ELISA HIV抗体测定
HIV1+2抗体ELISA测定方法
1.原理用多种HIV-1和HIV-2特异性抗原包被反应板,当待测标本中存在HIV抗体时,该
抗体与固相化的抗原结合于反应板上,并进一步与酶结合物结合,在底物参与反应的情况下,产生显色反应
2 试剂盒组成(中山生物)
反应板(已包被HIV抗原) 8孔/条*12 底物B 6.0ML/瓶
抗HIV阴性对照0.5ML/ 瓶洗涤液(1:25稀释) 30ML/ 瓶
抗HIV阳性对照0.5ML/ 瓶终止液 6.0ML/ 瓶
酶结合物6ML/ 瓶说明书 1 份
底物A 6ML/ 瓶封口膜2片
样品稀释液6ML/瓶
3操作步骤
3.1 每次实验均须设立空白对照孔1孔, 加样品稀释液100μl.; 抗-HIV阳性对照孔2孔,
每孔50μ样品稀释液和50ul阳性对照;阴性对照2孔, 每孔50μl样品稀释液和50ul 阴性对照;质控2孔,每孔50ul样品稀释液和50ul质控血清.
3.2 剩余各孔加50ul样品稀释液和待测标本50μl.充分混匀.
3.3 覆盖粘胶纸, 置37℃孵育45分钟
3.4 取出已孵育完毕的反应板, 弃去粘胶纸, 吸干板内液体, 将洗涤液注满每孔, 吸干,
反复5次, 在一次性卷纸上将板拍干.
3.5 每孔加酶结合物50μl, 取新粘胶纸覆盖反应板, 置37℃孵育30分钟.
3.6 洗涤同步骤(4).
3.7 每孔加入底物A50μl. 底物B 50μl. 混匀, 置37℃显色10分钟
3.8 加终止液50μ
3.9 在酶标读数仪中, 取波长450nm ,以空白对照孔校零,读取每孔吸收值.
4 结果判断
抗HIV阳性对照OD值>0.8,结果有效
Cutoff Value=0.13+阴性对照均值(若阴性对照OD值小于0.05 按0.05计算)
标本OD值＜Cutoff Value为阴性
标本OD值≥Cutoff Value为阳性
5 注意事项
5.1 整个检测工作必须符合HIV实验室管理规范和生物安全守则制度, 严格防止交叉
污染, 操作时必须戴手套, 穿工作服, 严格健全和执行消毒隔离制度
5.2 HIV检测结果的判定必须以酶标仪的读数为准
5.3 所有样品洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理.
5.4 试剂使用前须预先在室温平衡至潮气干尽方可
5.5 洗涤时洗液应充盈各孔
5.6 不同批号试剂不得混用.
6 备注
厂家:中山生物工程有限公司电话:0086-760-5598017
地址:中国广东省中山市火炬开发区沙边路5号528437
编写：邹洪兴制定日期：2011.12.1
审核：邹洪兴修订日期：2012.08.16
HIV抗体硒标法测定方法
1. 检测原理利用免疫层析法原理定性测定血样本中的HIV-1/2抗体. 加样本入反
应条, 当样本迁移通过结合物包被处, 与硒胶体-抗原结合物混合重
组结合, 此混合物继续迁移通过固相包被的合成肽和重组抗原的病
人结果窗口. 如果样本中含有HIV-1/2抗体, 抗体将会与硒胶体-抗原
结合固定, 形成一条红线.
2 . 测试步骤去掉每个测试条的外包装, 加50μ血清样品与样品反应堑中(箭头所
指处),静置至少15分钟(最多60分钟)肉眼读取结果.
3 . 结果判断病人条带(Patient)和质控条带(Control)都呈红色被认为是阳性; 病人
条带无色而质控条带呈红色被认为是阴性; 若质控条带无色被认为
结果无效
4. 注意
4.1病人条带线深浅与与样品中抗体效价不一定有关
4.2 只能使用于血清/血浆
4.3 可能会有假阴性
5 备注如为阳性，则参照酶标法阳性处理原则
编写：邹洪兴制定日期：2011.12.1
审核：邹洪兴修订日期：2012.08.16
抗血清制备及抗体效价测定
摘要............................................................................. .. (4) 【实验过程】 (5) PartⅠ. NDV 抗血清制备 (5) 一、实验原理 (5) 二、实验仪器、材料和试剂 (7) 1. 仪器 (7) 2. 材料 (7) 3. 试剂 (7) 三、方法和步骤 (7) （一）NDV 兔抗血清制备 (7) 1. 家兔捉拿方法 (7) 2. 家兔固定方法 (8) 3. 初次免疫 (9) 4. 二次免疫 (10) 5. 终末免疫 (10) 6. 试血 (10) 7. 颈动脉放血 (10) 8. 血清分离 (12)
9. 抗血清保存 (12) （二）NDV 鼠抗血清制备 (12) 1. 小白鼠的捉拿和固定 (12) 2. 初次免疫 (13) 3. 二次免疫 (15) 4. 终末免疫 (15) 5. 试血 (16) 6．放血 (18) 7．血清分离 (19) 8．抗血清保存 (19) Part Ⅱ. 琼脂双扩散实验检测抗体效价 (19) 一、基本原理 (19) 二、实验仪器、材料和试剂 (20) 1. 仪器 (20) 2. 材料 (20) 3. 试剂 (20) 三、方法和步骤 (20) 1. 灭活鸡新城疫病毒 Ulster 2C 株抗原提取 . 20 2. 1%琼脂糖配制 (20) 3. 倒平板 (21) 4. 打孔 (21) 5. 稀释抗血清 (22)
6. 加样 (22) 7. 孵育 (23) 8. 结果观察 (23) Part Ⅲ. 酶联免疫吸附试验测定 NDV 抗血清效价 (23) 一、基本原理 (23) 二、实验仪器、材料和试剂 (24) 1. 仪器 (24) 2. 材料 (24) 3. 试剂 (24) 三、方法和步骤 (25) 1. 鸡新城疫病毒 Ulster 2C 株灭活抗原提取 . 25 2、抗原包被 (25) 3. 封闭 (25) 4. 洗板 (25) 5. 稀释抗血清 (25) 6. 加抗血清 (26) 7. 洗板 (26) 8. 加酶标二抗 (26) 9. 洗板 (27) 10. 显色 (27) 11. 终止 (27) 12. 读数 (27)
Q_HBY QF0001-2016抗体检验标准操作规程
Q/HBY 抗体检验标准操作规程 杭州博茵生物技术有限公司发布
前 言 本规范由杭州博茵生物技术有限公司提出。 本规范起草单位:杭州博茵生物技术有限公司。 本规范主要起草人：李因来、徐东鑫、陈浙、潘剑用。本规范于2016年7月27日首次发布
