A RING finger E3 ligase gene, Oryza sativa Delayed Seedpdf
A RING ?nger E3ligase gene,Oryza sativa Delayed Seed
Germination 1(OsDSG1),controls seed germination and stress responses in rice
Gi-Gyeong Park ?Jong-Jin Park ?Jinmi Yoon ?
Sun-Nam Yu ?Gynheung An
Received:15December 2009/Accepted:3September 2010/Published online:28September 2010óSpringer Science+Business Media B.V.2010
Abstract Seed germination is an important character for plant growth and seed quality.We identi?ed a rice mutant that was delayed in its germination.There,T-DNA was inserted into Oryza sativa Delayed Seed Germination 1(OsDSG1),causing a recessive null mutation.Overexpression of the gene enhanced seed germination.OsDSG1is most similar to Ara-bidopsis AIP2,an E3ligase targeting ABI3.Yeast two-hybrid experiments showed that our OsDSG1binds to OsABI3,indicating that OsDSG1is a rice ortholog of AIP2.Self-ubiquitination assay indicated that bacterially expressed OsDSG1protein has E3ubiquitin ligase activity.Real-time PCR analysis revealed that OsDSG1was expressed in leaves and roots,and strongly in developing seeds.In addition to the delayed-germination phenotype,mutant plants were shorter and had greater tolerance to high-salt and drought stresses.In the osdsg1mutant,transcript levels of ABA signaling genes and ABA responsive genes were signi?cantly increased.By contrast,expressions of OsGAMYB and its downstream genes that encode hydrolytic enzymes were markedly reduced.These observations support that OsDSG1is a major regulator
of ABA signaling in germinating seeds.Finally,we observed that the germination rates of various rice cultivars depended upon the transcript levels of OsDSG1and other ABA-sig-naling genes.
Keywords ABA signaling áAbiotic stresses áE3ligase áRice áSeed germination
Introduction
Most seeds go through a period of dormancy.Under favor-able conditions,hydrolytic enzymes become activated and convert stored food resources into metabolically useful chemicals,allowing the embryo to develop.ABA and GA play important roles in this dormancy and germination (Leubner-Metzger 2003).Both hormones affect germination by modulating their related functional proteins.In rice,GA stimulates expression of several genes encoding hydrolytic a -amylase,which breaks down carbohydrate reserves and,thus,mobilizes nutrients that nourish the young seedling (Vieira et al.2002).Others genes induced by GA in germi-nating rice seeds include b -Amylase and a -Glucosidase (Sun and Gubler 2004;Asatsuma et al.2005).ABA functions antagonistically by suppressing this GA-inducible expres-sion (Oh et al.2009).
Several components regulating ABA signaling in seeds have been identi?ed in Arabidopsis (Finkelstein et al.2002;Assmann 2005Hegedus et al.2003;Nambara and Marion-Poll 2003).ABI1and ABI2are protein phosphatases that negatively control ABI3(Leung et al.1994;Rodriguez et al.1998).ABI3is a transcription factor that positively modulates another transcription factor,ABI5,which is a negative regulator of GAMYB (Lopez-Molina et al.2002).ABI4independently controls downstream genes,including
Electronic supplementary material The online version of this article (doi:10.1007/s11103-010-9687-3)contains supplementary material,which is available to authorized users.G.-G.Park áG.An (&)
Crop Biotech Institute &Department of Plant Molecular Systems Biotechnology,Kyung Hee University,Yongin 446-701,Republic of Korea e-mail:genean@khu.ac.kr
G.-G.Park áS.-N.Yu
Department of Plant Genetic Engineering,Catholic University of Daegu,Gyeongsan 712-702,Republic of Korea
J.-J.Park áJ.Yoon
Department of Life Science,Pohang University of Science and Technology (POSTECH),Pohang 790-784,Republic of Korea
Plant Mol Biol (2010)74:467–478DOI 10.1007/s11103-010-9687-3
GAMYB,that are involved in germination(Finkelstein et al.1998).AIP2encodes a RING?nger E3ligase that negatively regulates ABI3(Zhang et al.2005).
Ubiquitination system appears to be present in all eukaryotic cells and is implicated in many cellular processes, including differentiation,cell division,hormonal responses, and biotic and abiotic stress responses(Amador et al.2001; Gonzalez-Lamothe et al.2006;Luo et al.2006).One class of the ubiquitination enzymes,RING proteins are characterized by a zinc-binding motif(Seol et al.1999;Freemont2000). The RING domain is necessary for E3ligase activity in protein ubiquitination(Lorick et al.1999;Hatakeyama et al. 2001).Those ligases can be subdivided into single-and multi-subunit RING E3s(Peters1998;Callis and Vierstra 2000;Teng and Tang2005;Thomann et al.2005).
More than387members of RING?nger genes occur in Arabidopsis,and300in rice,although it is not clear if all of those genes encode E3ubiquitin ligases(Vierstra2003; Moon et al.2004).COP1was the?rst RING?nger gene identi?ed from Arabidopsis(Deng et al.1991).Dark-grown cop1mutant seedlings display characteristics of light-grown seedlings,including short hypocotyls,leaf development,and photosynthetic activity.Seeds of mutants defective in SOMNUS,which encodes a nucleus-localized CCCH-type zinc?nger protein,germinate in darkness,independent of various light regimens(Kim et al.2008).The somnus mutant has less ABA and more GA due to expressional changes in their metabolic genes.Arabidopsis RING?nger E3ligase RHA2a is a novel,positive regulator of ABA signaling during germination and early seedling development(bu et al.2009).The rha2a mutant is less sensitive to ABA than is the wild type during both stages,whereas transgenic plants over-expressing RHA2a are hypersensitive.This indicates that RHA2a positively regulates ABA-mediated control of germination and the growth of young seedlings.AIP2is another RING?nger protein,which involves in ABA sig-naling(Zhang et al.2005).AIP2interacts with ABI3and polyubiquitinates the target molecule for degradation.
Little is known about the functional roles of RING?n-ger E3ligase in rice.However,one such gene,OsBIRF1, causes a reduction in ABA sensitivity in the roots and increases drought tolerance during germination(Liu et al. 2008).Here,we characterized Oryza sativa Delayed Seed Germination1(OsDSG1)that encodes a RING?nger E3 ligase,which negatively regulates OsABI3.
Materials and methods
Plant materials and growing conditions
Rice mutant line3A16755,containing a T-DNA insertion within OsDSG1,was identi?ed from a population of T-DNA-tagging lines generated from Oryza sativa var. japonica cv.Dongjin(Jeon et al.2000;Jeong et al.2002, 2006).Seeds were germinated on a half-strength Murash-ige and Skoog(MS)medium containing3%sucrose,0.2% phytagel,and0.55mM myo-inositol.Seedlings were placed for7days at27°C under continuous light and then transplanted into soil in the greenhouse,where they were grown to maturity.
Genotyping
Genotyping of the T2progeny was performed by PCR. This reaction was carried out in a50l l mixture that con-tained20ng of genomic DNA,0.2mM dNTP,0.5units of Tag polymerase(TaKaRa,Shiga,Japan),1l M primers, and5l l of109Tag buffer.PCR involved35cycles of 94°C for60s,60°C for60s,and72°C for90s.Gene-speci?c primers included F1(50-ATGCCAAACAACAGG GAAAC-30)and R2(50-GAGGGTGGAAAAGATGCTT G-30).The distance between primers was1,430kb.In addition,we used a T-DNA primer(50-GGGTTGGGGTTT CTACAGGA-30)that resided in the GUS gene.
RNA isolation and RT–PCR
Total RNA was isolated,with Tri-reagent(TaKaRa,Shiga, Japan),from leaves and roots of7-,20-day-old plants; developing seeds at6–12days after pollination(DAP);and the embryos and aleurone layers of mature seeds at2–36h after imbibition.cDNA was synthesized as previously reported(Kang et al.2005).RT–PCR was performed with primers F1(50-ATGCCAAACAACAGGGAAAC-30)and R1(50-GAGGGTGGAAAAGATGCTTG-30)for OsDSG1; and50-TCCATCTTGGCATCTCTCAG-30and50-GTACC CGCATCAGGCATCTG-30for OsActin1.
Quantitative Real-Time RT–PCR
Real-time PCR was performed on a Roche LightCyclerII (Roche,Mannheim,Germany)and a Rotor-Gene TM6000 (Corbett,Mortlake,Australia),as previously described (Han et al.2006).The mRNA level of Ubiquitin was used to normalize the expression ratio for each gene.Primers for OsDSG1were50-CCGCTTTGGAAGAATCTCTG-30and 50-TTCCTGTCTTCCTCCTCTTC-30;OsABI1,50-GGAGA GGAAGGTGGTGGACT-30and50-CACAGACGCTCAC CTCGATA-30;OsABI2,50-CGCGATCAATAGGTGAC AGA-30and50-CGCTAATGTTGTCCTTGCTC-30;OsA-BI3,50-CCCAACAACAAAAGCAGGAT-30and50-CCT TTGTATTGGACGAGACG-30;OsABI4,50-TTCCATCA CCAACCGTTC-30and50-TTGAGGAAGAGATCGAAC CA-30;OsABI5,50-AGCGGTGAACCAGTTTGATT-30and 50-ATCTGCCTGTTTCCTCTCCA-30;OsGAMYB,50-GAA
TCCACCCCTCCTGTT-30and50-GCCCCATTACTTGC TCTC-30;a-Amylase,50-TCGAAGAGGCAGTAGATG-30 and50-CGATAGGTGATGAGTAGT-30;RAB18,50-TTAA GCTTTGTATGAATC-30and50-CCTTTATGCGTGGGA TCA-30;RD29B,50-TTAAGCTTAAACTGGAGGAG-30 and50-TTAAGCTTTCGTCACGGCAG-30;and Ubi,50-T GAAGACCCTGACTGGGAAG-30and50-CACGGTTCA ACAACATCCAG-30.Changes in gene expression were calculated according to the delta-delta Ct method.
