色谱柱

色谱柱
色谱柱

本人是一个色谱柱销售人员,从业十多年,接触色谱柱的品牌很多,对各品牌的色谱柱都略知一二,所以在这里把色谱柱分分类,让大家对这些色谱柱有个初步的了解,因为精力有限,我无法把所有的色谱柱罗列,也欢迎大家拍砖,补充其他我没有收录的色谱柱及其特点!另外这里只谈使用的最多的反相色谱柱,至于其他糖柱,手性柱,气相柱,GPC柱,蛋白柱等,以后有时间再另开帖子!

一、高性能色谱柱

特点:柱效高,价格高,通用性好,使用寿命长,pH范围宽,一般这类色谱柱可用于解决一些疑难杂症,并不是平时经常使用的色谱柱。

1、NEW!!广州绿百草的ECOSIL C18-EXTEND 评分90

美国生产,被广州绿百草引进,采用硅胶球聚合物包被技术,与菲罗门和资生堂采用了相同技术,pH1-12,

优点:因为聚合物涂层抑制了碱性溶液水解硅胶,所以可以承受一定的碱性条件,由于是硅胶球颗粒,所以柱效不错,比Xterra或者PSDVB这类色谱柱柱效好。同类型色谱柱单价最低,¥2700。

缺点:市场推广一般,知名度很低,聚合物涂层稳定性比较差,所以当涂层损失时,色谱柱会很坏被碱性溶液溶解,这也是其寿命远不及Xbridge的原因。另外涂层损失也会影响结果重现性。

2、Waters公司Xbridge 评分90

2005年waters公司推出,杂化颗粒柱

优点:pH 1-12, 在高pH状态下,没有能与此色谱柱匹敌的,目前市场的宽pH色谱柱在高pH的状态下(9-12)普遍寿命很短,如Gemini,资生堂公司Capcell,YMC Pro-C18,包括waters的第一代杂化柱Xterra都是寿命不长,Zorbax Extend更是不堪。柱效与一流的硅胶柱相当,甚至有过之无不及,杂化颗粒柱和聚合物色谱柱的问题在于柱效,Xterra和常见的PSDVB的色谱柱都有不错的pH范围,但是柱效低的问题无法解决,这是聚合物填料一般比较软且不耐压的原因造成。在如此宽的pH范围,最大的好处是可以在化合物的保留平台区去开发方法(pH1-3, pH9-12),这样能得到更稳定更容易重现的方法,对酸性,中性,尤其是碱性化合物都能得到理想的峰形。

注:Waters UPLC色谱柱与Xbridge采用同类型填料,只是颗粒度是1.7um,所以不再重复。缺点:价格高,平均每支¥7000多的,不是大多数中国客户可以接受的,大多数客户的色谱柱报废了主要是盐或者样品堵了色谱柱,因为这个原因,昂贵的Xbridge很有可能2-3个月就被客户报废掉了。

2、Merck Chromolith整体化色谱柱评分90

Merck公司2001年推出,整体化色谱柱,2001年Pitticon Editors金奖

优点:高流速、低压力,可以快速分析样品,因为压力低,所以可以串联色谱柱以获得更高的柱效而不用担心色谱柱耐压问题,低压力是因为硅胶棒的大量中孔的存在,中孔的存在也让这支色谱柱不怕堵,在处理比较脏的样品的时候会优势很大(如中药),实际的寿命也因此延长。

这个色谱柱最大的特点是柱效高出峰时间快,特别适合之前分析时间超长的实验条件,目前很好的例子就是人参的指纹图谱,因为成分复杂,之前出峰要2个小时,现在用整体化色谱柱30min就可以分析完了(已经在省药检所做过测试),且不影响柱效,类似于UPLC,但不像UPLC那么容易堵。如果需要谱图,我可以免费提供。

缺点:规格单一,单价比较高,单价¥7000左右,所以通过串联获得更高柱效的方式显得比较奢侈。市场推广的并不是很好,知名度比较低。

3、Phenomenex公司Gemini 评分80

采用硅胶球聚合物包被技术。pH1-12,

优点:因为聚合物涂层抑制了碱性溶液水解硅胶,所以可以承受一定的碱性条件,由于是硅胶球颗粒,所以柱效不错,比Xterra或者PSDVB这类色谱柱柱效好。单价不低,¥3200。缺点:聚合物涂层稳定性比较差,所以当涂层损失时,色谱柱会很坏被碱性溶液溶解,这也是其寿命远不及Xbridge的原因。另外涂层损失也会影响结果重现性。

4、资生堂Capcell 评分70

采用硅胶球聚合物包被技术。pH1-10,

优点:其实采用了和Gemini同样的技术,只是参数指标比phenomenex低调。有非官方消息称其实是phenomenex购买的资生堂的该项技术。

缺点:市场推广远差于phenomenex, 单价偏高,¥5000以内。

5、Agilent Zorbax Extend 评分50

采用双配位键和相技术。pH2-11.5

优点:不详

缺点:在各公司的高pH使用时间测定表,基本上都会拉上Extend,大多数公司的数据都说明该款色谱柱的耐高pH能力很差,甚至不如一些高纯硅胶柱。单价¥5000左右。

二、高纯硅胶柱

特点:柱效高,普遍柱效在9-10万/米的塔板数,峰形好,适用广泛,价格合适,为各大色谱柱公司目前主流色谱柱,也是竞争最激烈的色谱柱,普遍在2000-3000的范围内!

1、NEW!! 广州绿百草公司的ECOSIL C18-SH 评分90

德国生产的色谱柱,工艺可靠,被广州绿百草引入中国,

优点:pH 1-10, 单价便宜,¥1900,通用性好,柱效高,测试报告中见过甲苯测出12万/米的塔板数

缺点:市场推广较差,知名度比较低。

2、Merck的Purosphere STAR 评分 90

优点:为Merck公司1999年推出,pH 1.5-10.5,单价¥2950,通用性好,柱效高,测试报告中见过甲苯测出11万/米的塔板数

缺点:市场推广较差,知名度比较低,压力较高,后来更新的色谱柱把压力降下来了,柱效也略有下降!

3、Phenomenex的Luna 评分 90

Phenomenex公司的主打色谱柱,主要是菲罗门直销,pH1.5-10,单价¥2600左右,

优点:通用性很好,在进口色谱柱市场上占有一定份额,

缺点:装填相对松散,柱头填料容易塌陷,价格也略有上涨。

4、Waters的Symmetry 评分85

优点:由于Waters推出Sunfire超纯硅胶柱,而降为低端色谱柱,但实际性能优异

pH2-8,属于很通用的色谱柱,目前促销价为¥2990和¥3450,相对于waters其他色谱柱,

性价比还是不错的。柱寿命不错

缺点:因为是仪器公司的色谱柱,虽然做了特价,但还是较贵,另外柱压稍高。

5、Kromasil以及Hypersil ODS2 并列评分85

两款色谱柱均为专业色谱柱公司提供,性能相当,Kromasil稍胜一筹,单价¥2300左右

pH2-8,属常规色谱柱,通用性不错,都是由代理公司销售,没有技术附加分,全靠价格取胜。故评分85

相对来说Hypersil的BDS和ODS2性能稍逊,主要是属于A类硅胶,会容易拖尾,不过thermo 近期的促销价格非常低,价格已经降到了1700以下,所以现在购买已经比Kromasil色谱柱更划算!

