电泳原理与应用

电泳原理与应用
电泳原理与应用

在确定的条件下,带电粒子在单位电场强度作用下,单位时间内移动的距离

电泳漆膜具有涂层丰满、均匀、平整、光滑的优点,电泳漆膜的硬度、附着力、

耐腐、冲击性能、渗透性能明显优于其它涂装工艺。

详细特点:[2]

(1)采用水溶性涂料,以水为溶解介质,节省了大量有机溶剂,大大降低了大气污染和环境危害,安全卫生,同时避免了火灾的隐患;

(2)涂装效率高,涂料损失小,涂料的利用率可达90%~95%;

(3)涂膜厚度均匀,附着力强,涂装质量好,工件各个部位如内层、凹陷、焊缝等处都能获得均匀、平滑的漆膜,解决了其他涂装方法对复杂形状工件的涂装难题;

(4)生产效率高,施工可实现自动化连续生产,大大提高劳动效率;

(5)设备复杂,投资费用高,耗电量大,其烘干固化要求的温度较高,涂料、涂装的管理复杂,施工条件严格,并需进行废水处理;

(6)只能采用水溶性涂料,在涂装过程中不能改变颜色,涂料贮存过久稳定性不易控制。

(7)电泳涂装设备复杂,科技含量较高,适用于颜色固定的生产。

编辑本段电泳种类

移动界面电泳

是将被分离的离子(如阴离子)混合物置于电泳槽的一端(如负极),在电泳开始前,样品与载体电解质有清晰的界面。电泳开始后,带电粒子向另一极(正极)移动,泳动速度最快的离子走在最前面,其他离子依电极速度快慢顺序排列,形成不同的区带。只有第一个区带的界面是清晰的,达到完全分离,其中含有电泳速度最快的离子,其他大部分区带重叠。

区带电泳

是在一定的支持物上,于均一的载体电解质中,将样品加在中部位置,在电场作用下,样品中带正或负电荷的离子分别向负或正极以不同速度移动,分离成一个个彼此隔开的区带。区带电泳按支持物的物理性状不同,又可分为纸和其他纤维膜电泳、粉末电泳、凝胶电泳与丝线电泳。

等电聚焦电泳

是将两性电解质加入盛有pH梯度缓冲液的电泳槽中,当其处在低于其本身等电点的环境中则带正电荷,向负极移动;若其处在高于其本身等电点的环境中,则带负电向正极移动。当泳动到其自身特有的等电点时,其净电荷为零,泳动速度下降到零,具有不同等电点的物质最后聚焦在各自等电点位置,形成一个个清晰的区带,分辨率极高。

等速电泳

是在样品中加有领先离子(其迁移率比所有被分离离子的大)和终末离子(其迁移率比所有被分离离子的小),样品加在领先离子和终末离子之间,在外电场作用下,各离子进行移动,经过一段时间电泳后,达到完全分离。被分离的各离子的区带按迁移率大小依序排列在领先离子与终末离子的区带之间。由于没有加入适当的支持电解质来载带电流,所得到的区带是相互连接的(图d),且因“ 自身校正”效应,界面是清晰的,这是与区带电泳不同之处。

电泳分离原理示意图 a 移动界面电泳b 区带电泳 c 等电聚焦电泳 d 等速电泳L 领先离子T 终末离子

编辑本段电泳原理

综述

电泳是电泳涂料在阴阳两极,施加于电压作用下,带电荷的涂料离子移动到阴极,并与阴极表面所产生的碱性物质作用形成不溶解物,沉积于工件表面。它包括四个过程:

电解(分解)

在阴极反应最初为电解反应,生成氢气及氢氧根离子OH ,此反应造成阴极面形成一高碱性边界层,当阳离子与氢氧根作用成为不溶于水的物质,涂膜沉积,方程式为:H2O→OH+H

电泳动(泳动、迁移)

阳离子树脂及H+ 在电场作用下,向阴极移动,而阴离子向阳极移动过程。

电沉积(析出)

在被涂工件表面,阳离子树脂与阴极表面碱性作用,中和而析出不沉积物,沉积于被涂工件上。

电渗(脱水)

涂料固体与工件表面上的涂膜为半透明性的,具有多数毛细孔,水被从阴极涂膜中排渗出来,在电场作用下,引起涂膜脱水,而涂膜则吸附于工件表面,而完成整个电泳过程。

编辑本段电泳

综述

电泳(Electrophoresis)是指带电荷的粒子或分子在电场中移动的现象称为电泳。大分子的蛋白质,多肽,病毒粒子,甚至细胞或小分子的氨基酸,核苷等在电场中都可作定向泳动.1937年Tis

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elius成功地研制了界面电泳仪进行血清蛋白电泳,它是在一U型管的自由溶液中进行的,电泳后用光学系统使各种蛋白所形成折光率差别成为曲线图象,将血清蛋白分为白蛋白,α1-球蛋白,α2-球蛋白,β-球蛋白和γ-球蛋白五种,随后,Wielamd 和Kanig 等于1948年采用滤纸条做载体,成功地进行了纸上电泳。从那时起,电泳技术逐渐被人们所接受并予以重视,继而发展以滤纸,各种纤维素粉,淀粉凝胶,琼脂和琼脂糖凝胶,醋酸纤维素薄膜,聚丙烯酰胺凝胶等为载体,结合增染试剂如银氨染色,考马斯亮蓝等大大提高和促进生物样品着色与分辨能力,此外电泳分离和免疫反应相结合,使分辨率不断朝着微量和超微量(1ng~0.001ng)水平发展,从而使电泳技术获得迅速推广和应用。在此主要介绍常用电泳的一般原理及其应用.

电泳的基本原理

生物大分子如蛋白质,核酸,多糖等大多都有阳离子和阴离子基团,称为两性离子。常以颗粒分散在溶液中,它们的静电荷取决于介质的H+浓度或与其他大分子的相互作用.在电场中,带电颗粒向阴极或阳极迁移,迁移的方向取决于它们带电的符号,这种迁移现象即所谓电泳。

如果把生物大分子的胶体溶液放在一个没有干扰的电场中,使颗粒具有恒定迁移速率的驱动力来自于颗粒上的有效电荷Q和电位梯度E.它们与介质的摩擦阻力f抗衡。在自由溶液中这种抗衡服从Stokes定律.

F=6πrvη

这里v是在介质粘度为η中半径为r的颗粒的移动速度。但在凝胶中,这种抗衡并不完全符合Stokes定律.F取决于介质中的其他因子,如凝胶厚度,颗粒大小,甚至介质的内渗等。

电泳迁移率(mbility)m规定为在电位梯度E的影响下,颗粒在时间t中的迁移距离d.

d

m= ------------ 或 m=V / E

t·E

迁移率的不同提供了从混合物中分离物质的基础,迁移距离正比于迁移率。

影响电泳的因素

1.电泳介质的pH值

溶液的pH值决定带电物质的解离程度,也决定物质所带净电荷的多少.对蛋白质,氨基酸等类似两性电解质,pH值离等电点越远,粒子所带电荷越多,泳动速度越快,反之越慢。因此,当分离某一种混合物时,应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差别的pH值,以利于各种蛋白质的有效分离.为了保证电泳过程中溶液的pH值恒定,必须采用缓冲溶液。

缓冲液的离子强度

溶液的离子强度(Ion intensity)是指溶液中各离子的摩尔浓度与离子价数平方的积的总和的1/2.带电颗粒的迁移率与离子强度的平方根成反比。低离子强度时,迁移率快,但离子强度过低,缓冲液的缓冲容量小,不易维持pH恒定.高离子强度时,迁移率慢,但电泳谱带要比低离子强度时细窄。通常溶液的离子强度在0.02~0.2之间。

I=1/2∑CiZi2 (I:离子强度;Ci:离子的摩尔浓度;Zi:离子价数. )

0.154M NaCl溶液的离子强度为:

I= 1/2(0.154×12+0.154×12)=0.154

0.015M Na2SO4溶液的离子强度为:

