不同种类中药制剂对常见致病菌的体外抑菌活性研究-李绍红,闫卫利,封继宏
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第16卷 第8期 2014?年?8?月
辽宁中医药大学学报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 16 No. 8 Aug .，
2014
随着抗生素的发明与广泛应用，感染性疾病较
以前得到了较好的控制，但是抗生素的大量以及不合理的应用也导致了耐药菌株的出现，给临床抗感染的治疗带来了极大的困难，中医药治疗感染性疾病表现了其优势，并有研究证明其有着确定的疗效。现代临床感染性疾病归于风温热病，临床治疗采用
清热解毒法，亦有人认为适当加用补益类中药使得疗效更佳。有临床研究清热解毒制剂痰热清在治疗肺部感染性疾病方面有确定疗效[1-2]，靳颖华等通过Meta 分析初步证实了其在治疗肺炎方面的有效
不同种类中药制剂对常见致病菌的体外抑菌活性研究
李绍红，闫卫利，封继宏
（天津中医药大学第二附属医院，天津 300150）
摘 要：
目的：为了更好的指导临床医生合理有效地使用中药制剂，探讨3种清热解毒复方制剂及复方甘草酸苷单独使用及联合抗生素使用后对常见致病菌的体外抑菌活性。方法：采用肉汤二倍稀释法，研究几种复方清热解毒中药及复方甘草酸苷单独使用及与左氧氟沙星联合使用后对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌活性，来观察不同复方中药对不同细菌抑菌活性。结果：痰热清的抑菌活性要高于其他2种清热解毒复方制剂，尤其是痰热清与左氧氟沙星联合应用时，能够明显增强左氧氟沙星针对金黄色葡萄球菌及耐甲西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的抑菌活性，其次是复方甘草酸苷制剂，在与左氧氟沙星联合应用时，在一定程度上能够增强左氧氟沙星的抑菌活性。结论：痰热清和复方甘草酸苷制剂在与左氧氟沙星联合应用时，能够明显增强左氧氟沙星的抑菌效果，为临床合理使用中药制剂提供了理论基础。
关键词：抑菌活性；金黄色葡萄球菌；痰热清注射液；左氧氟沙星
中图分类号：R285 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2014) 08- 0027- 04
收稿日期：2014-02-10基金项目：国家自然科学基金资助项目（81373849）作者简介：李绍红（1968-），女，天津人，副主任技师，学士，研究方向:细菌耐药性研究。通讯作者：闫卫利（1964-），女，天津人，主任技师，学士，研究方向:细菌耐药性研究。
Research for Antibacterial Activity of Traditional Chinese Medicine
Preparation against Common Pathogens in vitro
LI Shaohong，YAN Weili，FENG Jihong
（The Second Affiliated Hospital of Tianjin University of Traditional
Chinese Medicine，Tianjin 300150，China）
Abstract：Objective ：In order to better guide clinicians in rational and effective use of traditional Chinese medicine preparation，it discussed three kinds of preparations and detoxification compound glycyrrhizin alone and combined use of antibiotics in vitro antibacterial activity against common pathogens.
Methods ：Using the broth two times dilution method，several studies medicine and detoxification compound glycyrrhizin alone and after levofloxacin in combination with Escherichia coli ，Staphylococcus aureus and methicillin-resistant Staphylococcus aureus （MRSA）antibacterial activity were used to observe the different antibacterial activities of compound Chinese medicine for different bacteria. Results ：
Tanreqing antibacterial activity was better than the other two kinds of detoxification compound，especially Tanreqing injection combined with levofloxacin，which can significantly enhance the levofloxacin against Staphylococcus aureus and methicillin resistant Staphylococcus aureus （MRSA）antibacterial activity，followed by Compound Glycyrrhizin preparation in combined with levofloxacin which can enhance the antibacterial activity of levofloxacin in a certain extent. Conclusion ：Tanreqing and compound glycyrrhizin preparation in combination with levofloxacin can significantly enhance the inhibitory effect of levofloxacin，providing a theoretical basis for clinical rational use of medicine.
Key words：antibacterial activity；Staphylococcus aureus ；Tanreqing injection ；levofloxacin
DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2014.08.010
辽宁中医药大学学报16卷
性。魏云等[3]发现对于小儿病毒性肺炎，喜炎平退热等方面效果优于利巴韦林。梁朝矿[4]发现抗生素联合热毒宁的抗感染效果优于单独使用抗生素。有研究甘草主要成分甘草酸苷可以通过调节TNF-A 及IL-12的表达而发挥其对巨噬细胞的免疫调节活性[5]。
现将3种清热解毒复方中药制剂以及复方甘草酸酐单独使用及联合抗生素使用后对常见致病菌的体外抑菌活性进行了研究，现总结如下。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1?药物与菌株
（1）药物：①痰热清注射液：10 mL/支，批号：1210216，国药准字：Z20030054，上海凯宝药业股份有限公司。②热毒宁注射液：10 mL/支，批号：121137，国药准字：Z20050217，江苏康缘药业股份有限公司。③喜炎平注射液：2 mL/支：50 mg，批号：20121220，国药准字：Z20026249，江西青峰药业股份有限公司。④注射用复方甘草酸苷，每瓶含甘草酸苷40 mg，盐酸半胱氨酸20 mg，甘氨酸0.4 g，批号：1208024A4，国药准字：H20060570，哈尔滨三联药业有限公司。⑤盐酸左氧氟沙星注射液：2 mL∶0.1 g，批号：12101831，国药准字：H19990324，扬子江药业集团有限公司。
（2）菌株：标准菌株ATCC 25922 大肠埃希菌、ATCC 29213 金黄色葡萄球菌，均购自天津市临检中心，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌为我院临床痰标本所分离。
1.1.2?仪器与试剂
Biobase生物安全柜，型号：BSC-1500II B2-X，厂家：济南鑫贝西生物技术有限公司；LRH-MS霉菌培养箱，型号：LRH-MS，厂家：韶关市泰宏医疗器械有限公司；VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定及药敏仪，型号：VITEK-2 Compact，厂家：法国生物梅里埃公司；DensiCHEK Plus比浊仪，厂家：法国生物梅里埃公司；营养肉汤:按照使用说明进行配制，厂家：北京陆桥生物有限公司；血琼脂培养基：规格：90 mm，批号：1001814700，梅里埃（上海）生物制品有限公司。
1.2方法
1.2.1?耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的鉴定及确认
按照《全国临床检验操作规程》第三版要求进行痰标本的处理，以平板划线法于血琼脂培养基做分离，35 ℃培养18~24 h后观察菌落形态。用接种环挑取由临床分离的β-溶血的可疑菌落，分纯接种于血琼脂培养基，35 ℃培养18~24 h 后，用纯化的菌落，在全自动微生物鉴定和药敏分析系统（VITEK-2 Compact）上鉴定并进行药敏实验，药敏实验显示为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。MRSA的确认根据美国临床实验室标准研究所（CLSI）的标准，用苯唑西林代替甲氧西林测定它对金黄色葡萄球菌临床分离株的最低抑菌浓度（MIC），若苯唑西林对金黄色葡萄球菌的MIC ≥4 μg/mL，定为MRSA 菌株。1.2.2?药物的体外抑菌活性检测
采用肉汤二倍稀释法，研究3种复方清热解毒中药及复方甘草酸苷单独使用及与左氧氟沙星联合使用后对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌活性，同时设立生长对照组及空白对照组。来观察不同复方中药对不同细菌的抑菌活性。
（1）操作步骤：菌悬液的配制：用无菌棉签挑取经分纯实验菌菌落2~3个，调节菌悬液浓度至0.5麦氏比浊管浓度，使含菌量达1×108 CFU/mL做实验菌悬液。
单独配药组：①盐酸左氧氟沙星组（ZK）：盐酸左氧氟沙星注射液：规格：2 mL∶0.1 g，取盐酸左氧氟沙星注射液20 μL，加入1980 μL营养肉汤作100倍稀释，然后再取上述稀释后溶液200 μL加入1800 μL营养肉汤内，此时为1000倍稀释，最终浓度为50 μg/mL。
阴性对照组：取无菌试管加入500 μL M-H肉汤，不加实验药物，只加菌液，作为生长对照管，即阴性对照管，置35 ℃温箱中培养24 h，肉眼观察。
