Axygen-RNA提取试剂盒

Axygen-RNA提取试剂盒
Axygen-RNA提取试剂盒

AxyPrep总RNA小量制备试剂盒

本试剂盒用于从各种动物组织、植物组织、细胞、细菌、酵母和丝状真菌中提取总RNA。提取的总RNA分子完整、纯度高,适用于Northern Blot 、RT-PCR、体外翻译、Primer Extension、S1核酸酶作图、RNase保护测定、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。

一、试剂盒组成、贮存、稳定性

Cat. No. AP-MN-MS-RNA-4AP-MN-MS-RNA-50AP-MN-MS-RNA-250

Kit size 4 preps 50 preps 250 preps

Spin/vac mini column450250

2 ml Microfuge tube 4 50 250

1.5 ml Microfuge tube 8 100 500

Buffer R-Ⅰ 3 ml 25 ml 125 ml

Buffer R-Ⅱ 1 ml 10 ml 50 ml

Buffer W1A concentrate 2.4 ml 24 ml 120 ml

Buffer W2concentrate 2.4 ml 24 ml 2×72 ml

Buffer TE 1 ml 6 ml 30 ml

Protocol manual 1 1 1

Spin/vac mini column:小量制备管。

Buffer R-Ⅰ:细胞裂解液。室温密闭贮存。

Buffer R-Ⅱ:中和液。室温密闭贮存。

Buffer W1A concentrate:洗涤液。使用前,根据瓶上指定的体积加入乙醇,混合均匀,室温密闭贮存。可用无水乙醇或95%乙醇。

Buffer W2 concentrate:去盐液。使用前,根据瓶上指定的体积加入乙醇,混合均匀,室温密闭贮存。可用无水乙醇或95%乙醇。

Buffer TE :洗脱液。10 mM Tris-HCl,0.1 mM EDTA,pH 7.5。室温密闭贮存。

二、注意事项

Buffer R-Ⅰ和Buffer W1A 含刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套和眼镜,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医疗咨询。

三、实验准备

1. 第一次使用时,在Buffer W1A concentrate 和Buffer W2 concentrate中按试剂瓶上指定体积加入

无水乙醇或95%乙醇。

2. 所有试剂用DEPC处理过的溶剂配制。请选用RNase-free枪头和离心管,以避免提取过程中RNA

被RNase降解。

四、操作步骤

不同的样品提取总RNA的操作中略有区别,具体步骤分述如下:

【从动物组织中提取总RNA】

1. 取20-40 mg组织,转移至预冷的研钵中,加液氮研磨成粉末。

*请按下面说明使用组织的量:

RNA丰富的组织(如肝脏) 不超过30 mg

RNA含量低的组织(如肌肉) 不超过100 mg

当使用的组织量小于20 mg时R-Ⅰ,R-Ⅱ和异丙醇的使用量都减半

当使用的组织量大于40 mg时R-Ⅰ,R-Ⅱ和异丙醇的使用量按比例增加

2. 加入400 μl Buffer R-Ⅰ,用装有21-25号针头的注射器反复抽吸8-10次,转入1.5 ml离心管(试剂

盒内提供)中。

3. 加入150 μl Buffer R-Ⅱ,漩涡振荡15-30 s,12,000×g离心5 min。

* 建议在4℃下离心。

4. 取上清至1.5 ml离心管中,加入250 μl异丙醇,混和均匀。

步骤5-10可选择离心法或负压法

A.离心法

5A. 将制备管置于2 ml离心管(试剂盒内提供)中,转移步骤4中的混合液到制备管中,6,000×g 离心1 min。

* 建议在4℃下离心。

6A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,制备管中加入500 μl Buffer W1A,12,000×g离心1 min。

* 确认在Buffer W1A concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

7A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,制备管中加入700 μl Buffer W2,12,000×g离心1 min;

以同样的方法再用700 μl Buffer W2洗涤一次。

* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

8A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,12,000×g离心1 min。

9A. 将制备管放入一干净的1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中,在制备管膜中央加70-100 μl Buffer TE或RNase-free水。

10A. 室温静置1 min,12,000×g离心1 min,洗脱得RNA。

B.负压法

5B. 将制备管插到负压装置的插口上,将步骤4中的混合液移入制备管中,开启并调节负压至-20-30英寸汞柱,吸尽管中溶液。

6B. 保持负压,加入500 μl Buffer W1A,吸尽管中溶液。

* 确认在Buffer W1A concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

7B. 保持负压,沿管壁四周加入700 μl Buffer W2,吸尽管中溶液;以同样的方法再用700 μl Buffer W2洗涤一次。

* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

8B. 将制备管置于一个2 ml离心管(试剂盒内提供)中,12,000×g离心1 min。

9B. 将制备管放入一干净的1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中,在制备管膜中央加70-100 μl Buffer TE或RNase-free水。

10B. 室温静置1 min,12,000×g离心1 min,洗脱得RNA。

【从植物组织中提取总RNA】

1. 取30-150 mg组织,转移至预冷的研钵中,加液氮研磨成粉末。

*请按下面说明使用组织的量:

植物叶子通常用量10-80 mg

植物纤维组织通常用量100-150 mg

当植物叶组织量小于30 mg时R-Ⅰ,R-Ⅱ和异丙醇的使用量都减半

当植物叶组织量大于80 mg时R-Ⅰ,R-Ⅱ和异丙醇的使用量按比例增加

当植物纤维组织量大于150 mg时R-Ⅰ,R-Ⅱ和异丙醇的使用量按比例增加

2. 加入400 μl Buffer R-Ⅰ,用装有18-23号针头的注射器反复抽吸8-10次,转入1.5 ml离心管(试剂

盒内提供)中。

3. 加入150 μl Buffer R-Ⅱ,漩涡振荡15-30 s,12,000×g离心5 min。

* 建议在4℃下离心。

4. 取上清至1.5 ml离心管中,加入250 μl异丙醇,混和均匀。

步骤5-10可选择离心法或负压法

A.离心法

5A. 将制备管置于2 ml(试剂盒内提供)离心管中,转移步骤4中的混合液到制备管中,6,000×g 离心1 min。

* 建议在4℃下离心。

6A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,制备管中加入500 μl Buffer W1A,12,000×g离心1 min。

* 确认在Buffer W1A concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

7A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,制备管中加入700 μl Buffer W2,12,000×g离心1 min;

以同样的方法再用700 μl Buffer W2洗涤一次。

* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

8A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,12,000×g离心1min。

9A. 将制备管放入一干净的1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中,在制备管膜中央加70-100 μl Buffer TE或RNase-free水。

10A. 室温静置1 min,12,000×g离心1 min,洗脱得RNA。

B.负压法

5B. 将制备管插到负压装置的插口上,将步骤4中的混合液移入制备管中,开启并调节负压至-20-30英寸汞柱,吸尽管中溶液。

6B. 保持负压,加入500 μl Buffer W1A,吸尽管中溶液。

* 确认在Buffer W1A concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

7B. 保持负压,沿管壁四周加入700 μl Buffer W2,吸尽管中溶液;以同样的方法再用700 μl Buffer W2洗涤一次。

* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

8B. 将制备管置于一个2 ml离心管(试剂盒内提供)中,12,000×g离心1 min。

9B. 将制备管放入一干净的1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中,在制备管膜中央加70-100 μl Buffer TE或RNase-free水。

