DNA分子标记在真菌系统分类与鉴定中的应用

几种真菌的分离与鉴定教学文案

常见真菌的分离与鉴定病原真菌的一般特性真菌（Fungi）是微生物中的一个大类，是一群数目庞大的细胞生物，估计全世界已有记载的真菌有10万种以上。它们的子实体小者用显微镜才能见到，大者可达数十厘米，它们共同特征是具有真正的细胞核，产生孢子和不含叶绿素，以寄生或腐生等方式吸取养料，仅少数类群为单细胞，其他都有分支或不分支的丝状体，能进行有性或无性繁殖，具有纤维素（或其他葡聚糖）或几丁质的微纤维或两者兼有的细胞壁的有机体。对人类和动物致病的真菌大约100余种，属于病原真菌。一、基本性状（一）形态结构真菌分单细胞真菌与多细胞真菌两大类，前者属于酵母菌（yeast）一般呈球形或卵圆形，后者称为霉菌（mold）或丝状真菌，呈丝状分枝，菌丝交织象绒球状，另有一些真菌可因寄生环境及培养条件（养料、温度、氧气等）的不同可交替出现两种形态，即在室温中呈霉菌型，在37℃或体内呈单细胞的酵母型，这类真菌有双相性，所以称之为双态真菌或二相真菌。真菌的细胞结构与一般植物细胞相似，有定型的细胞核及完善的细胞器，但胞壁与细菌胞壁不同，不含粘肽而是由角质及葡聚糖组成，也含有脂多糖蛋白质，其中酵母菌及类酵母菌皆以出芽增殖，不生长真菌丝，革兰氏染色呈阳性，丝状真菌分菌丝及孢子两部分，形态多种多样，分述如下。 1．菌丝（Hypha）真菌在合适的环境中，由孢子生出嫩芽，称为芽管。芽管逐渐延长呈丝状，称菌丝。菌丝继续生长并生长分枝，增殖的菌丝交织组成菌丝体。其中一部分菌丝深入被寄生的物体或培养基中吸取养料，称为营养菌丝体。另一部分菌丝向空间生长，称为气生菌丝体。气生菌丝体能产生孢子者称为生殖菌丝体。菌丝中各个细胞间有明显分隔者，称为有隔菌丝。主要见于病原性真菌。很多非病原真菌的菌丝无明显分隔，称为无隔菌丝。有些菌丝可呈各种特殊形式，如球拍状、破梳状、螺旋状、结节状、关节状、鹿角状、假菌丝。 2．孢子生成孢子是真菌扩大繁殖的一种方式。真菌孢子的抵抗力、形态及作用等均与细菌芽胞不同，分为无性孢子及有性孢子两大类。不经过两性细胞的结合而形成的孢子叫无性孢子，这一繁殖过程称为无性繁殖。常见的无性孢子有5种：关节孢子、厚壁孢子、孢子囊孢子、芽孢和分生孢子。病原真菌属于不完全菌纲，很少产生有性孢子，大多数是无性孢子。（1）厚壁孢子：当真菌在不利环境中，由菌丝内胞浆缩浓和胞壁增厚而成，呈圆形。当环境好转时可生成芽管成长为菌丝。

真菌分类学

假丝酵母属分类研究进展郭成栓摘要：概述了假丝酵母属的建立和定义的演变以及分类进展，并介绍了在假丝酵母属分类中常用的一些方法。关键词：假丝酵母；分类酵母菌的分类发展非常迅速，从1952年的第一本酵母分类专著问世以来，到1984年又酵母分类专著第三版，酵母菌属的数量已由1952年的26属增加到56属，种的数量由160种增加到600种左右。1984年后属、种数量又有所增加。鉴定的常规方法与新技术也都有发展。假丝酵母属(Candida Berkhout)是酵母菌中最大的一个属，现包括200多种，约占目前已知酵母菌总种数的三分之一[1]。由于假丝酵母的经济重要性及其在整个酵母菌中占的比重，对该属的分类研究作为其他各方面研究的基础，一直是一个颇为活跃的领域。研究手段不断改进，分类系统不断更新。假丝酵母属的常规分类主要依赖于形态和生理特征。由于酵母菌主要以单细胞形式存在、可供考察的形态特征很有限，故其种级水平上的分类，主要以对糖类化合物的发酵和对碳、氮源化合物的同化能力。对外源维生素的依赖性和不同温度下的生长能力等生理学特性为依据。然而，这些特征所表现的均是表型性状，难以反映种间的亲缘关系。在常规分类所测试的30—40项生理生化性状中，许多种间往往只存在一两项区别。而研究表明，有些生理生化性状常常是由单个可变基因控制的，因而是不稳定的。所以在常规分类中对只有一两项生理生化性状差异的相似种做出精确鉴定往往是困难的。目前假丝酵母分类除了细胞形态和行为水平的研究外，也发展了细胞水平，蛋白质水平与基因组水平的研究。借助各种技术的适当运用，对假丝酵母的亲缘关系有了更深入的了解。近10多年来该属的定义已经过两次重大修订[2]。下面对该属的分类研究进展及分类方法作一介绍。 1假丝酵母属的建立及其定义的演变假丝酵母属是1923年建立的[3]，Yarrow和Meyer把球拟酵母属(Torulopsis Berlese)与假丝酵母属合二为一，把前者变为后者的异名，对假丝酵母属的定义作了较大的修订，使这样一个本来就不自然的类群更加异源化，在同一属内包括了子囊菌和担子菌两类酵母的无性型。因此随后就有人依靠下述分类技术的进步对假丝酵母属进行了清理工作。 1)用透射电镜对酵母菌细胞壁的超微结构进行观察的结果发现担子菌酵母的细胞壁为多层结构，而子囊菌酵母的细胞壁则为双层结构．担子菌酵母为全壁芽殖型，而子囊菌酵母则为内壁芽殖型。 2)在细胞壁水解产物单糖组成上。子囊菌酵母与担子菌酵母也有明显差异，子囊菌酵母以甘露糖占优势，不含鼠李糖，岩藻糖和木糖；担子菌酵母则可分为两类：一类含有木糖及少量的甘露糖，另一类含有岩藻糖和／或鼠李糖及相当数量的甘露糖。 3)子囊菌酵母与担子菌酵母在细胞壁超微结构及其水解物单糖组成上的差异，与DBB(Diazonium Blue B Salt)颜色反应和尿素酶试验具有很好的对应性，前者均为阴性而后者均为阳性。这样，子囊菌酵母与担子菌酵母就可以通过简单的颜色反应而区别开来。 Weijman等主要根据上述相关性特征对假丝酵母属进行了重新定义，把假丝