I= 1/2(0.015×2×12+0.015×22)=0.045

3.电场强度

电场强度(电势梯度Electric field intensity)是指每厘米的电位降(电位差或电位梯度).电场强度对电泳速度起着正比作用,电场强度越高,带电颗粒移动速度越快。根据实验的需要,电泳可分为两种:一种是高压电泳,所用电压在500~1000V或更高.由于电压高,电泳时间短(有的样品需数分钟),适用于低分子化合物的分离,如氨基酸,无机离子,包括部分聚焦电泳分离及序列电泳的分离等。因电压高,产热量大,必须装有冷却装置,否则热量可引起蛋白质等物质的变性而不能分离,还因发热引起缓冲液中水分蒸发过多,使支持物(滤纸,薄膜或凝胶等)上离子强度增加,以及引起虹吸现象(电泳槽内液被吸到支持物上)等,都会影响物质的分离.另一种为常压电泳,产热量小,室温在10~25℃分离蛋白质标本是不被破坏的,无需冷却装置,一般分离时间长。

4.电渗现象

在电场中液体对于一个固体的固定相相对移动称为电渗.在有载体的电泳中,影响电泳移动的一个重要因素是电渗。最常遇到的情况是γ-球蛋白,由原点向负极移动,这就是电渗作用所引起的倒移现象.产生电渗现象的原因是载体中常含有可电离的基团,如滤纸中含有羟基而带负电荷,与滤纸相接触的水溶液带正电荷,液体便向负极移动。由于电渗现象往往与电泳同时存在,所以带电粒子的移动距离也受电渗影响;如电泳方向与电渗相反,则实际电泳的距离等于电泳距离加上电渗的距离.琼脂中含有琼脂果胶,,其中含有较多的硫酸根,所以在琼脂电泳时电渗现象很明显,许多球蛋白均向负极移动。除去了琼脂果胶后的琼脂糖用作凝胶电泳时,电渗大为减弱.电渗所造成的移动距离可用不带电的有色染料或有色葡聚糖点在支持物的中心,以观察电渗的方向和距离。

电泳的分类

目前所采用的电泳方法,大致可分为3类:显微电泳,自由界面电泳和区带电泳.区带电泳应用广泛,区带电泳可分为以下几种类型:

按支持物的物理性状不同,区带电泳可分为:

(1)滤纸为支持物的纸电泳;

(2)粉末电泳:如纤维素粉,淀粉,玻璃粉电泳;

(3)凝胶电泳:如琼脂,琼脂糖,硅胶,淀粉胶,聚丙烯酰胺凝胶电泳;

(4)缘线电泳:如尼龙丝,人造丝电泳

2.按支持物的装置形式不同,区带电泳可分为:

(1)平板式电泳:支持物水平放置,是最常用的电泳方式;

(2)垂直板电泳:聚丙烯酰胺凝胶可做成垂直板式电泳。

(3)柱状(管状)电泳:聚丙烯酰胺凝胶可灌入适当的电泳管中做成管状电泳.

3.按pH的连续性不同,区带电泳可分为:

(1)连续pH电泳:如纸电泳,醋酸纤维素薄膜电泳;

(2)非连续pH电泳:如聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳;

电泳所需的仪器

电泳所需的仪器有:电泳槽和电源。

1.电泳槽

电泳槽是电泳系统的核心部分,根据电泳的原理,电泳支持物都是放在两个缓冲液之间,电场通过电泳支持物连接两个缓冲液,不同电泳采用不同的电泳槽.常用的电泳槽有:

(1)圆盘电泳槽:有上,下两个电泳槽和带有铂金电极的盖。上槽中具有若干孔,孔不用时,用硅橡皮塞塞住.要用的孔配以可插电泳管(玻璃管)的硅橡皮塞。电泳管的内径早期为5~7mm,为保证冷却和微量化,现在则越来越细.

(2)垂直板电泳槽:垂直板电泳槽的基本原理和结构与圆盘电泳槽基本相同。差别只在于制胶和电泳不在电泳管中,而是在块垂直放置的平行玻璃板中间.

(3)水平电泳槽:水平电泳槽的形状各异,但结构大致相同。一般包括电泳槽基座,冷却板和电极.

电源

要使荷电的生物大分子在电场中泳动,必须加电场,且电泳的分辨率和电泳速度与电泳时的电参数密切相关。不同的电泳技术需要不同的电压,电流和功率范围,所以选择电源主要根据电泳技术的需要.如聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS电泳需要200~600V电压。

电泳技术的应用

1.聚丙烯酰胺凝胶电泳可用做蛋白质纯度的鉴定.聚丙烯酰胺凝胶电泳同时具有电荷效应和分子筛效应,可以将分子大小相同而带不同数量电荷的物质分离开,并且还可以将带相同数量电荷而分子大小不同的物质分离开。其分辨率远远高于一般层析方法和电泳方法,可以检出10-9~10-12g的样品,且重复性好,没有电渗作用.

2.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可测定蛋白质分子量.其原理是带大量

电泳管路

电荷的SDS结合到蛋白质分子上克服了蛋白质分子原有电荷的影响而得到恒定的荷/质比。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测蛋白质分子量已经比较成功,此法测定时间短,分辨率高,所需样品量极少(1~100μg),但只适用于球形或基本上呈球形的蛋白质,某些蛋白质不易与SDS结合如木瓜蛋白酶,核糖核酸酶等,此时测定结果就不准确.

3.聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于蛋白质定量。电泳后的凝胶经凝胶扫描仪扫描,从而给出定量的结果.凝胶扫描仪主要用于对样品单向电泳后的区带和双向电泳后的斑点进行扫描。

4.琼脂或琼脂糖凝胶免疫电泳可用于①检查蛋白质制剂的纯度;②分析蛋白质混合物的组分;③研究抗血清制剂中是否具有抗某种已知抗原的抗体;④检验两种抗原是否相同.

电泳后结果检测

对于不同的目的,应采用不同的检测方法。用染料和生物大分子结合形成有色的复合物是电泳后检测最常用的方法.

(七)聚丙烯酰胺凝胶电泳结果不正常现象和对策1.指示剂前沿呈现两边向上或向下的现象。向上的"微笑"现象说明凝胶的不均匀冷却,中间部分冷却不好,所以导致凝胶中分子有不同的迁移率所致.这种情况在用较厚的凝胶以及垂直电泳中时常发生。向下的"皱眉"现象常常是由于垂直电泳时电泳槽的装置不合适引起的,特别是当凝胶和玻璃板组成的"三明治"底部有气泡或靠近隔片的凝胶聚合不完全便会产生这种现象.

2."拖尾"现象是电泳中最常见的现象。这常常是由于样品溶解不佳引起的,克服的办法是在加样前离心,选用合适的样品缓冲液和凝胶缓冲液,加增溶辅助试剂.另一方法是降低凝胶浓度。

3."纹理"现象常常是由于样品中不溶颗粒引起的,克服办法是增加溶解度和离心除去不溶性颗粒.

4.蛋白带偏斜常常是由于滤纸条或电极放置不平行所引起的,或由于加样位置偏斜而引起。

5.蛋白带过宽,与邻近蛋白泳道的蛋白带相连,这是由于加样量太多或加样孔泄漏引起的.

6.蛋白带模糊不清和分辨不佳是由于多种原因引起的。虽然梯度凝胶可以提高分辨率,但与其他方法相比,常规聚丙烯酰胺凝胶电泳是分辨率较低的方法.

为了提高分辨率,不要加过多的样品,小体积样品可给出窄带。加样后应立即电泳,以防止扩散.选择合适的凝胶浓度,使组分得以充分的分离。通常靠近前沿的蛋白带分辨率不佳,所以应根据分子量与凝胶孔径的关系,灌制足够长度的凝胶,以使样品不会走出前沿.样品的蛋白水解作用也引起扩散而使分辨率降低。水解作用通常发生在样品准备的时候,系统中的内源性蛋白酶会水解样品蛋白,如果在缓冲液中加蛋白酶抑制剂可以减少这种情况的发生.

