紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12 注射液

【实验内容】

1. 对照品溶液和样品溶液的配制

准确称取维生素B12 对照品适量，加水溶解稀释成25μg/mL 的溶液。

精密吸取维生素B12 注射液0.5 ml 于10 ml 容量瓶中，用水稀释至刻度摇匀，得到待测

样品溶液（按标示含量稀释成25μg/ml 的溶液）。

2. 吸收光谱的绘制与注射液的鉴别

取对照品溶液进行光谱扫描（250 ~ 600 nm），得到维生素B12 的吸收曲线，寻找吸收峰，

扫描后可得到在278nm，361 nm 和550 nm 波长处出现的3 个吸收峰，然后在以上3 个吸

收峰处测量维生素B12 注射液的吸光度，并计算A361/A278 和A361/A550 的比值。

3. 维生素B12 的定量测定

根据吸收曲线选择最大吸收波长（在361 nm 或附近）作为测量波长，测量维生素B12

【注意事项】

1. 注意石英比色皿的操作使用；

峰位置波长略有差异。这是因为不同的仪器由于其性能的差异，导致吸光度和波长等参数不同，因此必须对仪器进行定期的校正。

3．比较用吸光系数和校正曲线定量方法，你认为哪种方法好？为什么？

吸光系数法可根据测量得到的吸光度直接计算浓度，简便易行，但仪器性能差异会导致结果误差较大，因此必须对仪器的吸光度和波长进行校正后方能采用此法，且浓度要在复合Beer定律的线性范围内。

校正曲线法是配制一系列标准溶液作为基础进行测量，即使有偏离Beer定律线性关系，也可以应用于测定。因为是在相同条件下测量，有标准溶液的校正，可抵消仪器性能、操作等所带来的系统误差，与前一种方法相比，虽然操作步骤要繁琐些，但准确、可靠，是测定最常用的方法。