10B.室温静置1 min,12,000×g离心1 min,洗脱得RNA。

【从细胞中提取总RNA】

步骤1-4根据细胞培养的方式不同可以选择a或b两种实验方法

a. 悬浮培养的动物细胞或从培养皿、培养瓶中获得的细胞悬浮液或新鲜分离的动物组织单细胞悬浮液:

1a. 收集2×106-1×107的细胞,2,000×g离心5 min,弃上清。

2a. 加入400 μl Buffer R-Ⅰ,用装有21-25号针头的注射器反复抽吸8-10次,转入1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中。

3a. 加入150 μl Buffer R-Ⅱ,漩涡振荡15-30 s,12,000×g离心5 min。

* 建议在4℃下离心。

4a. 取上清至1.5 ml离心管中,加入250 μl异丙醇,混和均匀。

b. 96-孔, 24-孔,12-孔,或6-孔培养板上贴壁培养的细胞:

1b. 从96-孔,24-孔,12-孔或6-孔培养板里收集细胞,尽量弃去培养基,每孔加入300 μl Buffer R-Ⅰ,用移液枪上下吹打8-10次。

2b. 转移上述细胞悬浮液到1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中,用装有21-25号针头的注射器反复抽吸8-10次。

3b. 加入110 μl Buffer R-Ⅱ,漩涡振荡15-30 s,12,000×g离心5 min。

* 建议在4℃下离心。

4b. 取上清至1.5 ml离心管中,加入200 μl异丙醇,混和均匀。

步骤5-10可选择离心法或负压法

A.离心法

5A. 将制备管置于2 ml离心管(试剂盒内提供)中,转移步骤4中的混合液到制备管中,6,000×g 离心1 min。

* 建议在4℃下离心。

6A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,制备管中加入500 μl Buffer W1A,12,000×g离心1 min。

* 确认在Buffer W1A concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

7A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,制备管中加入700 μl Buffer W2,12,000×g离心1 min;

以同样的方法再用700 μl Buffer W2洗涤一次。

* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

8A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,12,000×g离心1 min。

9A. 将制备管放入一干净的1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中,在制备管膜中央加70-100 μl Buffer TE或RNase-free水。

10A. 室温静置1 min,12,000×g离心1 min,洗脱得RNA。

B.负压法

5B. 将制备管插到负压装置的插口上,将步骤4中的混合液移入制备管中,开启并调节负压至-20-30英寸汞柱,吸尽管中溶液。

6B. 保持负压,加入500 μl Buffer W1A,吸尽管中溶液。

* 确认在Buffer W1A concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

7B. 保持负压,沿管壁四周加入700 μl Buffer W2,吸尽管中溶液;以同样的方法再用700 μl Buffer W2洗涤一次。

* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

8B. 将制备管置于一个2 ml离心管(试剂盒内提供)中,12,000×g离心1 min。

9B. 将制备管放入一干净的1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中,在制备管膜中央加70-100 μl Buffer TE或RNase-free水。

10B. 室温静置1 min,12,000×g离心1 min,洗脱得RNA。

【从细菌中提取总RNA】

1. 收集0.5-2×109的细菌,6,000×g离心10 min,弃上清。用50 μl PBS 充分悬浮菌体并转移至预冷

的研钵中,加液氮研磨成粉末。

* 请进行细菌计数,对于大肠杆菌而言,1×109/ml 细菌的OD600≈1。如果细菌量小于0.5×109,R-I,R-II和异丙醇用量减半。如果细菌量大于2×109,R-I,R-II和异丙醇按比例增加。

2. 加入400 μl Buffer R-Ⅰ,用装有21-25号针头的注射器反复抽吸8-10次,转入1.5 ml离心管(试剂

盒内提供)中。

3. 加入150 μl Buffer R-Ⅱ,漩涡振荡15-30 s,12,000×g离心5 min。

* 建议在4℃下离心。

4. 取上清至1.5 ml离心管中,加入250 μl异丙醇,混和均匀。

步骤5-10可选择离心法或负压法

A.离心法

5A. 将制备管置于2 ml离心管(试剂盒内提供)中,转移步骤4中的混合液到制备管中,6,000×g 离心1 min。

* 建议在4℃下离心。

6A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,制备管中加入500 μl Buffer W1A,12,000×g离心1 min。

* 确认在Buffer W1A concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

7A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,制备管中加入700 μl Buffer W2,12,000×g离心1 min;

以同样的方法再用700 μl Buffer W2洗涤一次。

* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

8A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,12,000×g离心1 min。

9A. 将制备管放入一干净的1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中,在制备管膜中央加70-100 μl Buffer TE或RNase-free水。

10A. 室温静置1 min,12,000×g离心1 min,洗脱得RNA。

B.负压法

5B. 将制备管插到负压装置的插口上,将步骤4中的混合液移入制备管中,开启并调节负压至

-20-30英寸汞柱,吸尽管中溶液。

6B. 保持负压,加入500 μl Buffer W1A,吸尽管中溶液。

* 确认在Buffer W1A concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

7B. 保持负压,沿管壁四周加入700 μl Buffer W2,吸尽管中溶液;以同样的方法再用700 μl Buffer W2洗涤一次。

* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

8B. 将制备管置于一个2 ml离心管(试剂盒内提供)中,12,000×g离心1 min。

9B. 将制备管放入一干净的1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中,在制备管膜中央加70-100 μl Buffer TE或RNase-free水。

10B. 室温静置1 min,12,000×g离心1 min,洗脱得RNA。

【从酵母中提取总RNA】

本方案用于从2×106-5×107的酵母细胞中提取RNA。请进行酵母细胞计数,也可用如下方法估算:对于一般酵母培养物而言,3×107/ml酵母细胞的OD600≈1。如果酵母量小于5×106,R-I,R-II 和异丙醇用量减半。如果酵母量大于2×107,R-I,R-II和异丙醇按比例增加。

酵母的破碎和裂解方法有两种:机械法(如下a)和酶法(如下b)。机械法采用加液氮研磨的方法,酶法用Lyticase破壁形成原生质体。

步骤1-4根据酵母的破碎和裂解方式不同可以选择a或b两种实验方法

a. 机械法

1a. 收集0.5-2×107的酵母细胞,6,000×g离心10 min,弃上清。用50 μl PBS 充分悬浮酵母细胞并转移至预冷的研钵中,加液氮研磨成粉末。

2a. 加入400 μl Buffer R-Ⅰ,用装有21-25号针头的注射器反复抽吸8-10次,转入1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中。

3a. 加入150 μl Buffer R-Ⅱ,漩涡振荡15-30 s,12,000×g离心5 min。

* 建议在4℃下离心。

4a. 取上清至1.5 ml离心管中,加入250 μl 异丙醇,混和均匀。

b. 酶法

配置 Buffer YE:

? 1 M山梨糖醇

?0.1 M EDTA, pH 7.5

?使用前加入0.1% (V/V)的β-巯基乙醇

1b. 收集0.5-2×107的酵母细胞到1.5 ml离心管中,6,000×g离心10 min,弃上清。用1 ml 含有Lyticase的Buffer YE 充分悬浮酵母细胞。30°C保温20-30 min,并不时轻柔颠倒以形成原生质体。3,000×g离心5 min,弃上清。

* Lyticase用量按每1×107酵母细胞加50单位计算。

2b. 加入400 μl Buffer R-Ⅰ,用装有21-25号针头的注射器反复抽吸8-10次,转入1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中。

3b. 加入150 μl Buffer R-Ⅱ,漩涡振荡15-30 s,12,000×g离心5 min。

* 建议在4℃下离心。

4b. 取上清至1.5 ml离心管中,加入250 μl异丙醇,混和均匀。

步骤5-10可选择离心法或负压法

A.离心法

5A. 将制备管置于2 ml离心管(试剂盒内提供)中,转移步骤4中的混合液到制备管中,6,000×g 离心1 min。

* 建议在4℃下离心。

6A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,制备管中加入500 μl Buffer W1A,12,000×g离心1 min。

* 确认在Buffer W1A concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

7A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,制备管中加入700 μl Buffer W2,12,000×g离心1 min;

以同样的方法再用700 μl Buffer W2 洗涤一次。

* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

8A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,12,000×g离心1 min。

9A. 将制备管放入一干净的1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中,在制备管膜中央加70-100 μl Buffer TE或RNase-free水。

10A. 室温静置1 min,12,000×g离心1 min,洗脱得RNA。

B.负压法

5B. 将制备管插到负压装置的插口上,将步骤4中的混合液移入制备管中,开启并调节负压至-20-30英寸汞柱,吸尽管中溶液。

6B. 保持负压,加入500 μl Buffer W1A,吸尽管中溶液。

* 确认在Buffer W1A concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

7B. 保持负压,沿管壁四周加入700 μl Buffer W2,吸尽管中溶液;以同样的方法再用700 μl Buffer W2

洗涤一次。

* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

8B. 将制备管置于一个2 ml离心管(试剂盒内提供)中,12,000×g离心1 min。

9B. 将制备管放入一干净的1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中,在制备管膜中央加70-100 μl Buffer TE或RNase-free水。

10B. 室温静置1 min,12,000×g离心1 min,洗脱得RNA。

【从丝状真菌中提取总RNA】

1. 取30-100 mg菌丝体,转移至预冷的研钵中,加液氮研磨成粉末。

*请按下面说明使用组织的量:

当使用的组织量小于30 mg时R-I,R-II和异丙醇的使用量都减半

当使用的组织量大于100 mg时R-I,R-II和异丙醇的使用量按比例增加

2. 加入400 μl Buffer R-Ⅰ,用装有21-25号针头的注射器反复抽吸8-10次,转入1.5 ml离心管(试剂

盒内提供)中。

3. 加入150 μl Buffer R-Ⅱ,漩涡振荡15-30 s,12,000×g离心5 min。

* 建议在4℃下离心。

4. 取上清至1.5 ml离心管中,加入250 μl异丙醇,混和均匀。

步骤5-10可选择离心法或负压法

A. 离心法

5A. 将制备管置于2 ml离心管(试剂盒内提供)中,转移步骤4中的混合液到制备管中,6,000×g 离心1 min。

* 建议在4℃下离心。

6A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,制备管中加入500 μl Buffer W1A,12,000×g离心1 min。

* 确认在Buffer W1A concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

7A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,制备管中加入700 μl Buffer W2,12,000×g离心1 min;

以同样的方法再用700 μl Buffer W2洗涤一次。

* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

8A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,12,000×g离心1 min。

9A. 将制备管放入一干净的1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中,在制备管膜中央加70-100 μl Buffer TE或RNase-free水。

10A. 室温静置1 min,12,000×g离心1 min,洗脱得RNA。

B.负压法

5B. 将制备管插到负压装置的插口上,将步骤4中的混合液移入制备管中,开启并调节负压至-20-30英寸汞柱,吸尽管中溶液。

6B. 保持负压,加入500 μl Buffer W1A,吸尽管中溶液。

* 确认在Buffer W1A concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

7B. 保持负压,沿管壁四周加入700 μl Buffer W2,吸尽管中溶液;以同样的方法再用700 μl Buffer W2洗涤一次。

* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

8B. 将制备管置于一个2 ml离心管(试剂盒内提供)中,12,000×g离心1 min。

9B. 将制备管放入一干净的1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中,在制备管膜中央加70-100 μl Buffer TE或RNase-free水。

10B. 室温静置1 min,12,000×g离心1 min,洗脱得RNA。

五、操作流程图

加入样品和400 μl Buffer R-I 加入150 μl Buffer R-II

12,000×g离心 5 min

加入250 μl 异丙醇

加入500 μl Buffer W1A

加入700 μl Buffer W2

加入700 μl Buffer W2

加入70-100 μl Buffer TE (或RNase-free水)裂解

中和结合

结合洗涤

洗脱

高纯度质粒小量快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://https://www.360docs.net/doc/bc10894234.html, HighPure Plasmid Mini Kit 高纯质粒小量快速提取试剂盒 目录号:PL03 试剂盒组成、储存、稳定性: 试剂盒组成保存 50次 (PL0301) 100次 (PL0302) 200次 (PL0303) 平衡液室温5ml 10ml 20ml RNaseA(10mg/ml)-20℃150μl 250μl 500μl 溶液P1 4℃15 ml 25 ml 50 ml 溶液P2 室温15 ml 25 ml 50 ml 溶液P3 室温20 ml 35 ml 70 ml 去蛋白液PE 室温16ml 31.5 ml 63 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温10ml 15ml 20ml 吸附柱AC 室温50个100个200个 收集管(2ml)室温50个100个200个 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项: 1.第一次使用时,将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后(终浓度100ug/ml) 置于2-8℃保存。如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会有微量RNA 残留,在溶液P1中补加RNase A即可。 2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀,可在37℃水浴加热几分 钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。 3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍:

