焦化废水活性污泥中PHB生产菌的筛选、鉴定及合成PHB条件研究

焦化废水活性污泥中PHB生产菌的筛选、鉴定及合成PHB条件研

究

【摘要】PHB（聚β-羟基丁酸酯）由于具有生物可降解性和生物相容性等性质，可以广泛应用在材料、医学、农业和环境保护的领域中。基于在环保领域对PHB的需求量高，希望通过廉价物质作碳源去筛选出PHB的生产菌株，可以大量合成PHB，且降低成本。本研究从焦化废水的活性污泥中提取出菌液，通过几种碳源的培养液中培养，在平板上分离，得到单菌株并再进行复集培养。通过苏丹黑染色法鉴定5种菌株有积累PHB的能力，用硫酸降解法测定菌株产生的PHB的量，选出D2菌，细胞干重高为3.01mg/mL，PHB含量高达17.21%，且十分容易培养。预测所分离培养的D2菌具有培养PHB的工业化前景且节约了成本。

【关键词】PHB；PHB生产菌；分离；鉴定；PHB提取

1.研究背景

1.1 PHB的用途

聚β-羟基丁酸酯（PHB）作为一种有光学活性的聚酯，除具有高分子化合物的基本特性，如质轻、弹性、可塑性、耐磨性和抗射线外，更重要的是其还具有生物可降解性和生物可相容性。因此，PHB在食品包装、农业、医药和环境保护等领域具有广泛的用途。

在环保领域，通常需要高浓度PHB将有机毒物（如：有机氯化物）吸收浓缩，以便进行下一步处理或回收。然而，虽然目前PHB的生产方法很多如化学合成法、转基因植物生成法、微生物发酵法等等，但是却没有一种低成本、高产量的方法。

1.2 研究目的

本文的最终目的就是通过选育出能够利用廉价物质作碳源高效积累PHB的菌株，从而得到大量生产PHB的方法。

2.试验方法

2.1制备培养基

配制上述的培养基各1 L，摇匀，调节pH在7.0左右。之后放入灭菌锅灭菌20 min，取出放在4 oC冰箱中保存。

2.2 菌株的初步培养

活性污泥处理工业废水

活性污泥法处理工业废水项目建议书一、项目提出的必要性和依据： (1)世界的淡水资源极端紧缺，前联合国秘书长德奎利亚尔曾讲到：“过去人类最可怕的是战争，未来人类最可怕的是淡水资源的紧缺”。淡水资源面临取尽，使人类产生巨大的危机感。(2)中国水资源的拥有量在世界排名第121位，可见我国水资源的占有量居于世界排位之后，说明我国淡水资源匮乏，需引起我们高度关注，并在节约用水的同时还要积极杜绝水资源的污染。这就需要我们积极研究和保护水资源，活性污泥法处理工业废水是一个热点。（3）由于该行业排放的废水中生化可降解成分较多,因而处理效率一般较高。Wheaton等人研究了连续活性污泥法对水果加工业废水的处理,发现对 BOD去除率较高;（4）只要保持较低有机负荷和较高水力停留时间(2·5 天),活性污泥能成功处理玉米碱性发酵厂废水;对已连续运行两年的处理高强度啤酒厂废水的深井曝气活性污泥系统的运行结果分析后可知:尽管该废水具有S含量高、水量变化大、悬浮物浓度达6 10 0一9 6 0 0mgl/等特点,活性污泥对进水有机负荷的平均去除率仍达到 97 %。（5）活性污泥法是以活性污泥为主体的废水处理方法,是目前有机废水生物处理的主要方法之一。它主要是利用活性污泥中的好氧菌及其它原生动物,对废水中的酚、氛等有机物进行氧化和分解,把有机物最终变成CO2和H2O,其过程主要由物理化学和生物化学作用来完成的。（6）活性污泥处理效率也在不断提高，生化处理的关键是细菌的繁殖与生长,这就要求活性污泥(7)要有较好

的质量,应具备颗粒松散,易于吸附氧化有机物,有良好的凝聚、沉降性能。（8）因此,在实际操作时,要严格控制活性污泥的性能指标。通过多年实践,我们认识到,理想的指标应控制在如下范围: 污泥沉降比:1 5一30%; 污泥浓度:2一39 / L; 污泥指数:50一150。（9）日本一专利习对生物固定滤床加以改进,用含15 %铁酸钻的聚乙烯和1%偶氮甲酞胺发泡剂制成发泡磁化聚乙烯颗粒填充滤床,连续运转一周,滤床形成生物膜处理工业废水中有机污染物。（10）实验应用表明,以磁化的塑料作为生物载体能高效地处理工业废水中BO D、COD (见表1)。表l磁化峨料固定溥床处理效果mg/L （11）活性污泥法的新发展：到目前为止, 对活性污泥法在运行方式上还没有大的突破, 往往所作的是一些局部的改进, 但在曝气方式上确取得了较大的成果, 如纯氧曝气、深井曝气、射流曝气, 采用微气泡扩散器等, 这些都增大了氧转移率、提高了氧的利用率使曝气池中氧的浓度增加。如美日