编制人陈浙日期2016.07.26部门抗体研发部审核人徐东鑫日期2016.07.27部门质量部 批准人潘剑用日期2016.07.27部门抗体研发部发放编号Q/HBY QF0001‐2016生效日期2016.07.27 抗体检验标准操作规程 1.目的 对单克隆抗体成品的检验操作做出规定，以保证成品质检结果的准确性。 2.范围 适用于下述第6条“合格标准”表格中所列抗体成品的效价测定。 3.职责 操作人员依据本规程进行抗体检验。 4.材料与设备、试剂与溶液 见下述相关文件。 5.检验方法 5.1外观 包装完好，无漏液现象，标签准确。 5.2物理性能 自然光下目测，观察产品溶液是否澄清、是否有沉淀或悬浮物。 5.3浓度 按QC-0004《抗体浓度测定（A280）标准操作规程》测定样品的浓度。 5.4纯度 将样品稀释到1mg/ml，按QC-0003《蛋白SDS-PAGE检测标准操作规程》进行检测并作记录。其中，样品缓冲液含DTT或β-巯基乙醇，样品应加热处理，浓缩胶浓度为3%，分离 胶浓度为12%，染色方法为考染。 5.5效价 按QC-0002《效价检测标准操作规程》进行。
6.合格标准 项目 产品 M010101M010102 外观包装完好，无漏液现 象，标签准确 包装完好，无漏液现 象，标签准确 物理性能无色澄清液体、无沉 淀、无悬浮物 无色澄清液体、无沉 淀、无悬浮物 浓度≥3mg/ml，且偏差± 5% ≥3mg/ml，且偏差± 5% 纯度≥95%≥95% 效价 1.28ng/ml 1.28ng/ml 7.相关文件 QC-0002《抗体效价检测标准操作规程》 QC-0003《蛋白SDS-PAGE检测标准操作规程》 QC-0004《抗体浓度测定（A280）标准操作规程》 8.相关记录 QF-0001-RE-01《抗体检验报告》 QF-0002-RE-01《抗体效价检测记录》 QC-0003-RE-01《蛋白SDS-PAGE检测记录》 QC-0004-RE-01《抗体浓度测定（A280）记录》
HIV的实验室诊断
HIV实验室诊断 一、HIV病毒是带有包膜的RNA逆转录病毒，在我国流行的是HIV-1。 二、HIV实验室诊断 人体感染HIV后，血液中最先出现HIV抗原，然后很快消失直到疾病后期才重新出现。几周后出现IgM抗体并很快消失，此后,IgG抗体出现并一直存在。因此，HIV感染的实验室诊断以抗体检测为主，病毒及相关抗原的检测为辅。 抗体检测分为初筛试验和确证试验两种，初筛试验为阳性的血清必须进一步确证，确证实验为阳性的方可报告为HIV感染阳性。 多聚酶链式反应(PCR)主要用于检测血浆中HIV的RNA含量，目前主要用于预测母亲将HIV传染给胎儿的可能性以及新生儿的HIV感染状况。此外，尚可用于判断病人的预后及监测抗病毒治疗的效果。 （一）HIV抗体的初筛检测 初筛试验的要求是敏感性高，理论上要求达到100%，尽可能避免漏掉可能阳性的对象，相对来说，对特异性要求不是太严，允许有少量假阳性，这些假阳性可以通过重复试验和确证试验排除。 HIV抗体初筛检测的方法很多，如酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、明胶颗粒凝集实验(gelatine particle agglutination assay, PA)、乳胶凝集实验(latex agglutination assay, LA)、各种快速检测实验(rapid tests)等。 1．酶联免疫吸附实验检测HIV1/2 型抗体，酶联免疫吸附实验（ELISA）是最常见的HIV抗体检测方法，它具有准确性高、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点，适合于大批量标本的检测，是献血员筛选和临床诊断最常用的方法。 3．胶体金法检测HIV1/2抗体实验 胶体金法检测HIV抗体是一种不需要任何仪器设备的血清／血浆检测法，它利用免疫层析分析原理来快速检测血清／血浆中是否含有HIV抗体，从而用于判断人体是否受到HIV1型／HIV2型病毒感染。 注意：由于样本中HIV抗体滴度的不同，测试区（T）内的红色条带会显现出不同深浅的颜色。但是，本试剂盒的测试结果不能做为判定样本中抗体滴度高低的依据。 (二)、初筛试验每一次检测阴性者可报告阴性，若第一次检测阳性，则需进行复测，复测时（最好用不同类型的试剂）可同时测定两孔，判定方法如下：
血型抗体效价测定
血型抗体效价测定 目的了解血型抗体效价测定的操作方法。 原理将被检抗血清作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现1个（+）凝集的试管稀释倍数之倒数定为该抗体的效价。 器材小试管、刻度吸管、37°C水浴箱。 试剂1.标准2%A型红细胞生理盐水悬液。 2．生理盐水。 标本被检者血清。 操作以抗A效价测定为例。 1．血清倍比稀释取10支小试管，每管加入生理盐水0.1ml。在第1管中加入0.1ml被检者血清，混匀后吸取0.1ml加入第2管，依此类推，至第 10管，最后弃去0.1ml。 2．加入抗原红细胞于每管中加入2%A型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。 3．温育置15~20°C室温中温育15min。 4．离心和观察结果以1000r/min离心1min，以出现1个（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的倒数定为该抗血清效价。 注意事项 1．倍比稀释要准确，避免稀释不匀出现跳管现象。 2．离心后试管内上清液出现溶血，表明不仅有抗原抗体反应，而且有补体激活，具有重要临床意义。 血型抗体效价测定 目的了解血型抗体效价测定的操作方法。 原理将被检抗血清作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现1个（+）凝集的试管稀释倍数之倒数定为该抗体的效价。 器材小试管、刻度吸管、37°C水浴箱。 试剂1.标准2%A型红细胞生理盐水悬液。 2．生理盐水。 标本被检者血清。 操作以抗A效价测定为例。 1．血清倍比稀释取10支小试管，每管加入生理盐水0.1ml。在第1管中加入0.1ml被检者血清，混匀后吸取0.1ml加入第2管，依此类推，至第10管，最后弃去0.1ml。 2．加入抗原红细胞于每管中加入2%A型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。 3．温育置15~20°C室温中温育15min。 4．离心和观察结果以1000r/min离心1min，以出现1个（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的倒数定为该抗血清效价。 注意事项 1．倍比稀释要准确，避免稀释不匀出现跳管现象。
全国艾滋病检测技术规范(2015年修订版)
附件1 全国艾滋病检测技术规范 National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2015年修订版） 中国疾病预防控制中心 二○一五年十二月
