Thermo Scientific HAAKE RheoStress6000流变仪说明书

Thermo Scientific HAAKE RheoStress6000流变仪说明书
Thermo Scientific HAAKE RheoStress6000流变仪说明书

As a pioneer in the ? eld of rheology, we are well-known for our leading

HAAKE viscometer and rheometer

lines. These instruments precisely

analyze a materials‘s rheological

properties, temperature-related

changes, and the material’s

processability.

The Thermo Scienti? c HAAKE

RheoStress 6000 is the latest

generation in the successful

RheoStress series, which is focused

on standard applications in research

& development and quality control.

The HAAKE RheoStress 6000 is fully

compatible with existing accessories

of previous RheoStress models

such as temperature control

units, measuring geometries and

application oriented measuring

cells. The new modular HAAKE

RheoStress 6000 combines

proven technology plus the latest

innovations from the high end

Thermo Scienti? c HAAKE MARS

rheometer. This makes it easier to

upgrade to the new generation in

Rheology without making a huge

investment. Thanks to the Thermo

Scienti? c HAAKE MARS technology

inside, our customers can now

bene? t from the latest

developments in user-friendly

measuring software and ? rmware.

Thermo Scientific

HAAKE RheoStress 6000

Selection of HAAKE RheoStress models:

HAAKE RheoStress 100

(1992)

HAAKE RheoStress 150

(1997)

HAAKE RheoStress 6000

(2007)

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Thermo Scientific

HAAKE RheoStress 6000 Design

Optional display/control unit. Monitoring data online even without a PC.

The display/control unit of the HAAKE RheoStress 6000

facilitates manual operation of lift movement and gap setting as

well as starting measuring and evaluation jobs with or without a PC. The colour display monitors rheological and instrument-

speci? c data online.

* DE 10 2004 050 753 A1; US 7,181,956 B2Fixed measuring head consisting of:

? Drag cup motor with the lowest available inertia

(10μNms2)

? High resolution optical encoder (12 nrad)

? Patented 4th generation air bearing system*

? Temperature-compensated, normal-force sensor, based on strain-gauge technology for positive and negative normal force measurements Adapter for upper measuring geometries

Receiver for temperature control units and application oriented measuring cells Compact design by one-column aluminum frame

with integrated control

and power electronics

Glass plate with

high resistance against

chemicals for easy cleaning

3

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Universal Temperature Control Unit (UTC)

The UTC consists of a universal controller box

to regulate different temperature control units

for cone and plate measuring geometries –

Peltier as well as electrical. A Peltier unit

covering a temperature range from -60°C up

to 200°C enables quick and accurate responses

to temperature changes. The electrical

temperature control unit, comprising a lower

and an upper heater, can be converted to a

measuring chamber with a tempered glass

ring. This allows measurements up to 500°C

under visual control and inert gas.

Liquid temperature-controlled units

A temperature control unit for cone & plate

measuring geometries and two units with

different coaxial cylinder diameters are available.

Liquid temperature-controlled units require

either a circulator or cryostat and a bath liquid

speci? c to the application. The Thermo Scienti? c

product portfolio is based on many years of

experience in temperature control to ensure a

? t with your requirements.

Liquid temperature-controlled unit for coaxial cylinders

Powerful Thermo Scienti? c

HAAKE Phoenix II

temperature control unit

to be used for liquid

temperature controlled units

Electrically heated temperature control units: upper

cone heating system, cylinder and lower plate unit

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Our comprehensive accessory portfolio contains

coaxial cylinders, plate/plate and cone/plate measuring geometries, custom-tailored dimensions, and made of various materials. Standard titanium measuring geometries have a low mass and therefore a low inertia. For measurements at higher temperatures, geometries with a ceramic shaft are available. These

geometries are characterized by a reduced heat transfer to the measuring head and a limited temperature

gradient within the sample. To avoid sedimentation or slippage, measuring geometries with serrated or sand-blasted surfaces are available. Disposable coaxial cylinder and plate/plate measuring geometries are available for cross-linking and curing materials.

Description Type

Shear rate (s -1) standard

Shear rate (s -1) high shear option

Recommended viscosity range (mPas)**

Double gap cylinder system DG410.007 - 11 41534 2450.5 - 10 000Cylinder ? 40 mm ISO 3219Z40 DIN 0.001 - 1 9315 793 5 - 100 000Cylinder ? 20 mm ISO 3219Z20 DIN 0.001 - 1 9315 79350 - 1 000 000Cylinder ? 10 mm ISO 3219Z10 DIN 0.001 - 1 9315 793500 - 10 000 000Cylinder ? 41 mm DIN 53018Z410.002 - 3 50010 50010 - 100 000Cylinder ? 38 mm DIN 53018Z380.001 - 1 4004 20030 - 500 000Cylinder ? 31 mm DIN 53018Z310.0005 - 6601 98050 - 1 000 000Profiled cylinder ? 38 mm DIN 53018Z38/S 0.001 - 1 5004 50050 - 100 000Disposable cylinder ? 41 mm ISO 3219 Z41DIN/E 0.001 - 1 9315 79310 - 100 000Disposable cylinder ? 25 mm ISO 3219 Z25DIN/E 0.001 - 1 9315 79350 - 1 000 000

High shear cylinder 25 μm gap HS250.1 - 69 200207 600 5 - 100High shear cylinder 100 μm gap HS1000.1 - 15 00045 000 5 - 100Double cone ? 60 mm, 1° angle DC60/10.006 - 9 00027 000 1 - 50 000Cone ? 60 mm, 1° angle*C60/10.006 - 9 00027 000 2 - 100 000Cone ? 35 mm, 1° angle*C35/10.006 - 9 00027 000100 - 1 000 000Cone ? 20 mm, 1° angle*C20/10.006 - 9 00027 0001 000 - 1.0 E+08Plate ? 60 mm PP600.003 - 4 70014 100 2 - 100 000Plate ? 35 mm PP350.002 - 2 7008 100100 - 1 000 000Plate ? 20 mm

PP200.001 - 1 5704 7101 000 - 1.0 E+08Plate ? 35 mm serratetd PP35/S 0.002 - 2 7008 100100 - 1 000 000Plate ? 20 mm serratetd

PP20/S

0.001 - 1 570

4 710

1 000 - 1.0 E+08

* Cones with angles of 0.5° and 2.0° are available as well.

** Theoretical minimum viscosity value at lowest torque and highest shear rate. Theoretical maximum viscosity value at highest torque and lowest shear rate.

Measuring Geometries for Thermo Scientific HAAKE Rheometers

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Selection of measuring geometries

High-temperature geometries with ceramic shaft at different diameters

Titanium geometries with measuring plate cover with same diameter for optimized gap ? lling; sample cover with integrated solvent trap

Selection of special measuring geometries

with serrated surfaces to prevent slippage, with helical groovings to prevent sedimentation, vane rotors and rotors with glass covers

Coaxial cylinders according to DIN 53019 in different sizes

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Pressure cell

Different versions of pressure cells for pressures

up to 400 bar and temperatures up to 300°C are

available. A Hastelloy? version can be used with

corrosive samples.

Application examples:

Crude oil, drilling ? uids, food

UV cell

For tests on UV-hardening materials UV cells are

available: a standard version and an individual

measuring cell with freely con? gurabl e distances

for optical components such as light guides,

condensors and glass plates.

Application examples:

Coatings, dental material, contact lenses

Measuring cell for construction materials

A special measuring cell with a ? exible pro? le for

measurements on building materials is offered.

Thanks to the interchangeable pro? le lamellas the

measuring cell can be easily and quickly adapted

to new materials. The design avoids slippage layer

formation.