Generation of the OsDSG1-RNAi and overexpression constructs
OsDSG1cDNA containing the entire ORF was isolated by PCR,using forward(50-AAGCTTCTGCGACTGGAGGA GGAG-30)and reverse(50-GGTACCTGCGGTGACAAG GATGTTAG-30)primers.These contained restriction enzyme sites Hin dIII and Asp718(underlined in the primer sequences)for subsequent cloning.The PCR product was ?rst cloned into pBluescript SK-(Stratagene,La Jolla,CA, USA).Afterward,the cDNA was sub-cloned into the pGA1611binary vector(Kim et al.2003;2009)between the maize Ubi promoter and the nopaline synthase(Nos) terminator to generate the Ubi::OsDSG1construct.To obtain the OsDSG1RNAi construct,the255-bp C-terminal coding region and70-bp30untranslated region(UTR)of OsDSG1were ampli?ed with forward(50-CACCATGG ATGCATCGTCTTCACC-30)and reverse(50-TTAAAC GTACATATATTCACCTCCGC-30)primers.Afterward, the 1.2-kb GUS fragment was inserted between two inverted copies of the OsDSG1fragment.This chimaeric molecule was cloned into the pGA1611binary vector with Kpn I and Sac I,and was inserted into Agrobacterium(An et al.1988).For the OsDSG1-overexpression construct,we ampli?ed the full-length cDNA by a primer pair(50-AA AAGCTTATGTCGGCCCCCGCGGCGGT-30and50-AA GGTACC TCAGACATACATGAACTCCC-30).The PCR product was cloned into Hind III and Kpn I sites between the maize ubiquitin promoter and the T7terminator in the binary vector pGA1611.Rice transformation was per-formed according to Agrobacterium-mediated co-cultiva-tion methods(Kim et al.2009).Transgenic plants were grown in the greenhouse and then transferred to a con?ned paddy?eld.
Yeast two-hybrid analysis
Yeast two-hybrid analysis was performed as described previously(Moon et al.1999).Experiments were con-ducted with the MATCHMAKER yeast two-hybrid system (Clonetech).Activation domain(AD)vector pGAD424 and DNA-binding domain vector pGBT9were used (Tokunori et al.1999).Sequences containing the B-1/B2domain of OsABI3were PCR-ampli?ed with primers 50-ACGACGTTGGCATGATGATA-30and50-TCTTCTGG AGGTGGTGGTTC-30.Yeast cells were transformed by the lithium acetate method(Gietz et al.1992).Those transformants were then grown on a selective medium lacking Ade,Leu,Trp,and His.
In vitro self-ubiquitination analyses
Recombinant Xpress-OsDSG1protein was expressed in E.coli and puri?ed by af?nity chromatography using nickel-nitrilotriacetic acid agarose super?ow resin(Qia-gen).Puri?ed fusion proteins were brought to30l l with ubiquitination reaction buffer(40mM Tris–HCl,pH7.5, 5mM MgCl2,2mM DTT,2mM ATP,5l g of ubiquitin (Sigma–Aldrich),100ng of Arabidopsis UBA1(E1),and 100ng of Arabidopsis UBC8(E2),and incubated at30°C for1h as described previously(Cho et al.2006).Reaction products were separated by10%SDS–PAGE and subjected to immunoblot analysis using anti-Xpress antibody(Invit-rogen)or anti-ubiquitin antibody(Santa Cruz Biotechnol-ogy)as described previously(Lee et al.2006).
Results
Isolation of a seed germination mutant
We previously reported the generation of T-DNA tagging lines in rice(An et al.2003).For our forward-genetics approach,T2plants from the tagging population were grown in the greenhouse and mutant lines that exhibited altered seed germination were screened.Here,we report the identi?cation of Line3A16755,which showed a phe-notype of delayed germination.Whereas wild-type(WT) seeds had germinated within12h after sowing,the mutant seeds required about36h to reveal their shoots(Fig.1a–c). Mutant seedlings also grew more slowly than WT(Fig.1d, f).At the mature stage,mutant plants were77cm tall compared with89cm for WT(Fig.1e,f).These results indicated that the mutation affects both germination and plant growth.Because of this delay,we examined the viviparous germination rate by submerging immature seeds (49DAP)in water for48h.During the treatment,86%of WT seeds germinated versus only20%from the mutant (Fig.1g,h).We named this mutant Oryza sativa delayed seed germination1(osdsg1).
Identi?cation of Oryza sativa Delay Seed Germination
1(OsDSG1)gene
In3A16755,T-DNA was inserted into the second introns of LOC_Os09g26400located on Chromosome9(Fig.2a).
RT–PCR analysis demonstrated that homozygous plants did not accumulate the OsDSG1transcript(Fig.2b),indi-cating that the mutant was a null allele.We synthesized cDNA containing the full-length ORF and compared its sequence with genomic DNA.This gene consists of four exons and encodes a protein of320amino acid residues, which is most similar to Arabidopsis AIP2,an E3ligase containing the RING?nger motif.The proteins shared41% sequence identity and49%similarity.Alignment of the OsDSG1protein with AIP2showed that the C-terminal region containing the RING?nger motif is most conserved (Fig.S1).
Because the mutant manifested certain phenotypes through all developmental stages,we expected that the OsDSG1transcript would be ubiquitous.Real-time PCR analyses indicated its presence in roots and leaves,with levels slowly decreasing as the plants matured(Fig.2c).In spikelets,expression was higher at25days after fertil-ization(DAF)than at6DAF(Fig.2c).However,tran-scripts were markedly increased in seeds during germination(Fig.2d).Our results are in agreement with those reported by Zhang et al.(2005),where Arabidopsis AIP2was expressed in various vegetative and reproductive organs.
(A)
(B)
(E)(C)
(D) (G)
Generation of OsDSG1-RNAi and overexpressing transgenic plants
To verify that the mutant phenotype was indeed due to disruption of OsDSG1,we generated transgenic plants carrying the OsDSG1RNA interference(RNAi)construct (Fig.3a).Among?ve independent RNAi plants,three were selected for further analyses(Fig.3b).They also had a growth retardation phenotype(data not shown).Their level of OsDSG1transcripts was signi?cantly reduced,con-?rming that those mutant phenotypes were caused by diminished OsDSG1expression(Fig.3c,d).
To over-express OsDSG1the full-length OsDSG1 cDNA was placed in a sense orientation under the control of the maize ubiquitin promoter(Fig.4a).Among several transgenic plants overexpressing the molecule,we selected the line number3for further analyses.Seeds from the plant showed the early seed germination phenotype(Fig.4b). Transcript level of the introduced was signi?cantly higher in the transgenic plants compared to the untransformed control(Fig.4c).
Abiotic-stress responses of OsDSG1
OsDSG1is homologous to AIP2,which negatively regu-lates ABA signaling by targeting ABI3for post-
(A)
(B)
Fig.3Phenotypes of OsDSG1RNAi transgenic plants.a Schematic
diagram of OsDSG1-RNAi construct.P ubi,maize ubi promoter;
T nos,nopaline synthase terminator.b Seeds of WT and three
independent RNAi line(T1)at48h after imbibition.c RT–PCR
analysis of OsDSG1transcript in WT and OsDSG1-RNAi transgenic
plants(#1–3).OsActin1served as control.RT–PCR cycles for
amplifying OsDSG1and OsActin1were30and24,respectively.
d Real-tim
e PCR analysis o
f OsDSG1in RNAi transgenic plants.
OsUbi was reference for normalization
translational destruction.Therefore,we proposed that rice OsDSG1also was involved in this signaling.We exposed osdsg1seeds to high-salt conditions to determine whether stress altered their germination rate.Zhu (2002)has reported that ABA in?uences the inhibitory effect of salts on germination.On regular MS media,the rate for the osdsg1mutant was 70%,i.e.,20%lower than for WT seed (Fig.5a).However,under salt stress (150mM NaCl),the mutant germination rate was 5times higher than for WT (Fig.5a).Since salt stress induces ABA response,it is expected that germination rate of osdsg1is further reduced under the stress condition.However,the mutant germi-nated better,probably due to increased tolerance of the seedlings to the salt stress.
We also examined how salt stress affected plant growth.When eight-day-old WT seedlings were treated with 150mM NaCl,fresh weights decreased rapidly,with a loss of about 67%of their original mass at 5days after expo-sure.In contrast,same-age osdsg1seedlings were more salt-tolerant,losing only 17%of their original weight (Fig.5b).Because those mutant seedlings were small,that difference might have been due to their inherent size.Therefore,we also examined 15-day-old osdsg1seedlings
that were the same size and weight as eight-day-old WT seedlings.When compared,the mutants were also more tolerant to salt (Fig.5b,c);treatment with 300mM NaCl produced similar results (data not shown).