全国艾滋病检测技术规范National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2015年修订版） 中国疾病预防控制中心 二○一五年十二月
前言 艾滋病在我国的流行已数十年，随着感染者和临床病人的不断增加、感染人群的变化，艾滋病检测工作量逐渐加大，对监测和检测的需求也不断增加，承担艾滋病检测的实验室已遍及全国各级医疗、疾病预防控制、采供血、妇幼保健机构，出入境检验检疫、军队等各个系统。为了尽早发现HIV感染者和艾滋病病人，及早提供咨询、治疗，同时为适应基层艾滋病检测工作需求，在新的形势下，根据《关于艾滋病抗病毒治疗管理工作的意见》、《中国预防与控制艾滋病中长期规划（1998—2010年）》、《中国遏制与防治艾滋病十二五行动计划的通知（国办发[2012]4号）》、“四免一关怀”等国家艾滋病防治重要方针政策和十三五防治工作重点，在广泛征求各省、市疾病预防控制机构和医疗机构意见的基础上，在中华人民共和国卫生和计划生育委员会艾滋病专家及省级专家的参与下，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心对《全国艾滋病检测技术规范（2009年版）》进行修改、增补和完善，制定出《全国艾滋病检测技术规范（2015年版）》（以下简称《规范》），使其既能满足目前艾滋病检测工作的实际需求，又能体现检测技术的发展。 本次《规范》修订工作立足于我国目前检测状况，结合发达国家使用的指南，主要对以下几个方面内容进行了修改、增补和完善：（1）完善了不同的检测策略，并将其整合为独立的一章；（2）增加了HIV-1新
新生儿溶血病血清学检查标准操作规程
新生儿溶血病血清学检查标准操作规程 (一)检验目的 检测孕妇产前与其丈夫ABO及Rh血型相容性、孕妇IgG 抗体效价、产后新生儿体内不相容抗体存在情况、新生儿与产妇之间血型相容性，为新生儿溶血病的预防、诊断及治疗提供可靠的实验室依据。 (二)检验原理 新生儿溶血病是由母婴血型不合，母亲体内与新生儿红细胞抗原不配合的IgG性质的血型抗体进入新生儿体内，破坏新生儿或胎儿红细胞而引起，可发生在胎儿期和新生儿早期，溶血严重者可出现死胎而流产，存活者则有不同程度的新生儿黄疸。新生儿溶血病产前诊断方法主要包括检测胎儿父母的ABO及Rh血型、孕妇不规则抗体筛查、外周血抗A ／抗B或Rh抗体效价来判断新生儿溶血病发生的可能性及严重程度；新生儿溶血病产后诊断主要包括母子ABO及RhD 血型鉴定试验、新生儿标本三项试验，为临床诊断及进一步采取治疗手段提供可靠的依据。 (三)适用范围 适用于新生儿溶血病产前、产后血型血清学试验。 (四)设备性能参数 参见血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Ortho BioVue离心机及各全自动血型／配血系
统使用说明书。 (五)器材与试剂 1.器材血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Or-tho BioVue离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mmXl2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液枪、一次性移液枪头。 2.试剂DiaMed ABO／RhD血型卡、OrthoBioVueABO ／RhD血型卡、抗A、抗B血清、Rh分，型血清、生理盐水、抗球蛋白试剂(市售单克隆)、抗体筛查试剂红细胞、抗体鉴定试剂红细胞、致敏的阳性对照细胞(自制)。 (六)标本要求 1.夫妇标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。 2.患儿标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无明显乳糜。 (七)校准步骤 参照血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、OrthoBioVue离心机及各全自动血型／配血系统使用说明书中的校准要求执行。 ’ (八)操作程序
HIV检测方法
HIV 实验室诊断
人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)及其相关标志的检测是预防 HIV 感染和艾滋病临床治疗中重要的环节，在艾滋病的防治工作中具有重要作用，如艾滋病的 诊断、HIV 感染的诊断、血源及器官供体的筛选、流行病学调查、艾滋病病人及 HIV 感染 者的病情动态观察、临床治疗疗效考核以及 HIV 疫苗的安全性和效果鉴定等。 HIV 感染标志分为病毒标志、免疫标志和相关标志三大类。病毒标志是指直接从 HIV 感染者体内分离出病毒或检出 HIV 组成成分(抗原或核酸)。免疫标志是指 HIV 感染所产生 的 HIV 抗原、抗体等免疫物质。相关标志是指 HIV 感染后与艾滋病病情进展有密切关系的 某些标志，如 CD4 细胞、CD8 细胞，β2 微球蛋白、有关细胞因子等。这些标志的测定可 为 HIV 感染及临床疗效的考核提供极为重要的诊断、治疗和预后指征。目前 HIV 抗体的检 测是艾滋病实验室检测中最常用的方法，因为 HIV 抗体是患者感染 HIV 后最容易检出并且 持续时间最长的免疫学标志，而且抗体的检测方法大多简便、经济，易于推广应用。 在介绍各种 HIV 实验室诊断方法之前，为了使实验室工作人员能够有效地确保结果准 确、可靠、优质，我们必须对作为一种感染因子的 HIV 以及由它所导致的致命性危害有基 本的认识。实验室工作人员应特别注意病毒的结构、抗原组成，人体的免疫反应，诊断试 验的基本原理、试验结果的解释，以及为了准确而有效地提供实验诊断所必需的质量保证 措施。如果由于缺乏技术专长或基本知识而造成不正确的试验结果是不可原谅的。现将有 关内容扼要介绍如下： 一、人类免疫缺陷病毒(HIV)概述 （一） 年份 1981 艾滋病病原体的发现和命名 事 由 命 名
美国首先在洛杉矶男性同性恋中发现 5 例以 往很罕见的卡氏肺囊虫肺炎和 26 例卡波济氏 肉瘤患者，这些病人均表现有严重的免疫缺 陷，但原因不明。
1982 年将这种新的疾病命名为 “获得性免疫缺陷综合征” Acquired Immuno Deficiency
Syndrome，AIDS，即艾滋病 淋巴结病相关病毒 Lym phadenopathy Associated
1983
