Guideline on setting specifications for related impurities in antibiotics-中文

Guideline on setting specifications for related impurities in

antibiotics

Table of contents 目录

Executive summary概要 (3)

1. Introduction (background)介绍（背景） (3)

2. Scope 范围 (4)

3. Legal basis 法规依据 (4)

4. General requirements一般性要求 (5)

5. Impurity profiling and reporting, identification and qualification thresholds 杂质概况和报告限，鉴定限和界定限 (6)

5.1. Active substances manufactured by semi-synthesis 半合成法生产的活性物质 (6)

5.2. Active substances manufactured by fermentation, single compound发酵法生产的活性物质，单一化合物 (7)

5.3. Active substances manufactured by fermentation, family of compounds 发酵法生产的活性物质，同族化合物 (7)

5.4. Peptides manufactured by fermentation/semi-synthesis发酵法和半合成法生产的多肽 (7)

5.5. Active substances for veterinary use 兽用活性物质 (7)

5.6. Special cases for very complex impurity profiles非常复杂的杂质概况特例 (7)

6. New applications and variations 新申请和不同情况 (8)

6.1. New active substances新的活性物质 (8)

6.2. Existing active substances, not subject to a Ph. Eur. monograph 无EP专论的活性物质 (8)

6.3. Active substances subject to a Ph. Eur. monograph 有EP专论的活性物质 (8)

6.3.1. Existing active substances subject to a Ph. Eur. monograph with transparency

statement and availability of a CRS for peak identification or relative retention times for the related substances有EP专论，有透明度声明和峰鉴别对照品或有关物质相对保留时间的活性物质 (8)

6.3.2. Existing active substances subject to Ph. Eur. monograph, with transparency statement, but no availability of a CRS for peak identification or relative retention times for the related substances有EP专论，有透明度声明但无峰鉴别对照品或有关物质相对保留时间的活性物质 (8)

6.3.3. Existing active substances subject to Ph. Eur. monograph, without transparency statement 有EP专论，无透明度声明的活性物质 (9)

6.3.4. Revision of Ph. Eur. monographs EP专论的修改 (9)

7. Specifications for medicinal products药物产品的标准 (9)

8. Analytical procedures分析方法 (10)

Definitions定义 (10)

References 参考文献 (11)

Annex 1: Explanatory note regarding thresholds附录1：有关限度的注释 (12)

Annex 2: Thresholds附录2：限度 (13)

Annex 3: Example of “fingerprint chromatogram” approach to control very complex impurity profiles 附录3：“指纹图谱”方法来控制非常复杂的杂质概况的示例 (14)

Executive summary 概要

（略）

1.Introduction (background) 介绍（背景）

（略）

2.Scope （范围）

本指南提供上市批准申请中，设定抗生素（如抗菌物质）的有关杂质的指导意见，这些抗生素是发酵产品或由发酵产品衍生的半合成物质。进一步将该指南的范围扩大，使其能应用于其它抗生素（如抗真菌物质）是可预见的。

本指南给出的原则是关于活性物质中和药物产品中有关物质含量和界定方面的，不应用于临床试验中使用的研究性药物产品中使用的新活性物质。

本指南中，给出的是有关杂质的报告限、鉴定和界定限。对于由相近的有关化合物的混合物构成活性物质的抗生素，可能难以应用本指南的通用限度。本指南给出了如何设定限度和质量标准和如何界定杂质概况的一般性原则。这些限度代表了一般性行的设定要求，这些限度是可以调整的，以适合特定的情况。必要的时候，需要考虑到安全性的进一步要求。

本指南不包括来自发酵过程的产物，例如，微生物的残留物，培养基，基质和前体；这包括在EP的通用专论“发酵产品”中。（该专论只适用于发酵生产的物质，不适用于半合成法生成的物质）