_大豆根瘤菌剂载体的选择及最佳施用浓度筛选

第33卷第2期2014年 4月大豆科学SOYBEAN SCIENCE Vol．33No．2Apr． 2014 大豆根瘤菌剂载体的选择及最佳施用浓度筛选刘庆莉1，王金生1，刘丽君1，林蔚刚1，王红蕾2，张俐俐3，吴俊江 1 （1．黑龙江省农业科学院大豆研究所，黑龙江哈尔滨150086；2．黑龙江省农业科学院信息中心，黑龙江哈尔滨150086；3．黑龙江省农业科学院，黑龙江哈尔滨150086）摘要：为筛选出适宜根瘤菌吸附且能促进大豆生长、提高产量的优质载体，并且在优质载体的条件下，筛选出大豆根瘤菌液的最佳使用浓度，通过3种载体吸附不同浓度根瘤菌液拌种大豆盆栽播种后，对大豆的生物量、结瘤及产量的对比发现：不同载体介入、大豆接入根瘤菌后均对大豆的生物量及结瘤产生一定的促进作用。根瘤菌以草炭和蛭石为载体，更有利于促使大豆植株生长，积累更多的干物质；草炭的促进结瘤作用持续效果时间较长，液体的持续效果时间最短，而蛭石的持续效果时间相对比较居中；以草炭和蛭石作为根瘤菌载体，低浓度的根瘤菌液接入更能发挥其提高产量的作用，以液体作为根瘤菌载体，根瘤菌接入浓度较高才能发挥其提高产量的作用。结合生产成本来看，草炭土更适宜作为自主研发根瘤菌剂的载体，同时推荐根瘤菌使用浓度为1．4?108 菌细胞 ·mL －1。关键词：大豆根瘤菌；结瘤；载体中图分类号：S565．1文献标识码：A 文章编号：1000- 9841（2014）02-0207-04收稿日期：2013-10-11基金项目：国家“十二五”科技支撑计划（2012BAD14B06）；现代农业产业技术体系（CAＲS-004）；黑龙江省自然科学基金（C201104）；哈尔滨市科技创新人才研究专项资金（2013ＲFXYJ043）。第一作者简介：刘庆莉（1971-），女，技师，主要从事大豆耕作与栽培研究。E-mail ：liuqingli1971@126．com 。通讯作者：吴俊江（1970-），男，博士，研究员，主要从事大豆耕作与栽培研究。E-mail ：nkywujj@163．com 。Chosen of Soybean Ｒhizobia Carrier and Screening of the Best Concentration LIU Qing-li 1，WANG Jin-sheng 1，LIU Li-jun 1，LIN Wei-gang 1，WANG Hong-lei 2，ZHANG Li-li 3，WU Jun-jiang 1 （1．Soybean Ｒesearch Institute ，Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences ，Harbin 150086，China ；2．Information Center of Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences ，Harbin 150086，China ；3．Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences ，Harbin 150086，China ） Abstract ：In order to screen the carrier that was more appropriate for the absorption of rhizobia ，improving yield and quality of inoculated soybean ，and screen the best soybean rhizobia bacterial concentration at levels of quality carrier ，three carriers ab-sorbed different soybean rhizobia bacterial concentration with seed dressing were performed according to the biomass ，nodular rate and yields of soybean plant by soil pot experiments．The results showed that different carriers and inoculating soybean rhi-zobia could improve the biomass and nodular rate of soybean plant．Peat and vermiculite were used as carriers of rhizobia could remarkably promote the growth of soybean plant and enhance dry matter accumulation ；thus the lasting effect of nodular was the longest ，followed by vermiculite and liquid．Low level bacterial concentration could remarkably increased soybean yield and quality with peat and vermiculite as carriers ，however the opposite when used liquid as carriers．In conclusion ，in view of the cost ，peat was more appropriate for soybean rhizobia ，and the best bacterial concentration was 1．4?108 cells ·mL －1．Key words ：Soybean rhizobia ；Nodulation ；Carrier 施用根瘤菌菌剂能促进大豆结瘤，有效提高豆科植物的产量，减少生产中的化肥使用量，降低生产成本，而且可以提高土壤肥力，同时，由于根瘤菌剂耐污染能力强［1］，还可以减少因长期使用化肥对环境的破坏［2-3］，对无公害大豆生产以及降低农民投人，保护环境等具有十分重要的作用［4-5］。因此引起了人们的极大兴趣和广泛关注，已成为豆科植物增产的主要研究方向。近年来随着新技术特别是分子生物学技术的发展，各种高效菌种不断被选育或改造，制备菌剂的工艺、保藏菌剂的方法也不断完善和发展，配制成的菌剂的效果越来越好，在农业生产中得到了广泛利用。与此同时，诸如发酵水平低、保质期短和技术不成熟、质量不过关等问题限制了根瘤菌剂的产业化和大面积推广应用。其中，菌种质量的高低一直是影响其应用效果的一个突出问题；载体也是大豆根瘤菌肥料质量控制的一个关键因素［6］。作为根瘤菌的载体很多，如草炭、蛭石、珍珠岩、煤炭、草炭、膨润土和高岭土等。草炭、蛭石由于其营养与pH 适中，表面积比较大和吸附性好，有利于根瘤菌的存活及菌剂保存，是理想的载体［7-9］。另外，草炭和蛭石等资源丰富，价格低廉，适合于在根瘤菌剂生产中应用推广，已成为当代根瘤菌类肥料的主要类型。本文的研究目的是筛选出适宜根瘤菌吸附且接种大豆能促进大豆生长、提高产量的优质载体，

危险废物环境影响评价危险废物鉴定

危险废物环境影响评价-危险废物鉴定中国科学院广州化学研究所分析测试中心卿工---189--3394--6343 三、危险废物环境影响评价技术要求（一）工程分析 1．基本要求工程分析应结合建设项目主辅工程的原辅材料使用情况及生产工艺，全面分析各类固体废物的产生环节、主要成分、理化性质及其产生、利用和处置量。 2．属性判定根据《中华人民共和国固体废物污染环境防治法》《固体废物鉴别导则（试行）》，建设项目产生的物质（除主、副产品外）定义为固体废物的，应按照《国家危险废物名录》《危险废物鉴别标准通则》（GB5085.7）等进行属性判定。（1）列入《国家危险废物名录》的直接判定为危险废物。环境影响评价文件中应对照名录明确危险废物的类别、行业来源、代码、名称、危险特性。（2）未列入《国家危险废物名录》，但从工艺流程及产生环节、主要成分等角度分析可能具有危险特性的固体废物，应选取具有相同或相似性的样品，按照《危险废物鉴别技术规范》（HJ/T298）、《危险废物鉴别标准》（GB5085.1～6）等国家规定的危险废物鉴别标准和鉴别方法予以认定。（3）环评阶段不具备开展危险特性鉴别条件的可能含有危险组分的固体废物，环境影响评价文件中应明确暂按危险废物从严管理，并要求在该类固体废物产生后开展危险特性鉴别，环境影响评价文件中应给出详细的危险废物特性鉴别方案建议，样表见表1。表1危险废物特性鉴别方案样表项目产生的危险废物如需调整贮存、处置设施场所、扩大能力