从艾滋病流行学资料分析很可能是由病毒引 起的。 法国巴斯德研究所 Montagnier 等首先从 多发性淋巴结病综合症病人分离到一种新的 逆转录病毒
Virus，LAV
1984
美国国立癌症研究所 Robert Gallo 等报道从艾 滋病病人活检组织分离到一种新的逆转录病 毒与其以前发现的 HTLV-1 和 HTLV-Ⅱ不同。
人类嗜 T 淋巴细胞Ⅲ型病毒 Human T-cell Lymphatropic Virus
typeⅢ，HTLV-Ⅲ AIDS Related Virus， ARV
1984
美国加州大学分离出艾滋病相关病毒
HIV抗体检测
第二章 HIV抗体检测 1 范围 本章规定了HIV抗体的检测方法、检测程序、检测报告及检测策略，适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者/AIDS 病人的诊断、报告和处理的实验室依据。 2 规范性引用文件 Revised recommendations for the selection and use of HIV antibody tests. WHO/UNAIDS Revised version 2001. 实验室生物安全通用要求（GB 19489-2004）。 3 HIV抗体检测实验室 应符合《全国艾滋病检测工作规范（1997年版）》中对检测实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。 应符合《实验室生物安全通用要求》（GB 19489-2004）对II级生物安全实验室（BSL-2）的各项要求。 实验室的质量保证按本规范第八章规定执行。 实验室安全防护按本规范第七章规定执行。 4 HIV抗体检测的目的和要点 4.1 HIV抗体检测的目的 4.1.1 HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。 4.1.2 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。 4.1.3 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。 4.1.4 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 4.2 HIV抗体检测的要点 4.2.1 筛查试验阳性不能出阳性报告。 4.2.2 严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。 4.2.3 严格按照试剂盒说明书操作。 4.2.4 注意防止样品间交叉污染。
母体IgG抗体效价检测卡操作规程
孕妇血清IgG抗体效价检测操作规程 [样本要求]：血样标本最好采用EDTA抗凝（也可以用枸橼酸钠等抗凝），用血清代替血浆进行检测时，用前离心，2000g×10min，防止纤维蛋白干扰反应结果。 [样品准备]： 试剂配制：用985ulPH7.4的PBS(或者生理盐水)溶解15ul二巯基乙醇（2-Me）,即为0.2M(2-Me)应用液,密封，避光，置2---6℃保存. 红细胞标本的制备：用生理盐水配置红细胞悬液，红细胞最终浓度为1%左右. 血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中,10分钟后离心取上清;或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中,4℃放置12小时,或37℃ 放置2小时后离心,2000Rpm,10分钟,取上清.该上清不得有 絮状物或沉淀； [配套试剂]：孕妇IgG抗体 效价卡，标准A、B、O红细 胞（取决于父亲血型）， 0.2M(2-Me)应用液 [实验步骤] 1、试剂卡室温平衡， 离心一次，标记编 号； 2、配制中和血浆：先取待检者血浆200微升与生理盐水600微升做4倍稀释，然后取稀释后的标本和 0.2M巯基乙醇(2-Me)应用液各200ul，混匀，37℃孵育30---60分钟，（充分破坏标本中IgM类抗体） 既得到孕妇的中和血浆。 3 4、在所有孔中加入50ul健康人O型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统以外IgG血型抗体)或所有孔 中加入50ul健康人A型或B型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统IgG血型抗体)，然后加入上述表格中稀释的中和血浆各50ul 5、把加有血浆和红细胞的微柱卡置37 ℃专用孵育器孵育15分钟； 6、用专用离心机离心5分钟（900r/min2分钟1500r/min3分钟）。判定结果。 [结果判定]效价值：产生3+凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。 [参考值] 1、RH系统抗体效价16有临床意义 2、ABO系统抗体效价64有临床意义 [注意事项] 1.据文献报道微柱凝胶法检测出的母体效价值比常规聚凝胺和抗人球蛋白试管法高出1-2个滴度 （根据P.L.Mollison所著教材《临床医学中的输血（Blood Transfusion in Clinical Medicine）》） 2. 红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。如不 得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。
抗体效价测定操作规程
抗体效价测定操作规程 操作步骤： 一.IgG 类 I.IgG类抗体效价滴定，须取适量血清200］加等体积2—Me溶液混合，封口，置37C水浴箱作用60分钟，先稀释血清：200L病人血清 600L 生理盐水备用，排列6 支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，在第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L 暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是 1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256 。 2.加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L，混匀。（如待检血清抗体为抗A,则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B,则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B,则倍量稀释两份血清，一份加入A 型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；） 3.先直接观察离心结果，之后在每管分别加入凝聚胺试剂盒中的R1 液3d,混合30S均匀后，在各加R2液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判读结果。通常以肉眼观察到的第一个“±”的凝集管作为判断的终点, 终点血清稀释度的倒数为效价（Titer ）,或称滴度。 二.IgM 1?血清连续倍量稀释法先稀释血清：100L病人血清+700L生理盐