电泳漆工艺流程

电泳漆工艺流程 1、钢模板电泳涂装工艺流程 除油、除锈→水冲→水洗→干燥→电泳上膝→水冲→烘干→喷商标→包装→出厂 2、对工艺流程的说明 除油、除锈:采用二合一法,即除油、除锈一步法,溶液本厂自配。 水冲、水洗:其目的在于去掉模板表面的酸碱残留物。水洗时,最好采用常流水。 电泳上漆:这是工艺的目的和核心。电泳槽内的电流、电压、固成份含量、PH值、电泳温度速度以及电泳槽附加设备的正确使用,是决定电泳上漆成败的关键。 烘干:钢模板电泳上漆后必须烘干。烘干箱工作温度为160-180℃,烘烤时间为30min。 电泳涂装所需的主要设备。各种水槽,电泳槽,通道式烘干箱,机械传动系统,电气控制系统,漆液和漆膜设备,如电导仪,附着力测定仪等。 3、质量检测与控制 (1)漆液浓度 电泳漆与蒸馏水混合后,其浓度应达到10%-15%,浓度过高,漆膜流平性欠佳,易出现桔皮等缺陷。浓度过低,漆膜变薄,易出现针孔现象。 (2)电压 电泳电压一般应控制在60V左右。电压升高,沉积量增加,漆膜变的粗糙,形成桔皮,电压过低,漆膜甚簿,甚至泳不上漆。 (3)PH值 一般漆液PH值在8-9时均能得到满意的漆膜。PH值过低,电泳槽内脉冲电流密度降低,从而造成模板局部无漆,形成花脸,PH值过高,会造成湿膜再溶解,使漆膜变簿,影响涂装质量。调整槽液的PH值有多种方法,我们选择了阴极罩法。阴极罩是将阴极板装在一个帆布袋内,袋用钢丝架支撑着,袋内装满蒸馏水。电泳时,胺的正离子和漆液中带正电荷的杂质离子(如水中的Ca2﹢、Mg2﹢)均可通过帆布进入阴极罩内,并在阴极放电。更换罩内蒸馏水,就可将杂质除去。 (4)电泳时间 电泳漆膜的厚度一般是随着电泳时间的增加而增加的,但是,当电泳时间到达一定点后,漆膜厚度就不再增加,其原因就是漆膜在达到一定厚度时产生绝缘。故采用处长电泳时间使漆膜增厚是行不通的,而且由于耗电增加,在经济上是不合算的。电泳时间一般有3min即可。 (5)电导率 电泳漆工作液的导电能力,通常用电导率表示。漆液的电导过低,漆膜不易形成;电导过高,造成漆膜外观粗糙。对同一种涂料而言,对漆液电导影响最大的因素是漆液中杂质离子的存在。因此,一定要通过控制杂质含量,保持电导率的正常值。

汽车零部件油漆涂层技术规范 (长安汽车)

编 号 GY-TY-23-2013 代 替 规范等级 二级 重庆长安汽车股份有限公司内部技术规范 汽车零部件油漆涂层技术规范 Painting of auto parts technique criterion 2013-08-01制定 2013-09-25发布重庆长安汽车股份有限公司发布

前言 本规范是根据有关国家标准、行业标准及长安汽车的实际情况制定的。为保证汽车零部件油漆涂层质量,明确了涂层的质量要求、工艺管控要求和质量验收要求。 本规范由汽车工程研究总院法规标准所管理。 本规范由工艺技术部发动机总铸工艺设计所负责起草。 本规范主要起草人:黄平、张营营、杨鸿昌。 编制:黄平、张营营、杨鸿昌 校核:程巾 审定:彭宝斌 批准:张劲松 本规范的版本记录和版本号变动与修订记录 规范编号 制定/修订者 制定/修订日期批准 日期

汽车零部件油漆涂层技术规范 1范围 本规范规定了汽车零部件油漆涂层的质量要求、工艺管控要求和质量验收要求。 本规范适用于长安汽车零部件的油漆涂层。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件,凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 1730 漆膜硬度测定法 摆杆阻尼试验 GB/T 1731 漆膜柔韧性测定法 GB/T 1732 漆膜耐冲击测定法 GB/T 1734 漆膜耐汽油性测定法 GB/T 1735 色漆和清漆 耐热性的测定 GB/T 1740 漆膜耐湿热测定法 GB/T 1764 漆膜厚度测定法 GB/T 1766 色漆和清漆 涂层老化的评级方法 GB/T 1865 色漆和清漆 人工气候老化和人工辐射暴露(滤过的氙弧辐射) GB/T 5209 色漆和清漆 耐水性的测定 浸水法 GB 6514 涂装作业安全规程 涂漆工艺安全及其通风净化 GB/T 6739 涂膜硬度铅笔测定法 GB/T 9274 色漆和清漆 耐液体介质的测定 GB/T 9286 色漆和清漆 漆膜的划格试验 HG/T 3343 漆膜耐油性测定法 HJ/T 293 清洁生产标准 汽车制造业(涂装) QC/T 484 汽车油漆涂层 SY-HB-14 长安汽车禁限用物质的限值及测量方法(中国) SY-HB-15 长安汽车禁限用物质的限值及测量方法(欧盟)

电泳设备基本原理

电泳设备基本原理
阴极电泳涂料所含的树脂带有碱性基团,经酸中和后成盐而溶于水。通直流 电后,酸根负离子向阳极移动,树脂离子及其包裹的颜料粒子带正电荷向阴极移 动,并堆积在阴极上,这便是电泳涂装的基本原理(俗称镀漆)。电泳涂装是一 个很杂乱的电化学反响,一般以为至少有电解、电泳、电堆积、电渗这四种效果 一起发作。 1、 电解
任何一种导电液体在通电时发作分化的现象,如水的电解 能分化成 H2 和 O2。 2、 电泳
在导电介质中,带电荷的胶体粒子在电场的效果下向相反电极移动的现 象,如阴极电泳中带正电荷的胶体粒子(R3N H)夹藏和吸附颜料粒子由电泳进 程移向阴极。 3、电堆积
漆粒子在电极上的堆积现象。电堆积的第一步是 H2O 的电化学分化,这一 反响至使在阴极外表区发作高碱性(OH)界面层,当阳离子(树脂和颜料)与 OH 反响变成不溶性时,就发作涂膜的堆积。 4、电渗
刚堆积到被涂物外表的涂膜是半浸透的膜,在电场的继续效果下,涂膜内 部所含的水分从涂膜中渗分出来移向槽液,使涂膜脱水,这种现象称电渗。电渗 使亲水的涂膜变为涂膜,脱水而使涂膜细密化。
制造进程 它包含四个进程:
1 )电解(分化) 在阴极反响开始为电解反响,生成氢气及氢氧根离 子 OH ,此反响构成阴极面构成一高碱性边界层,当阳离子与氢氧根效果成为 不溶于水的物质,涂膜堆积,方程式为:H2O→OH+H 2 )电泳动(泳动、搬迁)阳离子树脂及 H+ 在电场效果下,向阴极移动, 而阴离子向阳极移动进程。 3 )电堆积(分出) 在被涂工件外表,阳离子树脂与阴极外表碱性效果, 中和而分出不堆积物,堆积于被涂工件上。 4 )电渗(脱水) 涂料固体与工件外表上的涂膜为半透明性的,具有大都 毛细孔,水被从阴极涂膜中排渗出来,在电场效果下,引起涂膜脱水,而涂膜则 吸附于工件外表,而完结整个电泳进程。
工艺特色 电泳外表处理工艺的特色: 电泳漆膜具有涂层饱满、均匀、平坦、润
滑的长处,电泳漆膜的硬度、附着力、耐腐、冲击功能、浸透功能显着优于其它 涂装工艺。
(1)选用水溶性涂料,以水为溶解介质,节省了很多有机溶剂,大大下降了 大气污染和环境危害,安全卫生,一起避免了火灾的危险;
(2)涂装功率高,涂料丢失小,涂料的利用率可达 90%~95%; (3)涂膜厚度均匀,附着力强,涂装质量好,工件各个部位如内层、洼陷、 焊缝等处都能取得均匀、滑润的漆膜,处理了其他涂装办法对杂乱形状工件的涂