Application examples:

Cementitious pastes and mortars, samples with

big particles

Double cone geometry

Highly sensitive measuring cell consisting of base

plate, cone and cover designed as solvent trap using

oil as sealing.

Application examples:

For low viscous materials available in small quantity

only or with a tendency of evaporation

Disposable measuring geometries

Plate/plate measuring geometries with different

diameters and coaxial cylinders out of aluminium

are available in a disposable version.

Application examples:

Samples which are dif? cult to remove, e.g. cross-

linking and curing material

Double cone

Lid

Sample

Oil seal

Base plate with cylindrical wall

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Universal holder for individual containers

Holder with individually adjustable clamps for sample containers like glass jars, cans, beakers and cups.Application examples: Paints, inks, food

3 point bending tool

Sample ? xture to investigate the bending and breaking behaviour of a wide range of materials.

Application examples: Food

Selected Application Notes:

V-217Rheological properties of fresh building materials V-222Breaking Strength of Chocolate

V-225

Rheological characterization of asphalt binders

Selected Product Information:

P-1Investigation of Curing Behavior with a Newly Designed Ring Rotor P-2Sample loading tool for measurements on pellets and powders using a plate/plate- or cone/plate-measuring geometry

P-3

Trimming tool to remove over? lling in a plate/plate- and cone/plate-measuring geometry

We are committed to offering comprehen s ive product and application solutions. Our application specialists will be glad to assist and consult with you.

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Components

? RheoWin JobManager for manual instrument control, automated measuring routines ("jobs") and report printout or export

? RheoWin DataManager for interactive evaluation of measured data as well as sophisticated tools for

creating reports and generating templates for graphs, tables and screen views

? RheoWin UserManager for comprehensive user management regarding user access control and assignment of speci? c access rights

Thermo Scientific

HAAKE RheoWin 3 Software

We work closely with our customers to provide the most user-friendly software for rheological instruments. HAAKE RheoWin software is continuously aligned to customer needs and requirements. The comprehensive software can be used for all HAAKE viscometers and rheometers. The software is customized to offer

convenient operation with default settings for beginners and full access to all re l evant measuring parameters for advanced rheo l ogists.

Functionality

? Manual control for preliminary testing, for

displaying selected parameters and for saving manually acquired data

? Convenient creation and customization of measuring jobs using prede? ned measuring and evaluation elements via "drag and drop" techniques

? Fully automated measuring, data evaluation and documentation within a job

? Real multitasking – simultaneous

measurements using several instruments and data evaluation

? Freely con? gurable data export (ASCII, Excel, etc.)

? Filing graphs in various formats (pdf, etc.)? Numerous algorithms for data analysis (e.g. interpolation, regression and automated quality control)

? Automated backup ? le generation for retrieval of con? guration data ? Availability of saving the raw data and

numerical values for quality control purposes

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Customization

? User-de? ned de? nitions of paths and subdirectories for data ? ling

? Push-button selection of one out of 12 languages

? Modular generation of a ? le name and automated ? ling in a prede? ned subdirectory

? Selectable units and arbitrary labeling of axes

? Links to data bases (SAP, LIMS, etc.)

? Online display of all corrections to improve measuring data (Micro Stress Control)

? Snap-shot-test for quick characterization of an unknown sample

? RheoWizard help feature for expert knowledge to set up a measuring job ? Customizable report templates to permit the use of custom logos and text

Optional tools

? Ef? cient tool to make RheoWin compliant with FDA 21 CFR Part 11? Polymer software consisting of TTS (Time Temperature Superposition) to

generate master curves, spectra and MWD (Molecular Weight Distribution) The latest version of the HAAKE RheoWin software is provided free-of-charge at https://www.360docs.net/doc/a3250674.html,/mc.De?

nition of a measuring and evaluation procedure

Data evaluation using Lissajous plots

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Min. torque rotation CS 200 nNm Min. torque rotation CR 200 nNm Min. torque oscillation CS 200 nNm Min. torque oscillation CD 200 nNm Max. torque 200 mNm Torque resolution 0.5 (a) nNm Motor inertia 10 μNms 2Angular resolution 12 (b) nrad Min. angular velocity CS 10-7 min -1Min. angular velocity CR 10-5 min -1

Max. angular velocity 1500, 4500 (c) min -1Min. oscillation frequency 10-5 Hz Max. oscillation frequency 100 Hz Min. Normal force 0.01 N Max. Normal force 50 (d) N Normal force resolution 0.001 N Min. lift speed 0.2 μm/s Max. lift speed 7 mm/s Lift positioning accuracy 0.5 μm

Temperature range -80 to +500 (e) °C Dimensions (W x D x H)400 x 400 x 780 mm Weight

42 kg

Thermo Scientific

HAAKE RheoStress 6000 Specifications

(a) at the lowest torque (b) internal resolution (c) high shear option

(d) in both positive and

negative direction

(e) depending on temperature

control unit

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Measuring Tack: Sample: Double-sided tape

Mea sur ing

Ta Ta

ck:S

a Sa mpl e:e: Dou ble si -si ded ta ta pe

Selected Measurements

Low torque measurements

The 4th generation diffusion air-bearing is the result of 25 years of development and manufacturing experience. Our latest advances in air-bearing technology plus accurate residual torque correction (MSC = Micro Stress Control), allow for measurements down to 200 nNm.

HAAKE RheoStress 6000 – Air-bearing performance

CS-Mode: Amplitude Sweeps Sample: 1 Pas Oil

Normal force and tack measurements

The HAAKE RheoStress 6000 is equipped with a new normal force sensor based on robust and very sensitive strain gauges with integrated temperature compensation and a measuring range from 0.01 N to 50 N in positive and negative directions. This sensor

measures normal force differences in shear experiments or compensates for changes in sample volume. An axial force can be applied so that the HAAKE RheoStress 6000 can be used as a very precise “tack” instrument.

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Application laboratories

Our fully equipped laboratories re? ect our applications expertise and commitment to innovation. Our laboratories are in constant demand for testing customer samples and developing and optimizing pioneering applications.

Seminars and training courses

Customers are offered a comprehensive training program and selected courses in our international training center in Karlsruhe, Germany. Basic and advanced rheology seminars and training on special applications are held worldwide. In-house seminars are also offered to our customers.

Services to meet individual requirements

We offer a wide range of professional services to a

variety of industries to help our customers improve their productivity and decrease costs. Individual solutions to support our customers and maintain their instruments are a standard service. Additional service packages, warranty enhancements or premium service packages, which can be bundled, allow our customers to plan and budget for maintenance and service support. All service is provided by skilled and certi? ed service engineers.

Services

We are committed to customer support, including speci? c service products, short response times, and customer-speci? c solutions. To quickly meet our

customers’ requirements, we offer a comprehensive

range of services.

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About Thermo Fisher Scienti? c Thermo Fisher Scienti? c Inc. (NYSE: TMO) is the world leader in serving science, enabling our customers to make the world

healthier, cleaner and safer. With an annual revenue rate of more than $9 billion, we employ 30,000 people and serve over 350,000 customers within pharmaceutical and biotech companies, hospitals and clinical diagnostic labs, universities, research institutions and government agencies, as well as environmental and industrial process control settings. Serving customers through two premier brands, Thermo Scienti? c and Fisher Scienti? c, we help solve analytical challenges from routine testing to complex research and discovery. Thermo Scienti? c offers customers a complete range of high-end analytical instruments as well as laboratory equipment, software, services, consumables and reagents to enable integrated laboratory work? ow solutions. Fisher Scienti? c provides a complete portfolio of laboratory equipment, chemicals, supplies and services used in healthcare, scienti? c research, safety and education. Together, we offer the most convenient purchasing options to customers and continuously advance our technologies to accelerate the pace of scienti? c discovery, enhance value for customers and fuel growth for shareholders and employees alike. Visit www.thermo? https://www.360docs.net/doc/a3250674.html,.