6、YMC Pro C18 评分80

性能不错,较第四名性能优异,被多家公司挑选进行性能比较,只是目前的YMC产品为代理公司销售,热衷销售更低价格的ODS-A,所以Pro C18市场占有率很低,

缺点:销量决定价格,目前售价在¥4000以上。

7、Agilent的Zorbax XDB以及岛津的Shim-pak并列评分75

性能一般,只是因为是由仪器公司直接销售,销量还是有保障的,售价较高,Agilent大约¥4000-5000,岛津大约¥3000-4000。

缺点:性能普通,单价稍高。技术多年没有更新。

8、Waters的Sunfire 评分60

Waters最新超纯硅胶色谱柱,为二官能团封端,峰形更尖锐,此外性能较其它高纯硅胶柱并无明显优异,比如Purosphere STAR、Symmetry以及Luna等,单价¥6000-7000,单价太高,性能并不突出,所以在国内一般只能依靠Waters仪器捆绑销售。

缺点:单价太高

9、Inertsil ODS-3色谱柱:评分90

优点:日本GL Sciences公司经典的高纯硅胶柱,峰形好,通用型好,理论柱效需要超过8.8万/m才可出厂,与LUNA,SYMMETRY性能相当,

价格¥2400-2500之间,随着岛津GL在中国投入的加大,销量已经增长很多,目前大概1万支一年,

缺点:在国内以分销为主,市场推广不够。

10、Inertsil ODS-SP色谱柱:评分80

特点:日本GL Sciences公司经典的高纯硅胶柱,SP说明了它的特点,Sharp Peak,碳载量很低,可以运行100%水溶液,保留时间短,现在为岛津日本机型的标配色谱柱。

缺点:碳载量低会导致它对非极性样品的保留较弱,分离度会下降,价格在¥3500左右。

11、Lichrospher RP18e色谱柱评分90

优点:默克公司的纯硅胶柱,且端基封尾,通用型较好,目前250*4.6 5u的色谱柱正在特价¥2000,性价比极高。性能与kromasil,hypersil色谱柱相当。

缺点:硅胶杂质含量相对较高,峰形会较高纯硅胶柱差一些,市场知名度很低。

三、亲水色谱柱,

特点:一般的C18都是疏水色谱柱,所以分析极性强的样品,都会保留比较弱,而调低有机溶剂比例又会造成疏水塌陷,所以很多公司都会推出不封端的或特殊封端的色谱柱,通过亲水基团达到增加极性样品保留,并且可以降低疏水塌陷的影响。

这类色谱柱一般都会用AQ或者Hydro表示,可耐100%水

1、NEW!! 广州绿百草的ECOSIL C18-AQ 评分90

优点:美国生产,耐100%纯水,性价比很高¥1900

缺点:知名度很低,

2、Waters Atlantis T3 评分90

采用三官能团键合,获得了很好的低pH稳定性,寿命提高,采用了专利的封端使其对极性化合物有良好的保留,并且对碱性化合物峰形也不错,

优点:很多公司的分析极性化合物的c18柱采用了不封端的技术,所以造成分析碱性化合物拖尾,并且柱寿命低,而T3在极性化合物的保留、碱性化合物的拖尾、柱寿命三方面都完成得很好,所以是这类色谱柱的No.1。

缺点:价格偏高,单价¥5000-6000

3、Agilent SB-AQ 评分85

优点:采用二异丙基空间位阻技术,碳链结构为专利(应该不是C18),所以在低pH下碳链难水解,低pH稳定性非常好,(SB-C18采用的是二异丁基位阻技术,是目前在低pH下稳定最好的色谱柱,只有waters的Xbridge能与之相比)单价¥4000-5000。

缺点:因为空间位阻影响,所以和SB-C18一样,无法封端,造成了缺点和优点一样突出,所以SB-C18碰到碱性化合物的峰形是非常差的,尤其是在pH7左右,另外在pH7左右这款色谱柱寿命也更差,所以一般适用于pH1-3。

4、phenomenex Synergi Hydro-RP 评分:85

采用极性封端,单价3000以下。

高纯硅胶柱(补充)

四、低价色谱柱(大多数客户的首选)

特点:一般价格在¥1000-2000之间,通用性好,低价但不一定低性能,是目前国内客户使用最广泛的色谱柱,尤其是制药企业的客户,因为拥有很高的性价比,用坏了也不用太心疼,所以目前国内市场至少有每年2万支左右的市场。

1、广州绿百草的ECOSIL C18色谱柱评分100

优点:日本生产,绿百草引入中国,价格经济,性能优异可靠。属于高纯硅胶柱,柱压低,150mm的短柱65:35乙腈/水压力在2.5MPa左右。性价比很高,售价在¥1700。

缺点:知名度很低。

2、迪马钻石色谱柱评分90

优点:属于高纯硅胶柱,柱压低,峰形好,尤其用于中药客户更有优势,目前与依利特并列为两大最常用国产色谱柱品牌,拥有这么广阔的市场,说明这款色谱柱是经得起考验的,售价¥1600左右。

缺点:质量控制较大品牌的原装进口柱差,批次重现性差,使用寿命短。

3、依利特色谱柱评分90

优点:属于纯硅胶柱,拥有这么广阔的市场,尤其是制药企业客户,说明这款色谱柱是经得起考验的,售价¥1400-1500。

缺点:批次重现性差,使用寿命短,现在thermo的进口柱会对依利特有很大的冲击,同样的填料,进口的色谱柱价格也不高。

4、Kromasil国产色谱柱评分80

优点:属于纯硅胶柱,拥有较多的客户,价格低售价¥1000-1200。

缺点:批次重现性差,使用寿命短,阿克苏诺贝尔公司已经不供应中国市场5u填料,不过这几年应该还可以买到。

HILIC色谱柱介绍[优质材料]

亲水作用色谱(HILIC)是近年来色谱领域研究的热点之一。本文简介了HILIC的起源、定义、分离特点;比较了HILIC和反相色谱(RPLC)的选择特性,讨论了HILIC与质谱联用技术的特点,并对其使用中的注意事项进行了总结。 1. HILIC的概念 亲水色谱(HILIC)是一种用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技术。它通过采用强极性固定性,并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这一目的。而这样的流动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱(ESI-MS)的灵敏度。2. HILIC的分离机制 HILIC的分离机理在目前还存在着争议,主要包括以下三个方面:(1)分配机理(2)离子交换(3)偶极-偶极相互作用。更多的试验现象则表明HILIC的保留机理包含氢键作用、偶极作用和静电作用等多种次级效应,很难将其区分开来。 3.HILIC影响保留的主要因素 普遍认为HILIC保留行为受到多种参数的影响,如固定相的官能团、有机改性剂的含量、流速、柱温、流动相缓冲体系的pH值、缓冲盐的种类和浓度。 影响样品在固定相上的保留行为的最主要因素都是流动相中有机相的比例,例如乙腈的含量的增加会显著增加样品的保留因子。在HILIC分离模式中,溶剂洗脱能力由弱到强为:四氢呋喃<丙酮<乙腈<异丙醇<乙醇<甲醇<水, 流动相中水是最强的洗脱溶剂。一般采用乙腈-水体系作为流动相,其中水相的比例为5%-40%以保证其显著的亲水作用。如图1所示,将流动相中的水相用甲醇、乙醇、异丙醇代替,随着流动相极性的减小,待测物在柱上的保留就会增强。 Figure 1. HILIC retention as a function of polar modifier. 100 mm length ACQUITY UPLC BEH HILIC column. Peaks: 1 = methacrylic acid, 2 = cytosine, 3 = nortriptyline, 4 = nicotinic acid. 4. HILIC与RP-HPLC的比较 传统的反相色谱(RPLC)对强极性和亲水性的小分子物质的保留和分离能力较弱,通常流动相需要采用高比例的水相才能实现其保留,然而高比例的水相会导致一系列问题,比如固

