高效液相色谱法同时测定杜仲叶中芦丁和槲皮素含量的研究

槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定

槐花米中芦丁的提取与鉴定背景知识芦丁（Rutin）又称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica L 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高(含量可达12-16%)，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水形成的苷。芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有3分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10 000；沸水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液，酸化后又可析出，因此，本实验采用碱提取酸沉淀法提取芦丁。芦丁具有维生素P样作用。能维持血管的正常通透性，减低血管的脆性，缩短流血时间，可作为高血压病的辅助治疗剂。亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。

一、实验目的通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作；熟悉芦丁、槲皮素的结构性质和检识方法。二、实验要求独立完成实验，从槐花米中提取出芦丁并进行鉴定。三、实验原理芦丁属黄酮类化合物，分子中有较多酚羟基，具弱酸性，易溶于热碱中，酸化后又析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁，又利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶精制。四、实验材料和器皿【器皿】烧杯（500ml）2个，试管2个，布氏漏斗1个，玻璃棒1根，抽滤瓶1个，滴管，移液管（10ml）1根，洗耳球1个，滤纸，pH试纸，电热炉，真空抽滤机。【材料】槐米花30 g，饱和石灰水，0.4%硼砂水溶液，镁粉，pH试纸，浓盐酸，95%乙醇，10% α萘酚乙醇溶液，浓硫酸，蒸馏水。五、实验内容操作步骤：称取30g槐花米于研钵中研成粉状物，置于500mL烧杯中，加入饱和石灰水，加热至沸，并不断搅拌，煮沸30分钟后，趁热抽滤。然后用浓盐酸调节pH值为4~5。放置1-2h，使沉淀完全，抽滤，沉淀用水洗涤2~3次，得到芦丁的粗产物。流程图：

芦丁的提取分离及鉴定A4

2011届本科生毕业论文题目芦丁的提取分离及鉴定作者单位陇东学院化学化工学院指导老师胡浩斌作者姓名张娜娜专业班级2007级化学本科(2)班提交时间二〇一一年四月

2011届本科生毕业论文芦丁的提取分离及鉴定张娜娜，胡浩斌（陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳745000）摘要：目的以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法，掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮甙，甙元和糖的部分鉴定方法。方法采用水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法对芦丁进行提取分离，并对其进行定性分析及色谱鉴定。结果水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法，三种方法均可制的芦丁，且质量合格。结论从提高芦丁产率和纯度的角度出发，乙醇回流是较理想的提取方法。制得芦丁产率高，且测定方法简单、迅速、灵敏度高。关键词：槐花米；芦丁；槲皮素；提取；分离；鉴定 Extraction, Seperation and Identification of Rutin Zhang Nana, Hu Haobin (College of Chemistry and Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 745000, Gansu) Abstraction: Objection Rutin as an example to learn the extraction of flavonoids square. Grasp the main properties and flavonoids ingredients flavonoids glucoside. Method W ith the water extraction method, buck (limewater) extraction,organic solvent (alcohol) extraction to extraction and separation of rutin and chromatographic identification. Result With water formulation,Buck (limewater) extraction,organic solvent (alcohol) method of extraction rutin backflow separation,three methods are made rutin and obtaining rutin quality qualified. Conclusion From improve yield and purity of rutin angle, ethanol refluxing was ideal extraction method. Preparation of rutin of high yield,high sensitivity. determination method is simple to rutin rapid. Key word: Sophora japonica; rutin; quercetin; extraction; separation; identification 引言随着人们生活水平及质量的不断提高，心脑血管病的发病率也呈上升趋势，而且死亡率居各种疾病之首，因此，对治疗和预防心脑血管病的药品与保健品的开发研究就显得尤为重要， 1