Thermo Scienti? c solutions for Material Characterization Thermo Fisher Scienti? c successfully supports a wide range of industries with its comprehensive Thermo Scienti? c solutions for Material Characterization. Material Characterization products analyze and measure viscosity, elasticity, processability and

temperature-related mechanical changes of plastics, food, cosmetics, pharmaceuticals and coatings, plus a wide variety of liquids or solids. Detailed information

is provided at https://www.360docs.net/doc/a3250674.html,/mc.

Benelux

Tel. +31 (0) 76 579 55 55info.mc.nl@https://www.360docs.net/doc/a3250674.html, China

Tel. +86 (21) 68 65 45 88

info.mc. china@https://www.360docs.net/doc/a3250674.html, France

Tel. +33 (0) 1 60 92 48 00info.mc.fr@https://www.360docs.net/doc/a3250674.html, International/Germany Dieselstr. 476227 Karlsruhe

Tel. +49 (0) 721 4 09 44 44info.mc.de@https://www.360docs.net/doc/a3250674.html,

https://www.360docs.net/doc/a3250674.html,/mc

India

Tel. +91 (22) 27 78 11 01info.mc.in@thermo? https://www.360docs.net/doc/a3250674.html, United Kingdom

Tel. +44 (0) 1785 82 52 https://www.360docs.net/doc/a3250674.html,@https://www.360docs.net/doc/a3250674.html, USA

Tel. 603 436 9444

https://www.360docs.net/doc/a3250674.html,@https://www.360docs.net/doc/a3250674.html,

? 2007/10 Thermo Fisher Scientific Inc. · All rights reserved · 623-2100 · LI MC 623-2100 BR 2007/10 · Hastelloy is a registered trademark of Haynes International, Ltd. All other trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific Inc. and its subsidiaries. This document is for informational purposes only and is subject to change without notice. Specifications, terms and pricing are subject to change. Not all products are available in all countries. Please consult your local sales representative for details.

Process Instruments

彩虹130广谱蛋白marker说明书

彩虹130广谱蛋白marker说明书 货号:PR1950 规格:20T(100μL)/50T(250μL)/100T(250μL×2)/500T(250μL×10) 保存:-20℃保存,有效期至少2年。 产品特点: ●三色预染,颜色鲜亮,条带整齐,便于观察。 ●用量少,节约成本,仅5ul即可完美呈现(1.5mm,10孔梳)。 ●广谱多带,一支即可满足多种实验需求。 产品简介: 本产品包含9种彩色预染的已知分子量标准蛋白,分子量范围为15kD-130kD,每种蛋白含量约为 0.2-0.4mg/ml。预染marker可以用于直接观察蛋白质电泳状况以及清晰地判断Western Blot的转膜效果。经SDS-PAGE凝胶电泳或转移到PVDF或NC膜上可得到清晰的9条彩色蛋白条带,其中70kD条带为红色,25kD条带为绿色,其余条带为蓝色。 使用说明: 1.本产品是即用型液体,可直接上样电泳。上样前无需加热,稀释或添加还原剂。 2.上样5ul,SDS-PAGE电泳过程及转膜后可看见清晰的彩虹条带。 3.建议分离胶浓度为15%。 电泳示意图说明: 第1页,共2页

第2页,共2 页注意事项: 1.本产品含有较高浓度甘油,常规-20℃保存为液体状态,可直接使用。若冰箱温度不稳,导致结冰,可 适当分装后置于4℃保存,至少稳定6个月。 2.Marker分离效果与PAGE胶浓度相关,若分离胶浓度低于15%,25kD以下条带不易分离,但不影响绿色 (25KD)及以上条带。如果目的条带小于25KD,建议分离胶浓度大于或等于15%。 3.转膜效果与转膜时间有关,需根据客户目的条带大小而定,如果转膜后较大分子量条带有部分未转膜 成功,属于正常现象。

监测数据处理指南

“中国天然氧吧”数据监测与处理指南 (试行) 本指南规定了创建“中国天然氧吧”所需各项数据的监测、处理要求,适用于“中国天然氧吧”创建活动所涉及的数据采集与处理。 一、空气负氧离子 1、负氧离子监测区域分类 负氧离子监测区域分为二类:一类区域为城市自然保护区、风景名胜区和其他特殊保护区;二类区域为城市居民居住区、商业交通居民混合区、文化区、工业区和农村地区。 2、监测点布设要求 监测点的布设应能反应不同类型区域的总体情况,两类区域中保证至少各有 1 个监测点。负氧离子监测一般采用固定式仪器测量,仪器距离地面 1.5m 左右,监测点下垫面尽可能保持一致。监测点位置应四周空旷平坦,与喷泉、瀑布、人群、交通干道等保持合理距离。 3、空气负氧离子的监测记录 申报“中国天然氧吧”地区应提交近一年以上的空气负氧离子监测记录。 4、月均值计算 指每个整月有效数据的算术平均值。

二、环境空气质量 1、以当地环保部门环境空气质量监测数据为准,提交近一年以上的环境空气质量的监测数据(AQI 指数)、环境空气质量统计数据。 2、月均值计算 指当月每日AQI指数的算术平均值。 3、年均值计算 指一年每月AQI指数的算术平均值。 三、人居环境气候舒适度 人居环境气候舒适度指数依据本地区近20年以上气象观测资料计算,计算方法参见《人居环境气候舒适度评价》(GB/T27963-2011)。 四、其它 森林覆盖率采用林业部门最新数据。 地表水环境质量采用当地环保部门最新监测数据(参照《地表水环境质量标准》(GB3838-2002)),水质等级和相关参数须能客观反映当地水质总体质量状况。

彩虹245广谱蛋白marker使用说明

彩虹245广谱蛋白marker使用说明 货号:PR1920 规格:20T(100μ1)/50T(250μ1)/100T(250μ1×2)/500T(250μ1×10) 保存:-20℃保存,有效期至少2年。 产品特点: ●三色预染,颜色鲜亮,条带整齐,便于观察。 ●稳定性能突出,经检测4℃放置两年无明显降解。 ●用量少,节约成本,仅5ul即可完美呈现(1.5mm,10孔梳)。 ●广谱多带,一支即可满足多种实验需求。 产品简介: 彩虹245广谱蛋白marker包含12种彩色预染的已知分子量标准蛋白,分子量范围为 11kD-245kD,每种蛋白含量约为0.2-0.4mg/ml。预染marker可以用于直接观察蛋白质电泳状况以及清晰地判断Western Blot的转膜效果。经SDS-PAGE凝胶电泳或转移到PVDF或NC膜上可得到清晰的12条彩色蛋白条带,其中25kD为绿色条带,75kD为红色条带,其余10条是蓝色条带。 使用说明: 1.彩虹245广谱蛋白marker是即用型液体,可直接上样电泳。上样前无需加热,稀释或添加还原剂。 2.上样5ul,SDS-PAGE电泳过程及转膜后可看见清晰的彩虹条带。 3.建议分离胶浓度为15%。 电泳示意图说明:

彩虹245广谱蛋白marker经15%浓度的SDS-PAGE凝胶电泳后,转移至PVDF膜上。 注意事项: 1,本产品含有较高浓度甘油,常规-20℃保存为液体状态,可直接使用。若冰箱温度不稳,导致结冰,可适当分装后置于4℃保存,至少稳定6个月。 2,Marker分离效果与PAGE胶浓度相关,若分离胶浓度低于15%,25kD以下条带不易分离,但不影响绿色(25KD)及以上条带。如果目的条带小于25KD,建议分离胶浓度大于或等于15%。3,转膜效果与转膜时间有关,需根据客户目的条带大小而定,如果转膜后较大分子量条带有部分未转膜成功,属于正常现象。 相关试剂: P10154×蛋白上样缓冲液(含DTT) P1300-1SDS-PAGE凝胶制备试剂盒 T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 D106010×电泳转移缓冲液 PR1910彩虹180广谱蛋白marker