本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点: 1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附 量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2.独有的去蛋白液配方,可以高效去除残留的核酸酶,即使是核酸酶含量丰富的菌 株如JM系列、HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。 3.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。获得的 质粒产量高、纯度好,可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。 注意事项 1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机, 如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2. 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒,建议 接种单菌落于1.5-4.5 ml加合适抗生素的LB培养基,过夜培养14-16个小时,可提取出多达20μg的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒,应适当加大菌体使用量,使用5-10 ml过夜培养物,同时按比例增加P1、P2、P3的用量,其它步骤相同。 3. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260 值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带,也可能为2条或者多条DNA条带,这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成,与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。 4. 质粒DNA确切分子大小,必须酶切线性化后,对比DNA分子量Marker才可以知 道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒,泳动位置不确定,无法通过电泳知道其确切大小。 5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗 脱,但应该确保pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在-

microRNA快速提取试剂盒

◆RNAmisi microRNA快速提取试剂盒◆目录号1105 ◆使用手册 ◆实验室使用,仅用于体外

RNAmisi microRNA快速提取试剂盒 目录号:1105 目录编号包装单位 110501 50次 适用范围: 适用于快速提取各种细胞组织miRNA和其它各种小RNA 试剂盒组成、储存、稳定性: 试剂盒组成保存50次 Lysis/Binding buffer 4°C避光50 ml 70%乙醇室温9ml RNase-free H2O 第一次使用前按说明加指定量乙醇 Wash Solution 1 室温12 ml 第一次使用前加入28ml无水乙醇 Wash Solution 2/3 室温10 ml 第一次使用前加入42ml无水乙醇 RNase-free H2O 室温10 ml 吸附柱RA和收集管室温50套 microRNA吸附柱MA 和收集管 室温50套本试剂盒按照指示储存6个月不影响使用效果。

储存事项 1.Wash Solution 1和Wash Solution 2/3加入无水乙醇后,可以在常温保存一个月, 如果要更长时间保存,请存放在4°C,但是使用前,应该先回复到室温。 2.Wash Solution 2/3可能加入乙醇使用几天后出现沉淀晶体,并不影响使用,直接 不吸晶体,吸上清使用就可以。 3.运输在常温下进行,不影响使用效果。 4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及 时盖紧盖子。 产品介绍: 近年来对RNA干扰和调节性小RNA的广泛研究迫切需要一种能有效提取15-30核苷酸左右大小RNA(包括siRNA和miRNA)的试剂盒。但是传统的RNA提取方法如硅胶膜不能有效吸附回收,酚/胍抽提和乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA。本试剂盒采用独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,强烈有机抽提去除蛋白和DNA,RNA包括微小分子RNA吸附于离心柱内特殊硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质进一步去除,最后低盐的洗脱液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

DNA提取试剂盒步骤--最新

组织基因组DNA提取试剂盒(离心柱型) 储存条件 该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。 注意事项 1.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇。2.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。 3.若缓冲液GA或GB中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。 4.所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。 操作步骤 使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。 1. 处理材料 用干烤过的镊子和剪刀剪取一定量的冰冻组织,体积约两个绿豆大小,放入DNAase-free的1.5ml EP中。向EP管中加入等体积的磁珠,以及加入200 μl缓冲液GA,振荡悬浮。置于组织破碎仪中运行5mins/次,共3次。每破碎一次,需将含组织的EP管放入离心机中短暂离心来沉淀组织和磁珠,使其在下次破碎时更好的接触。可根据观察匀浆的效果来决定匀浆的次数,目标是“碾磨均匀”,不能有较大体积的组织块(>2mm的组织块)。 如果需要去除RNA,需加入4 μl RNaseA(100 mg/ml)溶液(客户自备,目录号:RT405-12),振荡15 sec,室温放置5 min。 2. 加入20 μl Proteinase K溶液,混匀。提取组织基因组时,加入Proteinase K混匀后,在56℃放置1~3 h,直至组织溶解,每小时颠倒混合样品2-3次,用水浴振荡器也可。放入10,000rpm (~11,500×g) 的离心力高速离心1mins来沉淀未碾碎的组织和磁珠。将上清转移至新的EP管中。 3. 加入200 μl缓冲液GB,充分颠倒混匀,70℃放置10 min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。 4. 加人200 μl 无水乙醇,充分振荡混匀15 sec,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。 5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放回收集管中。 6. 向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD (使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。 7. 向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。 8. 重复操作步骤7。

总RNA提取试剂盒使用说明

总RNA提取试剂盒使用说明 货号:R1200 规格:50T/100T 产品内容: 试剂盒组成R1200-50R1200-100保存有效期 裂解液50ml100ml2-8℃一年 漂洗液15ml15ml×2RT一年 洗柱液50ml50ml×2RT一年RNase free ddH2O15ml15ml×2RT一年RNase free吸附柱50个100个RT一年RNase free收集管(2ml)50个100个RT一年 操作步骤: 1.样品处理: a.植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀。 b.动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。 c.贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每106细胞加1ml裂解液。用取样器吹打混匀。 d.细胞悬液:离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。

e.血液处理:取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置10分钟,10000rpm离心1分钟。弃上清,若沉淀含有红细胞,可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。 2.将处理后的样品在室温放置5分钟,使得核酸蛋白复合物完全分离。 3.向匀浆样品中加0.2ml氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置3-5分钟。 4.2-8℃12000rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中,把水相转移到新管中,不要吸到沉淀。 5.吸附柱前处理:在吸附柱中加入500ul洗柱液,室温放置2分钟,2-8℃12,000rpm 离心2min,弃废液。 6.第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀,加入吸附柱静置2分钟,2-8℃12000rpm 离心2min,弃废液。 7.向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),2-8℃12,000rpm 离心2min,弃废液。 8.向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8℃12,000rpm离心2min,弃废液。 9.12000rpm离心2min,弃掉收集管,将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。 10.将吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O,室温放置5min,12000rpm室温离心2min即得 到RNA。 注意事项: 1,所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品,操作过程要小心,带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。

质粒提取试剂盒-说明书-翻译

精品文档 。 1欢迎下载 E.Z.N.A.? 质粒小提试剂盒操作规程(英文版译文) (适用于No. D6942, D6943 & D6944) 1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落,接种含适当选择性抗生素的1-5ml 的LB 培 养基进行培养。37℃强力摇动(~300rpm )孵育12-16h 。使用10-20ml 培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。强烈推荐使用endA 阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。此类菌株包括DH5α和JM109。 2. 将1.5-5.0ml 细菌室温10,000 x g 离心1min 。轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。 3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A 重悬沉淀,涡旋或用移液器反复吹打。充分重悬沉 淀对于获得高质量的DNA 非常重要。 4. 加入250μl 溶液II ,倒置、转动试管数次使之轻轻混匀,得到透明的裂解产物。 可能需要孵育2min 。不要用力混合,以免使染色体DNA 断裂,减低质粒的纯度。该步反应不要超过5min 。溶液II 不用时要拧紧瓶盖,以免试剂被空气中的CO2酸化。 5. 加入350μl 溶液III ,立即倒置试管数次混匀,直至白色絮状沉淀物形成。为避免 形成局部沉淀,加入溶液III 后应立即、充分混匀溶液。 6. 室温≥10,000 x g 离心10分钟。白色沉淀物形成,立即进行下一步操作。 7. 小心翼翼.... 的吸取上清液,加入装配在2ml 收集管中的小量纯化柱I 中。确保离心沉淀未受扰动,确保没有细胞碎片加入到柱子中。室温下10,000 x g 离心1分钟,使裂解液完全通过柱子。 8. 丢弃滤过液,重新使用2ml 收集管;加入500μl HB 缓冲液清洗柱子,室温10,000 x g 离心1分钟,使溶液完成通过柱子。该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除,以保证获得高品质的DNA 以适合于下游的应用。 9. 丢弃滤过液,重新使用2ml 收集管;加入700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液清 洗柱子,室温10,000 x g 离心1分钟,使溶液完全通过柱子,丢弃滤过液。 注意:DNA 清洗液的浓缩液使用前必须用无水乙醇稀释(5倍稀释),如果DNA 清洗液稀 释液经过冷藏,则使用之前必须置于室温。 10. 可选步骤:重复清洗,加入另外的700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液。 11. 将空柱子≥13,000 x g 离心2min ,使柱子的基质干燥。此步骤为关键操作,不可 遗漏。 12. 将柱子放入干净的1.5ml 微量离心管中。将30-50μl (取决于终产物的期望浓度) 洗脱液或无菌去离子水直接加入柱子基质上,使之于室温下静置1-2min 。≥13,000 x g 离心1min 洗脱DNA 。可以进行二次洗脱,以收集残存的DNA 。 13. DNA 的产量和质量:分别在波长260nm 和280nm 处测定样品适当稀释液的吸光度。DNA 的浓度计算如下: DNA 浓度=A 260×50×(稀释倍数)μg/ml A 260/A 280的比率可以反映核酸的纯度。比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。或者,DNA 的产量(及质量)有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA 样品相比较更好的予以确定。通常情况下洗脱的大部分DNA 是超螺旋单体形式,但也可能存在串联体形式。 张小强 翻译

