ELISA法检测梅毒抗体假阳性原因分析及其对策
3种梅毒检测方法的比较与分析
3种梅毒检测方法的比较与分析 目的比较分析三种梅毒检测方法，提高梅毒临床诊断符合率。方法收集2012年10月～2013年10月门诊及住院患者共8178例，经梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）筛选出200例血清标本分别用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）法进行检测，以TPPA检测结果作为确诊。结果以TPPA为标准可得出TP-ELISA的敏感性较高；而TRUST 的敏感性较低，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论2种方法的特异性均较高，无明显差异（P>0.05）。TP-ELISA适合大规模筛查和临床的诊断，TRUST敏感性较低，不适合于大批量筛查，为提高梅毒的检出率和准确性，建议用TPPA复检和确诊，3种检测方法结合应用能更有效提高梅毒临床诊断符合率。 Abstract：Objective To compare three methods for detection of syphilis，improve the clinical diagnosis of syphilis.Methods A total of 8178 cases of syphilis including outpatients and inpatients were collected from 2012 October to 2013 October，among which 200 serum samples selected by TP-ELISA were detected by TPPA and TRUST methods，the TPPA results as confirmation. Results Can be obtained with the standard of TPPA that the sensitivity of TP-ELISA was higher and TRUST was lower，the difference was statistically significant （P＜0.05）. Conclusion Specificity of the two methods was high，no significant difference （P>0.05）. TP-ELISA method is suitable for large-scale clinical screening and diagnosis，the TRUST method is not suitable for mass screening because of the lower sensitivity，in order to improve the detection rate and accuracy of syphilis，we advice examing and confirming by TPPA. Three kinds of detection methods combined application can more effectively improve the rates of clinical diagnosis. Key words：Syphilis；Enzyme-linked immunosorbent assay；Treponema pallidum gelatin particle agglutination test for syphilis；Methylaminered unheated serum test 梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的具有高度传染性和致病性疾病。目前，临床实验室主要采用血清学试验检测梅毒抗体。我们对常用的梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） 3 种方法进行比较，为提高梅毒检测及诊断的准确率提供参考。 1资料与方法 1.1一般资料收集2012年10月～2013年10月门诊及住院患者共8178例。 1.2方法①试剂：TP-ELISA试剂为北京万泰生物药业有限公司产品，TPPA 试剂为日本富士瑞必欧株式会社产品，TRUST试剂为上海荣盛生物有限公司产品。②方法：所有血清标本经TP-ELISA筛查后，选取200例标本（阴性和阳性血清标本各100例），分别用TPPA和TRUST检测，TPPA作为确诊试验。实验
梅毒实验室测试题
梅毒实验室测试题 一、单选题 1、梅毒螺旋体镜检可采用的染色方法： A 革兰染色 B 美兰染色 C 镀银染色 D 伊红染色 2、非梅毒螺旋体抗体检测可采用的方法： A TPPA B ELISA C RPR D FTA-ABS 3、TPPA只能检测到： A IgA B IgG C IgG+IgM+IgA等混合抗体 D IgM 4、梅毒螺旋体镜检一般不采用下列标本： A 皮肤溃疡组织液 B 羊水 C 血液 D 脑脊液 5、RPR检测不能采用下列标本：
A 血清 B 血浆 C 全血 D 脑脊液 6、ELISA检测不能采用下列标本： A 血清 B 血浆 C 全血 D 脑脊液 7、梅毒螺旋体病原学检测方法不包括： A 暗视野显微镜检查 B 镀银染色 C 培养基培养 D 核酸检测 8、RPR/TRUST检测用水平旋转仪的转速是： A （100±2）转/分B（100±10）转/分 C （120±2）转/分 D （120±10）转/分 9、RPR/TRUST检测用水平旋转仪的旋转直径是： A 25±2mm B 18±2mm C 20±2mm D 30±2mm 10、RPR/TRUST试验在水平旋转仪上旋转反应时间