和规模等内容的，应按照有关规定办理环评变更手续。 3．产生量核算方法采用物料衡算法、类比法、实测法等相结合的方法核算建设项目危险废物的产生量。对于生产工艺成熟的项目，应通过物料衡算法分析估算危险废物产生量；若无法按物料衡算法估算，可采用类比法估算，但应给出所类比项目的工程特征和产排污特征等类比条件；对于改、扩建项目可采用实测法统计核算危险废物产生量。 4．污染防治措施工程分析应给出危险废物收集、贮存、转移、利用、处置环节采取的污染防治措施，并以表格的形式列明危险废物的名称、数量、类别、形态、危险特性和污染防治措施等内容，样表见表2。表2工程分析中危险废物汇总样表在项目生产工艺流程图中应标明危险废物的产生环节，在厂区布置图中应标明危险废物贮存场所（设施）、自建危险废物处置设施的位置。在环境影响评价文件的审批登记表“工业固体废物”中，标明危险废物产生、削减和排放的数量情况。（二）环境影响分析 1．基本要求在工程分析的基础上，环境影响评价文件应从危险废物的产生、收集、贮存、转移、利用和处置等全过程以及建设期、运营期、服务期满后等全时段角度考虑，分析预测建设项目危险废物可能造成的对环境空气、地表水、地下水、土壤等环境要素以及环境敏感保护目标的环境影响，进而指导危险废物污染防治措施的补充完善。同时，应特别关注与项目有关的特征污染因子，开展必要的土壤、地下水等环境背景监测，分析环境背景变化情况。 2．危险废物贮存场所（设施）环境影响分析危险废物贮存场所（设施）环境影响分析内容应包括：（1）按照《危险废物贮存污染控制标准》（GB18597），结合区域水文地质、工程地质、环境地质、主导风向、环境敏感点分布等条件，分析危险废物贮存场选址的可行性。

污水处理中关于活性污泥的浅谈(1)

【格林课堂】一直以自己是环境工程专业的自称，但是从来没有在公司的网站上投稿过什么专业类的文章，说起来比较惭愧。主要是觉得自己才学疏浅，实在不敢在公司的这种对所有人公开的网站上面班门弄斧。但是最近看了伟大的数学家华罗庚的一篇文章后觉得班门弄斧才能有助于自身的提高，同时也希望借此能够加强与各位资深的前辈们交流工艺技术方面的东西。当然，这篇文章是比较初级的东西，写的是一些比较基本的入门的知识，如果你系统的学过但是理解不够深刻那么我希望你看完这篇文章后能够让你对水处理有一个重新的系统理解，如果你已经对水处理方面有一套自己独特的理解的话也希望你看完后能提出意见以供我学习，让我改进。我个人研究比较多的方向是生物处理，对于水处理这个专业而言，生物处理也算比较核心的一块吧。所以我们就来简单的谈谈生物处理吧。说起水处理，不得不说最初的发现过程，让我们先来对“活性污泥”进行一个简单的认识吧。将经过沉淀处理后的生活污水注入沉淀管（或者适宜的器皿）中，然后注入空气对污水加以曝气，并使生活污水保持下列条件;水温在20℃左右，水中溶解氧值介于1—3mg/L。pH在6—8之间，每日保留沉淀物，更换部分污水，注入经过沉淀处理后的新鲜生活污水，这样的操作持续一段时间（10天到2周）后，在污水中形成一种呈黄褐色絮凝体状的群体，这种絮凝体易于沉降与水分离，污水已得到净化处理，水质澄清，这种絮凝体是由大量繁殖的以细菌为主体的微生物所构成，是一种生物性污泥，它就是“活性污泥”。希望各位看完这篇文章后能想想这个过程是什么。留一个问题作为悬念，接下来就开始我们的正式话题。生物处理篇：活性污泥M的组成分为四个部分，具有代谢功能活性的微生物群体Ma、微生物内源代谢自身氧化的残留物Me、由原水挟入附着的难降解的有机物Mi、由原水挟入附着的生物表面的无机物Mii。即 M=Ma+Me+Mi+Mii。活性污泥的主体组成部分是具有活性的微生物。接下来整个活性污泥系统我都将围绕微生物来讨论。微生物的组成：其中包括细菌，原生动物后生动物等等。当然这其中组成主体部分是细菌，细菌的种类比较多，主要类型有假单胞菌属、分枝杆菌属、芽孢杆菌属等

利用不同的方法筛选和鉴定转化子

生物工程上游技术实验综合实验设计利用不同的方法筛选和鉴定转化子生命科学学院生工121 指导老师: 田长恩、周玉萍摘要本次实验我们小组通过含Amp的培养基初步筛选出转化子、菌落直接PCR、摇菌培养观察细菌表达形态等一系列实验方法，从6个转化子中筛选出了2个目的重组子.，从而达到实

验的基本目的，基本掌握了转基因生物筛选鉴定的基本方法。关键词筛选、菌落直接PCR、摇菌培养、电泳引言在质粒载体上进行克隆时，由于重组质粒转化的大肠杆菌的量少，连接产物没有也不可能在经过分离纯化而获得纯的重组质粒，连接产物中混有载体自连而成的空载体、载体与目的片段连接而成的目的重组质粒和载体与非目的片段连接而成的非目的重组质粒。同时，宿主的转化效率极低，因此，绝大部分宿主是没有被转化的，所以很有必要对转化产物进行筛选与鉴定。首先，通过抗生素抗性从转化后代中筛选出转化子。然后，通过菌落直接PCR从转化子中筛选出候选转基因生物。最后，摇菌培养观察菌株表达形态。通过抗生素抗性筛选，从转化后代中筛选出转化子。因为非转化菌没有质粒而缺乏相应的抗生素抗性，所以可将转化产物涂布在含有相应抗生素的培养基上筛选，只有含有相应抗性的抗生素抗性基因才能生长繁殖形成菌落。通过菌落直接PCR从转化子中筛选出转基因生物，扩增出特殊目的基因片段，判断所得转化子是否为重组子。但因为PCR技术的高灵敏性，往往会产生假阳性结果，所以有必要进一步进行鉴定.。从候选重组子中进行摇菌培养关注菌株表达形态，若出现荧光蛋白则说明菌株成功转化并表达了GFP荧光蛋白。三、使用仪器、材料 1、材料：实验九准备好的菌株。 2、实验仪器及设备:PCR仪、恒温摇床、台式高速离心机、恒温水浴锅、琼脂糖凝胶电泳装置、电热恒温培养箱、电泳仪、超净工作台、微量移液抢、1.5mL离心管等。 3、主要试剂：10×PCR buffer 、dNTP mixture 、前向引物(P1) 、反向引物r(P2) 、 rTaq 酶、灭菌蒸馏水、LB液体培养基：四、实验步骤 1、转化子筛选：在实验九含有Amp的筛选培养基中长出的菌落中挑选出6个白色单菌落，并做好标记，这6个单菌落即为转化子。 2、菌落直接PCR：用无菌牙签把6个白色单菌落，先在编好号的6支PCR反应管中的底部分别涂擦，然后在PCR管中配制60μL反应体系.并按每管9μL分装好反应体系。反应体系如下: DNA template buffer （用牙签挑取菌落在PCR管中涂抹） 10×PCR buffer 6μL