RNA试剂盒提取步骤

常规植物样品总RNA小量抽提 1. 植物样品的研磨。 ?收集植物样品并尽快浸泡到液氮中以防止RNA 的降解。使用研钵、研磨棒和液氮将植物样品研磨成尽量细小的粉末。RNA 的产量取决于样品类型和研磨效果。 注:研磨后的植物粉末可直接保持于-70°C。 ?快速称取50-100mg 的研磨好的植物样品至1.5ml 预冷的离心管中。 注:在加入裂解液之前,不要让样品解冻。初次使用时,推荐先使用50mg,待取得理想结果后, 再酌情提高用量。 2. 立即加入500μlBuffer RL/β-ME混合液至样品中。立即于最高速度涡旋30-60 秒 充分打散样品,室温静置3-5 分钟让样品充分裂解。 注:使用前分装适量的Buffer RL,每1ml Buffer RL 加入20μl β-疏基乙醇(β-ME)或2M DTT。 若植物用量增加超过100mg,按比例增加Buffer RL/2-ME 的用量。 3. 室温下,14,000 x g 离心5 分钟。 4. 把gDNA 过滤柱装在2ml 收集管中。把第三步的上清液转移至gDNA过滤柱中。14,000 x g 离心1 分钟。 5. 弃去gDNA 过滤柱。加入0.5倍体积无水乙醇(~250μl)至滤液中。用移液枪吸打3-5次混匀。 6. 把HiPure RNA Mini Column 装在2ml 收集管中。转移第5 步的混合液至RNA柱子中。10,000 x g 离心30-60 秒。 7. (可选)这一步可插入DNase 进行膜上消化。(请另外订购DNase On Column Kit 进化 膜上DNase 消化)。 8. 倒弃滤液,把柱子装在收集管中。加入500μl Buffer RW1 至柱子中。10,000 x g 离心30-60 秒。9. 倒弃滤液,把柱子装回收集管中。加入600μl Buffer RW2 (已用乙醇稀释)至柱子中。10,000 ×g 离心30-60 秒。 注:在使用Buffer RW2 之前,必须按瓶子标签指示用无水乙醇进行稀释。 10. 倒弃滤液,把柱子重新装回收集管中。加入600μl Buffer RW2(已用乙醇稀释)至柱 子中。10,000×g 离心30-60 秒。 11. 倒弃滤液,把柱子套回空的收集管。10,000 ×g 离心空柱2 分钟甩干柱子。 12. 将柱子转移至新的1.5ml 离心管。加入30-50μl DEPC 水至柱子的膜中央。静置2 分钟。10,000 ×g 离心1 分钟。 13. (可选)再加入30-50μl DEPC 水至柱子的膜中央。静置2 分钟。10,000 ×g 离心1 分钟。 注:HiPure RNA Column 最小的洗脱体积是30μl,小于30μl 会导致RNA 的洗脱效率下降。如果RNA 产量超过30μg,推荐按第13 步进行第二次洗脱。 14. 弃去柱子,把RNA 保存于-80oC。

大量全血基因组DNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书

大量全血基因组DNA提取试剂盒 目录号:DN04 DN0401 16次×10ml DN0402 32次×10ml DN0403 96次×10ml 适用范围: 适用于快速提取各种动物全血基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性: 试剂盒组成保存16次×10ml 32次×10ml 96次×10ml 10x红细胞裂解液室温50 ml 100 ml 300 ml 细胞核裂解液室温180 ml 180×2 ml 250 m l×4 蛋白沉淀液室温55 ml 110 ml 330 ml DNA溶解液室温15 ml 30 ml 90 ml 本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。 储存事项: 1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀,可在 37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。 2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,如果不 能完全溶解,也不影响使用效果,直接取用上层溶液即可。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍: 本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞,细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA,然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA 溶解液。 产品特点: 1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全。 2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。 3.快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。 4.结果稳定,产量高(典型的产量10ml全血可提取出150-500μg),OD260/OD280 典型的比值达 1.7~1.9,长度可达50kb-150kb,可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。 注意事项 1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到2,500 x g,并配备容纳50ml心 管转头的传统台式离心机。 2.用户需自备异丙醇和70%乙醇。 3.典型的产量10ml全血可提取出150-500μg基因组DNA(不同样品尤其疾病样品中 中白细胞数量差异可能非常大,因此产量的个体差异也可能非常大)。 4.本试剂盒为溶液型,可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量 (20μl-10ml),请联系我们索取其它处理量的操作手册。

