平板划线法操作要点
平板划线法操作步骤
1.操作前准备：将接种环2支，酒精灯2个，打火机2个，无菌平板两包，酒精棉球2瓶，镊子2个，洁净烧杯2个置于超净工作台，打开紫外灯，灭菌30分钟。取待纯化菌种2支放入超净工作台。操作者直立坐于操作台前，打开操作台玻璃，高度可供双手顺利出入即可。
2.擦拭：用镊子取酒精棉球擦拭双手，在超净工作台门口处，并将台面擦出与肩同宽的正方形区域，此区域即为操作区域。将用毕的棉球放入烧杯中。
3.物品摆放：将酒精灯放于擦拭区域的中心，将接种环放于酒精灯的右侧，将菌种放于酒精灯的左侧，将无菌平板的包装除去，包装置于操作区外，无菌平板置于酒精灯左侧。
4.点燃酒精灯：打开酒精灯盖，将盖扣于离开操作区的台面上，点燃酒精灯，酒精灯周围3-5cm 之内即为无菌区。
5.灼烧接种环：右手持接种环，将接种环的金属丝直立于酒精灯外焰处，灼烧至红透，然后略倾斜接种环，灼烧金属杆，注意灼烧时要将金属丝与金属杆的连接部分充分灼烧。
6.取菌种：左手持斜面的底部，将管口置于火焰的无菌区，右手小指打开试管塞，将接种环的接种丝放于外焰处再次灼烧至红透，然后将其深入试管内部，稍微凉一下，轻轻取一环，勿划破培养基，将接种环从试管中取出，注意取时勿碰触试管壁。将试管塞灼烧一圈，塞于试管上。因试管口一直在火焰的外焰处，故其温度较高，塞试管塞时注意勿烫手。
7.接种：左手取无菌平板一个，用拇指和食指控制皿盖，其余几指控制皿底，打开皿盖，使开口角小于30°，将接种环上的菌种按图示进行划线，一区法要求连续划线，且线的边缘应划至培养皿的内缘，线要紧密但不相连。三区或四区法要求每划完一区，都应灼烧接种环，后一区要求与前一区首尾相连，但不得与其他区域搭在一起。
8.培养：将接种完毕的平板放于28℃恒温培养箱中倒置培养72小时。
9.整理台面：操作完毕后，将实验所需的物品放回原处，并将实验所产生的垃圾清理干净，带出超净台，放于垃圾桶中。
10.结果观察：72小时后，观察平板，应无杂菌污染，若菌种不在划线的线上则为杂菌；线应为直的，且每一线都接近平板边缘，平行的线和线之间要紧密，但不能搭在一起；要有较多的单菌落，至少应有10个以上的单菌落方为合格。
平板划线法分离菌种
实验六平板划线法分离菌种 一、实验目的 1、了解平板划线法分离菌种的基本原理 2、练习平板划线法分离菌种的基本操作，掌握无菌操作技术 二、实验原理 平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。一般是将混杂在一起的不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面上作多次划线稀释，形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。通常认为这种单菌落就是某微生物的“纯种”。实际上同种微生物数个细胞在一起通过繁殖也可形成一个单菌落，故在科学研究中，特别是在菌种鉴定等工作中，必须对实验菌种的单菌落进行多次划线分离，才可获得可靠的纯种。 平板划线分离对细菌、酵母菌较为适宜，而霉菌和放线菌的分离多采用稀释分离法进行菌种的分离纯化。 具体的划线形式有多种，这里仅介绍一种经过长期实践并证明可获得良好实验效果的方法：将一个平板分成A、B、C、D4个面积不同的小区进行划线，A区面积最小，作为待分离菌的菌源区，B和C区为经初步划线稀释的过渡区，D区则是关键的单菌落收获区，它的面积最大，出现单菌落的概率也最高。由此可知，这4个区的面积安排应做到D>C>B>A。 鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助于快速鉴别某种微生物。这样的培养基称之为鉴别培养基。例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝培养基就是一种常用的鉴别性培养基。（参考GB4789.38-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数） 其配方中含有乳糖、伊红和美蓝，用以鉴别肠道病原菌及其他杂菌。伊红、美蓝作为指示剂，伊红系酸性染料，当大肠埃希氏菌或产气肠杆菌分解乳糖产酸时，由于细菌带正电荷，所以被伊红着色。在大肠埃希氏菌中因为伊红与美蓝结合，所以菌落不呈红色，而是蓝紫黑色，且具有绿色金属光泽；菌落呈棕色者为产气肠杆菌；不分解乳糖的肠道病原菌则不着色，有时因产生碱性物质较多，细菌带负电荷，被美蓝着色后，菌落并不呈蓝色，因美蓝与伊红结合，所以菌落为淡紫色。 三、材料和器皿 1、菌种：大肠埃希氏菌(Escherichia coli)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的混合培养斜面菌种。
微生物学实验报告
2012级制药专业 工业微生物学实验报告 姓名: 刘甜甜学号: 2012304090 班级: 制药12-2班指导老师：王健 日期：2014.6.11
一、实验目的 1、抑制或杀死微生物的一些物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的原理。 2、掌握物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的试验方法。 3、了解细菌的形态特征、染色特点。 4、了解细菌在普通培养基、选择培养基、血平板上的菌落特征。 5、掌握细菌分离划线培养的方法。 6、掌握细菌的初步生化反应。 7、掌握细菌密集划线法，掌握细菌K-B药敏纸片法。 二、实验内容 1 细菌Gram’s stain染色，镜检，观察记录细菌形态和特色特征 1.1 实验原理：染色原理：G+菌与Gˉ菌细胞壁不同，G+菌比Gˉ菌细胞内核糖核酸镁盐含量高，G+菌比Gˉ等电点低。 1.2 实验步骤： 1.2.1.