Because ABA also in?uences drought stress,we exam-ined the response by mutant seedlings.As with our salt experiments,WT seedlings were sensitive to drought while mutants had greater tolerance (Fig.5d).Chlorophyll con-tents were much higher in mutant leaves after these stress treatments (Fig.5c,e).Hence,our observations indicated that OsDSG1is involved in ABA signaling.OsDSG1binds to OsABI3
Zhang et al.(2005)have demonstrated that the C terminal region of AIP2,which contains the RING motif,interacts with ABI3.Therefore,we used yeast two-hybrid analysis to examine whether OsDSG1also binds to OsABI3.Because the B1/B2domain of ABI3interacts with AIP2,we made a binding domain (BD)plasmid containing the B1/B2domain of OsABI3.We also produced an AD plasmid that included the C-terminal region of OsDSG1(Fig.6a).The two proteins interacted with each other and did not have self-activation activities in that region (Fig.6b).By switching the AD and BD vectors to examine their inter-action further,we could also con?rm the results that OsDSG1binds to OsABI3(Fig.6b).Further analysis is needed for in vivo interaction between the two molecules.OsDSG1is an E3ligase
Since OsDSG1binds to OsABI3,we examined whether OsDSG1has E3ligase activity.The full-length OsDSG1cDNA was fused to the coding region of Xpress and the construct was expressed in E.coli .The OsDSG1-Xpress protein was puri?ed with histidine af?nity column.The fusion proteins were incubated at 30°C in the presence or absence of ubiquitin,E1(UBA1),and E2(UBC8)for 1h and subjected to immunoblot analyses with anti-Xpress or anti-ubiquitin antibodies.Poly ubiquitination tails were detected when E1,E2,and ubiquitin were present (Fig.7).Xpress-OsDSG1proteins were seen as high-molecular-mass ladders that are the characteristic of ubiquitination,whereas there was no ubiquitination signal in the absence of E1,E2or ubiquitin.These results imply that OsDSG1is an E3ubiquitin ligase.
Mutation in OsDSG1increases expressions of OsABI5and ABA-responsive genes
Because OsDSG1appeared to be involved in ABA sig-naling,we studied the expression levels of ABA-signaling genes in germinating seeds (Fig.8).Transcript of
OsABI5
Fig.4Characterization of OsDSG1-overexpressing plants.a Schematic diagram of OsDSG1-overexpression construct.The full length OsDSG1cDNA was ampli?ed with OxF and OxR,and placed between the maize ubiquitin promoter (P ubi )and nopaline synthase terminator (T nos ).b WT and OsDSG1-overexpressing transgenic seeds (T1)at 24h after imbibition.c RT–PCR analysis of OsDSG1-overexpressing transgenic plants compared to WT.RNAs were extracted from leaves of two-week-old plants and ampli?ed with the gene speci?c primers,F and OxR
was signi?cantly increased in the osdsg1mutant.This was expected because the gene functions downstream of OsA-BI3,which is a target of OsDSG1.Levels of OsABI1and OsABI2transcripts were somewhat elevated but not sig-ni?cantly.These genes are known to function upstream of OsABI3.In addition,OsABI3and OsABI4expressions were slightly higher in the mutant.The latter regulates OsG-AMYB expression independent of the OsABI3–OsABI5pathway.We also monitored expression of OsGAMYB and its downstream genes that encode hydrolytic enzymes.As expected,transcript levels of OsGAMYB ,a -Amylase ,b -Amylase,and a -Glucosidase were markedly reduced in the mutant seeds.We also examined transcript levels of two well-known ABA-responsive genes:RESPONSIVE TO DESSICATION29B (RD29B )and RESPONSIVE TO ABA18(RAB18)(Wang et al.2008).Quantitative real-time
PCR analyses showed that transcript levels of RD29B and RAB18were elevated (Fig.8).
Analysis of ABA-signaling genes in 41rice cultivars Germination rates were measured for 41different japonica rice cultivars as well as the osdsg1mutant (Supplementary Fig.2),and were found to vary signi?cantly among culti-vars,from 3to 88%.For example,rates for low-germina-tion cultivars ‘Jado’and ‘Odae’were \10%.Those of ‘Moonjang’and ‘Hwasung’were 25%,similar to the mutant.We then selected three low-germination cultivars (‘Odae’,‘Jinbong’,and ‘Moonjang’)and ?ve high-per-formers (‘Dongjin’,‘Chungjuing’,‘YR1596acp33’,‘Hwayoung’,and ‘Saechuchung’)for measuring transcript levels of ABA-signaling genes and their target genes that
(A)
g e r m i n a t i o n r a t e s (%)
WT osdsg1WT osdsg1
Fig.6Yeast two-hybrid Array experiments for interaction
between OsDSG1and OsABI3.
a Schematic illustration of DNA
constructs.PCR primers for
amplifying motifs used in
constructing yeast two-hybrid
vectors are indicated with
arrows.Ring domain in
OsDSG1;and AD,B1,B2,and
B3domains in OsABI3are
indicated.The numbers indicate
the amino acid positions.
b Yeast cells containing AD/BD
constructs were grown on media
lacking Leu/Trp(left)or Ade/
Leu/Trp/His(right)
72
55
40
26
function during germination.Quantitative real-time RT–PCR analysis demonstrated that levels for OsDSG1,OsG-AMYB,and the downstream enzyme genes were high in the ?ve cultivars that germinated well but low in the other three(Fig.9).In contrast,transcript levels of OsABI3, OsABI4,and OsABI5—suppressors of GAMYB—were signi?cantly higher in the low-germination cultivars (Fig.9).These results suggested that ABA signaling, including via OsDSG1,is the major determinant of ger-mination success,and that an unknown regulatory trait must control the overall ABA-signaling pathway in developing seeds(Fig.10).Discussion
We have now isolated a T-DNA insertional mutant in OsDSG1that encodes a deduced RING?nger protein. Mutant seeds germinated24h behind WT,and their plants were also shorter.Under high-salt stress,however,mutant seeds germinated better than WT.The viviparous germi-nation rate of the osdsg1mutant was signi?cantly reduced. These phenotypes coincide with ABA-overexpressing plants(Zhang et al.2005).
OsDSG1is a member of the ABA signaling group OsDSG1encodes a deduced protein that carries a RING ?nger motif present in a class of E3ligases.The protein sequence is highly homologous to Arabidopsis AIP2, which functions as an E3ligase,thus indicating that Os-DSG1is also an E3ligase.As AIP2binds to ABI3(Zhang et al.2005),OsDSG1binds to OsABI3,demonstrating that the rice protein functions similarly to the Arabidopsis AIP2 protein.The latter degrades ABI3via26S proteasome, thereby acting negatively in ABA signaling(Zhang et al. 2005).Therefore,it is likely that OsDSG1also functions negatively in this signaling by degrading OsABI3. Although we did not directly show that the OsABI3protein level was increased in the osdsg1mutant,several lines of evidence support that possibility.First,the osdsg1pheno-types indicated that the mutation is due to the loss of an ABA negative regulator.Second,OsDSG1binds to OsA-BI3and ubiquitinates it.Third,the transcript level of the OsABI3target gene,OsABI5,was increased.Unexpectedly, we observed that OsABI3transcripts also were elevated in the mutant.Because its steady state protein level should be higher there,a rise in OsABI3transcripts is not necessary. One possible explanation is the positive feedback regula-tion of upstream genes by ABI3or its downstream protein. Alternatively,OsDSG1may target other proteins that control activity upstream of OsABI3.Zhang et al.(2005) have proposed that AIP2may degrade other proteins besides ABI3.
OsDSG1expression levels are correlated
with germination rates
Our examination of japonica rice cultivars revealed a good correlation between germination rates and OsDSG1tran-scripts.Whereas all?ve high-performing cultivars had high expression,levels were poor from the low-germination cultivars.This indicated that OsDSG1is an important determinant of germination success.In addition,expres-sions of other ABA-signaling genes,especially OsABI3 and OsABI5,were signi?cantly different between the two germination groups.However,unlike with OsDSG1,
transcript levels of those two genes were enhanced in the low performers.This observation supports our theory that OsDSG1functions antagonistically to OsABI3and OsABI5.Interestingly,OsABI4transcript levels were also better in the low-germination cultivars.In Arabidopsis ,ABI4functions independent of the ABI3–ABI5pathway.Therefore,the agronomic trait presented in poorly germi-nating cultivars is likely a regulatory gene that controls the overall ABA-signaling pathway.
osdsg1can be used for development of stress-tolerant plants
The osdsg1T-DNA mutant and RNAi plants were toler-ant to high salt and drought.Therefore,this mutant allele could be used for developing stress-tolerant cultivars.Because the trait is a loss-of-function mutation,it can be achieved via chemical mutagenesis or natural transposon-tagging,which does not involve gene manipulation.The desired trait should be stable in various environments and through several generations because the allele is reces-sive.One drawback is that mutant plants are shorter.However,this is not accompanied by a reduction in yield.Therefore,if the trait were introduced into a tall variety,the new product could gain several new,bene?cial char-acters that would enhance yields.Any altered timing of germination is not a signi?cant factor because it is deferred by only 1day.In fact,such a delay could be advantageous when paddy ?elds are ?ooded at the seed-maturation
stage.
