36.盐炙对车前子中京尼平苷酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷含量的影响----卢丹逸

盐炙对车前子中京尼平苷酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷含量的影响卢丹逸，黄婉茹，马志国*

暨南大学药学院，广东广州510632

*通讯作者：马志国，副教授，从事中药炮制学与中药药剂学的教学和科研工作。Tel:(020)85223784，E-mail:mzg79@https://www.360docs.net/doc/989472342.html,

摘要：目的：建立车前子中京尼平苷酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的RP-HPLC 含量测定方法，并研究三个成分在盐炙前后的含量变化情况；方法：采用Phecda ODS(150 mm × 4.6 mm，5 μm)色谱柱，柱温：30℃；流动相为甲醇（A）-0.1%甲酸（B），梯度洗脱（0 min，15% A；5 min，20% A；30 min，55% A）,流速：1.0 mL/min；检测波长：250 nm和330 nm。比较7批车前子盐炙前后京尼平苷酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的含量。结果：方法学考察结果表明，所建立的HPLC方法准确、稳定、可靠；车前子中的京尼平苷酸、毛蕊花糖苷炮制后含量降低，异毛蕊花糖苷盐炙后含量增加。结论：车前子中毛蕊花糖苷在炮制过程中可能部分转化为异毛蕊花糖苷。将京尼平苷酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷共同作为评价车前子及其炮制品的质量控制的指标成分更加合理。

关键词：车前子；盐炙；京尼平苷酸；毛蕊花糖苷；异毛蕊花糖苷

Reaserch on the main components in Semen Plantaginis about processing

LU Danyi，HUANG Wanru，MA Zhi-guo *

College of Pharmacy, Jinan University, Guangzhou 510632, China;

Abstract: Objective: To establish an RP-HPLC method for determination of Geniposidic acid, Acteoside and Isoacteoside in Semen Plantaginis pieces, and the three components in the change situation, stir fried with salt. Method: the Phecda ODS (150 mm × 4.6 mm, 5 μ m) column, the column temperature: 30 ℃; the mobile phase of methanol (A) -0.1% acid (B), Gradient elution (0 min, 5 min, 15% A; 20% A;

30 min, 55% A), flow rate: 1 mL/min; the detection wavelength: 250 nm and 330 nm. Comparison of different batches of plantain seed processing fingerprint determination of the contents of Geniposidic acid, Acteoside and Isoacteoside and psyllium Plantago in pieces and salt. Results: The study results show that the HPLC method, the method is accurate, stable, reliable, Geniposidic acid, Acteoside content decreased after processing after processing, isoacteoside content increased. Conclusion: Acteoside in Plantago may be partially converted into isoacteoside in the processing process, Geniposidic acid, acteoside and isoacteoside as the common evaluation of Semen Plantaginis plantain seeds index and quality control components more reasonable. Keywords: Plantago; Stir fried with salt; Geniposidic acid; Acteoside; Isoacteoside

车前子为车前科植物车前(Plantago asiatica L)或平车前(Plantago depressssa Wiltd)的干燥成熟种子，具有清热利尿通淋，渗湿止泻，明目，祛痰等功效，用于热淋涩痛，水肿胀满，暑湿泄泻，目赤肿痛，痰热咳嗽。车前子中的主要化学成分是以京尼平苷酸为代表的环烯醚萜及其苷类成分，以毛蕊花糖苷为代表的苯乙醇苷类成分。《中国药典》2010年版以京尼平苷酸和毛蕊花糖苷作为其质量控制指标：规定车前子含京尼平苷酸(C16H22O10)不得少于0.50％，毛蕊花糖苷(C29H36O15)不得少于0.40％；盐车前子含京尼平苷酸(C16H22O10)不得少于0.40％，毛蕊花糖苷(C29H36O15)不得少于0.30％[1]，炮制品的含量限度低于生品，提示在炮制过程中指标成分含量降低。

