HPLC-UV及ELSD法测定续断皂苷Ⅵ的比较研究

HPLC-UV及ELSD法测定续断皂苷Ⅵ的比较研究
HPLC-UV及ELSD法测定续断皂苷Ⅵ的比较研究

万方数据

万方数据

万方数据

HPLC-UV及ELSD法测定续断皂苷Ⅵ的比较研究

作者:彭英, 韦英杰, 陈宁, 朱明新, 石金城

作者单位:彭英,朱明新(南京工业大学,江苏,南京,210009), 韦英杰,陈宁,石金城(南京工业大学,江苏,南京,210009;江苏省药物研究所有限公司,江苏,南京,210009)

刊名:

中成药

英文刊名:CHINESE TRADITIONAL PATENT MEDICINE

年,卷(期):2010,32(2)

被引用次数:4次

参考文献(5条)

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2.纪顺心;吴雪琴;李崇芳中药续断对大鼠实验性骨损伤愈合作用的观察 1997(02)

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4.胥秀英;郑一敏;傅善权道地药材川续断指纹图谱模糊模式识别研究[期刊论文]-药物研究 2008(05)

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引证文献(4条)

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2.刘京晶.郭宝林.黄文华.肖培根.宋海波.王川易HILIC-HPLC测续断药材中多种皂苷含量[期刊论文]-中国中药杂志 2011(17)

3.王玉梅.喻悦.李会军HPLC-ELSD法测定青葙子中青葙苷Ⅰ[期刊论文]-中成药 2013(9)

4.姚岚.董彩霞.李默影.刘丽芳皂苷及其体内代谢产物的分析方法研究进展[期刊论文]-中国野生植物资源

2011(5)

引用本文格式:彭英.韦英杰.陈宁.朱明新.石金城HPLC-UV及ELSD法测定续断皂苷Ⅵ的比较研究[期刊论文]-中成药 2010(2)

比色法测定总皂苷含量

比色法测定总皂苷含量 1、仪器 紫外分光光度计、电热恒温水浴锅、电子分析天平、旋转蒸发器、大孔树脂柱(内径0.8 cm,长20 cm)。 试剂 无水甲醇、无水乙醇、正丁醇、冰醋酸、高氯酸和香草醛等均为分析纯;大孔树脂 DM-301、对照品、洋金花药品。 2、方法 2.1 对照品溶液的制备 取对照品 10 mg,加甲醇溶解定容至 10 ml,制成 1 mg/ml对照品溶液。 2.2供试品溶液的制备 取药材粉末(过4号筛)约0.2 g,准确称定,置于150 ml具塞锥形瓶中。精密加入50 ml 甲醇后,准确称重。浸泡60 min,超声提取30 min,再次称重,补加甲醇至超声前重量。过滤,精密移取续滤液25 ml于蒸发皿中,水浴蒸发至干,用5 ml水溶解残留物,所得溶液缓缓通过已处理好的大孔吸附树脂柱(径高比1:5),以水50 ml洗脱,弃去水液,之后再以50 ml 95%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,蒸干。用20 ml水分次将残留物溶解转移至60 ml分液漏斗中,用水饱和的正丁醇萃取(4×20 ml),合并正丁醇层,减压蒸干。残留物用70%甲醇溶解转移至10 ml量瓶中,定容,摇匀,即得。 2.3测定波长的选择 精密移取1.5 ml的对照品及l ml供试品溶液,于70℃水浴蒸发至干,加入5%香草醛一冰醋酸(临用新配)0.2ml,高氯酸0.8 ml,于60℃水浴显色15 min后流水冷却 lO min。加冰醋酸5 ml,摇匀。立即在紫外分光光度计于400~800 nm波长下扫描,同时空白溶液作参比。对照品及供试品的最大吸收波长均在475 nm,故选取475 nm为检测波长。 2.4线性关系考察 精密量取对照品溶液0.60,1.50,2.40,3.30,4.20 ml,置具塞试管中,于70℃水浴蒸发至干,加入5%香草醛-冰醋酸(临用新配)O.2 ml,高氯酸0.8 ml,于60℃水浴显色15min后流水冷却10 min。各加冰醋酸5 ml,摇匀,以同法平行处理的空白溶剂为空白,在475 nm处测定吸光度。以对照品质量c(mg)为横坐标,吸光度A为纵坐标,使用软件OriginPro 7.0进行回归分析,得到回归方程为:A=0.007 4+1.120 83c, r=0.999 97。在0.096—0.672 mg内线性关系良好。 2.5精密度试验 精密吸取对照品溶液1.5 ml,依“2.4”项下方法显色测定吸收度,连续测定5次,结果RSD为0.254%,说明仪器的测试性能良好。 2.6稳定性试验 取对照品和样品溶液,依“2.4”项下方法操作,按不同时间测定吸光度,结果见表1。2.7样品含量测定 取供试品溶液6份,每份精密吸取80 μ L,按“2.3”项的方法显色后,在540nm测定吸光度,计算样品含量。 2.8加样回收率试验 取供试品溶液8份,每份精密吸取80μL,加入0.2mg/mL齐墩果酸溶液50 u I。,按“2.3”项的方法显色后,在540hm测定吸光度,计算加样回收率。