制片：○1涂片：取半滴生理盐水置一洁净玻片上，以无菌操作技术自平板上去菌落少许，与生理盐水混匀，均匀涂布约1cm2大小，自然干燥； ②固定：取含菌膜的玻片与酒精灯火焰上来回三次，使菌膜牢固附于玻片表面； 1.2.2染色：①初染：取结晶紫一到两滴覆盖于菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,细流水冲洗，切勿直接冲洗涂片区域； ②媒染：取卢氏碘液1~2滴覆盖菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,用上法细流水冲洗； ③脱色：取95%酒精2~3滴于菌膜表面，轻微摇动，局部接近无色即可, 用上法细流水冲洗； ④复染：取1：10稀释石炭酸复红覆盖涂片区域，轻微摇动，用上法细流水冲洗； ⑤吸水纸初步吸干玻片水分，然后自然干燥； 1.2.3 镜检：于涂片区域加半滴香波油，油镜（100倍目镜）下。 图1：Gram’s stain（1000×）图2：染色试验 三、分离培养 1实验原理：四区划线法是把混杂着在一起的微生物或同一微生物群体的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养繁殖后生成个菌落。有时这些单菌落并非由单个细胞繁殖而来，故必须反复分离多次才能得到纯种。其原理是微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。
实验方案的格式
实验方案 一.【实验题目】： 土壤中细菌的分离纯化实验 二.【实验设计思想】： 细菌是具有很高实用价值的一类微生物, 世界各国对其研究与资源开发极为重视. 目前, 国内有关细菌的区系调查及资源开发虽然有一些报道, 但对不同作物根际细菌的研究很少. 甘肃天水麦积山海拔1742m , 属黄土高原潮湿区, 植物生长土壤区有机质含量丰富,本次实验将以该地区的落叶松、马尾松、白岩松、野豌豆等作物生长地区的土壤为材料, 分离鉴定其中的细菌, 探讨不同作物根际土壤中细菌分布数量及种类的差异, 并且分析每一种菌种在植物生长过程中所起的作用，最后以此为依据来推断麦积山大片地区内土壤中微生物的分布丰富情况和它们对植物生长作出的巨大贡献. 三.【实验目的】： 1.学会培养基最基本的制备方法。 2.学会最基本的微生物灭菌、接种等基本操作过程。 2.掌握最基本的分离、纯化微生物的一系列操作操作。 四.【试验方法】： 取天水麦积山不同植物根部的土壤作为土样，通过对其土壤中微生物的一系列培养、分离、筛选最终分离出细菌得菌株，并稀释平板菌落计数法进行数量测定四．实验原理: 1.菌种来源：由于各种细菌对营养物质需求不同，在不同地方采样对选取所要的细菌含量和其它杂菌含量的多少直接有关，所以选择微生物含量有可能丰富的土壤（天水麦积山植物根区）中采样。 2.培养基的选取：为了使所要的细菌能很好的生长，其它微生物生长受到一定的抑制，要用选择培养基。还要把细菌与其他微生物相区别，还要用鉴别培养基。为了达到既是选择培养基又是鉴别培养基，选取牛肉膏蛋白胨培养基。 3.培养及分离纯化：通过涂布培养法、平板划线法等方法达到分离纯化的目的。 4.保藏：通过分离纯化得到的菌种，接种与斜面培养基上，到一定时间后进行传代培养保藏，使其不死亡、减少突变所引起的生物学性状的改变。
大肠杆菌微生物培养实验报告及评价标准
实验1 微生物的分离、培养及计数 实验原理 纯化分离：人为提供适宜的菌落生长的条件（包括营养、温度、Ph等）。用平板划线法，通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞菌落。 筛选：转基因大肠杆菌有抗氨苄青霉素基因，所以在含有氨苄青霉素的LB培养基中可以正常繁殖长成菌落。而普通的大肠杆菌没有抗氨苄青霉素基因，咋含有氨苄青霉素的LB培养基中不能繁殖。由此可进行大肠杆菌的筛选。 梯度稀释并计数：通过浓度梯度稀释把液体培养基培养的大肠杆菌稀释到一定浓度，用稀释涂布平板法，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。由此可计数计算大肠杆菌的数量。 实验目的 1.通过制备LB固体培养基，对平板进行划线等，学会使用固体LB 平板。 2.通过用液体培养基，学会对微生物进行扩大培养。 3.通过稀释，学会用计数器对微生物进行计数。
实验材料和药品 待分离的大肠杆菌菌液、高压蒸汽灭菌锅、LB 固体培养基、LB 液体培养基、接种环、玻璃涂布器、培养皿、恒温培养箱、摇床、酒精灯、无菌水、移液枪、EP 管 实验步骤（用简单的流程图表示） 实验数据的记录与分析（如照片、表格等）
稀释倍数104105 大肠杆菌单个菌落个 837799111812数 平均数 浓度×107×107 实验结果与讨论 结果：稀释了105计算出来的结果约为×107ml/cm^3
平板划线法
平板划线法操作步骤 1.操作前准备： 将接种环2支，酒精灯2个，打火机2个，无菌平板两包，酒精棉球2瓶，镊子2个，洁净烧杯2个置于超净工作台，打开紫外灯，灭菌30分钟。取待纯化菌种2支放入超净工作台。操作者直立坐于操作台前，打开操作台玻璃，高度可供双手顺利出入即可。 2.擦拭： 用镊子取酒精棉球擦拭双手，在超净工作台门口处，并将台面擦出与肩同宽的正方形区域，此区域即为操作区域。将用毕的棉球放入烧杯中。 3.物品摆放： 将酒精灯放于擦拭区域的中心，将接种环放于酒精灯的右侧，将菌种放于酒精灯的左侧，将无菌平板的包装除去，包装置于操作区外，无菌平板置于酒精灯左侧。 4.点燃酒精灯： 打开酒精灯盖，将盖扣于离开操作区的台面上，点燃酒精灯，酒精灯周围3-5cm之内即为无菌区。 5.灼烧接种环： 右手持接种环，将接种环的金属丝直立于酒精灯外焰处，灼烧至红透，然后略倾斜接种环，灼烧金属杆，注意灼烧时要将金属丝与金属杆的连接部分充分灼烧。 6.取菌种： 左手持斜面的底部，将管口置于火焰的无菌区，右手小指打开试管塞，将接种环的接种丝放于外焰处再次灼烧至红透，然后将其深入试管内部，稍微凉一下，轻轻取一环，勿划破培养基，将接种环从试管中取出，注意取时勿碰触试管壁。将试管塞灼烧一圈，塞于试管上。因试管口一直在火焰的外焰处，故其温度较高，塞试管塞时注意勿烫手。 7.接种： 左手取无菌平板一个，用拇指和食指控制皿盖，其余几指控制皿底，打开皿盖，使开口角小于30°，将接种环上的菌种按图示进行划线，一区法要求连续划线，且线的边缘应划至培养皿的内缘，线要紧密但不相连。三区或四区法要求每划完一区，都应灼烧接种环，后一区要求与前一区首尾相连，但不得与其他区域搭在一起。 8.培养：
