怀化医专微生物学检验教案.

怀化医专《微生物学检验》教案编号：

第十七章球菌及检验

球菌（coccus）是细菌中的一大类，对人有致病性的球菌主要引起化脓性炎症,又称化脓性球菌。常见种类：

G+C：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌

G-C：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布兰汉菌

第一节葡萄球菌属（staphylococcus）

概述：（特点，分布）

多数为非致病菌，少数可导致疾病。葡萄球菌是最常见的化脓性球菌，是医院交叉感染的重要来源。

一、生物学特性

（一）形态与染色

G+，球形，无鞭毛、无芽孢，呈葡萄串状排列。衰老、死亡、被吞噬后变为G-（二）培养特性

条件：要求不高，多数菌株耐盐。

液体：均匀浑浊生长。

普通琼脂平板（色素）、血液琼脂平板（溶血情况）（菌落特点）高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌为淡橙黄色菌落；其他葡萄球菌为白色菌落。

（三）生化反应

活泼，分解多种糖类、蛋白质、氨基酸（如：葡萄糖，麦芽糖，蔗糖，甘露醇）。触酶（＋）（区别于链球菌属）

（四）抗原构造

１、蛋白抗原（ＳＰＡ）

特点：存在于细菌细胞壁上的蛋白质，具有种属特异性。SPA可与人类IgGFc 段发生非特异性结合，不影响Fab与抗原的结合。

意义：（1）降低抗体的调理作用，抗吞噬。

（2）协同凝集试验：辅助诊断疾病。

２、多糖抗原

位于细胞壁上，具有型特异性。

金黄色葡萄球菌：核糖醇磷壁酸（检测磷壁酸Ａｂ有助于金葡菌感染诊断）

凝固酶（－）葡萄球菌：甘油磷壁酸

（五）分类（３２个种及亚种）

１、按色素分类：金、白、柠

２、按凝固酶分类：凝固酶阴性葡萄球菌、凝固酶阳性葡萄球菌

３、按噬菌体分类：金葡菌分为5群26型

三种葡萄球菌的主要性状性状金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌

色素金黄色白色白色或柠檬色

血浆凝固酶+ －－

α溶血素+ －－

耐热核酸酶+ －－

SPA + －－

致病性强弱无

（六）抵抗力

无芽胞菌中最强，耐干燥（数月），耐热（80℃30min死亡），对石炭酸、升汞、龙胆紫敏感。

易产生耐药性变异，如：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）：

MRSA常呈多重耐药，对青霉素、氧氟沙星及红霉素的敏感率分别为1.3%、3%及14%。长期住院、反复使用各种广谱抗菌药物、烧伤或有伤口的病人、与MRSA定植或感染的病人接触都是造成院内MRSA流行的危险因素。MRSA定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源。

MRSA定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源。

二、致病性和免疫性

(一)致病物质

金葡菌产生多种侵袭性酶与外毒素。

1．血浆凝固酶（coagulase)：结合凝固酶、游离凝固酶。

鉴别金黄色葡萄球菌的重要指标。

2．葡萄球菌溶血素（staphylolysin）

致病性葡萄球菌，可损伤细胞膜，分为αβγδ四种，对人致病的主要是α溶血素。

3．杀白细胞素（leukocidin）

4．肠毒素（enterotoxin）：

（A、B、C1、C2、C3、D、E、G、H 9个血清型）引起食物中毒。

5．表皮剥脱毒素（exfoliative toxin）

6. 毒性休克综合征毒素1（toxic shock syndrome toxin 1, TSST1）

（二）所致疾病

1．侵袭性疾病：

（1）皮肤软组织感染主要有疖、痈、毛囊炎、麦粒肿、蜂窝组织炎、伤口化脓等。病灶局限且脓汁粘稠

（2）内脏器官感染如肺炎、脓胸、中耳炎、脑膜炎、心包炎、心内膜炎等，主要由金葡菌引起。

（3）全身感染如败血症、脓毒血症等，多由金葡菌引起，新生儿或机体防御可能严重受损时表皮葡萄球菌也可引起严重败血症。

（4）尿路感染

2．毒素性疾病

（1）食物中毒进食含肠毒素食物后1～6小时即可出现症状，如恶心、呕吐、腹痛、腹泻，大多数病人于数小时至1日内恢复。

（2）烫伤样皮肤综合征

（3）毒性休克综合征

（4）假膜性肠炎3. 凝固酶阴性葡萄球菌的致病性

人类凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）感染中以表皮葡萄球菌的感染最为常见。

CNS主要引起以下几种感染：泌尿系感染，细菌性心内膜炎，败血症等，其中大多为医院内感染。此外，心脏起搏器安装、置换人工心脏瓣膜、长期腹膜透析、静脉滴注等亦可造成凝固酶阴性葡萄球菌的感染。