双向电泳笔记

1.当你在首次对未知样品进实验时,建议你使用以下的样品溶液: 将蛋白溶解在: ·8M尿素,4%CHAPS, 60 mM DTT, 2% Pharmalyte 3-10, 0.002%溴酚蓝。 溶解大蛋白或疏水蛋白量更难溶的蛋白可以使用以下方法: ·7M尿素,2M硫脲,4%CHAPS, 60M DTT, 2% Pharmalyte pH 3-10, 0.002%溴酚 蓝。 2.为了从蛋白含量很低并且含有大量干扰物质的组织(如植物组织)中制备样品,你可以使用以下推荐方法。该方法产生的蛋白溶液中不包含盐,核酸及其它污染物。 ·将组织在研钵中用液氮研碎。将粉末悬浮在含有10%TCA,0.3%DTT的丙酮中。 在-18?C 条件下过夜并离心。用丙酮清洗沉淀,干燥沉淀并将沉淀溶于9M尿素, 2%CHAPS,1%DTT,2% Pharmalyte 3-10(52,63)中。 3.等电聚焦在变性条件下进行,能产生高分辩率和高清晰度的结果。利用尿素和去污剂的混合液,能达到完全的变性和溶解,确保各种蛋白质以单一形态存在,并且减少凝集和分子间的相互作用。 尿素(Urea):使蛋白质溶解和变性,通常使用浓度为8mol/L,但为了使蛋白质完全溶解的需要,尿素的浓度往往增加到9或9.8mol/L。 CHAPS :促使疏水蛋白质溶解并减少蛋白质间的结合 还原剂:打断二硫键使蛋白质完全展开,往往使用DTT或DTE 载体两性电解质混合物:载体两性电解质的混合物在等电聚焦过程中不影响梯度,还能促进样品的溶解度,并且等电聚焦过程中在整个梯度范围内能产生更一致性的导电性。 经典的再水化液组成:8 M urea, 0.5% (w/v)CHAPS, 0.2%(w/v)DTT, 0.5% IPG缓冲液或Pharmalyte, 0.002%溴酚蓝。 ***不要让干燥的IPG胶条在室温下存留时间超过10分钟,胶条会从空气中吸收水分,将IPG 胶条密封好在-20℃以下温度保存。再水化至少需要十个小时。 矿物油加入:利用微量移液器从槽的一端逐滴加入,直至一半条胶被覆盖,然后从另一端逐滴加入,直至整条胶被覆盖。 ****聚焦时间过长会发生过聚焦,导致产生水平的条纹,可以在双向电泳的最后结果中见到。 4.可选操作:加入分子量标准蛋白。

车身前处理电泳工艺流程

车身前处理电泳工艺流程 1、工艺流程 复验白车身→预清理→装挂→上件→预脱脂→脱脂→水洗1→水洗2→表调→磷化→水洗3→水洗4→纯水洗→平台沥水→电泳→UF1→UF2→DI水洗→平台沥水→下件→电泳烘干→强冷→检验 2、工艺程序及规范 (1)复验白车身:仔细观察白车身A面应平顺,凹凸度<1mm,无锈蚀及砂轮打磨痕迹。其它部位无明显变形。各表面无重油、明显锈蚀、焊接 垃圾及杂物等。 (2)预清理:带乳胶手套,用棉纱蘸稀料擦拭车身内外表面油污,再用干净棉纱擦净,重点应保证A面不得留下污痕。 (3)装挂:车身运行到装挂工序自动下降到位后停止,手动控制遥控器将车身调正落放在浸式滑撬上使前后托架离开前后风窗口,用挂钩将车 身固定在滑撬上。打开吊具,手动放行自行小车。检查装挂安全、可 靠后按放车按钮,滑橇自动运行至上件工位。 (4)上件:待吊具自动运行到上件工位后,手动控制吊具上升吊起工件,用锁紧装置锁紧吊具,手动控制吊具上升到光电开关以上高度,按放 车按钮,吊具平稳上升到顶点,当下一工位无占位时,小车自动进入 前处理、电泳线。 (5)预脱脂: ①温度:50℃-60℃开线前半小时将槽液升温到规定范围内。A线 升温用蒸汽直接加热和电磁阀控制加热两种加热方式同时进行加热, 到温后用电磁阀自动控温。B线升温用天燃气液槽加热系统直接加热, 自动控温。 ②浸渍时间:3.0min ③出槽自动喷淋喷淋压力0.1~0.15Mpa喷嘴方向调整正确、无阻 塞,喷淋覆盖全车表面。随时清理液面,保持液面清洁无杂物。 (6)脱脂:同预脱脂 (7)第一水洗: ①浸洗1min 常喷,喷淋压力0.1~0.15Mpa,喷嘴方向调整正确,无

电泳原理.pdf

电泳原理 阳极电泳用水溶性树脂是一种高酸值的羧酸盐,在水中溶解后以分子和离子平衡 状态存在于直流电场中,通电后,由于两极的电位差,离子定向移动,阴离子沉积在阳极表面,而阳离子在阴极表面获得电子还原成胺,它是一个电化学反应,包括电泳、电解、电沉 积和电渗四个同时进行的过程。 1.电泳:在直流电压作用下,分散在介质中的带电胶体粒子在电场作用下向与其所 带电荷相反的电极方面移动,叫电泳。 2.电沉积:阴离子树脂放出电子沉积在阳极表面,形成不溶水的漆膜,此过程叫电 沉积。 3.电渗:电泳逆过程,当阴离子树脂在阳极上,吸附在阳极上的介质在内渗力的作 用下,从阳极穿过沉积的漆膜进入漆液,称电渗。 4.电解:电流通过漆液时水便发生电解阴极放出氢气,阳极放出氧气,此过程 即为电解。 电泳涂料 有人说,电泳涂料可划分为三代,第一代为环氧树脂涂料,第二代为丙烯酸树脂涂料, 第三代为聚氨酯涂料。由于环氧涂料主要应用于汽车底盘,第三代主要用于阴极电泳漆,涂覆于首饰表面,故目前主要介绍第二代,即丙烯酸树脂涂料。此树脂如一团乱麻,羧基藏于里,胺基接于外,其中最先的羧基有70%被胺基取代,因其树脂中存在-COONHR,使树脂成为水溶性。铝型材表面涂覆的丙烯酸树脂多采用胺基树脂为固化剂进行交联固化,同时, 涂料分子均匀性对工艺操作有很大影响,一般说,乳化越好,分子越均匀。 涂装工艺流程 1 .除油:如有酸回收装置,推荐采用碱性除油,因碱性除油后,铝型材表面比较光亮,且 不会与后面的碱蚀发生副作用,如用碱性除油,其主要成份是 Na 2 CO 3 和NaOH。 2 .水洗:自来水洗去前道工序的酸或碱。 3 .蚀:加入碱蚀剂的碱蚀工序,会降低型材表面光亮度,但效果并不十分明显,主要应注意不可使槽中Al 3 含量过大,温度过高,否则易产生洗不去的花斑,涂漆烘干后呈黄色。 二道水洗:最好有喷淋或加大溢流,以保证清洗彻底。 除灰:用HNO 3 效果较好,但要注意加强水洗(最少二道+喷淋)。 水洗:自来水用H 2 SO 4 除灰,一道水洗即可,用HNO 3 除灰,需二道水洗 氧化:H 2 SO 4 氧化一般为20min,使氧化膜达到9u,某些公司推销的所谓的 高温氧化剂,其主要成份是一种混酸,建议不要使用,对氧化膜的色泽、硬度、可着色性均 无好处。 水洗:自来水二道加大溢流。 着色:用单锡盐、单镍盐、锡镍复合盐均可,注意不要有色差,因为色差会在 电泳涂漆后加大。 水洗:最好加喷淋,以期尽量减少对后道工序酸的带入量。 热纯水洗:要求电导率<100us/cm,温度70-80℃,PH=4-6,尤其是银白涂漆型材或氧化中电压较大的型材应在此槽中处理较长的时间,PH值可用三乙胺进行调整。

