CTAB法提取总DNA

CTAB法提取槐树总DNA

⑴分别精称1.0g槐树新鲜叶片,去主脉,放入研钵。

⑵用液氮将叶片组织研磨成细粉,然后将粉末分装于2mL离心管中。

⑶各离心管中加入65℃预热的2×CTAB抽提液1000µl和β-巯基乙醇4µl,

混和使之充分湿润,于65℃水浴锅中温育1.5h,不时混匀。

⑷ 12000rpm离心10min,将上清液转移至新的离心管中,弃沉淀。

⑸上清液中加入等体积的酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)(v/v),抽提上清,颠倒

混匀7min,12000rmp离心10min。

⑹将离心后所得的上清液体转移至新离心管;每管加入等体积的氯仿/异戊醇

(24:1)(v/v),再次抽提上清液,12 000rpm离心10min,上层液体转移至新管。

⑺每管加入1/10体积的3mol/LNaAc(pH8.0)和等体积的异丙醇,轻轻翻转混

匀,置-20℃冰箱中冰浴30min~1h,沉淀DNA。

⑻ 12000rpm离心10min,弃上清。

⑼用70%酒精和无水乙醇各洗涤沉淀一次,分别离心2min自然干燥。

⑽加50µl TE缓冲液溶解DNA;保存于-20℃的冰箱中备用。

⑾ DNA浓度及质量检测:

取3μL DNA提取液,用1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA浓度、质量。

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