水备用，排列6 支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L,第一管和第二管中各加入稀释血清200L,第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L 暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是 1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256 。 2. 加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L,混匀。（如待检血清抗体为抗A,则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B,则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B,则倍量稀释两份血清，一份加入A 型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；）三．此类为IgM 类盐水抗体可立即离心后观察。 四． 五．（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）
输血相容性检测作业指导书范本
输血相容性检测作业指导书范本 目录 第一章规章制度 第一节临床输血管理委员会一、临床输血管理委员会组成 二、临床输血管理委员会工作职责三、临床输血管理委员会工作计划第二节临床用血申请与审批管理一、临床用血计划的拟定 二、临床用血申请和审批制度 三、临床退血管理 第三节临床输血操作步骤及岗位职责 一、临床输血操作步骤 二、各岗位职责流程图 第四节输血科管理制度 一、科室工作守则 二、临床用血有控制感染的方案及管理制度三、输血反应及输血感染疾病的登记报告与调查处理制度 四、消毒隔离及污物处理制度 五、工作人员健康体检制度 六、考勤制度 七、请假制度 八、人事考核制度 九、奖惩制度 十、计算机使用管理制度 十一、仪器设备管理制度
十二、值班工作制度 十三、临床用血计划申报登记制度十四、配输血查对制度 1 十五、血型鉴定与交叉配血的复查与核对制度十六、血液储存、发放、临床输血和血液报废制度 十七、血液质量监测制度 十八、仪器设备认购、验收、使用管理、保养、维修及报废制度 十九、试剂的认购与入库、领用制度二十、计量管理制度 二十一、差错事故登记、报告制度二十二、方便病人配合临床制度二十三、科学合理用血制度 二十四、紧急用血制度 二十五、输血治疗知情同意制度二十六、各种登记记录管理和保存制度二十七、库房管理制度 二十八、档案保管制度 二十九、输血不良反应处理和回报制度三十、交接班制度 三十一、血液标本的留取接收保存制度三十二、实验室管理制度 第五节、岗位职责 一、输血科主任岗位职责 二、主任、副主任技师岗位职责三、主管技师职责 四、输血科技师岗位职责 五、输血科技士岗位职责 六、临床医师在用血时的职责 七、临床护士在用血时的职责 第二章仪器、设备使用操作规程
HIV抗体检测技术规范
HIV抗体检测技术规范 1 范围 本章规定了HIV抗体的检测方法、程序、结果报告、检测策略及质量控制。适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者诊断和监测的实验室依据。 2 规范性引用文件 《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-2008） Guidance for HIV testing in the Western Pacific Region. WHO Draft 19 July 2008. Statement from the Surveillance and Survey Working Group and the Laboratory Working Group to the Office of the Global AIDS Coordinator.26 Nov.2006. Guidelines for the use of the BED assay for incidence estimation and surveillance in resource-limited countries. Atlanta, 5 June 2006. Revised Guidelines for HIV Counseling, Testing, and Referral. U.S. CDC 2001. Current HIV-2 diagnostic strategy overestimates HIV-2 prevalence in China. Journal of Medical Virology,
艾滋病检测点标准操作规程(胶体金法)
HIV抗体检测标准操作规程（SOP文件） 1、目的： 为了规范本卫生院艾滋病检测点的正常运行，保证艾滋病抗体检测的准确，确保实验室生物安全，特制定本操作规程。 2、适用范围： 适用于本卫生院艾滋病抗体检测从标本的采集、处理、检测到报告的全过程。 3、职责： 各检测工作人员按标准操作规程进行艾滋病抗体检测，本院艾滋病检测工作领导小组负责对检测活动全过程及各项生物安全措施执行情况进行监督。 4、标准操作程序： 4.1样品的采集和处理 4.1.1样品的采集： 4.1.1.1血清样品采集：用真空采血管抽取5mL静脉血，室温下自然放置1-2小时，待血清凝固和血块收缩后在用4000rmp离心15min，吸出血清备用。 4.1.1.2抗凝血样品采集：用加有抗凝剂的真空管或用消毒注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管，反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。 4.1.1.3采样注意事项： 4.1.1.3.1采集样品应按临床采血技术规范及试剂盒说明书要求进行。 4.1.1.3.2采集标本时应注意安全，直接接触HIV感染者或艾滋病病人血液和体液的操作应戴双层手套。 4.1.2样品的保存： 用于抗体检测的血清或血浆样品应存放与-20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2-8℃。 4.1.3样品的运送： 4.1.3.1实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类、采样时间。