无菌技术、倒平板操作、平板划线操作、稀释操作、涂布平板操作
无菌技术、倒平板操作、平板划线操作、稀释操作、涂布 平板操作 无菌技术:主要包括1、对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒;2、将用于微生物培养的器皿、接种的用具和培养基等进行灭菌;3、为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行;4、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 倒平板操作: 1、将灭菌过的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。 2、右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰; 3、用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10,20ml)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，轻轻摇匀。 4、等待平板冷却凝固(大约需5,10min)后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。 平板划线操作: 1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红; 2、在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的棉塞; 3、将试管口通过火焰; 4、将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液; 5、将试管口通过火焰，并塞上棉塞; 6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。
7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三区域内划线。注意不要将最后一区域的划线与第一区相连。 8、将平板倒置，放入培养箱中培养。 稀释操作: 1、将分别盛有9ml水的6支试管灭菌，并按10?,10的6次方(打不出六次方来)的顺序编号。 2、用移液管吸取1ml培养的菌液，注入10?倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。 3、从10?倍稀释的试管中吸取1ml稀释液，注入10?倍稀释的试管中，重复第2步的混匀操作。依次类推，直达完成最后一支试管的稀释。注:移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰的1,2cm处。 涂布平板操作: 1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中; 2、取少量菌液(不超过0.1ml)，滴加到培养基表面; 3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8,10s; 4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 注意:1、将涂布器末端浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布 器在火焰上引燃。 2、操作中一定要注意防火～不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧 杯中，以免引燃其中的酒精。
实验具体方案的格式
一.【实验题目】： 土壤中细菌地分离纯化实验 二.【实验设计思想】： 细菌是具有很高实用价值地一类微生物, 世界各国对其研究与资源开发极为重视. 目前, 国内有关细菌地区系调查及资源开发虽然有一些报道, 但对不同作物根际细菌地研究很少. 甘肃天水麦积山海拔, 属黄土高原潮湿区, 植物生长土壤区有机质含量丰富,本次实验将以该地区地落叶松、马尾松、白岩松、野豌豆等作物生长地区地土壤为材料, 分离鉴定其中地细菌, 探讨不同作物根际土壤中细菌分布数量及种类地差异, 并且分析每一种菌种在植物生长过程中所起地作用，最后以此为依据来推断麦积山大片地区内土壤中微生物地分布丰富情况和它们对植物生长作出地巨大贡献.个人收集整理勿做商业用途 三.【实验目地】： .学会培养基最基本地制备方法. .学会最基本地微生物灭菌、接种等基本操作过程. .掌握最基本地分离、纯化微生物地一系列操作操作. 四.【试验方法】： 取天水麦积山不同植物根部地土壤作为土样，通过对其土壤中微生物地一系列培养、分离、筛选最终分离出细菌得菌株，并稀释平板菌落计数法进行数量测定个人收集整理勿做商业用途 四．实验原理: .菌种来源：由于各种细菌对营养物质需求不同，在不同地方采样对选取所要地细菌含量和其它杂菌含量地多少直接有关，所以选择微生物含量有可能丰富地土壤（天水麦积山植物根区）中采样.个人收集整理勿做商业用途 .培养基地选取：为了使所要地细菌能很好地生长，其它微生物生长受到一定地抑制，要用选择培养基.还要把细菌与其他微生物相区别，还要用鉴别培养基.为了达到既是选择培养基又是鉴别培养基，选取牛肉膏蛋白胨培养基.个人收集整理勿做商业用途 .培养及分离纯化：通过涂布培养法、平板划线法等方法达到分离纯化地目地. .保藏：通过分离纯化得到地菌种，接种与斜面培养基上，到一定时间后进行传代培养保藏，使其不死亡、减少突变所引起地生物学性状地改变.个人收集整理勿做商业用途 .通过形态与染色鉴定：由于各种微生物有其特定地菌落形态特征和单细胞形态特征，可通过这些形态进行鉴定.还由于细胞壁组成不同可进行鉴别染色法进行鉴定，也可用产生不产生芽孢进行芽孢染色.通过以上方法可对所分离纯化地菌种进行初步地鉴定.个人收集整理勿做商业用途 .通过生理生化反应进行鉴定：各种微生物在代谢类型上表现了很大地差异，如表现在对对大分子糖类和蛋白质地分解能力，以及分解代谢地最终产物地不同，反映出他们有不同地酶系.我们在实验室允许地条件下做了糖类发酵与氧化、是否能产生过氧化氢酶以及是否含有细胞色素氧化酶等生理生化试验，进行再次鉴定.个人收集整理勿做商业用途 五【.实验材料】： .器材：玻璃烧杯、天平、搪瓷烧杯、三角瓶、量筒、漏斗、试管、培养皿、吸管、培养基分装器、电炉、接种环、移液枪、试纸（—）、牛角匙、牛皮纸、棉花、纱绳、高压蒸汽灭菌锅等.个人收集整理勿做商业用途 .牛肉膏、蛋白胨、、、. 六．实验步骤： .配置牛肉膏蛋白胨培养基： ().配方及其配量：