将左克组1~10号无菌试管中加入500 μL M-H 肉汤。本组1号试管只加左克不加菌液作为空白对照管，用于观察测试药物是否有污染。1号2号试管中分别加稀释后的左克500 μL（浓度：50 μg/mL），混匀后从2号管吸出500 μL溶液放置第3管，依次开始做对倍稀释至10号试管，10号试管混匀后吸出500 μL弃去。用微量加样器于2~10号及阴性对照试管中分别加入500 μL 0.5 M实验菌悬液，使最终接种量为5×107 CFU/mL。35 ℃培养24 h，用肉眼观察。各管中药物浓度见表1。
②痰热清组（TRQ）：痰热清注射液：10 mL/支，操作时使用原液，无需稀释，其他操作方法同左克组，各管中药物浓度见表1。
③热毒宁组（RDN）：热毒宁注射液：10 mL/支，操作时使用原液，无需稀释，其他操作方法同左克组，各管中药物浓度见表1。
④喜炎平组（XYP）：喜炎平注射液，每支装2 mL：
50 mg，浓度：25 mg/mL，操作时使用原液，无需稀释，其他操作方法同左克组，各管中药物浓度见表1。
⑤甘草组（GC）：注射用复方甘草酸苷，每瓶含甘草酸苷40 mg，盐酸半胱氨酸20 mg，甘氨酸0.4 g，取复方甘草酸苷1支加入0.9%氯化钠2 mL，彻底溶解，混匀后待用，此时甘草酸苷浓度20 mg/mL，其他操作方法同左克组，各管中药物浓度见表1。
表1 左克及4种中药制剂各管中药物浓度
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 左克组（μg/mL） 25 12.5 6.25 3.12 1.56 0.78 0.39 0.19 0.09 0.0
痰热清组（μL/mL） 500 250 125 62.5 31.2 15.6 7.8 3.9 1.9 0.9
热毒宁组（μL/mL） 500 250 125 62.5 31.2 15.6 7.8 3.9 1.9 0.9
喜炎平组（mg/mL） 12.5 6.25 3.12 1.56 0.78 0.39 0.19 0.09 0.04 0.02甘草组（mg/mL） 10 5 2.5 1.25 0.62 0.31 0.16 0.08 0.04 0.02
联合配药组：①左克加痰热清组（ZK+TRQ）：盐酸左氧氟沙星注射液：规格：2 mL：0.1 g，取盐酸左氧氟沙星注射液20 μL，加入1980 μL营养肉汤作100倍稀释，然后再取上述稀释后溶液100 μL加入1900 μL营养肉汤内，此时为2000倍稀释，最终
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浓度为25 μg/mL。
阴性对照组：取试管加入1.5 mL M-H肉汤，不加任何实验药物，只加实验菌液，作为生长对照管，即阴性对照管，置35 ℃温箱中培养24 h，肉眼观察。
将左克组1~10号试管中加入1 mL M-H肉汤。
本组1号试管中加稀释后的左克1 mL（浓度：25 μg/mL），混匀后吸出1 mL溶液弃去，不加细菌悬液作为空白对照管。2号试管中加稀释后的左克1 mL（浓度：25 μg/mL），混匀后吸出1 mL溶液放置第3管，依次开始做对倍稀释至10号试管，10号试管混匀后吸出1 mL弃去。用微量加样器于2~10号试管中分别加入500 μL实验菌悬液，使最终接种量为5×107CFU/mL。上述溶液35 ℃培养4 h后，1号管内加入痰热清原液1 mL，2~10号管加入痰热清原液500 μL，彻底混匀后至35 ℃培养20 h，用肉眼观察。各管中药物浓度见表2。
② 左克加热毒宁组（ZK+RDN）：热毒宁注射液，直接使用原液，无需稀释，其它操作同左克加痰热清组，只是将热毒宁替代痰热清进行操作，各管中药物浓度见表2。
③ 左克加喜炎平组（ZK+XYP）：喜炎平注射液，直接使用原液，无需稀释。其余操作同左克加痰热清组，只是将喜炎平替代痰热清进行操作，各管中药物浓度见表2。
④ 左克加甘草组（ZK+GC）：取复方甘草酸苷1支加入0.9%氯化钠2 mL彻底溶解，混匀后待用，此时甘草酸苷浓度20 mg/mL。其余操作同左克加痰热清组，只是将甘草酸苷替代痰热清进行操作，各管中药物浓度见表2。
表2 左克与4种中药制剂混合后组各管中药物浓度
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
左克组（μg/mL） 6.25 3.12 1.56 0.78 0.39 0.19 0.09 0.04 0.02 0.01
痰热清组（μL/mL） 500 250 250 250 250 250 250 250 250 250
热毒宁组（μL/mL） 500 250 250 250 250 250 250 250 250 250
喜炎平组（mg/mL） 2.5 1.25 1.25 1.25 1.25 1.25 1.25 1.25 1.25 1.25
甘草酸苷组（mg/mL） 10 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
（2）结果判断与解释：在读取和报告所测试菌株的MIC前，应检查阴性对照组（生长对照）的细菌生长情况是否良好，同时还应观察第一管的空白对照，以确定被检药物是否被污染，药物最低浓度管无细菌生长者，即为受试菌的MIC。
2 结 果
2.1单独用药组
4种复方中药制剂及盐酸左氧氟沙星注射液单独使用时，对大肠埃希菌ATCC25922及金黄色葡萄球菌ATCC29213体外抑菌试验结果，见表3 。
表3 4种中药制剂及左氧氟沙星对大肠埃希菌
及金葡菌的最低抑菌浓度（MIC值）
项目 ZK(μg/mL) TRQ(μL/mL) RDN(μL/mL) XYP(mg/mL) GC(mg/mL) ATCC25922（MIC值） 0.78 250 250 6.25 5.0 ATCC29213（MIC值） 0.39 125 125 >6.25 2.5 2.2联合用药组
4种复方中药制剂与盐酸左氧氟沙星注射液联合应用时，对大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC29213及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）体外抑菌试验结果，以左氧氟沙星最小抑菌浓度（MIC）来观察，见表4。
表4 4种中药制剂与左氧氟沙星联合应用时对大肠埃希
菌及金葡菌及MRSA 3种菌的最低抑菌浓度（μg/mL）
项目 ZK ZK+TRQ Zk+RDN ZK+XYP ZK+GC ATCC29213（MIC值） 0.39 0.022 0.39 0.39 0.09
MRSA（MIC值） ≥12.5 3.12 ≥12.5 ≥12.5 ≥12.5 2.3实验结论
以上检测结果均为同种方法分别检测3次的检测结果。
本实验结果显示，这4种复合中药制剂对临床常见病原菌的抑菌效果有所不同，其中痰热清和热毒宁的抑菌效果相当，其次是复方甘草酸苷及喜炎平，但是对于金黄色葡萄球菌，喜炎平抑菌效果较差。当与抗生素联合使用时，痰热清和复方甘草酸苷均能使左克对金葡菌的MIC值明显降低；对于MRSA，痰热清和左克联合使用时能使左克的MIC 值降低；对于大肠埃希菌均无改善；该结果表明痰热清和复方甘草酸苷与抗生素联合使用，可以增强抗生素的抑菌活性，中西药之间存在协同抑菌作用。
3 讨 论
现代研究认为，病原体不仅直接对人体造成损伤，同时破坏了机体的免疫稳态，使机体出现免疫失衡甚至是免疫损伤，并且这种损伤不是由病原体直接感染所致，免疫细胞及炎症因子在其中发挥了重要的作用。中医药可控制机体过度的炎症反应，纠正失衡的细胞因子网络，在病原体清除和减轻组织损伤之间寻求适当的平衡，从而起到治疗作用。
中医药对于感染性疾病的基本治疗大法是清热解毒，痰热清、热毒宁、喜炎平是常用的中药制剂，大量的现代药理研究证实痰热清注射液（痰热清经典处方是依据中医温病理论建立的，痰热清注射液由黄芩、熊胆粉、山羊角、金银花、连翘等5味中药制成）具有广谱抗菌消炎作用及较强的呼吸道抗病毒作用，对呼吸道有关致病菌如肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌等均有一定的抑制作用；该药在清热、解毒、消炎、杀菌的同时，又能促进白细胞的吞噬，增强机体免疫调节作用[6-9]；热毒宁（金银花、连翘、青蒿）注射液具有明显的抗病毒、抗菌作用，对多种呼吸道病毒株培养细胞病变均有明显的抑制作用，对多种细菌菌株的生长亦有一定的抑制作用，有较好的抗炎、解热功效，能有效地增加机体的免疫功能，提高抗病能力[10]；喜炎平（穿心莲提取物）可明显抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞对于炎性因子的释放，有明显的抗炎作用。
中医药治疗感染性疾病还可通过调控机体免疫应答，减轻炎症损伤，与抗感染药物合用可减毒增效，从而发挥治疗作用。本实验中左克与复方甘草酸苷的联合使用，可以使得左克的MIC值明显降低，就为这一观点提供了依据。中药甘草为豆科植物甘草、胀果甘草或光果甘草的干燥根及根茎，药用历史悠久。其具有解毒、补益及调和药物等作用，有效活性成分主要是三萜类化合物甘草酸苷。而复方甘草酸苷是就是以甘草中的活性物质甘草酸苷为主要成分，并以甘草酸苷、L半胱氨酸和甘氨酸制成复方制剂，复方甘草酸苷的主要活性物质为甘草次酸，甘草次酸在化学结构上类似肾上腺皮质激素，也具有抗
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炎、抗变态反应和类固醇样免疫调节等作用。甘草酸具有T 细胞活化调节作用、rIFN 诱发作用、NK 细胞活化作用、胸腺外Ｔ淋巴细胞分化增强作用等免
疫调节[11]
；复方甘草酸苷的抑菌主要成分为甘草总黄酮，崔永明等[12]研究表明甘草总黄酮对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和枯草杆菌4种致病菌均有明显的抑制作用。
研究发现中医药治疗感染性疾病具有一定特点和优势：如辨证论治无需确定病原体可早期治疗，重视发挥人的作用，具有抑菌和调控免疫应答双重作用，与抗感染药物合用可起到减毒增效作用，可以对感染伴发炎症反应的进行调整和对感染后微炎症状态及组织修复的调理等等，甚至可以干预耐药性形成和转导，逆转耐药性，这些优势让中药在临床应用中极具潜力，中西药联合应用相对于抗生素类药物，中药不易使病原菌产生耐药性，但相关各种研究的不系统性、起效的时间长、批次间质量不均一等缺陷也在很大程度上限制了其在临床上的应用，不可能轻易替代抗生素类药物；与抗生素的联合使用是中药临床应用的发展趋势，本研究可以给中西药联合使用提供借鉴意义。
综上所述，在治疗感染性疾病时，为了延长抗生素的使用寿命，减少耐药菌的产生，可以充分利用
中药的抑菌、延缓、消除细菌耐性的作用，与抗生素
联合使用是中药临床应用的发展趋势。◆
参考文献[ 1 ] 靳颖华，张卫东，齐平 .痰热清注射液治疗肺炎的Meta分析[ J ] . 中国医院药学杂志，2009，29 ( 2 )：1466-1468.[ 2 ] 宋志香，李刘坤，李兴广.中药痰热清注射液治疗MRSA 感染
性肺炎的临床观察研究[ J ] .中华医院感染学杂志，2010，20 ( 11 )：1596-1598.