A 5分钟 B 8分钟 C 10分钟 D 12分钟 11、TRUST试验时每个反应孔滴加的抗原量是： A 50μl B 30μl C 25μl D 17μl 12、前带现象主要出现在下列哪一种方法中： A ELISA B RPR C TPPA D FTA-ABS 13、RPR 试验时每个反应孔滴加的抗原量是： A 50μl B 30μl C 25μl D 17μl 14、下列哪项方法不是检测非梅毒螺旋体抗体： A RPR B ELISA C VDRL D TRUST 15、TPPA试验结果判读孔的血清稀释倍数是：
ELISA检测方法有哪些
ELISA检测方法有哪些？ 酶联免疫吸附测定（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）是研究蛋白抗体的重要方法。它是采用抗原与抗体的特异结合将被测物质与酶标抗体进行直接或间接结合，然后通过标记酶与底物产生颜色反应进行定性和定量分析。那么，它与其它检测方法的灵敏度及您了解吗？跟着小编往下看 ELISA通常分为四种类型：直接法、间接法、竞争法、夹心法等，直接上图： 直接法（Direct ELISA）仅需要抗原和酶标一抗，操作简便，可避免交叉反应，然而该方法要求酶标一抗有较高的特异性要求，同时也并非所有的一抗适合标记处理。直接法在实际运用中并不多见，它并不能对样本中抗体进行定量分析，因为样本中抗体是非酶标抗体，无法进行后续显色，但是该法经过改进就是竞争性ELISA方法，见后文。 间接法（Indirect ELISA）使用了二抗增加信号强度，也使抗体的选择多样化，然而间接法容易产生交叉反应。间接法只能用于测定抗体，主要用于疾病的诊断，其优点是只需要改变包被抗原，酶标抗体是通用的。 夹心法（Sandwich ELISA）分为双抗体夹心法和双抗原夹心法： 双抗体夹心法中抗原被两个抗体——捕捉抗体和检测抗体，结合于不同位点。捕捉抗体固定于载体上，检测抗体通过结合抗原进行显色分析。应用于双抗体夹心法检测的抗体需是单抗，而且对同一抗原结合位点不同，如此才能避免交叉反应或两种抗体竞争性结合同一位点。夹心法具有高灵敏度、高专一性的优势，但该法只适用于有多个结合位点的抗原检测，主要用于检测各种大分子抗原——例如在医学检测中测定HBsAg、HBeAg、AFP等。由于双抗体夹心法特异性高，在检测过程中有时会将样本和酶标抗体同时加入进行反应（一步法），此时如果样本中抗原含量过高会导致其与固相抗体和酶标抗体均有结合而不形成“夹心复合物”，
TPPA试剂检测TP抗体假阳性原因分析
TPPA试剂检测TP抗体假阳性原因分析 TPPA试剂是将梅毒螺旋体（Nichols株）的精制菌体裂解成分包被在人工载体明胶粒子上（致敏粒子），这种致敏粒子含有TP抗原的全片段成分，致敏粒子和样本中的TP抗体进行交联反应发生凝集，产生粒子凝集反应，由此可以检测出血清或血浆中的TP抗体。 在试剂使用过程中，有时由于个别样本中干扰因素和操作偶然因素的影响，可能会出现个别结果不太准确的情况，根据目前收集到的资料分析，产生有异议的结果一般原因如下： 一：试验操作产生的偶然误差 TPPA试剂操作相对简单，但个别情况下也可能产生偶然误差，导致异常结果，如U型板孔划花（重复使用的U型板在清洗时用硬质刷，导致内孔划痕较多，阴性样本的致敏粒子不能正常沉淀而看上去像凝集图像）、静置过程中意外震动（导致沉淀粒子散开）等。 二：其他可能导致异常结果的干扰因素 因为样本个体之间的差异，部分患有其他疾病的患者可能会产生与致敏粒子包被的抗原产生非特异性反应的因子，造成异常结果。根据文献中对于异常结果分析，可能会造成异常结果的疾病是：自身免疫性疾病（系统性红斑狼疮、盘状红斑狼疮、药物诱发的红斑狼疮类、风湿性关节炎、混合结缔组织病、自身免疫性溶血性贫血等）、肿瘤（淋巴肉瘤、脑膜瘤、结肠癌）、皮肤病（皮肤相关的螺旋体引起）、生殖器疱疹、麻风、热性病、
莱姆病、地方性密螺旋体病（雅司病、品他病）等。以及说明书中提及的服用了含有免疫球蛋白血液制品而呈阳性反应的患者。但以上情况中的人群也并不都出现异常结果，可能还和患者自身的个体差异有关。 除疾病外，在孕妇和老年人检测时，也有可能会产生较高概率的异常情况。老年人曾患的基础疾病可能使机体释放诱导产生抗类脂抗体和/或抗T.pallidum抗体（特异性抗体）的交叉抗原，或者个别老年患者体内可能有口腔螺旋体、皮肤相关螺旋体、肠道螺旋体等螺旋体共生，诱导产生抗属、群或特异抗原的交叉反抗体。孕妇在妊娠期间，机体会产生一些特殊物质，可能会导致TPPA检测异常结果（具体何种物质可能会产生影响上不明确）。 总之，TPPA检测结果可以作为样本中是否含有TP抗体的判断依据，但由于人体自身干扰物质影响和个别疾病患者产生的干扰物质影响，可能导致误差的因素较多，在TPPA检测阳性的情况下，还需要结合其他检测结果和临床症状来进行综合评价。 技术服务部
实验室常用梅毒检测方法的评价