酵母的分子生物学鉴定

生物技术通报ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹＢＵＬＬＥＴＩＮ ?技术与方法? ２００８年第５期收稿日期：２００８－０３－１４基金项目：国家高技术研究发展计划（８６３）项目基金（２００３ＡＡ２１４０６１，２００６ＡＡ０２０２０３）作者简介：唐玲（１９８３－），女，硕士研究生，研究方向：分子生物学；Ｅ－ｍａｉｌ：ｔａｎｇｌｉｎｇ１０１４９９＠１６３．ｃｏｍ通讯作者：闫云君（１９６９－），男，教授，博士生导师；Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｎｙｕｎｊｕｎ＠ｔｏｍ．ｃｏｍ；Ｔｅｌ：（０２７）８７７９２２１４酵母种类繁多，不仅作为一种重要的工业微生物被广泛应用于各个领域，近年来，人们还利用酵母发酵来生产抗生素，维生素和酶等高附加值的产品，但酵母也会引发食物、制造物的腐坏变质，从而给人们带来巨大的经济损失，有的酵母还是人体和动物的致病菌（如，Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ）。近两个世纪以来，酵母菌分类主要依据形态学鉴定和生理生化特性。目前，已发展起来各种用于酵母快速检测的商业化的试剂盒，可实现部分酵母（多是针对导致疾病的部分致病酵母）的鉴定，但是该类试剂盒对酵母的检测不仅费时，而且鉴定结果准确性不高。由于受到环境因素的影响，某些酵母菌属、种在形态学及生理生化特性方面差异极不显著，在这样的背景下，以化学为基础的分类法建立起来，通过细胞壁的成份、生物合成以及同功酶电泳图谱分析来对酵母进行分类鉴定。现在，随着分子生物学的发展，ＤＮＡ－ＤＮＡ杂交，染色体组型分析（ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃｋａｒｙｏｔｙｐｉｎｇ），染色体ＤＮＡ的限制性片段长度的多态性分析（ＲｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎＦｒａｇｍｅｎｔＬｅｎｇｔｈＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍａｏｆｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌＤＮＡ），线粒体ＤＮＡ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＤＮＡ）及核糖体ＤＮＡ序列分析（ｒｉｂｏｓｏｍａｌＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ），实时ＰＣＲ（ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ），基因芯片（ｇｅｎｅｃｈｉｐｓ）等分子生物学的方法广泛地应用于酵母的鉴定中。分子生物学的方法不仅能够快速的将各种酵母鉴定到属或种，而且鉴定的结果精确度更高。随着数据库中分子信息量的增加，近年来应用分子生物学技术鉴定酵母菌种的研究越来越广泛。１核糖体ＤＮＡ鉴定法核糖体ＤＮＡ普遍存在于生物中，真核生物的核糖体ＲＮＡ中包括２６Ｓ、１８Ｓ、５．８Ｓ和５Ｓ４种不同酵母的分子生物学鉴定唐玲刘平黄瑛杨江科闫云君（华中科技大学生命科学与技术学院分子生物物理教育部重点实验室，武汉４３００７４）摘要：酵母种类繁多，与人类的关系极其密切，但目前由于研究方法的不同，对于酵母的分类还存在着不同的分类体系。而准确快速的对酵母进行鉴定，既可以有效防止食品腐化变质，又可以增加经济效益，同时也为酵母的分类鉴定奠定一定的理论基础。对常用的核糖体ＤＮＡ鉴定法、ＤＮＡ指纹图谱鉴定、脉冲场电泳鉴定、实时ＰＣＲ和基因芯片等分子生物学鉴定方法在酵母鉴定工作中的研究情况进行了比较。关键词：核糖体ＤＮＡＤＮＡ指纹图谱脉冲场凝胶电泳实时ＰＣＲ基因芯片ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｆｏｒＹｅａｓｔＴａｎｇＬｉｎｇＬｉｕＰｉｎｇＨｕａｎｇＹｉｎｇＹａｎｇＪｉａｎｇｋｅＹａｎＹｕｎｊｕｎ（ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，ＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００７４）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｙｅａｓｔｓｈａｖｅｗｉｄｅｒａｎｇｅａｎｄａｒｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｔｏｈｕｍａｎｂｅｉｎｇｓ．Ｔｈｅｒｅｅｘｉｓｔｓｏｍｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓｏｆｙｅａｓｔｓｂａｓｅｄｏｎｒｅｓｅａｒｃｈｍｅｔｈｏｄｓ．Ｉｔｉｓｎｅｃｅｓｓａｒｙｔｏｆｉｎｄａｎａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔｍｅｔｈｏｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｙｅａｓｔｓ，ｔｈｕｓｂｅｉｎｇａｂｌｅｔｏｐｒｅｖｅｎｔｆｏｏｄｃｏｒｒｕｐｔｉｏｎ，ａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｅｃｏｎｏｍｉｃｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ａｌｓｏ，ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｂｏｕｔｔｈｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｃｏｕｌｄｂｅｐｒｏｖｉｄｅｄ．Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｄｅｓｃｒｉｂｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｙｅａｓｔ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｒｉｂｏｓｏｍａｌＤＮＡ，ＤＮＡｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ，ｐｕｌｓｅｄｆｉｅｌｄｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲａｎｄｇｅｎｅｃｈｉｐｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＲｉｂｏｓｏｍａｌＤＮＡＤＮＡｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇＰｕｌｓｅｆｉｅｌｄｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲＧｅｎｅｃｈｉｐｓ

普通细菌培养鉴定操作规程

普通细菌培养鉴定操作规程 1 检验目的做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。 2 原理人体很多部位与外界相通，存在栖息菌群，但不致病，当菌群失调或分离到致病菌则具有临床意义；另外机体某些部位是无菌的，如检出细菌则视为致病菌。并排除采样及操作污染。 3 标本要求（1）标本类型：血液，骨髓，脑脊液，胸水，腹水，尿液，等体液；痰液，前列腺液，脓液，组织分泌物或穿刺液等。（2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。（4）标本拒收状态：非无菌方式采集的标本或未按要求部位采取的标本。 4 容器和添加剂类型均使用灭菌器皿盛放标本 5 试剂（1）试剂名称：革兰氏染液、氧化酶试剂、3%触酶、血平板、中国蓝平板、SS平板、柯玛嘉平板、相关生化试剂等。 6仪器设备：（1）接种针、接种环、酒精灯（2）梅里埃ATB药敏鉴定仪（3）显微镜、SPX-150B型生化培养箱、超净工作台、台式离心机、天平 7 校准程序 (送市计量质量检测研究所校准) 8操作步骤

（1）所有标本按照培养目的增菌培养12-18小时后盲目接种，血培养发现阳性立即进行接种。（2）接种：以上增菌标本及其他临床标本用接种环取标本接种环划线血平板及其他选择性培养基上,35℃培养过夜，观察结果。（3）涂片：肉眼见细菌生长，取生长物涂片做革兰氏染色；（4）纯培养：根据需要接种血平板、巧克力、中国蓝/柯玛嘉或厌氧平板过夜培养以获得纯培养。（5）鉴定：按照鉴定仪要求调配菌液浓度，细菌的鉴定见梅里埃ATB微生物鉴定系统 9质量控制：参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动 10 生物参考区间血液，尿液，脑脊液等无菌部位采取的标本未见细菌生长；其他标本如大便，痰液为正常菌群或未见致病菌。 11 患者检验结果的可报告区间细菌鉴定到种或属；菌群调查报告比例。 12 临床意义：为医生提供病原学诊断，并为进一步药敏实验提供依据。

真菌分类学讲义第一章菌物的基本概念

主讲教师：林英任博士教授林英任，1951年11月生，男，汉族，安徽金寨人，中共党员，博士。1974年毕业于安徽农学院林学系，并留校任教。1998年于东北林业大学研究生部毕业，获博士学位。历任安徽农学院助教、讲师、副教授。现任安徽农业大学教授，森林保护学、微生物学专业博士生导师。兼任中国菌物学会理事，《菌物研究》期刊编委，安徽省植物病理学会常务理事。获省首届青年科技奖，被遴选为省高校中青年学科带头人培养对象，省首批跨世纪学术和技术带头人，享受省政府特殊津贴。林英任教授主要从事林木病理学、菌物学的教学与科研工作。主讲“森林（经济林、园林植物）病理学”、“林病流行与治理”、“高级菌物学”、“拉丁文”等课程。指导硕士、博士研究生多名。先后主持“中国真菌志·斑痣盘菌目卷研编”、”斑痣盘菌科及相关类群分子系统学研究”等国家自然科学基金项目4项和“安徽盘菌资源及其经济重要性研究”等省级科研项目10余项。在国内外学术刊物上发表论文60余篇，主要有“中国斑痣盘菌目分类研究”、“盘菌纲一新属——新齿裂菌属”、“国内新见的木本药用植物病害”、“中华猕猴桃病害及其防治”等。合著《牯牛降科学考察集》、《果树常见病虫害防治》等。曾获国家农业科技推广奖、省自然科学二等奖、省科技进步三等奖（2项）、省高校科技进步一等奖和校“九五”科技先进个人一等奖。课程内容《高级菌物分类学》以Ainsworth et al.（1973）的分类体系为基本框架，同时参考Hawksworth et al.（1995）和Kirk et al.（2001）的有关分类主张，系统讲授鞭毛菌、接合菌、子囊菌、担子菌和半知菌亚门及其下属各分类阶元的分类地位和鉴别特征。此外对菌物的一般性状、植物病原菌的治理和病菌、害虫天敌及食药用菌的开发利用等情况作简要介绍。旨在学生为识别、发掘、利用和改造菌物打下良好基础。适用学科专业森林保护学、微生物学专业研究生。学分及学时 2.5学分，合50学时。教学环节理论讲授：30学时；