HPLC 法测定桑叶中芦丁的含量

228 第12卷第5期 2010 年 5 月辽宁中医药大学学报 JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM Vol. 12 No. 5 May，2010 桑叶为桑科桑属植物桑Morus alba L.的干燥叶，味苦甘、寒，归肺、肝经，具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目之功能，用于风热感冒、肺热燥咳、头晕头痛、目赤昏花等症。在《中华人民共和国药典》 2005版中[1] ，桑叶中芦丁的含量测定采用的是HPLC 法梯度洗脱，其操作重复性差，对实验设备要求相对较高，旨在建立以等度洗脱，采用HPLC 法测定桑叶中芦丁的含量。 1 仪器试剂和药材 1.1 仪器高效液相色谱仪（岛津LC-10A，日本）， KQ-100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。 1.2 试剂甲醇、乙腈均为色谱纯，其他试剂为分析纯。 1.3 药材桑叶经辽宁中医药大学植物教研室王冰教授鉴定为桑科桑属植物桑Morus alba L.的干燥叶。 2 实验方法 2.1 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-醋酸-水（15：10：2.6：72.4）为流动相，检测波长为358nm，流速： 1mL·min -1 。理论塔板数按芦丁计算应不低于3000。芦丁与相邻成分色谱峰的分离度应不小于1.5。见图 1~2。图1 芦丁对照品溶液HPLC 色谱图图2 桑叶供试品溶液HPLC 色谱图 2.2 对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品 10.32mg，置100mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1mL 含0.1032mg 的溶液，作为芦丁对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备精密称定桑叶1g, 置25mL 容量瓶中，甲醇超声提取30min，放冷，加甲醇至刻 HPLC 法测定桑叶中芦丁的含量周美环1，赵书楷1，陈淼2，张东方3 （1.沈阳东北大药房连锁店，辽宁沈阳 110023；2.神威药业有限公司，辽宁沈阳 110003；3.中国医科大学药学院，辽宁沈阳 110001）收稿日期：2009-10-05 作者简介：周美环（1975-），女，辽宁大连人，工程师，学士，主要从事药品质量管理。通讯作者：张东方（1975-），男，辽宁朝阳人，副教授，博士，研究方向：中药复方研究及新药开发。E-mail: syzdf@https://www.360docs.net/doc/909757299.html,。摘要：目的：在《中华人民共和国药典》中，桑叶中芦丁的含量测定方法采用的是HPLC 法梯度洗脱，其操作重复性差，对实验设备要求高，旨在建立以等度洗脱，采用HPLC 法测定桑叶中芦丁的含量。方法：采用HPLC 法，以甲醇-乙腈-醋酸-水（15：10：2.6：72.4）为流动相等度洗脱，以建立芦丁的含量测定方法。结果：采用HPLC 法测定桑叶中芦丁的含量稳定性良好，精密度良好，重复性良好，加样回收率良好，芦丁含量为0.46%~0.49%。结论：采用HPLC 等度洗脱测定桑叶中的芦丁方法可行。关键词：桑叶；HPLC；芦丁中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1673-842X (2010) 05- 0228- 02 Content of Rutin from Follium Mori is Determined by HPLC ZHOU Mei-huan 1, ZHAO Shu-kai 1, CHEN Miao 2, ZHANG Dong-fang 3 （1.Shenyang North-East Drug Store Chain, Shenyang 110023, Liaoning, China; 2.Shenwei Pharmaceutical Company, Shenyang 110003, Liaoning, China; 3. College of Pharmaceutical Science, China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning, China） Abstract： Objective : Content of rutin from Follium Mori is determined by HPLC in China Ph.，but gradient elution is difficult to repeat and equipment is not public. Methods : HPLC was used to determined content of rutin from Follium Mori, and its mobile phase is methanol-acetonitrile-acetic acid -water（15：10：2.6：72.4）. Results : Stability, Precision, repetition of HPLC all were better .Content of rutin was 0.46%~0.49%. Conclusion : The content determination of rutin from Follium Mori are feasible. Key words：Follium mori; HPLC; rutin DOI ：10.13194/j.jlunivtcm.2010.05.230.zhoumh.097