电泳漆技术服务协议知识讲解

合同编号:****2016( )号 *******摩托车有限公司 *********** MOTORCYCLE CO.,LTD 技 术 服 务 协 议

协议编号: 技术、服务协议书 协议签订地点: 需方: (以下简称甲方) 供方:(以下简称乙方)甲、乙双方经协商就HL1201双组分阴极电泳漆产品的供货及技术服务要求,达成以下协议: 第一条总则 供方为需方提供的电泳涂料为供方目前稳定生产的HL1201双组份阴极电泳漆涂料,且能满足需方提出的质量技术要求。 1、电泳漆应稳定性好,耐腐蚀性能好,槽液易管理; 2、此涂料为双组份阴极电泳涂料,可以直接添加。档槽液参数偏高正常范围时,可以通过少量添加剂或添加涂料调整至正常; 3、在设备正常使用及运行情况下,此涂料应能满足极膜、超滤器、过滤器的正常使用周期。 4、供方提供不间断优良的现场技术服务,使电泳涂装顺利进行。 5、涂膜质量应达到双方达成协议的技术要求。 6、每年不定期的委托第三方检验两次。 7、电泳漆不含:铅汞镍硒铬等重金属符合环保指标。 第二条责任及条件 一、甲方责任 1、甲方对生产使用过程中的设备完好负责,并且在设备故障、损坏、不满足要求或使用寿命已到的情况下,应及时进行修复或更换。

2、甲方应具备常规的实验场地、检测仪器及化验人员。 3、甲方应对乙方服务代表的建议和分析数据予以高度重视,并积极调整、改善。 二、乙方责任 1、乙方具备完善的质量保证体系,从原材料到半成品、在制品、成品等都有严格的检验制度、检验设施,具备一定的生产、检验/仓储条件。 2、乙方保证向甲方提供的产品符合技术指标所规定的标准,供货时应标明产品名称、型号、净量、生产批号和生产日期,并随货提供产品出厂检测报告单。 3、乙方须提供“阴极电泳漆施工工艺及槽液管理规范”,供甲方执行。 4、乙方必须在投槽前、中,对需方现有前处理设备。工艺设计认同。 5、投槽后,一个月内达到所提供样板同等的质量和外观。并在以后的使用过程中达到最佳的、稳定的涂装质量。 6、在涂装过程中,档出现涂装异常时,一旦分析判定为乙方责任(原漆质量问题、技术指导、服务等)乙方承担全部责任,造成的所有经济损失由乙方承担,并负责在最短的时间内改善状况。 第三条质量、技术服务要求 1、供方提供的电泳涂料应能使用膜厚调整的需要;外表面≥16um 2、供方须每月对需方槽液进行抽样检测,对极液中的细菌、霉菌等含量根据生产情况进行检测,对检测的槽液或极夜供方应向需方提交实验报告及解决方法。 3、供方电泳漆在投入大槽后,在工艺、设备、槽液参数均达到要求的前提下,需方产品经过电泳漆、烘干后,应保证做到:①产品烘后,外露面上不得出现有流挂现象,②车厢所有缝隙不得出现不上漆的现象。③外露面上不得出现水迹。④整个车厢电泳烘干后应保持漆膜均匀、光滑,不得有色差。⑤确保电泳漆与需方

RNA的变性电泳原理

RNA的琼脂糖凝胶电泳 实验原理 RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶,不同的RNA条带也能分开,但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下,RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时,一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时,配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。 基本过程同DNA电泳一样,但应明确一点的是,因为RNA分子对RNA酶的作用非常敏感,因此必须用对RNA酶有抑制作用DEPC水来配置所有溶液,所有与RNA接触的仪器和装置都要严格处理以尽量减少RNA酶对样品的降解;另外,因为RNA分子有二、三级结构可以影响其电泳结果,因此电泳时应在变性剂存在下进行,常用的变性剂为甲醛和戊二醛。 RNA非变性琼脂糖凝胶检测 实验材料、器具及药品 蘑菇的总RNA溶液。电泳仪,电泳槽,电子天平,移液器,枪头,微波炉,紫外透射检测仪等。琼脂糖,1XTAE电泳缓冲液,0.5μg/ml溴化乙锭(EB)10X载样缓冲液。 实验步骤 (1)用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶,加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。(2)在超净工作台上,用移液器吸取总RNA样品4 ul于封口膜上。在实验台上再加入5 ul 1×TAE电泳缓冲液及1 ul 的10X载样缓冲液,混匀后,小心加入点样孔。 (3)打开电源开关,调节电压至100V,使RNA由负极向正极电泳,约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。

非变性电泳:上样量超过3ug,电压超过6V/cm,电泳缓冲液时间太长,均可能导致28S 和18S 条带分不开。使用2ug 上样量,电压小于6V/cm,使用新鲜的电泳缓冲液并且频繁混匀两极的缓冲液,是获得好的电泳结果的前提。(以DNA 标准为参照,28S 和18S 分别位于2.0kb 和0.9kb 左右。) 变性电泳条带变淡:EB 与单链的结合能力要差一些,故同样的上样量,变性电泳比非变性电泳要淡一些。另外的可能是甲醛的质量不高。 RNA的变性琼脂糖凝胶检测 试剂: (1)MOPS缓冲液(10*):0.4mol/L 吗啉代丙烷磺酸(MOPS)(PH7.0),0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA。 (2)上样染料:50%甘油,1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝,0.4%二甲苯蓝。 (3)甲醛。 (4)去离子甲酰胺。

新颖电泳线实用工艺文件资料 文档

电湖泳北线新工日艺涂文装件厂

目录 一、电泳线工艺流程????????????????????????2 二、电泳线参数控制?????????????????????????3 三、电泳线配槽参数?????????????????????????4 四、槽液的日常管理与维护?????????????????????5 五、槽液保养项目表?????????????????????????6 六、槽液检测方法??????????????????????????7 七、漆膜性能检测方法???????????????????????8 八、常见故障及处理方法??????????????????????9 注:本工艺文件主要参照武汉材保前处理药剂参数编制

一、电泳线工艺流程 二、电泳线参数控制

三、电泳线配槽参数

四、槽液的日常管理与维护

1、工件上线前检查验收 对于待处理的工件,除锈要彻底,其它机械杂物(如焊渣)也应清除干净,以免造成在脱脂槽内堵塞管道。 2、热水洗 热水洗的温度要达到45℃以上,保证溢流。 3、预脱脂 其目的在于预清除工件表面的油脂油污。操作条件要保证: 游离碱度:10-18点、槽液温度:55-60℃、喷淋压力: 0.20-0.25MPa、处理时间:30S。游离碱度高时,让其自然降低; 游离碱度低时,补加脱脂剂PA30-SM2A和PA30-SM2B(比例为2:1)。如有固态脂时,应适当提高温度,达到脂的溶点以上。 4、主脱脂 其目的在于彻底清除工件表面的油脂油污。操作条件要保证: 游离碱度:10-18点、槽液温度:55-60℃、处理时间:3-5分。游离碱度高时,让其自然降低;游离碱度低时,补加脱脂剂PA30-SM2A和PA30-SM2B(比例为2:1)。如有固态脂时,应适当提高温度,达到脂的溶点以上 5、水洗1 溢流喷淋水洗 6、水洗2 溢流浸泡水洗 7、表面调整 其目的是使工件表面活化,使之磷化时形成更细致密实磷化膜,操作条件: pH值7.5-8.5、溶液温度:常温、喷淋压力: 0.20-0.25MPa处理时间:1-2分。pH值高时,让其自然降低; pH值低时,补加PA66-SC表调剂。鉴于现场实际情况,建议缩短换槽周期,以免表调失效影响磷化效果。 8、磷化 在工件表面形成一层均匀磷化膜,作为涂漆前打底。操作条件:总酸度:17-23点、游离酸度: 0.8-1.3点、促进剂浓度:3.5-5.0点、溶液温度:40-45℃、喷淋压力:0.08-0.12MPa、处 理时间:3-5分。游离酸度高时,加PA-N55中和剂;游离酸度低时,加PA477-400B;磷化剂总酸度高时,让其自然降低;总酸度低时,补加PA477-100B磷化剂。促进剂高时,让其自然降低;促进剂低时,补加PA-C31 促进剂。 9、水洗3 溢流喷淋水洗,常温下进行。 10、水洗4 溢流浸泡水洗,常温下进行。 11、纯水洗 循环纯水喷淋,常温,纯水电导大于50μs/cm时,更换纯水。 12、新鲜纯水喷雾 出口喷淋,常温进行,纯水电导大于50μs/cm时,更换纯水。 13、电泳 温度控制在28℃左右,电压150V,电导率1400±400μs/cm,pH:5.8±0.3,电导率过高通过排放超滤液降低,pH过高加中和剂调整至控制范围,pH过低通过更新阳极液升高,每天添加15Kg助剂,补充挥发性物质。 14、阳极液 阳极液流量控制在1500左右,pH控制在2.5-5,pH过低排放一半,加纯水至液位,pH 过高,补加中和剂至控制范围。