本指南适用于新的活性物质和既有活性物质的新来源。当涉及到时，申请者负责说明活性物质已在EU上市。

对于既有的活性物质的新来源，本指南应与活性物质的已有的EP专论结合起来阅读。与EU 已批准的活性物质或产品中的杂质水平/概况对比是一种界定杂质的可选方法。

3.Legal basis 法规依据

本指南需结合介绍部分和一般性要求（4）部分和Annex Is to Directives 2001/82/EC and 2001/83/EC as amended的第一部分进行阅读。

4. General requirements 一般性要求

杂质概况很大程度上取决于生产工艺；即使是来源于同一微生物，杂质概况也可能是不相同的。一般地，可以用一些纯化步骤来获得足够纯的活性物质，这些纯化步骤包括柱层析法和超滤操作。

半合成物质不是欧洲药典的通用专论“发酵产品”的范围内。然而，发酵原料的规范应该参照现行指导原则进行论证，若有必要，还包括在通用专论中描述的一般性概念。（本指南中限度并不适用于发酵原料）。

发酵后的合成路线越短，发酵原料越复杂，与通用专论的相关性越大。因此，通用专论中详细描述的发酵步骤和其它一些方面，尤其是纯化步骤，也应该适用于半合成抗生素产品。除非论述了发酵原料和发酵步骤后的半合成步骤的数量和/或性质是不复杂的。

如，发酵产品的酯化，醚化和成盐，这些步骤有利于最终活性物质中的发酵副产物的除去，

（例如，像琥乙红霉素或乳糖醛酸红霉素等红霉素衍生物），它们不被视为主要的合成步骤，因此可以不给出发酵工艺，特别是纯化步骤的详细描述。

在发酵的起始原料不复杂的，并考虑到了发酵后合成步骤的数量和性质情况下，有合适的发酵起始物料的包括含量、成分（如相关）和有关物质（特定的、非特定的，和总的杂质）的规范就足够了。这应该在任何情况下都是要论证的。对于半合成法生产的活性物质，发酵起始物料的杂质概况应该经过细致谨慎的评估，因为这些杂质主要贡献于最终活性成分的杂质概况。

发酵步骤后观察到的有关杂质包括副产物，中间体和降解产物。对于半合成物质，其杂质也包括发酵起始原料和它里面的有关杂质，合成副产物（包括来源于起始原料的杂质），合成中间体和降解产物。

任何关键中间体都应该设定质量标准（包括不同纯化步骤下的中间体）。这些标准中应包括特定杂质和非特定杂质的限度。对活性成分的杂质概况有贡献的杂质应该列为特定杂质。申请者应该提供关于潜在杂质的讨论，他们是如何去除的，哪些杂质会出现在活性物质中。

虽然是通过发酵或半合成法生产的，抗生素的结构也是可以被良好地定义为一种单组分物质的，它也是可以被有效地纯化的。对于每个类别的抗生素，最好尽可能地去优化它的纯化步骤，以减少杂质至界定限以下，而不是提供（额外的）安全性数据。

通过发酵生产的抗生素，活性物质可能由生物活性相似的紧密相关的一些化合物的混合物组成。在这种情况下，当建立标准时，可能难以确定一个化合物是活性物质的一部分，或是应当被视为杂质（如庆大霉素）。要定义那种物质是活性成分的组成部分，应该建立在预临床和临床试验的基础上，除非EP专论描述了它的活性物质组成。不被定义为活性物质组成的有关化合物就被视为有关杂质。

在ICH Q3和VICH GL10/GL11指南和指导原则“Chemistry of New Active Substances’ (CPMP/QWP/130/96 Rev 1, EMEA/CVMP/541/03)中给出的限度，并不适用于发酵产品和从发酵产品衍生出来的半合成物质。在其他方面，当前的指南中没有给出特定的指导意见的，则参考这些指南中的准则。

在界定处在特定水平上的一个杂质或一个给定的杂质概况时，存在以下一些可能性：适当的一套非临床试验、文献数据；与EU已经批准的活性物质/产品的杂质水平/概况对比；或者证明这个相关的杂质是活性物质的一个重要代谢产物。