?６２２? 河南职工医学院学报 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｆｏｒＳｔａｆｆａｎｄＷｏｒｋｅｒｓＶ０１．２０Ｎｏ．６Ｄｅｃ．２００８实验室常用梅毒检测方法的评价 孟德娣，房功思 （安徽医学高等专科学校医学技术系，安徽合肥２３０６０１） ［关键词］梅毒；ＲＰＲ；ＴＰＨＡ；ＴＲＵＳＴ；ＥＬＩＳＡ；订Ａ—ＡＢＳ；ＰＣＲ ［中图分类号］Ｒ３７７＋．１［文献标识码］Ａ［文章编号］１００８—９２７６（２００８）０６—０６２２－０３ 梅毒是一种经典的通过性和母婴传播的疾病，其传染性强，感染后可以引起全身各组织、器官的损害，危害较大。近年来，梅毒的发病率呈上升趋势。在梅毒诊断中，由于抗体效价或方法特异性等原因使诊断结果常出现偏差，因此，高效的梅毒实验室诊断已成为大势所趋，对控制梅毒蔓延意义重大。临床实验室合理、有效地选用检测方法，避免错诊、误诊、漏诊是非常必要的。 目前梅毒的检测多采用血清学试验，本文仅对我国实验室常用的梅毒螺旋体检测方法回顾、总结如下。 １快速血浆反应素试验（ＲＰＲ） 快速血浆反应素试验，是一种常用的梅毒血清学筛选试验，检查的是人体内的反应素。该试验原理是用未经处理的活性炭颗粒（直径３—５ａｍ）吸附ＶＤＲＬ抗原…（０．０３％心拟脂、０．２１％卵磷脂、０．９％胆固醇，用无水乙醇配制）。此颗粒如与待检血清中反应素结合，便形成黑色凝集块，可肉眼观察结果，也可将标本倍比稀释（１：２、１：４—１：３２）进行半定量试验，对疗效和判断是否再感染有一定价值。该试验操作简便、快速，可用肉眼判断结果，不需特殊器材，易于推广，可广泛应用于普查、筛选。但是反应素试验特异性不强。梅毒螺旋体破坏组织可使机体产生反应素，而其他破坏机体的过程也可产生反应素，所以患者ＲＰＲ试验阳性，不一定感染梅毒螺旋体。人体某些生理或病理状态，如怀孕、病毒性肝炎、上呼吸道感染、肺结核、肺炎、亚急性细菌性心内膜炎、类风湿性关节炎、ＳＬＥ（系统性红斑狼疮）、风湿性心脏病、干燥综合征、慢性肾炎和海洛因成瘾等，ＲＰＲ都可以呈假阳性；同时，由于梅毒感染者下疳出现最初几天内血清反应素抗体效价较低，ＲＰＲ试验可能呈阴性结果口】。因此，ＲＰＲ一般只作为初筛手段，不能单独据其结果诊断梅毒感染，而应对患者进行全面检查，密切随访，并采用其他试验进行确定。 ２甲苯胺红不加热试验（ＴＲＵＳＴ） ＴＲＵＳＴ试验同样是检测梅毒患者血清中存在着的反应素。ＴＲＵＳＴ试验采用ＶＤＲＬ抗原重悬于特制的甲苯胺红溶液中，当待测血清中存在反应素时，即与其发生凝集反应，出现肉眼可见的粉红色凝块。ＴＲＵＳＴ法成本低廉、快速、直观，作为梅毒的初筛试验，ＴＲＵＳＴ试验在一般的中小型及基层医院被广泛使用。但ＴＲＵＳＴ法为人工操作、判读，易受到室温及技术操作等因素影响，结果的判断方面主观性较强，易出现漏判和错判，同时存在与ＲＰＲ同样的特异性低、敏感度不高的缺点，尤其对早期和治疗期梅毒可呈阴性反应，且其结果不易保存、查阅，故只作为一项梅毒感染的筛选试验ｐ１。 ３梅毒螺旋体血凝试验（ＴＰＨＡ） ＴＰＨＡ试验是一种检测梅毒螺旋体特异性抗体的特异的、灵敏的被动血凝试验。试验血球为用梅毒螺旋体特异性抗原包被经过醛化和鞣化的鸡红细胞，对照血球为未用上述抗原包被的经过醛化和鞣化的鸡红细胞，如果是阳性标本，当和致敏的鸡红细胞混合后，抗体和抗原的结合会引起致敏血球的凝集，在血凝板底部形成凝集块，如为阴性标本，则血细胞在孔底形成致密的沉淀。ＴＰＨＡ检测目标物为梅毒特异性抗体，是目前公认的梅毒诊断试验，主要用于筛检阳性标本的确诊Ｈ１。但ＴＰＨＡ试剂价格较高，操作较繁琐费时，不利临床快速诊断，同时因该特异性抗体存在时间过长，患者即便经过正规抗梅毒治疗，仍可出现阳性结果，甚至可终生检出阳性．故该法对梅毒治疗效果无判定价值¨－。 收稿日期：２００８—０６—１０ 作者简介：孟德娣（１９７９一）．女，安徽省合肥市人．学士，助教．现从事临床检验技术教学和科研工作。万方数据
孕产妇检测梅毒假阳性的原因与处理分析
孕产妇检测梅毒假阳性的原因与处理分析 发表时间：2018-07-12T09:23:27.167Z 来源：《中国医学人文》(学术版)2018年2月第4期作者：罗文蓉 [导读] 探析孕产妇检测梅毒假阳性的原因与处理方法。方法：选取我院行梅毒检测的2584例孕产妇为对象进行研究 罗文蓉 四川省阿坝州茂县人民医院 623200 【摘要】目的：探析孕产妇检测梅毒假阳性的原因与处理方法。方法：选取我院行梅毒检测的2584例孕产妇为对象进行研究，回顾性分析其全部的临床资料，其均接受梅毒检测，总结分析梅毒假阳性的原因与处理方法。结果：经检测，2584份结果中初检阳性为93例。经确诊79例为梅毒患者，14例为假阳性反应，占比15.05%。其中联合恶性肿瘤导致的假阳性1例（1.07%）；妊娠导致的生理学假阳性12例（12.90%）；血清标本处理不当导致的假阳性1例（1.07%）。结论：孕产妇梅毒检测需结合患者临床反应与症状、病史、血清检测等综合判断其假阳性结果。 【关键词】孕产妇；梅毒；假阳性；原因；处理 Reasons and Treatment Analysis of Pregnancy Maternity Syphilis False Positive Abstract：Objective：To explore the causes and treatment of pregnant women with false positive syphilis.Methods：Among the 2584 cases，93 were initially positive and 14 were false positive in 79 cases of syphilis.The ratio was 15.05.One case of false positive caused by combined malignant tumor，12 cases of physiological false positive caused by pregnancy，and 1 case of false positive caused by improper handling of serum samples.Results：After