[ 3 ] 魏云.喜炎平注射液治疗儿童呼吸道合胞病毒肺炎40例疗效
观察[ J ] .中国中西医结合儿科学，2011，3 ( 5 )：439-440.
[ 4 ] 梁朝矿.基于随机对照试验方法评价热毒宁注射液治疗老年
性肺炎的意义[ J ] .中国医药指南，2010，8 ( 25 )：72-74.[ 5 ] 王大南，于淼，冯永辉，等.甘草酸苷调节小鼠腹腔巨噬细胞活
性的研究[ J ] .中国免疫学杂志，2009，25 ( 9 )：805-806.[ 6 ] 雷鸣，覃华宏，黎斌兵，等，痰热清注射液联合左氧氟沙星治疗
社区获得性肺炎的疗效分析[ J ] .临床合理用药，2012，5 ( 5 )：1-2.[ 7 ] 董燕，王仙园，周红，等.中草药对MRSA 临床株的抑菌作用研
究[ J ] 护理研究，2008，22 ( 4 )：863-865.
[ 8 ] 唐明. 金银花黄酮活性成分分离纯化与生物学效应研究[ D ] .
重庆：第三军医大学，2008.[ 9 ] 张泽生，乌兰. 金银花中绿原酸的体外抑菌和抗氧化性的研
究[ J ] .天津科技大学学报，2005，20 ( 2 )：5-8，34.[ 10 ] 罗先才.热毒宁注射液药理作用、临床应用及不良反应[ J ] .
中国药物警戒，2013，10 ( 4 )：215-218.
[ 11 ] 朱三甫，胡姗姗.复方甘草酸苷的临床应用[ J ] . 安徽医药，
2011，15 ( 2 )：235-238.
[ 12 ] 崔永明，余龙江，敖明章，等. 甘草总黄酮的提取技术及其抑
菌活性研究[ J ] .中药材，2006，29 ( 6 )：838-840.
芩荑合剂对哮喘大鼠STAT6表达的影响
杨继兵，戴启刚，刘军楼
（南京中医药大学附属第一医院，江苏 南京 210029）
摘 要：
目的：观察芩荑合剂对哮喘大鼠肺组织模型信号转导子和转录激活子（STAT6）蛋白含量及其mRNA 表达影响，探讨芩荑合剂对支气管哮喘的作用机理。方法：用卵清蛋白建立大鼠哮喘模型，将48只SD 大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组、芩荑合剂低剂量组、芩荑合剂中剂量组、芩荑合剂高剂量组，其中正常对照组、哮喘模型组给予生理盐水灌胃，芩荑合剂高、中、低剂量分别按生药量5.4、2.70、1.35?g/（kg·d）灌胃，地塞米松按1.4?mg/（kg·d）灌胃，采集肺组织标本，分别采用实时荧光定量PCR（Realtime?PCR）法和免疫组化法检测哮喘大鼠模型STAT6m?RNA 及其蛋白表达。结果：中、高剂量组STAT6?mRNA 及蛋白表达较哮喘组显著减弱，有显著差异（P <0.01），与地塞米松组比较无统计学意义。结论：芩荑合剂通过降低哮喘大鼠STAT6蛋白含量以及减弱STAT6?mRNA 在气道上皮细胞的表达，来干预气道炎症，从而达到治疗支气管哮喘的目的。
关键词：芩荑合剂；哮喘大鼠；STAT6蛋白；STAT6?mRNA
中图分类号：R256.12 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2014) 08- 0030- 04
收稿日期：2014-02-06
基金项目：江苏省中医药局科技项目（LB09027）；江苏高校优势学科建设工程资助项目作者简介：杨继兵（1969-），男，江苏如皋人，副教授，博士，研究方向：中西医结合呼吸内科。
Effect of Qinyi Mixture on Amount of STAT6 in Asthmatic Rats
YANG Jibing，DAI Qigang，LIU Junlou
（First Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210029，Jiangsu，China）Abstract：Objective ：To investigate the effect of Qinyi Mixture on the amounts of STAT6 mRNA and protein in lung in asthmatic rats，and to determine the mechanism of Qinyi Mixture on bronchial asthma. Methods ：The rat asthma model was made by using ovalbumin. 48 SD rats were randomly divided into normal control group，asthma model group，dexamethasone group，Qinyi mixture low-，medium-，high-DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2014.08.011
抗生素分类及特点
抗生素应用原则与方法经验性选药应先作痰涂片检查，可大致确定感染的病原体是使抗生素的选择相对具有针对性。 G+ 球菌或G -杆菌，这样可以 在社会获得性感染中，病原体以肺炎球菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、军团菌、厌氧 菌和病毒、支原体、衣原体为主，常选用红霉素类、四环素类、青霉素G、氨苄青霉素、复 方新诺明、林可霉素类及第一代头孢菌素类。 医院内感染、老年人、有慢性阻塞性肺疾患、免疫抑制患者感染中，以G一杆菌为主（如肠 杆菌科细菌、绿脓杆菌、不动杆菌）和G+球菌中的金黄色葡萄球菌及厌氧菌为主，尚有真 菌、结核和非结核类分支杆菌及少见的巨细胞病毒、卡氏肺孢子虫等。 常用耐酸青霉素类、广谱青霉素类、第一至三代头孢菌素类、亚胺培南、氨曲南、氨基糖苷类、喹诺酮类、万古霉素及抗厌氧菌药和抗真菌药。在经验性治疗的同时，应积极开展病原 学检查。 抗菌治疗三天后，若肺炎的临床表现好转，提示选择方案正确，继续按原方案用药。如若临床表现无改善或病情恶化，应调换抗感染药物。 根据药敏试验结果选用敏感度高，抗菌谱窄、价廉、低毒副反应的药物。如果无药敏结果作指导，应选用能控制常见G-杆菌、绿脓杆菌和G+球菌的药物。 对有误吸病史或腹腔、盆腔感染者，还应加用抗厌氧菌药物。尽量选用毒副作用少的B -内 酰胺类，剂量要足，给药方法要正确。 联合用药与合理配伍 一般细菌感染用一种抗生素能够控制，无需联合用药，但对病原菌不明的严重感染或患者有基础疾病并发心肺功能不全，免疫功能低下，或混合感染，应采取联合用药，可起到协同作用，增强疗效，减少细菌耐药性的产生。 联合用药的合理配伍应是繁殖期杀菌剂加静止期杀菌剂，如B -内酰胺类加氨基糖苷类，可 起协同作用；静止期杀菌剂加速效抑菌剂，如氨基糖甙类加大环内酯类，有累加协同作用；青霉素类加头孢菌素类，可连续抑制细菌细胞壁的合成，产生协同作用。 速效抑菌剂与繁殖期杀菌剂不宜联合应用，如大环内酯类与B -内酰胺类，因为速效抑菌剂 可迅速抑制细菌蛋白质合成而使其不能进入繁殖期，从而导致繁殖期杀菌剂活性减弱，产生拮抗作用。 泰能与哌拉西林合用治疗绿脓杆菌感染可出现拮抗作用，因泰能诱导细菌产生B -内酰胺酶， 使耐酶力低的青霉素灭活。 抗生素的后效应与给药间隔时间 抗生素的后效应（PAE）指高浓度药物与细菌接触后，随着体内代谢，药物浓度逐渐降低，当浓度低于MIC 时抗菌药物仍可持续抑制细菌生长，这种现象称为PAE。 各种抗菌药物对G+球菌都有不同程度的PAE。但对G-杆菌，只有氨基糖苷类与喹诺酮类药物有满意的
白蔹抗菌活性的研究[文献综述]