菌种鉴定

?（1）常规鉴定常规鉴定内容有形态特征和理化特性。形态特征包括显微形态和培养特征；理化特性包括营养类型、碳氮源利用能力、各种代谢反应、酶反应和血清学反应等。 ?（2）BIOLOG碳源自动分析鉴定 BIOLOG鉴定系统以微生物对不同碳源的利用情况为基础，检测微生物的特征指纹图谱，建立与微生物种类相对应的数据库。通过软件将待测微生物与数据库参比，得出鉴定结果。该系统已获美国FDA认可，已逐步应用于食品和饮品企业、环保、海洋生物/水产品、制药、农业微生物、生物治理、化妆品、临床等领域的微生物鉴定试验中。 CICC拥有国内最全的BIOLOG数据库，涉及革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、厌氧菌、酵母、丝状真菌在内近2000种微生物。 ?（3）分子生物学鉴定应用分子生物学方法从遗传进化角度阐明微生物种群之间的分类学关系，是目前微生物分类学研究普遍采用的鉴定方法。CICC拥有微生物菌种分类鉴定的分子生物学实验室，配有PCR仪、高速冷冻离心机、电泳仪、HPLC、凝胶成像系统、紫外控温分析系统等先进仪器设备，以及DNAMAN、 BIOEDIT、CLUSTALX、TREEVIEW等序列分析软件。目前CICC可采用核酸序列分析法分析细菌16S rDNA/16S-23S rDNA区间序列、酵母18S rDNA/26S rDNA（D1/D2）序列及丝状真菌的18S rDNA/ ITS1-5.8S-ITS2序列，提供科学的鉴定结果。 ?（4）API细菌数值鉴定系统 API鉴定系统涵盖15个鉴定系列，约有1000种生化反应，目前已可鉴定超过600种的细菌。鉴定过程中，可根据细菌所属类群选择适当的生理生化鉴定系列，通过软件将待测细菌与数据库参比，得出鉴定结果。 CICC目前可应用API 50CH系列、API 20 E系列、API Staph系列对乳酸杆菌（Lactobacillus sp.）和相关细菌、芽孢杆菌（Bacillus sp.）、葡萄球菌属（Staphylococcus sp.）、微球菌属（Micrococcus sp.）和库克菌属（Locuria sp.）进行鉴定。 ?（5）功能性分析及功能基因

临床标本细菌培养鉴定常见的15个疑问

问题1：如何正确应用药物敏感结果？正确运用药敏试验结果应考虑以下3个方面：首先要确定病原菌，如未找到真正的致病菌，药敏实验不但不能指导用药甚至可能误导临床；重视耐药监测，这是经验用药的一个重要的参考；考虑到药敏试验的局限性：体外报告敏感的药物体内治疗不一定有效，而体外报告耐药的药物体内治疗不一定无效。问题2：是否MIC越低的药物越好？不一定。因为不同药物对同种细菌，同一药物对不同细菌的折点均可不同，并且若细菌产生某些特殊耐药机制时，即使体外敏感也应报耐药，另外尚需考虑药动学和耐受性。因此，不能单纯比较MIC值而认为MIC越低的药物就一定越好。 MIC只表示一种药物对某一株细菌抗菌作用的强弱，MIC越低（离中介值越远）说明该药物对相应的病原菌的作用越强。只能比较同一种药对同一株菌，若MIC值升高，可认为其耐药性提高。问题3：是否所有报告的细菌均为病原菌？不一定。原因如下：所报告细菌为污染菌或定植菌，细菌培养结果的临床意义大小与所取标本有关。如为血液等无菌标本则临床意义较大，但即使血培养阳性也可能为污染菌。某些标本易受污染如痰标本易于受咽喉部携带菌的污染，尿培养易受下尿道、尿道口寄居菌污染。可能为应用抗菌药后的菌群交替或菌群失调。特别是原为复数菌感染时，针对优势菌治疗一段时间后可能非优势上升为优势菌，或广谱抗菌药治疗后可

能出现真菌感染。有２种以上病原菌时因生长速度不同、营养要求不同，培养结果不能真实反映病原菌的种类、数量。问题4：为什么有时痰涂片结果与痰培养结果不一致？由于痰标本进行培养和涂片时选取的部位不一致；某些快生长菌所占比例并不多，但由于生长速度快、营养要求低，能在培养过程中迅速变为优势菌而掩盖其他菌的生长；标本从采集到接种的时间过长，造成部分苛养菌死亡，在涂片中看到的只是菌的残骸而非活菌。问题5：我们想用的药物在药敏试验中没有做？ 1.天然耐药 2.可能是药物的敏感性被其他药物所预报问题6：为什么有的菌报告很多种药物，有的仅报告几种药物？报告的药物种类根据细菌种类的不同而有所不同，如铜绿假单胞菌报告的药物较多，而嗜麦芽窄食单胞菌报告的药敏较少。问题7：是否能将所用的药都做药敏试验? 1.没有必要：通过耐药机制和标志性药物可以预测其他抗菌药物的敏感性 2.没有可能：不是所用药物都可以做药敏试验（需要药物在体外稳定，需要有操作标准和解释标准）问题8：选择药敏报告敏感的药物，为什么临床治疗无效？ ①体外药敏试验只能预测体内治疗效果，并不等同；一般来说，耐药＝治疗无效；敏感≠治疗有效；