无菌技术、倒平板操作、平板划线操作、稀释操作、涂布平板操作
无菌技术：主要包括1、对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；2、将用于微生物培养的器皿、接种的用具和培养基等进行灭菌；3、为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；4、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 倒平板操作： 1、将灭菌过的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。 2、右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰； 3、用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10～20ml）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，轻轻摇匀。 4、等待平板冷却凝固（大约需5～10min）后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。 平板划线操作： 1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红； 2、在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的棉塞； 3、将试管口通过火焰； 4、将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液； 5、将试管口通过火焰，并塞上棉塞； 6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。
7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三区域内划线。注意不要将最后一区域的划线与第一区相连。 8、将平板倒置，放入培养箱中培养。 稀释操作： 1、将分别盛有9ml水的6支试管灭菌，并按101～10的6次方（打不出六次方来）的顺序编号。 2、用移液管吸取1ml培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。 3、从101倍稀释的试管中吸取1ml稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复第2步的混匀操作。依次类推，直达完成最后一支试管的稀释。注：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰的1～2cm处。 涂布平板操作： 1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中； 2、取少量菌液（不超过0.1ml），滴加到培养基表面； 3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s； 4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 注意：1、将涂布器末端浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布
送检样品抑菌实验报告
检测报告 检测项目：抗生素抑菌实验送检日期：2012-09- 10 送检单位： 检验员：周俊
实验材料与方法 1．1 实验材料 指示菌、TSB肉汤、麦氏比浊管、LB平板培养基、MRS肉汤、L型波棒、牛津杯、灭菌陶瓷盖、灭菌试管、微量移液器、密封发酵管、磷酸缓冲液等。 2．1 实验方法 2.1.1 指示菌 使用大肠杆菌O157，O139，K88，K99型、金色葡萄球菌与沙门氏菌。 2.1.2 指示菌菌悬液的准备 （1）细菌复苏：菌种平板划线，36℃培养20h；挑取单菌落于TSB肉汤，置37℃振荡培养16h；接种TSB肉汤，置37℃振荡培养16h。 （2）采用直接菌落悬液法，将培养好的菌液调整到5个麦氏浓度(也就是细菌数为1×108 cfu/ml)。此时指示菌菌悬液制备完毕。（注：在调整过程中需使用PH 7.2的磷酸缓冲液进行菌液的麦氏浓度调整） 2.1.5 LB检测平板的制备的准备 将LB肉汤培养基加入琼脂后，溶解均匀，在高压灭菌釜中。121℃，高温灭菌20min。将已灭菌的琼脂培养基倒在玻璃培养皿内，每皿15ml（下层），待其凝固。再继续将灭好的LB琼脂培养基再次加固在已凝固的培养基上待凝固（上层）。使LB平板增厚。凝固后并使培养皿中水份干燥透，取100μl的指示菌菌悬液在平板上用L型波棒均匀涂布，涂布后以平板无可见水滴为准，此时的平板立刻进行抑菌试验。 2.1.6 样品原粉在培养基上的放置 精确秤取样品0.05克轻轻放入培养皿中，在水平放置的平皿中均匀地放置。2.1.7 样品抑菌扩散及指示菌的培养 将加入样品原粉的平皿放置37℃的恒温培养箱内，培养16h~24h后，进行拍照记录。 结果：
分子生物学大实验报告
分子生物学实验 ： 专业： 学号：
目录 实验一细菌培养 实验二质粒DNA提取 实验三琼脂糖凝胶电泳 实验四质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 实验五聚合酶链式反应（PCR）技术体外扩增DNA 实验六地高辛标记的Southern杂交