三、微生物学检验

（一）标本采集

根据病情采集标本

种类：脓液、伤口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。

注意：无菌操作，避免污染，迅速送检。

（二）检验程序

基本程序：标本采集、处理—涂片染色镜检—细菌分离培养—细菌鉴定药敏试验—结果报告

但不同标本其检验程序有些不同，如下：

脓液、咽拭、穿刺液、尿液、痰液血液粪便、呕吐物

分离培养（高盐甘露醇）

直接涂片染色

初报取可疑菌落（观察）

鉴定实验、药敏实验

涂片染色血浆凝固酶耐热核酸酶药敏实验其他鉴定实验

（三）检验方法

１、直接涂片

适于：(1)正常情况下无菌的标本（如脑脊液、尿液、穿刺液）

(2)伴有炎症细胞的其他体液标本（如痰液、脓汁）

初步报告：“查见革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌”

2、分离培养

（1）血液标本5ml→ 50ml葡萄糖肉汤（增菌）（培养7天，盲传）无菌生长

混浊

（2）脑脊液、脓液、穿刺液、咽拭、尿液血平板

（3）粪便、呕吐物→ 高盐甘露醇平板

3、鉴定试验

（1）血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌（+）

［原理］致病性葡萄球菌能产生２种血浆凝固酶：

一种为结合型凝固酶（凝聚因子）：细菌表面的纤维蛋白原受体与血浆中的纤维蛋白原结合，导致细菌凝集。

另一种为游离型凝固酶，可被人或兔血浆中的协同因子激活，成为凝血酶样物质，使纤维蛋白原变为纤维蛋白，从而使血浆凝固。

［检测方法］结合型凝固酶：玻片法

游离型凝固酶：试管法

（2）甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌（+）

（3）耐热核酸酶试验：金黄色葡萄球菌（+）

100℃水浴15min

液体培养物甲苯胺蓝核酸琼脂（加在孔内）孔周变为粉红色（４）肠毒素测定：金黄色葡萄球菌产生

病人呕吐物、粪便、剩余食物→高盐肉汤→分离培养48h→肉汤煮沸30min,3000rpm1h，

取上清液2ml→幼猫→4h观察症状

（5）SPA检测：金黄色葡萄球菌

SPA+兔抗SRBC抗体（IgGFc）+致敏SRBC→凝集

（6）凝固酶阳性和凝固酶阴性的葡萄球菌鉴定

表1 凝固酶阳性葡萄球菌的鉴别

结合型游离型耐热核酸VP 鸟氨酸脱

血浆凝固酶血浆凝固酶酶试验试验羧酶试验

金黄色葡萄球菌+ + + + —

中间型葡萄球菌—+ + ——

（罕见）

希氏葡萄球菌+ —+ + +

表2 凝固酶阴性葡萄球菌的鉴别（见书P167表17-1）

表3 几种常见葡萄球菌的鉴别

细菌菌落颜色菌体大小溶血触酶凝固酶甘露醇发酵新生霉素

金黄色淡黄至金黄小而匀β + + F S

葡萄球菌

表皮白色中大γ + ——S

葡萄球菌

溶血白色中大β + ——S/R 葡萄球菌

腐生柠檬黄色较大γ + ——R

葡萄球菌

与微球菌的鉴别：

微球菌也为触酶（+），氧化酶（+），G+C，但它为专性需氧菌，葡萄糖发酵（—），菌体大小不均，排列不规则，略大于葡萄球菌，常四联、多叠，有白色、黄色、粉红色菌落，有粘性不乳化，通常不致病，抵抗力低下时偶尔致病。

（7）API葡萄球菌鉴定试剂盒

（四）结果评价和报告

1、金黄色葡萄球菌：无论任何标本中分离到均应鉴定并报告临床。

2、表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌：从输液导管、人工植入组织中分离到，应视为致病菌。

3、尿培养计数：>103-104为阳性菌尿标准。

4、其他凝固酶阴性葡萄球菌：引起感染流行或治疗失败时，应鉴定到种。

5、金黄色葡萄球菌（MRSA）：头孢菌素类抗生素体外药敏试验为敏感时，不应报告，因体内试验已证实MRSA对该类抗生素耐药。