真菌分类表

真菌分类表维基百科，自由的百科全书（重定向自真菌分類表）真菌分类表，本列表使用NCBI所公告之真菌分類表[1]為準。以前的分類學家將真菌和细菌都列為植物，称为菌类植物，但他们和植物相当不同，都是异养生物，现在的分类法倾向将它们独立在动物和植物之外，各自单独分为一个界。目录 [隐藏]

? 1 子囊菌门（Ascomycota） o 1.1 外囊菌亚门（Taphrinomycotina） ? 1.1.1 粒毛盘菌纲（Neolectomycetes） ? 1.1.2 肺孢子菌纲 (Pneumocystidomycetes) ? 1.1.3 裂殖酵母纲 (Schizosaccharomycetes) ? 1.1.4 外囊菌纲 (Taphrinomycetes) o 1.2 盘菌亚门 (Pezizomycotina) ? 1.2.1 星裂菌纲 (Arthoniomycetes) ? 1.2.2 刺盾炱纲 (Chaetothyriomycetes) ? 1.2.3 座囊菌纲 (Dothideomycetes) ? 1.2.4 散囊菌綱 (Eurotiomycetes) ? 1.2.5 虫囊菌綱 (Laboulbeniomycetes) ? 1.2.6 茶渍纲 (Lecanoromycetes) ? 1.2.6.1 微孢衣亚纲 (Acarosporomycetidae) ? 1.2.6.2 茶渍亚纲 (Lecanoromycetidae) ? 1.2.6.3 厚顶盘菌亚纲 (Ostropomycetidae)? 1.2.7 锤舌菌纲 (Leotiomycetes) ? 1.2.8 李基那地衣纲 (Lichinomycetes) ? 1.2.9 圆盘菌纲 (Orbiliomycetes) ? 1.2.10 盘菌纲 (Pezizomycetes) ? 1.2.11 粪壳菌纲 (Sordariomycetes) ? 1.2.11.1 肉座菌亚纲 (Hypocreomycetidae) ? 1.2.11.2 粪壳菌亚纲 (Sordariomycetidae) ? 1.2.11.3 炭角菌亚纲 (Xylariomycetidae) o 1.3 酵母菌亚门 (Saccharomycotina) ? 1.3.1 酵母纲 (Saccharomycetes) ? 2 担子菌门 (Basidiomycota) o 2.1 异担子菌纲 (Heterobasidiomycetes) ? 2.1.1 异担子菌亚纲 (Heterobasidiomycetidae) ? 2.1.2 银耳亚纲 (Tremellomycetidae) o 2.2 同担子菌纲 (Homobasidiomycetes) o 2.3 锈菌纲 (Urediniomycetes) ? 2.3.1 亚纲 (Agaricostilbomycetidae) ? 2.3.2 微球黑粉菌亚纲 (Microbotryomycetidae) ? 2.3.3 锈菌亚纲 (Urediniomycetidae) o 2.4 黑粉菌纲 (Ustilaginomycetes) ? 2.4.1 亚纲 (Entorrhizomycetidae) ? 2.4.2 外担子菌亚纲 (Exobasidiomycetidae) ? 2.4.3 黑粉菌亚纲 (Ustilaginomycetidae) ? 3 壶菌门 (Chytridiomycota) ? 4 球囊菌门 (Glomeromycota) o 4.1 球囊菌纲 (Glomeromycetes) ? 5 接合菌门 (Zygomycota)

微生物的分类与鉴定

第十章微生物的分类与鉴定一、选择题 1.真菌的分类单元-门的词尾为（A ） 2.A、–mycota B、–mycetes C、–mycotina D、-mycetidae 3.下列传统分类指标中始终被用作微生物分类和鉴定的重要依据的是（A ） 4.A、形态学特征 B、生理特征 C、生态学特征 D、分子生物学特征 5.下列拉丁文哪个书写格式正确（ C ） 6.A、Fusarium oxysporium B、Aspergillus japonicus Saito 7. C、Bacillus amyloliquefaciens D、Clostridium Kluyveri 8.1978年，根据16S rRNA和18S rRNA的碱基序列将生物分为“三域”的科学家是（D ） 9.A、Ainsworth B、Bergey C、Leedale D、Woese 10.1995年，Ainsworth分类系统把菌物列入真核生物域，将其分为3个界，下面哪项不属于其中（ D ） 11.A、原生动物界 B、假菌界 C、真菌界 D、菌物界 12.有关菌株的说法，下列哪项说法不对（ B ） 13.A、菌株强调的是遗传型纯的谱系 B、菌株的名称不可随意确定 14.C、菌株与克隆相同，为一个物种内遗传多态性的客观反映 15.D、菌株实际上是某一微生物达到遗传型纯的标志，二、是非题 1．微生物的种是微生物分类的基本单元，但是目前还没有一个公认的、明确的定义。（√） 2．两个微生物菌株具有相同G+C含量表明它们之间的亲缘关系一定很相近。（×）