芦丁的提取及鉴定

实验二芦丁的提取及鉴定（一）概述芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。芦丁具有维生素P样作用。有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防治高血压病的辅助治疗剂，亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。实验目的和要求实验目的 ①通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 ②通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 ③了解UV及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。要求 ①要拿到以下三个化合物：芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰化合物。 ②能够拿根据化学试验及UV、NMR数据初步推断出芦丁的结构。并对黄酮类化合物的结构测定有一般性的了解。试验方法芦丁的提取与分离（见下图）芦丁的鉴定 ①芦丁的定性反应取芦丁3~4mg，加乙醇5~6ml使其溶解，分成三份作下述试验： A. 取上述溶液1~2ml，加2滴浓盐酸，在酌加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。 B. 取上述溶液1~2ml，然后滴加2%柠檬酸的甲醇溶液，注意观察颜色变化情况，在继续向试管中加入2%ZrOCl2的甲醇溶液，并详细记录颜色变化情况。 C. 取上述溶液1~2ml，然后再加入10%α-等体积的萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两液面产生的颜色变化。 ②芦丁的紫外光谱解析取芦丁溶于色谱纯甲醇中，加入规定的试剂，测定其UV光谱，试解析光谱并初步判断其结构。

HPLC法测定芦丁中芦丁和槲皮素的含量

HPLC法测定芦丁中芦丁和槲皮素的含量李启彬1，刘涛2，曹晓庆，李青丽（1．河南省驻马店市药品检验所，驻马店463000；2．河南天方药业股份有限公司，驻马店463000）摘要：目的利用HPLC测定芦丁中芦丁和槲皮素的含量。方法采用Zorbox SBC18 色谱柱，流动相为水-甲醇-乙酸（45:50 :5），流速1.0ml ·min-1,检测波长256nm。结果芦丁在60 ~ 140μg · ml-1 浓度范围内，线性关系良好，r =1.00 000，槲皮素在2.4 ~ 5.6μg ·ml-1 浓度范围内, 线性关系良好，r=0.99998。芦丁的平均回收率为99.3%，RSD为0.6%，槲皮素的平均回收率为99.6%，RSD为0.4%。结论本法结果准确，重复性良较好，方法简便可行。关键词：芦丁；槲皮素；HPLC Determinaition of Rutin and Its Quermination by HPLC LI Qi-bin1，LIU Tao2，CAO Xiao- qing，LI Qing-li（1. Zhumadian Institute of Quality Control of Drug, Zhumadian 463000,China；2. Henan Topfond Pharmaceutical Co.,Ltd Zhumadian463000,China） ABSTRACT: OBJECTIVE A HPLC method for the determination of rutin and its quermination was established. METHODS A zorbox SBC18 column was used，with the mobile phase of water-methanol-Vinegar(45：50：5)，at the flow rate of 1.0ml · min-1，the detection wavelength was 256nm. RESULTS The linear range of rutin (r=1.00000) was 60~140ug·ml-1，and quermination (r=0.99998) was 2.4~5.6μg ·ml-1，The average recovery of Rutin was 99.3%，RSD0.6%，and quermination was 99.6%，RSD0.4%.CONCLUSION It was accurate and rapid. KEY WORDS：rutin；quermination；HPLC 芦丁又名芸香苷、芸香苷是从槐米中提取的一种浅黄色或微绿色针状结晶或粉末。它具有降低毛细血管的异常通透性和脆性的作用。主要用于防治高血压病的辅助治疗。同时，它又是合成曲克芦丁的主要原料。现行卫生部药品标准采用紫外分光光度法测芦丁含量，用纸层析法测槲皮素的含量，方法复杂，操作费事，并且槲皮素无法定量，而用HPLC法操作简便，结果准确。