电泳漆技术说明

目录 一、公司简介 二、电泳原理 三、规范工艺流程 四、产品简介 五、全系列丙烯酸聚氨酯电著产品简介 六、全系列产品规格 七、全系列涂膜性能 八、补给剂资料 九、管理对策 十、问题点与对策 十一、各型号产品说明书

二、电泳涂装原理: 阴极电泳涂料是一种具有半水溶型和悬体系特征的多组份体系,在电场作用下,已中和的阳离子树脂携带的涂料粒子在阴极进行电沉积,其过程包括电泳、电解、电沉积、电渗四种现象。 1、电泳:悬浮在极性液体中的带电粒子由于电场影响而发生泳动的现象。阳离子型树脂粒子向作为阴极的工件移动。 2、电解:液体中的氢离子和氢氧根离子在直流电源的作用下,生成氢气和氧气,阴极界面PH值升高。 3、电沉积:阳离子涂料粒子在吸引它的电极(阴极)上被还原为中性不溶脂,析出粘附,形成不溶解的涂膜。 过程如下: H 2 O≒H++OH- 阳极:2H++2OH—- 2e→H 2O+1/2O 2 ↑+2H+ 阴极:2OH-+2H++2e→H 2 ↑+2OH- R 1 R 1 ∣∣ ~NH++OH-→~N↓+H 2 O ∣∣ R 2 R 2 4、电渗:在外电场力作用下,涂膜内部所含的水份从涂膜中渗析出来移向槽液,进行内聚部分脱水。电渗使亲水涂膜变为憎水涂膜,脱水使涂膜致密化。 由于上述四个过程是连续进行的,获得的涂膜在烘干之前含水量在10%以下,可以直接进行水洗、烘干,最后形成连续均一的品质优良的涂膜。

三、规范工艺流程: 1.环氧体系电泳流程: 高温脱脂(加超声波)→常温脱脂→水洗三次→酸洗除锈→水洗三次→流动水洗→表调→磷化→水洗三次→流动水洗→纯水洗两次→电泳涂装→回收水洗三次→纯水浸洗两次→纯水喷淋→脱水剂洗/吹洗→烘干固化→成品包装 2.透明有色体系电泳流程: 电镀工件(抛光工件)→化学除油(加超声波)→水洗两次→电解除油→水洗三次(溢流水洗)→中和(弱酸洗)→水洗三次(溢流水洗)→纯水洗两次→电泳涂装(透明及各色)→回收纯水洗两次→纯水洗三次(溢流)→脱水剂洗→滴水(吹净水珠)→烘烤→成品包装

电泳的基本原理

电泳的基本原理 mm,近年来新研制的电泳槽,胶面更小、更薄,以节省试剂和缩短电泳时间。制胶时在凝胶溶液中放一个塑料梳子,在胶聚合后移去,形成上样品的凹槽。水平式电泳,凝胶铺在水平的玻璃或塑料板上,用一薄层湿滤纸连接凝胶和电泳缓冲液,或将凝胶直接浸入缓冲液中。由于pH值的改变会引起带电分子电荷的改变,进而影响其电泳迁移的速度,所以电泳过程应在适当的缓冲液中进行的,缓冲液可以保持待分离物的带电性质的稳定。E =V/L为了更好的了解带电分子在电泳过程中是如何被分离的,下面简单介绍一下电泳的基本原理。在两个平行电极上加一定的电压(V),就会在电极中间产生电场强度(E),上式中L是电极间距离。在稀溶液中,电场对带电分子的作用力(F),等于所带净电荷与电场强度的乘积:F=q*E上式中q是带电分子的净电荷,E是电场强度。这个作用力使得带电分子向其电荷相反的电极方向移动。在移动过程中,分子会受到介质粘滞力的阻碍。粘滞力(F’)的大小与分子大小、形状、电泳介质孔径大小以及缓冲液粘度等有关,并与带电分子的移动速度成正比,对于球状分子,F’的大小服从Stokes定律,即:F’=6πrηυ式中r是球状分子的半径,η是缓冲液粘度,υ是电泳速度(υ= d / t,单位时间粒子运动的距离,cm / s )。当带电分子匀速移动时:F =

F’,∴qE =6πrηυ电泳迁移率(m)是指在单位电场强度 (1V/cm)时带电分子的迁移速度:所以: v/E=Q/6πrη这就是迁移率公式,由上式可以看出,迁移率与带电分子所带净电荷成正比,与分子的大小和缓冲液的粘度成反比。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量时,实际使用的是相对迁移率mR。即:上式中:d-带电粒子泳动的距离,t -电泳的时间,V-电压,L-两电极交界面之间的距离,即凝胶的有效长度。因此,相对迁移率mR就是两种带电粒子在凝胶中泳动迁移的距离之比。 带电分子由于各自的电荷和形状大小不同,因而在电泳过程中具有不同的迁移速度,形成了依次排列的不同区带而被分开。即使两个分子具有相似的电荷,如果它们的分子大小不同,由于它们所受的阻力不同,因此迁移速度也不同,在电泳过程中就可以被分离。有些类型的电泳几乎完全依赖于分子所带的电荷不同进行分离,如等电聚焦电泳;而有些类型的电泳则主要依靠分子大小的不同即电泳过程中产生的阻力不同而得到分离,如SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。分离后的样品通过各种方法的染色,或者如果样品有放射性标记,则可以通过放射性自显影等方法进行检测。

双向电泳操作步骤

双向电泳操作步骤 水化上样( 被动上样) 1. 从冰箱中取出IPG 胶条,室温放置10min。 2. 沿水化盘槽的边缘从左向右线性加入样品,槽两端各1cm 左右不加样,中间的样品液一定要连贯。注意:不要产生气泡,否则会影响胶条中蛋白质的分布。 3. 用镊子轻轻撕去IPG 胶条上的保护层。注意:碱性端较脆弱,应小心操作。 4. 将IPG胶条胶面朝下轻轻置于水化盘中样品溶液上。注意:不要将样品溶液弄到胶条背面,因为这些溶液不会被胶条吸收;还使胶条下面的溶液产生气泡。如产生了气泡,用镊子轻轻地提起胶条的一端,上下移动胶条,直到气泡被赶走。 5. 放置30~45min 大部分样品被胶条吸收,沿着胶条缓慢加入矿物油,每根胶条约3ml(17cmIPG),防止胶条水化过程中液体蒸发。 6. 置等电聚焦仪于- 20℃水化11~15h。 第一向等电聚焦 1. 将纸电极置于聚焦盘的正负极上,加ddH2O 5~8μl 润湿。 2. 取出水化好的胶条,提起一端将矿物油沥干,胶面朝下,将其置于刚好润湿的滤纸片上杂交以去除表面上的不溶物。 3. 将IPG 胶条胶面朝下置于聚焦盘中,胶条的正极(标有+)对应于聚焦盘的正极,确保胶条与电极紧密接触。 4. 在每根胶条上覆盖2- 3ml 矿物油。 5. 对好正、负极,盖上盖子。设置等电聚焦程序。 6. 聚焦结束的胶条,立即进行平衡、第二向SDS-PAGE电泳。或将胶条置于样品水化盘中,- 20℃冰箱保存,电泳前取出胶条,室温放置10 分钟,使其溶解。 第二向SDS-PAGE电泳 1. 配制12%的丙烯酰胺凝胶。 2. 待凝胶凝固后,倒去分离胶表面的MilliQ水、乙醇或水饱和正丁醇,用MilliQ 水冲洗。 3. 配制胶条平衡缓冲液I 4. 在桌上先放置干的厚滤纸,聚焦好的胶条胶面朝上放在干的厚滤纸上。将另一份厚滤纸用MilliQ水浸湿,挤去多余水分,然后直接置于胶条上,轻轻吸干胶条上的矿物油及多余样品,这样可以减少凝胶染色时出现的纵条纹。 5. 将胶条转移至样品水化盘中,加入6ml(17cmIPG)平衡缓冲液I ,在水平摇床上缓慢摇晃15 分钟。 6. 配制胶条平衡缓冲液II 。 7. 第一次平衡结束后,取出胶条将之竖在滤纸上沥去多余的液体,放入平衡缓冲液II 中,继续在水平摇床上缓慢摇晃15 分钟。 8. 用滤纸吸去SDS-PAGE胶上方玻璃板间多余的液体,将二向凝胶放在桌面上,凝胶的顶部面对自己。 9. 将琼脂糖封胶液加热溶解。 10. 在100ml 量筒中加入TGS 电泳缓冲液。 11. 第二次平衡结束后,取出胶条,用滤纸吸去多余的平衡液(将胶条竖在滤纸上,以免损失蛋白或损坏凝胶表面)。 12. 用镊子夹住胶条的一端使胶面完全浸末在1×电泳缓冲液中漂洗数次。 13. 将胶条背面朝向玻璃板,轻轻放在长玻板上,加入低熔点琼脂糖封胶液。 14. 用适当厚度的胶片,轻轻地将胶条向下推,使之与聚丙烯酰胺凝胶胶面完全接触。注意:不要在胶条下方产生气泡,应推动凝胶背面的支撑膜,不要碰到面胶。