5. Impurity profiling and reporting, identification and qualification thresholds杂质概况和报告限，鉴定限和界定限

抗生素药物的杂质概况应按照ICH Q3A (VICH GL10)的指导原则来表征。

根据该指导意见，抗生素的有关物质限度应该设定如下：

●每种特定的已鉴定杂质

●每种特定的未鉴定杂质

●任何不大于（≤）鉴定限认可标准的非特定杂质

●总杂

特殊情况下，鉴定单个杂质可能是不可行的，应提供它的结构的充分证据（例如用HPLC/MS 方法），来将其合理地归类为母化合物的有关物质。这种情况下，应将其用适当的分析标识

（例如HPLC相对保留时间（RRT））标记出来，作为特定未鉴定杂质。一般原则是，对与母体化合物结构不相似（见第5.3部分）的杂质，ICH Q3A（VICH GL10）中给出的限度是适用的，除非在以下章节中有不同的说明。

以上第4部分讨论的理由，并考虑到抗生素的治疗周期在多数情况下都是被限制的，抗生素类产品的有关物质，可以比ICH Q3A/VICH GL10中描述的高一些，也会因为抗生素类别的不同而设定不同的限度。这些限度在下面给出来了。

5.1. Active substances manufactured by semi-synthesis 半合成法生产的活性物质

半合成物质是以发酵原料为起始物料，通过至少分离和形成共价键过程，并包含提取/纯化步骤的工艺来获得的。半合成物质的有关物质可接受标准应该按照下面给出的限来设定。

用ICH Q3A中的报告、鉴定和界定限。

报告限：0.05%/0.03%

鉴定限：0.10%/0.05%

界定限：0.15%/0.05%

如果半合成活性物质由一族很接近的化合物组成，则其限可能可以高于发酵法和族化合物分离法生产的活性物质的限（见5.3）。这种情况应该提供适当的论证。

5.2. Active substances manufactured by fermentation, single compound发酵法生产的活性物质、单个化合物

有关物质可接受标准应该按照下面给出的限来设定。

报告限：0.10%

鉴定和界定限：0.15%

5.3. Active substances manufactured by fermentation, family of compounds 由发酵法生产

的活性物质、族化合物

有关物质可接受标准应该按照下面给出的限来设定。

报告限：0.10%

鉴定限：0.15%

界定限：0.50%/0.2%

结构很接近的有关杂质（见定义）的0.50％界定限，结合其它有关杂质0.2％的界定限。当论证一个有关物质（化合物没有定义要包括在活性物质中）的结构与母体化合物很相近时，至少应该有诸如HPLC/MS或使用对照物质的证据。给出的0.50％/0.2％的界定限甚至适用于日剂量≥2g的药物，这里面的一些抗生素可能是相关的。

5.4. Peptides manufactured by fermentation/semi-synthesis发酵法/半合成法生产的多肽

多肽类（如短杆菌肽，短杆菌素和杆菌肽）的抗生素的界定限，与欧洲药典General Monograph Substances for Pharmaceutical中合成多肽的一样是可以接受的，无需任何论证。其它限则应该被论证。这些限并不适用于含有其它基团而不是氨基酸的某些修饰多肽（例如糖肽）。

5.5. Active substances for veterinary use 兽用活性物质

兽药中的活性物质只能应用VICH GL10中的报告、鉴定和界定限（分别为0.10%、0.20%和0.50%）。对于发酵法生产的并且由一族化合物组成的，只在兽药中使用的活性物质，其限可能需要论证，并根据具体情况来评估。

在兽药和人用药中都使用的活性物质，按照上述给出的适用于人用药分类的限来设定。

5.6. Special cases for very complex impurity profiles非常复杂的杂质概况特例

在杂质概况非常复杂或其中两个杂质非常相似的情况下，技术上可能不能达到峰的分离。在这种情况下，可能有必要为这种未分离的峰设定一个总的限度。此时，可能的话，限应适用于该组合峰。设定界定限的时候，应当考虑用于毒理研究的批次的成分。