003三维激光数据处理软件

Trimble RealWorks 软件 功能介绍 武汉海德斯路科技有限公司 2013年9月

目录 一、软件简介 (3) 二、点云配准 (4) 1.基于目标的配准工具 (4) 2.基于点云的配准工具 (4) 3.测站坐标与大地坐标的相互转换 (4) 三、办公室测量 (5) 1.分割工具 (5) 2.取样功能 (6) 3. 测量工具 (6) 4.平面切割工 (8) 5.等高线工具 (8) 6.纵切/横切面工具 (9) 7.快捷轮廓曲线工具 (9) 8.多义线绘图工具 (10) 9.二维多义线监测工具 (10) 10.容积计算工具及生产报告 (10) 11.面与面、面与模型监测工具 (11) 12.监测图分析器 (11) 13.三维检测图工具及分析器 (11) 14.三角网创建工具 (11) 15.三角网编辑工具 (12) 16.正射投影工具 (12) 17.多面正射投影工具 (13) 18.图像校准投影工具 (13) 四、建模模块 (14) 1.基于点云的模型生成 (14) 2.工厂建模 (15) 3.EasyPipe全自动建模 (15) 五、其他辅助模块 (16) 1.影像生成器 (16) 2.逆向工程、虚拟安装 (17)

一、软件简介 Trimble RealWorks是美国天宝公司独立开发的一款集三维激光点云的自动配准、办公室测量、三维建模于一体并支持多格式成果输出的三维激光点云高速处理软件。 内业处理成果多形式输出 点云多格式输出、支持多路径开发

二、点云配准 1.基于目标的配准工具 基于目标的配准工具是利用扫描过程中布设的标志点来配准。 2.基于点云的配准工具 基于点云的配准工具是扫描过程中不需要布设任何标志点,根据扫描站之间的重叠部分,自动识别公共点云进行配准,一键实现公共点云的识别、配准,并生成配准报告。 多种配准方式保证配准的效率和质量 3.测站坐标与大地坐标的相互转换 该功能实现外业扫描过程中的独立坐标转换成统一大地坐标系统

FuGENE 转染流程

FuGENE HD真核细胞转染流程 FuGENE HD Transfection Reagent Quick Protocol.pdf FuGENE HD Transfection Reagent.pdf 1.细胞和质粒的准备 ①将约5-10×105A549细胞接种于6孔细胞板中,用含10%小牛血清的F-12k 培养过夜,约60%~80%铺满时用于转染。 注:一般荧光试验细胞稀一点为宜;WB试验细胞密一点为宜 ②转染时所用质粒均用转染专用质粒抽提试剂盒无菌提取,抽提后测定其浓度 和纯度,浓度在0.1μg/μL以上且纯度在1.8±0.5 (OD260/OD280)的质粒用于转染,质粒提取的具体步骤按说明书提供的方法进行。(注:质粒浓度测定未必可行,需同时进行酶切和PCR鉴定方可。) ③按照转染剂量,计算质粒使用浓度 2.转染流程 注:由于不同转染试剂对质粒大小、性质、转染量、细胞的种类有很强的特异性,必须谨慎选择转染试剂。以多次转染成功使用的转染试剂为佳。 ①将培养板中的上清弃去,用细胞用无抗无血清F12K洗涤三次后,每孔加入 800ul 无抗无血清F12K。 ②取出FuGENE HD转染试剂,使其温度上升到室温。 ③计算好质粒、转染试剂、以及无抗无血清F12K的量,最终液体总量为100 ul。 准备好无菌指形管,按计算结果加入90-98ul的无抗无血清F12K,加入2ug 质粒,振荡器混匀;随后加入6ul FuGENE HD转染试剂,立即震荡混匀(转染试剂加入时不能沾到管壁上!) ④室温静置7-12分钟后,将质粒:转染试剂混合液均匀滴加在细胞平板孔中, 吹打混匀或者震荡混匀。放入37℃培养箱孵育。

PH0302-超低分子量蛋白Marker II (3.4-100kD)使用手册

PH0302|超低分子量蛋白Marker II(3.4-100kD) Ultra Low Molecular Weight Protein Marker 货号:PH0302规格:?10T(50ul)保存:Store@-20℃ ◆产品简介 本产品包含5种多肽和3种低分子量蛋白质组成,分子量范围为3.4kD-100kD。可以用来判断SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。 ◆使用说明 第一次收到该产品,室温融化后,彻底混匀,离心快甩将溶液完全收集到管底,根据需要适量分装成小管,-20℃贮存,每次取一小管使用;本产品为即用型,融化后既能使用,不能95℃加热处理。 一.制胶: I配制分离胶 1.按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(19:1)、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。 2.加入10%APS和TEMED,立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。 3.在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液,然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3cm的水层,使凝胶表面保持平整。4.静置30-60分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。 表一(一块0.75mm mini胶用量) 分离胶浓缩胶 18%T,5%C/6.0ml5%T,3.3%C/2ml 40%PAA(19:1) 2.7ml/ 40%PAA(29:1)/0.25ml 4×凝胶缓冲液 1.5ml0.5ml 乙二醇(电泳级) 1.8ml/ ddH2O/ 1.25ml 10%APS50-65μl20μl TEMED6μl2μl 注:如非必须,不要使用1.0mm和1.5mm的凝胶,尽量使用厚度0.75mm的凝胶,这样会减少电泳后染色和脱色的时间。 II配制浓缩胶 去除覆盖在分离胶上的水层,用滤纸将残留的水吸去。 1.按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(29:1)和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。