关于盐炙对车前子中指标成分的影响研究报道很少，高明哲等曾比较了盐炒和清炒两种炮制方法对车前子苷含量的影响，结果表明车前子苷性质稳定受不同炮制方法影响较小[2]。刘荣华等采用HPLC法，对江西大粒车前子的微波炮制品、清炒品、盐炙品以及生品的水提液进行指纹图谱研究，结果表明不同炮制方法对化学成分有较大的影响，其中微波炮制品对化学成分影响最大[3]。李丽等曾用高效液相色谱法对车前子炮制前后阿克苷（即毛蕊花糖苷）含量变化进行了研究，实验结果表明阿克苷的含量明显降低[4]。为此，我们拟对盐炙前后车前子中京尼平苷酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的含量进行比较，考察盐炙对其的影响，为车前子及盐车前子的质量评价提供参考，为车前子炮制原理的研究提供研究基础。

1 实验仪器与试药

Agilent 1200 Series高效液相色谱仪（美国，G1316B DAD检测器，G1311A 四元低压梯度泵，G1322A在线真空脱气机，G1329A自动进样器，G1316A柱温箱）；Agilent Chemstation 色谱工作站；ALC-110.4万分之一电子天平（北京塞多利斯仪器系统有限公司），KQ—250E型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司），DFY—200摇摆式高速中药粉碎机（温苓市中德中药机械有限公司）；小保姆FK-130S型家用电热锅购于电器超市。

京尼平苷酸对照品购自成都瑞芬思生物科技有限公司，毛蕊花糖苷、异毛蕊

花糖苷对照品为实验室自制(利用1H NMR、13C NMR、MS等波谱技术鉴定了化学结构)，HPLC检出纯度均大于98%；甲醇（色谱纯，购自上海晶纯试剂有限公司）；甲醇（分析纯，广州化学试剂厂）；甲酸（分析纯，天津市富宇精细化工有限公司）；实验用水为纯净水(华润怡宝食品饮料有限公司)；其他试剂均为分析纯。7批不同批次车前子，经暨南大学药学院生药学教研室张英副教授鉴定为车前科植物车前（Plantago asiatica L）的干燥成熟种子。

2 方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1对照品溶液的制备

精密称取2.53 mg京尼平苷酸、2.65 mg毛蕊花糖苷和1.13 mg异毛蕊花糖苷对照品。置5 mL容量瓶中，加50% 甲醇定容，配成浓度分别为506、530、226 μg/mL的京尼平苷酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷混合对照品溶液，置4℃冰箱备用。

2.1.2供试品溶液的制备

盐炙车前子的制备：参照《中国药典》（2010版）盐炙法(附录ⅡD)，取不同批次车前子各50 g，放入经预热后的锅内，清炒车前子至有轻微爆鸣声，喷洒20% 盐水5 mL至车前子全部浸润，炒干，放凉，即得盐车前子。

将车前子生品及其盐炙品粉碎，过筛（40目），各取1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入50% 甲醇25 mL，回流提取1 h，放凉，用50%甲醇补足重量，滤过，取续滤液，过0.45μm微孔滤膜，即得。

2.2色谱条件

采用Phecda ODS(150mm×4.6mm，5μm)色谱柱；流动相：甲醇(A)-0.1%甲酸(B)梯度洗脱（0 min，15% A；5 min，20% A；30 min，55% A），流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；进样量：20 μL；检测波长：京尼平苷酸在250 nm处检测，毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷在330 nm处检测。在该条件下，3种成分的色谱图见图1。

图1 对照品、车前子生品、盐炙品的代表性液相色谱图

1. 京尼平苷酸，

2. 毛蕊花糖苷，

3. 异毛蕊花糖苷

2.3 线性关系

精密吸取混合对照品溶液适量，分别稀释至不同浓度，使京尼平苷酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的浓度分别为 2.53-506.0μg/mL、2.65-530.0μg/mL、1.13-226.0μg/mL，按“2.2”项下色谱条件分别进样，以3个对照品的进样浓度( μg/mL ) 为横坐标，对应的色谱峰面积为纵坐标，进行线性回归。结果表明各成分在各自进样范围内线性关系良好，见表1。