毕业论文文献综述 生物工程 白蔹抗菌活性的研究 1 前言 微生物耐药性已成为全球关注的严峻问题,由多重耐药菌和许多新的病原微生物引起 的感染对人类健康造成极大威胁。随着抗微生物药物的广泛应用,医院感染性微生物耐药性问题日趋严重,细菌感染在临床上也有逐年上升趋势[1]。微生物的耐药性产生速度,远远大于抗生素研制速度。与此同时,中草药具有清热解毒、滋补、抗菌等作用, 且毒副作用小、耐药性小, 也开始得到人们的关注。 白蔹为葡萄科植物自蔹 Ampelopsis japonica(Thunb)akino的干燥块根 ,又名白根 , 五爪藤 ,山地瓜。始载于《神农本草经》 ,性微寒,味苦,具有清热解毒、生肌止痛之功效。用于痈肿疮疡、瘰疬、烫伤、扭挫伤;外用于痈、疖、蜂窝组织炎、淋巴结炎等。白蔹入药历史悠久,早在《名医别录》中已有记载 ,是历代医家治疗疔痈的重要药物[2]。 临床报道白蔹用于治疗化脓性皮肤感染、细菌性痢疾等疾病,疗效显著[3]。现代研究表明,白蔹含有大黄素甲醚、大黄酚、大黄素、富马酸、没食子酸等多种抗细菌和抗真菌成分,与其临床应用相一致[4]。 2 植物提取物的抑菌活性 人类自从古代就记载了许多具有杀虫或控制害虫、抗菌或杀菌作用的植物, 如中国、印度等东南亚以及一些非洲国家的劳动人民积累了许多利用植物杀虫防病的经验。几个世纪前, 我国人民就已知道植物中含有抗菌物质, 在许多实例中,这些化合物能以天然的抗性或防御体系来抵抗微生物或其他病害。某些化合物具有特殊味道或气味, 已经在香料工业中使用, 使用药草和香料作为调味品或食品防腐剂, 许多文献已报道了它们的特性及活性成分[5~6]。 不同的抗菌、杀菌植物, 其有效成分分布在植物根、茎、叶、花、果、种子等不同部位, 如厚扑存在于叶中、苦瓜存在于果实中等。同种植物不同部位活性成分的含量亦存在差异, 黄梁绮龄等对香港地区四种红树植物的根、茎分别用95%乙醇浸取, 其浸取物对三种植物病菌抑制活性存在一定差异[7]。研究有效成分在植物中分布, 应针对具体的杀菌、抗菌植物, 分成根、茎、叶、花、果实等部分, 采用生物测定法来分析活性成分在植株中的部位, 只有
药物的体外抑菌试验
实验五药物的体外抗菌试验 药物的抗菌试验是为了检查药物的抗菌能力。该项试验方法已广泛应用于新药研究和指导临床用药。如抗菌药物的筛选，提取过程的生物追踪、抗菌谱的测定、耐药谱的测定、药敏试验、药物血浓度测定等各个方面。 药物的体外抗菌试验在实验室进行，优点是方法简便、需时短、用药量少，不需要活的动物、实验条件容易控制。因此，药物的体外抗菌试验已广泛应用各种测定了。 药物的体外抑菌试验是常用抗菌试验方法，其中最常用的方法用系列稀释法和琼脂扩散法。 （一）稀释法（结果示教） 稀释法有液体培养基连续稀释法和固体稀释法（斜面法）两种。这两种方法都可以用来测定药物的最小抑菌浓度（MIC）：是指该药物能抑制细菌生长的最低浓度，通常用μg∕ml或U/ml表示。 （二）琼脂扩散法 它是将抗菌药物加至接种试验菌的平板表面，抗菌药物在琼脂胶内向四周自由扩散，其浓度随扩散距离增大而降低，在药物一定的扩散距离内，由于药物的抗菌效应，试验菌不能生长，此无菌生长的范围称为抑菌圈，抑菌圈的大小与药物的抑菌效应成正比。琼脂扩散法常有纸片法、管碟法、打洞法和挖沟法。 滤纸片法（K-B纸片法）－学生操作 滤纸片法是最常用的方法，适用于新药的初筛试验（初步药物是否有抗菌作用）及临床的药敏试验（细菌药物第三性试验、以便选择用药）。滤纸片分湿、干两种，可以在试验时用无菌纸片沾取药物溶液放在含菌的平板表面，也以预先做成一定浓度的干燥纸片。一般来说预先做成的干燥纸片实用一些而且准确一些。 至于干燥纸片的制备方法：选用吸水力强而且质地均匀的滤纸，用打洞机制成6mm直径的圆纸片，120℃干燥灭菌2小时。然后把配制好的各种适宜浓度的抗生素溶液，每100张纸片加入0.5ml药液，使它均匀浸润，放在无菌平皿中，
抗菌肽体外抑菌实验方法
微量肉汤稀释法（borth microdilution method） 实验方法： 1.用无菌蒸馏水在聚丙烯离心管中将抗菌肽和抗生素溶解制成1280 g/L的储 备液，然后用等量无菌的0.02%乙酸（含0.4% BSA）稀释，在用0.01%乙酸（含0.2% BSA）溶液对等量稀释后的溶液在进行一系列的双倍稀释，得到质量浓度为640，320，160……1.25 mg/L的共10个梯度的系列稀释液， 4 ?C下保存备用。 2.将待测细菌在灭菌MH肉汤琼脂平板上过夜培养，挑取菌落接种于灭菌试管 中的MH肉汤，37 ?C，180 r/min过夜培养。将培养后的菌液稀释至2*10^5-7*10^5 CFU/mL，向无菌的96孔平板中的1-11孔各加入100 μL的菌液，12孔不加入菌液而加入100 μLMH肉汤，然后从1～10孔逐一加入相应的待测抗菌肽，11孔作为扫描对照组不加肽。37 ?C，90 r/min培养18-24 h，这样待测抗菌肽的终质量浓度分别为64，32，16，……0.125 mg/L。（不知道待测抗菌肽添加量是多少，最终抗菌肽的终浓度怎么缩小了10倍） 3.最小抑菌浓度MIC（mininmal inhibitory concentration）就是能阻止50%以 上细菌生长的最小肽浓度。用酶标仪在490 nm下对平板进行扫描，肽的MIC 的确定按照比对照孔（11孔）的浑浊程度低50%以上的最小质量浓度计算。 4.最小杀菌浓度MBC（minimal bactericidal concentration）就是能抑制任何残 余菌落生长的肽的最低浓度。从没有细菌生长的平板孔中的内容物中取10 μL涂布到MH琼脂平板上，37 ?C培养18 h，以此来确定肽的MBC。 参考文献： 【1】汪以真，抗菌肽与抗生素的体外抗菌效果比较[J].中国兽医学报，2004，24（3）：270-273. 抗菌肽的体外抑菌实验（平板法） 1.稀释：将一定效价的抗菌肽做6个浓度的稀释，将抗生素按正常使用剂量同 样做6个浓度的稀释 2.指示菌：指示菌用液体LB培养基培养24 h后稀释至10^6 CFU/mL
广西一点红总生物碱的提取和抗菌活性研究(一)
广西一点红总生物碱的提取和抗菌活性研究(一) 作者：周吴萍韦媛媛李军生阎柳娟赖雪芬 【摘要】目的考察广西一点红总生物碱的分离提纯及其抗菌活性。方法通过95％乙醇回流提取一点红药材中的生物碱类物质，利用酸水提取法及有机溶剂萃取对其进行分离纯化，同时用化学检识法与薄层色谱法进行定性鉴别。采用滤纸片法研究一点红生物碱类物质的抗菌活性。结果一点红生物碱浓度在600～800 mg/ml时对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及枯草杆菌中度敏感，随着药物(生物碱)浓度的增大，抗菌作用越明显。结论说明一点红生物碱类物质对供试菌有一定的抑菌活性。 【关键词】一点红总生物碱提取分离抗菌活性 Abstract：ObjectiveTo investigate the extraction and separation methods and antibacterial activities of the alkaloids in Emilia sonchifolia from Guangxi.MethodsThe alkaloids in Emilia sonchifolia were reflux extracted by 95% alcohol, and separated by acid water extraction and organic solvent extraction method, at the same time qualitative identification was performed by the chemical methods and the thin layer chromatography methods. To study the antibacterial activities of the alkaloids in Emilia sonchifolia by filter paper method. Results The result showed it was medium sensitive to Escherichia coli, Bacillus subtilis and Staphylococus aureus when the concentrations of the alkaloids were in the range of 600～800 mg/ml. The antibacterial function was more remarkable with the medicine concentrations increased. ConclusionThe alkaloids of Emilia sonchifolia has certain antibacterial activities against the selected microbes. Key words：Emilia sonchifolia; Total alkaloids; Extraction-Separation; Antibacterial activity 一点红Emilia sonchifolia (Linn.) DC属菊科植物一点红的干燥全草，主产于广东、广西、福建、贵州、江西，具有清热解毒、活血散瘀的功效，用于治疗急性扁桃体炎、肺炎、急性阑尾炎、传染性肝炎、痢疾、尿路感染等疾病〔1〕。一点红是妇科临床常用药广西特产中成药花红片的主要原料药〔2〕，其主要含有黄酮类〔3〕，生物碱类〔1〕，甾醇类〔4〕等化学成分。据文献报道，一点红提取物有一定的抗氧化和抗炎作用〔5，6〕，并且对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和痢疾杆菌有一定抑制作用〔1〕。国内外仅对一点红的种植和临床应用方面有少量研究，对活性成分抗菌性能未见有相关报道，而生物碱常常是很多中草药的有效成分，具有抗炎抗菌的药理作用。故实验分离提纯一点红