testing，14 out of 2584 results were false positives，accounting for 15.05%.Among them，one case（1.07%）of false positives caused by malignant tumor；12 cases（12.90%）of physiological false positives caused by pregnancy；and one case（1.07%）of false positives caused by improper handling of serum samples.Conclusion：The detection of syphilis in pregnant women should be combined with the clinical response and symptoms，medical history，serum test to determine its false positive results. Keywords：Maternal；Syphilis；False positive；Causes；Treatment 梅毒是由梅毒螺旋体引起的慢性、系统性性传播疾病，临床上，梅毒比较常见。相关资料中提及，本病可通过多种途径进行传播，其中最常见的有：经血液途径感染传播；性接触传播；母婴垂直传播等【1】。当人体在感染梅毒之后，其机体中将会产生两种不同的抗体，其中一种为针对梅毒螺旋体的特异性抗体，而另一种则为针对类脂质的非特异性抗体【2】。后者由于不直接针对梅毒螺旋体，所以不具备特异性。当然，除了感染梅毒之外，人体在罹患其它一些疾病亦或者是生理状况有所改变之时，其体內也有可能会形成抗类脂质抗体（低滴度）。现阶段，临床上在对梅毒病患进行诊断之时，常常采取的是梅毒血清学检查法，针对梅毒螺旋体抗体以及针对类脂质抗体进行检测的方式，可取得比较准确的检测结果，但有报道称，此检查方式也存在一定的假阳性问题，也就是生物学假阳性，具体表现为：患者存在生理状况改变亦或者是罹患其它疾病时所致的梅毒血清学检测呈现出假阳性的结果【3】。对此，为能进一步降低患者梅毒血清学检测假阳性问题的发生几率，临床需要对假阳性问题形成的原因进行综合分析，并以此为依据提出相应的解决措施。如此，方可确保孕产妇梅毒检测结果的准确性和可靠性，从而有助于确保孕产妇及胎儿的身体健康。此研究，笔者选取我院行梅毒检测的2584例孕产妇（接诊于2016年1月-2017年12月）为对象进行研究，即对孕产妇检测梅毒假阳性的原因与处理方法进行了探讨和分析，现具体报道如下： 1一般资料与方法 1.1一般资料 选取我院2016年1月-2017年12月行梅毒检测的2584例孕产妇为对象进行研究，其年龄在19-45岁的范围之内，平均 （27.35±4.57）岁；妊娠时间在3-10个月的范围之内，平均（4.3±1.6）个月。所有孕产妇都知情同意此研究，依从性良好，病历资料完整，且符合伦理道德。 1.2标本采集与处理 标本均为早晨空腹血，选用红色头盖无添加剂真空采血管，抽血过程中保证抽血顺利，一针见血，以避免抽血不顺利造成溶血或压脉带使用过久组织液混入等因素影响检测结果。抽血完毕及时分离血清，并于当天及时进行检测。 1.3仪器与试剂 本次研究所用的仪器与试剂 仪器：深圳RT-3900洗板机；北京普朗DNM-9602G酶标仪 试剂：⑴.北京万泰生物药业有限公司生产的梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）；⑵.上海荣盛生物医药有限公司生产的梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） ⑶.北京万泰生物药业有限公司生产的梅毒螺旋体抗体诊断试剂卡（金标法） ⑷.厦门英科新创有限公司生产的梅毒螺旋体抗体诊断试剂卡（金标法） 1.4检测方法 所选择的2584例研究对象均为在我院进行产前检查或入院生产的孕产妇，并全部进行了梅毒检测。检测过程严格按照仪器操作规程以及试剂盒说明书进行检测，与此同时，还需要对所有被检者的基本信息进行准确的记录，主要包括妊娠期、年龄和诊断结果等。 如果出现阳性结果都要用另一种方法复查，如多种方法均为阳性或弱阳性或结果不一致则报告临床医生，然后外送做确证试验。 1.3 评价指标 综合分析2584例孕产妇梅毒检测的结果，统计假阳性反应发生者例数，并对其假阳性形成的原因进行分析讨论，然后再提出相应的解决措施。 2结果 检测结果表明，在2584份检测结果当中有93例初检为阳性。确诊79例为阳性，14例为假阳性反应，所占百分比为15.05%。此14例
梅毒的检测方法
梅毒是艾滋病出现以前最令人生畏的一种性传播疾病，梅毒是一种慢性传染病，梅毒初起时为全身感染，病程缓慢，在发展中向人体各器官组织入侵，梅毒也可潜伏多年甚至终身没有临床表现。梅毒从传染来源可分为后天梅毒（获得性）和先天梅毒。梅毒早期确诊很关键，下面我们介绍一下梅毒的检测方法： 梅毒的检测方法1、暗视野显微镜检 暗视野显微镜检查是一种检查梅毒螺旋体的方法。暗视野，顾名思义即是显微镜下没有明亮的光线，它便于检查苍白的螺旋体。这是一种病原体检查，对早期梅毒的诊断有十分重要的意义。 早期皮肤粘膜损害（一期、二期霉疮）可查到苍白螺旋体。一期梅毒苍白螺旋体多在硬下疳的硬结、溃疡的分泌物和渗出液中存在，肿大的淋巴结穿刺也可检出。二期梅毒苍白螺旋体可在全身血液和组织中检出，但以皮肤检出率最高。早期先天性梅毒，可以通过皮肤或粘膜损害处刮片发现梅毒苍白螺旋体。最近，通过羊膜穿刺术获得孕妇的羊水，以其作暗视野显微镜观察，对先天性梅毒有诊断价值。 