实验一细菌的培养 一、目的 学习细菌的培养方法及培养基的配置。 二、原理 在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。特别是常用的大肠杆菌。 大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。 培养基可以是固体的培养基，也可以是液体培养基。实验室中最常用的是LB培养基。 三、实验材料、试剂与主要仪器 （一）实验材料 大肠杆菌 （二）试剂 1. 胰蛋白胨 2. 酵母提取物 3. 氯化钠 4. 1mol/L NaOH 5. 琼脂粉 6. 抗生素（氨苄青霉素、卡那霉素等） （三）仪器 1. 培养皿 2. 带帽试管 3. 涂布器 4. 灭菌锅 5. 无菌操作台（含酒精灯、接种环、灭菌牙签等） 6. 恒温摇床 四、操作步骤 （一）LB培养基的配制 配制每升培养基，应在950m1去离子水中加入： 细菌培养用胰蛋白胨10g 细菌培养用酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质完全溶解，用1mol/L NaOH调节pH位至7.0。加入去离子水至总体积为lL，在15 lbf／in2 (1.034×105Pa)高压下蒸气灭菌20分钟。 这样得到是LB液体培养基。LB固体培养基是在其液体培养基的基础上另加琼脂粉15g/L。 （二）细菌的培养 （１）在液体培养基中培养
实验报告2
微生物实验个人报告 班级：09环工2班姓名：刘人豪学号：200930230215 组别：第五组 一．实验目的： 1.培养基的配制和灭菌 （1）熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作 （2）了解配制微生物培养基的基本原理，掌握配制、分装培养基的方法 （3）学会各类物品的包装、配制（稀释水等）和灭菌技术 2．细菌当然纯种分离、培养和接种技术 （1）从环境（土壤、水体、活性污泥、垃圾、堆肥等）中分离、培养细菌，掌握一些常用的分离和纯化微生物的方法 （2）掌握细菌纯种分离的方法（平板划线法、浇注平板法） （3）学会几种接种技术（斜面接种技术、穿刺接种、稀释平板涂布法等） 3.纯培养菌种的菌体、菌落形态的观察 （1）观察通过实验分离出来的几种细菌相应的菌落形态特征 二．实验仪器和材料： 1.培养基的配制和灭菌：高压蒸汽灭菌器、干燥箱、煤气灯、培养皿（10套）、试管（20 支）、移液枪和1mL枪头、锥形瓶（2个）、烧杯（一大一小）、量筒（200mL一个、10mL 一个）、药物天平、玻璃棒、玻璃珠（30个）、石棉网、药匙、铁架、表面皿、PH试纸和棉花等；牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH和琼脂等 2.上述实验所准备的无菌物品（包括各种玻璃器皿、培养基、稀释水等）；活性污泥、土 壤或湖水一瓶；接种环、酒精灯或煤气灯、恒温培养箱等 三．实验原理： 1. 培养基的配制原理：培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，由碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、钙、镁、铁及微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。调节合适的PH值，经 高温灭菌后以备培养微生物之用。本实验配制固体培养基 2. 灭菌的原理：灭菌是用物理、化学等因素杀死全部微生物的营养细胞和它们的芽孢（或孢子）的过程，灭菌法有干热灭菌、加压蒸汽灭菌、间歇灭菌、气体灭菌和过滤除菌等。本实验使用加热灭菌，高温杀死细菌 3. 细菌的纯种分离原理：细菌的纯种分离是从混杂的微生物群体中分散成能再培养基上 长成单个菌落的分离方法。有平板划线法、平板表面涂布法和浇注平板法等 4. 细菌培养的原理：根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜 的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他细菌生长的环境，从而淘 汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法、稀释混合平板法或平板划线分离法等分 离、纯化该微生物，直至得到纯菌株 5. 细菌接种的原理：接种就是将一定量的微生物在无菌操作条件下转移到另一无菌的并合 适该细菌生长繁殖所需要的培养基中的过程。接种技术有斜面接种技术、穿刺接种、稀释平 板涂布法等 6. 菌体、菌落形态的观察原理：由于微生物个体表面结构、分裂方式、运动能力、生理
微生物实验报告模板
微生物实验报告模板 淀粉与微生物篇一：实验十分离产淀粉酶的微生物 第十次实验分离产淀粉酶微生物 学院：生命科学学院 专业：生物科学类 年级：20XX级 姓名： 学号：1007040085 20XX年XX月XX日 实验十分离产淀粉酶的微生物 一、实验目的 1、熟悉常用微生物培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）的配制方法。 2、学习各种无菌操作技术，并用此技术进行为微生物稀释分离、划线分离接种。 3、用平板划线法和稀释涂布平板发分离微生物。 4、认识为微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。 5、掌握分离产淀粉酶微生物的试验方法和步骤，了解产淀粉酶的微生物种类及形态。 二、实验原理
土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。一般在较干燥，偏碱性、有机质丰富的土壤中放线苗数量较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在水果表皮、葡萄园、果园土中数量多些。本次实验从土壤中分离产淀粉酶的微生物，应该取那些富含产淀粉酶的微生物的土样。从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一类型微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的方法有 1、简单单细胞挑取法 2、平板分离法和稀释涂布平板法 此次实验采取的是平板分离法和稀释涂布平板法结合，该方法操作简单，普遍用于微生物的分离与纯化。其原理包括： 1)稀释后的细胞悬液图不在平板上可以分离得单个菌株 2)在适合于待分离微生物的生长条件（如营养、酸碱度、温度与氧等）下培养微生物，或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 3)微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等方法完成。 以淀粉作为惟一碳源的培养基培养未分离细菌，能产淀粉酶的细菌能生长，且菌落周围出现透明圈（淀粉不透明，被消化后