头孢类抗生素的分类及特点
头孢类抗生素的分类及特点 头孢菌素类抗生素(cephalosporins )是分子中含有头孢烯的半合成抗生素,属于β－ 根据其抗菌作用的特点，一般将头孢菌素分为一、二、三,四代（见1表）。 头孢菌素抗菌作用比较(表1) 项 目 常用品种 抗 菌 谱 及 作 用 特 点 备注 第一代 头孢氨苄、头孢拉啶、头孢羟氨苄、头孢唑林(注射) 抗革兰氏阳性菌, 尤其是对金黄色葡萄球菌所致的感染。对大肠杆菌、痢疾杆菌等阴性杆菌所致的感染较弱。 可口服, 注射 第二代 甲氧头孢噻吩、头孢美唑、头孢孟多、头孢尼西钠等。 抗菌范围较第一代广，对球菌感染的抗菌作用与第一代相仿或略弱。对革兰氏阴性菌所致的感染的抗菌作用比第一代强。 较少用 应 第三代 头孢噻呋钠(动物专用),头孢噻肟钠、头孢哌酮钠、头孢曲松钠等。 抗菌范围较第一、二代更广，对所有致病菌都有抗菌作用，但对革兰阳性菌的球菌的抗菌作用不如第一、二代，其特点是对绝大多数革兰氏阴性菌有强大抗菌作用，。 临床广泛用应 第四代 头孢匹罗,头孢奎诺(动物专用) 对革兰阳性菌和革兰氏阴性菌均有强大的作用，且能用于控制金黄色葡萄球菌感染，同时具有第一’二’三代头孢菌素的抗菌优良性能。 价格昂 贵 1第一代头孢菌素的抗菌范围及作用与青霉素相同，常用于革兰氏阳性菌，尤其是球菌所致的感染，也可用于青霉素耐药的球菌。对大肠杆菌、痢疾杆菌等阴性杆菌所致的烧伤及其他部位的感染较弱。对绿脓杆菌所致的烧伤及其他部位的感染无效。常用的第一代头孢菌素品种有头孢唑林、头孢氨苄、头孢拉定、头孢羟氨苄等。其中除头孢唑林只能供注射外，其他的均可用于口服，也称为口服头孢.第一代头孢菌素主要应用于革兰氏阳性菌感染，治疗革兰氏阴性杆菌感染常需与氨基糖苷类抗生素联合应用。 2 第二代头孢菌素的抗菌范围较第一代广，对球菌的抗菌作用与第一代相仿或略弱。对流感嗜血杆菌、淋球菌、大肠杆菌、肺炎杆菌等革兰氏阴性菌所致的下呼吸道、泌尿道、皮肤和软组织感染的抗菌作用比第一代强。对青霉素或第一代头孢菌素耐药的抗菌作用比第一代好。常用的品种有头孢夫辛钠、头孢替安、甲氧头孢噻吩、头孢美唑、头孢孟多、头孢尼西钠等。 3 第三代头孢菌素的抗菌范围较第一、二代更广，几乎对所有致病菌都有抗菌作用，但对革兰阳性菌的球菌尤其是葡萄球菌的抗菌作用不如第一、二代，其特点是对绝大多数革兰氏阴性菌有强大抗菌作用，包括对绿脓杆菌、沙门氏菌和脆弱拟杆菌等也具有抗菌作用。第三代头孢菌素常用于革兰氏阴性菌所致的肠道感染,肺炎、胸膜炎以及皮肤和软组织等部位的感染。常用的品种有：头孢噻呋钠(动物专用),头孢噻肟钠、头孢哌酮钠、头孢曲松钠、头孢他定、头孢克肟、头孢唑肟等。
抗菌活性研究
【作者】王立波；邵萌；高慧媛；吴斌；吴立军； 【Author】WANG Li-bo,SHAO Meng,GAO Hui-yuan,et al.(School of Traditional Chinese Medicines,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110016,China) 【机构】沈阳药科大学中药学院；沈阳药科大学中药学院辽宁沈阳110016；辽宁沈阳110016；辽宁沈阳110016； 【摘要】目的探讨金荞麦乙醇提取物乙酸乙酯的萃取部分(待测样品)的抑菌作用,并对此部分进行分离纯化以研究其抗菌活性的物质基础。方法与复方板蓝根颗粒做对比,采用平皿稀释法及动物实验对待测样品进行体外及体内实验,测定其对各试验菌的最小抑菌浓度(M IC)和对肺炎链球菌感染小鼠的体内保护作用。并采用多种色谱方法对此部分进行分离纯化。结果体外抑菌试验表明,待测样品对乙型溶血性链球菌、肺炎球菌有明显的抑制作用;体内抑菌实验表明此部分对肺炎球菌菌株所致的小鼠感染有保护作用;从该活性部分分离得到8个化合物为:反式对羟基桂皮酸甲酯(trans-p-hydroxy c innam ic m ethy l ester,I),3,4-二羟基苯甲酰胺(3,4-d ihydroxybenzam ide,II),原儿茶酸(protocatechu ic ac id,III),原儿茶酸甲酯(protocatechu ic ac id m ethy l ester,IV),木犀草素(lu teo lin,V),槲皮素(querc itrin,V I),芸香苷(ru tin,V II),(-)-表儿茶素[(-)-ep icate... 更多还原
抗菌药物考试试题
抗菌药物合理使用培训考试题 一、单项选择题(每题1分,共分) 1.正确的抗菌治疗方案需考虑：(d ) A患者感染病情B感染的病原菌种类C抗菌药作用特点D以上3项 2、可辅以抗菌药局部应用的情况有：( a) A化脓性胸膜炎大量胸腔积液B反复发作性尿路感染C隐球菌脑膜炎D化脓性腹膜炎 3.下列哪种情况有抗菌药联合用药指征：(b ) A慢支急性发作B病原菌尚未查明的严重细菌感染C急性肾盂肾炎D急性细菌性肺炎 4、下列情况何种是预防用药的适应:( d) A昏迷B中毒C上呼吸道感染D人工关节移植手术 5、预防用药用于何种情况可能有效:(c ) A用于预防任何细菌感染B长期用药预防C晚期肿瘤患者D风湿热复发 6、手术前预防用药目的是预防:(d ) A切口感染B手术深部器官或腔隙的感染 C肺部感染D切口感染和手术深部器官或腔隙感染 7、外科手术预防用药多数不超过:(b ) A手术后3天B术后24小时C术后1周D用至患者出院 8、应用头孢哌酮时应给患者补充:(d ) A 维生素A B 维生素B1 C 维生素C D维生素Kl 9、肾功能减退时，必须调整给药剂量的药物为:( a) A糖肽类B克林霉素C利福平D大环内酯类 10、肝功能减退时，不需调整给药剂量的药物为:( b)
A氯霉素B庆大霉素C红霉素酯化物D利福平 11、厌氧菌感染不可以选用：(b ) A亚胺培南B氨基糖苷类C甲硝唑D克林霉素 12、治疗肠球菌属感染首选:( b) A氯霉素B氨苄西林C左氧氟沙星D头孢唑林 13、下列药物中对铜绿假单胞菌具有良好抗菌活性者有：(c ) A氨苄西林B头孢曲松C头孢他啶D头孢呋辛 14、有神经肌肉阻滞不良反应的药物为：(c ) A青霉素B氟喹诺酮类C氨基糖苷类D头孢菌素 15、新生儿感染治疗不宜选用：( a) A环丙沙星B头孢曲松C青霉素D以上都是 16、妊娠期不宜选用的抗菌药有：( c) A青霉素B头孢呋辛C环丙沙星D磷霉素 17、氨基糖苷类对以下那种细菌抗菌活性差：(b ) A大肠埃希菌B肺炎链球菌C铜绿假单胞菌D肺炎克雷伯菌18、在骨组织中浓度高的药物为：( a) A克林霉素B亚胺培南C庆大霉素D青霉素 19、老年感染患者一般不宜选用：( c) A青霉素类B克林霉素C氨基糖苷类D头孢菌素类 20、属于FDA妊娠期分类B类，孕妇可使用的抗菌药为：(c ) A环丙沙星B庆大霉素C青霉素D四环素 21、氨基糖苷类抗生素适用于以下何种病原菌感染：(c )
2016年抗菌药物的分类特点及应用