高效液相色谱法测定甲硝唑的含量

实验二高效液相色谱法测定甲硝唑的含 量 一、实验目的 1.熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能。 2.了解反相色谱法的原理、优点和应用。 3.了解流动相的选择依据及配制方法。 4.掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基本方法。 二、实验原理 高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入的供试品,由流动相带入柱内,各成分在柱内被分离,并依次进入检测器,由数据处理系统记录色谱信号。本实验以甲硝唑为测定对象,以反相HPLC来分离检测未知样中甲硝唑的含量。以甲硝唑标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归,再根据样品中甲硝唑的峰面积,由线性方程计算其浓度。 三、实验内容 (一)实验仪器与材料 1.实验仪器:高效液相色谱仪、精密天平、50mL烧杯、玻璃棒、称量纸、10mL容量瓶、50mL 容量瓶、注射器、洗瓶。 2.实验材料:甲硝唑原料、蒸馏水、HCl(0.1mol/L)、乙腈、三氟乙酸、超纯水。 (二)实验内容 1、色谱操作条件的制定: 色谱柱:C18柱(250×4.6mm,5μm); 流动相:乙腈:0.02%三氟乙酸水溶液(20:80) 流速:1mL/min 检测波长:277nm 柱温:35℃ 进样量:20μL 2、标准溶液配制 精密称取在105℃条件下干燥至恒重的甲硝唑对照品10mg,置于50mL容量瓶中,用0.1mol/L的HCl溶液溶解并定容至刻度,即得浓度为0.2mg/mL的甲硝唑标准储备液,备用。 3、标准曲线的建立 (1)精密量取甲硝唑标准储备液分别为0.3mL、0.5 mL、0.7 mL、0.9 mL、1.1 mL置于10 mL的容量瓶中,然后用0.1mol/L的HCl溶液定容至刻度,得到浓度梯度为6μg/mL、10μg/mL、14μg/mL、18μg/mL和22μg/mL的标准溶液,分别过0.22μm的微孔滤膜过滤,滤

三七总皂苷中各组分含量测定方法的改进

作者简介:冯亮(1980-),男,正攻读药剂学专业的博士学位。3通讯作者(C orrespondent author ),jxh1013@https://www.360docs.net/doc/9f7945960.html, 三七总皂苷中各组分含量测定方法的改进 冯 亮,蒋学华3,叶利民 (四川大学华西药学院,四川成都610041) 摘要:目的 用薄层扫描法(T LSC )和高效液相色谱法(HP LC )测定三七总皂苷中人参皂苷Rb 1(Rb 1)、人参皂苷Rg 1(Rg 1)和三 七皂苷R 1(R 1)3种主要成分的含量,并对两种方法进行比较,为修订质量标准中含量测定方法及含量限度提供依据。方法  T LSC 法用正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)上层溶液为展开剂,27%硫酸无水乙醇溶液为显色剂,测定波长λs =535nm ,λR =460nm ;HP LC 法用C 18色谱柱,以乙腈-水线性梯度洗脱,0min (25∶75)~15min (45∶55);流速1.5ml ?min -1;测定波长200nm 。结 果 T LSC 法测得三七总皂苷原料中Rb 1、Rg 1、R 1的含量分别为31.07%、23.30%、9.35%;HP LC 法测得三七总皂苷原料中Rb 1、 Rg 1、R 1含量分别为30.46%、22.65%、5.83%。结论 HP LC 法能将多种皂苷很好地分离并检测,简便快速,减少了误差。其准 确度和测定结果的稳定性均优于T LSC 法。 关键词:薄层扫描法;高效液相色谱法;三七总皂苷;人参皂苷Rb 1;人参皂苷Rg 1;三七皂苷R 1中图分类号:R927 文献标识码:A 文章编号:1006-0103(2006)02-0187-03 Improvement of determination method of the main components in Panax notoginseng saponions FE NGLiang ,J I ANG Xue -hua 3,YE Li -ming (West China School o f Pharmacy ,Sichuan Univer sity ,Chengdu 610041,China ) Abstract :OBJECTIVE T LSC and HP LC were adopted to determine the contents of ginsenoside Rb 1,ginsenoside Rg 1and sanchinoside R 1in Panax notoginseng saponions.And results of the tw o methods were compared ,which could provide the basis of revising the determination method in quality standard.METH ODS T LSC has been established with the upper layer of the mixture of butanol -ethyl acetate -H 2O (4∶1∶5)as developing s olvent ,and 27%sulphuric acid ethanol s olution as coloring reagent ,λs =535nm ,λR =460nm.HP LC was adopted with C 18column ,acetonitrile -H 2O (25∶75at 0min and 45∶55at 15min ,linear gradient elution )was used as m obile phase and detective wave 2length was set at 200nm.The flow rate was 1.5ml ?min -1.RESU LTS The content of ginsenoside Rb 1,ginsenoside Rg 1and sanchinoside R 1in Panax notoginseng saponions determined by T LSC was 31.07%,23.30%and 9.35%;and that determined by HP LC was 30.46%,22.65%and 5.83%,respectively.CONC L USION HP LC could separate and determine various components in Panax notoginseng saponions and determine them.Its accuracy and stability are better than T LSC. K ey w ords :T LSC ;HP LC ;Panax notoginseng saponions ;G insenoside Rb 1;G insenoside Rg 1;Sanchinoside R 1C LC number :R927 Document code :A Article I D :1006-0103(2006)02-0187-03 三七是五加科人参属植物Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen 的干燥根;含有皂苷、多糖、氨基酸等多种化学成分。其中三七总皂苷(Panax noto 2 ginseng saponions )为其主要的有效成分,具有活血化 淤的功效。三七总皂苷含有人参皂苷Rb 1、Rb 2、Rc 、Rd 、Re 、R f 、Rg 1、Rg 2、Rh 1和三七皂苷R 1、R 2、R 3、R 4、R 6等20余种皂苷成分,均属达玛烷型(Dammarane type )四环三萜皂苷。其中人参皂苷Rb 1(Rb 1)、人参 皂苷Rg 1(Rg 1)是三七总皂苷中含量最高的两个成分,而三七皂苷R 1(R 1)则是三七总皂苷的特征化合物[1]。对于三七总皂苷原料及其口服制剂,文献[2]规定采用比色法测定总皂苷含量。而比色法在操作过程中存在操作烦琐、影响因素多及重复性差等问题[3],尤其是不能分别测定三七总皂苷中各主要成 分的含量。为此,特建立了薄层扫描法(T LSC )测定 三七总皂苷原料中Rb 1、Rg 1和R 1的含量[4];同时建立了HP LC 含量测定法,并与T LSC 法进行比较,为重新修订质量标准中含量测定方法及含量限度提供依据。 1 实验部分 1.1 仪器与试药 LC -9A 高效液相色谱仪,SPD -6AV 紫外检测 器(日本岛津);CS -930薄层扫描仪;Dikma Diam on 2sil C 18色谱柱(200mm ×4.6mm ,5μ m ,美国Dikma 公司);硅胶G 板(大连化物所)。Rb 1、Rg 1和R 1对照 品(中国药品生物制品检定所);三七总皂苷(云南特 安钠制备厂);乙腈(色谱纯,美国Dikma 公司);水(超纯水);其余试剂均为分析纯。1.2 T LSC 法1.2.1 含量测定 取三七总皂苷样品约50mg ,精 华西药学杂志 W C J ?P S 2006,21(2):187~189

