：吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各5.00ml，置于250ml锥形瓶中，
总糖的测定蒽酮比色方法
总糖测定——蒽酮比色法 一、原理： 单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。 二、试剂： 1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、 2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。 2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。 3、72%硫酸溶液。 三、测定方法： （一）样品处理： 称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。 （二）测定 吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。 四、结果计算： 总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4 式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）； 10-4：将ppm换算为%的系数 五、说明与讨论
1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。 2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。 3、反应液中硫酸的浓度高达60%以上，在此高酸度条件下，在沸水浴中加热，可使双糖、淀粉等发生水解，再与蒽酮发生显色反应。因此测定结果是样液中单糖、双糖和淀粉的总量。如要求测定结果不包括淀粉，应该用80%乙醇作提取剂，以避免淀粉和糊精溶出。此外，在测定条件下，纤维素也会与蒽酮试剂发生一定程度的反应，因此应避免样液中含有纤维素。 4、蒽酮试剂不稳定,易被氧化变为褐色，一般应当天配制，添加稳定剂硫脲后，在冷暗处可保存48小时。 5、此法要求样液必须清澈透明，加热后不应有蛋白质沉淀，如样液色泽较深，可用活性炭脱色。
实验一还原糖和总糖的测定——3,5二硝基水杨酸比色法
《生物化学》实验指导书 适用专业：生物科学、食品科学、生物工程、农学、园艺、环境科学
孝感学院生命科学与技术学院 生物化学实验细则 为了保证生物化学实验的顺利进行，培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能, 特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。 1. 实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。 2. 严格按照生物化学实验分组，分批进入实验室，不得迟到。非本实验组的同学不准进入实验室。 3. 进入实验室必须穿实验服。各位同学进入各自实验小组实验台后，保持安静，不得大声喧哗和嬉戏，不得无故离开本实验台随便走动。绝对禁止用实验仪器或药物嬉耍。 4. 实验中应保持实验台的整洁，废液倒入废液桶中，用过的滤纸放入垃圾桶中，禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。 5. 实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使用前应了解使用方法，使用时要严格遵守操作规程，不得擅自移动实验仪器。否则，因非实验性损坏，由损坏者赔还。 6. 使用水、火、电时，要做到人在使用，人走关水、断电、熄火。 7. 做完实验要清洗仪器、器皿，并放回原位，擦净桌面。 8. 实验后，要及时完成实验报告。
实验一还原糖和总糖的测定一一3,5-二硝基水杨酸比色法. (1) 实验二油脂酸价的测定 (5) 实验三蛋白质的提取及浓度测定？（紫外吸收法） (7) 实验四淀粉酶活力的测定 (9) 实验五酶的激活和抑制作用 (13) 实验六氨基酸的分离鉴定一一纸层析法 (14) 实验七基因组DNA的快速提取---碘化钾法 (16) 实验八琼脂糖凝胶电泳技术一一DNA样品检测 (18)
实验一 还原糖和总糖的测定一一 3,5-二硝基水杨酸比色法 、目的与要求 掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。 二、实验原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是 还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利 用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和 多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含 量(还原糖以葡萄糖含量计)。 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物， 3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的 3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分 光光度计，在540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖 的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应 乘以0.9。 小麦面粉(1000 g) 2?主要仪器 3. 试剂 (1) 1mg/mL 葡萄糖标准液 100 mg ,置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转 移到100 mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至 100 mL ,混匀，4C 冰箱中保存备用。 (2) 3,5-二硝基水杨酸(DNS )试剂 3,5-二硝基水杨酸(DNS )试剂：称取6.5 g DNS 溶于少量热蒸馏水中， 溶解后移入1000 mL 容量瓶中，加入2 mol/L 氢氧化钠溶液325 mL ,再加入45 g 丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000 mL 三、实验材料、主要仪器和试剂 1.实验材料 (1)具塞玻璃刻度试管: 20 mL X 11 (2)滤纸 (3)烧杯：100 mL X 2 (4)三角瓶：100 mL X 1 (5 )容量瓶: 100 mL X 3 (6)刻度吸管：1mL X 1 ； 2 mL X 2; 10 mL X 1 (7)恒温水浴锅 (8)煤气炉 (9)漏斗 (10)天平 (11)分光光度计 准确称取80 C 烘至恒重的分析纯葡萄糖