阴极电泳工艺流程

阴极电泳工艺流程 通用的金属表面电泳涂装的全操作工艺流程如下:预清理一上线一除油一 水洗一除锈一水洗一中和一水洗一活化一水洗一底层电镀一水洗一光亮电镀一水 洗一电泳涂装一槽上清洗一超滤水洗一烘干一检验一包装。 被涂物的底材及前处理对电泳涂膜有极大影响。因此,不同的金属材料和不同 的制作成型的制品有不同的工艺流程和前处理要求。铸件一般采用喷砂或喷丸进 行除锈,用棉纱清除工件表面的浮尘,用80#~120#砂纸清除表面残留的钢丸等 杂物。钢表面采用除油和除锈处理,对表面要求过高时,进行磷化和钝化表面处理。黑色金属工件在阳极电泳前必须进行磷化处理,否则漆膜的耐腐蚀性能较差。磷化处理时,一般选用锌盐磷化膜,厚度约1~2μm,要求磷化膜结晶细而均匀。 不同材质金属进行不同色彩的阴极电泳加工的工艺流程如下。 (1)钢铁件 金色:前处理一镀镍一镀薄银一透明金色电泳; 咖啡色:前处理一磷化一透明金色电泳; 青铜色:前处理一镀锌一青铜色电泳; 黑色:前处理一磷化一黑色电泳; 其他色:前处理一镀镍一无色透明电泳一着色。 (2)铝及合金 金色:前处理一化学或电化学抛光一透明金色电泳; 咖啡色:前处理一透明咖啡色电泳; 青铜色:前处理一青铜色电泳; 黑色:前处理~黑色电泳; 其他色:前处理一化学抛光一无色透明电泳一着色。 (3)锌合金 金色:前处理一碱铜一酸铜一光亮镍一透明金色电泳; 咖啡色:前处理~透明咖啡色电泳; 青铜色:前处理一青铜色电泳; 黑色:前处理一黑色电泳; 其他色:前处理一碱铜一酸铜一光亮镍一无色透明电泳一着色。 (4)铜及铜合金

金色:黄铜件前处理一化学抛光一透明金色电泳;铜件前处理一光亮镍一镀薄银一透明金色电泳;咖啡色:前处理一着咖啡色一无色透明电泳; 青铜色(青铜):前处理一抛光一无色透明电泳; 黑色:前处理一黑色电泳; 其他色:前处理一光亮镍一无色透明电泳一着色。

电泳技术标准

电泳技术标准 Company number:【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】

电泳技术说明 环氧电泳漆电泳规范 1.定义: 这种电泳方法是用一种黑色、阳离子水溶性的环氧树脂漆, 沉积覆着在被阴极 化的零件表面, 从而起到涂层的作用. 然后,这个漆层被置于165℃—190℃范围之下,在零件表面发生聚合反应而呈网状结构. 2.技术特征: 2.1处理过程零件电透的过程如下: ●脱脂. ●酸洗 ●磷化 ●表面电泳涂装 (环氧漆) ●通过165℃—190℃温度聚合反应(隧道)炉持续时间20分钟 2.2阳离子底漆 型号: 例如:阳离子电泳底漆2K BT SP 颜色: 黑色 RAL9005 3.技术要求: 3.1抗侵蚀要求---盐雾试验 根据ISO9227 的标准,在96个小时暴露于盐雾之后,在被测试零件表面不应该看到任何红锈痕迹或水泡,以下部位除外: 螺纹部位 零件的尖角部位

附着力---要求 根据NFT30 038 或NFEN ISO 2409标准, (在依据ISO9227 标准进行盐喷雾实验 96 个小时之后), 用间隔1mm的梳状物在零件表面划出方格,用3M 250 的胶带 粘贴后撕下,我们认为合格的等级是 0级和1级。 3.2厚度 厚度要符合以上所述3. 1和条的要求,这以厚度值应该在 10--20微米之间(最多不超过25微米) 在螺纹部位的电泳厚度要求使用螺纹规控制,并考虑到最大允许螺纹厚度。. 螺纹端检验规范 --- 循环泵泵壳 非内密封管螺纹 NFE 03005 标准 1.泵壳加工件螺纹检规 2 螺纹规的尺寸(螺纹面上的d2 尺寸)

双向电泳步骤--标准操作完整版

细胞裂解(蛋白质提取) 一、试剂配置: PBS配方 氯化钠(MW 58.44) 130mM 8g 氯化钾(MW 74.5) 2.7mM 0.2g 十二水和磷酸氢二钠(MW 358) 10 mM3.63g 磷酸二氢钾(MW 136) 2 mM0.24g 加水至1L配好后进行高压灭菌。 Washing buffer(500mL)配方 Tris(MW 121.1) 10mM 0.605g 蔗糖(MW 342) 250mM 42.75g 加水溶解,用HCl调pH至7.0后用孔径为0.22μm滤膜过滤(使用1M盐酸略高于2750uL调pH) 裂解储液配方(细胞): 尿素(MW 60.06) 7M 4.2g 硫脲(MW 76.12) 2M 1.52g CHAPS(MW614.89) 4%(W/V)0.4g 加超纯水定容至10mL后经0.22μm一次性滤膜过滤,过滤后分装成20小管,每小管500uL,-20℃冰箱保存。 裂解储液配方(组织): 尿素(MW 60.06)5M3g 硫脲(MW 76.12) 2M1.52g

CHAPS(MW614.89) 2% 0.2g Tris(MW 121.1)40mM 0.048g 加超纯水定容至10mL后经0.22μm一次性滤膜过滤,过滤后分装成20小管,每小管500uL,-20℃冰箱保存。 裂解液: 裂解液储液 100uL IPG buffer(pH可选) 2% 2uL Pi 2uL NucLease mix(100×) 1uL PMSF(100mM:20mg/mL) 1mM 1uL DTT(0.411g/mL) 40mM 1.5uL Pi:每片使用200uL超纯水溶解后按10 uL分装 考马斯亮蓝G-250: 考马斯亮蓝G-250 0.01% 100g 95%乙醇 4.7% 50ml H3PO4 8.5% 85g 将考马斯亮蓝G-250溶于50ml95%乙醇中,与用水溶解的100mlH3PO4混合后稀释至1000ml,之后使用滤纸过滤。 二、实验准备: 1、准备冰盒,细胞裂解过程均在冰盒内进行(4℃); 2、准备4℃离心机,开机降温,保证温度下降至4℃; 3、取出置于-20℃保存的试剂,需冰上融化,最后取出细胞样品。