Fig.9Expression analyses of ABA-signaling genes among rice cultivars.OsUbi served as reference for normalization.DJ Dongjin,CJ Chungjuing,YR YR1596acp33,HW Hwayoung,SCC Saechuchung,OD Odae,JB Jinbong,and MJ Moonjang
Acknowledgments We thank Kyungsook An for plant transfor-mation,Priscilla Licht for English editing,Gihwan Yi for providing the rice seeds and Jongjin Park,Sungryul Kim and Songlim Kim for helpful discussion.This work was supported,in part,by grants from the Crop Functional Genomic Center,the21st Century Frontier Program(Grant CG1111);from the Biogreen21Program,Rural Development Administration(20070401-034-001-007-03-00);from the Korea Research Foundation Grant(MOEHRD,Basic Research Promotion Fund(KRF-2007-341-C00028);and from Kyoung Hee University(20100791).
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汽车修理工国家职业标准与技能标准
汽车修理工国家职业标准与技能标准 1. 职业概况 1.1 职业名称 汽车修理工。 1.2 职业定义 使用工、夹、量具,仪器仪表及检修设备进行汽车的维护、修理和调试的人员。 1.3 职业等级 本职业共设五个等级,分别为:初级(国家职业资格五级)、中级(国家职业资格四级)、高级(国家职业资格三级)、技师(国家职业资格二级)、高级技师(国家职业资格一级)。1.4 职业环境条件 室内、外、常温。 1.6 基本文化程度 高中毕业(含同等学力)。 1.7 培训要求 1.7.1 培训期限 全日制职业学校教育,根据其培养目标和教学计划确定。晋级培训期限:初级不少于600标准学时;中级不少于500标准学时;高级不少于320标准学时;技师不少于200标准学时;高级技师不少于120标准学时。 1.7.2 培训教师 理论培训教师应具有本职业(专业)大学本科以上学历或中级以上专业技术职务;实际操作教师:培训初、中级人员的教师应具有高级职业资格证书,培训高级人员的教师应具有技师职业资格证书,培训技师、高级技师的教师应具有本专业高级专业技术职务或高级技师职业资格证书,且在本岗位工作3年以上。
1.7.3 培训场地设备 理论培训场地应具有可容纳20名以上学员的标准教室,并配备投影仪、电视机及播放设备。实际操作培训场所应具有600 m2以上能满足培训要求的场地,且有相应的设备、仪器仪表和必要的工具、夹具、量具,通风条件良好、光线充足、安全设施完善。 1.8 鉴定要求 1.8.1 适用对象 从事或准备从事本职业的人员。 1.8.2 申报条件 ——初级(具备以下条件之一者) (1)经本职业初级正规培训达规定标准学时数,并取得毕(结)业证书。 (2)在本职业连续见习工作2年以上。 (3)本职业学徒期满。 ——中级(具备以下条件之一者) (1)取得本职业初级职业资格证书后,连续从事本职业工作3年以上,经本职业中级正规培训达规定标准学时数,并取得毕(结)业证书。 (2)取得本职业初级职业资格证书后,连续从事本职业工作5年以上。 (3)连续从事本职业工作7年以上。 (4)取得经劳动保障行政部门审核认定的、以中级技能为培养目标的中等以上职业学校本职业(专业)毕业证书。 ——高级(具备以下条件之一者) (1)取得本职业中级职业资格证书后,连续从事本职业工作4年以上,经本职业高级正规培训达规定标准学时数,并取得毕(结)业证书。 (2)取得本职业中级职业资格证书后,连续从事本职业工作7年以上。 (3)取得高级技工学校或经劳动保障行政部门审核认定的、以高级技能为培养目标的高等职业学校本职业(专业)毕业证书。 (4)取得本职业中级职业资格证书的大专以上本专业或相关专业毕业生,连续从事本职业工作2年以上。 ——技师(具备以下条件之一者) (1)取得本职业高级职业资格证书后,连续从事本职业工作5年以上,经本职业技师正规培训达规定标准学时数,并取得毕(结)业证书。 (2)取得本职业高级职业资格证书后,连续从事本职业工作8年以上。 (3)高级技工学校本职业(专业)毕业生,连续从事本职业工作满2年。 ——高级技师(具备以下条件之一者)
经开万达选址报告
题目经开万达选址报告学生姓名苏琬茵 学院设计学院 专业服装设计与工程班级服设162 导师姓名吴宣润 2018年9 月26 日
目录 第一章 (3) 1.1项目简介 (3) 1.2周边设施 (3) 第二章 (4) 2.1招商业态 (4) 2.2经营水平 (4) 2.3营业潜力 (4) 第三章 (5) 3.1商圈饱和指数 (6) 3.2赫夫法则 (7) 3.3商圈划分 (8) 第四章 (8) 4.1竞争优势 (9) 4.2特色品牌 (9) 总结 (9)
第一章 1.1项目简介 目名称:经开万达 项目类型:购物中心 商业建筑面积15万平米 商业楼层-3层到4层 项目介绍:嘉兴经开万达广场总建筑面积25万平方米,政府批准建设的龙腾路步行街将广场自然分成A、B两大区块。项目涵盖财物、餐饮、娱乐、休闲、商务、办公、酒店、公寓等多元化业态,并配套了约1300余个停车位,300余国际国内知名品牌进驻,其中众多品牌均为首次入驻嘉兴。 1.2周边设施: 综合商场:丽丰新天地 公园:运河公园 学校:嘉兴技师学院、嘉兴学院、嘉兴市蓝翔实验学校 酒店:君特酒店、豪仕登酒店、泊金湾酒店、财富假日酒店 银行:农业银行、工商银行、交通银行、台州银行 医院:浙江省荣军医院 周边人口概况(半径1公里) 常住人口26.2万人、办公人口1.3万人、差旅人口为0 周边交通概况(半径1公里) 公交线路36个、停车场为189个、周边地铁线为0 周边学校概况(半径1公里) 大学3个、中学3个、小学为0
第二章 2.1招商业态: 零售餐饮儿童亲子文体娱乐生活服务 2.2经营水平: 1.优势: 1>完整的产业链 2>营利能力稳定 3>经过多年的发展具有较强的市场占有率和竞争力 2.劣势: 1>债务规模不断攀升 2>大股东借款规模较大 3>受资产和对外担保规模较大 4>未分配利润规模较大 2.3营业潜力 注: 主要商圈:约包括55%-70%的顾客 次要商圈:约包括15%-25%的顾客 边际商圈:约包括5%的顾客 若平均每户居民每月去万达的总消费金额为200元,且三个商圈的人口分别是P、H、R 则经开万达的营业潜力可估为: 200[(55%-70%)*P+(15%-25%)*H+5%*R] 元
车辆外廓尺寸检测公差
国家经济贸易委员会、公安部关于进一步 加强车辆公告管理和注册登记有关事项的通知 (国经贸产业[2002]768号) 各省、自治区、直辖市、计划单列市及新疆生产建设兵团经贸委(经委)、公安厅(局):为加强机动车安全管理,严格执行车辆“生产准入”和“行驶准入”制度,进一步规范《车辆生产企业及产品公告》(以下简称《公告》)管理和机动车注册登记管理,深化车辆产品管理体制改革,现将有关事项通知如下: 一、《公告》管理的范围 国家经贸委实施《公告》管理的车辆产品包括:在我国境内生产、销售并在道路上行驶的民用汽车产品及相应底盘、农用运输车、半挂车和摩托车产品。无轨电车、轮式工程机械车(含装载机、挖掘机等)、拖拉机、全挂车等不实行《公告》管理。 《公告》包括文本和光盘两部分,文本主要表述新产品批准(含产品扩展)、勘误更改和撤销等内容;光盘由本批新增产品数据库和历批汇总产品数据库两部分构成,记录产品的技术参数及产品照片等内容。文本和光盘配合使用。 公安交通管理部门要严格依据最新一批《公告》文本和配套光盘的汇总产品数据库办理车辆注册登记。在用车辆在办理过户、转出和转入登记时,要依据车辆在注册登记时发布的《公告》文本和配套光盘中的汇总产品数据库办理有关手续。未登《公告》的车辆产品或与《公告》公布的参数不符的车辆产品不得办理注册登记。不实行《公告》管理的车辆产品,公安交通管理部门依据生产企业提供的整车出厂合格证办理注册登记。 