4.1.3.2将试管放入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒。在试管的周围垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。 4.1.4样品的接收： 4.1.4.1含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。 4.1.4.2核对标本与送检单，检查样品管有无破损及遗漏。如发现遗漏应立即将尚存留的样品移出、对样品管和盛器消毒，同时还要报告有关领导和专家。 4.2检验方法和步骤 4.2.2快速检测法（胶体金法） 4.2.2.1原理 采用胶体金免疫技术和层析原理，定性测定血清样本中的HIV1+2抗体。 4.2.2.2操作步骤 4.2.2.2.1将标本平衡至室温。 4.2.2.2.2将所需数量的测试卡从包装盒中拿出平衡至室温，打开铝箔包装袋，平置于台面上并编号（与样本编号相对应）。 4.2.2.2.3用微量加样器取试剂说明书规定的样本血清或血浆，加到测试卡的加样处。 4.2.2.2.4在试剂说明书规定的时间内观察结果。 4.2.2.3结果判定： 4.2.2.3.1阳性：在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带。如果检测区的条带隐约可见，建议对该样本重复试验，并使用其他厂家的试剂确认。 4.2.2.3.2阴性：只在对照区出现一条紫红色条带。 4.2.2.3.3无效：对照区未出现紫红色条带。 4.2.2.3.4注意：在规定的时间内不论测试区内的色带颜色深浅与否均应判为阳性。 4.3仪器的使用和维护 4.3.1设立常用仪器的维护制度，以保证正常运转；根据使用情况更换必要的部件： 4.3.2冰箱 定期检查温度并作好记录，必须每天检查和记录冷冻和冷藏室的温度。 4.3.3定期检查其他仪器设备。 4.4 HIV抗体筛查结果的记录、解释与报告 4.4.1筛查试验呈阴性反应出具HIV抗体阴性报告。 4.4.2筛查试验呈阳性反应，可出具“HIV抗体待复检”报告，不能出阳性报告。同时应尽快进行以下处理： 4.4.2.1填写HIV抗体筛查报告，经检测者、复核者和签发者审核签字。 4.4.2.2尽可能重新采集受检者的血样。
常用的HIV诊断方法
HIV/AIDS艾滋病诊断是一个十分严肃的问题，任何诊断的错误结果无论是假阴性还是假阳性，对家庭和社会都会造成十分严重的后果。HIV检测是诊断HIV感染及艾滋病的重要实验室依据之一，要知道是否感染了HIV可以通过检测病毒的抗体、抗原、核酸或通过病毒培养来确定。常用于诊断HIV/AIDS的方法是HIV抗体检测，它是诊断HIV/AIDS的主要指标，也是世界卫生组织和我国卫生部推荐使用的HIV感染诊断方法。为了最大限度地保证诊断结果准确，HIV诊断采用特殊的检测策略，即先用敏感性高的初筛试剂进行初筛，如果阳性再用特异性强的确认试剂进行确认。检测HIV抗体常用的初筛方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、凝集试验和各种快速诊断方法，确认的方法有蛋白印迹法(WB)、放射免疫沉淀试验(RIP)、间接免疫荧光试验(IFA)等。一般先用ELISA做初筛试验;如果阳性，再用蛋白印迹法来确认。以下介绍一下较常用的HIV抗体测定的方法。 一．初筛试验方法 1．酶联免疫吸附试验（ELISA） 酶联免疫吸附试验简称酶标法，是最常用初筛检测方法，在HIV抗体的测定中有四种模式：间接法、双抗原夹心法、捕获法和竞争法，其中以间接法用的最多。 1）间接法：将HIV抗原纯化后固定于微孔板上，然后加入待测标本，清洗后加酶标记抗人免疫球蛋白（IgG），清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图1） 2）双抗原夹心法：将HIV抗原固定于微孔板上,然后加入待测标本，清洗后加入酶标记的HIV抗原，清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图2）
3）捕获法：将非特异性的兔抗人免疫球蛋白抗体固定于微孔板上，然后加入待测标本,清洗后加入酶标记的HIV抗原，清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图3） 4）竞争法：：将HIV抗原固定于微孔板上,然后同时加入待测标本和一定数量的酶标HIV抗体，如果标本中有HIV抗体,即与加入的酶标HIV抗体竞争结合固定在微孔板上的抗原，标本中HIV抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体就愈少，清洗后加入底物。结果判断与间接法相反，产生有色反应即为阴性，无色反应的为阳性（见图4）
NDV抗血清制备及抗体效价测定
NDV抗血清制备及抗体效价测定 【实验目的】 1. 学习抗血清制备的基本原理，掌握兔和小鼠免疫注射方法、兔颈动脉放血、小鼠眼球采 血技术。 2. 学习双向琼脂扩散实验的基本原理，掌握的基本程序和结果判读方法。 3. 学习酶联免疫吸附实验（ELISA）的基本原理，掌握间接ELISA的基本程序和结果判读 方法。 4. 学习免疫印迹实验的基本原理，掌握免疫印迹记实验的的基本程序和结果判读方法。 PartⅠ. NDV抗血清制备 一、实验原理 将具有免疫原性的物质注入健康动物体内后，抗原可刺激机体相应B细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。待动物血清中存在大量抗体时，采集动物血液，分离析出血清，便得到所需的抗血清（免疫血清或抗体）。由于抗原性物质通常具有多个抗原决定簇，可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌各种抗原决定簇的抗体，免疫血清中实际上是含有多种抗体的混合物，所以这种免疫法获得的免疫血清又称为多克隆抗体（Polyclonal antibody，PcAb）。