电泳涂装工艺设计过程

电泳涂装工艺过程 电泳涂装基本原理 所谓电泳涂装,是将被涂物浸渍在水溶性涂料中作为阳极(阳极电泳),另设一与其相对应的阴极,在两极间通直流电,靠电流所产生的物理化学作用,使涂料均匀涂在被涂物上的一种涂装技术。 电泳涂装必须使用电泳漆,电泳漆通常又称水溶性涂料,电泳漆与蒸馏水必须按一定比例进行稀释,才能使用。 电泳涂装一般包括四个同时进行的过程: 1、电泳:在直流电场的作用下,正,负带电胶体粒子向负,正方向运动,也称泳动。 2、电解:电极上分别进行着氧化还原反应,反而在电极上形成氧化与还原现象。 3、电沉积:由于电泳作用,移至阳极附近的带电胶体粒子在模板表体放出电子,而呈不溶状态沉积,析出的现象,此时漆膜形成。 4、电渗:在电场作用下,固相不动,而液相移动的现象。电渗作用使漆膜内所含水份逐渐被排到涂膜外,最后形成几乎连电流也通不过去,含水率极低,电阻相当高的致密漆膜。 5、灰色环氧电泳漆为例:该电泳漆系改性环氧树脂,丁醇,乙醇胺,滑石粉,钛白粉、炭黑、高岭土的物质组成,电泳漆与蒸馏水混合后,在直流电场的作用下,即分离成带正电荷的阳离子和带负电荷的阴离子,并进行一系列复杂的物理化学胶体化学,电化学变化过程。 电泳涂装的方法及技巧 (1)一般金属表面的电泳涂装,其工艺流程为:预清理→上线→除油→水洗→除锈→水洗→中和→水洗→磷化→水洗→钝化→电泳涂装→槽上清洗→超滤水洗→烘干→下线。(2)被涂物的底材及前处理对电泳涂膜有极大影响。铸件一般采用喷砂或喷丸进行除锈,用棉纱清除工件表面的浮尘,用80#~120#砂纸清除表面残留的钢丸等杂物。钢铁表面采用除油和除锈处理,对表面要求过高时,进行磷化和钝化表面处理。黑色金属工件在阳极电泳前必须进行磷化处理,否则漆膜的耐腐蚀性能较差。磷化处理时,一般选用锌盐磷化膜,厚度约1~2μm,要求磷化膜结晶细而均匀。 (3)在过滤系统中,一般采用一级过滤,过滤器为网袋式结构,孔径为25~75μm。电泳涂料通过立式泵输送到过滤器进行过滤。从综合更换周期和漆膜质量等因素考虑,孔径50μm的过滤袋最佳,它不但能满足漆膜的质量要求,而且解决了过滤袋的堵塞问题。 (4)电泳涂装的循环系统循环量的大小,直接影响着槽液的稳定性和漆膜的质量。加大循环量,槽液的沉淀和气泡减少;但槽液老化加快,能源消耗增加,槽液的稳定性变差。将槽液的循环次数控制6~8次/h较为理想,不但保证漆膜质量,而且确保槽液的稳定运行。(5)随着生产时间的延长,阳极隔膜的阻抗会增加,有效的工作电压下降。因此,生产中应根据电压的损失情况,逐步调高电源的工作电压,以补偿阳极隔膜的电压降。 (6)超滤系统控制工件带入的杂质离子的浓度,保证涂装质量。在此系统的运行中应注意,系统一经运行后应连续运行,严禁间断运行,以防超滤膜干枯。干枯后的树脂和颜料附着在超滤膜上,无法彻底清洗,将严重影响超滤膜的透水率和使用寿命。超滤膜的出水率随运行时间而呈下降趋势,连续工作30~40天应清洗一次,以保证超滤浸洗和冲洗所需的超滤水。(7)电泳涂装法适用于大量流水线的生产工艺。电泳槽液的更新周期应在3个月以内。以一个年产30万份钢圈的电泳生产线为例,对槽液的科学管理极为重要,对槽液的各种参数定期进行检测,并根据检测结果对槽液进行调整和更换。一般按如下频率测量槽液的参数:电泳液、超滤液及超滤清洗液、阴(阳)极液、循环洗液、去离子清洗液的PH值、固体含

RNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和步骤

RNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和步骤 关键词:RNA琼脂糖电泳2012-03-09 00:00 来源:互联网点击次数:38148 一、实验目的 掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。 二、实验原理 RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶,不同的RNA条带也能分开,但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下,RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时,一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时,配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。

三、实验材料、器具及药品 蘑菇的总RNA溶液。电泳仪,电泳槽,电子天平,移液器,枪头,微波炉,紫外透射检测仪等。琼脂糖,1XTAE电泳缓冲液,0.5μg/ml溴化乙锭(EB)10X载样缓冲液。 四、实验步骤 (1)用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶,加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。 (2)在超净工作台上,用移液器吸取总RNA样品4μl于封口膜上。在实验台上再加入5μl 1×TAE电泳缓冲液及1μl 的10X载样缓冲液,混匀后,小心加入点样孔。 (3)打开电源开关,调节电压至100V,使RNA由负极向正极电泳,约30min 后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。

RNA的变性琼脂糖凝胶检测 试剂: (1)MOPS缓冲液(10*):0.4mol/L 吗啉代丙烷磺酸(MOPS)(Ph7.0),0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA。 (2)上样染料:50%甘油,1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝,0.4%二甲苯蓝。(3)甲醛。 (4)去离子甲酰胺。v电泳槽清洗:去污剂洗干净(一般浸泡过夜)——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2灌满——室温放置10分钟——0.1%DEPC水冲洗。 操作:

电泳工艺流程【详述】

电泳工艺流程 内容来源网络,由“深圳机械展(11万㎡,1100多家展商,超10万观众)”收集整理! 更多cnc加工中心、车铣磨钻床、线切割、数控刀具工具、工业机器人、非标自动化、数字化无人工厂、精密测量、3D打印、激光切割、钣金冲压折弯、精密零件加工等展示,就在深圳机械展. 随着汽车工业的发展,先进的汽车涂装特别是轿车涂装技术和设备在我国得以快速应用。目前,在我国安装的涂装设备的水平已经有了很大进步,今后随着水性漆及粉末涂料等环保涂料的使用,我国的涂装技术水平将整体达到世界先进水平。 电泳工艺分为阳极电泳和阴极电泳。若涂料粒子带负电,工件为阳极,涂料粒子在电场力作用下在工件沉积成膜称为阳极电泳;反之,若涂料粒子带正电,工件为阴极,涂料粒子在工件上沉积成膜称为阴极电泳。 阳极电泳的特点是:原料价格便宜(一般比阴极电泳便宜50%);设备较简单,投资少(一般比阴极电泳便宜30%);技术要求较低;涂层耐蚀性能较阴极电泳差(约为阴极电泳寿命之1/4)。 阴极电泳涂层耐蚀性高的原因是:工件是阴极,不发生阳极溶解,工件表面及磷化膜不破坏;电泳涂料(一般为含氮树脂)对金属有保护作用,且所用漆价高质优。 阳极电泳一般工艺流程为:工件前处理(除油→热水洗→除锈→冷水洗→磷化→热水洗→钝化)→阳极电泳→工件后处理(清水洗→烘干)。 1、除油。溶液一般为热碱性化学除油液,温度为60℃(蒸汽加热),时间为20min 左右。

2、热水洗。温度60℃(蒸汽加热),时间2min。 3、除锈。用H2SO4或HCl ,例如用盐酸除锈液,HCl总酸度≥43点;游离酸度>41点;加清洗剂1.5%;室温下洗10~20min。 4、冷水洗。流动中冷水洗1min。 5、磷化。用中温磷化(60℃时磷化10min),磷化液可用市售成品。 上述工序亦可用喷砂→水洗代替。 6、钝化。用与磷化液配套的药品(由出售磷化液厂家提供),室温下1~2min即可。 7、阳极电泳。电解液成分:H08-1黑色电泳漆,固体分质量分数9%~12%,蒸馏水质量分数88%~91%。电压:(70±10)V;时间:2~2.5min;漆液温度:15~35℃;漆液PH 值:8~8.5。注意工件出入槽要断电。电泳过程中电流随漆膜增厚会逐步下降。 8、清水洗。流动冷水中洗。 9、烘干。在烘箱中于(165±5)℃温度下烘40~60min即可。 内容来源网络,由深圳机械展收集整理! 更多相关内容,就在深圳机械展!

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