二、增加和调整强制性检验项目 (一)自2002年11月1日起,汽车生产企业申报《公告》的车型(包括改进型、扩展等,下同)必须符合《汽车和挂车侧面防护要求》(GB11567.1-2001)、《汽车和挂车后下部防护要求》(GB11567.2-2001)、《汽车燃油箱安全性能要求和试验方法》(GB18296-200 1)等3项国家标准的要求,并提供国家经贸委授权的检测机构(以下简称授权检测机构)出具的试验报告。 产品已列入《公告》的企业,自本通知发出之日起,要尽快使出厂产品符合上述3项国家标准的要求,并向国家经贸委报送由授权检验机构出具的试验报告。产品外型发生明显变化时,需提供有关照片。自2003年3月1日起,已列入《公告》的产品仍未安装符合上述标准的防护装置和燃油箱的,国家经贸委将在《公告》中予以撤销。 (二)自2003年1月1日起,装备驻车灯的车型申报《公告》时必须符合《汽车驻车灯配光性能》(GB18409-2001)要求,并提供由授权检测机构出具的试验报告。 (三)自2003年3月1日起,汽车企业申报《公告》的车型必须符合《用于保护车载接收机的无线电骚扰特性的限值及测量方法》(GB18655-2002)要求,并提供由授权检测机构出具的试验报告。 (四)自2003年1月1日起,汽车企业停止生产不符合《关于正面碰撞乘员保护的设计规则》(CMVDR 294)要求的微型客车产品,其库存产品最多允许继续销售6个月。自
01-万达广场立面初设及主材封
万达广场立面初设及主材封样 管控方法及要点总结 前言 万达广场经历了三代产品的历练,从单店到复合店再到三代产品的万达商业综合体,万达品牌不断致力于打造万达广场就是城市中心的建造理念,每一个万达广场都是一个城市的地标建筑、都是当地文化与现代人居生活提炼的结晶。万达广场从设计之初就不断从当地的文化中提炼设计语言,董事长身体力行,严格要求采用符合当地文脉及文化特征的建筑语汇,让建筑真正体现“生于斯,长于斯”的文脉延续。以XX万达广场为例,建筑语汇取材于当地发达的丝绸制造业,建筑的表皮犹如卷曲的丝绸,柔美而兼具灵动的特质,表皮以曲面铝合金板和彩釉玻璃相结合,卷曲的实和玻璃的虚对比分明,重点与主次突出,与当地文化及民俗交相呼应,建筑成为一座凝固的丝织艺术品,强化了“丝绸之府”的重要地位,成为城市的名片与生活的真实写照。 一个高品质建筑的实现不仅仅是来源完美的设计理念,在材料的选择,设计图纸的完善与深度以及节点控制上都需要严格的管控,否则在今后的施工中无法控制施工材料及施工工艺的效果,并会对夜景照明等相关设计带来致命的影响。众所周知,万达广场具有严格的模块化节点计划,在如此快速的设计到施工的时间里,如果在立面初设及主材封样环节出现了问题,对于万达广场品质的保证就会成为无稽之谈,因此本篇文章结合作者亲身参与的XX万达广场项目在立面初设及主材封样阶段管控工作的得失,总结管控工作中需要注意的问题以及需要达到的成果,防微杜渐,以期达到前车之鉴、后车之师的警示作用。(图1)
图1 万达广场鸟瞰图 立面初设及主材封样管控心得 1、立面初步设计及主材封样节点重要性分析 1.1、立面深化初步设计及主材封样是立面效果图到幕墙施工图深化过程中的重要环节。 立面初步设计是衔接立面效果图与幕墙施工图的重要一环,董事长签批的效果图及设计理念能否得以完全贯彻执行的重要引擎,其节点周期为75天,可以说75天就成为决定了万达广场设计成败的关键。 1.2 立面初步设计及主材封样是施工过程中定标封样及样板间建造的依据和范本。 立面主材封样是定标封样以及样板段施工及效果检查的重要依据,因此主材封样阶段需要严格把控材料的质地以及颜色等特性,并对封样的全面性进行评估,才能为将来的建筑品质做好最优的铺垫。 1.3 立面初步设计及主材封样是进行成本有效优化的平台。 资金的投入与产出需要找到最优点,任何项目都不是资金投入的越多就一定能得到同比例的效果的提升,万达企业是一个把好钢一定要用到刀刃上的企业,成本的投入和价值的产出只有在立面初设图纸
汽车维修行业标准
汽车维修行业标准国家职业标准:汽车修理工 1、职业概况 1、1 职业名称 汽车修理工。 1、2 职业定义 使用工、夹、量具,仪器仪表及检修设备进行汽车的维护、修理与调试的人员。 1、3 职业等级 本职业共设五个等级,分别为:初级(国家职业资格五级)、中级(国家职业资格四级)、高级(国家职业资格三级)、技师(国家职业资格二级)、高级技师(国家职业资格一级)。 1、4 职业环境条件 室内、外,常温。 1、5 职业能力特征
1、6 基本文化程度 高中毕业(含同等学力)。 1、7 培训要求 1、7、1 培训期限 全日制职业学校教育,根据其培养目标与教学计划确定。晋级培训期限:初级不少于600标准学时;中级不少于500标准学时;高级不少于320标准学时;技师不少于200标准学时;高级技师不少于120标准学时。 1、7、2 培训教师 理论培训教师应具有本职业(专业)大学本科以上学历或中级以上专业技术职务;实际操作教师:培训初、中级人员的教师应具有高级职业资格证书,培训高级人员的教师应具有技师职业资格证书,培训技师、高级技师的教师应具有本专业高级专业技术职务或高级技师职业资格证书,且在本岗位工作3年以上。 1、7、3 培训场地设备 理论培训场地应具有可容纳20名以上学员的标准教室,并配备投影仪、电视机及播放设备。实际操作培训场所应具有600 m2以上能满足培训要求的场地,且有相应的设备、仪器仪表与必要的工具、夹具、量具,通风条件良好、光线充足、安全设施完善。 1、8 鉴定要求 1、8、1 适用对象 从事或准备从事本职业的人员。 1、8、2 申报条件 ——初级(具备以下条件之一者) (1)经本职业初级正规培训达规定标准学时数,并取得毕(结)业证书。 (2)在本职业连续见习工作2年以上。 (3)本职业学徒期满。 ——中级(具备以下条件之一者) (1)取得本职业初级职业资格证书后,连续从事本职业工作3年以上,经本职业中级正规培训达规定标准学时数,并取得毕(结)业证书。 (2)取得本职业初级职业资格证书后,连续从事本职业工作5年以上。 (3)连续从事本职业工作7年以上。 (4)取得经劳动保障行政部门审核认定的、以中级技能为培养目标的中等以上职业学校本职业(专业)毕业证书。
汽车修理工国家职业技能鉴定标准
汽车修理工国家职业标准 1.职业概况 1.1职业名称 汽车修理工。 1.2职业定义 使用工、夹、量具,仪器仪表及检修设备进行汽车的维护、修理和调试的人员。 1.3职业等级 本职业共设五个等级,分别为:初级(国家职业资格五级)、中级(国家职业资格四级)、高级(国家职业资格三级)、技师(国家职业资格二级)、高级技师(国家职业资格一级)。 1.4室、外,常温。 1.5职业能力特征
1.6基本文化程度 高中毕业(含同等学历)。 1.7培训要求 1.7.1培训期限 全日制职业学校教育,根据其培养目标和教学计划确定。晋级培训期限:初级不少于600标准学时;中级不少于500标准学时;高级不少于320标准学时;技师不少于200标准学时;高级技师不少于120标准学时。 1.7.2培训教师 理论培训教师应具有本职业(专业)大学本科以上学历或中级以上专业技术职务;实际操作教师:培训初、中级人员的教师应具有高级职业书,培训高级人员的教师应具有技师职业书,培训技师、高级技师的教师应具有本专业高级专业技术职务或高级技师职业书,且在本岗位工作3年以上。 1.7.3培训场地设备 理论培训场地应具有可容纳20名以上学员的标准教室,并配备投影仪、电视机及播放设备。实际操作培训场所应具有600m2以上能满足培训要求的场地,且有相应的设备、仪器仪表和必要的工具、夹具、量具,通风条件良好、光线充足、安全设施完善。 1.8鉴定要求 1.8.1适用对象 从事或准备从事本职业的人员。 1.8.2申报条件 ——初级(具备以下条件之一者)
(1)经本职业初级正规培训达规定标准学时数,并取得毕(结)业证书。 (2)在本职业连续见习工作2年以上。 (3)本职业学徒期满。 ——中级(具备以下条件之一者) (1)取得本职业初级职业书后,连续从事本职业工作3年以上,经本职业中级正规培训达规定标准学时数,并取得毕(结)业证书。 (2)取得本职业初级职业书后,连续从事本职业工作5年以上。 (3)连续从事本职业工作7年以上。 (4)取得经劳动保障行政部门审核认定的、以中级技能为培养目标的中等以上职业学校本职业(专业)毕业证书。 ——高级(具备以下条件之一者) (1)取得本职业中级职业书后,连续从事本职业工作4年以上,经本职业高级正规培训达规定标准学时数,并取得毕(结)业证书。 (2)取得本职业中级职业书后,连续从事本职业工作7年以上。 (3)取得高级技工学校或经劳动保障行政部门审核认定的、以高级技能为培养目标的高等职业学校本职业(专业)毕业证书。 (4)取得本职业中级职业书的大专以上本专业或相关专业毕业生,连续从事本职业工作2年以上。 ——技师(具备以下条件之一者) (1)取得本职业高级职业书后,连续从事本职业工作5年以上,经本职业技师正规培训达规定标准学时数,并取得毕(结)业证书。 (2)取得本职业高级职业书后,连续从事本职业工作8年以上。 (3)高级技工学校本职业(专业)毕业生,连续从事本职业工作满2年。 ——高级技师(具备以下条件之一者)