色谱柱的分类及特点

3-1 柱的结构 1、堵棒(或导管) 2、接头 3、接头 4、密封圈 5、螺帽 6、柱密封圈 7、柱管 8、柱填料9 10、过滤片 3-2 柱的分类: 根据所有的担体材料分为三种: a.硅胶型:机械强度高,易制成小颗粒,理论塔板数高。 b.聚全物型:在广泛的PH值范围内稳定 c.羟基磷灰石型:对蛋白质等生物高分子样品有特殊的选择性。 根据分离方式分类: a.硅胶型

1)正相:SIL--磷脂、NH --糖、维生素E,CN--甾类激素。 2)反相:ODS(C18)、(C8 CN TMS Pheny1)低分子量化全物。 3)离子交换: WAX(弱碱阴离子交换)--核苷酸、蛋白质 WCX(弱酸阳离子交换)--蛋白质 SAX(强碱阴离子交换)--核苷酸 SCX(强酸阳离子交换)--儿茶酚胶 4)凝胶过滤: Diol--蛋白质GF--

蛋白质 b.聚合物型: 1)反相:ODP--50--肽,蛋白质,低分化合物。 2)离子交换:ISC--氨基酸,胍类化合物,ISA--糖,IC--无机离子,PA--蛋白质,ES--蛋白质。 3)配位交换:SCR(磺化聚苯乙烯)--糖。 4)离子排阻:SCR-101H 102H --有机酸 5)凝胶过滤:ION--多糖GS--水溶性分子 6)凝胶渗透色谱(GPC):GPD

--合成分子、橡胶。 7)羟基磷灰石型:HPC--蛋白质、核苷酸 按尺寸分类: 1.制备:30mm 50mm 内径,半制备:20mm内径。 2.分析:标准型柱:4_8mm内径。 快速色谱柱:3mm内径、5cm长、4.6mm内径。 小孔径柱:2.5mm内径,微孔径柱1mm内径。 3-3柱的技术指标 *耐压:不小于40Mpa。 *渗透性:反相--流动相甲醇1ml/min,压力3Mpa。

液相色谱仪色谱柱使用及维护

液相色谱仪色谱柱使用及 维护 Prepared on 22 November 2020

液相色谱仪色谱柱使用及维护 每天用足够的时间来平衡色谱柱,您就会在处理问题方面获得最大的"补偿",而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!------ 一定得做! 新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试,即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且,在以后的使用中,应时常对色谱柱进行测试。 卡套柱的安装(不加预柱) 1.将卡套架套入柱芯 2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽,使柱芯高于夹套(见左图) 3.将已套到柱芯上的卡套架向上推,直至高过夹套片 4.将卡套帽和卡套架旋在一起,然后用手拧紧 5.然后依同样的顺序连接好柱子的另一端 6.连接到液相色谱仪,PEEK接头手拧即可;若为不锈钢接头应使用专用扳手 注意:使用卡套柱时,两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗,任何时候都不能将卡套取下来,否则会造成填料的流失。 卡套柱的安装(加预柱) 1.将卡套架套入柱芯 2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽,使夹套高于柱芯(见左图) 3.将已套到柱芯上的卡套架向上推,直至高过夹套片 4.将"子弹头"预柱放入卡套片内

5.将卡套帽和卡套架旋在一起,然后用手拧紧 6.然后依同样的顺序连接好柱子的另一端 7.连接到液相色谱仪,PEEK接头手拧即可;若为不锈钢接头应使用专用扳手 更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片(同时可以修补色谱柱) 注意:在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前,应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗,而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈,以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。 1.将修补工具中的2套入柱芯的顶端 2.将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中,并顺时针方向旋转到旋紧 3.一手握柱芯,另一只手轻轻地向外拉3,取出柱芯顶端的滤网 4.用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料 5.将新的填料用甲醇润湿,然后填入挖去的部位,压平 6.照(左图)装上新的玻璃棉滤网,并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端 7.柱芯顶端套上2,然后参照(左图)将滤网放入 8.压紧,然后取下2,再用4将滤网的边缘压平 平衡色谱柱反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会

色谱柱基本知识

色谱柱 色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。目录 1简介 2构造 3填料 4分类 1. 4.1 安装 2. 4.2 流动相 3. 4.3 样品制备 4. 4.4 保存操作 5发展方向 6性能评价 7注意事项 8新进展

柱效;对于同系物分析,只要500即可;对于较难分离物质对则可采用高达2万的柱子,因此一般 10~30cm左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。 柱效受柱内外因素影响,为使色谱柱达到最佳效率,除柱外死体积要小外,还要有合理的柱结构(尽可能减少填充床以外的死体积)及装填技术。即使最好的装填技术,在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的,靠近管壁的部位比较疏松,易产生沟流,流速较快,影响冲洗剂的流形,使谱带加宽,这就是管壁效应。这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍粒径的厚度。在一般的液相色谱系统中,柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。 2构造 色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。柱管多用不锈钢制成,压力不高于70 kg/cm2 时,也可采用厚壁玻璃或石英管,管内壁要求有很高的光洁度。为提高柱效,减小管壁效应,不锈钢柱内壁多经过抛光。也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度,其效果与抛光相同。还有使用熔融硅或玻璃衬里的,用于细管柱。色谱柱两端的柱接头内装有筛板,是烧结不锈钢或钛合金,孔径0.2~20µm(5~10µm),取决于填料粒度,目的是防止填料漏出。 色谱柱按用途可分为分析型和制备型两类,尺寸规格也不同:①常规分析柱(常量柱),内径 2~5mm(常用4.6mm,国内有4mm和5mm),柱长10~30cm;②窄径柱(narrow bore,又称细管径柱、半微柱semi-microcolumn),内径1~2mm,柱长10~20cm;③毛细管柱(又称微柱microcolumn),内径0.2~0.5mm;④半制备柱,内径>5mm;⑤实验室制备柱,内径20~40mm,柱长10~30cm;⑥生产制备柱内径可达几十厘米。柱内径一般是根据柱长、填料粒径和折合流速来确定,目的是为了避免管壁效应。 3填料 常见的分配柱填料:碳十八柱[1](ODS/C18)、碳八柱(MOS/C8)、碳六柱(Hexyl/C6)、 碳四柱(Butyl/C4)、碳一柱(Methyl/C1)、阴离子交换柱(SAX)、 阳离子交换柱(SCX)、苯基柱(Phenyl)、氨基柱(Amino/NH2)、 氰基柱(Cyano/CN/Nitrile) 常见的吸附柱填料:硅胶柱 4安装 1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。为减少死体积,进样阀、柱子、检测器之间