芦丁的提取分离和鉴定

综合化学实验: 芦丁的提取分离和鉴定芦丁简介: 芦丁（Rutin）又名芸香苷化学式: C27H30O16·3H2O，是一种浅黄色针状结晶有机化合物，广泛存在于自然界植物中，是一种被人们广泛使用的有机天然产物。目前已发现含有芦丁的植物至少在70种以上，常见的如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均有不同含量。尤其以中药槐米（豆科、槐属，槐树Sophorajaponica的花蕾）和荞麦中含量最高，因此槐米可作为大量提取芦丁的天然植物原料。中药槐米（炒碳）味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。西医研究其主要有效成分为有机化合物“芦丁”而中药槐米中芦丁的含量可高达12~16%，是主要的芦丁天然来源。槐米中还含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。研究文献证明芦丁具有VitP（维生素P）样作用（VitP具有生物类黄酮的功能，可防止维生素C被氧化而受到破坏，增强维生素功效；增加毛细血管壁强度，防止瘀伤。有助于牙龈出血的预防和治疗，有助于因内耳疾病引起的浮肿或头晕的治疗等）。而芦丁具有类似作用如可降低毛细血管脆性和调节通透性等，在医学临床上常将其用作毛细血管脆性引起的出血症以及防治高血压病等的辅助治疗药物。芦丁是由槲皮素（quercetin）3位上的羟基与芸香糖（rutinose，一种由葡萄糖glucose与鼠李糖rhamnose组成的双糖）脱水合成的苷，是一种浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无结晶水时188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。补充知识:

槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定

槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定槐米为豆科植物槐（Sophora japonica L ．）的未开放花蕾。味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。槐米常炒炭应用。槐米的主要化学成分为芦丁，其含量可达12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。芦丁具有Vitp 样作用，可降低毛细血管脆性和调节通透性。临床上用作毛细血管脆性引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。 [目的要求] 1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2．掌握槲皮素的制备原理及操作。 3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用 4．通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 [实验原理] 芦丁（rutin ）：C 27H 30O 16·3H 2O ，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。槲皮素（quercetin ）：C 15H 10O 7·2H 2O ，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择

槐米中芦丁的提取及含量测定

题目: 槐米中芦丁的提取及含量测定

目录摘要 (3) 关键词 (3) 前言 (3) 1 槐米的简介 (3) 2 芦丁的简介 (4) 1 实验材料、仪器与试剂 (5) 1.1 实验材料 (5) 1.1 实验仪器 (5) 1.2 实验试剂 (5) 2 实验原理及实验条件 (5) 2.1 实验相关原理 (5) 2.2 实验条件的选择 (7) 3实验方法和结果 (7) 3.1芦丁的提取 (7) 3.2芦丁的精制 (7) 3.3芦丁的鉴定 (7) 3.3.1呈色反应 (7) 3.3.2薄层色谱检识 (8) 3.4芦丁的含量测定 (8) 3.4.1对照品溶液的配制 (8) 3.4.2标准曲线的制备 (9) 3.4.3样品测定 (10) 3.4.4样品稳定性试验 (10) 3.4.5加样回收率实验 (10) 4 讨论与小节 (11) 5 参考文献 (11) 6综述 (12)

槐米中芦丁的提取及含量测定摘要：目的：测定槐米中芦丁的含量，掌握芦丁的提取工艺。方法：采用碱提酸沉法获得芦丁粗提物，利用多次碱提酸沉法获得较纯的芦丁，再通过显色实验以及薄层色谱鉴定槐米提取液中的芦丁，并通过标准曲线法测定提取物中芦丁的含量。结果：吸光度与标准溶液的浓度呈良好的线性关系，回归方程为A=30.1081C+0.0184,采样率为96％，没有太大的区别。结论：该方法易于操作，实验原理比较简单，薄层色谱与分光光度相结合实现了槐米提取液中芦丁的鉴定与含量测定。关键词：槐米芦丁碱提酸沉法含量测定 Abstract:Objective: to determine the content of luding in acacia and the extraction process of luding.Methods: alkali, acid sinking method to obtain crude extract rutin using multiple alkali acid sinking method to obtain a more pure rutin, again through the color experiment and TLC identification of rutin in the sophora japonica extract, and through the standard curve method for determining the content of rutin in extracts.Results: the concentration of standard solution and absorbance had good linear relationship, the regression equation A = 30.1081 + 0.0184 C, R = 0.9997, the sampling rate is 96%, not much difference.Conclusion: this method, easy to operate, the experiment principle is simple, thin layer chromatography combined with a spectrophotomet Key Words：Sophora japonica rutin alkali extraction and acid precipitation content determination