梅毒的检测方法2、梅毒血清学检测 梅毒血清学检查对于诊断二期、三期梅毒，以及判定梅毒的发展和痊愈，判断药物的疗效都有十分重要的意义。梅毒血清学检查包括非梅毒螺旋体血清学试验和梅毒螺旋体血清学试验。前者常用于临床筛选及判定治疗的效果，抽血后1小时即可出结果，这样梅毒检测费用也低廉。后者主要是用于判定试验，但是它不能判定治疗效果，一旦患有梅毒，这一试验将终身阳性。 (1)非梅毒螺旋体血清试验：这类试验的抗原分为心磷脂、卵磷脂和胆固醇的混悬液，用来检测抗心磷脂抗体。由于这些试验具有相同的标准化抗原，所以敏感性相似。常用的有三种： ①性病研究实验室玻片试验（VDRL）； ②血清不加热的反应素玻片试验（USR）； ③快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）。 可用作临床筛选，并可作定量，用于疗效观察。 (2)梅毒螺旋体血清试验： ①荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）； ②梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）；
ELISA检测
ELISA检测 ----- 固相捕获法测IgM抗体 在病原体急性感染的诊断中，通常需检测IgM抗体，如急性甲型肝炎诊断的血清抗HAVIgM检测、急性乙型肝炎病毒感染的血清抗HBc lgM检测和TORCH项目的系列IgM检测等。IgM抗体也有使用间接法测定的，如目前在市场上可见到的有些TORCH系列的IgM检测试剂盒。在使用间接法测IgM抗体时，由于临床血清样本中含有高浓度的IgG抗体，其中部分特异IgG抗体将与IgM抗体竞争与固相抗原结合，从而干扰IgM抗体的检测。 因此，在使用间接法测定IgM抗体时，通常须将血清样本用抗人IgG抗体或SPA预处理，以去除IgG的干扰。这样不但测定较为繁琐，而且影响测定的特异性和灵敏度。目前，常用的IgM抗体检测方法为捕获法，即以抗人IgM抗体(抗人u链)作为固相抗体，当加入血清标本时，其中的IgM类抗体(特异的和非特异的)即可被固相抗体捕获，再加入特异抗原，其与固相上捕获的IgM抗体结合后，加入酶标抗特异抗原的抗体，最后加入底物显色。具体操作步骤如下： 1．首先将抗人IgMbt链抗体于碳酸盐缓冲液中40c下过夜包被聚苯乙烯等固相，形成固相抗体，洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭，洗涤去除未结合的部分及杂质。 2．加入含待测IgM抗体的临床样本如血清等，温育一定时间后洗板；此时，待测样本中的IgM抗体就会与固相上的抗P链抗体反应而吸附于固相上。 3．加入特异的抗原如HAV抗原、HBcAg等，温育一定时间后洗板；此时，特异抗原就会与固相上的特异IgM抗体发生反应。 4．加入酶标记的抗特异抗原的抗体，温育一定时间后洗板；此时，在固相上即形成相应的抗原抗体复合物。 5．加入酶底物，温育显色测定 本方法要着重注意的是RF(1gM类)及其他非特异IgM的干扰。RF(1gM类)由于其能与固相抗人u 链抗体结合，并可与随后加入的酶标抗体(动物IgG)反应，从而导致假阳性反应。而非特异IgM由于其
ELISA检测方法
ELISA（酶联免疫吸附测定，enzyme linked immunosorbent assay）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。 基本原理： ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 ③在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。 ④加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 双抗夹心法 夹心法常用于检测大分子抗原，一般的操作步骤为: ①将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体； ②加入待测检体，检体中若含有待测的抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结； ③洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一的一次抗体，与待测抗原进行键结； ④洗去多余未键结一次抗体，加入带有酶的二次抗体，与一次抗体键结； ⑤洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果。 间接法 间接法常用于检测抗体，一般的操作步骤为： ①将已知的抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余的抗原。
②加入待测检体，检体中若含有待测的一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。 ③洗去多余待测检体，加入带有酶的二次抗体，与待测的一次抗体键结。 ④洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酶呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。 竞争法 竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为： ①将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体； ②加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结； ③加入带有酶的抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。 ④洗去检体与带有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少，显色也就越浅。 注：当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。