(完整版)色谱柱的使用及维护

前言 液相色谱的分离原理是,在色谱柱流动相中样品的不同组分与固定相发生吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和等作用,由于作用力的大小、强弱不同,各种组分在固定相中滞留的时间也不同,因而先后从以 固定相中流出而得到分离。因此液相色谱分离的关键之一是色谱柱中的固定相。柱效的好坏直接影响目标化合物的分析和检测。但在液相色谱运行过程中,色谱柱极易发生问题,因此掌握正确使用和维护 色谱柱的知识非常必要。色谱柱使用过程中容易发生柱堵塞引起系统压力过高;柱效低引起峰拖尾、变宽;柱污染、损坏导致鬼峰等问题。引起这些问题的内在原因有: (1) 硅羟基的死吸附。色谱柱的基材硅胶粒子表面存在硅胶羟基。任何物质在色谱柱中都存在双分配效应,即在流动相与固定相之间进行分配,又在流动相与硅羟基之间进行分配。被分析物质被硅羟基吸附称为非特异性吸附,或称死吸附。当硅羟基对被分析物质的吸附趋近于饱和状态时,色谱柱柱效下降,峰形出现拖尾、变宽。 (2) 重金属。色谱柱的基材硅胶粒子无论纯度多高,无论怎样处理,都会有不少于5 ×10- 6 的重金属以金属氧化物的形式残存在硅胶粒子的表面,这些金属氧化物很容易与其它化合物形成螯合物,使其被氧化,产生不对称峰或拖尾峰。例如儿茶素和大多数中药,因含有多酚结构,极易被金属氧化物氧化,影响其分离效果。 (3) 碳流失。固定相经长期使用,会有部分碳链被流动相洗脱下来,随流动相一起流出色谱柱外, 造成碳流失。 (4) 缓冲液中盐的析出。在做色谱分析时,有时流动相中会含有缓冲盐溶液。分析结束后,如果没有先用含一定配比的水相流动相冲洗,而直接用纯有机相冲洗,瞬间柱子中的微环境是高有机相、低水相。这时流动相中的缓冲盐溶液极易析出盐,将柱子堵塞,使柱压升高,柱效下降。 (5) 色谱柱变干。如果对色谱柱保存不当,使色谱柱中的保存液全部挥发,柱子内部变干,造成色谱柱的损伤,影响分离效果。 2 色谱柱的使用 新柱使用前应先检查产品包装、外观是否完好。认真阅读说明书及性能测试报告,了解新柱子的最佳性能指标,如某色谱条件下的柱压、柱效等。有时分析用的流动相与柱子的保存试剂不同,故在分析样品之前,应使用合适的试剂将柱子中的保存试剂清洗出来。要注意清洗用的流动相与保存溶剂的相溶性。反相C18 柱通过出厂测试后多保存在乙腈中,可用10~20 倍柱体积的甲醇或乙腈来平衡色谱柱。流速要缓慢提高,如开始0. 3~0. 5mL/ min , 10~15min 后可慢慢加快。 硅胶柱和极性色谱柱通过出厂测试后一般保存在正庚烷中。如果分析时需要使用含水的流动相,则使用前须用乙醇或异丙醇冲洗,流速0. 1~0. 3mL/ min ,将正庚烷冲洗干净后,再用流动相平衡。 实验过程中可以记录色谱柱的一些性能指标,如柱效、柱压等,供今后参考。每次分析样品前,要用流动相对色谱柱进行平衡,待基线平稳后再进样分析。梯度洗脱用初始流动相平衡。一次样品分离完成后,要有足够的时间使系统恢复平衡,再进行下一次分析。一般流动相平衡时间为30min ,若系统中有盐或水,平衡时间应延长。 3 色谱柱的清洗与保存 色谱柱清洗是日常的重要维护工作。如果样品分子残留在柱子、接头、流通池中,会污染系统,影响对其它样品的分析,降低柱效。因此分析工作结束后,要用适当的溶剂清洗系统中残留的样品。在反相系统中, 若流动相中无酸、碱、盐类物质, 可用90 %甲醇冲洗30~60min ,若含酸、碱、盐类物质,则要先用10 %甲醇或乙腈,或用与分析用流动相相同的

如何正确选择色谱柱

如何正确选择色谱柱 色谱分析技术主要是应用在化学医药实验室或研究所等领域内,主要是用来分析液体或气体样品的内部成分情况。色谱柱是色谱分析系统中非常的关键的核心部件,它的作用是使得样品内部成分以不同的速率通过色谱柱,而让检测器检测通过色谱柱成分的各个不同色谱峰,最终确定其成分。下面我们来了解一下如何正确选择色谱柱: 一、选择色谱柱时,首先根据其所需要进行成分含量分析的样品进行大致的类型分类,例如可以根据分离规模来进行选择色谱柱的类别,如色谱柱根据其直径的大小尺寸不同具有非常多的型号。如直径较大的是制备柱,它的尺寸一般大于10mm,还有分析柱的直径尺寸大概是2-5mm,一些微型柱,包括有纳米柱毛细管管柱等。 二、其次,可以从需要分析样品的物理和化学性质入手,如在选柱前提前找好关于该物质的资料,包括其分子量、溶解性、是否会出现解离现象等等详细的信息,然后根据这些找出合适的色谱柱类型。如脂溶性的样品适合的色谱柱是调料式的孔径,而水溶性非离子型的则比较适合反向色谱柱法等。 三、当具体到选择哪一款色谱柱时,应当保证填料所能耐受的ph范围符合分析条件的要求。因为如果其硅胶材质不与需要测量的样品的酸碱值不能够相适应,就会发生键合相水解或者是硅胶溶解的多种现象,当然其填料的孔径也要选择与色谱柱相适应的,不然很可能会导致分析结果不准确。

四、色谱柱的规格情况:色谱柱的规格包括它的长度,内外径等,细内经色谱柱的优点是比较节约溶剂、且灵敏度较高,成分测量测量也比较准确,但是它对整个色谱系统的分析精度也要求较高;如果是组分较多的色普柱,则就适合长度较长的色谱柱,才能达到更好的分离和分析的效果。 综上所述,在众多型号和尺寸的色谱柱中选择一款合适的色谱柱来使用,进行分析相应样品的成分是需要一定的技巧的。不仅要考虑考虑到该样品可能具有哪些物理和化学性质,还要考虑到色谱柱的规格尺寸以及它的填料材质和直径尺寸等,当然色谱柱售后有保障也是需要考虑的,只有考虑到多方面相关的知识和注意要点才能选到合适的评价高的色谱柱。