活性污泥处理故障判断

污水活性污泥法处理故障判断 1.浮渣、泡沫的形成与故障在活性污泥法中出现浮渣和泡沫现象是比较常见的。泡沫的形成源于水体的黏度升高，其主要原因有：水体有机物含量过高、污泥老化、进流水富含洗涤剂或表面活性剂、丝状菌膨胀等。在实践中我们可以看到随着泡沫的不断积聚，最后就形成了浮渣。 (1)不同泡沫所对应的故障 ①.棕黄色泡沫，易碎，短时间不会形成积聚——活性污泥处于老化状态，部分分解附着于泡沫中。 ②.灰黑色泡沫，易碎，短时间不会形成积聚——活性污泥处于缺氧状态，局部厌氧反应，部分好氧活性污泥死亡，附着在泡沫中。 ③.白色泡沫，粘稠不易破碎，色泽鲜白，堆积性好——负荷过高； .白色泡沫，粘稠但易破碎，白色陈旧，堆积性差——曝气过度。 (2)不同浮渣所对应的故障 ①黑色稀薄的浮渣——污泥处在缺氧状态 ②黑色且堆积过度的浮渣——污泥处在严重厌氧状态 ③棕褐色稀薄的浮渣——活性污泥系统正常的表现 ④棕褐色且堆积过度的浮渣——污泥反硝化或丝状菌膨胀 2.活性污泥的上浮活性污泥上浮的原因主要有三种：污泥腐化、污泥脱氮、污泥膨胀。 ①污泥腐化原因：操作不当，曝气过小，缺氧腐化，厌氧分解。上浮污泥颜色：灰白色且粘度不高泡沫小。处理对策：加大曝气量。 ②污泥脱氮原因：曝气过大，曝气池污泥高度硝化，碳氮比失衡，随后流入二沉池缺氧反硝化。

上浮污泥颜色：黑色且粘度低无泡沫。处理对策：减小曝气量。 ③污泥膨胀原因：水质成分单一加上长时间厌氧引起的丝状菌膨胀。在曝气的情况下，丝状菌夹杂着许多细小菌胶团被气体顶至水面，形成大量泡沫。上浮污泥颜色：棕黄偏黑或偏白且粘度高泡沫大。处理对策：控制丝状菌的膨胀，调高污水PH，增大溶解氧。 3.丝状菌膨胀工艺控制中，容易诱发丝状菌膨胀的条件如下： ①进水成分单一，缺少必要的补充元素，尤其在高碳氮化合物情况下 ②长期处于低负荷运行 ③长期低溶解氧或局部缺氧运行 ④营养剂投加失衡 ⑤酸性废水环境对丝状菌有诱发作用以上丝状菌诱发条件，日常工艺控制中需要重点注意，以避免发生丝状菌膨胀。 4.活性污泥的老化 (1)活性污泥的老化可以借助对污泥沉降比的观察作为判断依据： a.老化的活性污泥能够在较短的时间内完成沉淀。 b.老化的活性污泥污泥絮团都比较大，但比较松散，且絮凝速度也较快。 c.老化的活性污泥颜色深暗、灰黑，不具鲜活的光泽。 d.老化的活性污泥会导致部分菌胶团细菌死亡解体，产生浮渣和泡沫。 (2)导致活性污泥老化的原因 a.排泥不及时，即在较长的污泥龄下 b.长期低负荷 c.过度曝气 d.过高的污泥浓度 5.发现二沉池中有活性污泥随放流水漂出导致活性污泥随放流水漂出的原因有: (1)生化污泥负荷过高，活性增强，絮凝性变差，出水伴有浑浊现象