早期梅毒实验室检查的现状
早期梅毒实验室检查的现状 （作者：_________ 单位：___________ 邮编：___________ ） 【关键词】早期梅毒实验室检查 梅毒是由梅毒螺旋体（苍白螺旋体）感染引起的一种慢性全身性传染性传播疾病，对健康的危害程度仅次于艾滋病，几乎可以引起全身所有组织器官的损害和病变，导致功能障碍。近年来，梅毒在我国的再次流行，发病率呈逐年上升的趋势。梅毒早期主要侵犯皮肤黏膜，晚期可累及心血管及中枢神经系统等重要器官 [1 ]，给身体造成严重的损害，既严重危害了社会健康，又影响了家庭的安定。因此，对梅毒进行早期诊断、早治疗，对控制其蔓延至关重要。敏感性、特异性高的梅毒检测方法对梅毒的诊断最有效。根据梅毒的生物学及免疫学特性，目前国内外所用的梅毒螺旋体的检测方法亦很多，现将主要的 检测方法作一综述。 非特异性梅毒血清学试验的阳性检出率 非特异性梅毒血清学检查方法有快速血浆反应素环状卡片实验（RPR）和甲苯胺红不加热血清反应素试验（TRUST两种。RPR是20 世纪80年代问世的非特异性梅毒血清学试验，也是目前国内各实验室广泛应用的主要筛查试验。RPR法检测血清中非特异性抗体，所用抗原为标
准的牛心肌脂抗原，主要用于早期梅毒的诊断，王剑等［2］报道RPF 用于早期梅毒检测阳性率为75%- 85%该方法有操作简便、迅速、结果容易判定、不需灭活、不需显微镜、抗原不需新鲜配制等优点,适用于大量标本检测，目前许多血站用此试验对献血者进行梅毒普查。但凡属于密螺旋体属的螺旋体均具有与梅毒螺旋体完全一样的类脂质抗原，其主要成份是心拟脂，可激发机体产生抗体，并与牛心磷脂发生反应，因此易出现生物学假阳性反应，且当抗体含量过高时易出现假阴性反应，即前带现象（prozonephenomnon）［3］。路麒等 :4］通过实验发现温度较低（低于9C）时，RPR勺假阴性率达10.1% 时会有漏检。而TRUST式验所用的抗原是从牛心提取的心磷脂和从鸡蛋黄提取的卵磷脂及胆固醇，与RPR方法比较,TRUST试验是在VDRC 试剂中加了甲苯胺红溶液，阳性呈红色有不同程度的凝块悬于液体中，在白色纸卡上结果清晰易读，简便快速,稳定性好,对非特异性反应素抗体导致的阳性标本，TRUST法的检出率和重复性都强于RPR 法,EbelA等［5］通过实验比较认为TRUST法比RPF效价测定高一个滴度，根据滴度的变化有助于判断梅毒的治疗效果、复发或再感染，这是其他方法不可替代的。缺点是许多因素影响结果，如高脂血症和抗心磷脂抗体阳性的血清均可干扰而出现假阳性结果［6］。黄波等［7］ 报道此法对早期梅毒检测出现较高的假阴性（10%。王治萍等］8］通过改进实验方法发现，应用全自动微孔板法改进TRUST实现机械 操作，减少了人为因素及标本差错，可使其敏感度和特异性提高3%
引起梅毒血清试验假阳性影响因素
引起梅毒血清试验假阳性影响因素 用TRUST及TPPA做梅毒血清学检测。结果 4913例TRUST试验，57例发生生物学假阳性反应，麻风发生率最高，占麻风病例的31.82%，依次为类风湿关节炎17.78%，系统性红斑狼疮（SLE）17.02%，变应性血管炎6.67%，乙型肝炎5.43%，硬皮病3.33%，皮肌炎3.13%，活动性肺结核1.82%，孕妇0.68%，正常人0.08%。结论所有生物学假阳性反应的TRUST定量试验，滴度均≤1:8，其中91.23% 的TRUST定量为1:2，而未经治疗的二期显发梅毒TRUST定量一般≥1:16。 4913例TRUST试验，发生57例生物学假阳性反应，麻风发生率最高，占麻风病例的31.82%，依次为类风湿关节炎17.78%，SLE 17.02%，变应性血管炎6.67%，乙型肝炎5.43%，硬皮病3.33%，皮肌炎3.13%，活动性肺结核1.82%，孕妇0.68%，正常人0.08%。所有生物学假阳性反应的TRUST定量试验均≤1:8，其中91.23%的TRUST定量为1:2。61例二期显发梅毒（未经治疗）患者的TRUST定量试验均≥1:16,其中67.2%的TRUST定量试验≥1:32。 目前国内最常用的梅毒血清学初筛试验是以心拟脂为抗原的非特异性梅毒血 清学试验，简称TRUST，中文名称为苯甲胺红不加热血清反应素试验。其所检测的抗体并非抗梅毒螺旋体抗体，而是梅毒螺旋体感染人体以后分解破坏人体组织，其分解产物释放到血液中，使人体产生抗体。分解释放的产物即是心拟脂，所产生的抗体即是反应素。据文献记载，除梅毒外尚有其他一些感染和免疫性疾病也可使人体组织受损释放心拟脂到血液中，使人体产生反应素，而使TRUST 出现生物学假阳性反应［1，2］。并将生物学假阳性反应分为急性和慢性两种。 急性生物学假阳性反应见于病毒性疾病，如风疹、麻疹、水痘、传染性单核细胞增多症、病毒性肝炎；其他如疟疾、活动性肺结核、丝虫病、鼠咬热、回归热、钩端螺旋体病等，多于6个月内消失。 慢性生物学假阳性反应常见于麻风、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、干燥综合征、桥本甲状腺炎、结节性多动脉炎、风湿性心脏病以及海洛因吸毒成瘾者等，反应持续时间可长达数年或终身［3，4］。 