嘉兴万达广场地产分析
嘉兴万达广场地产分析 工商管理3班1116094 戴维楠这一次,万达真的来了!在传言许多年之后,2013年6月,全球商业地产巨头—万 达广场,终于决心“落户”嘉兴。立志打造嘉兴首席城市综合体,最高端的南湖商业新中心! 不负一个多月以来业内外的猜测,6月6日下午,成功摘牌市经开区2013-14号、1 5号商业地块(东至石桥港,南至塘桥路,西至云东路,北至广益路绿化带),这预示着 巨型商业航母将在嘉兴市东南核心区块的崛起。未来以嘉兴万达广场为主导的城市东南商 业圈,将与市中心商业圈、秀洲区商业中心圈形成三角之势,推动着嘉兴商业格局的改变。而嘉兴万达广场也将成为继宁波、温州、绍兴、余姚、金华和杭州之后,万达集团进驻浙 江的第七个万达广场项目! ——摘自《南湖日报》 现在是2014年11月中,嘉兴万达广场项目主体施工已经接近尾声,正在如火如荼的进行装饰装修工作,招商售楼工作也在紧张积极的进行当中。作为万达集团嘉兴分公司招商部的工作人员,对嘉兴地理位置,经济文化,未来发展前景等方面进行分析,是我们招商工作的重要工作。 1嘉兴是浙江省省辖市,位于浙江省东北部、长江三角洲杭嘉湖平原腹心地带,是长江三角洲重要城市之一。城市处于江、海、湖、河交会之位,扼太湖南走廊之咽喉,与上海、杭州、宁波、绍兴、苏州等城市相距均不到百公里。 嘉兴自古为富庶繁华之地,素有“鱼米之乡”、“丝绸之府”之美誉,是国家历史文化名城、中国文明城市、全中国双拥模范城市、中国绿化模范城市、中国优秀旅游城市和国家园林城市。 主要景点有:南湖景区,月河历史街区,乌镇,西塘,南北湖,九龙山,梅花州,新塍古镇等。 截止2011年12月30日,嘉兴市下辖2个市辖区(南湖区、秀洲区)、3个县级市(海宁市、平湖市、桐乡市)、2个县(嘉善县、海盐县)。共有44个镇,29个街道(涉农街道 22个),246个城市社区,115个城镇社区,809个行政村。 2013年末嘉兴市户籍人口345.93万人,比上年末增加1.41万人。嘉兴市户籍人口出生率8.18‰,死亡率6.94‰,自然增长率1.23‰。全年迁入人口2.75万人,迁出人口1.74万人,人口机械增长率2.94‰。 截至2013年,嘉兴市公路通车里程8000公里,其中四级以上公路7867公里。[6] 高速公路:沪昆高速公路、乍嘉苏高速公路、杭州湾环线高速公路、常台高速公路、沈海高速公路、申嘉湖高速公路、苏绍高速公路、练杭高速公路 国道:320国道、101省道、202省道 客运站:嘉兴汽车北站、嘉兴汽车客运中心
汽车修理工国家职业标准(最新)
汽车修理工国家职业标准 1.职业概况 1.1 职业名称 汽车修理工。 1.2 职业定义 使用工、夹、量具,仪器仪表及检修设备进行汽车的维护、修理和调试的人员。 1.3 职业等级 本职业共设五个等级,分别为:初级(国家职业资格五级)、中级(国家职业资格四级)、高级(国家职业资格三级)、技师(国家职业资格二级)、高级技师(国家职业资格一级)。 1.4 职环境条件 室内、外,常温。 1.5 职业能力特征 1.6 基本文化程度 高中毕业(含同等学历)。 1.7 培训要求 1.7.1 培训期限 全日制职业学校教育,根据其培养目标和教学计划确定。晋级培训期限:初级不少于600标准学时,中级不少于500标准学时,高级不少于320标准学时;技师不少于200标准学时;高级技师不少于120标准学时。 1.7.2 培训教师 理论培训教师应具有本职业(专业)大学本科以上学历或中级以上专业技术职务;实际操作教师:培训初、中级人员的教师应具有高级职业资格证书,培训高级人员的教师应具有技师职业资格证书,培训技师、高级技师的教师应具有本专业高级专业技术职务或高级技师职业资格证书,且在本岗位工作3年以上。 1.7.3 培训场地设备 理论培训场地应具有可容纳20名以上学员的标准教室,并配备投影仪、电视机及播放设备。实际操作培训场所应具有600m2以上能满足培训要求的场地,且有相应的设备、仪器仪表和必要的工具、夹具、量具,通风条件良好、光线充足、安全设施完善。 1.8 鉴定要求
1.8.1 适用对象 从事或准备从事本职业的人员。 1.8.2 申报条件 ——初级(具备以下条件之一者) (1)经本职业初级正规培训达规定标准学时数,并取得毕(结)业证书。 (2)在本职业连续见习工作2年以上。 (3)本职业学徒期满。 ——中级(具备以下奈件之一者) (1)取得本职业初级职业资格证书后,连续从事本职业工作3年以上,经本职业中级正规培训达规定标准学时数,并取得毕(结)业证书。 (2)取得本职业初级职业资格证书后,连续从事本职业工作5年以上。 (3)连续从事本职业工作7年以上。 (4)取得经劳动保障行政部门审核认定的、以中级技能为培养目标的中等以上职业学校本职业(专业)毕业证书。 ——高级(具备以下条件之一者) (1)取得本职业中级职业资格证书后,连续从事本职业工作4年以上,经本职业高级正规培训达规定标准学时数,并取得毕(结)业证书。 (2)取得本职业中级职业资格证书后,连续从事本职业工作7年以上。 (3)取得高级技工学校或经劳动保障行政部门审核认定的、以高级技能为培养目标的高等职业学校本职业(专业)毕业证书。 (4)取得本职业中级职业资格证书的大专以上本专业或相关专业毕业生,连续从事本职业工作2年以上。 ——技师(具备以下条件之一者) (1)取得本职业高级职业资格证书后,连续从事本职业工作5年以上,经本职业技师正规培训达规定标准学时数,并取得毕(结)业证书。 (2)取得本职业高级职业资格证书后,连续从事本职业工作8年以上。 (3)高级技工学校本职业(专业)毕业生,连续从事本职业工作满2年。 ——高级技师(具备以下条件之一者) . (1)取得本职业技师职业资格证书后,连续从事本职业工作3年以上,经本职业高级技师正规培训达规定标准学时数,并取得毕(结)业证书。 (2)取得本职业技师职业资格证书后,连续从事本职业工作5年以上。 1.8.3 鉴定方式 分为理论知识考试和技能操作考核,理论知识考试采用闭卷笔试方式,技能操作考核采用现场实际操作方式进行。理论知识考试和技能操作考核均实行百分制,两门均达到60分以上者为合格。技师和高级技师鉴定还需进行综合评审。 1.8.4 考评人员与考生配比 理论知识考试考评员与考生配比为员与考生配比为1:5。 1.8.5 鉴定时间 根据职业等级不同,理论知识考试为90~120min,技能操作考核为150~240min,论文答辩不少于40min。 1.8.6 鉴定场所设备 理论知识考试在标准教室进行。技能操作考枝在具有必备的设备、仪器仪表,工、夹、量具及设施、通风条件良好,光线充足和安全措施完善的场所进行。 2. 基本要求
强制性国家标准道路车辆外廓尺寸轴荷及质量限值
强制性国家标准道路车辆外廓尺寸轴荷及质量限值
强制性国家标准《道路车辆外廓尺寸、轴荷及质量限值》 征求意见稿编制说明 一、工作简况 (一)任务来源: 受国家工业和信息化部(以下简称工信部)委托,全国汽车标准化技术委员会(以下简称汽标委)整车分技术委员会启动了标准的修订计划,标准项目计划编号: 20120011-Q-339,标准项目名称:《道路车辆外廓尺寸、轴荷及质量限值》。(二)制定过程 2012年初,工信部经与国家标准化管理委员会、交通运输部、公安部、国家质量监督检验检疫总局(以下简称质检总局)、国家认证认可监督管理委员会(以下简称认监委)等单位讨论协商后,启动了GB 1589-2004《道路车辆外廓尺寸、轴荷及质量限值》的修订工作,委托中国汽车技术研究中心(以下简称中汽中心)牵头,研究标准具体如何修改、分析后续影响,尽快拿出修订方案。 1、汽标委提出修订方案
中汽中心对一汽、东风、重汽等多个重点企业进行了调研,初步征求了汽车行业对三个标准的修订意见, 2012年10月16日,汽标委在杭州召开了GB 1589及相关标准修订行业研讨会。会议对前期工作进行了通报,针对各企业代表对GB 1589—2004标准在实施及企业新产品开发中所遇到的问题进行了梳理和汇总,并就下一阶段工作进行了布置和安排。会议研究成立了车辆运输车专项验证项目组,开展半挂车辆运输列车和中置轴车辆运输列车的试验验证工作。 杭州会议后,车辆运输车专项验证项目组召开会议,研究了车辆运输车的半挂车、中置轴挂车、铰接列车、中置轴列车的长度调整问题,以及通道圆及外摆值等指标的论证方案,并制定了工作计划。会后该工作组完成了半挂车辆运输列车及中置轴车辆运输列车的计算机模拟及实车验证试验。 2013年1月25日,汽标委在深圳召开GB1589标准修订会议。集中研究了牵引销和牵引鞍座的技术尺寸、车辆运输车(半挂列车、中置轴列车)、侧帘车等的问题,形成了统一意见。