《抗菌药物分类特点及应用》培训试题 单位：姓名：分数： 一、单选题（3*10=30分） 1、主要通过抑制细胞壁合成起抗菌作用的药物有（） A、克林霉素 B、氯霉素 C、红霉素 D、万古霉素 E、达托霉素 2、下列哪类抗菌药物影响细菌细胞的蛋白质的合成（） A、青霉素类 B、头孢菌素类 C、大环内酯类 D、糖肽类 E、磷霉素 3、对铜绿假单胞菌无抗菌活性的药物（） A、哌拉西林 B、头孢他啶 C、美罗培南 D、头孢曲松 E、环丙沙星 4、对MRSA不具抗菌活性的药物为（） A、达托霉素 B、万古霉素 C、利奈唑胺 D、头孢唑林 E、替考拉宁 5、治疗脑膜炎需要同时鞘内给药的抗感染药为（） A、青霉素 B、头孢曲松 C、两性霉素B D氟康唑 E、美罗培南 6、对嗜麦芽窄食单胞菌不具抗菌活性的药物为（） A、替卡西林/克拉维酸 B、米诺环素 C、左氧氟沙星 D、头孢吡肟 E、SMZ/TMP 7、无论脑膜有无炎症，不能透入脑脊液的抗菌药物为（） A、氯霉素 B、头孢曲松 C、米诺环素 D、万古霉素 E、红霉素 8、骨组织中浓度高的药物为（） A、红霉素 B、头孢菌素 C、克林霉素 D、青霉素 E、四环素类 9、前列腺中浓度高的药物为（） A、青霉素 B、头孢他啶 C、氟喹诺酮类 D、氨曲南 E、头孢拉定 10、与时间依赖性抗菌药物有关的PK/PD参数主要为（）
A、血药峰浓度/MIC B、AUC24/MICCDE C、血药浓度达到或超过MIC的时间（T>） D、以上均是 E、以上均否 二、多选题（5*10=50分） 1、口服吸收差的抗菌药物为（） A、阿莫西林 B、左氧氟沙星 C、两性霉素B D、万古霉素 E、氟康唑 2、胆汁中浓度高的抗菌药物有（） A、利福平 B头孢哌酮 C、氨基糖苷类 D、万古霉素 E、氟康唑 3、抗菌药物的药效学指标包括药物对细菌的（） A、最低抑菌浓度（MIC） B、最低杀菌浓度（MBC） C、抗生素后效应（PAE） D、生物利用度 E、AUC 4、浓度依赖性抗菌药物有（） A、氨基糖苷类 B、氟喹诺酮类 C、头孢菌素类 D、氟胞嘧啶 E、利奈唑胺 5、时间依赖性抗菌药物有（） A、青霉素类 B、头孢菌素类 C、碳青霉烯类 D、两性霉素B E、棘白菌素类 6、与浓度依赖性抗菌药物杀菌活力有关的主要PK/PD参数是（） A、Cmax/MIC B、AUC24/MIC C、>MIC D、消除半衰期 E、生物利用度 三、简答题（1*20=20分） 1.抗菌药物的分类？
抗菌药物血清杀菌活性研究的临床意义分析
抗菌药物血清杀菌活性研究的临床意义分析 【摘要】目的：研究抗菌类药物血清杀菌活性的临床意义。方法：选取36名健康男性为研究对象，按照随机抽取的方式将其划分为三组，每组各计12人。以抗菌类药物头孢哌酮及其复合制剂（头孢哌酮/他唑巴坦与头孢哌酮/舒巴坦）对其进行静脉滴注（静脉滴注按照头孢哌酮1.5g剂量、头孢哌酮/他唑巴坦2.25g剂量以及头孢哌酮/舒巴坦3.0g剂量进行滴注），选取静脉滴注后0.5h以及7h为监测点，对36名健康男性前后在接受这几种抗菌类药物静脉滴注前后体内血清杀菌活性（SBA）相关指标参数进行临床观察与监测。结果：抗菌类药物头孢哌酮复合制剂（头孢哌酮/他唑巴坦与头孢哌酮/舒巴坦）对产超广谱β—内酰胺酶中的金黄色葡萄球菌、阴沟肠杆菌、表皮葡萄球菌以及大肠埃希菌的SBA 血清杀菌活性较单纯意义上的头孢哌酮高出2~4倍左右（p＜0.05），差异具有统计学意义。结论：抗菌类药物头孢哌酮及其复合制剂（头孢哌酮/他唑巴坦与头孢哌酮/舒巴坦）针对临床常见致病病菌而言有着良好的SBA血清杀菌活性，抗菌类药物复合制剂对于产超广谱β—内酰胺酶中的金黄色葡萄球菌、阴沟肠杆菌、表皮葡萄球菌以及大肠埃希菌的SBA血清杀菌活性明显优于单一式的抗菌药物，值得临床推广。 【关键词】抗菌药物；头孢哌酮；复合制剂；血清杀菌活性；β—内酰胺酶 头孢哌酮以及良好的抗菌活性在临床有着很高的应用价值，但其针对各种细菌所产生的β—内酰胺酶不如第三代头孢菌素稳定。头孢哌酮/他唑巴坦与头孢哌酮/舒巴坦作为头孢哌酮的复合制剂，其针对各种细菌所产生的β—内酰胺酶抑制剂有着高效、广谱且不可逆的特性，对阴性细菌以及革兰阳性细菌生成的β—内酰胺酶有着良好的抑制作用[1]。本文选取36名健康男性为研究对象，对头孢哌酮、头孢哌酮/他唑巴坦以及头孢哌酮/舒巴坦的SBA血清杀菌活性进行对比，研究抗菌药物血清杀菌活性的临床意义，所取得成果现总结报告如下。1 资料与方法1.1一般资料选取36名健康男性为研究对象，按照随机抽取的方式将其划分为三组，每组各计12人。研究对象年龄为20~31岁，平均年龄为（25±1.8）岁，体重为58~73kg，平均体重为（63±2.1）kg。所选对象经调查测定均无药物过敏史[2]，签署同意书自愿参与实验。1.2 方法所选取的36名健康男性以随机顺序先后给予包括头孢哌酮、头孢哌酮/他唑巴坦以及头孢哌酮/舒巴坦在内的抗菌药物（其中，头孢哌酮取剂量为1.5g、头孢哌酮/他唑巴坦含1.5g头孢哌酮以及0.75g他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦含1.5g头孢哌酮以及1.5g舒巴坦），晨起空腹状态下进行静脉滴注，并在静脉滴注后0.5h以及7h两个时间点采取观测者静脉血，制备血清标本（每类药物给药间隔时间为7d）。1.3统计学处理本文所有数据均采用SPSS13.0软件进行分析，经t检验并以p＜0.05为有统计学意义。 2 结果 抗菌类药物头孢哌酮复合制剂（头孢哌酮/他唑巴坦与头孢哌酮/舒巴坦）对产超广谱β—内酰胺酶中的金黄色葡萄球菌、阴沟肠杆菌、表皮葡萄球菌以及大肠埃希菌的SBA血清杀菌活性较单纯意义上的头孢哌酮高出2~4倍左右（p＜
常用抗菌药物的作用特点及注意事项
常用抗菌药物的分类 北京大学第三医院胡永芳 常用抗菌药物的分类。抗菌药物可以按照它的化学结构，抗菌谱，以及药代动力学的PK/PD来分类。在抗菌药物专项整治方案里边抗菌药物根据它的临床的实用级别，又可以 分为不同的级别。 一、抗菌药物的分类-按化学结构分类 通常常用的抗菌药物可以按照化学结构分为β内酰胺环类的、喹诺酮类的、大环内 酯类、氨基糖苷以及糖肽类、噁唑烷酮类、四环素类、磺胺类、硝基咪唑类等，以它的母 核来做它的分类。临床上常用的抗菌药物就是这几大类。 首先看一下β- 内酰胺环抗菌药物包括哪些？它分为青霉素类、头孢菌素类和非典 型的β- 内酰胺的抗菌药物。 β- 内酰胺环的抗菌药物以青霉素为例，青霉素按照它的抗菌谱又可以分为抗葡萄球 菌的青霉素类以及抗铜绿假单的氨基青霉素类，还有根据青霉素它是天然来源发酵得来的 还是合成的，又分为天然的青霉素。随着青霉素在临床的广泛使用，逐渐出现了耐酶的青 霉素。为了克服在临床上使用过程中产生的β- 内酰胺酶对青霉素的耐药性，做过化学的结构改造以后又出现了像甲氧西林一类的耐酶的青霉素。在化学结构上做了一定的修饰以后，又出现了广谱的青霉素类药物，比如刚才说的氨基青霉素类。像青霉素类的药物主要 是针对的常见的阳性球菌。在青霉素的结构做了改造以后，它就有一个氨基，所以氨基青 霉素类的药物都具有抗铜绿假单的作用。头孢菌素类的抗菌药物根据它的生产的年代不同，分为了临床上现在在一类手术切口广泛使用的头孢唑啉，第二代头孢菌素，比如头孢呋辛，以及第三代头孢菌素，头孢哌酮、头孢曲松、头孢他啶、头孢唑肟等等，还有第四代的头 孢菌素类药物头孢吡肟。 β- 内酰胺环类的药物还包括一大类非典型的β- 内酰胺环抗菌药物，比如β- 内 酰胺酶的抑制剂舒巴坦、三唑巴坦。还有一类就是单环类的抗菌药物，如氨曲南。还有一 类就是在临床上广泛使用的，它的抗阳性球菌和阴性杆菌的抗菌谱是跟第二代头孢菌素， 比如头孢呋辛、头孢西林相似的。但是它对于厌氧菌的作用又强于这些药物。还有一大类 头霉素类的抗菌药物，如头孢米诺，还有头孢美唑。还有就是特殊期使用的抗菌药物，碳
抗菌药物的体外抑菌及体内抗菌实验
《生物工程综合实验平台》——《抗菌药物的体外抑菌及体内抗菌实验》 专业班级： 学号： 姓名： 小组成员： 实验日期：5月27日-5月30日 微生物综合实验