细菌总RNA提取说明-生工

细菌总RNA快速抽提试剂盒 产品编号:SK8625/SK8626 包装规格:50次/100次 试剂盒组成 组分 SK8625,50次 SK8626,100次 Buffer Rlysis-B 50 ml 100 ml DEPC-treated ddH2O 30 ml 60 ml 操作手册1份1份 保存方法及注意事项 试剂盒于常温运输,4°C保存。有效期见包装。 产品介绍 本试剂盒是生工生物工程(上海)有限公司最新研制成功的一种细菌总RNA快速抽提试剂盒。因为细菌RNA半衰期很短,RNA很容易发生降解。针对这一难题,本试剂盒采用溶菌酶与裂解液Buffer Rlysis-B共同作用,快速裂解样品,再通过氯仿抽提、无水乙醇沉淀等步骤,可获得浓度高、完整性好的RNA。适合于从各种来源的细菌(革兰氏阳性或阴性菌等)培养液中快速提取RNA。 使用本试剂盒,从1 ml对数生长期的细菌菌液中提取5~15 μg总RNA,可直接用于RT-PCR、Northern Blot、斑点杂交等实验。 本产品具有以下特点: 1. 操作简单,全过程可在40分钟内完成。 2. 完整性好,纯化的RNA几乎不会发生降解。 3. 纯度高,OD260/280一般为2.0。 试剂准备 自备试剂:无水乙醇、75%乙醇、溶菌酶、氯仿等。 标准抽提步骤 4. 取1 ml对数生长期的细菌,8,000 rpm 4°C离心1 min,彻底弃掉培养基,加100 μl溶菌酶,振荡混匀。(G-菌使用的溶 菌酶浓度为400 μg/ml,室温酶解3~5分钟;G+菌使用的溶菌酶浓度为3 mg/ml,室温酶解5~10分钟。) ?收集菌体后可用500 μl DEPC-treated ddH2O漂洗一次,10,000 rpm离心1分钟,弃上清,进一步去除残留的培养基。 5. 立即加入900 μl Buffer Rlysis-B震荡混匀,室温放置3 min。 6. 向裂解样品中加入200 μl 氯仿,充分混匀。12,000 rpm 4°C离心5 min,取上清。 7. 向上清液中加入1/3 体积无水乙醇,混匀,室温放置3 min,12,000 rpm 4°C离心5 min,小心倒掉上清。 ?离心后,在离心管底部,可能无肉眼可见的沉淀产生,属正常现象,请继续以下操作。 8. 用700 μl的75%乙醇(请用DEPC-treated ddH2O配制)洗涤沉淀,12,000 rpm 4°C离心3 min, 小心倒掉上清。 9. 重复步骤5一次。 10. 室温倒置10 min,尽可能使离心管中残留的乙醇彻底挥发。加入30-50 μl的DEPC-treated ddH2O溶解沉淀,立即使用或 -70°C长期保存。 ?如果残留的乙醇有挂壁现象,倒掉液体后再短暂离心,将残液用移液器吸出。然后开盖室温放置5~10分钟至残留的乙

组织基因组DNA提取试剂盒磁珠法

组织基因组DNA提取试剂盒(磁珠法) 使用说明书(Cat#Yu-TD02-1) 【产品介绍】 组织基因组DNA提取试剂采用国内领先的专利技术合成的纳米磁珠颗粒和多次实验优化的缓冲液体系,能从样品中分离纯化高质量DNA。在一定条件下,磁珠表面修饰的基团高效吸附目的DNA,而当条件改变时,磁珠释放吸附的DNA,达到快速分离纯化DNA的目的。整个过程安全、无毒、便利,提取的DNA质量稳定、纯度高。纯化后的DNA适用于多种后续实验。本试剂盒可以从少量动物组织中分离纯化出高质量、高浓度的DNA。 【产品特点】 1. 效率高:DNA提取得率高,操作简便。 2. 安全、无毒害:整个操作过程无需使用苯酚、氯仿等有毒物质,提取环境更加安全。 3. 高纯度:OD260/230在1.5左右,OD260/280在2.0左右。可直接用于各种分子生物学实验。 【试剂盒组成】 【规格】50T/盒 【自备试剂】无水乙醇,异丙醇 【贮藏与有效期】 裂解吸附液和Buffer AW1必须室温(15-25℃)避光保存;磁珠室温保存;其他所有试剂室温保存,有效期为1年。 【注意事项】

1、Buffer AW1使用前,加入18mL无水乙醇,混匀,使乙醇含量为60%。★ 2、Buffer AW2使用前,加入21mL无水乙醇,混匀,使乙醇含量为70%。★ 3、磁珠使用前必须充分混匀。★ 4、组织最好置于组织核酸(DNA/RNA)保存液(Cat#Yu-TP01)或液氮中保存。【操作步骤】 1、样本的处理 1.1、液氮中保存的组织将组织在液氮中磨成粉末后,使液氮充分挥发。再以50-100mg组织中加入1mL裂解吸附液,充分研磨。以下进入步骤2。 1.2、组织保存液中保存的样本取出在组织保存液中保存的组织,加入1mL无水乙醇洗涤组织两次。再以50-100mg组织中加入1mL裂解吸附液,充分研磨。以下进入步骤2。 2、吸取400μL研磨后的裂解吸附液转入1.5mL的EP管中,加入5μL蛋白酶K,60℃1500rpm10分钟。 3、取出EP管,加入250μL异丙醇和10μL混匀的磁珠,闭盖,充分混匀。室温1500rpm振荡10min。 4、取出EP管,瞬时离心,将EP管放于磁力架上,吸附磁珠4分钟。 5、在磁力架上,打开EP管盖,吸弃液体,保留磁珠。 6、加入600μL Buffer AW1,闭盖。从磁力架上取下EP管,充分混匀使磁珠完全分散至洗液中。 注:可以在漩涡振荡仪上3000rpm振荡20秒,使EP管壁上的磁珠完全分散至洗液中。 7、将EP管放回磁力架,吸附磁珠3分钟至液体清澈(吸附磁珠2分钟后,颠倒磁力架3次,使EP管盖上残留的磁珠被充分回收)。打开EP管盖子,吸弃液体,保留磁珠(需吸干EP管底和管盖中的残留液体)。 注:由于各个实验室磁力架磁力不尽相同,吸附时间可以延长,直至液体清澈。 8、加入600μL Buffer AW2,闭盖。从磁力架上取下EP管,充分混匀使磁珠完全分散至洗液中。 注:可以在漩涡振荡仪上3000rpm振荡20秒,使EP管壁上的磁珠完全分散至洗液中。

高纯度质粒小提试剂盒使用说明书

高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit (目录号:HS0103) 产品包装 试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml) 150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml) 50个 (注意:使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀,2 ~ 8℃保存) 保存条件 本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存,可稳定保存6个月。 产品简介 本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理,质粒可从菌体中释放出来,并特异、高效地被离心柱硅胶膜(Spin Columns PA )吸附。通过去蛋白液(Buffer PD )和漂洗液(Buffer PW )的清洗可去除蛋白及其他杂质,在低盐、高pH 条件下洗脱,最后得到高纯度的质粒DNA 。 北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.

使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA,可在30 min之内完成提取任务。所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。 产品特点 1. 快速:步骤少,操作简便,节约时间。 2. 简便:离心吸附柱不需要预平衡,漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇,即开即用。 3. 纯度高:所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。 操作步骤 1. 取1 ~ 5 ml过夜培养的菌液,室温12,000 rpm离心1 min,尽量将上清去除干净。 (注意:根据菌液的浓度决定取液量,浓度高时取1 ml菌液离心即可,浓度低时可多收集一次) 2. 加入250 ul Buffer P1,用枪头充分吹打使菌体重悬均匀。 (注意:是否将RNase A溶液加到Buffer P1中并混合均匀;菌体沉淀是否悬浮充分,如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解,导致提取的质粒浓度及纯度降低) 3. 加入250 ul Buffer P2,温和颠倒混匀6 ~ 8次,直到溶液变得清亮粘稠。 (注意:不可剧烈震荡,以免造成基因组DNA片段的污染,所用时间不要超过5 min,以免质粒受到破坏,如未完全变得清亮,可能是菌体太多,可增加Buffer P2的用量,在后续的操作中Buffer P3的用量也要相应增加) 4. 加入350 ul Buffer P3,立即温和颠倒混匀6 ~ 8次,可见白色沉淀物产生,室温静置2 min,然后12,000 rpm离心3 ~ 5 min。 (注意:Buffer P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀,如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清) 5. 小心将上清液转移到离心吸附柱Spin Columns PA中,静置2 min,让质粒DNA与吸附柱中的硅胶膜充分结合。12,000 rpm离心0.5 ~ 1 min,弃收集管中的废液。 6. 向吸附柱中加入500 ul去蛋白液,12,000 rpm离心1 min,弃收集管中废液。 (注意:如果宿主菌是endA-,如DH5α若TOP10,此步骤可省略。如果宿主菌是endA+,如TG1、BL21、HB101、JM101等,此步骤不可省略,因这些宿主菌含有大量的核酸酶,易降解质粒。如果提取低拷贝质粒