常用色谱柱简介

常用色谱柱简介 气相色谱毛细柱 (键合,聚二甲基硅氧烷) HP-1,DB-1,P-1,CP-SIL5CB, Ultra-1,007-1,RTx-1,AT-1 类似固定相:SE-30,SP-2100,OV-1,OV-101,使用 温度:-60℃-320℃ 应用范围:烷烃,芳烃,多环芳烃,醇,酚,酮,酯,醛,胺,卤代烃,吡啶,糖衍生物,氨基酸衍 生物,维生素衍生物,镇痛药,农药,溶剂,胆固SPB-50型中等极性柱 醇,香料,咖啡,食品添加剂等。 (键合, 50%二苯基,50%二甲基聚硅氧烷) 对照品牌:HP-50,HP-17,DB-17,RTx-50,AT-50 SPB-5型弱极性柱 类似固定相:OV-17, SP-2250,使用温度:30℃-310℃(键合,5%苯基,95%甲基聚硅氧烷) 应用范围:烷烃,低沸点芳烃,多环芳烃,醇,甘 对照品牌:HP-5,DB-5,BP-5,CP-SIL 8CB, 油三酸酯,喹啉,卤素化合物,香料,农药,酯,Ultra-2, ,RTx-5,AT-5 镇痛药,除草剂等。 类似固定相:SE-54,SE-52,OV-73 使用温度: -60℃-320℃ PTE-5,PTE-5QTM型弱极性柱

应用范围:烷基苯,多环芳烃,醇,酚,酮,脂肪(MS专用柱,键合,5%苯基,95%甲基聚硅氧烷) 酸酯,苯二甲酸酯,硝基芳烃,芳胺,烷基胺,联 对照品牌:HP-5 MS,DB-5 MS, DB-5.625,XTI-5, 苯胺,卤代烃,多氯联苯,,糖类衍生物,维生素衍BPX625,半挥发污染物分析柱(US EPA方法525, 生物,有机酸,镇痛药,农药,抗组胺药,溶剂,625.5,625) 生物碱,防腐剂,香料等。 类似固定相:SE-54,SE-52 使用温度:-60℃-320℃ 应用范围:多氯联苯,胺,有机磷,有机氯农药,SUPELCOWAX 10型极性柱 含氯除草剂,酚,苯胺,香料等。 (键合,聚乙二醇二万) 对照品牌:HP-Wax,DB-Wax,BP-20,CP-Wax 52CB,SPB-1701型中等极性柱 HP-INNO Wax,AT-Wax (键合, 14%氰丙基,86%二甲基聚硅氧烷) 类似固定相:PEG-20M, CARBOWAX-20M,使用温 对照品牌:HP-1701,DB-1701,RTx-1701,AT-1701,度:35℃-280℃ BP-10,CPSil19CB 应用范围:低沸点芳烃,醇,酮,酸,酯,醛,醚, 类似固定相:OV-1701,SP-2250 使用温度:室温-280 乙二醇,丙二醇,甘油,吡啶,胺,亚硝胺,卤代 ℃ 烃,胆汁酸衍生物,冰片,薄荷,精油,香料,酒,

色谱柱的极性

柱子的极性取决于固定相的极性 我们常用柱子的极性如下: 一、非极性 1、100%Dimethyl polysiloxane,100%聚二甲基硅氧烷,商品名:AC1,OV-101,OV-1,DB-1,SE-30,HP-1,RTX-1,BP-1 二、弱极性 2、5%Phenyl dimethyl polysiloxane, 5%二苯基(95%)二甲基聚硅氧烷,商品名:AC5,SE-52, 3、5% Phenyl 1%vinyl dimethyl polysiloxane,5%二苯基1%乙烯基(94%)二甲基聚硅氧烷,商品名:OV-5,DB-5,SE-54,HP-5,RTX-5,BP-5 注:2、3常无严格区分,通常混称。 三、中等极性 4、50%Phenyl dimethyl polysiloxane, 50%二苯基(50%)二甲基聚硅氧烷,商品名:OV-17,HP-50,RTX-50 5、14%Cyanopropyl phenyl polysiloxane, 14%氰丙基苯基(其中7%氰丙基7%苯基)(86%)二甲基聚硅氧烷,商品名:AC10,OV-1701,DB-1701,RTX-1701 6、50% Cyanopropyl phenyl polysiloxane,50%氰丙基苯基(其中25%氰丙基25%苯基)(50%)二甲基聚硅氧烷,商品名:AC225,OV-225,BP-225,DB-225,HP-225,RTX-225 四、强极性 7、polyethylene glycol,聚乙二醇,商品名:AC20,PEG20M,HP-INNOWAX(FFAP是其与2-硝基对苯二甲酸的反应产物)

COSMOSIL高效液相色谱柱使用说明书一序言二使用注意

COSMOSIL高效液相色谱柱使用说明书 一. 序言 非常感谢您购买我们的COSMOSIL色谱柱。为了保证色谱柱能够发挥最高性能和保持更长的寿命,我们建议您在使用前仔细阅读本说明书。 COSMOSIL色谱柱由不锈钢制成,其内部填料以超纯多孔球状硅胶为基质。我们的COSMOSIL系列覆盖了几乎所有的正反相色谱的一般应用和特殊应用,此外还具有分析目的和制备目的的色谱柱。请联系我们的经销商或直接联系Nacalai Tesque咨询最适合您的色谱柱。 二. 使用注意 1. 避免冲击和震动。 2. 按照标签上标明的方向连接色谱柱。 3. 将色谱柱连接到检测器之前,先使用20~30ml流动相通过色谱柱。 4. 请使用完全脱气的流动相。气泡会导致检测噪音并且会加速色谱柱的恶化。 5. 请使用HPLC级溶剂。 6. 包装盒内的检验报告书中记载了色谱柱出厂时的内部溶剂成分。给流动相中添加缓冲液 时,请确认检验报告书中的成分表以避免色谱柱内产生沉淀。 7. 请将流动相的pH值范围保持在2~7.5之内。缓冲液浓度范围通常为0.005~0.02M。使用 流动相前先将流动相通过孔径0.5μm以下的薄膜滤器。使用三氟乙酸时,请将浓度保持在0.1%以下。 8. 请将压力保持在200kgf/cm2以下。在使用高粘度流动相时需要特别注意。 9. 使用完反相色谱柱后,请先用不含酸或盐的溶剂清洗色谱柱,再用乙腈或甲醇清洗色谱 柱,紧栓保存。 10. 使用完正相色谱柱后,请将色谱柱内部的溶剂置换为无卤素非极性溶剂(如正己烷或正 庚烷),紧栓保存。 11. 注入样品前请务必过滤样品。另外,将样品注入到流动相内时,请注意不要产生沉淀。 12. 拆下色谱柱的端螺帽或端部滤片会造成色谱柱性能的大幅下降。 13. 不要将螺帽拧的太紧。 14. 使用制备柱时,请先使用分析柱确定样品的分离状态。注意:可能会有保留时间长于目 标物质或无紫外吸收的杂质存在。

色谱柱的使用和维护注意事项

色谱柱的使用和维护注意事项 色谱柱的正确使用和维护十分重要,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中,需要注意下列问题,以维护色谱柱。 1、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料,因此在调节流速时应该缓慢进行,在阀进样时阀的转动不能过缓(如前所述)。 2、应逐渐改变溶剂的组成,特别是反相色谱中,不应直接从有机溶剂改变为全部是水,反之亦然。 3、一般说来色谱柱不能反冲,只有生产者指明该柱可以反冲时,才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。 4、选择使用适宜的流动相(尤其是pH),以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱,分析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶"饱和",避免分析柱中的硅胶基质被溶解。 5、经常用强溶剂冲洗色谱柱,清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时,对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡,每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右。 6、保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇,柱接头要