表1 京尼平苷酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的线性关系

化合物标准曲线r 线性范围（μg/mL）京尼平苷酸Y = 18.909X - 5.997 1.0000 2.53-506

毛蕊花糖苷异毛蕊花糖苷Y = 33.733X - 51.788

Y= 26.105X - 22.422

0.9999

0.9999

2.65-530

1.13-226.00

2.4 精密度试验

三个连续工作日内，每天将对照品溶液连续进样分析6次，测定京尼平苷酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷峰面积积分值，计算日内精密度RSD值分别为1.20、0.83、1.31%，日间精密度RSD值分别为0.47、1.63、0.33%，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液20 μL，于制备后0、2、4、8、16、24 h分别进样

测定京尼平苷酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷峰面积积分值，计算RSD值分别为1.28、1.03、0.84%，表明供试品溶液在24 h内测定稳定。

2.6 重复性试验

精密称取同一样品6份，照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样20μL。测定计算京尼平苷酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷含量的平均值（n=6)分别为10.40、7.89、1.40 mg/g，RSD分别为1.20、0.83，1.31%，表明方法重复性良好。

2.7 加样回收率试验

取“2.6”项下已知含量的样品粉末6份，每份约0.5 g，精密称定，分别精密加入京尼平苷酸对照品溶液（0.524 mg/mL）、毛蕊花糖苷对照品溶液（0.398 mg/mL）、异毛蕊花糖苷对照品溶液（0.096 mg/mL）各10mL，再以50%甲醇补足至50 mL，然后按“2.1.3”项下方法制备供试液，进样分析。京尼平苷酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷平均回收率（n=6）分别为97.61%、97.20%、102.44%；RSD 值分别为2.52%、2.45%、2.38 %。

2.8 样品含量测定

称取不同批次的药材干燥粉末约1g，精密称定，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液。分别精密吸取20 μL注入高效液相色谱仪，测定，以外标法计算含量。结果见表2。

表2 车前子、盐车前子中3个指标成分的含量（%，n=2）

3讨论

3.1本实验建立了一套HPLC方法用于车前子药材中京尼平苷酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的含量测定，通过对3个成分的方法学考察，表明所建立的方法准确、简单，可为车前子药材的质量控制提供参考。

3.2试验结果表明，车前子经盐炙后，京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的含量下降，而异毛蕊花糖苷含量升高。京尼平苷酸含量降低的原因可能是炮制时加热使部分京尼平苷酸受到破坏，因而含量下降。进一步分析毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的结构，两者为同分异构体，推测车前子在盐炙过程中，高温使得二者发生了部分转化，即毛蕊花糖苷部分转化为异毛蕊花糖苷含量，化学反应式如图2。化学成分的变化很可能带来其药效的变化，本实验可为车前子的炮制原理研究提供参考。

加热

毛蕊花糖苷异毛蕊花糖苷

图2 车前子炮制过程中毛蕊花糖苷可能转化为异毛蕊花糖苷

3.3《中国药典》2010年版一部中以京尼平苷酸和毛蕊花糖苷作为车前子和盐车前子质量控制指标：通过本论文的研究，建议将异毛蕊花糖苷增加为车前子及盐车前子的含量测定指标成分，并制定合理的含量限度，这对于车前子尤其是其炮制品的质量控制具有重要的应用价值。

参考文献

[1]中国药典.中华人民共和国药典委员会.北京：化学工业出版社,2010年版一部：

63.

[2]高明哲，袁昌鲁，徐青，梁鑫淼等.高效液相色谱法测定大车前子中车前子苷

的含量.现代中药研究与实践，2004，18：34-36

[3]刘荣华，马志林，邵峰，王玲等.江西大粒车前子不同炮制品HPLC指纹图谱

研究.中药研究，2007，70-71

[4]李丽，刘志强，刘淑莹，曹荣等.车前子炮制前后阿克苷含量变化的HPLC研

究.424-425