槐米中芦丁的提取分离和检识及槲皮素的制备

槐米中芦丁的提取分离和检识及槲皮素的制备杨翊涵（2013级中药学一班）【摘要】本文整理总结了两次实验的操作过程与实验结果。包括从槐米中提取芦丁、芦丁的分离和检识，以及槲皮素的制备和检识。通过碱溶酸沉的方法提取芦丁，再利用稀酸水解生成槲皮素。通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用。通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法熟悉重结晶技巧。了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。【关键词】芦丁、槲皮素、提取分离、检识鉴定、结构、性质。 1. 1 芦丁的提取原理利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。 1.2. 芦丁的分离原理利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热

溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。也可采用醇溶水沉法进行精制。 1.3. 芦丁的鉴定原理（1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。（2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。 1.4 实验原理芦丁浅黄色针状结晶，难溶于冷水，可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。槲皮素黄色结晶，能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。

综合实验_槐花米中芦丁的提取与鉴定(给学生)

综合实验槐花米中芦丁的提取与鉴定（一）实验目的 (1)通过芦丁的提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理和操作。 (2)掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷的检识方法。 (3)掌握薄层层析法的操作。 (4)掌握由芦丁水解制取槲皮素的方法。（二）实验原理芦丁((rutin)亦称芸香苷（rutinoside），为黄酮苷，广泛存在于植物中，其中以槐花米(为槐树Sophora japnica，的花蕾)和乔麦叶中含量较高。芦丁的主要药理作用有抗炎作用、维P样作用及抗病毒作用，具有维持血管抵抗力，释低其通透性，减少脆性的作用；对脂肪肝有去脂的作用，与谷胱甘肽合去脂作用更明显；对于放射性伤害所引起的出血症也有一定治疗作用；临床上只要作防治高血压的辅助药物，毛细血管性止血药。芦丁水解后可生成槲皮素，槲皮素有一定的平喘作用；此外还有降低血压，增强毛细血管抵抗力，减少毛细血管脆性，降血脂，扩张冠动脉，增加冠状动脉血流量的作用。槐花米中含芦丁8%~28%，槐花米甲素sophorin A 14% ，槐花米乙素sophorin B 1. 25%，槐花米丙素sophorin C 0. 35%，也含槲皮素quercetin、白桦脂醇betulin，槐二醇sophoradiol等。本实验以常用中药槐花米为原料，对其主要成分芦丁进行提取分离及鉴定。根据芦丁分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提液加酸后加酸酸化则芦丁游离析出(碱溶酸沉法)，然后也可通过快速柱层析法对粗品进行纯化。 (三)实验步骤 1.芦丁的提取（1）于250mL烧杯中加入120 mL石灰水溶液，0. 5 g硼砂，置于石棉网上加热至微沸后，加入10g槐花米粗粉，保持微沸60 min(不断搅拌)后，趁热用纱布包裹挤压过滤。滤渣再用100mL石灰水溶液同法操作一次。合并滤液，然后在60∽70℃保温情况下，以15%盐酸液调节pH为3∽4。静置过夜，使沉淀完全。（2）将静置过夜的滤液的上层清液小心倾倒到烧杯中，剩下的少量液体和沉淀混合物用离心分离法得到沉淀，小心倒出离心管上层清液，再加入蒸馏水，用玻棒搅拌洗涤沉淀，离心，倒出上层清液，重复上述操作，直至倒出的蒸馏水洗液为中性，将离心管和沉淀一起放入烘箱中干燥，称量。