TransZol法rna提取试剂盒说明

TransZol法RNA提取步骤 准备试剂:氯仿、无水乙醇。 1.菌体处理 (1)将发酵后的菌体小心地转入1.5ml离心管中,用纯水冲洗菌体,12000rpm离心2min,仔细去除培养基上清。 (2)加入TransZol TM Up (每≤2×109个细菌中加入1ml TransZol TM Up)。 (3)用移液枪反复吸吹直至裂解液中无明显沉淀。 (4)室温静置5min。 2. 每使用1ml TransZol TM Up,加入0.2ml氯仿或50ul 4-Bromoanisole(间溴茴香醚),剧烈震荡30s,室温孵育3min。 3. 10000×g 4℃离心15min。此时溶液分成三层,无色的水相(上层)、中间层,粉红色有机相(下层)。RNA分布在水相中,水相体积约为所用TransZol TM Up 试剂的50%-60%(为了避免吸到中间层导致DNA污染,可以适当留下一部分水相)。 4. 转移无色的水相于新的RNase-free离心管中,加入等体积的无水乙醇(此时可能会出现沉淀),轻轻颠倒混匀。 5. 将得到的溶液和沉淀一起加入离心柱中,12,000×g 室温离心30s,弃掉流出液(如果体积大于离心柱容量,可以分几次完成)。 6. 加入500ul CB9,12,000×g 室温离心30s,弃掉流出液。 7. 重复步骤6一次。 8. 加入500ul WB9(使用前请先检查是否加入无水乙醇),12,000×g 室温离心30s,弃掉流出液。 9. 重复步骤8一次。 10.12,000×g 室温离心2min,彻底去除残留的乙醇,在室温静置数分钟彻底晾干离心柱。 11.将离心柱放入RNase-free Tube(试剂盒已配)中,加50-200ul RNase-free Water 在离心管的中央,室温静置1min。 12. 12,000×g 室温离心1min,洗脱RNA。 (可选步骤:为获得更多的RNA,建议重复步骤11和12进行二次洗脱)。

DNAzol基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

DNAzol 基因组DNA快速提取试剂 目录号:DN26 DN2601 50ml DN2602 100ml 产品介绍: DNAzol 是一种完全的、可直接使用的基因组DNA提取试剂,简单高效,结果可靠,可快速提取基因组DNA,适用于多种大量或少量样品。DNAzol 可在一个步骤中裂解细胞并水解RNA,经过乙醇沉淀后即可快速得到基因组DNA。整个过程只需10-30 分钟,DNA 回收率可达70-100%,得到的DNA 不需再纯化,可直接用于Southern 杂交、斑点杂交、分子克隆、PCR 反应和其他分子生物学应用。 产品储存: 室温保存至少一年。 注意事项: DNAzol 有毒害性,应避免直接接触皮肤和眼睛。 操作步骤:(实验前请先阅读注意事项) 1.裂解,匀浆 a.组织:25-50mg 组织加1ml DNAzol ,使用匀浆仪处理5-10 次。少量 (5-10mg)柔软组织,如脾或脑组织,可切成或者捣成小块使用微量取样器吹打

混匀,室温放置5-10 分钟。 b.细胞:单层培养的细胞应直接裂解,倒出培养基,加入DNAzol 用取样器吹 打几次混匀。每10cm2 细胞培养板加0.75-1.0ml DNAzol。 c.细胞沉淀或悬浮液:每1-3×107细胞(体积小于0.1ml)加1ml DNAzol,反复 吹打混匀。 以上均要使用大口径枪头吹打,以免过度剪切断基因组。 2.离心 4 -25℃,10000g 离心10 分钟。将得到的上清转入新管。 此步骤去除组织碎片、部分水解的RNA和多糖。如果所提样品为含较多细胞和细胞外物质的样品,如肝、肌肉和大部分植物组织等,或要提取不含RNA 的DNA 时,可加此步骤。其他样品可省略此步。 3.沉淀 每使用1ml DNAzol 加0.5ml 100%乙醇,颠倒离心管5-8 次,混匀样品至出现DNA 沉淀,室温放置1-3分钟。可以看见DNA 絮状沉淀,让沉淀自然沉降到管底,尽可能吸弃上清。用枪头搅绕DNA贴附在离心管上端壁上,仔细吸弃剩下的在管底和管壁的上清。如果因为剪切太厉害导致形成小片段或者量少的DNA(少于15ug),无法缠绕到枪头上,可在4 -25℃,4000g 离心1-2分钟沉淀DNA,弃上清。 4.漂洗 用0.8-1ml 75%乙醇漂洗DNA 两次。漂洗时,将DNA 悬浮在乙醇中,颠倒离心管3-6 次,然后静置0.5-1 分钟使DNA 沉降到管底,尽可能吸弃上清。 如果需要,可在4 -25℃,1000g 离心1-2 分钟沉淀DNA。从组织中提取DNA 时,如需去除其他内含物,第一次漂洗可用70%DNAzol 和30%乙醇的溶液代替75%乙醇。