保健食品中总皂苷的测定

1 总皂苷的测定(来源于《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版))1.1 试剂 1.1.1 Amberlite-XAD-2大孔树脂,Sigma化学公司、U.S.A.。 1.1.2 正丁醇:分析纯。 1.1.3 乙醇:分析纯。 1.1.4 中性氧化铝:层析用,100-200目。 1.1.5 人参皂甙Re:购自中国药品生物制品检定所。 1.1.6 香草醛溶液:称取5g香草醛,加冰乙酸溶解并定容至100mL。 1.1.7 高氯酸:分析纯。 1.1.8 冰乙酸:分析纯。 1.1.9 人参皂苷Re标准溶液:精确称取人参皂苷Re标准品0.020g,用甲醇溶解并定容至10.0mL,即每毫升含人参皂苷Re 2.0 mg 1.2 仪器 1.2.1 比色计 1.2.2 层析柱 1.3 实验步骤 1.3.1 试样处理 1.3.1.1 固体试样:称取1.000 g左右的试样(根据试样含人参量定),置于100 mL 容量瓶中,加少量水,超声30 min,再用水定容至100 mL,摇匀,放置,吸取上清液1.0 mL进行柱层析。 1.3.1.2 液体试样:含乙醇的补酒类保健食品,吸取1.0 mL试样放水浴挥干,用水浴溶解残渣,用此液进行柱层析。 非乙醇类的液体试样:吸取1.0 mL试样(假如浓度高、或颜色深,需稀释一定体积后再取1.0mL)进行柱层析。 1.3.2 柱层析:用10mL注射器作层吸管,内装3cm Amberlite-XAD-2大孔树脂,上加1cm中性氧化铝。先用25mL70%乙醇洗柱,弃去洗脱液,再用25mL水洗柱,弃去洗脱液,精确加入1.0mL已处理好的试样溶液(见1.3.1),用25mL水洗柱,弃去洗脱液,用25mL70%乙醇洗脱人参皂苷,收集洗脱液于蒸发皿中,置于60℃水浴挥干。以此作显色用。

高效液相色谱法测定氨基酸

脑蛋白水解物溶液氨基酸含量分析方法研究方案 1、仪器与试药 1.1 仪器 1525型高效液相色谱仪(美国Waters公司);Waters1525型泵,Waters2487型检测器,Waters5CH 型柱温箱,WatersBREEZE数据处理软件,水浴恒温器(精度±0.1℃),旋涡器,微量移液器,衍生专用管;CP225D型分析天平(德国);4umNora-Pak TM C18(3.9mm×150mm,5μm)色谱柱(美国) 1.2 药品与试剂 16种氨基酸(门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸)由中国药品生物制品检定所提供。 脑蛋白水解物注射液,云南盟生药业有限公司生产,规格10ml/支。批号:2013、2013、2013. 乙腈(HPLC级);EDTA(分析纯);磷酸(分析纯);二乙胺(分析纯);三水合乙酸钠(分析纯)。2、方法与结果 2.1色谱条件流动相A为AccQTag醋酸—磷酸盐缓冲液;由AccQTagEluent A浓缩制备AccQTag洗脱液,用前稀释10倍(或按以下方法配制:称19.04g三水合乙酸钠,加1000ml纯化水,搅拌,溶解,用50%H3PO4将pH调至5.2,加入1ml 1mg/ml的EDTA溶液,加入2.37ml二乙胺,用50%H3PO4滴定至pH4.95,用水溶性过滤器过滤,超声,脱气,备用。);流动相B为60% HPLC级乙腈,按梯度表梯度洗脱;流速1.0ml/min;检测波长为254nm;进样量5μl;柱温38℃。