3．亚种是进一步细分种时所用的单元，一般指除某一明显而稳定的特征外，其余鉴定特征都与模式种相同的种，其命名方法按“三名法”处理。（√） 4．变种是亚种的同义词，在《国际细菌命名法规》中不主张使用。（√）5．在微生物分类中，DNA（G+C）mol%的比较只能做否定判断。（√）6．微生物DNA之间的同源性越高，说明它们之间亲缘关系就越近，反之亦然。（×） 7．菌株是一个物种内遗传多态性的客观反应，是遗传型纯的谱系，其名称可以随意确定。（√） 8．模式菌株是一个种的具体活标本。（√） 9．据科学家1992年估计，地球上生存的菌物约有150万种。（√）10．微生物自动化鉴定技术一般都是利用微生物的生理生化反应特性而设计的。（√） 11．细菌分子鉴定常用16S rRNA序列分析，而真菌分子鉴定常用ITS序列分析。（√） 12．所谓“模式菌株”通常是指一个细菌的种内最具代表性的菌株。（×）13．对微生物生理生化特征的比较也是对微生物基因组的间接比较，加上测定生理生化特征比直接分析基因组要容易得多，因此生理生化特征对于微生物的系统分类仍然是有意义的。（√） 14．现代微生物分类中，任何能稳定地反映微生物种类特征的资料，都有分类学意义，都可以作为分类鉴定的依据。（×） 15．DNA-DNA杂交主要用于种、属水平上的分类研究，而进行亲缘关系更远(属以上等级)分类单元的比较，则需进行DNA-rRNA杂交。（√）

真菌学实验指导

本课程，本课程是大学本科生物技术、生物科学专业的选修课程。介绍真菌分类现状、分类方法（包括传统与现代分类方法的比较）、分类依据及其原则。本课程的教学不限于介绍研究的成果，重在介绍分析和解决问题的方法，以培养学生分析问题和创新的能力。所以在理论学习的同时开设综合性实验，培养学生观察、分析和动手能力。基本掌握真菌分离、鉴定的方法，并应用于真菌其它领域的研究。本指导书适用于生物技术和生物科学专业。

1、实验：内生真菌的分离及鉴定 ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????3 2、实验报告基本内容要求 ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????7 3、实验报告格式????????????????????????????????????????????????????????????????8

实验内生真菌的分离及鉴定实验学时：18 实验类型：综合实验要求：选修一、实验目的 1.了解真菌形态的基本特征。 2.掌握丝状真菌制片方法和真菌鉴定方法。二、实验内容采集植物样品包括叶、茎、根、花、种子或果实，然后对分离样品的内生真菌，并进行形态和分子生物学方法的鉴定。三、实验原理、方法和手段（一）实验原理根据真菌的形态特征和ITS序列等分子证据对分离到真菌进行归类和鉴定。（二）实验手段和方法 1、内生真菌分离纯化方法 1.1样品的表面消毒及预处理分别取根、茎、叶、果实，用洗涤剂在自来水下洗净。老树皮用75%酒精进行表面消毒后，用镊子取出，于酒精灯上烧灼15秒至表面焦糊，切成1×1cm2大小置于PDA固体培养基上。对于根、茎、叶、果实按下列程序进行表面消毒： 75%的酒精漂（浸）洗2-3min→无菌水冲洗4-6次→0.1%升汞不同的消毒时间（共设置7个梯度）→无菌水冲洗4-6次→用灭菌滤纸吸干多余水分→无菌刀片将材料切成小块将根、茎的表皮、韧皮部、木质部大致分开，并切成0.5×0.5cm2大小。将果实的外种皮去掉，消毒之后将内种皮去掉。灭菌时，沥干的植物材料转放到烧杯中，记好时间，倒入消毒溶液，不时用玻璃棒轻轻搅动，以促进材料各部分与消毒溶液充分接触，驱除气泡，使消毒彻

重要植物病原真菌分类检索表

重要植物病原真菌分类检索表鞭毛菌亚门真菌 1.根肿菌纲(Plasmodiophoromycetes)→根肿菌属（Plasmodiophora）→芸薹根肿菌（Plasmodiophora brasicae）：引起十字花科根肿病 2.壶菌纲(Chytridiomycetes)→节壶菌属(Physoderma)→玉蜀黍节壶菌(P. maydis)：玉米褐斑病 3.丝壶菌纲(Hyphochytridiomycetes) 无 4.卵菌纲(Oomycetes) 4.1水霉目（Saprolegniales） a1水霉属（Saprolegnia）→寄生水霉（S. parasitica）：引起鱼类水霉病 a2绵霉属（Achlya）→稻绵霉（A. oryzae）：引起水稻烂秧病 4.2霜霉目（Peronosporales） 4.2.1腐霉科（Pythiaceae） a1腐霉属（Pythium）→瓜果腐霉（P. aphanidermatum）：西葫芦绵腐病a2疫霉属（Phytophthora）→致病疫霉（P. infestans）：马铃薯晚疫病4.2.2霜疫霉科（Peronophthoraceae）→霜疫霉属（Peronophthora）→荔枝霜疫霉（P. litchii），为害荔枝花序和果实引起霜霉病。 4.2.3霜霉科（Peronosporaceae） a1霜霉属(Peronospora) →寄生霜霉（Peronospora parasitica）十字花科植物霜霉病 a2假霜霉属(Pseudoperonospora) a3单轴霉属(Plasmopara) a4盘梗霉属(Bremia) a5指梗霉属(Sclerospora) →禾（谷生）指梗霉（S. graminicola）谷子白发病4.2.4白锈科（Albuginaceae）→白锈属（Albugo）→白锈菌（A. candida）十字花科、旋花科等植物白锈病。接合菌亚门真菌 a1根霉属（Rhizopus）→匍枝根霉（R.stolonifer）特征：有匍匐丝和假根，