拧紧,防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置或更长时间。 7、色谱柱使用过程中,如果压力升高,一种可能是烧结滤片被堵塞,这时应更换滤片或将其取出进行清洗;另一种可能是大分子进入柱内,使柱头被污染;如果柱效降低或色谱峰变形,则可能柱头出现塌陷,死体积增大。在后两种情况发生时,小心拧开柱接头,用洁净小钢将柱头填料取出 1-2mm高度(注意把被污染填料取净)再把柱内填料整平。然后用适当溶剂湿润的固定相(与柱内相同)填满色谱柱,压平,再拧紧柱接头。这样处理后柱效能得到改善,但是很难恢复到新柱的水平。柱子失效通常是柱端部分,在分析柱前装一根与分析柱相同固定相的短柱(5-30mm),可以起到保护、延长柱寿命的作用。采用保护柱会损失一定的柱效,这是值得的。通常色谱柱寿命在正确使用时可达2年以上。以硅胶为基质的填料,只能在pH2-9范围内使用。柱子使用一段时间后,可能有一些吸附作用强的物质保留于柱顶,特别是一些有色物质更易看清被吸着在柱顶的填料上。 8、新的色谱柱在使用一段时间后柱顶填料可能塌陷,使柱效下降,这时也可补加填料使柱效恢复。每次工作完后,最好用洗脱能力强的洗脱液冲洗,例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。当采用盐缓冲溶液作流动相时,使用完后应用无盐流动相冲洗。含卤族元素(氟、氯、溴)的化合物可能会

色谱柱使用手册

正相、反相和极性胶联柱使用手册 分类:质量检验 2007.3.22 22:20 作者:LAI | 评论:0 | 阅读:146 正相、反相和极性胶联柱使用手册Chrompack HPLC Normal-,Reversed phase and Polar bonded columns 注意: 此色谱柱填充的是改性硅胶材料。向柱内导入碱性溶剂(pH>7.0)或酸性溶剂(pH<2.0)会导致柱子损坏。在使用这个柱子之前,你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。未正确地使用不能享受保修待遇。 1.简介 此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。硅胶形态的柱子用于正相(非水)条件。反相(C8,C18,ODS,RP-8和RP-18)通常用于反相条件(水相)。极性胶联型(APS,diol,CN和NH2)依照应用目的,可以用于正相和反相条件。建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下,这是因为柱子在特定的条件下,固定相的性质会发生变化,所以在其他的条件下,会影响柱效。也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将方向柱用在正相条件下,这是因为这种过程会发生重复性差的问题(每一次注射之间和柱与柱之间的比较)。 2.色谱柱老化 在开始分析工作以前,柱子必须经过正确的老化。一个没有正确老化的柱子可能会带来问题,诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。 A.在反相条件下老化 要老化这类柱子,首先要使用乙腈或者甲醇淋洗,然后你选用的洗脱液进行平衡。在发货以前,每根柱子都已经测试过并进行了老化。因此没有必要在第一次使用时用水冲洗)。 如果流动相中使用了添加物(例如缓冲液或离子对试剂),建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。缓冲冲洗应当首先以低流速进行,最后再使用正常流速。 B.在正相条件下老化 柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。柱子的干燥(激活)或润湿(失活)可能是需要的。使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。 C.对于极性键合柱的特殊说明 由于这些柱子可以用于反相或者正相条件,在进行老化以前,一定要首先检查你要使用的淋洗溶剂或洗脱液是否可以与封装在柱子里的溶剂相混溶。如果这些溶剂不能混溶,必须先使用一个合适的缓冲溶剂进行冲洗。 3.洗脱液 注意第节和第2节。一定不要使用pH低于2或者高于7的缓冲液,这是由于它们会改变固定相的性质。极性键合柱最好使用在3到5 之间。在使用以前,洗脱液要进行脱气,以及使用0.5微米的滤膜过滤,以免发生检测和泵送问题。

氨基色谱柱

氨基色谱柱,全称氨丙基键合硅胶色谱柱,在HPLC中既可以作为反相色谱柱,又可以作为正相色谱柱.使用者在进行正反相转换操作过程中一定要注意以下几项: 对于新购买到的柱子,首先请注意打开分析测试说明书,了解柱子的保存溶剂。如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶,请先用异丙醇过渡。过渡过程中注意因异丙醇粘度较大,会导致柱压很高,适当调低流速即可。如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类,建议在用分析流动相之前,先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡,这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。 柱效检测: 我用于判断一个用户是否有经验的指标之一,是用户是否习惯配制一些柱效检测标准溶液。说到柱效检测,我可以向大家提供一个方法,而且很通用,你也可以用同样的标准溶液和流动相来检测硅胶柱和氰基柱。 流动相: 10%乙酸乙酯+90%正己烷流速1.0 标准溶液: 乙苯(如乙苯找不动就用甲苯代替呗)+苯甲酸甲酯 检测波长254nm 这个方法特别适用于新购柱子(新购柱子往往保存在正相溶剂中)时即进行检测,如有问题,可及时与供应商沟通。也适合在柱子在准备放置相当长一段时间之前进行充分清洗后进行检测作为记录留档。在平常的使用过程中,如果分析物是固定重复的,我们当然可以从对分析物的分离分析情况来作出判断;但如果分析物和分析条件不同时,定期检测柱效可以避免柱效下降导致分离不佳再分析查找原因这样浪费人力物力的过程。不过特别要注意的是,当氨基柱(或氰基柱)在反相条件中使用时,如用该条件检测,请注意流动相的换相过渡问题。 氨基柱的使用: 需要注意的是,氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团C18,C8要容易水解,所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备,特别是当你的使用条件是反相条件下时。 反相条件下使用时,要特别注意控制PH值范围,PH值越低越有发生水解的危险,流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。所以,在使用后以及准备长时间放置该柱时,必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。 有一种情况是,当使用氨基柱进行酸性物质如果汁的分析时(分析其中的糖份),酸性物质的存在意味着质子的存在,可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化,导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。这时,Kromasil专家所给的建议是:用5-10倍的柱体积的含0.5- 1.0%NH3的50-50乙腈-水溶液冲洗该柱(冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨),之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1%。 氨基柱的清洗 简单说起来,正相条件下使用的氨基柱你就参照硅胶柱的清洗方法;反相条件下使用的氨基柱你就参照C18的清洗方法。 平时在正相条件下使用: 首先用50倍柱体积的异丙醇清洗,因异丙醇粘度较大可适当放低流速;之后,用50倍的甲醇清洗;之

色谱柱的使用和维护

一.安装、启用和维护中重点注意事项 色谱柱既是液相色谱仪的最核心部件,价格相对昂贵,请牢记它是高档仪器中的高档部件,给它以足够的尊重和关怀。如避免强烈的碰撞和震动,尽管色谱柱从1米高的实验台掉落到水泥地上不至于100%会损坏,但50%的可能损坏你也承受不起。另外不要让柱床变干,避免在严寒环境受冻等。 1. 柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配 色谱柱是消耗品,不是仪器原配的情况很多。上图表明柱连接的6种不同方式(数字单位是英寸),如果两者类型不匹配将会产生漏液或者死体积过大的现象。接头比柱头深度长,不易拧紧而漏液;接头比柱头深度短,柱头内留有空隙而产生死体积,使谱带展宽和峰拖尾。