从我们的研究结果可以看出，4913例TRUST试验，发生57例生物学假阳性反应，麻风发生率最高，为31.82%，其后依次为类风湿关节炎17.78%，系统性红斑狼疮17.02%，变应性血管炎6.67%，乙型肝炎5.43%，硬皮病3.33%，皮肌炎3.13%，活动性肺结核1.82%。所有生物学假阳性反应的TRUST定量试验均 ≤1:8，其中91.23%的TRUST定量为1:2。61例二期显性梅毒（未经治疗）患者的TRUST定量试验均≥1:16,其中67.2%的TRUST定量试验≥1:32。均经过TPPA 证实试验确定。提示生物学假阳性反应的TRUST定量滴度一般≤1:8，而未经治疗的二期显发梅毒TRUST定量滴度一般≥1:16。两者有一个明显的定量滴度不同，非常有利于临床的鉴别诊断，为临床医师正确判断化验结果提供了有利的手段。对一些无条件做TPPA、FTA-ABS等梅毒证实试验的医院的医师在梅毒的诊断上无疑也是有很大帮助的。
RPR假阳性
梅毒血清学试验有两类，一类是非特异性试验，包括RPR、VDRL、USR和TRUST。由于其采用的是非密螺旋体抗原（即正常牛心脂质）测定患者血清中的反应素，反应素也可在某些非梅毒患者及正常人血清中出现，故可呈生物学假阳性。另一类是特异性试验，包括TP ELISA、TPHA、TPPA、FT ABS、金标免疫层析法及免疫印迹试验，其采用Nichols株螺旋体或纯化的、基因重组的梅毒螺旋体抗原测定血清中的特异性抗体。试验的特异性可达到99%左右，但不能绝对排除假阳性。目前国内最常用的梅毒血清学初筛试验是以心拟脂为抗原的非特异性梅毒血清学试验，目前主要有TRUST 和RPR，其所检测的抗体并非抗梅毒螺旋体抗体，而是梅毒螺旋体感染人体以后分解破坏人体组织，其分解产物释放到血液中，使人体产生抗体。分解释放的产物即是心拟脂，所产生的抗体即是反应素。据文献记载，除梅毒外尚有其他一些感染和免疫性疾病也可使人体组织受损释放心拟脂到血液中，使人体产生反应素，而使RPR或TRUST 出现生物学假阳性反应。并将生物学假阳性反应分为急性和慢性两种。急性生物学假阳性反应见于病毒性疾病，如风疹、麻疹、水痘、 丝虫病、鼠咬热、回归热、钩端螺旋体病等，多于6个月内消失。慢 干燥综合征、桥本甲状腺炎、结节性多动脉炎、风湿性心脏病以及海洛因吸毒成瘾者等，反应持续时间可长达数年或终身。生物学假阳性反应的RPR或TRUST定量滴度一般≤1:8，而未经治疗的二期显发
梅毒RPR或TRUST定量滴度一般≥1:16。TPHA等特异性梅毒血清试验假阳性的主要原因有自身免疫病、皮肤病、心血管病、麻风、热性病、老年人、莱姆病、地方性密螺旋体病等因素。为正确判断检测结果是否为假阳性反应，往往需要医生的综合判断分析，如详细询问患者有无不洁性生活史、性病史、流产史、抗梅治疗史；还要认真查体，注意患者是否有梅毒体征；是否为老年人。资料显示老年人梅毒血清学特异性试验假阳性率偏高。 梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种性病。感染梅毒后，人体内会产生两类抗体，一类是直接针对梅毒螺旋体的抗体，另一类则是针对类脂质的抗体。针对类脂质的抗体因不直接针对梅毒螺旋体，因此无特异性，除感染梅毒外，患另外一些疾病以及生理状况的改变，体内也可能产生低滴度的抗类脂质抗体。诊断梅毒时，所做的梅毒血清学检查即检测这两类抗体。RPR试验，即为检测类脂质抗体的实验；而TPHA则为直接检测梅毒螺旋体的实验。因RPR是检测类脂质抗体，而不是直接检测抗梅毒螺旋体抗体的实验，因而无特异性，凡能导致产生类脂质抗体的疾病，均能使RPR阳性。除梅毒外，患上呼吸道感染、肺炎、活动性肺结核、风湿性心脏病、亚急性细菌性心内膜炎、传染性肝炎、肝硬化、慢性肾炎、钩端螺旋体病、麻风、疟疾、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮及***成瘾等，都可导致RPR阳性。 梅毒以外其他原因造成的RPR阳性有一个特点，滴度一般较低，小于1：8。根据这一性质在未做确诊试验的实验室进行梅毒滴度的测定来间接对梅毒进行确诊。RPR实验容易出现假阳性，医生常同时做
梅毒几种检测方法的比较(一)
梅毒几种检测方法的比较(一) 【摘要】安全的血源，是输血安全的保证。大多数采供血机构采用的非特异性的甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)或快速血浆反应素试验(RPR)法，检测灵敏度低、特异性差，对输血安全影响很大。为选择合适的梅毒检测方法，本文探讨各种检测方法的原理及优劣，从而总结出适合用于献血者梅毒筛查的方法。 【关键词】梅毒;检测;血站筛查 非特异性的甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)或快速血浆反应素试验(RPR)法，是目前血站筛查梅毒的常用方法。传染期的梅毒献血者，试验结果可能为阴性，献血者献血后造成梅毒传播；检测易出现生物学假阳性，部分假阳性的献血者被淘汰。因此梅毒的检测方法对输血安全非常重要。梅毒螺旋体侵入机体可产生两种抗体：特异性抗体与非特异性抗体。目前用于梅毒检验的方法就是检测这两种抗体。 1梅毒螺旋体非特异性血清学试验 1.1快速血浆反应素试验(RPR):抗原以胆固醇晶粒为载体，包被上心磷脂和卵磷脂，构成VDRL 抗原颗粒。再把抗原颗粒结合到活性炭上，当抗原与血清中反应素以一定的比例相互作用时，出现凝集，凝集颗粒呈黑色。 1.2甲苯胺红不加热血清试验(TRUST):抗原以胆固醇晶粒为载体，包被上心磷脂和卵磷脂，构成VDRL抗原颗粒。再把抗原颗粒结合到甲基胺红上，当抗原与血清中反应素以一定的比例相互作用时，出现凝集，凝集颗粒呈红色。 