真菌形态的几种观察方法

真菌形态的几种观察方法.txt39人生旅程并不是一帆风顺的，逆境失意会经常伴随着我们，但人性的光辉往往在不如意中才显示出来，希望是激励我们前进的巨大的无形的动力。40奉献是爱心，勇于付出，你一定会收到意外之外的馈赠。真菌形态的几种观察方法真菌作为一种实验材料，在微生物实验室中的应用是相当普遍的，正确的培养观察方法，能够如实地反映其本质特征。下面介绍实验室中真菌形态的几种观察方法。 1．载片培养法载片培养方法是实验室观察真菌形态的基本方法。此法的基本步骤是：在无菌条件下，用无菌吸管吸取融化的培养真菌的固体培养基，快速地滴一滴于无菌的载玻片上，待其冷却以后，用接种环沾取少许孢子或者挑取一点菌丝段于凝固的培养基上，上面放上无菌的盖玻片。然后，将此片子放入干净的培养皿中，培养皿底部放入潮湿的吸水滤纸，或者将培养皿底放入一些水，中间用玻璃棒隆起，将做好的培养片子搭放在上面，合适温度下培养。将培养好的片子取出，用小镊子轻轻地取下上面的盖玻片，把盖玻片转放于另一干净的载玻片上，待自然干燥后，两边用透明胶固定，用棉蓝染色液染色。载片培养法还可以这样进行：将厚度约0.5mm的平板培养基用小刀切成大小0.5cm2的小块，挑取一小块培养基放于干净的载玻片上，同样的方法接种、培养观察。还可以用刀片将培养好的载玻片上的多余培养基割去，自然干燥后，用大一点的盖玻片盖上菌丝，用同样方法两边固定，染色观察，这种方法特别适用于产生无性孢子的真菌的形态观察。该方法要注意以下几点：滴的培养基不能太多，接种物不能太多，防止污染。 2．插片培养法插片培养法是实验室观察真菌形态的另一种基本方法。这种方法的基本步骤是：将菌丝块接种于固体平板的中间。假如是以孢子接种，则将孢子稀释液涂布于固体平板上，然后，用小镊子夹起一块无菌的盖玻片，以45度角的角度斜插入培养基中，不要插入培养基太深，让菌丝爬上盖玻片；培养好了以后，再用小镊子将盖玻片取出，自然干燥以后，将盖玻片转移到一干净的载玻片上，用同样的方法两边固定，染色观察。该方法要注意：插片的角度要掌握好，不能太直或太平；当两面都有菌丝时，擦去背对中心的那面的菌丝，以避免干扰。 3．粘片法粘片法是用透明胶粘贴菌丝或者孢子进行观察的方法。用剪刀剪取一小段透明胶，用小镊子夹住一个角，轻轻地粘一些菌丝或者孢子，然后将其放入一干净的载玻片上，在载玻片上滴一滴染色液，可以染色观察。此法要注意：粘贴时，不要用力粘的太多；粘上菌丝或者孢子的透明胶放入载玻片上，不要移动，要一次放好。 4．平板观察法平板观察法是在平板上直接观察真菌的方法。对菌丝生长得比较稀疏的真菌和观察基内菌丝。此法比较直接真实地反映菌丝的形态特征，观察时将平板的上盖拿开，倒置于显微镜的载物台上。这种方法可以消除由于培养体变干或者放在菌丝表面的盖玻片等可能出现的影响。此

真菌分类学(考点版)

蘑菇圈fairy ring ·“蘑菇圈”多数发生在草原或森林边缘地。 ·它的形成是由同种蘑菇菌丝体的生长繁殖而形成，通常是从一点出发，不断向四周辐射扩展，因此由外围新生菌丝所形成的子实体常呈圈状生长。八界：细菌总界：1,真细菌界2,古细菌界真核总界：3,原始动物界4,原生动物界5,植物界 6,动物界7,真菌界8,假菌界真菌起源的三个学说指的什么？貌似还有菌幕藻类起源说，原生动物起源说，独立起源说目前，真正意义上的真菌，主要包括：壶菌、接合菌、子囊菌、担子菌毒菇的鉴定： 1.形状奇特，色泽鲜艳，盖上生刺、疣：柄上同时生有菌环和菌托。 2.气味恶臭，味道极辣，极苦，汁液混浊。 3.鸟不啄，鼠兽不食，虫不蛀。 4.与葱、蒜，银器，大米共煮时呈现乌黑色。 5.生于阴暗和潮湿污秽的地方。 1，虚心学习，认识自己周围可食的野菇和毒菇。不随便采集。 2，食用时，即便非常可口，第一次也要少吃些。个人体质不同，对毒素反映不相同。 3，禁止使用变质的蘑菇。菌丝生长特点 ·顶端生长·无限生长，不断分枝·各部分都有潜在的生长能力。菌丝的细胞壁可以增厚，但其直径生长时有限的，菌丝的长度是无限的。隔膜类型：初生隔膜不定隔膜初生隔膜类型：单孔型隔膜多孔型隔膜桶孔型隔膜两型性：有时形成具有分枝的，有隔或无隔的菌丝体，有时形成近球形，卵圆形酵母状细胞，称此现象为两型性，通常Y←→M表示，两型现象在酵母中最普遍。假菌丝：在酵母的出芽繁殖过程中，芽体往往不与母体脱落而出芽，依次下去，许多酵母细胞首尾相接而形成假的菌丝链。真菌吸器与寄生细胞相互作用有三种方式 (1)壁与壁并列：指吸器的壁与寄生细胞壁相互接触，为一种附着的关系，吸器并不穿透寄主细胞壁侵入寄主细胞内。 (2)吸器在寄主细胞内：吸器穿透寄主细胞壁进入寄主细胞内吸取养分，吸器