自生固氮菌微生物的筛选与生物学特征的研究1

自生固氮菌微生物的筛选与生物学特征的研究引言氮元素是农作物生长必不可少的一种元素，而它作为农肥的主要成分之一，能提高农作物产量，使作物在贫瘠的土壤上也能获得丰硕的成果。然而，工业固氮的成功使得人们忽略了原本更加天然的固氮方式-使用固氮菌。在全球人口呈现爆炸上升趋势的同时，人们需要。农业生产提供大量的粮食以满足温饱，这就导致工业固氮产业的蓬勃发展。但谁也没想到大量使用氮肥正威胁着人类赖以生存的地球环境：高浓度的氮氧化物是产生颗粒物和地面大气臭氧的重要原因。红潮等的多次出现，杀死数以万计的鱼类，都是由于许多农作土壤也呈氮肥饱和趋势，多余的活性氮肥都被排进湖海之中，最终导致富营养化。为了达到科学而且环保的目的，只有利用固氮生物进行绿色氮肥的生产，这样不仅可以节省生产氮肥的成本而且还不会造成活性氮流失事实上，许多试验都证明在某些环境状态下，接种的固氮菌对植物田有很大的帮助作用，这是由于固氮菌能在常温常压条件下，通过其体内固氮酶的作用，把空气中的氮固定下来形成氨，进一步变成植物可利用的氨素，从而让土壤中固定的氮元素增加，本实验主要是对自生固氮菌的筛选以及其生物学特征的研究。 1.材料和方法 1.1无氮培养基（富集培养）配方：葡萄糖10克磷酸二氢钾0.2克硫酸镁0.2克硫酸钙0.2克氯化钠0.2克碳酸钙 5.0克琼脂20克蒸馏水1000mL PH 6,5—7..0 瓦克斯曼77号培养基（分离培养）葡萄糖10克磷酸二氢钾0.5克MgSO4.7H2O 0.2克 1%MnSO4.4H2O溶液2滴1%FeCl3溶液2滴蒸馏水1000mL 琼脂20克PH 7.0—7.2 1.2自生固氮菌的生态分布 1.2.1土样采集：选定肥沃菜园土采集土样时，先铲去1-4厘米的部分，去5-10厘米深层土样，记录采集土样的时间地点和日期，带回实验室备用。 1.2.2土样备用：将采集的土样放入28摄氏度恒温箱中，不仅可以活化菌，而且还可以干燥土壤，便于土样播撒。 1.2.3自生固氮菌的分离：配制无氮培养基，并将其进行灭菌，冷却至适当温度，倒入灭过菌的培养基中，待凝后地面朝上备用（防止水汽污染）. 将恒温箱中的土样取出，将欲分离的土样均匀地撒在无菌的无氮培养基平板上，每块平板分别撒0.25克，共撒三块平板。在培养基上表明土样号，分离日期，将培养皿倒置。放入28—30摄氏度下培养4-7天。 1.2.4当土粒周围长出浑浊，半透明的胶状菌落时，对菌落特征进行观察，计数和编号。 1.3自生固氮菌的纯化： 1.3.1将融化的改良瓦克斯曼77号培养基倒入无菌平板中，凝固后将平板放入65~70摄氏度的烤箱中烘烤15~20min，以除去平板表面的水分。将土样或加富后的土粒样品用无菌水分别稀释至0.1，0.001，0.0001稀释度，并将各稀释度的菌落0.1mL加在平板上，用无菌刮铲涂匀后，放在28~30摄氏度恒温箱中培养7天，经过一周后长出的菌落既为好气性自生固氮菌。 1.3.2挑菌培养并保存

克隆的筛选和快速鉴定

实验六克隆的筛选和快速鉴定一、目的掌握快速细胞破碎法测定大小不等的众多的质粒DNA；和菌落PCR快速鉴定克隆。二、原理在这个实验方法中，只需配制一种细胞缓冲液（它可以在室温下保存，长期使用）。利用破碎细胞缓冲液中的阴离子去污剂SDS在37℃溶解膜蛋白，使细胞破裂，并解聚核蛋白，SDS还能与蛋白质结合形成复合物，使得蛋白质沉淀。利用EDTA螯合金属离子，防止破碎细胞的脱氧核糖核酸酶对DNA的降解。然后高速离心，去除细胞碎片核大部分的染色体DNA和RNA蛋白，将含有质粒DNA的上清夜直接进行点样电泳和分离。在琼脂糖凝胶上分离开的个组分中，有染色体DNA，不同大小的质粒DNA和RNA，它们都可以经肉眼观察或拍照显示。或者用设计好的引物，做菌落PCR快速鉴定克隆。三、试剂与仪器（一）试剂 1．破碎细胞缓冲液50mmol/L Tris-HCl (pH6.8)、1% SDS、2mmol/L EDTA、400mmol/L 蔗糖和0.01%溴酚蓝。配制方法：1mol/L Tris-HCl (pH6.8) 10ml 20% SDS 10ml 250mmol/L EDTA 1.6ml 蔗糖27.2g 1.2%溴酚蓝 1.67ml 加ddH2O至200ml 2．10mg/ml 溴乙啶 3．TBE电泳缓冲液（5×） 4．Taq DNA聚合酶(5U/μl) 5．10×反应缓冲液（含25mmol MgCl2） 6．dNTP 7．点样缓冲液Loading buffer（10×）：0.25%溴酚蓝，40%甘油。（二）仪器 1．电泳仪2．1.5ml 离心管3．Tip 4．培养皿5．PCR扩增仪6．台式离心机 7．紫外分析仪8．恒温水浴四、操作步骤（一）快速细胞破碎法测定 1．取1.5ml离心管编号码，每管加入50μl破碎细胞缓冲液。 2 3．待转化的细菌菌落长到2mm时

根瘤菌及其应用

根瘤菌与豆科植物及其应用摘要：自贝叶林克1888年首次从豆科植物根瘤中分离获得根瘤菌以来，国内外的许多学者都为揭开这一大自然的奥秘进行着孜孜不倦的研究，成为生命科学最为活跃的领域之一。人们从生物学，生态学，生理生化，分类和遗传等方面对根瘤菌进行了广泛研究，在根瘤菌和根瘤的形态结构，固氮酶的结构和功能，固氮机理和作用调件，根瘤菌在细菌分类学中的地位直到固氮基因，结瘤基因，固氮生态等应用方面都有着较快发展，20世纪90年代共生固氮体系已进入分子水平，研究转入根瘤菌与宿主豆目植物植物的相互识别和信息传递以及根瘤菌群体感应等方面。关键词：根瘤菌生物固氮根瘤菌应用一．根瘤菌的生物学特征根瘤菌：根瘤菌主要指与豆类作物根部共生形成根瘤并能固氮的细菌，一般指根瘤菌属和慢生根瘤菌属；两属都属于根瘤菌目。根瘤菌侵入寄主根内，刺激根部皮层和中柱鞘的某些细胞，引起这些细胞的强烈和生长，使根的局部膨大形成根瘤；根瘤菌在根内定居，植物供给根瘤菌以矿物养料和能源，根瘤菌固定大气中游离氮气，为植物提供氮素养料，两者在拮抗寄生关系中处于均衡状态而表现共生现象。根瘤菌的形态特征：根瘤菌是短杆状细菌，因生活环境和发育阶段的不同，在形态上有显著变化.根瘤菌在固体培养基上和土壤中呈杆状，端生或周生鞭毛能运动，革兰氏染色阴性，无芽孢，培养较久