芦丁测定

2. 1样品制备:自头翁汤加减复方以甘草、自头翁、秦皮、南山碴、粉葛根、车前子、黄连、蕾香、地榆、自芍=1 :3:2:4:3:2:115:3:3:2配制。弄成碎末，加水两次煎熬后提取，浓缩，添加乙醇致含醇量为65 07o .离心去掉沉淀后蒸I-，添加甲醇溶解，离心，取上清液加甲醇定容到原药材量1:1a 2. 2参照品溶液制备:取芦丁参照品12毫克，精密称取，置于SOmI瓶中，加70%乙醇溶解并稀释到刻度，得质量浓度为0. 24mg/ml的芦丁参照品溶液。 2. 3紫外一可见分光光度法扫描与标准曲线制备 2. 3. 1可见分光光度法:精密称定芦丁参照品溶液1. 00m1,2. OOmI,3. 00m1,4. OOmI, 5. OOmI, 6. OOmI分别置25 ml容量瓶中，均加水到6. OOmI，加5%的N aN 02溶液1. 00 ml，摇匀，放置6分钟，加10%的A1(N03) 3溶液1.00 ml，摇匀，放置6分钟，加4%的N a011溶液10. 00 ml.再加水到刻度，摇匀，放置15分钟。以相应试剂为空自，在400一800 nm 范围内进行光谱扫描，得510 nm处为可见最人吸收峰。以空自试剂为参照，将6个标准品溶液分别在510 nm下测定吸光度，得回归方程A=0. 00988 C + 0. 00523 . r = 0. 9997 a芦丁浓度在9. 6一57. 6 mg/L范围线性关系佳。 2.3.2紫外分光光度法:精密称定芦丁参照品溶液0. 10m1,0. 20m1,0.40m1,0. 60m1,0. 80m1,1. OOmI于5 ml容量瓶中，均加甲醇到刻度，摇匀。以甲醇作为空自试剂参照，在400 - 800 nm范围内进行光谱扫描，得359nm处为紫外最人吸收峰。以空自试剂为参照，将6个标准品溶液分别在359 nm下测定吸光度，得回归方程A = 0. 02503 C + 0. 02367 . r = 0. 9995 a芦丁浓度在4. 8 -48mg/L范围线性关系佳。 2. 4紫外一可见分光光度法测定中药复方总黄酮含量 2. 4. 1可见分光光度法:精密称定复方样品1. OOmI置于10 ml容量瓶中，加甲醇到刻度，再取1. SOmI置于25 ml容量瓶中，加水到6. OOmI，加5%的N aN 02溶液1. 00 ml，摇匀，放置6分钟，加10%的Al (N03) 3溶液1. 00 ml，摇匀，放置6分钟，加4%的N a011溶液10. 00 ml，再加水到刻度，摇匀，放置巧分钟。平行测定吸光度3次，仪器自动计算样品总黄酮含量。 2. 4. 2紫外分光光度法:精密称定复方样品1. OOmI置于10 ml容量瓶中，再取1. SOmI 置于25 ml容量瓶中，均加甲醇到刻度，摇匀。平行测定吸光度3次，仪器自动计算样品总黄酮含量。 3.结果比较可见分光光度法与紫外分光光度法测定全方与缺药的黄酮含量，如表1所示。结果表明，可见分光光度法测定的中药复方总黄酮含量

槲皮素,芦丁的提取

槐米中主要成分是芦丁。从槐米中提取芦丁可用乙醉提取法、水提取法、碱溶酸沉提取法。碱溶酸沉提取法是依据芦丁结构中有游离的酚羟基, 显弱酸性, 遇碱成盐溶解，加酸又游离析出的原理设计的, 此法成本低、收率高, 所得产品质童好, 是实际生产中常用的方法芦丁碱溶酸沉（alkali-solution and acid-isolation）碱溶酸沉法，中药化学中常用于黄酮类、蒽醌类、酚性,内酯结构的木脂素、香豆素类提取分离等实验。原理：利用混合物中各组分酸碱性差异而进行分离。具体操作将总提物溶于亲脂性有机溶，用碱水提取，调节PH值后用有机溶剂萃取，还可用PH梯度法进一步分离各碱度或酸度不同的成分。注意：提取过程中料液比、浸提碱液pH值、浸提时间等条件都对提取率及纯度有影响。注意酸性或碱性的强度，与被加热分离成分接触的时间，加热温度和加热时间等，避免在剧烈条件下某些化合物结构发生变化或结构不能回复到原本存在于中药的状态。 1．溶剂萃取法去杂原理：利用黄酮类与其它杂质极性不同，选不同溶剂进行萃取。石油醚：除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素水溶醇沉：除去蛋白质、多糖、大分子水溶性物质逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚在萃取除杂的同时，可使不同极性或极性相差较大者分离，如极性不同的苷和苷元，极性苷元和非极性苷元。 2．碱水提酸沉淀法原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出适用于含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提取。注意事项： ①酸碱度不宜过大 ②邻二酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟基易被氧化，加硼砂保护 ③石灰乳的加入可除去果胶、粘液等水溶性酸性杂质 3．炭粉吸附法适用于苷类的精制工作。植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，过滤得吸附苷的活性炭粉末。