强制性国家标准道路车辆外廓尺寸轴荷及质量限值
强制性国家标准《道路车辆外廓尺寸、轴荷及质量限值》 征求意见稿编制说明 一、工作简况 (一)任务来源: 受国家工业和信息化部(以下简称工信部)委托,全国汽车标准化技术委员会(以下简称汽标委)整车分技术委员会启动了标准的修订计划,标准项目计划编号: -Q-339,标准项目名称:《道路车辆外廓尺寸、轴荷及质量限值》。 (二)制定过程 2012年初,工信部经与国家标准化管理委员会、交通运输部、公安部、国家质量监督检验检疫总局(以下简称质检总局)、国家认证认可监督管理委员会(以下简称认监委)等单位讨论协商后,启动了GB 1589-2004《道路车辆外廓尺寸、轴荷及质量限值》的修订工作,委托中国汽车技术研究中心(以下简称中汽中心)牵头,研究标准具体如何修改、分析后续影响,尽快拿出修订方案。 1、汽标委提出修订方案 中汽中心对一汽、东风、重汽等多个重点企业进行了调研,初步征求了汽车行业对三个标准的修订意见, 2012年10月16日,汽标委在杭州召开了GB 1589及相关标准修订行业研讨会。会议对前期工作进行了通报,针对各企业代表对GB 1589—2004标准在实施及企业新产品开发中所遇到的问题进行了梳理和汇总,并就下一阶段工作进行了布置和安排。会议研究成立了车辆运输车专项验证项目组,开展半挂车辆运输列车和中置轴车辆运输列车的试验验证工作。 杭州会议后,车辆运输车专项验证项目组召开会议,研究了车辆运输车的半挂车、中置轴挂车、铰接列车、中置轴列车的长度调整问题,以及通道圆及外摆值等指标的论证方案,并制定了工作计划。会后该工作组完成了半挂车辆运输列车及中置轴车辆运输列车的计算机模拟及实车验证试验。 2013年1月25日,汽标委在深圳召开GB1589标准修订会议。集中研究了牵引销和牵引鞍座的技术尺寸、车辆运输车(半挂列车、中置轴列车)、侧帘车等的问题,形成了统一意见。
嘉兴万达广场2014.3月份安全月度检查例会会议纪要
嘉兴万达广场3月份安全月度检查例会会议纪要会议时间:2014年3月25日上午10:00 会议地点:会议室 参加人员:嘉兴万达广场投资有限公司、厦门勤奋监理、中建二局项目安全部、四川宏信、上海桑田、重庆律郡、嘉兴宏鑫、上海柏安、无锡荣大、上海舒城、上海万城、宜海架业、上海明鹏、湖南望新、二局安装、浙江鸿飞、平湖明春、鸿基租赁、浙江工业、上海大洋(人员详见会议签到表) 会议主持人:郑总 一、徐旺(中建二局) B区安全工作汇报: 1、现场文明施工现状及问题 B1区重庆律郡总体较好,四川宏信文明施工较差,B2区上海 柏安较好,嘉兴宏鑫文明施工较差 2、悬挑脚手架及悬挑卸料平台现状及问题 现场悬挑脚手架部分连墙件被擅自拆除,安全网污染严重,架 体端头部位处理不完善,悬挑式卸料平台预埋件布置不当 3、基坑工程现状及问题 基坑边缘采用定型化防护,总体较好 4、模板支架现状及问题 现场模板支架存在问题较严重,立杆间距较大,扫地杆纵横向 未设置齐全,B1区高支模未按照方案施工
5、现场人员安全行为现状及问题 现场安全行为总体较差,不系帽带人员很多,吸烟现象严重 6、施工用电现状及问题 现场三级配电箱损坏较多,发现部分单位使用插线板 7、人货电梯现状及问题 现场人货电梯已经陆续开始投入使用,总体运行平稳 8、塔式起重机现状及问题 塔式起重机运行平稳,租赁单位应加强指挥工安全教育 9、施工机具现状及问题 现场部分圆盘锯防护罩未及时安装,洋气乙炔瓶未分类存放, 使用距离在5米之内 10、下月工作计划 4月份项目将大力推行局沪安全标准化管理,针对工程进展, 开展安全隐患专项治理活动,保证项目安全平稳的运行 二、王东(中建二局) A区安全工作汇报: 1、A区施工现状及进度 A区4#楼主体4层,6#楼主体十层,8#楼十六层,10#楼主体 六层 2、3月份安全工作完成情况 3月份项目安全部积极响应局沪安全教育月活动号召,组织工 人进行专项安全教育,累计培训人数达2000余人。本月安全 部组织相关单位进行了全面安全大检查,同时各单位也对本施 工区域进行自查,其中检查出安全隐患159条,下发了整改单 18张,联系单9张。根据项目申报省级文明工的要求,项目 部对现场进行二次平面规划
中华人民共和国国家标准汽车车架修理技术条件
中华人民共和国国家标准汽车车架修理技术条件 UDC 629.113.011.3.004.124GB 3800-83 Technical requirements for automobileframes being overhauied 本标准适用于边梁式车架的大修。修理竣工的车架应符合本标准的要求。 1 技术要求 1.1 车架应无泥砂、油污、锈蚀及袭纹。 1.2 车架宽度极限偏差为-3+4mm。 1.3 车架纵梁上平面及侧面的纵向直线度公差,在任意1000mm长度上为3mm,在全长上为其长度的千分之一。 1.4 车架总成左、右纵梁上平面应在同一平面内,其平面度公差为被测平面长度的千分之一点五。 1.5 纵梁侧面对车架上平面的垂直度公差为纵梁高度的百分之一。 1.6 车架主要横梁对纵梁的垂直度公差不大于横梁长度的千分之二。 1.7 车架分段(如下图)检查,各段对角线长度差不大于5mm。 注:aa'--前钢板前支架销承孔轴线; bb'--前钢板后支架销承孔轴线; cc'--后钢板前支架销承孔轴线; dd'--后钢板后支架销承孔轴线; ab'、a'b--第Ⅰ段对角线; bc'、b'c--第Ⅱ段对角线; cd'、c'd--第Ⅲ段对角线; ac'、a'c--第Ⅳ段对角线;
1.8 左右钢板弹簧固定支架销孔应同轴,其同轴度公差为φ 2.0mm(按GB 1958-80《形状和位置公差检测规定》检测方法5-1进行检测)。前后固定支架销孔轴线间的距离左、右相差:轴距在4000mm及其以下的应不大于2mm,轴距在4000mm以上的应不大于3mm。 1.9 车架的焊接应符合焊接规范。焊缝应平整、光滑、无焊瘤、弧坑,咬边深度不大于0.5mm,咬边长度不大于焊缝长度的百分之十五,并不得有气孔、夹渣等缺陷。 1.10 车架挖补或截修的焊缝方向,除特殊车架外,不允许与棱线垂直、重叠;焊缝及其周围基体金属上,不应有裂纹。 1.11 铆接件的接合面必须贴紧,铆钉应充满钉孔,铆钉头不得有裂纹、歪斜、残缺,所有铆钉不得以螺栓代替。 1.12 前后保险杠应平整,形状符合原设计规定。 注:原设计是指制造厂和按规定程序批准的技术文件(下同)。 1.13 车架的其他附属装置及其安装应符合原设计规定。 1.14 修竣车架所增加的重量不得超过原设计重量的百分之十。 1.15 修竣的车架应进行防锈处理。 1.16 除本标准规定外,其他技术要求可参照原设计执行。 2 检验规则 经检验合格的车架应签发合格证。 附加说明: 本标准由中华人民共和国交通部提出,由交通部标准计量研究所归口。 本标准由河北省交通局、安徽省交通厅、四川省交通厅负责起草。 本标准主要起草人董先为、厉鸿培、陈盛模。
汽车维修行业标准
汽车维修行业标准
国家职业标准:汽车修理工 1. 职业概况 职业名称 汽车修理工。 职业定义 使用工、夹、量具,仪器仪表及检修设备进行汽车的维护、修理和调试的人员。 职业等级 本职业共设五个等级,分别为:初级(国家职业资格五级)、中级(国家职业资格四级)、高级(国家职业资格三级)、技师(国家职业资格二级)、高级技师(国家职业资格一级)。 职业环境条件 室内、外,常温。 职业能力特征 基本文化程度
高中毕业(含同等学力)。 培训要求 培训期限 全日制职业学校教育,根据其培养目标和教学计划确定。晋级培训期限:初级不少于600标准学时;中级不少于500标准学时;高级不少于320标准学时;技师不少于200标准学时;高级技师不少于120标准学时。 培训教师 理论培训教师应具有本职业(专业)大学本科以上学历或中级以上专业技术职务;实际操作教师:培训初、中级人员的教师应具有高级职业资格证书,培训高级人员的教师应具有技师职业资格证书,培训技师、高级技师的教师应具有本专业高级专业技术职务或高级技师职业资格证书,且在本岗位工作3年以上。 培训场地设备 理论培训场地应具有可容纳20名以上学员的标准教室,并配备投影仪、电视机及播放设备。实际操作培训场所应具有600 m2以上能满足培训要求的场地,且有相应的设备、仪器仪表和必要的工具、夹具、量具,通风条件良好、光线充足、安全设施完善。 鉴定要求 适用对象 从事或准备从事本职业的人员。 申报条件 ——初级(具备以下条件之一者) (1)经本职业初级正规培训达规定标准学时数,并取得毕(结)业证书。 (2)在本职业连续见习工作2年以上。 (3)本职业学徒期满。