菌体粗大，染色不均。生存习性：根瘤菌与植物的共生体系具有很强的固氮能力。已知全世界豆科植物近两万种。根瘤菌是通过豆科植物根毛、侧根杈口(如花生)或其他部位侵入，形成侵入线，进到根的皮层，刺激宿主皮层细胞分裂，形成根瘤，根瘤菌从侵入线进到根瘤细胞，继续繁殖，根瘤中含有根瘤菌的细胞群构成含菌组织。根瘤菌进入这些宿主细胞后被一层膜套包围，有些菌在膜套内能继续繁殖，大量增加根瘤内的根瘤菌数，以后停止增殖，成为成熟的类菌体；宿主细胞与根瘤菌共同合成豆血红蛋白，分布在膜套内外，作为氧的载体，调节膜套内外的氧量。类菌体执行固氮功能，将分子氮还原成NH3，分泌至根瘤细胞内，并合成酰胺类或酰尿类化合物，输出根瘤，由根的传导组织运输至宿主地上部分供利用。与宿主的共生关系是宿主为根瘤菌提供良好的居住环境、碳源和能源以及其他必需营养，而根瘤菌则为宿主提供氮素营养。二．根瘤菌与豆科植物根瘤菌(root nodule bacteria)是与豆科植物共生，形成根瘤并固定空气中的氮气供植物营养的一类杆状细菌。这种共生体系具有很强的固氮能力。已知全世界豆科植物近两万种。根瘤菌是通过豆科植物根毛、侧根杈口(如花生)或其他部位侵入，形成侵入线，进到根的皮层，刺激宿主皮层细胞分裂，形成根瘤，根瘤菌从侵入线进到根

危险废物鉴别标准

危险废物鉴别标准腐蚀性鉴别 GB5085.1-2007 危险废物鉴定及检验中心（中国科学院广州化学研究所分析测试中心）事业部---高工--189--3394-6343 为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国固体废物污染环境防治法》，防治危险废物造成的环境污染，加强对危险废物的管理，保护环境，保障人体健康，制定本标准。本标准规定了危险废物的鉴别程序和鉴别规则。本标准规定了危险废物的鉴别程序和鉴别规则。本标准适用于任何生产、生活和其他活动中产生的固体废物的危险特性鉴别。本标准适用于液态废物的鉴别；但不适用于排入水体的废水的鉴别。本标准不适用于放射性废物。按有关法律规定，本标准具有强制执行的效力。中国科学院分析测试中心由国务院吸收国外先进技术于2005年组建。下设危险废物鉴定实验室、二恶英实验室，化学与药学分析室，材料与形貌分析室，环境与能源分析室，生物与药学分析室。前言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国固体废物污染环境防治法》，防治危险废物造成的环境污染，加强对危险废物的管理，保护环境，保障人体健康，制定本标准。本标准是国家危险废物鉴别标准的组成部分。国家危险废物鉴别标准规定了固体废物危险特性技术指标，危险特性符合标准规定的技术指标的固体废物属于危险废物，须依法按危险废物进行管理。国家危险废物鉴别标准由以下7个标准组成： 1.危险废物鉴别标准通则 2.危险废物鉴别标准腐蚀性鉴别 3.危险废物鉴别标准急性毒性初筛 4.危险废物鉴别标准浸出毒性鉴别 5.危险废物鉴别标准易燃性鉴别 6.危险废物鉴别标准反应性鉴别 7.危险废物鉴别标准毒性物质含量鉴别前言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国固体废物污染环境防治法》，防治危险废物造成的环境污染，加强对危险废物的管理，保护环境，保障人体健康，制定本标准。本标准是国家危险废物鉴别标准的组成部分。国家危险废物鉴别标准规定了固体废物危险特性技术指标，危险特性符合标准规定的技术指标的固体废物属于危险废物，须依法按危险废物进行管理。国家危险废物鉴别标准由以下7个标准组成： 1.危险废物鉴别标准通则 2.危险废物鉴别标准腐蚀性鉴别 3.危险废物鉴别标准急性毒性初筛 4.危险废物鉴别标准浸出毒性鉴别 5.危险废物鉴别标准易燃性鉴别 6.危险废物鉴别标准反应性鉴别 7.危险废物鉴别标准毒性物质含量鉴别

污水处理中污泥质量判断标准

污水处理中污泥质量判断标准高质量的活性污泥主要体现在以下四个方面：良好的吸附性、沉降性、浓缩性和较高的生物活性。具体标准如下：颜色和气味正常的活性污泥外观为黄褐色，可闻到土腥味。微生物分解能力越强，土腥味越浓。具备以上特点的不一定正常，但不具备的也不一定是不正常的。进水颜色与气味和水质关系很大，尤其是工业废水或者参有工业与生活污水混合的废水中，进水颜色和气味主要是进水工业废水来决定的！ SOUR活性污泥的耗氧速率 SOUR活性污泥的耗氧速率是指单位重量的活性污泥在单位时间内所能消耗的溶解氧量，一般用SOUR表示，单位常采用mgO2/（gMLVSS?h）。SOUR也称为活性污泥的呼吸速率或消化速率，它是衡量活性污泥的生物活性的一个重要指标。如果F/M较高，或SRT较小，则活性污泥的生物活性也较高，其SOUR值也较大。反之，F/M较低，SRT太大，其SOUR值也较低。 SOUR在运行管理中的重要作用在于指示入流污水是否有太多难降解物质，以及活性污泥是否中毒。一般说，污水中难降解物质增多，或者活性污泥由于污水中的有毒物质而中毒时，SOUR值会急剧降低，应立即分析原因并采取措施，否则出水会超标。活性污泥工艺的SOUR一般为8～20 mgO2/（gMLVSS?h）之间。 SOUR测定时注意事项：应注意保持测定时活性污泥的温度。温度对SOUR值影响很大，不同温度下测得的SOUR是没有可比性的，也就不能利用SOUR值的变化有效地指示活性污泥的生物活性。一般应在200C时测SOUR值。污泥沉降比SV SV30是指曝气池的混合液在100mL的量筒内静置30min后，沉降污泥与混合液的体积之比。SV30是衡量活性污泥沉降性能和浓缩性能的一个指标，对于某一浓度的活性污泥，SV30越小，说明其沉降性能和浓缩性能越好。 SV30在运行管理中的意义：实际上，正常的活性污泥在沉降30min以后，一般都能达到最终沉降状态，在以后1—2h内，泥水界面不再下降。因此，两种沉降速度及沉降性能差别很大的活性污泥会有相同的SV30值，但两种浓缩性能不同的污泥肯定不会有相同的SV30值。有的处理厂采用5min沉降比作为污泥的沉降性能指标，因为沉降性能不同的SV5值相差很大，因此可以认为SV5是活性污泥的一个沉降指标，而SV30主要是一个浓缩性能指标。 SVI污泥体积指数