时间 (min) 流速 (ml/min) % A % B 曲线 起始 1.0 100 0 * 0.5 1.0 98 2 6 15.0 1.0 93 7 6 19.0 1.0 90 10 6 32.0 1.0 65 35 6 33.0 1.0 65 35 6 34.0 1.0 0 100 6 37.0 1.0 0 100 6 38.0 1.0 100 0 6 42.0 1.0 100 0 6 2.2对照品溶液、供试品溶液的制备分别精密称取16种氨基酸标准品,用纯化水配制成浓度如下表 所示的混合溶液。 名称浓度(mg/ml)名称浓度(mg/ml)名称浓度(mg/ml)门冬氨酸 4.80 苏氨酸 1.20 异亮氨酸 1.10 丝氨酸 2.60 丙氨酸 2.50 亮氨酸 2.70 谷氨酸 6.20 脯氨酸 2.00 苯丙氨酸 1.20 甘氨酸 2.40 缬氨酸 1.60 色氨酸0.40 组氨酸0.90 甲硫氨酸 1.00 精氨酸 1.20 赖氨酸 3.45 取上述溶液0.1ml,加纯化水0.9ml,旋涡器混匀,作为对照品溶液;取脑蛋白水解物注射液,加水稀释成含总氮为1mg/ml的溶液,取0.1ml,加纯化水0.9ml,旋涡器混匀,作为供试品溶液。 衍生剂配制将水浴锅设置55℃,加热,待温度稳定, 取AccQFluor衍生剂2A,轻轻弹击,确保AccQFluor 衍生剂2A粉末全落在瓶底,吸取AccQFluor衍生稀释剂2B 1ml并放掉,清洗移液器管,再吸取AccQFluor 衍生稀释剂2B 1ml,加入AccQFluor衍生剂2A的瓶中,振荡10秒钟,在恒温水浴锅中溶解,保持10分钟。于干燥器中室温保存一周,于干燥器中4℃保存二周。 2.3测定方法分别取20ul对照品溶液和供试品溶液加入衍生专用管底部,加入60uLAccQFluor硼酸

HPLC测定复方丹参片中三七总皂苷的含量_曾荣华

中国医药指南 2010 年 2 月第 8 卷第 6 期Guide of China Medicine, February 2010, V ol.8, No.621 论 著 和预后的辅助指标。 综上所述,采用免疫组织化学SP法检测p53、VEGF、PCNA在膀胱移行细胞癌组织中的表达,对于判断膀胱移行细胞癌恶性程度和预后有较好的临床应用价值。 参考文献 [1] Lane DP. P53 guanlian of the genoma [J].Nature,1992,358(6381): 15-16. [2] 阎洪涛,龚百生,廖勇,等.膀胱移行细胞癌组织中P53和血管内皮 生长因子表达的关系及临床意义[J].中华泌尿外科杂志,2006, 27(3):178-180.[3] Ferrara N,Henzel WJ. Pituitary follicular cells secrete a novel heparin-binding. Growth factor. Speci? c for vascular endothelial cells [J]. Biochem Biophys Res Commun,1989,161(2):851-858. [4] 郭雪涛,崔明玉.P53、P16、TGF-α、EGFR、VEGF在膀胱移行 细胞癌组织中的表达及意义[J].现代泌尿外科杂志,2007,14(4): 225-228. [5] Miyachi K,Frilzler MJ,Tan EM,et al. Autoantibody to a nuclear antigen in proliferating cells [J].J Immunol,1978,121(6):2228-2234. [6] 卢童,杨为民,章群. 膀胱移行细胞癌组织中P16、P53和PCNA的 表达及其意义[J].临床泌尿外科杂志,2008,23(1):58-60. 复方丹参片是2005年版《中国药典》一部收载的品种,由丹参、三七和冰片三昧药组成,有活血化瘀、理气止痛之功效,用于心血管疾病可显著扩张冠状动脉,增加血流量,减少心肌耗氧量,改变血液流变性。同时也能改善糖尿病患者心、脑血管及神经系统并发症的症状及体征。三七是复方丹参片的重要药物组成,国内文献报道[1-3]。对不同厂家生产的本品的含量比较只是针对丹参中主要成分丹参酮ⅡA和丹酚酸B。三七总皂苷含量变化幅度较大,致使药品质量和疗效存在很大的差异。三七中的主要有效成分是人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1,已有文献报道采用HPLC法测定以上成分的含量来控制制剂的质量[4,5]。本文采用HPLC法,同时对复方丹参片中的三七总皂苷3种主要有效成分进行了含量测定,可用于控制复方丹参片的质量,保证其临床用药有效性提供参考。 1 资料与方法 1.1 资料 仪器与试剂:Agilentl100高效液相色谱仪(美国惠普公司); Agilentl100系列可变波长检测器;Diamonsil C18柱(5μm,250mm×4.6mm,迪马公司);BP211D电子分析天平(北京塞多利斯天平有限公1 广东省肇庆市第一人民医院药剂科(526021) 2 广东省肇庆医学专科学校(526021) HPLC测定复方丹参片中三七总皂苷的含量 曾荣华1邓雪媚1卢慧娴1莫肇江1刘燕2 【摘要】目的建立复方丹参片中三七有效成分的含量测定方法。方法采用HPLC法测定本品中三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量。结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1线性范围分别依次为0.850~8.524、0.922~9.013、0.377~3.317μg;平均回收率分别为101.1%、101.2%、103.2%,RSD分别为1.5%、1.6%、1.8%。结论本方法简便可靠,结果稳定,可用于丹心舒胶囊中三七的有效成分的含量测定。 【关键词】复方丹参片;人参皂苷Rg1;人参皂苷Rb1;三七皂苷R1;含量测定 中图分类号:R927.2 文献标识码:B 文章编号:1671-8194(2010)06-0021-03 Determiation the Contents of Panax Notoginseng Saponins in Compound Danshen Tablets by HPLC ZENG Rong-hua1,DENG Xue-mei1,LU Hui-xian1,MO Zhao-jiang1, LIU Yan2 (1 Department of Pharmacy, The First People' s Hospital of Zhaoqing, Zhaoqing 526021,China; 2 Zhaoqing Medical College, Zhaoqing 526021, China) [Abstract]Objective To analyze the active compounds of Panax notoginseng and Salviae miltiorrhizae in Compound Danshen Tablets. Methods HPLC was used to analyze the contents of ginsenoside Rg1, ginsenoside Rb1 and notoginsenoside R1 in Compound Danshen Tablets. Results The linear ranges of ginsenoside Rg1, ginsenoside Rb1, and notoginsenoside R1 were 0.850~8.524, 0.922~9.013, 0.377~3.317μg. With average recoveries of 101.1%(RSD=1.5%), 101.2% (RSD =1.6%), 103.2% (RSD=1.8%). Conclusion The method is simple, reliable and stable, which could be used for the quality control of Compound Danshen Tablets. [Key words]Compound Danshen Tablets; Ginsenoside Rg1; Ginsenoside Rb1; Notoginsenoside R1; Determination 司);KQ100型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。 人参皂苷Rg1(批号:110703-200637)、人参皂苷Rb1(批号: 110704-200634)、三七皂苷R1(批号:110745-200619),对照品均供 含量测定用,由中国药品生物制品检定所提供。实验中乙腈为色谱纯, 水为纯净水,甲醇为分析纯;复方丹参片(广州白云山中药厂)。 1.2 方法 1.2.1 色谱条件 色谱柱:Diamonsil C18柱(5μm,250mm×4.6mm);以乙腈为 流动相A,0.05%磷酸水溶液为流动相B,进行二元梯度洗脱,洗脱程 序[6]:0→12min流动相A 22%,12→20min流动相A 22%→28%,20→ 60min流动相A 28%→43%;流动相B 81%→64%;流速:1.0mL/min; 柱温:30 ℃;检测波长:203nm,进样量为10μL。 1.2.2 供试品溶液的制备 取复方丹参片20片(除去包衣),研碎,精密称取约0.8g,加乙醚DOI:10.15912/https://www.360docs.net/doc/9f7945960.html,ki.gocm.2010.06.024