2. 溶剂的匹配转换 色谱柱内保存溶剂和仪器系统内存留溶剂,如果和流动相不匹配,使用前需进行转换。特别是流动相含缓冲盐时,如保存溶剂是纯有机相或有机相比例高,直接将新柱接入使用,会导致缓冲盐在柱内结晶析出,最严重会将新柱永久不可逆地损坏。正相柱保存溶剂一般为正己烷,如果要转换成HILIC柱模式使用,由于正己烷和甲醇乙腈的互溶性不好,转换中间需用二氯甲烷或乙酸乙酯过渡。 3. 新柱使用前的平衡和老化 厂家出厂检验时一般都已进行过平衡,但色谱柱到最终用户时间不一,用户正式测定前最好对色谱柱再次平衡。最好的平衡兼老化一起进行的方法是运行几次完整的分析程序(包括进样),直到观察到峰形、保留时间和峰面积稳定为止。所谓“老化”是借用了气相的术语,目的是达到分析物在色谱柱以及整个液相系统流路中的吸附饱和。对某些特定的待测物,如分子量大于1000的,因扩散速度慢,老化时间相应要长,可采取大浓度进样或在同一个洗脱周期内连续进样多针的方式加快老化。 4. pH使用范围 一般认为硅胶基质柱子的pH使用范围是2-8,这是很粗略的。硅胶类型、使用温度、硅胶表面所键合的固定相类型以及缓冲盐的不同,对此均有影响。硅胶比孔容小、键合密度大的填料pH耐受范围要大

色谱柱相关知识

色谱柱相关知识 1、色谱柱的使用说明: (1)色谱柱使用前注意事项: 色谱柱的储存液无特殊说明,均为评价报告所示的流动相。在使用前,一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。在反相色谱中,如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂,应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下,否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出,堵塞色谱柱。 (2)流动相: 流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯,配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好,尤其是含盐的流动相。另外,装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。 以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0,BDS C18适合于碱性化合物,PH值适用范围为2.0-10.0。当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时,每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗,并完全置换掉原来所使用的流动相。 (3)样品: 样品也要尽可能清洁,可选用样品过滤器或样品预处理柱(SPE)对样品进行预处理;若样品不便处理,要使用保护柱。在用正相色谱法分析样品时,所有的溶剂和样品应严格脱水。 2、色谱柱的保存?? (1)反相色谱柱每天实验后的保养: 使用缓冲液或含盐的流动相,实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。 (2)长期保存色谱柱: 如色谱柱要长时间保存,必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中,正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中,离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。 3、色谱柱的再生?? 因为色谱柱是消耗品,随着使用时间或进样次数的增加,会出现色谱峰高降低,峰宽加大或出现肩峰的现象,一般来说可能是柱效下降。 (1)反相柱的再生:依次采用20-30倍的色谱柱体积的甲醇:水=10:90 (V/V),乙腈,

HILIC色谱柱介绍

亲水作用(HILIC)是近年来色谱领域研究的热点之一。本文简介了HILIC的起源、定义、分离特点;比较了HILIC和反相色谱(RPLC)的选择特性,讨论了HILIC与质谱联用技术的特点,并对其使用中的进行了总结。 1. HILIC的概念 亲水色谱(HILIC)是一种用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技术。它通过采用强极性固定性,并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这一目的。而这样的流动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱(ESI-MS)的灵敏度。2. HILIC的分离机制 HILIC的分离机理在目前还存在着争议,主要包括以下三个方面:(1)分配机理(2)离子交换(3)偶极-偶极相互作用。更多的试验现象则表明HILIC的保留机理包含氢键作用、偶极作用和静电作用等多种次级效应,很难将其区分开来。 影响保留的主要因素 普遍认为HILIC保留行为受到多种参数的影响,如固定相的官能团、有机改性剂的含量、流速、柱温、流动相缓冲体系的pH值、缓冲盐的种类和浓度。 影响样品在固定相上的保留行为的最主要因素都是流动相中有机相的比例,例如乙腈的含量的增加会显着增加样品的保留因子。在HILIC分离模式中,溶剂洗脱能力由弱到强为:四氢呋喃<丙酮<乙腈<异丙醇<乙醇<甲醇<水, 流动相中水是最强的洗脱溶剂。一般采用乙腈-水体系作为流动相,其中水相的比例为5%-40%以保证其显着的亲水作用。如图1所示,将流动相中的水相用甲醇、乙醇、异丙醇代替,随着流动相极性的减小,待测物在柱上的保留就会增强。 Figure 1. HILIC retention as a function of polar modifier. 100 mm length ACQUITY UPLC BEH HILIC column. Peaks: 1 = methacrylic acid, 2 = cytosine, 3 = nortriptyline, 4 = nicotinic acid. 4. HILIC与RP-HPLC的比较 传统的反相色谱(RPLC)对强极性和亲水性的小分子物质的保留和分离能力较弱,通常流动相需要采用高比例的水相才能实现其保留,然而高比例的水相会导致一系列问题,比如固定相的反浸润和ESI-MS灵敏度的下降。 HILIC正好可以解决这些问题,它提供了一种与传统RPLC互补的保留方式,能够使在RPLC 上保留较弱或没有保留的物质在HILIC柱上提供合适的保留,如图2所示: Figure 2: Chromatograms comparing the retention of allantoin on Atlantis HILIC Silica and Atlantis dC18 columns. (a) Column: 50 mm×4.6 mm, 3-μm dp Atlantis dC18; mobile phase: 10 mM ammonium formate, pH 3; Shows no retention (k =0) of allantoin. (b) Column: 50 mm×4.6 mm, 3-μm dp Atlantis HILIC Silica; mobile phase: 95:5 (v/v) acetonitrile–water containing 10 mM ammonium formate, pH 3; Shows retention (k =1) of allantoin. 另外,HILIC柱上的洗脱顺序与RPLC柱上的正好相反,极性较小的物质先出峰,极性较大的物质后出峰。如图3所示:

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美国药典色谱柱型号对照 下面是USP规定的编号所对应的色谱柱类型。 L1:十八烷基键合多孔硅胶或无机氧化物微粒固定相,简称ODS柱 L2:30~50mm表面多孔薄壳型键合十八烷基固定相,简称C18柱 L3:多孔硅胶微粒,即一般的硅胶柱 L4:30~50mm表面多孔薄壳型硅胶柱 L5:30~50mm表面多孔薄壳型氧化铝柱 L6:30~50mm实心微球表面包覆磺化碳氟聚合物,强阳离子交换柱 L7:全多孔硅胶微粒键合C8官能团固定相,简称C8柱 L8:全多孔硅胶微粒键合非交联NH2固定相,简称NH2柱 L9:强酸性阳离子交换基团键合全多孔不规则形硅胶固定相,即SCX柱 L10:多孔硅胶微球键合氰基固定相(CN),简称CN柱 L11:键合苯基多孔硅胶微球固定相,简称苯基柱 L12:无孔微球键合季胺功能团的强阴离子交换柱 L13:三乙基硅烷化学键合全多孔硅胶微球固定相(C1),简称C1柱 L14:10mm硅胶化学键合强碱性季铵盐阴离子交换固定相,简称SAX柱 L15:已基硅烷化学键合全多孔硅胶微球固定相,简称C6柱 L16:二甲基硅烷化学键合全多孔硅胶微粒固定相C2柱 L17:氢型磺化交联苯乙烯-二乙烯基苯共聚物,强阳离子交换柱 L18:3~10mm全多孔硅胶化学键合胺基(NH2)和氰基(CN)柱 L19:钙型磺化交联苯乙烯-二乙烯基苯共聚物,强阳离子交换柱 L20:二羟基丙烷基化学键合多孔硅胶微球固定相(Diol),简称二醇基柱 L21:刚性苯乙烯-二乙烯基苯共聚物微球填料柱 L22:带有磺酸基团的多孔苯乙烯阳离子交换柱 L23:带有季胺基团的聚甲基丙烯酸甲酯或聚丙烯酸酯多孔离子交换柱 L24:表面含有大量羟基的半刚性聚乙烯醇亲水凝胶柱 L25:聚甲基丙烯酸酯树脂交联羟基醚(表面含有残余羧基功能团)树脂。能分离分子量100~5000MW 范围的水溶性中性、阳离子型及阴离子型聚合物(用聚氧乙烯测定)的固定相 L26:丁基硅烷化学键合全多孔硅胶微球固定相,即C4柱 L27:30~50mm的全多孔硅胶微粒 L28:多功能载体,100?的高纯硅胶加以氨基键合以及C8反相键合的官能团 L29:氧化铝,反相键合,含碳量低,氧化铝基聚丁二稀小球,5mm,孔径80? L30:全多孔硅胶键合乙基硅烷固定相 L31:季胺基改性孔径2000?的交联苯乙烯和二乙烯基苯(55%)强阴离子交换树脂 L32: L-脯氨酸铜配合物共价键合于不规则形硅胶微粒的配位体的交换手性色谱填料L33:能够分离分子量4000~40000MW范围蛋白质分子的球形硅胶固定相, pH稳定性好L34:铅型磺化交联苯乙烯-二乙烯基苯共聚物强阳离子交换树脂,9mm球形 L35:锆稳定的硅胶微球键合二醇基亲水分子单层固定相,孔径150? L36:5mm胺丙基硅胶键合L-苯基氨基乙酸-3,5二硝基苯甲酰 L37:适合分离分子量2000~40000MW的聚甲基丙烯酸酯凝胶 L38:水溶性甲基丙烯酸酯基质SEC色谱柱 L39:亲水全多孔聚羟基甲基丙烯酸酯色谱柱

色谱柱使用操作规程

【分享】色谱柱使用操作规程-sop 1.目的: 建立色谱柱使用操作规程. 2.范围:适用于仪器分析(HPLC、GC)前对检测条件适用性的确认和HPLC分析结束后对的色谱柱的清洗。 3.责任:QC检验员对本标准实施负责. 4.内容: 4.1. 系统适用性试验的定义:按SOP项下要求对仪器进行适用性试验,即用规定的对照品对仪器进行试验和调整,应达到规定的要求;或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。 4.1.1.色谱柱的理论板数(n): n=5.54(tR/Wh/2)2 TR—保留时间,min; Wh/2—半峰宽高度。 4.1.2.分离度: tR2—为相邻两峰中后一峰的保留时间; tR1—为相邻两峰中前一峰的保留时间; W2及W1—为此相邻两峰的峰宽。 4.1.3.重复性:取各品种项下的对照溶液,连续进样5次,除另有规定外,其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%。4.1.4.拖尾因子: W0.05h--为0.05峰高处的峰宽; d1—为峰极大至峰前沿之间的距离; 除另有规定外,T应在0.95—1.05之间。 4.2步骤: 4.2.1.按具体分析方法操作,用流动相走基线约40分钟(正常流速),待基线平稳。 4.1. 5.基线平稳后,按要求进系统适用性溶液或对照溶液分析,记录色谱图,进行评估,符合要求后,待测样品。 4.1.6.进样品溶液,记录结果。 4.1.7.测试完毕后,清洗约30min,一般流速为正常测样流速的1至1.5倍,冲洗约40min。 走空白,按1000积分无任何杂质显示。当所测样品杂质在30min 后出峰时,走空白时间约为60min。如果有杂质显示,继续清洗

色谱柱使用维护保养操作规程

目的:建立色谱柱使用维护保养操作规程,规范色谱柱的使用、维护行为。 范围:适用于色谱柱的使用、维护和保养。 依据: 责任:药分部 内容: 1.操作规程 一般要求是一根柱子用于同一个系列的产品,稳定性试验用专用柱。 1.1.新色谱柱在使用之前,首先应查看说明书,检查柱子的pH值范围是否与待验产品的要求相一致,确认柱子和仪器的接头以及管路是否相匹配,并注意柱子上标示的流向箭头,一切确认无误后,编上编号,在《色谱柱启用、报废台帐》上登记开始使用时间、生产厂家、型号规格等。 1.2.使用时,应按各色谱柱的要求进行色谱柱的维护保养,并在色谱柱使用登记表中登记使用日期、所测产品的名称及批次、使用前后维护保养的具体内容; 1.3使用后,及时填写《色谱柱使用台帐》。 2.维护规程 2.1.液相色谱柱的维护 2.1.1. 色谱柱使用时,确认柱子的编号、型号规格与待验产品的要求相一致,流动相的pH值应与柱子说明书上规定的pH值相适应,然后旋开两端的封头,接到高效液相色谱仪上,使色谱柱的箭头指向与流动相流向一致。 2.1.2.流动相应经过0.45um滤膜过滤并脱气后使用,柱压不要超过300bar(3000psig),最高操作温度不得超过60℃。 2.1. 3.流动相如果是非盐类的,用流动相冲洗约30min,按《高效液相色谱仪操作规程》进行操作,然后进行样品的检验。如果是盐类的,用有机相:水=10:90的溶液冲洗约10min,再换上相对应的流动相,按《高效液相色谱仪操作规程》进行操作,然后进行样品的检验。 2.1.4.检验完毕,如流动相中含有盐类物质,应先用有机相:水=10:90的溶液以1ml/min的流速冲洗约40min,然后用HPLC级的乙腈或甲醇以1ml/min的流速冲洗约30min,关闭液相色谱仪,取下色谱柱,在柱两端旋上封头,以防止柱内的有机溶剂流失而使柱内填料发干变松,柱效下降。不用的色谱柱放入液相色谱分析室的专用贮存柜中。 2.1.5.拿用时要轻拿轻放,避免剧烈震动。 2.1.6.不允许反向连接和冲洗柱子。 2.1.7.柱子的再生:每使用二十次,就按以下程序进行再生一次,以延长柱子的使用寿命。冲洗程序:按柱子上所示箭头方向,依次用高纯水-甲醇-氯仿-甲醇以1ml/min的流速分别冲洗约

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