固氮菌筛选及鉴定

固氮菌筛选及鉴定实验原理农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将用表土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。目的要求 1．初步学会从土壤中分离自生固氮菌的方法。 2．初步学会制作临时涂片的方法。材料用具农田的表层土壤(土壤溶液的pH不低于6.5)。无菌研钵，无菌玻璃棒，接种环，天平，存放有载玻片的酒精缸，盖玻片，显微镜，酒精灯，火柴，镊子，恒温箱，量筒，玻璃铅笔。灭过菌的、盛有无氮培养基的培养皿，结晶紫染液，无菌水。方法步骤一、接种 1．接种前，将灭过菌的、盛有无氮培养基的培养皿，放在37℃的恒温箱中一两天。随后，选取培养基上没有生长任何微生物的培养皿供实验用。 2．取10g土壤，放在无菌研钵中，注入5mL无菌水，并用无菌玻璃棒搅拌均匀，备用。 3．将接种环放在酒精灯的火焰上灭菌。略微打开培养皿盖，将接种环放在培养基边缘处冷却。然后，用接种环蘸取少许稀泥浆，轻轻地点接在培养基的表面上，共点接15～20处(注意：接种时手和衣袖不要碰到火焰，以免烧伤)。 4．接种后，轻轻地盖上培养皿盖，将培养皿放在实验桌上，并在顶盖上写明实验内容、接种人的姓名和接种日期。二、培养

将接过种的培养皿放入恒温箱内，在28～30℃的温度下培养3～4d。三、观察 3～4d后，取出培养皿，仔细观察培养基上稀泥浆周围长出的培养物——黏液。黏液初为无色透明，以后为乳白色，最后变成褐色，表明含有自生固氮菌。四、镜检 1．制作临时涂片 (1)用镊子从存放载玻片的酒精缸中夹取一片载玻片，将载玻片放在酒精灯火焰的上方缓缓烘烤，以便除去上面的酒精。将载玻片放在实验桌上，待载玻片冷却后，在载玻片的中央滴一滴无菌水。 (2)在火焰旁，按照接种的要求，用灭过菌的接种环从培养基上挑取少许黏液，将黏液涂在载玻片上的水滴中，加1滴结晶紫染液，混合均匀，染色1min。 (3)另取一片载玻片作推片。将推片自液滴左侧向右侧移动，使液滴均匀地附着在两片之间。然后，将推片自右向左平稳地推移(两片之间呈30～45°夹角)，推出一层均匀的菌膜。 2．干燥让临时涂片自然干燥(自生固氮菌的临时涂片不用加热固定，以免破坏荚膜)。 3．在显微镜下观察依次通过低倍镜和高倍镜观察临时涂片，可以看到染成紫色的自生固氮菌。结论通过显微镜能够看到几种自生固氮菌？它们在形态上各有什么特点？将得出的结论写在《实验报告册》上。讨论 1．为什么盛放无氮培养基的培养皿应当是灭过菌的？ 2．假如黏液中有三种自生固氮菌，你能不能想出一种办法，将这三种细菌分离开来？

污水处理工艺试卷五

污水处理工艺试卷五一、判断题（每题1分，10×1=10） 1、活性污泥絮凝体越小，与污水的接触面积越大，则所需的溶解氧浓度就大；反之就小。（） 2、水处理过程中水温上升是有利于混合、搅拌、沉淀等物理过程，但不利于氧的转移。（） 3、渐减曝气是将空气量沿曝气池廊道的流向逐渐增大，使池中的氧均匀分布。（） 4、污泥回流设备应按最大回流比设计，并具有按较小的几级回流比工作的可能性。（） 5、当活性污泥的培养和驯化结束后，还应进行以确定最佳条件为目的的试运行工作。（） 6、反硝化作用一般在溶解氧低于0．5mg／L时发生，并在试验室静沉30—90min以后发生。（） 7、沉淀种类主要有：自由沉淀、絮凝沉淀、成层沉淀、压缩沉淀。（） 8、消毒属于生物方法。（） 9、失去电子的物质称为还原剂，得到电子则为氧化反应。（） 10、厌氧法产生的污泥量大于好氧法的污泥量。（）二、选择题（每题1分，15×1=15） 1、污废水生物性质及指标有（）。

（A）表征大肠菌群数与大肠菌群指数（B）病毒（C）细菌指数（D）大肠菌群数与大肠菌群指数、病毒及细菌指数2、下列哪项不属于沉淀池的异常现象（）。（A）污泥上浮（B）污泥流出（C）池水发黑发臭（D）污泥沉降 3、一般情况下，污水的可生化性取决于（）。（A）BOD5/COD的值（B）BOD5/TP的值（C）DO/BOD5的值（D）DO/COD的值 4、污水处理厂普通二级处理SS和BOD5的去除效果分别为（）。（A）75%（B）80%左右（C）85%（D）90%左右 5、利用污泥中固体与水之间的比重不同来实现的，实用于浓缩比重较大的污泥和沉渣的污泥浓缩方法是（）。（A）气浮浓缩（B）重力浓缩（C）离心机浓缩（D）化学浓缩6、序批式活性污泥法的特点是（）。（A）生化反应分批进行（B）有二沉池（C）污泥产率高（D）脱氮效果差 7、在城市生活污水的典型处理流程中，隔栅，沉淀，气浮等方法属于下面的哪种方法（）。（A）物理处理（B）化学处理（C）生物处理（D）深度处理 8、下列哪个环境因子对活性污泥微生物无影响（）。（A）营养物质（B）酸碱度（C）湿度（D）毒物浓度 9、竖流式沉淀池的排泥方式一般采用（）。