高效液相色谱(HPLC)法测定邻苯二甲酸酯

高效液相色谱(HPLC )法测定邻苯二甲酸酯 一、实验目的: 1. 了解高效液相色谱仪原理; 2. 学习高效液相色谱仪的基本操作方法; 3. 利用高效液相色谱仪测定邻苯二甲酸酯、邻苯二乙酸酯、邻苯二丁酸酯的峰图和含量。 二、实验原理: ① 高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC )是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。高效液相色谱法有“四高一广”的特点:高压、高速、高效、高灵敏度和应用范围广。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。 在高效液相色谱中,若采用非极性固定相,如十八烷基键合相,极性流动相,即构成反相色谱分离系统。反之,则称为正相色谱分离系统。反相色谱系统所使用的流动相成本较低,应用也更为广泛。 定量分析时,为便于准确测量,要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度(R )的计算公式为: R = 2[t (R2)-t (R1)] /1.7*(W 1+W 2) //式中 t (R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间;t (R1)为相邻两峰中前一峰的保留时间; W 1 及W 2为此相邻两峰的半峰宽。 除另外有规定外,分离度应大于1.5。 ② 本实验对象为邻苯二甲酸酯,又称酞酸酯,缩写PAE ,常被用作塑料增塑剂。它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品,如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液等数百种产品中。 但研究表明,邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用,是一类内分泌干扰物。同时也有一定的致癌作用。 如果要检测不同条件对谱图分离的影响,可按表1配制几种物质的混合溶液,在不同条件下进行HPLC 分离检测。 三.仪器与试剂 1、仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪,50ul 微量注射器。 2、试剂 甲醇(色谱专用) ,高纯水,样品。 出峰次序 样品组成 1 邻苯二甲酸二甲酯(DMP ) 2 邻苯二甲酸二乙酯(DEP) 3 邻苯二甲酸二丁酯(DBP)