2梅毒螺旋体特异性血清学试验 2.1荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS):首先将梅毒螺旋体Nichols株抗原直接涂在载玻片上，然后将密螺旋体无毒株Reiter株制成吸收剂加至待测血清标本中，吸收掉血清中的非特异性抗体。再将吸收后的血清加到玻片的抗原膜上，再加荧光素标记的抗人IgG，最后在荧光显微镜下观察结果。 2.2梅毒螺旋体血细胞凝集试验(TPHA):将梅毒螺旋体Nichols株经超声破碎后，得到可溶性抗原成分，致敏红细胞。用无毒株Reiter株制成吸收剂与血清反应，吸收掉血清中的非特异性抗体。特异性的抗体(血清通常用作1∶80以上稀释)就可使致敏的红细胞发生凝集作用。 2.3梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）:用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致敏的红细胞，明胶颗粒为洋红色，致敏颗粒与人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性。 2.4梅毒酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)：在体外表达得到了梅毒螺旋体的相应特异基因工程抗原，采用基因工程梅毒螺旋体抗原以双抗原夹心法检测梅毒抗体。 2.5梅毒胶体金层析法（TP-CG）：根据双抗原夹心免疫层析原理，在硝酸纤维素膜上包被TP 重组抗原，在玻璃纤维上吸附胶体金标记TP重组抗原，样品中的TP抗体首选与金标抗原结合形成复合物，顺膜渗透至包被反应区，与包被TP抗原结合，形成由胶体金抗原-TP抗体-抗原组成的紫红色反应带。 2.6梅毒蛋白印迹（TP-WB）首先将将梅毒螺旋体Nichols株菌体细胞用SDS破碎，再使用聚丙烯酰胺凝胶电泳将将梅毒螺旋体各种抗原成分分开形成不同区带，经电转印可将这些条带转移至硝酸纤维素膜上作为抗原，最后采用酶标技术检测病人血清中的相应特异抗体。
50例梅毒抗体假阳性产生的原因分析
50例梅毒抗体假阳性产生的原因分析 发表时间：2013-03-25T14:20:53.467Z 来源：《中外健康文摘》2013年第4期供稿作者：岳学书田国敏[导读] 梅毒是苍白螺旋体所引起的危害人类健康的一种性传播性疾病，可侵犯全身各器官，造成多器官病变，功能失常，组织破坏甚至死亡。 岳学书田国敏（冀中能源峰峰集团邯郸医院检验科河北邯郸056002） 【中图分类号】R759.1 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）04-0216-02 【关键词】酶联免疫吸附法梅毒血清诊断假阳性 梅毒是苍白螺旋体所引起的危害人类健康的一种性传播性疾病，可侵犯全身各器官，造成多器官病变，功能失常，组织破坏甚至死亡。梅毒血清学检测一直是梅毒实验诊断的主要方法，目前常用的酶联免疫吸附实验（ELISA）和梅毒螺旋体抗体明胶凝集实验（TPPA）具有高特异性和敏感性的特点，但也有假阳性的问题，本文旨在探讨引起梅毒特异性抗体检测的假阳性结果可能的原因。 1 对象与方法 1.1研究对象 50份本院住院患者输血前检查，经调查无梅毒临床症状，不洁性生活史和既往史，排除梅毒诊断，已确诊为原有疾病。 1.2试剂和仪器 梅毒螺旋体抗体酶联免疫法诊断试剂盒【双抗原夹心一步法,艾康生物技术（杭州）有限公司】；梅毒螺旋体抗体明胶凝集法诊断试剂（TPPA,日本富士生物株式会社生产）。梅标仪芬兰Multiskan MK3,洗板机芬兰Multiskan MK2。 1.3方法 所有实验均严格按试剂盒说明书操作和判断，试剂均在有效期内使用。记录病人的性别、年龄、诊断并进行统计分析。 2 结果 （1）两种检测方法的检验结果，50例标本采用ELISA和TPPA两种方法检测，ELISA法均为阳性，TPPA法40例为阳性（80%），10例阴性（20%） （2）各种疾病所占比例及ELISA法和TPPA法结果见表1。 表1 各疾病ELISA法与TPPA法检测结果 3 讨论 梅毒是由梅毒螺旋体所引起的一种古老的性传播疾病。酶联免疫吸附实验（ELISA）具有高敏感性、特异性、检测费用低等特点被广泛采用，而TPPA检测费用较高，常用于确诊使用。表1可看出，两种方法均存在假阳性。 3.1疾病因素：直肠癌、肺癌、胰腺癌、膀胱癌、腹腔内膜癌、子宫内膜癌、乳腺癌等疾病可使患者体内含有治疗性抗体、嗜异性抗体、自身抗体、类风湿因子、甲胎蛋白等这些特殊成分，在反应过程中有一定吸附作用，产生假阳性，其中各种癌症及肿瘤病人多数表现为高抗体滴度的特点（ＥLISA）法检测OD/CO均在6以上)，易引起误诊。而老年人炎症及其他情况多数表现为低滴度的特点。(ELISA法检测OD/CO值均在6以下 )，可通过TRUST检测滴度<1:8,来排除梅毒诊断。 综上所述梅毒血清学实验虽然对梅毒的诊断有很大价值，但也存在一定的假阳、假阴的情况，因此本文特别提出在梅毒特异性抗体检测中要警惕肿瘤引起的假阳性结果，因此梅毒的诊断中不能仅凭梅毒特异性抗体检测结果，还要结合病史、体检结果及其他检验结果等综合分析后做出诊断，才能避免造成误诊。 参考文献 [1]叶顺章，张木有主编.现代性传播疾病实验诊断技术[M].广州广东科技出版社，1999，4～13. [2]周萍.不同检测方法对梅毒检测结果比较[J].淮海医药2005.23.（1）:27. [3]龙振华.梅毒血清学与临床[J].中华内科杂志，1994,42（7），438-439. [4]周毅.老年梅毒螺旋体感染51例调查与分析[J].中国现代医药杂志，2004,6（5）:7.