实验九 HPLC法测定中药饮片中芦丁的含量

实验九HPLC法测定中药饮片中芦丁的含量一、实验目的 1 ．理解反相色谱的原理和应用。 2 ．掌握外标定量方法。二、实验原理芦丁，即芸香苷，是中药饮片中较见的种黄酮类成分，有抗炎、降血脂、抗病毒及维生素P样等作用。高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的淋洗液和固定相间的分配系数不同，当试样随着流动相进入色谱柱中后，组分就在其中的两相间进行反复多次（103-106）的分配（吸附－脱附－放出），由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰。三、实验试剂、仪器及设备仪器: LC100高效液相色谱仪（UV检测器;二元梯度泵），上海五丰。样品:桑叶、芦丁标准品。试剂:甲醇(HPLC纯) ,重蒸馏水。四、实验内容 1. 标准液制备及标准曲线制备: 准确称取制备好的芦丁标准样品10mg，加蒸馏水溶解后移人10mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇晃使其浓度均匀，制得1mg/ml芦丁标准液，分别取该标溶液2μL, 4μL, 8μL, 16μL进样,分别测出峰面积, 不强制过原点，以浓度对峰面积进行回归, 得标准曲线和回归方程。数据处理机给出峰面积值,以标准品进样量(μ g) 为纵坐标( Y) ,峰面积为横坐标( X) ,得标准曲线。 2. 样品液制备:精取桑叶叶粉末(过20目筛) 5.00 g置于250ml烧瓶中，加入50ml甲醇水浴回流提取30min,过滤，取续滤液20ml，氮气吹干后，用甲醇定容至5.00ml,用滤头过滤后即为供试液。 3. 色谱测定用微量注射器吸取大2倍20uL试样溶液注入色谱仪，取得色谱图，以保留时间对照定

实验槐米中芦丁的提取、分离与鉴别

实验一槐米中芦丁的提取、分离与鉴别一、实验目的（1）掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。（2）掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。二、实验原理芦丁(Rutin)亦称芸香苷(Rutisude)，广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达23.5%，槐花开放后降至13.0%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性，临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。芦丁(Rutin)为淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。溶解度情况如下：水：1:10000(冷)，1:200(热) 甲醇：1:100(冷)，1:9(热) 乙醇：1:300(冷)，1:30(热) 吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热) 不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶解酸沉淀的方法自槐米中提取芦丁。再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为结晶溶剂进行精制。利用芦丁可被稀酸水解，生成苷元和糖，通过颜色反应、薄层层析等方法进行检识和确认芦丁。三、实验内容（一）芦丁(芸香苷)的提取 1. 取1.5g石灰粉（CaO），置于干净的小研钵中，加入10mL水研成乳液备用。称取槐米20g，于1000m1烧杯中，加0.4%硼砂水溶液200mL，在搅拌下小心加入石灰乳调至pH 8～9，加热至微沸，维持pH值20-30分钟，趁热抽滤，弃去滤渣，冷至60-70℃用浓盐酸调至pH4-5，放置过夜，减压过滤，得粗芦丁（滤