总皂苷检测方法-总皂苷含量测定法-实验流程图-李熙灿-XicanLi

总皂苷检测方法-总皂苷含量测定法(香草醛法):实验流程图2017.10 【文献】Xican Li, Qiuping Hu, Shuxia Jiang, Fei Li, Jian Lin, Lu Han,Yuling Hong, Wenbiao Lu, Yaoxiang Gao, Dongfeng Chen. Folium Sennae Protects against Hydroxyl Radical-induced DNA Damage via Antioxidant Mechanism: An in vitro Study. Botanical studies. 2014; 55:16. 【简介】皂苷广泛存在于中药及其他植物中,而且化学结构大同小异的皂苷往往同时存在。为了测定这些皂苷的总含量,便建立了总皂苷的检测方法。总皂苷的检测多使用分光光度法,并以某种标准品绘制工作曲线,依该曲线所建立的回归方程,计算其含量。 【溶液配制】 1.香草醛-冰醋酸溶液(测试液)配制:精密称取25mg香草醛,加冰醋酸定容至5mL。即制成5mg/mL 香草醛-冰醋酸测试液。 2.样品液配制:将待检测的样品用甲醇溶解,配成约5mg/mL的样品液。具体浓度视样品的溶解度而定, 但是必须有精确的数据。 3.齐墩果酸标准品溶液配制:精密称取齐墩果酸1mg,加甲醇定容至5mL,配成0.2mg/mL齐墩果酸标 准品溶液。(也可以使用其他的皂苷物质,如人参皂苷Rg3。但必须是纯的化合物) 4. 高氯酸:分析纯试剂。 5. 冰醋酸:即纯的无水乙酸(分析纯) 【检测方法与实验流程图】 【标准曲线绘制】(齐墩果酸) 取上述齐墩果酸溶液x μL (x=0,40,80,120,160,200),依“实验流程图”,在70℃水浴15mim 后呈桃红色。以第一份溶液(x=0)作为空白对照,测A540nm值。以“产物混合物”时的齐墩果酸的质量,为横坐标,A540nm值为纵坐标,绘制标准曲线。以此标准曲线计算,得线性回归方程。 【样品液的测定】 将上述“实验流程图”中的“齐墩果酸标准品溶液”换成样品液,进行实验,并测定其A540nm值。将此A540nm代入线性回归方程,即可计算出其总皂苷的含量(以齐墩果酸计)。 【说明】 1.此法是以齐墩果酸为标准品测得总皂苷的含量。所以,其结果应表示为,如:“某某提取物中含 有0.12mg/g的总皂苷(以齐墩果酸计)”。这并不意味着该提取物中真的就含有齐墩果酸。 2.“实验流程图”中,在“彻底挥干溶剂”一步中,如果溶剂挥干不彻底,哪怕是有一点点,都 会干扰。水也要彻底挥干。 1

比色法测定甘草中总皂苷的含量

比色法测定甘草中总皂苷的含量 【摘要】目的建立甘草中甘草总皂苷含量的测定方法。方法用香草醛 高氯酸试剂,在589 nm处有最大吸收,并对比色条件进行了优化。结果该法精密度高,1 h内稳定,平均加样回收率为99.03%。结论此法简便、准确、稳定性、重复性好,可用于甘草总皂苷的测定。 【关键词】甘草;总皂苷;香草醛 高氯酸 Determination of Total Saponins in Glycyrrhiza by Colorimetry Abstract:ObjectiveTo establish the method of determination of total saponins in Glycyrrhiza. MethodsUse Vanillin HClO4 as the chromogenic reagent and detect the maximum absorption at the wavelength of 589 nm. Choose the best chromogenic preparation to determine the contents of the samples. Results The precision of the method is high. The color of the treated samples was stable within 1h. The average value of the recovery was 99.03%.ConclusionThe method is simple, accurate, highly sensitive and reproducible. It may be used for the quantitative determination of total saponins in Glycyrrhiza. Key words:Glycyrrhiza; Total saponins; Vanillin- HClO4 甘草为豆科(Leguminosae)甘草属(Glycyrrhiza)植物,为我国重要的传统中草药。甘草属植物在世界上共有30余种,我国有8种,分布在内蒙、西北、东北等地。目前,被《中国药典》认定的甘草药材原植物有3种[1],即乌拉尔甘草、胀果甘草和光果甘草的根及根茎。其中以乌拉尔甘草分布最广,产量最多,质量最好。研究发现甘草属植物中三萜类皂苷具有含量高、生理活性强的特点,不仅具有抗溃疡、消炎、解毒等生理活性,今年研究还发现具有抗病毒、抗癌活性。 皂苷定量分析方法的研究已有很多报道[2~7],包括重量法、比色法、薄层扫描法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)等。重量法具有测定值稳定、重现性好等特点,但分析流程时间长,操作繁琐,试剂消耗量大,得到的皂苷中一般混有一定量的杂质,使结果偏高,误差较大。比色法一般采用香草醛-硫酸比色法[2]。张中伟发现香草醛-硫酸法稳定性差,而香草醛 高氯酸作为三萜皂苷常用的显色剂,较香草醛 硫酸的精密度高,且受糖类干扰较小[6]。薄层扫描法和高效液相法对测定样品、设备要求较高,且只适合一些特定皂苷的测定。综合考虑,以香草醛 高氯酸作为显色剂,测定甘草中总皂苷的含量,建立一种简便、准确的方法。 1 器材 1.1 仪器721型分光光度计,上海分析仪器厂;KQ 50DE型数控超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司;AB204 S型分析天平,METTLER公司;紫外扫描分光光度计,岛津UV 240。 1.2 试剂高氯酸,甲醇,香草醛,冰醋酸(以上试剂均为分析纯),甘草酸单铵盐标准品(甘草酸单铵盐10 mg溶解于甲醇中定容至10 ml,浓度为1 mg·ml-1,甘草(购于黑龙江省大庆市大同区)。 2 方法 2.1 最大波长的确定准确吸取0.5 ml标准品溶液,置于10 ml具塞试管中,70℃水浴挥干溶剂,加入0.2 ml的5%香草醛-冰醋酸溶液,再加入0.8 ml的高氯酸,摇匀,于

三七总皂苷工艺方法

三七总皂昔工艺方法 【摘要】目的研究氧化铝柱层析精制三七总皂昔工艺。方法采用HPLCfe测定三七总皂昔的含量,考察洗脱剂的浓度、洗脱剂的用量和吸附剂用量对工艺的影响。结果确 定最佳精制工艺为:洗脱剂的浓度为55%乙醇,洗脱剂的用量为10倍吸附剂的用量,吸附剂用量为5倍三七总皂昔的用量。结论通过氧化铝柱层析精制后,三七总皂昔的收率大于70%含量大于80%说明此精制工艺是可行的。 【关键词】三七总皂昔氧化铝高效液相法 三七为五加科植物三七的干燥根及根茎[1],三七总皂昔是中药三七的有效部位,主要含有三七皂昔R1,人参皂昔Rg1和人参皂昔Rb1等达玛烷型三站皂昔类化合物[2] c 现代药理研究证明:三七总皂昔具有多方面的生物活性,主要表现在扩张冠状动脉、增加冠脉血流量、改善心肌代谢、抗自由基、

