CTAB法提取总DNA

CTAB 法提取槐树总DNA

⑴ 分别精称1.0g 槐树新鲜叶片,去主脉,放入研钵。

⑵ 用液氮将叶片组织研磨成细粉,然后将粉末分装于2mL 离心管中。

⑶ 各离心管中加入65℃预热的2×CTAB 抽提液1000µl 和β-巯基乙醇4µl ,混和使之充分湿润,于65℃水浴锅中温育1.5h ,不时混匀。

⑷ 12000rpm 离心10min ,将上清液转移至新的离心管中,弃沉淀。

⑸ 上清液中加入等体积的酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)(v/v),抽提上清,颠倒混匀7min ,12000rmp 离心10min 。

⑹ 将离心后所得的上清液体转移至新离心管;每管加入等体积的氯仿/异戊醇(24:1)(v/v),再次抽提上清液,12 000rpm 离心10min ,上层液体转移至新管。

⑺ 每管加入1/10体积的3mol /LNaAc (pH8.0) 和等体积的异丙醇,轻轻翻转混匀,置-20℃冰箱中冰浴30min~1h,沉淀DNA 。

⑻ 12000rpm 离心10min ,弃上清。

⑼ 用70%酒精和无水乙醇各洗涤沉淀一次,分别离心2min 自然干燥。 ⑽ 加50µl TE 缓冲液溶解DNA ;保存于-20℃的冰箱中备用。

⑾ DNA浓度及质量检测:

取3μL DNA 提取液,用1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA 浓度、质量。

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