OMEGArna提取试剂盒中文说明

E.Z.N.A. Total RNA Kit I (R6834-01 50 preps) 步骤 A . 真核细胞和组织 自己需要的材料: β-巯基乙醇、70%乙醇(DEPC 水配置)、除RNase 的枪头和EP 管。 材料的最佳量 想得到最佳的产量和好的Hibind RNA 柱的纯化效果,选用正确的细胞和组织量是最重要的。Hibind RNA 柱的最大处理量是可变的,根据细胞和组织的类型。最大的结合能力是100ug 的RNA 。TRK 裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg 的组织。 细胞的步骤 1. 用500ul 的TRK 裂解缓冲液裂解细胞(≤1*107),使细胞团松散,轻轻弹EP 管或者用 枪头吹旋,再用漩涡振荡混匀。 a) 使用前每1ml TRK 裂解缓冲液加入20ul 的β-巯基乙醇。 b) 如果是单层的组织培养细胞(成纤维细胞,内皮细胞等),可以直接在细胞培养器 里裂解细胞。完全吸去培养基后直接加TRK 裂解缓冲液至细胞中。加700ul 的TRK 到T35细颈瓶或10cm 的培养皿中,更小的培养器加500ul 的TRK 。将液体布满整个器皿表面,确保细胞裂解完全。将裂解产物转移至1.5mlEP 管中。 c) 如果细胞是悬液培养,收集细胞(≤1,500rpm or 400*g )*5min ,弃上清,加入TRK 裂解液,漩涡振荡混匀。 2. 匀浆化裂解产物 “裂解和匀浆化样品”-第四页有详细的说明,如果细胞≤1*105,漩涡振荡1min 。不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA 的产量还容易造成柱子堵塞。 a) 用匀浆器30 s ,使样品匀浆化。 b) 用钝的针头的注射器(0.9mm 直径),至少吹打5次是样品匀浆化。注射器要除 RNase 。 3. 将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column 中,离心,≥1,4000*g, 3min, 室温。将离心收集的流出液转移到新的EP 管中。转到总RNA 分离中第4步。 组织的步骤: 1. 用500ul 的TRK 裂解缓冲液裂解细胞(≤30mg ),使用前每1ml TRK 裂解缓冲液加入 20ul 的β-巯基乙醇。 500ulTRK 裂解液最大裂解能力30mg ,难破碎的组织大于20mg 就用700ul 的TRK 裂解液。当组织量超出建议的最大量时,也不要超过40mg 。 组织样品匀浆化参照第四页选择一种方法只用,除非是使用液氮, 2. 离心,≥1,5000*g, 5min, 室温。 3. 转移上清至,Homogenization Spin Column 中,离心,≥1,3000*g, 3min,室温。将离心收 集的流出液转移到新的EP 管中。 总RNA 分离: 4. 在裂解产物中加入50%体积(250ul -350ul )的无水乙醇(96%-100%)混匀,漩涡振 荡20s 。 5. 样品转移到Hibind RNA Mini column 上,离心管的最大容量为750ul ,加完乙醇后可能 会形成沉淀。所以要充分振荡将所有的混合液加入到柱子上。室温离心,10,000*g,1min 。弃去流出液(透过柱子流出到离心管里的液体)。 生物秀-专心做生物 w w w .b b i o o .c o m

质粒提取试剂盒 说明书 翻译

E.Z.N.A.?质粒小提试剂盒操作规程(英文版译文) (适用于No. D6942, D6943 & D6944) 1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落,接种含适当选择性抗生素的1-5ml的LB培养基进行培养。37℃强力摇动(~300rpm)孵育12-16h。使用10-20ml培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。强烈推荐使用endA阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。此类菌株包括DH5α和JM109。 2. 将1.5-5.0ml细菌室温10,000 x g离心1min。轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。 3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A重悬沉淀,涡旋或用移液器反复吹打。充分重悬沉淀对于获得高质量的DNA非常重要。 4. 加入250μl溶液II,倒置、转动试管数次使之轻轻混匀,得到透明的裂解产物。可能需要孵育2min。不要用力混合,以免使染色体DNA断裂,减低质粒的纯度。该步反应不要超过5min。溶液II不用时要拧紧瓶盖,以免试剂被空气中的CO2酸化。 5. 加入350μl溶液III,立即倒置试管数次混匀,直至白色絮状沉淀物形成。为避免形成局部沉淀,加入溶液III后应立即、充分混匀溶液。 6. 室温≥10,000 x g离心10分钟。白色沉淀物形成,立即进行下一步操作。 7. 小心翼翼 ....的吸取上清液,加入装配在2ml收集管中的小量纯化柱I中。确保离心沉淀未受扰动,确保没有细胞碎片加入到柱子中。室温下10,000 x g离心1分钟,使裂解液完全通过柱子。 8. 丢弃滤过液,重新使用2ml收集管;加入500μl HB缓冲液清洗柱子,室温10,000 x g离心1分钟,使溶液完成通过柱子。该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除,以保证获得高品质的DNA以适合于下游的应用。 9. 丢弃滤过液,重新使用2ml收集管;加入700μl用无水乙醇稀释的DNA清洗液清洗柱子,室温10,000 x g离心1分钟,使溶液完全通过柱子,丢弃滤过液。 注意:DNA清洗液的浓缩液使用前必须用无水乙醇稀释(5倍稀释),如果DNA清洗液稀释液经过冷藏,则使用之前必须置于室温。 10. 可选步骤:重复清洗,加入另外的700μl用无水乙醇稀释的DNA清洗液。 11. 将空柱子≥13,000 x g离心2min,使柱子的基质干燥。此步骤为关键操作,不可遗漏。 12. 将柱子放入干净的1.5ml微量离心管中。将30-50μl(取决于终产物的期望浓度)洗脱液或无菌去离子水直接加入柱子基质上,使之于室温下静置1-2min。≥13,000 x g离心1min洗脱DNA。可以进行二次洗脱,以收集残存的DNA。 13. DNA的产量和质量:分别在波长260nm和280nm处测定样品适当稀释液的吸光度。DNA的浓度计算如下: DNA浓度=A260×50×(稀释倍数)μg/ml A260/A280的比率可以反映核酸的纯度。比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。或者,DNA的产量(及质量)有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA样品相比较更好的予以确定。通常情况下洗脱的大部分DNA是超螺旋单体形式,但也可能存在串联体形式。 张小强翻译

通用基因组DNA提取试剂盒使用说明

通用基因组DNA提取试剂盒使用说明 货号:D2100 规格:50T/100T 保存:室温(15℃-25℃)干燥保存,复检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。开封后请将RNase A,蛋白酶K于-20℃保存。 试剂盒内容:D2100-50T D2100-100T RNase A1ml1ml×2 蛋白酶K1ml1ml×2 溶液A25ml50ml 溶液B25ml50ml 漂洗液15ml15ml×2 洗脱液15ml30ml 吸附柱50个100个 收集管50个100个 说明书1份1份 产品简介: 本试剂盒为通用型,适合于从土壤,粪便,昆虫,以及其他样本中提取基因组DNA。对细菌,真菌,昆虫等样本都具有很好的裂解效果,最大限度的保留了生物DNA的多态性。 使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好,可直接用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

操作步骤: 使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 1、样品的处理: 1)土壤:称取0.1-0.3g(根据干湿)土壤,放入研钵中,倒入适量的液氮,立即研磨,重复3次,使土壤颗粒研成粉末,加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。 2)粪便:称取0.1-0.3g(根据干湿)粪便,加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。 3)昆虫:称取0.1-0.3g昆虫,倒入适量的液氮,立即研磨,重复3次,使昆虫研成粉末,加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。 4)未知样品,如为细未状,可直接称取0.1-0.3g(根据干湿)加500ul 溶液A,如为块状,可0.1-0.3g用液氮研磨成粉未,再加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。 2、向悬浮液中加入20ul10mg/ml的RNase A,55℃放置10min。 3、加入20ul10mg/ml的蛋白酶K,充分混匀,55℃水浴消化,30min。消化期间可颠倒离心管混匀数次,12000转离心10min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀,可再次离心。 4、加入500ul溶液B,充分混匀。如出现白色沉淀,于55℃放置5min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不彻底,可能导致提取的DNA量少及不纯,还有可能导致上柱后堵柱子,请增加消化时间。

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