特殊地，要控制非常复杂的杂质概况，但不可能鉴定单个峰时，申请人应提出不同的测试，给出批次间杂质具有一致性的结论。如申请人已经界定了一个原料药（从一个给定的生产商那里），这种情况下需要确保未来批次的一致性，则申请者至少应该能通过建立在足够生产批次基础上的质量标准来描绘杂质概况。

质量标准可以包括以下参数：（1）峰的个数（可以用范围）限制，对应的含量（总和），用预先定义的，窄的RRT范围来表示。（2）在一个预定义的RRT范围内的相对标准限度（例如，在RRT x和RRT y 之间，含量为A%~B%的峰至少有一个）。（3）在一个预定义的RRT 范围内，超过限的峰（例如，在RRT w和RRT z 之间不大于（NMT）C%的任何一个峰，但大于D%的峰不多于一个，C＞D，例如C=2.0%，D=1.5%或类似的值，取决于原料药和制剂的质量概况）。这种方法不应该应用于由混合成分组成的活性产物。本指南的附录3给出了一个例子。

6. New applications and variations 新申请和不同情况

6.1. New active substances新的活性物质

应描述杂质概况的特性和鉴定单个杂质，若有必要，则用一套临床和非临床测试方法来界定。

6.2. Existing active substances, not subject to a Ph. Eur. monograph 无EP专论的活性物质

应描述杂质概况的特性和鉴定单个杂质，若有必要，则用本指南的一般性要求部分中的方法来界定。

6.3. Active substances subject to a Ph. Eur. monograph 有EP专论的活性物质

6.3.1. Existing active substances subject to a Ph. Eur. monograph with transparency statement and availability of a CRS for peak identification or relative retention times for the related substances有EP专论，有透明度描述和峰鉴别对照品或有关物质相对保留时间的活性物质

应描述杂质概况的特性和鉴定单个杂质。

特定杂质应该按专论的要求来控制。

新杂质要鉴定，必要的时候，遵照本指南执行。

新杂质要鉴定，必要的时候，遵照本指南的一般性要求部分执行。

6.3.2. Existing active substances subject to Ph. Eur. monograph, with transparency statement, but no availability of a CRS for peak identification or relative retention times for

the related substances有EP专论，有透明度描述但无峰鉴别对照品或有关物质相对保留时间的活性物质

应描述杂质概况的特性和鉴定单个杂质，若有必要，遵照本指南执行，以专论中的透明度描述为参考。

特定单杂按照专论要求来控制。

任何新杂质要鉴定和界定，若有必要，照本指南的一般性要求部分执行。

6.3.3. Existing active substances subject to Ph. Eur. monograph, without transparency statement 有EP专论，无透明度描述的活性物质

应描述杂质概况的特性和鉴定单个杂质，若有必要，遵照本指南执行。

杂质应界定，若有必要，照本指南的一般性要求部分执行。

6.3.4. Revision of Ph. Eur. monographs EP专论的修改

当存在下列情况时，应发起EP专论的修改：

●建立了已知杂质的鉴定方法

●新杂质被鉴定或界定了

根据Directives 2001/82/EC and 2001/83/EC as amended，一个专论不能够控制一个物质的质量时，相关当局应该通知药典委员会。

7. Specifications for medicinal products药物产品的标准

属于降解产物的有关物质应该建立标准。来源于原料药生产的杂质不应该列入特定杂质范畴，除非这个杂质同时也是降解产物。

杂质概况信息也可以来源于活性物质（原料药）

有关物质的可接受标准应该设定在以下限范围内。开封/reconstitution/稀释（使用有效期）后的产品的质量标准与成品一致，除非用合适的界定数据论证过，如通过与批准产品的观测水平对比来论证。成品质量标准中没有包含的新降解产物应该在reconstituted product的质量标准中列出来。要提供开封/reconstitution/稀释的使用有效期内（in-use shelf life）的数据。