汽车行业常用标准集锦(pdf21个,doc3个,ppt6个)4
第六章公差与配合 教学目的: 了解互换性的概念、形位公差和表面粗糙度的基本知识,掌握圆柱体的公差与配合;学会使用国家公差与配合、形位公差标准,并能根据具体零件和机械正确选择公差等级、公差带、配合的种类和表面粗糙度。 教学内容: 公差与配合的基本术语、国标公差等级、基本偏差系列、形位公差和粗糙度。 重点:公差配合与选用 难点:公差配合的选用计算 参考教材:《机械基础》刘泽深等主编中国建工出版社 2000 《机械设计基础》杨可桢主编高等教育出版社 2003 《机械设计》濮良贵主编高等教育出版社 2004 具体教学内容: §1互换性的基本概念 一.互换性的概念 在制成的同一规格零件中,不需作任何挑选或附加加工(如钳工修配)就可以装在机器或部件上,而且可达到原定使用性能的特性。有完全互换和不完全互换。 二.互换性的意义 1流水线生产、自动生产 2使用维修 三.互换性包括的内容 几何参数、机械性能、理化参数。
四.加工误差 尺寸误差、形状误差、表面相互位置。 §2光滑圆柱体的公差于配合 一.基本术语与定义 1.孔:圆柱形内表面和其他非圆柱内貌的统称。 2.轴:圆柱形外表面和其他非圆柱外貌的统称。 3.尺寸:用特定单位表示长度值的数字,机械制图用mm为单位。 4.基本尺寸:设计给定的尺寸。孔,大写字母表示,轴,小写字母表示。 5.实际尺寸:通过测量所得尺寸。 6.极限尺寸:允许尺寸变化的两个界限值。其中,数值大的称为最大极限尺寸,数值小的称为最小极限尺寸。 7.尺寸偏差:某一尺寸减去基本尺寸的代数差。 上偏差(ES,es)= 最大极限尺寸-基本尺寸 下偏差(EI,ei )= 最小极限尺寸-基本尺寸 极限偏差:实际尺寸-基本尺寸 ※偏差可正可负,也可为零。 8.尺寸公差:允许尺寸的变动量。
大众汽车常用标准汇总
大众汽车常用标准汇总 一、焊接标准 VW 01101 类似国标中描述焊接类型并用图例表示的标准。对各种焊接进行了概括的介绍,并规定了各种标准的图示符号,是焊接里很概括的一章。 eg: VW 01103 凸点焊标准(weld projection),图示表示了不同的凸点焊情况,规定了不同厚度的板件进行凸点焊时凸点的直径、高度等。 eg: VW 01105 点焊标准(spot weld),详细介绍了点焊的设计思想、焊点排布、强度计算和校合,以及焊接头的布置和形状参考,有图示、查表表格和例题,教科书般的详尽标准。规定了焊接点的熔深要求、焊接头大小标准、缩印要求。 焊接后表面等级OG1\OG2\OG3的定义。 规定了图纸表注标准。
使用此标准焊接的熔深、劈凿(或者母材撕裂)都以VW01105为认可标准(Acceptance criteria)。实验方法也定义为VW01105,实际上此标准内第3 章有具体的实验标准比如PV6702等。考虑到VW01105比较全面而且大众认可,所以不把具体的小标准作为实验方法。 VW 01105-2 针对铝制金属的特殊焊接要求,包括特殊的熔深、劈凿要求。 eg: VW 01105-3 镀锌合金的特殊焊接要求,对焊板、焊接头有比较详细的描述,对校合计算过程有详细介绍,熔深和劈凿依然参考VW01105-1。
VW 01105-4 针对大厚度钢和高强度钢的焊接标准,介绍了特殊的技术要求和过程控制。介绍了“焊接强度——焊接时间”图,介绍了标准的图纸表注方法。eg: VW 01106 弧焊、二氧化碳保护焊、熔焊标准。规定了图纸标注的标准。详尽规定了不同钢板焊接时的要求和标准,图例表示了各种焊接情况下焊缝的形式。介绍了应力计算标准、涂层材料。规定了不同钢材焊接时焊缝的评估标准。认可标准和实验方法均为VW 01106。 eg:
万达商场租赁合同正式版
The cooperation clause formulated through joint consultation regulates the behavior of the parties to the contract, has legal effect and is protected by the state. 万达商场租赁合同正式版
万达商场租赁合同正式版 下载提示:此协议资料适用于经过共同协商而制定的合作条款,对应条款规范合同当事人的行为,并 具有法律效力,受到国家的保护。如果有一方违反合同,或者其他人非法干预合同的履行,则要承担 法律责任。文档可以直接使用,也可根据实际需要修订后使用。 出租方(下称“甲方”): 身份证号: 承租方(下称“乙方”): 身份证号: 鉴于: 1、甲方是位于东莞市东城区东纵路208号万达广场(下称“万达广场”)室外步行街号铺(下称“该商铺”)的合法产权人。 2、甲方拟出租/乙方拟承租该商铺。 鉴于前述情形,甲、乙双方本着平等自愿、诚实信用等原则,经协商一致,就该
商铺租赁及相关物业管理等事宜达成如下条款。 一、该商铺的位置、面积和用途 1、该商铺的位置:万达广场室外步行街号(附图)。 2、该商铺的建筑面积:平方米。该建筑面积数为本合同项下的租金、物业服务费等款项、费用计取基数。 3、该商铺的租赁用途:乙方承租该商铺用于经营(商品类别) 或其他经营用途。 二、租期和开业 1、本合同租期为:自年月日起至年月日止。 2、甲方同意在年月日前(下称“进场装修日”)将该商铺按现状(即毛坯房的
方式)移交给乙方,届时双方应签署交接确认书。自年月日至年月日,为乙方的装修期。装修期内,乙方无需支付租金(即俗称免租装修期)。 3、乙方应在免租装修期内完成装修。乙方在免租装修期内需交纳物业服务费,需承担免租装修期内该商铺发生的能源费等相关费用,并应在进场装修前向该商铺所在商场的物业服务公司(大连万达物业管理有限公司东莞分公司,下称“管理公司”)预付。 三、租金 1、双方约定该商铺租金为: (1) 年月日至年月日,每月租金为元人民币(大写:整)。
全国各地商场及步行街的信息
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汽车行业常用标准集锦6
公差与配合 1.1、公差、偏差和配合的基本规定(GB/T1800.2--1998) 1.1.1、公差、偏差和配合的代号 1)标准公差等级代号标准公差等级代号用符号IT和数字组成,例如:IT7。当其与代表基本偏差的字母一起组成公差带时,省略IT字母,如h7。 标准公差等级分IT01、IT0、IT1至IT18,共20级。 2)基本偏差代号基本偏差代号,对孔用大写字母A,……,ZC表示;对轴用小写字母a,……,zc表示,各28个。 其中,基本偏差H代表基准孔;h代表基准轴。 3)上偏差代号上偏差的代号,对孔用大写字母“ES”表示,对轴用小写字母“es”表示。 4)下偏差代号下偏差的代号,对孔用大写字母“EI”表示,对轴用小写字母“ei”表示。 1.1.2、公差带、注公差尺寸和配合的表示 1)公差带的表示公差带用基本偏差的字母和公差数字表示。 例如:H7孔公差带;h7轴公差带。 2)注公差尺寸的表示注公差的尺寸用基本尺寸后跟所要求的公差带或(和)对应的偏差值表示。 例如:32H7;80js15;100g6等 当使用有限的字母组的装置传输信息时,例如电报,在标注前加以下字母: 对孔为H或h;对轴为S或s。 例如:50H5或为H50H5或h50H5; 50h6或为S50h6或s50h6。 这种表示方法不能在图样上使用。 3)配合的表示配合用相同的基本尺寸后跟孔、轴公差带表示。孔、轴公差带写成分数形式,分子为孔公差带,分母为轴公差带。 例如:52H7/g6 当使用有限的字母组的装置传输信息时,例如电报,在标注前加注以下字母: 对孔为H或h;对轴为S或s。 例如:52H7/g6或为H52H7/S52g6或h52H7/s52g6 1.1.3、注公差尺寸的解释 (1)公差标注按GB/T 4249 在图样上注明“公差原则按01/23#34”的工件公差应按以下情况解释: 1)线性尺寸公差线性尺寸公差仅控制要素的局部实际尺寸(两点法测量),不控制要素本身的形状误差(如圆柱要素的圆度和轴线直线度误差或平行平面要素的平面度误差)。尺寸公差也不能控制单一要素的几何相关要素。 2)包容要求结合零件具有配合功能的单一要素,不论是圆柱表面还是两平行表面,图样上应在其尺寸极限偏差或公差带代号之后加注符号“”。这表明尺寸和形状彼此相关,并且不能超越以工件最大实体尺寸形成的理想包容面。 (2)公差标注不按GB/T4249 在图上未注明“公差原则按GB/T4249”的工件公差在规定的长度内应按下列方式解释: 1)对孔与实际孔表面内接的最大理想圆柱体直径不小于孔的最大实体极限;孔上任何