真核细胞转染试剂(Hifectin

技术咨询电话:400-607-9999 Hifectin I 真核细胞转染试剂(Hifectin I transfection reagent) 货号:M080006 描述:Hifectin I真核细胞转染试剂由阳离子脂质体和辅助脂质以特定比例融合制备而成的单层脂质体悬液,可与DNA或RNA形成稳定的转染复合物进入细胞,并将核酸释放入细胞内。Hifectin I独特的制备方法增加了脂质体对真核细胞转染的高效性、广谱性、低毒性和可靠性,并使试剂在4°C储存至少稳定12个月。Hifectin I可高效转染多种细胞,属于可被生物降解的脂质体因而细胞毒性明显降低,转染效率与Invitrogen 的LipofectAMINE相当,但其价格仅相当同类试剂的1/3。 转染时只需将Hifectin I稀释与DNA溶液混合并室温放置15分钟即可转染细胞。1 ml Hifectin I 可转染100-500μg DNA或50-100只35mm培养皿或250-1000孔24孔板细胞。 颜色:清亮或略呈白色胶体溶液。 储存:4°C储存12个月。切勿冻存。 适用:将DNA、RNA、寡聚核苷酸转入真核细胞。适用于大多数传代或原代细胞。 转染步骤:以生长于24孔板的一个孔内的贴壁细胞为例,使用其它规格培养皿参见表一。 细胞准备:转染前一天传0.5-2 x 105细胞于24孔板内,加1 ml正常培养基培养。在光镜下观察细胞,当细胞群覆盖培养瓶皿生长表面的85-95%时,为Hifectin I转染的最佳时机。这通常需要18-24小时,但依细胞类型和接种量而变。注意:传代时接种过多的细胞,100%长满的细胞的转化效率明显降低 制备转染复合物:对特定细胞类型来说,应该优化加入DNA (μg)和Hifectin I (μl)比率和绝对量,参见后面附表。推荐DNA和Hifectin I的初始比例为1:4。 DNA (μg) :Hifectin I (μl) =1:2~1:8 转染实际上是人为造成细胞对外源物质的高摄取状态,因此过量摄入DNA和转染试剂将导致细胞毒性而降低转染效率。与细胞接触的转染混合物中Hifectin I 的最大浓度不应超过30 μl/ml,DNA浓度应小于5μg/ml。参考表一制备转染复合物,参照表二进行优化。下面的步骤以生长于24孔板的单孔贴壁细胞为例。悬浮细胞转染参见表一后面的说明。 1. 取1 μg DNA稀释到25 μl 无血清无抗生素培养基,混匀。 2. 取2-8 μl Hifectin I 加入到25 μl 无血清抗生素培养基,轻轻混匀。 3. 吸取稀释的DNA溶液加入到稀释的Hifectin I溶液中,上下吹吸混匀,勿振荡。室温孵育15分钟。如果按照相反的顺序将稀释的Hifectin I溶液与DNA混合,将生成相反类型的DNA转染复合物,有可能会导致转染效率下降。 4. 在此期间用无血清培养基洗涤细胞1-2次,按照表一Step 5加入适宜体积的无血清无抗生素培养基。 5. 加入步骤3获得的转染复合物于培养瓶皿内,轻轻混合与细胞充分接触,开始转染细胞。 6. 二氧化碳孵箱37C孵育细胞4小时。 7. 吸除转染混合物,加入含血清的正常培养基;或直接将含血清培养基加到孔内,继续培养24小时以上。观察细胞,进行下一步实验。或1:10稀释传代,进行G418筛选。

真核细胞表达系统的类型与常用真核细胞表达载体

真核细胞表达系统的类型与常用真核细胞表达载体 标签:真核细胞酵母表达系统细胞表达载体真核表达系统昆虫表达系统动物表达系统 摘要: 原核表达系统是常被用来研究基因功能的成熟系统,由于原核表达系统具有包涵体蛋白不易纯化、蛋白修饰不完整等缺陷,人们也开始利用真核细胞表达系统来研究基因。 原核表达系统是常被用来研究基因功能的成熟系统,由于原核表达系统具有包涵体蛋白不易纯化、蛋白修饰不完整等缺陷,人们也开始利用真核细胞表达系统来研究基因。 自上世纪70年代基因工程技术诞生以来,基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行,在技术方法上得到了很大发展,时至今日已取得令人瞩目的成就。随着人类基因组计划的完成,越来越多的基因被发现,其中多数基因功能不明。利用表达系统在哺乳动物细胞内表达目的基因是研究基因功能及其相互作用的重要手段。 在各种表达系统中,最早被采用进行研究的是原核表达系统,这也是目前掌握最为成熟的表达系统。该项技术的主要方法是将已克隆入目的基因DNA段的载体(一般为质粒)转化细菌(通常选用的是大肠杆菌),通过iptg诱导并最终纯化获得所需的目的蛋白。其优点在于能够在较短时间内获得基因表达产物,而且所需的成本相对比较低廉。但与此同时原核表达系统还存在许多难以克服的缺点:如通常使用的表达系统无法对表达时间及表达水平进行调控,有些基因的持续表达可能会对宿主细胞产生毒害作用,过量表达可能导致非生理反应,目的蛋白常以包涵体形式表达,导致产物纯化困难;而且原核表达系统翻译后加工修饰体系不完善,表达产物的生物活性较低。 为克服上述不足,许多学者将原核基因调控系统引入真核基因调控领域,其优点是: ①根据原核生物蛋白与靶DNA间作用的高度特异性设计,而靶DNA与真核基因调控序列基本无同源性,故不存在基因的非特异性激活或抑制; ②能诱导基因高效表达,可达105倍,为其他系统所不及; ③能严格调控基因表达,即不仅可控制基因表达的“开关”,还可人为地调控基因表达量。 因此,利用真核表达系统来表达目的蛋白越来越受到重视。目前,基因工程研究中常用的真核表达系统有酵母表达系统、昆虫细胞表达系统和哺乳动物细胞表达系统。 1.酵母表达系统 最早应用于基因工程的酵母是酿酒酵母,后来人们又相继开发了裂殖酵母、克鲁维酸酵母、甲醇酵母等,其中,甲醇酵母表达系统是目前应用最广泛的酵母表达系统。目前甲醇酵母主要有H Polymorpha,Candida Bodini,Pichia Pastris3种。以Pichia Pastoris应用最多。

次高分子量蛋白质 Marker (43kD-200kD)使用说明

次高分子量蛋白质Marker(43kD-200kD)使用说明 货号:PR1500 规格:10T 保存:-20℃可保存至少六个月。避免反复冻融,建议分装保存。 产品简介: 次高分子量蛋白质Marker包含5种蛋白质混合物,分子量范围为43kD-200kD,每种蛋白的含量约为20ug。经SDS-PAGE电泳,用考马斯亮蓝染色后可以得到分布均匀密度相近的5条带。可以用来判断SDS-PAGE电泳后蛋白质的分子量。 本产品配有一支蛋白上样缓冲液(150ul)。 使用说明: 将两支试剂开启,取110ul蛋白上样缓冲液加入蛋白Marker干粉中,混匀,取出液体,置于 1.5ml离心管中,100℃沸水浴加热5分钟,冷却后根据需要分装成小管,建议每管分装10μl,-20℃贮存,每次取一管使用。 注:如长期贮存后使用,使用前最好取分装后的小管99℃预热3分钟后再上样电泳。 用考马斯亮蓝G-250染色后可见5条蛋白带(见下示意图)。

注意事项: 1.建议分离胶浓度7%,浓缩胶浓度4%,制胶时先配制分离胶,聚合后再配制浓缩胶。电泳时,80v电压大约跑1小时后,待指示剂沿到达分离胶上沿时,将电压调至120v,直到电泳结束。整个电泳过程大约需3-4个小时。 2.电泳之后可将胶进行染色观察,如果使用配方进行染色时效果不好或考虑其毒性,可以选择考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液,具有染色快,无毒,灵敏性高等特点,是常规染色液的替代品。 相关试剂: P10154×蛋白上样缓冲液(含DTT) T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 P1300-1SDS-PAGE凝胶制备试剂盒 P1300-500考马斯亮蓝快速染色液

环境监测数据采集传输系统软件简要介绍

环境监测数据采集传输系统软件简要介绍 一、软件功能介绍: 我公司长期专业从事环境自动监测监控系统开发和运营工作,开发的下端数据采集传输软件在实际工作中根据实际使用和管理要求不断地升级改版,目前的软件按照总局制订的《污染源在线自动监控(监测)系统数据传输标准》( HJ/T 212-2005)传输标准要求开发的,且已经过长时间的实际运行考证。 环保数据采集查询传输系统软件基于微软Windows框架开发,采用 Windows XP或 XPE嵌入式操作系统,具有工作稳定性高、开发升级方便、保密性强等特点。 本软件是用于环境监测监控的专业软件,该软件基于工控机模式的下位机程序,实现除现有的数据采集功能外,同时支持ADSL、PSTN、GPRS、CDMA和以太网,便于用户管理现场在线分析仪而开发的一套管理软件,该软件提供以下功能: ↘数据采集:采集来自仪器仪表的模拟量信号和分析仪的各状态信号;模拟信号包括流量、PH、COD等参数。 ↘数据处理:计算采样数据,得到各种测量项的分析结果和需统计数据,提供各种测量项的瞬时值、指定时间段的平均值或排放量。 ↘数据存储:保存原始采样数据和统计数据,可存储10年以上历史数据; ↘数据查询:多种方式查询显示各测量项的瞬时值、统计数据、历史数据;↘数据打印:可根据需要打印数据报表、画面内容、操作记录等; ↘系统操作:简洁的操作界面,系统、网络、监测参数设置方便; ↘通信标准:通信协议符合国家环保部《污染源在线自动监控(监测)系统数据传输标准》( HJ/T 212-2005)传输标准,且可扩展兼容各省市制定通信协议和其他通信协议; ↘数据传输:数据传输至上位监控中心平台,并可通过ADSL、PSTN、GPRS、CDMA和以太网等任意一种网络进行通信; ↘系统扩展:系统可随时增加监测参数,软件开放式构架,可扩展软件功能和进行二次开发; ↘数据安全:分级安全认证密码,以避免误操作并确保数据的安全性;