半合成方法生产的活性物质：

报告限：0.1%

鉴定和界定限：0.2%

发酵法生产的活性物质，单个化合物：

报告限：0.15%

鉴定和界定限：0.2%

发酵法生产的活性物质，族化合物：

报告限：0.15%

鉴定限：0.2%

界定限：0.5%/0.2%（见5.3节的解释）

对于这三类活性物质来说，按照ICH Q3B中的剂量/限度的关系，低剂量产品可以有高一点的鉴定限和界定限可接受标准。

兽药产品按照VICH GL11中的报告、鉴定和界定限度（分别为0.3%、1.0%和1.0%）来设定。只用于兽药的活性物质，用发酵法生产的由一族化合物组成的，限度视集体情况而定。

8. Analytical procedures分析方法

当分析的最终活性物质和药物产品时，只要有可能，应使用外标法计算W/W来评估和排除任何可能的质量不守恒情况。如果采用面积归一化，则相关组分和有关物质在检测器中的响应情况应该是相似的（见EP2.2.46）。否则，就应该用校正因子（校正因子经常被用于与任何使用的对照品的响应都不一样的杂质，除了未知杂质）

面积归一化法（2.2.46）应用在含有一系列同族化合物的活性物质（取代外标法）是可接受的。面积归一化法可以用于分析有关的中间体。应用面积归一化法时，应该描述预期的线性范围，并给出明确预定的不符合标准。

当对比批准药品，来界定杂质概况时，所用的方法要有足够的专属性。复杂混合物分析时，要将分离技术（例如HPLC）和质谱（或其它技术）联合使用。日常分析可以选择简单的方法，如果论证了的话。

分析方法的定量限要不大于（≤）报告限。发色团较弱的物质，可以使用除UV吸收以外的其它方法。如果在某些情况下，不能报告或鉴定大于本指南中的限度的杂质，要进行评估。

Definitions定义

发酵产品：像类似细菌、酵母、真菌和微藻类一样的微生物的间接基因产物（一级或二级中间体），不考虑微生物是否用传统的方法或重组DNA技术进行了改变。

半合成: 发酵后的一个或多个合成步骤。一个合成步骤要涉及到断开和形成共价键。

单一化合物: 通常由一个化合物组成的活性物质

同族化合物: 由化合物的混合物组成的活性物质。属于组成成分的相关化合物的名称和数量在活性物质质量标准中有定义，该定义与预临床研究和临床研究中使用的成分是一致的。该成分会在任何可获得的EP专论中出现。

半合成中用到的复杂/不复杂的发酵起始原料：如果分子实体是简单的，该起始原料就是不复杂的，可能可以被全面表征，也可以获得杂质概况。复杂起始物料需要的描述水平取决于，其与生物步骤相比是否包含了一系列的化学步骤，并且这些步骤是否能够减少生物步骤中产生的杂质，到一个不会影响活性物质的杂质概况的水平。

结构很相近的杂质: 与含有多于一个活性化合物的活性物质的结构很相近的杂质，其界定限度可以提高到0.50%。所有相关化合物，只要在活性物质中被定义，就被视为杂质。认定结构相近应该讨论的因素有：（1）该杂质应该是特定的已鉴定杂质。如果没被鉴定，则适用的界定限为0.2%。（2）与组成活性物质的化合物的物理化学性质（包括光谱）相似。（3）与组成活性物质的化合物的主要结构一致。（4）只允许在该活性物质组分之间发生变化的部分

内变化。典型的变化是微小的烷基链（不同的分支，少或多一个甲基）的差异，或者甲基换成氢原子，而不只是烷基链的变化。（5）不涉及新的高毒的基因毒性警示结构，如亚硝基化合物、环氧化物或偶氮化物。