抗凝、钙拮抗等方面[3]。 目前三七总皂昔的富集与纯化一般采 用大孔吸附树脂来完成[4],纯化后二七总 皂昔的含量达到60%U 上。为了提高药物的 安全性和有效性,提高其成药原料药的纯度 本实验拟米用氧化铝柱层析对三七总皂昔 的纯化物进行精制[5],并对工艺进行了考 察,为进一步的制剂学研究打下基础。 1仪器与试药 仪器与设备 RE52-99旋转蒸器;DK-S22型电热恒温 水浴锅;JA-1003型电子分析天平;电热鼓 风干燥箱;美国Tsp 高效液相色谱仪; TspP-2000 泵、 TspUV-1000UV-VIS 检测 TspPC100咱谱工作站; 材料与试剂 三七总皂昔提取物; 三七皂昔R1、人参皂昔 对照品;乙月青为色谱纯,水 为二次蒸偕水。 2方法与结果 色谱条件 色谱柱:ODSC1魁;流动相:A 为乙月青, 犯? 希; 色谱柱:ODSC1三七总皂昔对照品: Rg1、人参皂昔Rb1

高效液相色谱法测定有机化合物的含量

实验四高效液相色谱法测定有机化合物的含量 [目的要求] 1、了解仪器各部分的构造及功能。 2、掌握样品、流动相的处理,仪器维护等基本知识。 3、学会简单样品的分析操作过程。 [基本原理] 高效液相色谱仪液体作为流动相,并采用颗粒极细的高效固定相的主色谱分离技术,在基本理论方面与气相色谱没有显著不同,它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质差别。与气相色谱相比,高效液相色谱对样品的适用性强,不受分析对象挥发性和热稳定性的限制,可以弥补气相色谱法的不足。 液相色谱根据固定向的性质可分为吸附色谱、键合相色谱、离子交换色谱和大小排阻色谱。其中反相键合相色谱应用最广,键合相色谱法是将类似于气相色谱中固定液的液体通过化学反应键合到硅胶表面,从而形成固定相。若采用极性键合相、非极性流动相,则称为正相色谱;采用非极性键合相,极性流动相,则称为反相色谱。这种分离的保留值大小,主要决定于组分分子与键合固定液分子间作用力的大小。 反相键合相色谱采用醇-水或腈-水体系作为流动相,纯水廉价易得,紫外吸收小,在纯水中添加各种物质可改变流动相选择性。使用最广泛的反相键合相是十八烷基键合相,即让十八烷基(C18H37―)键合到硅胶表面,这也就是我们通常所说的碳十八柱。 [仪器试剂] 高效液相色谱仪(包括储液器、高压泵、自动进样器、色谱柱、柱温箱、检测器、工作站)、过滤装置 待测样品(浓度约100 ppm)、甲醇、二次水 [实验步骤] 1、仪器使用前的准备工作 (1)样品与流动相的处理 配好的溶液需要用0.45 μm的一次性过滤膜过滤。纯有机相或含一定比便例有机相的就要用有机系的滤膜,水相或缓冲盐的就要用水系滤膜。 水、甲醇等过滤后即可使用;水放置一天以上需重新过滤或换新鲜的水。含稳定剂的流动相需经过特殊处理,或使用色谱纯的流动相。 (2)更换泵头里清洗瓶中的清洗液 流动相不同,清洗液也不同,如果流动相为甲醇-水体系,可以用50%的甲醇;如果流动相含有电解质,通常用95%去离子水甚至高纯水。 如果仪器经常使用建议每周更换两次,如果仪器很少使用则每次使用前必须更换。(3)更换托盘里洗针瓶中的洗液 洗液一般为:50%的甲醇。

总皂苷的测定方法

总皂苷的测定方法(分光光度法) 本方法适用于功能性食品中总皂苷的测定。 本方法人参皂苷Re的最低检出量为2μg/mL。 一、方法提要 样品中总皂苷经提取、PT—大孔吸附树脂柱预分离后,在酸性条件下,香草醛与人参皂苷生成有色化合物,以人参皂苷Re为对照品,于560nm处比色测定。 二、仪器 1.722分光光度计。 2.PT—大孔吸附树脂柱(河北省津杨滤材厂)。 3.超声波振荡器。 三、试剂 1.甲醇(分析纯)。 2.乙醇(分析纯)。 3.人参皂苷Re标准品(中国药品生物制品检定所)。 4.5%香草醛溶液:称取5g香草醛,加冰乙酸溶解并定容至l00mL。 5.高氯酸(分析纯)。 6.冰乙酸(分析纯)。 7.人参皂苷Re标准溶液:精确称取人参皂苷Re标准品20.0mg,用甲醇溶解并定容至10mL,即每1mL含人参皂苷Re2.0mg。 8.重蒸水。 四、测定步骤 1.样品处理: (1)固体样品 称取1.0g左右样品于100mL烧杯中,加入20~40mL 85%乙醇,超声波振荡30min,再定容至50mL,摇匀,放置,吸取上清液1.0mL挥干后以水溶解残渣,进行柱分离。 (2)液体样品 含乙醇的酒类样品:准确吸取1.0mL样品放于蒸发皿中,蒸干,用水溶解残渣,用此液进行柱层析;非乙醇类液体样品:准确吸取1.0mL样品(如浓度高或颜色深,需稀释一定体积后再取1.0mL)直接进行柱分离。 2.柱层析