真核细胞转染操作方法

一些真核蛋白在原核宿主细胞中的表达不但行之有效而且成本低廉,然而许多在细菌中合成的真核蛋白或因折叠方式不正确,或因折叠效率低下,结果使得蛋白活性低或无活性。不仅如此,真核生物蛋白的活性往往需要翻译后加工,例如二硫键的精确形成、糖基化、磷酸化、寡聚体的形成或者由特异性蛋白酶进行的裂解等等,而这些加工原核细胞则无能为力。 一些真核蛋白在原核宿主细胞中的表达不但行之有效而且成本低廉,然而许多在细菌中合成的真核蛋白或因折叠方式不正确,或因折叠效率低下,结果使得蛋白活性低或无活性。不仅如此,真核生物蛋白的活性往往需要翻译后加工,例如二硫键的精确形成、糖基化、磷酸化、寡聚体的形成或者由特异性蛋白酶进行的裂解等等,而这些加工原核细胞则无能为力。需要表达具有生物学功能的膜蛋白或分泌性蛋白,例如位于细胞膜表面的受体或细胞外的激素和酶,则更需要使用真核转染技术。由于DNA导入哺乳动物细胞有关技术方法的发展,使真核表达成为可能。 利用克隆化的真核基因在哺乳动物细胞中表达蛋白质,具有以下多种不同用途: (1) 通过对所编码的蛋白质进行免疫学检测或生物活性测定,确证所克隆的基因。 (2) 对所编码的蛋白质须进行糖基化或蛋白酶水解等翻译后加工的基因进行表达。 (3) 大量生产从自然界中一般只能小量提取到的某些生物活性蛋白。

(4) 研究在各种不同类型细胞中表达的蛋白质的生物合成以及在细胞内转运的 情况。 (5) 通过分析正常蛋白质及其突变体的特性,阐明蛋白质结构与功能的关系。 (6) 使带有内含子而不能在原核生物如酵母中正确转录为 mRNA的基因组序列 得到表达。 (7) 揭示某些与基因表达调控有关的DNA序列元件。 DNA转染技术现已变成研究基因功能和组分的重要工具,已发展了很多转染方法,并成功应用于转染各种细胞。目前广泛应用方法有磷酸钙共沉淀法、电穿孔法、病毒载体,以及阳离子脂质体介导转染法。 进行真核转染的一般程序: 克隆目的基因(经测序验证)-准备真核表达载体-将目的基因插入表达载体中-转染-筛选-鉴定 下面以pcDNA3为载体,p16为目的基因,介绍真核转染的实验操作。 一、试剂准备 1、HBS(Hepes-buffered saline):876mg NaCl溶于90ml ddH2O,加入1M Hepes,调pH到7.4,补ddH2O至100ml, pH7.4,滤过除菌。 2、核酸贮存液,过滤除菌。 3、培养基:含血清或不含血清的,用于转染细胞的正常培养。 二、操作步骤 (一)克隆目的基因 1、根据GenBank检索的目的基因序列,设计扩增引物,并在上、下游引物的5’-端分别引入酶切位点BamHⅠ和XhoⅠ,行RT-PCR。 2、回收特异性扩增片段,连入T载体。 3、转化DH5α,质粒制备。 4、酶切初步鉴定,测序证实。 (二) 真核重组表达载体的构建:

真核表达载体

真核细胞常见表达载体 1、pCMVp-NEO-BAN载体 特点: 该真核细胞表达载体分子量为6600碱基对,主要由CMVp启动子、兔β-球蛋白基因内含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗neo基因以及pBR322骨架构成,在大多数真核细胞内都能高水平稳定地表达外源目的基因。更重要的是,由于该真核细胞表达载体中抗neo基因存在,转染细胞后,用G418筛选,可建立稳定的、高表达目的基因的细胞株。 插入外源基因的克隆位点包括Sal1、BamH1和EcoR1位点。注意在此载体中有二个EcoR1位点存在。 2、pEGFP, 增强型绦色荧光蛋白表达载体(Enhanced Fluorecent Protein Vector) 特点: pEGFP表达载体中含有绿色荧光蛋白,在PCMV启动子驱动下,在真核细胞中高水平表达。载体骨架中的SV40 origin使该载体在任何表达SV40 T 抗原的真核细胞内进行复制。Neo抗性盒由SV40早期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成,能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株。此外,载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制,而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。 用途: 该表达载体EGFP上游有Nde1、Eco47111和Age1克隆位点,将外源基因扦入这些位点,将合成外源基因和EGFP的融合基因。借此可确定外源基因在细胞内的表达和/或组织中的定位。 亦可用于检测克隆的启动子活性(取代CMV启动子,Acet1-Nhe1)。 3、pEGFT-Actin, 增强型绿色荧光蛋白/人肌动蛋白表达载体 特点: pEGFP-Actin表达载体中含有绿色荧光蛋白和人胞浆β-肌动蛋白基因,在PCMV启动子驱动下,在真核细胞中高水平表达。载体骨架中的SV40 origin使该载体在任何表达SV40 T 抗原的真核细胞内进行复制。Neo抗性盒由SV40早期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成,能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株。此外,载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制,而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。 用途: pEGFP-Actin载体在真核细胞表达EGFP-Actin融合蛋白,该蛋白能整合到胞内正在生的肌动蛋白,因而在活细胞和固定细胞中观察到细胞内含肌动蛋白的亚细胞结构。 4、pSV2表达载体 特点:该表达质粒是以病责SV40启动子驱动在真核细胞目的基因进行表达的,克隆位点为Hind111。SV40启动子具有组织/细胞的选择特异性。此载体不含neo基因,故不能用来筛选、建立稳定的表达细胞株。5、CMV4 表达载体 特点:该真核细胞表达载体由CMV启动子驱动,多克隆区域酶切位点选择性较多。含有氨苄青霉素抗性基因和生长基因片段以及SV40复制原点和fl单链复制原点。但值得注意的是,该表达载体不含有neo基因,转染細胞后不能用G418筛选稳定的表达细胞株。 其他常用克隆Vector: pBluscript II KS DNA 15 ug pUC18 DNA 25 ug pUC19 DNA 25 ug