作物病原真菌分类

实用标准
常见杀菌剂类别及其特点—选择性杀菌剂（杀真菌剂）由真菌引起作物病害种类最多、最普遍。人类对植物病原真菌研究的最早最详尽，所以，至今专用于防治真菌性病害的杀菌剂种类也最多。如何更容易记忆和使用这些种类繁多的杀菌剂，最好是首先认识常见作物病害的病原真菌类别。再针对不同病害类别去选择适宜相当的药剂。比如，对于霜霉病、疫霉病和晚疫病等低等真菌引起的病害，可以选用烯酰吗啉、霜霉威、瑞毒霉、霜脲氰等，而三唑类杀菌剂对炭疽病、褐斑病、白粉病、锈病等半知菌、子囊菌或担子菌引起的病害有效。咯菌腈、嘧霉胺、异菌脲等对灰霉病特效。作物病原真菌分为低等真菌和高等真菌两大类，低等真菌是指鞭毛菌亚门和接合菌亚门，而子囊菌、担子菌以及尚未发现其有性世代的半知菌三个亚门。详情见下表。表 1，作物病原真菌分类
类别
亚门
属别
常见病害
1 根肿菌：其营养体为原质团，整体产孢繁殖。无性孢子为薄壁
十字花科根肿孢子囊中产生的游动孢子，有性
病孢子为厚壁孢子囊中产生的休眠包子。
2
粉痂菌：休眠包子聚集成多孔马铃薯粉痂病
的海绵状圆球。
低等真菌
一、鞭毛菌：无性孢
子为带有鞭毛的能 3 霜霉菌：营养体为发达的菌丝
体，产生吸器伸入作物组织细胞
在水中游动的游动
内吸取养分。无性孢子为游动孢
孢子，有性孢子为厚
多种蔬菜、果树
子，有性孢子多为卵孢子。在被
垣孢子或卵孢子。
的霜霉病
害发病的作物叶片背面出现的
霜霉状物是病菌的菌丝体和游
动孢子囊。
文案大全
4 疫霉菌：菌丝体发达，无性孢子为游动孢子，自然条件下很难疫霉根腐病、马见到其卵孢子。其病征（病菌在铃薯、番茄等晚被害作物体上表现的特征）是白疫病等。色绵絮状物。

利用ITS序列鉴定真菌

北方民族大学实验论文题目：利用ITS序列鉴定真菌学院：生物科学与工程学院专业：生物技术班级： 082 姓名：李晓飞李妍吾木尔古丽张瑞莉陈波艾克拜尔指导老师：刘建利完成日期：2011年5月18日——2011年6月5日

利用ITS序列鉴定真菌李晓飞李妍吾木尔古丽张瑞莉艾克拜尔陈波（北方民族大学生物科学与工程学院银川750021）摘要：采用实验室提供的两株酵母菌，活化培养后，经基因组DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳检测，以ITS1和ITS2为引物构成的PCR反应体系对目的DNA片段（ITS1区）进行扩增，经琼脂糖凝胶电泳检测后送至测序公司测序，所测序列经Genbank比对后，两株菌分别为掷孢酵母属TY-241菌株(Sporobolomyces sp)和假丝酵母ST-50菌株（Candida sp）。关键词：ITS序列酵母菌PCR 菌种鉴定 1 材料与方法 1.1试验材料与试剂实验室提供的红色掷孢酵母菌[1]和白色产香酵母菌。 YEPD液体培养基[2]配方：酵母浸粉10g，葡萄糖20g，蛋白胨20g，配成1L溶液，分装100/250ml，121℃灭菌15min。裂解液[3]：1L裂解液中需加Tris1.2114g，EDTA8.767g，SDS5g，用1M的NaOH调至8.0，121℃灭菌30min备用。醋酸钾溶液：1L溶液中含醋酸钾245.35g。氯仿-异戊醇（24：1）：现配现用。 70%乙醇：用95%乙醇配制，现配现用。 10×TAE溶液：1L溶液中含Tris1.2114g，EDTA29.22g，用HCl调pH至8.0。 1%琼脂糖凝胶：取1g琼脂糖溶于100ml1×TAE溶液中，微波炉加热至沸腾三次。1.2主要仪器与设备表一实验中使用的主要仪器仪器名称型号产地立式自控高压蒸汽灭菌器LDZX-40SSI 上海申安医疗器械厂数显恒温水浴锅HH-4 国华电器有限公司电泳仪DYY-12 北京市六一仪器厂制冰机AF200PSC50R ΜSA 生物安全柜HFsafe 1200/C 上海力申科学仪器有限公司电冰箱BCD-219D 青岛海尔股份有限公司Sigma高速离心机3K30 Germany 电子精密天平HR-200 上海精科天平酸度计DELTA302 上海电子可调电炉101RF-3 天津市泰斯特仪器有限公司双层恒温振荡器THZ-9511K 太仓市实验设备厂紫外分析仪WD-9403C 北京市六一仪器厂