实验报告
综合设计实验 题目：微生物吸附底泥中重金属综合设计实验指导老师：包红旭 专业：环境工程07级 姓名：赵洋 学号：271307102
目录 一、实验目的 (2) 二、实验原理 (2) （一）微生物分离与纯化 (2) 1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备与灭菌 (2) 2、平板划线分离法 (2) （二）铅离子测定分析原理 (2) 三、实验仪器和试剂 (3) 四、实验步骤 (3) （一）分离纯化制备试验菌种的菌悬液 (3) （二）不同条件下，微生物对铅离子的吸附效率的测定 (6) 五、试验结果及分析 (8) 1、微生物吸附剂添加量对吸附效果的影响 (8) 2、微生物吸附剂在不同pH下的吸附效果对比 (9) 3、菌龄对吸附效果的影响 (10) 六、试验结论 (11) 七、讨论 (12)
微生物吸附底泥中重金属综合设计实验 一、实验目的： 1、学习并掌握培养基配制的原理，掌握配制牛肉膏蛋白胨培养基的方法和步骤。 2、学习并了解高压蒸汽灭菌的原理和操作技术。 3、掌握平板划线分离纯化微生物的原理以及操作方法。 4、了解生物吸附法处理重金属的机理机制。 5、掌握测定重金属含量的化学分析方法。 6、了解微生物对重金属吸附效率的影响因素。 二、实验原理： （一）微生物分离与纯化 1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备与灭菌 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。 2、平板划线分离法 平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。 （二）铅离子测定分析原理
平板划线法知识讲解
平板划线法
精品文档 实验三菌种的分离纯化技术——平板划线法 实验目的 了解平板划线分离纯种的原理，并熟练掌握该操作法。 实验内容 1．培养基平板的制备。 2．用平板划线分离法分离混菌。 实验原理 平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。 划线的形式有多种，可将一个平板分成四个不同面积的小区进行划线,第一区(A区)面积最小，作为待分离菌的菌源区，第二和第三区(B、C区)是逐级稀释的过渡区，第四区(D 区)，则是关键区，使该区出现大量的单菌落以供挑选纯种用。为了得到较多的典型单菌落,平板上四区面积的分配应是D＞C＞B＞A。 实验器材 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌混合菌悬液 牛肉膏蛋白胨培养基 无菌培养皿，水浴锅，接种环等。 实验步骤 1．融化培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水浴中加热至融化。 2．倒平板：待培养基冷却至50℃左右，按无菌操作法倒2只平板(每皿约15m1)，平置，待凝固。 倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰；然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管(瓶)塞(也可将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞则不必夹在手中)。左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速例入培养基约15m1，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。 3．作分区标记在皿底将整个平板划分成A、B、C、D四个面积不等的区域。各区之间的交角应为120℃左右（平板转动一定角度约60℃），以便充分利用整个平板的面积，而且采用这种分区法可使D区与A区划出的线条相平行，并可避免此两区线条相接触。 4．划线操作 收集于网络，如有侵权请联系管理员删除
微生物学实验指导(8个)
课程教学日历 课程名称：微生物学(实验部分) 授课学期：2010～2011学年度第一学期
实验一培养基的制备与灭菌 一、实验目的 1.学习和掌握培养基配制的一般方法与步骤 2.掌握高压蒸汽灭菌的原理及操作方法 3.学会制作棉塞 二、实验原理 1.培养基配制的一般原则 2.高压蒸汽灭菌原理强调温度而非压力 三、实验材料及用具 药品：牛肉膏，蛋白胨，琼脂，氯化钠，可溶性淀粉，葡萄糖，马铃薯，硝酸钾，磷酸氢二钾，硫酸镁，硫酸铁 用具：试管，三角瓶，铁架台，烧杯，量杯，玻璃棒，锅，天平，药匙，PH试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，纱布，线绳，高压灭菌锅 四、实验方法与步骤 称量→溶解→定容→调PH→分装→加塞→包扎→灭菌→摆斜面→无菌检查 注意强调1.琼脂等药品添加注意事项（牛肉膏，高氏一号，PDA） 2.分装时的注意事项并示范 3.灭菌加水→装料→加盖→排气→升压→保压→降压 →无菌检查 五、实验演示 1.培养基分装方法 2.棉塞的制作 3.试管斜面的搁置 六、作业与思考 实验报告 分组：牛肉膏蛋白胨培养基 1500ml 40斜面余三角瓶 高氏一号培养基 1500ml 30斜面余三角瓶 PDA培养基 2000ml 60斜面余三角瓶 淀粉水解培养基 1000ml 8斜面余三角瓶 同时灭无菌水待用“多多益善”