蛋白标准品(Marker)知识汇总

蛋白Marker可分为:一、未预染的Marker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。 在western blot 过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个Western Blot 参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量精确无误了,实验结果才有说服力,除此之外,蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用,所以选择正确的蛋白Marker也是western blot实验成功的必要条件之一。 总体来说,蛋白分子量标准可以分成未染蛋白分子量标准、预染蛋白分子量标准二个级别。以下是关于蛋白分子量标准的小叙: 一. 未染色(pre mixed)蛋白分子量标准 未染色的蛋白分子量标准是最简单,也是最准确的一种。由于没有附带染料分子或者是标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,是精确判断蛋白大小必须的。现在的Marker多数都选用预混和的Marker,方便不同大小的蛋白比较。预混的Marker通常有几条带加倍浓度作为指示,因为混合的条带越多,越不好记,谁知道哪条是那条!数到眼都花了。所以当看到特别浓的那几条标志带就记得是哪里了。不过要记得,小带通常都不那么容易看清楚的。在选择上来说,当然是选择其中至少有一条条带和自己的目的蛋白大小相近的最好,越近越好。如果你的蛋白不幸在两条跨度较大Marker条带之间,选别的Marker吧。预混的Marker 使用上不如预染Marker(pre-stained)好用,因为电泳过程中完全看不到,要和目标蛋白一起等到最后染色才―开蛊‖,无法对实验起预示参照作用。完全属于―后知后觉‖型的,当然还是比―不知不觉‖不做对照的要好。 ①宽分子量蛋白标准

真核细胞常见表达载体

真核细胞常见表达载体 真核细胞, 表达载体 1、pCMVp-NEO-BAN载体 特点:该真核细胞表达载体分子量为6600碱基对,主要由CMVp启动子、兔β-球蛋白基因内含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗neo基因以及pBR322骨架构成,在大多数真核细胞内都能高水平稳定地表达外源目的基因。更重要的是,由于该真核细胞表达载体中抗neo基因存在,转染细胞后,用G418筛选,可建立稳定的、高表达目的基因的细胞株。 插入外源基因的克隆位点包括Sal1、BamH1和EcoR1位点。注意在此载体中有二个EcoR1位点存在。 2、pEGFP, 增强型绦色荧光蛋白表达载体(Enhanced Fluorecent Protein V ector) 特点: pEGFP表达载体中含有绿色荧光蛋白,在PCMV启动子驱动下,在真核细胞中高水平表达。载体骨架中的SV40origin使该载体在任何表达SV40 T抗原的真核细胞内进行复制。Neo抗性盒由SV40早期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成,能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株。此外,载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制,而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。 用途: 该表达载体EGFP上游有Nde1、Eco47111和Age1克隆位点,将外源基因扦入这些位点,将合成外源基因和EGFP的融合基因。借此可确定外源基因在细胞内的表达和/或组织中的定位。 亦可用于检测克隆的启动子活性(取代CMV启动子,Acet1-Nhe1)。 3、pEGFT-Actin, 增强型绿色荧光蛋白/人肌动蛋白表达载体 特点:pEGFP-Actin表达载体中含有绿色荧光蛋白和人胞浆β-肌动蛋白基因,在PCMV启动子驱动下,在真核细胞中高水平表达。载体骨架中的SV40origin使该载体在任何表达SV40 T抗原的真核细胞内进行复制。Neo抗性盒由SV40早期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin 抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成,能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株。此外,载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制,而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。 用途: pEGFP-Actin载体在真核细胞表达EGFP-Actin融合蛋白,该蛋白能整合到胞内正在生的肌动蛋白,因而在活细胞和固定细胞中观察到细胞内含肌动蛋白的亚细胞结构。 4、pSV2表达载体 特点:该表达质粒是以病责SV40启动子驱动在真核细胞目的基因进行表达的,克隆位点为Hind111。SV40启动子具有组织/细胞的选择特异性。此载体不含neo基因,故不能用来筛选、建立稳定的表达细胞株。 5、CMV4 表达载体 特点:该真核细胞表达载体由CMV启动子驱动,多克隆区域酶切位点选择性较多。含有氨苄青霉素抗性基因和生长基因片段以及SV40复制原点和fl单链复制原点。但值得注意的是,该表达载体不含有neo基因,转染細胞后不能用G418筛选稳定的表达细胞株。 其他常用克隆Vector: pBluscript II KS DNA 15 ug pUC18 DNA 25 ug pUC19 DNA 25 ug 说明: pBluescript II kS、pUC18 &Puc19载体适合于DNA片段的克隆、DNA测序和对外源基因进行表达等。这些载体由于在lacZ基因中含有多克隆位点,当外源DNA片段扦入,转化lacZ基因缺乏细胞,并在含有IPTG和X-gal的培养基上培养时,含有外源DNA载体的细胞

变形监测数据处理

变形监测数据处理 第一章引论 变形是自然界的普遍现象,它是指变形体在各种荷载作用下,其形状、大小及位置在时空域中的变化。 变形监测,就是利用测量与专用仪器和方法对变形体的变形现象进行监视观测的工作。其任务是确定在各种荷载和外力作用下,变形体的形状、大小及位置变化的空间状态和时间特征。 变形体的范畴可以大到整个地球,小到一个工程建(构)筑物的块体,它包括自然的和人工的构筑物。根据变形体的研究范围,可将变形监测研究对象划分为这样三类: 1.全球性变形研究,如监测全球板块运动、地极移动、地球自转速率变化、地潮等; 2.区域性变形研究,如地壳形变监测、城市地面沉降等; 3.工程和局部性变形研究,如监测工程建筑物的三维变形、滑坡体的滑动、地下开采使引起的地表移动和下沉等。 变形监测的内容,应根据变形体的性质与地基情况来定。 1)工业与民用建筑物:主要包括基础的沉陷观测与建筑物本身的变形观测。就其基础而言,主要观测内容是建筑物的均匀沉陷与不均匀沉陷。对于建筑物本身来说,则主要是观测倾斜与裂缝。对于高层和高耸建筑物,还应对其动态变形(主要为振动的幅值、频率和扭转)进行观测。对于工业企业、科学试验设施与军事设施中的各种工艺设备、导轨等,其主要观测内容是水平位移和垂直位移。 2)水工建筑物:对于土坝,其观测项目主要为水平位移、垂直位移、渗透以及裂缝观测。对于混凝土坝,以混凝土重力坝为例,由于水压力、外界温度变化、坝体自重等因素的作用,其主要观测项目主要为垂直位移(从而可以求得基础与坝体的转动)、水平位移(从而可以求得坝体的扭曲)以及伸缩缝的观测,这些内容通常称为外部变形观测。此外,为了了解混凝土坝结构内部的情况,还应对混凝土应力、钢筋应力、温度等进行观测,这些内容通常称为内部观测。 3)地面沉降:对于建立在江河下游冲积层上的城市,由于工业用水需要大量地吸取地下水,而影响地下土层的结构,将使地面发生沉降现象。对于地下采矿地区,由于在地下大量的采掘,也会使地表发生沉降现象。这种沉降现象严重的城市地区,暴雨以后将发生大面积的积水,影响仓库的使用与居民的生活。有时甚至造成地下管线的破坏,危及建筑物的安全。因此,必须定期地进行观测,掌握其沉降与回升的规律,以便采取防护措施。对于这些地区主要应进行地表沉降观测。 变形监测所研究的理论和方法主要涉及到这样三个方面:变形信息的获取;变形信息的分析与解释;以及变形预报。 对于工程建筑物,变形监测的意义重点表现在:确保安全、验证设计、灾害防治。