槐米中卢丁和槲皮素的提取分离与鉴定

槐米中卢丁和槲皮素的提取分离与鉴定实验名称：槐米中卢丁和槲皮素的提取分离与鉴定实验目的： 1）掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理及操作，学会芦丁的精制与水解方法。 2）能运用化学法、色谱法鉴定芦丁。实验器材：槐花粗粉石灰乳硼砂烧杯纱布蒸馏水抽滤装置盐酸硫酸三角烧杯镁粉α-萘酚硅胶ＧBa(OH) 2 FeCl 3 K 3 [Fe(CN) 6 ]苯胺-联苯二甲酸芦丁标准品槲皮素标准品葡萄糖标准品鼠李糖标准品参考文献：（一）主要成分的结构及性质槐花系豆科植物Sophora japonica L.的干燥花蕾。其主要有效成分为芦丁，芦丁在槐花花蕾中含量高，《药典》规定槐花中芦丁含量不得少于20.0％。其结构为槲皮素-3-O-芸香糖苷。（二）基本原理芦丁分子中有较多的酚羟基，有弱酸性，可与碱成盐而溶于水中，加酸酸化后可沉淀析出，因而用碱溶酸沉法提取芦丁。芦丁的精制是利用它在冷热水中的溶解差异进行的。（三）操作步骤１．芦丁的提取称取槐花粗粉，置500ml烧杯中，加入0.4％硼砂沸水溶液200ml，在搅拌下加入石灰乳，调至pH8～9,加热微沸20分钟（注意保持pH8～9），并随时补充蒸发的水分，趁热用四层纱布滤过。同样操作再提取一次，合并两次滤液。滤液在60~70oC用浓HCl调至pH３~４，静置过夜使沉淀完全，抽滤，沉淀用蒸馏水洗２~３次，抽干，置空气中晾干，得芦丁粗品。 2．芦丁的精制称量粗品芦丁，按1:200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使芦丁全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。抽滤，结晶置空气中晾干或60～70oC干燥，得精制芦丁，称重，计算收率。 3．芦丁的水解取芦丁，研细后置于250ml三角烧杯中，加入2%H 2 SO4溶液100ml，直火加热微沸约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇（95%乙醇约15ml）重结晶得精制槲皮素。 4．芦丁鉴定 (１)化学鉴别分别取芦丁和槲皮素少许，加乙醇５～６ml使溶解，作以下试验： ①盐酸-镁粉反应取上述溶液１～２ml，滴加２滴浓盐酸，再加入少许镁粉，振摇，观察颜色变化情况。 ②Molich反应取上述溶液１～２ml，加10％等体积的α-萘酚乙醇溶液，摇匀，

11分光光度法测定芦丁的含量

新乡医学院分析化学实验课教案首页授课教师姓名及职称：新乡医学院化学教研室年月日

实验分光光度法测定芦丁的含量一、实验目的 1．掌握比色分析的一般操作方法； 2．学习分光光度计的使用方法。二、实验原理分光光度法定量分析分为单组分定量分析，多组分定量分析，本实验是单组分定量分析，单组分定量分析方法包括吸光系数法、校正曲线法、对照法等，分析中最常用的是校正曲线法。校正曲线法：先配制一系列不同浓度的标准溶液，然后在选定的分析条件下测定吸光度，然后以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得到一条通过原点的直线，这条直线称为校正曲线，在相同的测定条件下，测得样品溶液的吸光度，通过校正曲线就可以求出样品的浓度了。本实验通过校正曲线法测定芦丁的含量，芦丁溶液的颜色较浅。不能直接用分光光度法进行测定，那么，需要用显色剂将其变为有颜色的溶液，芦丁与Al3+在亚硝酸钠碱性溶液中生成红色配合物，该红色配合物最大吸收波长在510nm，所以可以在510nm测定吸光度。三、仪器与试剂 721型分光光度计，容量瓶；芦丁标准品，60%乙醇，亚硝酸钠溶液（1:20），硝酸铝溶液（1:10）， 1 mol?L-1氢氧化钠。四、实验步骤 1．标准溶液的制备取120℃真空干燥至恒重的芦丁标准品约50mg精密称定，置于50mL容量瓶中，加60%乙醇适量，水浴上微热，使溶解，放冷后用60%乙醇稀释至刻度，摇匀。 2．绘制标准曲线精密吸取标准溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00及5.00mL，分别置于50mL容量瓶中，各加60%乙醇使成5.0mL，各精密加入亚硝酸钠溶液（1:20）0.5mL，摇匀，放置6分钟后，加硝酸铝溶（1:10)1.5mL，摇匀，放置6分钟，加1 mol?L-1氢氧化钠试液4mL，蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟。在510nm 波长下测定各溶液的吸光度。以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。 3．样品测定