以PT—大孔吸附树脂柱进行层析分离,准确吸取上述已处理好的样品溶液1.0mL上柱,用15mL水洗柱,以洗去糖分等水溶性杂质,弃去洗脱液,再用20mL85%乙醇洗脱总皂苷,收集洗脱液于蒸发皿中,于水浴上蒸干,以此作显色用。 3显色 在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL 5%香草醛冰乙酸溶液,转动蒸发皿,使残渣溶解,再加0.8mL高氯酸,混匀后移入l0mL比色管中,塞紧盖子于60℃以下水浴上加温15min取出,冷却后准确加入冰乙酸5.0mL,摇匀后以1.0cm 比色皿、于560nm处与人参皂苷Re标准管同时比色。 4标准曲线的绘制: 吸取人参皂苷Re标准溶液(2.0mg/mL)0、20、40、60、80、100μL(相当于人参皂苷Re0、40、80、120、160、200μg),于10mL比色管中,用氮气吹干,同4.(3)显色步骤测定吸光度。并绘制标准曲线。 人参总皂苷浓度为20~200μg/mL之间与吸光度值呈线性关系,相关系数(r)0.999。 五、结果计算 式中X——样品中总皂苷(以人参皂苷Re计)(g/kg或g/L); m——试样质量或试液体积(g或mL); V1——样品提取液总体积(mL); V2——样品提取液测定用体积(mL); m1——从标准曲线查得待测液中人参皂苷Re量(μg)。

总皂苷的测定方法

A1 总皂苷的测定方法 方法来源:《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)保健食品中总皂苷的测定方法(分光光度法) A1.1 试剂 Amberlite-XAD-2大孔树脂,Sigma化学公司U.S.A 正丁醇分析纯 乙醇分析纯 中性氧化铝层析用,100-200目 人参皂苷Re 购自中国药品生物制品检定所 香草醛溶液称取5g香草醛,加冰乙酸溶解并定容至100ml。 高氯酸分析纯 冰乙酸分析纯 人参皂苷Re标准溶液:精确称取人参皂苷Re标准品0.020g,用甲醇溶解并定容至10.0ml,即每毫升含人参皂苷Re2.0mg。 A1.2 仪器 比色计、层析柱 A1.3 试验步骤 A1.3.1 试样处理 A1.3.1.1 固体试样:称取1.000g左右的试样(根据试样含人参量定),置于100ml 容量瓶中,加少量水,超声30min,再用水定容至100ml,摇匀,放置,吸取上清液1.0ml进行柱层析。 A1.3.1.2 柱层析:用10mL注射器作层析管,内装3cm Amberlite-XAD-2大孔树脂,上加1cm中性氧化铝。先用25ml70%乙醇洗柱,弃去洗脱液,再用25ml水洗柱,弃去洗脱液,精确加入1.0ml已处理好的试样溶液(见3.1),用25ml水洗柱,弃去洗脱液,用25m170%乙醇洗脱人参皂苷,收集洗脱液于蒸发皿中,置于60℃水浴挥干。以此作显色用。 A1.3.1.3 显色:在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2ml5%香草醛冰乙酸溶液,转动蒸发皿,使残渣都溶解,再加0.8ml高氯酸,混匀后移入5ml比色管中,塞紧盖子于60℃水浴上加热10min,取出,冰浴冷却后,准确加入冰乙酸5.0ml,

最新高效液相色谱法测定维生素C

高效液相色谱法测定维生素C的含量 【摘要】高效液相色谱法已经成为解决生命科学、医药学发展中各种难题的重要手段,在实验室中也广泛应用于物质的定性定量分析。本实验中利用高效液相色谱法对维生素C进行定量分析,所采用的定量分析方法为外标法,通过做出标准溶液浓度与峰面积的标准曲线进而对样品中的维生素C进行定量检测。 【关键词】高效液相色谱法、维生素C、含量 1、引言 维生素 C(Vitamin C, Vc)又叫抗坏血酸,是一种水溶性维生素。Vc 在体内参与多种反应,如氧化还原过程,在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用。人体内缺乏 Vc 时容易导致坏血病。同时,由于 Vc 是一种水溶性的强有力抗氧化剂并参与胶原蛋白的合成,它同时还具有防癌、预防动脉硬化、治疗贫血、抗氧化和提高人体免疫力等功效。Vc 在蔬果中普遍存在,尤其是柑桔类水果中含量较高。樱桃、番石榴、辣椒、猕猴桃等水果中 Vc 含量在 50-300 mg/100 g。 溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationary phase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography,HPLC)是在经典液相色谱法的基础上,于 60 年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography,HPLC)。HPLC 系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等,现代 HPLC 仪还有微机控制系统,进行自动化仪器控制和数据处理。制备型 HPLC 仪还备有自动馏分收集装置。 2、HPLC测定维生素C的含量 2.1、仪器试剂 2.1.1、仪器 高效液相色谱仪(Agilent1260),色谱柱:C18 柱 (250 mm×4.6 mm, I.D.5 μm);平头进样器。 2.1.2、试剂 乙腈(色谱纯),冰乙酸,维生素 C,磷酸二氢钾等均为分析纯,实验用水为超纯水。

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