实验二油镜的使用及常见细菌形态观察 一、实验目的 1．掌握细菌基本形态和特殊结构的观察方法。 2．掌握光学显微镜油镜的使用和维护方法，了解荧光显微镜和暗视野显微镜的构造和使用方法。 二、实验原理 1．油镜的使用原理 图1-2 显微镜油镜的使用原理 油镜的放大倍数高而透镜很小，自标本片透过的光线，因玻片和空气的折光率不同（玻璃n=1.52，空气n=1.0），部分光线经载玻片进入空气后发生折射，不能进入接物镜，致使射入光线较少，物象不清晰。在油镜和载玻片之间滴加和玻璃折光率相近的香柏油（n=1.515），则使进入油镜的光线增多，视野光亮度增强，物象清晰（见图1-2）。 三、实验材料及用具 1．示教片：各种球菌、杆菌、弧菌、荚膜、鞭毛、芽胞的示教片。 2．器材及其他：光学显微镜、载玻片、擦镜纸、香柏油、脱油剂等。四、实验方法与步骤 （一）、细菌基本形态和特殊构造的观察 1．细菌的基本形态（各种球菌、杆菌、弧菌等） 观察要点：注意细菌的染色性、相对大小、形状及排列方式。 2．特殊结构的观察（荚膜、芽胞、鞭毛） 观察要点：注意这些特殊结构的大小、形状及其在菌体中的位置，均有助于细菌的鉴定。 （二）、光学显微镜油镜的使用
平板划线法
实验三菌种的分离纯化技术——平板划线法 实验目的 了解平板划线分离纯种的原理，并熟练掌握该操作法。 实验内容 1．培养基平板的制备。 2．用平板划线分离法分离混菌。 实验原理 平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。 划线的形式有多种，可将一个平板分成四个不同面积的小区进行划线,第一区(A区)面积最小，作为待分离菌的菌源区，第二和第三区(B、C区)是逐级稀释的过渡区，第四区(D 区)，则是关键区，使该区出现大量的单菌落以供挑选纯种用。为了得到较多的典型单菌落,平板上四区面积的分配应是D＞C＞B＞A。 实验器材 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌混合菌悬液 牛肉膏蛋白胨培养基 无菌培养皿，水浴锅，接种环等。 实验步骤 1．融化培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水浴中加热至融化。 2．倒平板：待培养基冷却至50℃左右，按无菌操作法倒2只平板(每皿约15m1)，平置，待凝固。 倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰；然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管(瓶)塞(也可将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞则不必夹在手中)。左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速例入培养基约15m1，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。 3．作分区标记在皿底将整个平板划分成A、B、C、D四个面积不等的区域。各区之间的交角应为120℃左右（平板转动一定角度约60℃），以便充分利用整个平板的面积，而且采用这种分区法可使D区与A区划出的线条相平行，并可避免此两区线条相接触。 4．划线操作
微生物实验报告细菌
微生物实验报告 题目脓汁和粪便标本中病原菌的检测年级专业2013级临床医学八年制 实验者 学号 小组 成员 指导老师 一、实验目的
1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的类型，学习并掌握培养基的原则与方法。 2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法。 3.了解并比较细菌在固体、半固体和液体培养基的生长特征。 4.学习并掌握空气及人体细菌检测学方法。 5.掌握细菌涂片标本的制备以及革兰染色法，熟悉不同类型细菌的基本形态。 6.掌握糖发酵实验、抗菌素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理与方法。 7.从脓汁和粪便标本中分离培养和检测出病原体。 二、实验器材 1.培养基的制备：干粉培养基、天平、蒸馏水、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网 2.空气与人体体表细菌学检查：琼脂培养基、酒精、碘酒 3.细菌的分离培养：脓汁标本、粪便标本、伊红美蓝平板、营养琼脂平板、接种环、酒精灯、打火机 4.细菌的纯培养：接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基 5.细菌的形态学检测：斜面培养物、营养肉汤、生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰染色试剂、液体培养基 6.细菌的生化试验：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、接种针、酒精灯、打火机、中性笔、菌液、营养琼脂平板、接种环、药物纸片（青霉素、庆大霉素、头孢曲松）、玻片、兔血浆、生理盐水 7.细菌的血清学试验：玻片、福氏志贺菌诊断血清、生理盐水、接种环、酒精灯 三、实验方法与步骤
1.培养基的制备 称量琼脂粉→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌 2.空气与人体体表细菌学检查 2.1空气的细菌学检查 每组1个营养琼脂平板，选择实验楼女厕所→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15分钟→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24小时→观察结果。2.2人体体表细菌学检查 甲丙常规洗手，乙丁标准洗手。甲和乙、丙和丁分别共用1个平板按下图在普通平板上接种手指上的细菌。第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。 3.细菌的分离培养 3.1 实验方法 平板划线法：借助于划线，将混杂的多种细菌，在平板表面分散成单个细菌，并固定在某一点上。培养以后细菌各自分裂繁殖，形成肉眼可见的细菌集团（单菌落）。 3.2实验步骤