References 参考文献

（略）

Annex 1: Explanatory note regarding thresholds 附录1：有关限度的注释

在建立的限度时，抗生素是根据它们的制备方法（是只发酵或发酵后再合成）和它们的组成（抗生素是单一物质或密切相关的化合物的混合物）来分类的。因此，这些类别之间的报告限、鉴定限和界定限的差异，主要是基于技术/实际的原因。

本指南考虑到了，欧洲药典现行做法中的限度，评估与获得COS的关系的背景。

通过半合成生产的活性物质：

纯化步骤和随后的合成步骤，使有可能获得低含量杂质的活性物质。在许多情况下，合成步骤中所指定的“起始原料”是有好的纯度的已表征化合物（例如6-APA和7-ACA ），类似通过合成步骤生产出的指定的起始原料。因此，可采用ICH的限度（Q3A和VICH GL 10 ）。

通过发酵生产的活性物质，单一化合物：

仅由一种活性化合物组成，这些物质都比较容易纯化，所以，相对较低的限度是可能的。

通过发酵生产的活性物质，同族化合物：

当活性物质是密切相关的化合物的混合物，它是难以纯化的，不能去除存在的和其很相近的化合物（过度的纯化也可能导致不同的成分分配）。其中的一些其它成分，与包含在活性物质中的已定义成分具有相似的抗菌活性，而其它成分无相似活性。这些成分需按照杂质来处理，但由于复杂的情况，很难定将限度定得很低。建议有相对低的界定限，并包括适用于结构很相似的有关物质的更广泛的界定限的可能性（基于如HPLC/MS的证据）。

在某些情况下，对发酵产物而言，它可能无法坚持本指南中的限度。关系到报告限的问题在“分析方法”部分有提到。关系到鉴定的问题在“杂质概况和报告限、鉴定限和界定限”部分有提到。关系到界定的问题，有几种选择，包括与市场上的产品做对比。本指南指出了，市场上有些产品含有大于本指南提到的鉴定限的未知杂质。如果相同的物质是作为新申请的，这些杂质最好要被鉴定出来。在任何情况下，EP专论的修改要应该被要求的。对于存在特殊问题的活性物质，例如，壁霉素和庆大霉素，是不能满足报告限和鉴定限的。这些在本指南的“范围”和“第八部分分析方法”中已经考虑到了。

Annex 2: Thresholds 附录2：限度

Annex 3: Example of “fingerprint chromatogram” approach to control very complex impurity profiles附录3: “指纹图谱”方法来控制非常复杂的杂质概况的示例

非常复杂的杂质概况的情况下，若鉴别单个峰是不可能的，至少应该能通过建立在足够生产批次基础上的质量标准来描绘和表征杂质概况，质量标准可以包括以下参数：

●峰的个数（可以用范围）限制，对应的含量（总和），用预先定义的，窄的RRT范围来表示。

●在一个预定义的RRT范围内的相对标准限度（例如，在RRT x和RRT y 之间，含量为A%~B%的峰至少有一个）。

●在一个预定义的RRT范围内，超过限的峰（例如，在RRT w和RRT z 之间不大于（NMT）C%的任何一个峰，但大于D%的峰不多于一个，C＞D，例如C=2.0%，D=1.5%或类似的值，取决于原料药和制剂的质量概况。这种方法不应该应用于由混合成分组成的活性产物。

举例：

万古霉素的纯度标准

万古霉素B：NLT （不小于）93.0%

EP 杂质A NMT（不大于）2.0%

EP 杂质B NMT（不大于）2.0%

EP 杂质C NMT（不大于）2.0%

EP 杂质D NMT（不大于）2.0%

RRT 0.4-0.8范围内的单个未知杂质NMT（不大于）1.0%

RRT 1.4-1.7范围内的单个未知杂质NMT（不大于）1.0%

其它未知杂质NMT（不大于）0.3%

总杂NMT（不大于）7.0%

两个API批次的对应色谱图