多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为了获得特异性强，效价高的抗血清，除了抗原的因素外，还需注意动物品系的选择、抗原注射的浓度、剂量、次数、间隔时间及注射途径等。对于免疫原性较弱的可溶性抗原(如蛋白质类抗原)要加入佐剂，以增强免疫性。 本实验介绍新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）抗血清的制备过程。新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）又称亚洲鸡瘟病毒、伪鸡瘟病毒或禽肺脑炎病毒。在病毒分类学中的位置属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）、副黏病毒属（Paramyxovirus）中的一个种。该病毒主要危害鸡、珠鸡和火鸡，在被侵袭的鸡群中迅速传播，强毒株可使鸡群全群毁灭。以新城疫病毒灭活疫苗（Ulster 2C株）灭活油剂苗多种途径免疫兔和小白鼠，制备新城疫病毒抗血清。 二、实验仪器、材料和试剂 1. 仪器
HIV抗体检测
HIV抗体检测
第二章 HIV抗体检测 1 范围 本章规定了HIV抗体的检测方法、检测程序、检测报告及检测策略，适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者/AIDS病人的诊断、报告和处理的实验室依据。 2 规范性引用文件 Revised recommendations for the selection and use of HIV antibody tests. WHO/UNAIDS Revised version 2001. 实验室生物安全通用要求（GB 19489-2004）。 3 HIV抗体检测实验室 应符合《全国艾滋病检测工作规范（1997年版）》中对检测实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。 应符合《实验室生物安全通用要求》（GB 19489-2004）对II级生物安全实验室（BSL-2）的
各项要求。 实验室的质量保证按本规范第八章规定执行。 实验室安全防护按本规范第七章规定执行。 4 HIV抗体检测的目的和要点 4.1 HIV抗体检测的目的 4.1.1 HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。 4.1.2 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。 4.1.3 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV 感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。4.1.4 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 4.2 HIV抗体检测的要点 4.2.1 筛查试验阳性不能出阳性报告。 4.2.2 严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。 4.2.3 严格按照试剂盒说明书操作。 4.2.4 注意防止样品间交叉污染。
孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程
孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程 【原理】 新生儿溶血病HDN发生的主要原因在于母子血型不合，血型系统最主要的类型为ABO血型系统，本实验采用微柱凝胶检测孕妇血清中的抗A（B）IgG抗体效价。 【试剂】 6%牛血清白蛋白；生理盐水；凝胶卡 【标本采集】 孕妇静脉血3毫升，肝素钠抗凝，孕妇爱人静脉血3毫升，肝素钠抗凝。将孕妇标本制作成血清标本，孕妇爱人标本制成0.5%红细胞标本（用生理盐水洗涤后配制）。 【操作步骤】 1．取孕妇血清标本50微升加入等体积的牛血清白蛋白，37度水浴温育30～60分钟；2．将血清倍比稀释成9管，依次为1：4、8、16、32、64、128、512、1024、2048管；3．将卡作好标记，在所有孔中加入经处理好的孕妇血清标本50ul； 4．然后在所有孔中加入50ul的孕妇爱人0.5%红细胞标本； 5．37度孵育15分钟（专用孵育箱）； 6．专用离心机离心5分钟；900rpm2分钟，1500rpm3分钟； 7．取出判定结果； 【结果判定】 阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中； 阴性结果：红细胞完全沉降到胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。 【结果报告】 产生1+阳性凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。 【注意事项】 1．红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应，尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本试验。 2．血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍红细胞沉淀，呈假阳性反应。 3．如在微柱凝胶中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所臻溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。 4．本凝胶卡价格不菲，成本较高，请您节约使用。 【临床意义】 有人观察1632例孕妇血清中IgG抗A（B）≥1：64者249例；ABO-HDN发生率随IgG抗A（B）效价升高而上升；HDN与妊娠史的频率有关，随着年龄上升，孕妇个体IgG抗A（B）抗体效价也随之上升。夫妇间ABO血型不合者应及时检查产前血型抗体水平，用于预防不良妊娠的发生；IgG抗A（B）效价的高低与HDN的发病率成正比；孕妇血清IgG抗A（B）效价≥1：64需定期检测抗体效价水平及时用药降低抗体效价，以预防新生儿溶血病的发生。
艾滋病检测质量控制试题