平板划线法操作要点
平板划线法操作步骤 1.操作前准备：将接种环2支，酒精灯2个，打火机2个，无菌平板两包，酒精棉球2瓶，镊子2个，洁净烧杯2个置于超净工作台，打开紫外灯，灭菌30分钟。取待纯化菌种2支放入超净工作台。操作者直立坐于操作台前，打开操作台玻璃，高度可供双手顺利出入即可。 2.擦拭：用镊子取酒精棉球擦拭双手，在超净工作台门口处，并将台面擦出与肩同宽的正方形区域，此区域即为操作区域。将用毕的棉球放入烧杯中。 3.物品摆放：将酒精灯放于擦拭区域的中心，将接种环放于酒精灯的右侧，将菌种放于酒精灯的左侧，将无菌平板的包装除去，包装置于操作区外，无菌平板置于酒精灯左侧。 4.点燃酒精灯：打开酒精灯盖，将盖扣于离开操作区的台面上，点燃酒精灯，酒精灯周围3-5cm之内即为无菌区。 5.灼烧接种环：右手持接种环，将接种环的金属丝直立于酒精灯外焰处，灼烧至红透，然后略倾斜接种环，灼烧金属杆，注意灼烧时要将金属丝与金属杆的连接部分充分灼烧。 6.取菌种：左手持斜面的底部，将管口置于火焰的无菌区，右手小指打开试管塞，将接种环的接种丝放于外焰处再次灼烧至红透，然后将其深入试管内部，稍微凉一下，轻轻取一环，勿划破培养基，将接种环从试管中取出，注意取时勿碰触试管壁。将试管塞灼烧一圈，塞于试管上。因试管口一直在火焰的外焰处，故其温度较高，塞试管塞时注意勿烫手。
7.接种：左手取无菌平板一个，用拇指和食指控制皿盖，其余几指控制皿底，打开皿盖，使开口角小于30°，将接种环上的菌种按图示进行划线，一区法要求连续划线，且线的边缘应划至培养皿的内缘，线要紧密但不相连。三区或四区法要求每划完一区，都应灼烧接种环，后一区要求与前一区首尾相连，但不得与其他区域搭在一起。 8.培养：将接种完毕的平板放于28℃恒温培养箱中倒置培养72小时。 9.整理台面：操作完毕后，将实验所需的物品放回原处，并将实验所产生的垃圾清理干净，带出超净台，放于垃圾桶中。 10.结果观察：72小时后，观察平板，应无杂菌污染，若菌种不在划线的线上则为杂菌；线应为直的，且每一线都接近平板边缘，平行的线和线之间要紧密，但不能搭在一起；要有较多的单菌落，至少应有10个以上的单菌落方为合格。
微生物期末试验报告
微生物期末实验报告 题目：土壤微生物的分离与鉴定 姓名：余振洋学号：200900140156 系年级：09生科三班组别：周三4组同组者：张刚刚、岳永胜、俞华军、谢英健时间：2010年12月27日 一、【实验目的】 1、学习从土壤中分离、纯化微生物的原理与方法。 2、学习、掌握微生物的鉴定方法。 3、对提取的土样进行微生物的分离、纯化培养，并进行简单的形态鉴定。 4、对简单鉴定后的微生物进行生理生化鉴定并由鉴定结果查伯杰氏手册及霉菌图谱以确定分离出微生物的品种。 二、【实验原理】 1．微生物的分离与纯化 从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的方法有：1、简单单细胞挑取法2、平板分离法此次实验采取的是平板分离法，其原理包括两方面： 1、在适合于待分离微生物的生长条件（如营养、酸碱度、温度与氧等）下培养微生物，或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 2、微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等方法完成。 但是从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落的特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定。有的微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。 2．微生物的形态观察 每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和种类。 3．平板菌落计数法 平板分离法主要有平板划线分离法和稀释涂布平板法。后者除能有效分离纯化微生物外，还可以用于测定样品中活菌数量。
实验二 细菌培养与代谢产物检查
实验二细菌培养与代谢产物检查 【目的】 ①学习并初步掌握基础培养基制备方法。 ②了解细菌生长繁殖所需要营养以及常用培养基的种类和用途。 ③了解细菌所具有的不同生化反应及代谢产物，以利细菌的鉴定和鉴别。 ④规范地进行无菌操作。 一、基础培养基的制备 (一)培养基的制作程序 培养基制作的一般程序：准确称量培养基的各种成分→混合溶解→测定及矫正pH→分装、包装→灭菌→检定→保存备用。 (二)常用培养基的种类 按培养基的作用分为： ①基础培养基：含有细菌需要的最基本营养成分(蛋白胨1％，牛肉膏0.3％，氯化钠0.5％，用蒸馏水溶解)。按其性状不同可分为：(1)肉汤培养基。(2)普通琼脂培养基。分斜面和平板培养基，内含2～3％的琼脂，呈固体状。(3)半固体培养基，含0.2～0.5％的琼脂。 ②营养培养基：供营养要求较高的细菌用，如血琼脂培养基(在普通琼脂培养基中加入5％～10％的脱纤维动物血)。 ③选择培养基：如SS琼脂培养基，可选择性抑制非病原菌生长，有利于分离病原菌。 ④鉴别培养基：如含铁双糖培养基，用以鉴定细菌。 ⑤厌氧培养基：如庖肉培养基，用以培养厌氧菌。 (三)基础培养基的制备过程 1、肉汤(肉浸液)培养基 【材料】 牛肉、蛋白胨、氯化钠、水(蒸馏水或自来水)、NaOH溶液(1N和N／10)、0.02％酚红指示剂、吸管等。 【方法】 ①取新鲜瘦牛肉，除去脂肪及筋膜，切成小块后用绞肉机绞碎，每500g碎肉加水1000ml，混合置4℃冰箱过夜(使营养物质即溶解性蛋白质充分渗出)。 ②次日取出煮沸半小时左右，使肉渣蛋白质全部凝固；加热过程中不时地用玻璃棒搅拌，以免沉淀烧焦。也可不放置冰箱过夜，直接煮沸1小时。 ③用数层纱布过滤，弃去肉渣(肉渣中的液体应尽量挤净)，于滤液中加入1％蛋白胨及0.5％氯化钠，加热溶解，并补足失水至1000ml。 ④冷却到50℃在右，以N／10 NaOH调至pH值7.6～7.8。