抗菌药物的体外抑菌及体内抗菌实验 班级16级生物技术1、2班姓名 学号座位号 实验日程安排 日期开始时间实验内容备注 5月27日（周一）14:30-15:30 实验背景、原理、方法 讲解 15:30-18:00 分组准备试剂、培养基、 实验器具 5月28日（周二） 上午 8:00-8:30 体内抑菌实验细菌接 种、培养 8:30-10:30 体外抑菌实验：MIC法 10:30-11:40 固体培养基的配制、体 外抑菌实验：纸片法、 5月28日（周二） 下午12:30-13:30 体内抑菌实验：4小时 实验组稀释涂布 5月28日（周二） 晚上20:00-21:00 体内抑菌实验：12小时 实验组稀释涂布 5月29日（周三） 上午10:00-12:00 体内抑菌实验：24小时 实验组稀释涂布； 体外抑菌实验：纸片法、 MIC法结果观察，分析； 5月30日（周四） 上午8:30-12:00 体内抑菌实验：4小时、 12小时、24小时实验组 结果观察、分析； 所有实验结果的统计与 讨论 抗菌药物的体外抑菌及体内抗菌实验
一、实验原理 抗菌药物一般是指具有抑菌或杀菌活性的药物，包括各种抗生素、磺胺类、咪唑类、硝基咪唑类、喹诺酮类等化学合成药物。由细菌、放线菌、真菌等微生物经培养而得到的某些产物，或用化学半合成法制造的相同或类似的物质，也可化学全合成。抗菌药物在一定浓度下对病原体有抑制和杀灭作用。 药物的体外抑菌实验，是指在体外测定药物抑制或杀灭细菌能力的实验。它是常用抗菌实验的方法，其中最常用的方法有系列稀释法和琼脂扩散法。 稀释法有液体培养基连续稀释法和固体稀释法（斜面法）两种，这两种方法都可以用来测定药物的最小抑菌浓度（MIC）：是指该药物能抑制细菌生长的最低浓度，通常用ug/ml或U/ml表示。其结果判断方法为凡无肉眼可见细菌生长的药物最低浓度即为该菌的最小抑菌浓度（MIC）。 琼脂扩散法是将抗菌药物加至接种试验菌的平板表面，抗菌药物在琼脂胶内向四周自由扩散，其浓度随扩散距离增大而降低。在药物一定的扩散距离内，由于药物的抗菌效应，试验菌不能生长，此无菌生长的范围称为抑菌圈。抑菌圈的大小与药物的抑菌效应成正比。琼脂扩散法常有纸片法、管碟法、打洞法和挖沟法。一般药敏实验常采用纸片法，我们可以根据抑菌圈的大小，来判断菌种对药物的敏感性，是敏感，中度敏感还是耐药。 世界卫生组织规定了抗菌药物的敏感性评定标准，在标准实验条件下根据抑菌圈的大小来判断，如： 复方新诺明（SXT）左氧氟沙 星（LEV） 庆大霉 素（CN） 苯唑西 林（OXA） 氯霉素 （CM） MIC ug/ml 敏感（S）≤2/38 ≤1 ≤4 ≤2 ≤8 中度敏感（I）-- 2 8 -- 16 耐药（R）≥4/76 ≥4 ≥16 ≥4 ≥32
药物的体外抗菌试验-第十九章
第十九章 药物的体外抗菌试验 教学要求 .（一）掌握常用的体外抑菌试验（连续稀释法、琼脂扩散法）。 .（二）熟悉杀菌试验（最低杀菌浓度、最低致死浓度的含义及测定的方法，活菌计数法，石碳酸系数测定法）；联合抗菌试验（纸条试验、梯度平板纸条试验、棋盘格法），协同、拮抗、无关、累加的概念。 .（三）了解体外抗菌试验的影响因素。 第一节 常用的体外抑菌试验 一、药物的体外抗菌试验 .又称药敏试验，主要用于筛选抗菌药物或测定细菌对药物的敏感性。 .最低抑菌浓度（MIC）：指药物完全抑制某种微生物生长的最低浓度。 .优点：方法简便、需时短、用药量少，不需要动物。 .缺点：不能根据体外试验结果肯定或否定一个药物的抗菌作用。试验菌 .细菌、霉菌和酵母菌常用 .标准菌株：来自专门机构，我国是卫生部生物制品检定所菌种保藏中心提供。 .临床分离株：经形态、生化及血清学等方面鉴定。不得有杂菌污染，不宜用传代多次的菌种，最好是重新活化的。控制培养时间。 .接种菌量的多少的计算培养基 .根据试验菌的营养要求进行选择 .培养基质量控制供试药物 .药物的浓度和总量要精确配制 .供试药物用适宜溶剂溶解并稀释至所需浓度，难溶药物加助溶剂。 .中草药或某些生药原粉的样品，应先提取，再浓缩至所需浓度对照试验 .试验菌对照：在无药情况下，应能在培养基内正常生长 .已知药物对照：已知抗菌药对标准的敏感菌株应出现预期的抗菌效应，对已知的抗药菌应不出现抗菌效应。 .溶剂及稀释剂对照：抗菌药物配制时所用的溶剂及稀释剂应无抗菌作用 （一）连续稀释法 .方法：液体法和固体法。 .用于测定药物的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）。 .抑菌：药物可抑制微生物生长繁殖，但不杀死它，在药物除去后，微生物又可恢复生长 .杀菌：药物能杀死微生物，当药物去除后，微生物不再继续生长。 1、液体培养基稀释法 .方法：两倍稀释法 .步骤： 液体培养基稀释药物成系列递减的浓度每 管加入一定量试验菌24-48小时后肉眼观察试管浑浊情况，记录能抑制细菌生长的最低浓度（MIC）将未见细菌生长的各试管内的培养液（各吸取0.1ml）移种到新鲜的琼脂培养基上重新长出细菌的只具有抑菌作用，无菌生长（菌落数﹤5个）具有杀菌作用，记录最低杀菌浓度（MBC）。 液体稀释法图解 抗菌药物的浓度增加最低抑菌浓度移种平板
临床常用抗生素的分类及特点
临床常用抗生素的分类及特点 临床常用的抗生素包括β-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、林可霉素类、多肽类、喹诺酮类、磺胺类、抗结核药、抗真菌药及其他抗生素。 β-内酰胺类 此类属于繁殖期杀菌剂。其特点是：血药浓度高、抗菌谱广和毒性低。包括青霉素类、头孢菌素类、新型β-内酰胺类及β-内酰胺类与β-内酰胺酶抑制剂组成的复合制剂。 （1）青霉素类 青霉素G：临床上主要用于肺炎球菌、溶血性链球菌及厌氧菌感染，金黄色葡萄球菌和流感杆菌多数对其耐药。普鲁卡因青霉素G半衰期较青霉素长。青霉素V 钾片耐酸，可口服，使用方便。 双氯青霉素：对产酸耐青霉素G的金黄色葡萄球菌抗菌活性最强，对其它G 球菌较青霉素G差，对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）无效。 阿莫西林：抗菌谱与氨苄青霉素相似，肺炎球菌、溶血性链球菌、肠球菌和流感杆菌对本药敏感，抗菌作用优于氨苄青霉素，但对假单胞菌无效。 广谱抗假单胞菌类：对G 球菌的抗菌作用与青霉素G相似，对G-杆菌（如大肠杆菌、变形杆菌、流感杆菌等）及假单胞菌有很强的抗菌作用，尤其哌拉西林、阿洛西林、美洛西林抗菌活性更强。 （2）头孢菌素类 此类属广谱抗菌药物，分四代。第一、二代对绿脓杆菌无效，第三代中部分品种及第四代对绿脓杆菌有效，该类药物对支原体和军团菌无效。 第一代头孢菌素：包括头孢噻吩/氨苄/唑林/拉定。对产酸金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、溶血性链球菌等G 球菌抗菌活性较第二、三代为强，对G-杆菌的作用远不如第二、三代，仅对少数肠道杆菌有作用。对β-内酰胺酶稳定性差，对肾有一定毒性。对绿脓杆菌、变形杆菌、不动杆菌等无效。其中头孢唑林/拉定较常用。
抗菌药物分类90282
抗菌药物分类90282
抗菌药物（Antimicrobial agents） 能抑制或杀灭病原菌，用于防治细菌感染性疾病的药物。包括抗生素和人工合成抗菌药物。抗生素（antibiotics）： 是某些微生物产生的具有抑制或杀灭其它微生物作用的代谢产物。 抗菌药的分类： 第I类：繁殖期杀菌剂：如青霉类、头孢菌素类 第II类：静止期杀菌剂：如氨基糖苷类、多粘菌素类 第Ⅲ类：速效抑菌药：如四环素类、氯霉素类与大环内酯类 第Ⅳ类：慢效抑菌药：如磺胺类 I+II：协同（增强） I+Ⅲ：拮抗（可能） II+Ⅲ：协同（增强或相加） I+Ⅳ：协同 β-内酰胺类抗生素(Beta-lactam antibiotics) 包括：1、青霉素类抗生素 2、头孢菌素类抗生素 3、非典型的b-内酰胺类抗生素 抗菌机制： 阻碍细胞壁粘肽合成，造成细菌细胞壁缺损；激活细菌自溶酶。 一、青霉素类抗生素（Penicillins） （一）天然青霉素类（窄谱青霉素）Natural Penicillin 青霉素G 抗菌谱： ★大多数G+球菌：溶血链球菌，草绿色链球菌，肺炎双球菌。 ★G+杆菌：白喉棒状杆菌、炭疽杆菌、产气荚膜杆菌、破伤风杆菌。 ★G-球菌：脑膜炎奈瑟菌、不耐药的淋病奈瑟菌。 ★少数G-杆菌：流感杆菌、百日咳鲍特菌。 ★螺旋体：梅毒螺旋体、钩端螺旋体、回归热螺旋体。 ★放线菌。 临床应用 首选： ★溶血链球菌A组、B组感染：蜂窝组织炎、丹毒、猩红热、扁桃体炎等。 ★敏感葡萄球菌感染、鼠咬热。 ★草绿色链球菌心内膜炎（与链霉素联用）。 ★淋病。 ★梅毒、回归热。 ★流行性脑膜炎（首选SD，SD无效时才首选）。 ★破伤风、白喉（与抗毒素合用）。 ★钩瑞螺旋体病、放线菌病。 （二）半合成青霉素Semisynthetic Penicillins 1．耐酶类青霉素（异恶唑类青霉素） 药物：氟氯西林 抗菌特点：①耐酶，耐酸；对G－菌无效。 ②耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）对该类药可产生耐药性。 应用：耐青霉素G的金黄色葡萄球菌感染。 不良反应：与青霉素G有交叉过敏反应。 2．广谱青霉素类 代表药物：氨苄西林、阿莫西林（羟氨苄西林）