PEI转染法

PEI 转染法 材料: 质粒DNA 指数生长的真核细胞 PEI (聚乙烯亚胺) 1×HBS (pH7.4) 配方: PEI 储存液(100 μM):称取125 mg PEI 粉末溶解于50 ml 1×HBS (pH7.4)中, 0.2 μm 滤膜过滤,储存于4℃备用。 1×HBS (pH7.4):将8.76 g NaCl 溶解于900 ml 超纯水,加入20 ml 1 M 的HEPES,调pH 值到7.4,定容至1 L,过滤(0.2 μm 滤膜)后储存于4℃备用。方法: 1.细胞分盘:通过胰酶消化收集细胞,用适当的完全培养基以4×105 至8×105细胞/cm2 的密度平铺细胞于60 mm 组织培养皿上(根据实验需要选择培养皿,使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90%)。根据细胞贴壁情况于 含5% CO2 的37℃温箱中孵育8-24 h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染 前换入2 mL 预热的无血清培养基。 2. 制备PEI-DNA 混合物:以60 mm 组织培养皿用420 μL 反应总体积为例。准备两支1.5 mL 离心管,一管将质粒DNA(总量2-8 μg 为佳)加入240 μL HBS 中,混匀。另一管中则用HBS 将100 μM 的PEI 储存液稀释成10 μM,充分 混合。然后取180 μL 10 μM PEI 溶液加入含有DNA 的HBS 中,充分混匀后 室温静置20-30 min。最后将这420 μL 的PEI-DNA 混合液逐滴加入上述单层 细胞的细胞培养基中,轻轻摇动平皿混匀,置于含5%~7% CO2 的37℃温箱 孵育。 注:每次用100 μM 的PEI 储存液前都需要先将其充分混匀,保证所取的 浓度一致。 3. 培养6-10 h 后更换为37℃预热的含有血清的培养基,继续培养,16 h 左右可以观测到报告基因的表达。

真核细胞表达系统的类型与常用真核细胞表达载体

标签:真核细胞酵母表达系统细胞表达载体真核表达系统昆虫表达系统动物表达系统 摘要 : 原核表达系统是常被用来研究基因功能的成熟系统,由于原核表达系统具有包涵体蛋白不易纯化、蛋白修饰不完整等缺陷,人们也开始利用真核细胞表达系统来研究基因。 原核表达系统是常被用来研究基因功能的成熟系统,由于原核表达系统具有包涵体蛋白不易纯化、蛋白修饰不完整等缺陷,人们也开始利用真核细胞表达系统来研究基因。 自上世纪70年代基因工程技术诞生以来,基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行,在技术方法上得到了很大发展,时至今日已取得令人瞩目的成就。随着人类基因组计划的完成,越来越多的基因被发现,其中多数基因功能不明。利用表达系统在哺乳动物细胞内表达目的基因是研究基因功能及其相互作用的重要手段。 在各种表达系统中,最早被采用进行研究的是原核表达系统,这也是目前掌握最为成熟的表达系统。该项技术的主要方法是将已克隆入目的基因DNA段的载体(一般为质粒)转化细菌(通常选用的是大肠杆菌),通过iptg诱导并最终纯化获得所需的目的蛋白。其优点在于能够在较短时间内获得基因表达产物,而且所需的成本相对比较低廉。但与此同时原核表达系统还存在许多难以克服的缺点:如通常使用的表达系统无法对表达时间及表达水平进行调控,有些基因的持续表达可能会对宿主细胞产生毒害作用,过量表达可能导致非生理反应,目的蛋白常以包涵体形式表达,导致产物纯化困难;而且原核表达系统翻译后加工修饰体系不完善,表达产物的生物活性较低。 为克服上述不足,许多学者将原核基因调控系统引入真核基因调控领域,其优点是: ①根据原核生物蛋白与靶DNA间作用的高度特异性设计,而靶DNA与真核基因调控序列基本无同源性,故不存在基因的非特异性激活或抑制; ②能诱导基因高效表达,可达105倍,为其他系统所不及; ③能严格调控基因表达,即不仅可控制基因表达的“开关”,还可人为地调控基因表达量。 因此,利用真核表达系统来表达目的蛋白越来越受到重视。目前,基因工程研究中常用的真核表达系统有酵母表达系统、昆虫细胞表达系统和哺乳动物细胞表达系统。 1.酵母表达系统 最早应用于基因工程的酵母是酿酒酵母,后来人们又相继开发了裂殖酵母、克鲁维酸酵母、甲醇酵母等,其中,甲醇酵母表达系统是目前应用最广泛的酵母表达系统。目前甲醇酵母主要有H Polymorpha,Candida Bodini,Pichia Pastris3种。以Pichia Pastoris 应用最多。

HGO GNSS数据处理软件

测绘工程专业选修课程<控制网平差与程序设计> 软件应用-HGO GNSS数据处理软件 辽宁科技大学土木工程学院测绘工程教研室

一、软件简介 中海达GNSS数据处理软件由卫星预报、野外动静态数据采集、数据传输、项目管理、静态基线处理、动态路线处理、闭合差搜索、网平差、成果输出、坐标系管理及坐标转换等模块组成。 HGO(Hi-Target Geomatics Office)软件全名“HGO数据处理软件包”,是中海达在十多年的后处理软件运用与用户体验改进的基础上继HDS2003软件后推出的第二代静态解算软件。该软件用于高精度测量用户的基线数据处理,网平差,坐标转换。 软件的功能及特点包括: 1.该软件设计支持GPS、Glonass、Compass多系统解算,支持静态,动态(走走停停,后处理RTK)等多种作业模式。 2.全新第二代基线处理引擎,能够解算超长时间的静态数据,并能智能剔除粗差数据,用户的基线处理变得前所未有的简单。 3.全新的网平差模块,能进行WGS84系统下约束平差、当地约束平差等工作。 4.全新的用户界面设计,与国际软件接轨。 5.配套完整的解决软件工具,包括全新的Rinex转换软件ConvertRinex、坐标转换软件CoordTool、精密星历下载软件SP3Gate等。 二、软件静态数据处理流程

三、典型算例 1.数据来源 数据为辽宁科技大学测绘工程专业09级《空间定位技术及应用》实验数据,于2011年11月7日采用中海达V30采集2个时段数据,数据格式为*.ZHD。 2.建立一个新的项目 HGO数据处理软件是面向项目进行管理的。因此,不管是进行单点定位,还是进行静态基线处理、动态路线处理,或者是进行网平差。首先需要建立一个新的项目,或者打开一个点名 仪器高

低分子量蛋白质Marker(14.4kD-97.4kD)使用说明

低分子量蛋白质Marker(14.4kD-97.4kD)使用说明 货号:PR1400 规格:20T 保存:-20℃可保存至少一年。避免反复冻融,建议分装保存。 产品简介: 低分子量蛋白质Marker包含6种蛋白质混合物的冻干粉,分子量范围为14.4kD-97.4kD,每种蛋白的含量约为20-30μg。经过SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶)电泳后,用考马斯亮蓝染色可以得到分布均匀密度相近的6条带。可以用来判断SDS-PAGE电泳后蛋白质的分子量。 使用说明: 1.开封后,溶于400μL体积的1×蛋白上样缓冲液(含巯基还原剂),于沸水浴中加热5分钟,冷却后可根据需要进行小量分装,每管20μL,-20℃贮存,每次取一管使用。 2.如长期贮存后使用,使用前最好取分装后的小管沸水浴预热3-5分钟后再上样电泳,用考马斯亮蓝G-250染色后可见6条蛋白带(见下示意图)。 注意事项: 1.建议分离胶浓度12%,浓缩胶浓度5%,制胶时先配制分离胶,聚合后再配制浓缩胶。电泳时,80v电压大约跑1小时后,待指示剂沿到达分离胶上沿时,将电压调至120v,直到电泳结

束。整个电泳过程大约需3-4个小时。 2.电泳之后可将胶进行染色观察,如果使用配方进行染色时效果不好或考虑其毒性,请选择考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液,该试剂具有染色快,无毒,灵敏性高等特点,是常规染色液的替代品。 相关试剂: P10154×蛋白上样缓冲液(含DTT) P10164×蛋白上样缓冲液(含巯基还原剂) T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 P1300-1SDS-PAGE凝胶制备试剂盒 P1300-500考马斯亮蓝快速染色液

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