固氮菌、解磷菌的分离筛选

固氮菌、解磷菌的分离筛选一、目的要求: 1、掌握选择培养基的筛选原理。 2、掌握固氮菌、解磷菌的分离方法。 3、学习平板划线分离法。二、实验原理：选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理化学抗性而设计的培养基，利用这种培养基可以将所需的微生物从混杂的微生物中分离出来。固氮菌可以利用空气中的氮作为氮源进行自身代谢，根据这一原理可以利用无氮培养基将固氮菌从混合菌中分离出来。解磷菌可以在含有难溶性磷酸盐或有机磷的固体培养基产生溶磷圈，根据这一特性可以分离出解磷菌。同样，可以根据解钾菌的生理特性选择合适的培养基将其分离出来。在本实验中，分离固氮菌我们采用阿须贝氏（Ashby）培养基，分离解磷菌采用无机磷培养基。选择培养基的配方如下 Ashby培养基：磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.2 g 硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2 g 氯化钠(NaCl) 0.2 g 碳酸钙(CaCO3) 5.0 g 甘露醇(C6H14O6) 10.0 g 硫酸钙(CaSO4·2H2O) 0.1 g 琼脂 18.0 g 蒸馏水 1000 mL pH 6.8～7.0 无机磷培养基：葡萄糖 10.0 g (NH?)?SO? 0.5 g NaCl 0.3 g KCl 0.3 g MgSO??7H?O 0.3 g FeSO??7H?O 0.03 g MnSO?? 4H?O 0.03 g Ca?(PO?)? 10 g 琼脂 18 g 蒸馏水 1000 ml 三、实验材料: 1、试剂及样品：Ashby培养基、无机磷培养基、无菌水、土壤样品（自带）。 2、仪器及其它用具：培养皿、玻璃棒、烧杯、量筒、天平、高压蒸汽灭菌锅、生化培养箱、超净工作台、接种环、酒精灯、PH试纸等。

信息检索信息搜索、鉴别和筛选

信息检索信息搜索、鉴别和筛选一提到网络搜索，大家马上会想到谷歌和百度。当然，一遇到问题人们可能最先想到的就是这两大搜索引擎。但是呢，好的信息搜索并不只有这两个，每一种搜索引擎都有各自的利弊，选不对搜索引擎，就像选了不合脚的鞋一样，能走路，但艰辛痛苦，也跑不快走不远。使用搜索引擎首先要了解各种搜索引擎特点，否则你可能浪费大量时间。这次搜索，你应该使用百度还是Yahoo？Google还是百度？分析你的需求，选根据需求找拥有相应功能优势的搜索引擎。这里介绍一些： 1.方向着手（1）从行业入手查找，比较好用的是“百度产品大全”（点击首页“更多”选项即可）：行业报告——各行业官方报告、评定、专家解读，行业与单个品牌市场综述、分析，行业与单个品牌数据、过往新闻。当然这个不乏广告成分，所以需要鉴别，当心受骗。（2）寻找特定领域的人了解情况，寻找合适采访对象，如专家学者、老一辈，想熟悉某个领域或了解某个城市、历史、词条……这些比较细致的东西，可以用“百度百科”，网友们集体贡献的智慧是无穷的，而且网友的料也是无穷的，你往往能有意外收获。

另外wikipedia（维基百科）也是巨型资料库，而且更新很快。（3）Google有一个实用搜索功能是“大学搜索”，要知道现在多数有点名的所谓专家学者都没少在大学挂职，各种研究所、实验室、官方组织的这个那个不少也扎根大学，而大学又是产生思想文化的重要阵地。用这个搜索可以一网打尽和某所大学有关的所有东西。（4）现在有一些新开发的搜索引擎，它们可以对网页库中的某类专门的信息进行一次整合。有人称之为：元搜索引擎。这种搜索引擎的特点是大大减少了你整合资料的时间。比如比比猫（Bbmao）。这个搜索引擎的特点是：自动分类、自动去掉重复结果、汇集五大搜索引擎结果。智能分类，你可能在分类中发现一些你不曾想到的东西。不过元搜索是不是好用，可能仁者见仁智者见智，但是只要适应了这种新方式，会给你带来很多方便。 2.技巧着手（1）设计关键词：使用搜索引擎要避免大而空的关键词，它不知道你要找啥，就可能返回很多莫名其妙结果。

危险废物鉴定单位

危险废物鉴定单位目录国家危险废物名录国家危险废物名录——条例国家危险废物名录——分类国家危险废物名录中华人民共和国环境保护部令中华人民 __国家发展和改革委员会第1号根据《中华人民 __固体废物污染环境防治法》，特制定《国家危险废物名录》。现予公布，自xx年8月1日起施行。 1998年1月4日原国家环境保护局、国家经济贸易委员会、对外贸易经济合作部、公安部发布的《国家危险废物名录》(环发〔1998〕89号)同时废止。环境保护部部长周生贤发展改革委主任张平二〇〇八年六月六日国家危险废物名录——条例第一条根据《中华人民 __固体废物污染环境防治法》的有关规定，制定本名录。第二条具有下列情形之一的固体废物和液态废物，列入本名录：

(一)具有腐蚀性、毒性、易燃性、反应性或者感染性等一种或者几种危险特性的; (二)不排除具有危险特性，可能对环境或者人体健康造成有害影响，需要按照危险废物进行管理的。第三条医疗废物属于危险废物。《医疗废物分类目录》根据《医疗废物管理条例》另行制定和公布。第四条未列入本名录和《医疗废物分类目录》的固体废物和液态废物，由 __环境保护行政主管部门组织专家，根据国家危险废物鉴别标准和鉴别方法认定具有危险特性的，属于危险废物，适时增补进本名录。第五条危险废物和非危险废物混合物的性质判定，按照国家危险废物鉴别标准执行。第六条家庭日常生活中产生的废药品及其包装物、废杀虫剂和消毒剂及其包装物、废油漆和溶剂及其包装物、废矿物油及其包装物、废胶片及废像纸、废荧光灯管、废温度计、废血压计、废镍镉电池和氧化汞电池以及电子类危险废物等，可以不按照危险废物进行管理。将前款所列废弃物从生活垃圾中分类收集后，其运输、贮存、利用或者处置，按照危险废物进行管理。第七条 __环境保护行政主管部门将根据危险废物环境管理的需要，对本名录进行适时调整并公布。第八条本名录中有关术语的含义如下：