实验六、抗菌药物的体外药效试验
实验六、抗菌药物的体外药效试验 （药敏试验） 各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性有差异，检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选最有疗效的药物，用于临床对控制细菌性传染病的流行至关重要。此外，通过药物敏感试验可为新抗菌药物的筛选提供依据。药敏试验的方法很多，普遍使用的有滤纸片扩散试验（Kirby-Baueer Dice Diffusion）；最低抑菌浓度试验（Minimum Inhibitory Concentration, MIC）和最低杀菌浓度试验（Minimum Bactericidal Concentration, MBC）。 ［目的要求］ 1、熟悉体外抗菌试验操作技术。 2、掌握药物抗菌能力体外测定的常用方法及其用途。 ［实验原理］ 常用的体外测定药物抑菌能力的方法有两大类：琼脂渗透法与浓度系列稀释法。琼脂渗透法时利用药物能够渗透至琼脂培养基的性能，将实验菌混入琼脂培养基后倾注成平板；或将试验菌均匀涂于琼脂平板的表面，然后用不同的方法将药物置于已含试验菌的琼脂平板上。根据加药的操作方法不同而有滤纸片法、打洞法、管碟法及挖沟法等。经适宜温度培养后观察药物的抑菌能力。浓度系列稀释法时把药物稀释成不同的系列浓度，混入培养基内，加入一定量的试验菌，经适宜温度培养后观察结果，求得药物的最低抑菌浓度（MIC）。 1、细菌：所用细菌应包括主要致病菌。革兰氏阳性球菌包括金黄色葡萄球菌(产酶与不产酶菌株)、表皮葡萄球菌，链球菌、肠球菌等。革兰氏阴性球菌如淋球菌等。革兰氏阴性杆菌包括流感杆菌、肠杆菌科细菌8～10种，绿脓杆菌与其它假单孢菌属及不动杆菌属等，厌氧菌包括脆弱类杆菌、消化球菌和消化链球菌等。对临床应用有代表性的菌株数量，创新药应不小于1000株。其它类新药根据新药抗菌谱宽窄可作200-500株。试验时应包括有国际公认质控菌株(如金葡菌ATCC25925，大肠杆菌ATCC25922和绿脓杆菌ATCC27853等)。 2、培养基：选MH(Muelkr-Hintop)培养基。链球菌、流感杆菌需接种到巧克力琼脂平板或加5％羊血。淋球菌接种到哥伦比亚培养基上。
抗生素分类及特点
抗生素应用原则与方法 经验性选药应先作痰涂片检查，可大致确定感染的病原体是G+ 球菌或G -杆菌，这样可以使抗生素的选择相对具有针对性。 在社会获得性感染中，病原体以肺炎球菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、军团菌、厌氧菌和病毒、支原体、衣原体为主，常选用红霉素类、四环素类、青霉素G、氨苄青霉素、复方新诺明、林可霉素类及第一代头孢菌素类。 医院内感染、老年人、有慢性阻塞性肺疾患、免疫抑制患者感染中，以Gˉ杆菌为主（如肠杆菌科细菌、绿脓杆菌、不动杆菌）和G+球菌中的金黄色葡萄球菌及厌氧菌为主，尚有真菌、结核和非结核类分支杆菌及少见的巨细胞病毒、卡氏肺孢子虫等。 常用耐酸青霉素类、广谱青霉素类、第一至三代头孢菌素类、亚胺培南、氨曲南、氨基糖苷类、喹诺酮类、万古霉素及抗厌氧菌药和抗真菌药。在经验性治疗的同时，应积极开展病原学检查。 抗菌治疗三天后，若肺炎的临床表现好转，提示选择方案正确，继续按原方案用药。如若临床表现无改善或病情恶化，应调换抗感染药物。 根据药敏试验结果选用敏感度高，抗菌谱窄、价廉、低毒副反应的药物。如果无药敏结果作指导，应选用能控制常见G-杆菌、绿脓杆菌和G+球菌的药物。 对有误吸病史或腹腔、盆腔感染者，还应加用抗厌氧菌药物。尽量选用毒副作用少的β-内酰胺类，剂量要足，给药方法要正确。 联合用药与合理配伍 一般细菌感染用一种抗生素能够控制，无需联合用药，但对病原菌不明的严重感染或患者有基础疾病并发心肺功能不全，免疫功能低下，或混合感染，应采取联合用药，可起到协同作用，增强疗效，减少细菌耐药性的产生。 联合用药的合理配伍应是繁殖期杀菌剂加静止期杀菌剂，如β-内酰胺类加氨基糖苷类，可起协同作用；静止期杀菌剂加速效抑菌剂，如氨基糖甙类加大环内酯类，有累加协同作用；青霉素类加头孢菌素类，可连续抑制细菌细胞壁的合成，产生协同作用。 速效抑菌剂与繁殖期杀菌剂不宜联合应用，如大环内酯类与β-内酰胺类，因为速效抑菌剂可迅速抑制细菌蛋白质合成而使其不能进入繁殖期，从而导致繁殖期杀菌剂活性减弱，产生拮抗作用。 泰能与哌拉西林合用治疗绿脓杆菌感染可出现拮抗作用，因泰能诱导细菌产生β-内酰胺酶，使耐酶力低的青霉素灭活。 抗生素的后效应与给药间隔时间 抗生素的后效应（PAE）指高浓度药物与细菌接触后，随着体内代谢，药物浓度逐渐降低，当浓度低于MIC时抗菌药物仍可持续抑制细菌生长，这种现象称为PAE。
体外抑菌实验方案
体外抑菌实验方案 体外实验室是筛选抗菌药物或测试新药抗菌性能的重要环节。药物对细菌代谢的影响，可以使细胞呼吸量减低，或酶系统受到抑制等，因而出现细菌停止生长或部分抑制，借以判断药物对细菌有无抗菌作用或抗菌范围。体外实验是细菌与药物直接接触，没有机体诸因素参与，故体外和体内实验的结果不一定完全一致，需两方面综合分析进行评价。 一、体外实验的准备 （一）实验菌株的选择 一般使用实验室保存的典型菌株和临床分离菌株。 （二）培养基的制备 选择适合细菌生长繁殖的营养物质的培养基 （三）实验器皿的准备 抗菌实验的步骤需用无菌操作，应用的试管、平皿、吸管等与细菌接触的器皿，均需经过高压灭菌后应用。 （四）药物的准备 实验时称取一定量的药物，铵盐基折算成效价/mg，配成溶液或制成均匀的混悬液，pH调至中性。 （五）菌液制备 抗菌药物实验是针对细菌的作用，实验菌株不能含其他杂菌。 （六）细菌计数 将菌稀释至OD值为0.002（实验时1ml菌液加1ml药液OD值降为0.001）二、体外抗菌实验（试管稀释法） （一）1ml药液采用8个梯度：500、100、50、25、10、5、2.5、1.25（ug）。 配置方法： 每个药液浓度为1ml，8个梯度总共694ug，取整700ug。 （1）称取700ug待测物，溶解在1.4ml溶剂中得到500ug/ml的药液。 （2）从500mg/ml的药液中取0.4ml，加入1.6ml溶剂得到100ug/ml的药液。（3）从100mg/ml的药液中取1ml，加入1ml溶剂得到50ug/ml的药液。
（4）从50mg/ml的药液中取0.5ml，加入0.5ml溶剂得到25ug/ml的药液。（5）从50mg/ml的药液中取0.5ml，加入2ml溶剂得到10ug/ml的药液。 （6）从10mg/ml的药液中取1ml，加入1ml溶剂得到5ug/ml的药液。 （7）从5mg/ml的药液中取1ml，加入1ml溶剂得到2.5ug/ml的药液。 （8）从2.5mg/ml的药液中取1ml，加入1ml溶剂得到1.25ug/ml的药液。 （图示如下图） （二）1ml菌液采用OD值0.002的菌液 配置方法：菌悬液在600nm波长下测定其OD值，根据具体的OD值按10倍稀释使菌悬液的OD值接近0.002，在接近0.002后缩小稀释倍数使菌悬液OD 值为0.002。 （三）菌药混合培养 取稀释药液各1ml分装于小试管内（从稀到浓可不换吸管），做好标记，然后取经培养16-18h细菌培养液，每管1ml，每小试管总量为2ml，置37℃培养箱内培养16-18h，检查结果。 （四）结果分析 如加入细菌的药液管仍未澄清，即表明无细菌生长，则该管药物有抗菌作用；如为浑浊，即表明细菌已生长，该管药物无抗菌作用。以完全无细菌生长的最低药物浓度作为细菌对药物的敏感度，即为该药物最小抑菌浓度。