艾滋病检测质量控制试题 （总分：100分） 单位：姓名：得分： 一、填空题：（30分，每空2分） 1、常规HIV抗体检测分为和。 2、在艾滋病病毒感染的窗口期进行HIV抗体检测，结果呈 ，这段时期 已具有 ，时间一般为 。 3、WHO推荐，在为病人提供医疗服务时，无论是血液还是体液，也不论它们 是阳性还是阴性，都应当采取 原则。 4、艾滋病职业暴露的处理原则包 括 、 、和 。 5、HIV检测实验室污物处理的推荐消毒方法为： 。 6、质量管理包 括 、 、 。 二、判断题：（27分，每题3分） 1、HIV抗体快速检测结果阳性即表示受检者已感染HIV。（） 2、HIV抗体快速检测结果阴性一定表示受检者未感染HIV。（） 3、HIV确证结果为阳性，表明受检者感染了HIV。( ) 4、对HIV抗体不确定样本应进行追踪检测。（） 5、艾滋病检测点经现场验收并在卫生行政部门备案后可开展检测工作。（） 6、艾滋病检测点的技术人员需要有相关的检验或医学知识、经过县级以上相关专业技术部门培训并取得合格证书。（） 7、快速检测中，只要检测带出现阳性反应，就可以判断为阳性结果。（） 8、艾滋病检测点必须与艾滋病筛查实验室建立密切的联系，并接受筛查实验室的技术指导和督导。（） 9、艾滋病检测点发现的艾滋病抗体筛查阳性反应样品必须及时送艾滋病 筛查实验室或确证实验室，不得擅自处理。（） 三、问答题：（43分） 1、简述快速检测试剂使用要求。（7分）
2、艾滋病检测点必须具备的条件有哪些？（8分） 3、简述HIV抗体快速检测的原理。（8分） 4、简述艾滋病快速检测点的检测程序。（8分） 5、请分别阐述HIV职业暴露的预防及暴露后的处理原则。（12分）
艾滋病检测
艾滋病检测 包括筛查试验(含初筛和复检)和确证试验。HIV1/2抗体筛查方 法包括ELISA法、化学发光法或免疫荧光试验、快速检测(斑点ELISA和斑点免疫胶体金或胶体硒快速试验、明胶颗粒凝集试验、 免疫层析试验)等，确证试验常用的方法是免疫印迹法。 筛查试验呈阴性反应可出具HIV1/2抗体阴性报告，见于未被 HIV感染的个体，但处于窗口期的新近感染者筛查试验也可呈阴性 反应。若呈阳性反应，应用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂 家的试剂进行重复检测，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进 行重复检测，如两种试剂复测均呈阴性反应，则为HIV抗体阴性;如 有一种或两种试剂呈阳性反应，需进行HIV抗体确证试验。确证试 验无HIV特异性条带产生，报告HIV1/2抗体阴性。确证试验出现 HIV1/2抗体特异带，但不足以判定阳性，报告HIV1/2抗体不确定，可在4周后随访。如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性;如随 访期间发生带型进展，符合HIV抗体阳性判定标准则为HIV抗体阳性，如带型仍不满足阳性标准，继续随访到8周。如带型没有进展 或呈阴性反应则报告阴性;满足HIV阳性诊断标准则报告阳性，不满 足阳性标准可视情况决定是否继续随访。经确证试验HIV1/2抗体阳 性者，出具HIV1/2抗体阳性确认报告，并按规定做好咨询、保密和 报告工作。 抗原检测：主要检测HIV1的P24抗原核心蛋白。感染早期和晚期，P24抗原以游离形式出现，多数情况下以抗原抗体复合物形式 存在。P24一般在感染后1-2周内即可检出，随P24抗体产生而减少。一般持续0.5-5个月，如持续存在或再度出现则提示预后不良。 HIV感染人体后，出现CD4+T淋巴细胞进行性减少，CD4+/CD8+T 细胞比值倒置，细胞免疫功能受损。如果进行HAART，CD4+T淋巴细 胞在病程的不同阶段可有不同程度的增加。目前常用的CD4+T淋巴 细胞亚群检测方法为流式细胞术，可以直接获得CD4+T淋巴细胞数
禽流感免疫抗体效价检测
龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/a33297696.html, 禽流感免疫抗体效价检测 作者：何生 来源：《湖北畜牧兽医》2013年第07期 摘要：为掌握H5N1高致病性禽流感疫苗免疫效价，了解乌鲁木齐市米东区鸡群禽流感免疫抗体水平，对该地区不同鸡场进行了禽流感抗体检测。结果表明，40只免疫鸡，免疫抗体 效价合格数33只，总合格率为82.5%。说明近几年对高致病性禽流感采取的强制免疫措施达到了比较显著的效果。 关键词：禽流感；免疫；抗体效价；血凝试验；血凝抑制试验 中图分类号：S855 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2013）07-0029-02 禽流感是由禽流感病毒引起的一种禽类（家禽和野禽）的烈性传染病，被世界动物卫生组织（OIE）定为A类传染病。禽流感病毒感染后，呈现出较严重的全身性、出血性、败血性症状，死亡率较高。禽流感病毒不仅能引起禽类严重的疾病，而且对人类和哺乳类动物也能造成感染。在世界各种家禽和野生禽类中，按照血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）表面抗原来区分，已发现了数千种属于许多不同抗原亚型的病毒。各种品种和不同日龄的禽类均可感染高致病性禽流感。该研究为掌握H5N1高致病性禽流感疫苗免疫效价，了解本地区鸡群禽流感免疫抗体水平，对该地区鸡场进行了禽流感抗体检测，并对不其检测结果进行了对比分析。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 试验动物 40只鸡由米东区铁厂沟镇大草滩村养禽场提供。 1.1.2 试剂禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原，禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验阳性血清，1%鸡红细胞悬液。 1.1.3 仪器 96孔V型微量反应板、台式离心机，单道、多道微量可调移液器，吸嘴，微量振荡器，加样槽。 1.2 方法 1.2.1 血凝（HA）试验在微量反应板的1～12孔均加入0.025 mL的PBS，换滴头，吸取0.025 mL病毒悬液加入第1孔混匀，从第1孔吸取0.025 mL病毒液加入第2孔，混匀后吸取0.025 mL加入第3孔，依次倍比稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025 mL弃之，换滴头，每孔再加入0.025 mL PBS。每孔均加入0.025 mL体积分数为1%的鸡红细胞悬液，充分混匀后加入。在微量振荡器上振荡2 min，在25 ℃恒温箱内静置40 min后观察结果。