植物切片制作

植物切片制作
植物切片制作

植物组织制片技术是随着显微镜的出现而发展起来的技术,是人们认识植物体结构的有效手段,已成为植物生物学的重要组成部分。植物制片技术已建立了许多方法,现简要介绍如下几种最常见的制片技术:徒手切片法、滑走切片法、离析法、压片法、石蜡制片法和冰冻切片法。

徒手切片法

徒手切片法是指手拿刀片把植物新鲜材料切成薄片,所作的切片通常不经染色或经简单染色后,制成临时的水装片用于观察,亦可以通过脱水与染色制成永久制片。优点:简单、方便,不需要复杂的设备,不经过化学药物的处理,基本上保留了植物活体的状态。

用品与材料

显微镜、载(盖)玻片、刀片、毛笔、培养皿、吸水滤纸、滴管、ddH2O或清水、1%番红水溶液、菜叶、胡萝卜、马铃薯

实验材料对于软硬适中,便于手持的材料,可将实验材料截成适当小块,一般以长2~3cm,切片断面不超过3~5mm2为宜。对于过于柔嫩的器官(如叶片等),一般可选用胡萝卜根、土豆块茎等作为支撑物,包被住材料后再进行切片。有时也可将叶片卷成圆筒后再进行切片。实验步骤

1、在小培养皿中放入ddH2O或清水。

2、用左手拇指、食指和中指拿住材料,拇指略低于食指与中指,并使材料略为突出在指尖上面。

3、右手持刀,将刀片平稳地放在左手食指之上,与材料切面平行,然后以均匀的动作,自左前方向右后方,斜着向后拉切,切时用臂力而不用腕力。

4、切下许多薄片后,用湿毛笔将这些薄片放人培养皿中。用毛笔挑选透明的薄片,放在载玻片上,用吸管滴一滴水在载玻片上,盖上盖玻片,制成临时装片进行观察。

注意事项

1、在切片前,要不断地用水湿润材料和刀片。

2、切片时,两只手应该保持活动状态,不要使它们紧靠身体或实验台,且用力不要过猛,不能用刀片挤压材料或来回切割材料。

3、动作要敏捷,材料要一次切下,不要追求切片形状的完整。

简单的组织化学染色

经徒手切片法切下的薄片,可以进行简单的组织化学染色,这样更容易分辨细胞的结构,同时可以观察到细胞各部分的化学成分。一般选用以下几种染料进行染色:

1、1%番红水溶液木质化、栓质化的细胞壁及细胞核染成红色。

2、25%硫堇水溶液组织呈现从粉红到蓝紫的多色反应,区分含纤维素、木质素的细胞壁。

3、5%间苯三酚反应木质化的细胞壁成红色,颜色深浅与木质化程度有关。

4、I2—KI染色淀粉粒呈蓝色,细胞核呈黄色。

视课上实验进展情况,另外安排显微镜下观察动植物组织装片。

压片法(简要介绍,补充实验洋葱根尖有丝分裂染色体标本制备及观察)压片法是植物的器官或组织未经处理或经过处理后,被涂抹或压在载玻片上,使细胞成一薄层,便于进行观察的一种制片方法。压片法的实验步骤包括:取材、预处理、固定、解离、染色、压片、镜检和制成永久制片等。

实验步骤

1、取材:用锋利的双面刀片截取生长良好的植物根尖或茎尖,长度不超过3mm。

2、预处理:利用预处理液如秋水仙素、对二氯苯等处理材料,使细胞分裂停留在有丝分裂的中期,并使染色体缩短变粗。预处理的时间视不同植物而定。观察有丝分裂各期特点和减数分裂的幼小花药的制片不需要预处理。

3、固定:用固定剂迅速杀死正在分裂的细胞,使其尽量保持分裂的状态。常用的固定剂是卡诺固定剂,固定时间l~24h。

4、解离:用酶或盐酸处理固定后的材料,使正在分裂的细胞分离,便于压片。解离时要掌握好时间,特别是用盐酸解离时,时间过短,细胞不易分开;时间过长,则染色困难。

5、染色:常用碱性品红或醋酸洋红等染核的染料进行染色。

6、压片:压片时,将新鲜的或经固定的材料放在载玻片上,用解剖刀或镊子后端压住材料,并往载玻片的另一边拖,注意用力均匀。也可以将载玻片上的材料盖上盖玻片,用解剖针、竹毛衣针或铅笔轻轻敲击,使组织或细胞分散,再用拇指挤压盖玻片,使细胞成一薄层。前者常用于花粉和小孢子母细胞,后者用于根尖、茎尖和幼叶等幼嫩器官。

7、镜检:将压片置于显微镜下观察,选取目标细胞。用记号笔在载玻片和盖玻片上分别作记号。

8、照相或制成永久制片:好的压片可以直接照相,也可以通过冷冻干燥后制成永久制片。滑走切片法(补充)

滑走切片法是利用滑走切片机切新鲜的或保存的材料,亦可以切经由石蜡制片法包埋的材料。此法切出的切片厚薄均匀、结构完整,适用于一些比较坚硬的材料。

用品和材料

实验用品显微镜、滑走切片机、切片刀、载玻片、盖玻片、双面刀片、毛笔、培养皿、滤纸、滴管和软木。

实验材料新鲜材料,若直径小于lcm,可分割成3cm长的小段;若大于lcm,则应将材料劈开,使切面的面积小于lcm2为宜。新鲜材料可直接用于切片,也可以经处理后再进行切片。处理时,用FAA固定液固定一天,然后转入软化剂如甘油、氢氟酸中软化,软化时间视不同材料而定。在木材制片时,也可以用水煮法排出木材中的空气并软化部分组织,然后转入软化剂乙二胺中,软化合适后,用聚乙二醇包埋。经由石蜡制片法包埋的材料也可以利用滑走切片法切片。

实验步骤

滑走切片机由机身、升降夹物装置、切片刀的夹刀滑行部分等组成。先把切片刀固定在夹刀上,然后将材料固定在两片软木中,材料露出木片约0.5cm,再固定在切片机的夹物装置上。调好材料的高度,使刀刃靠近材料的切面,并使材料与刀刃平行。调整厚度调节器,使其符合切片的要求。切片时用右手扶切片刀的夹刀滑行部分,均匀用力往自己方向移动,切片便被切下并粘在刀的表面上。用湿毛笔把切片取下,放入盛水的培养皿里,然后把刀推回。当把刀向后推时,夹物装置就按调节好的厚度上升。如此循环往复。可将切片制成临时装片或进行简单的显微化学染色后观察,亦可以通过固定、脱水、染色和封固等程序,制成永久制片。

离析法(补充)

离析法是用一些化学药品使细胞间的胞间层溶解,细胞彼此分离,从而得到单个、完整细胞的方法,便于研究细胞的立体结构。

1、铬酸-硝酸离析法适用于木质化组织,如木材、纤维等。把材料切成长约lcm、火柴棒大小的小条,放人小玻璃管中,加入离析液,其量约为材料的20倍。盖紧瓶盖放在30~40℃的温箱中。离析的时间,一般1~2天。如果2天后仍末离析,可换新的离析液,再放置几天,时间因材料的性质而异。检查材料是否离析,可取出材料少许,放在载玻片上,用解剖针末端轻轻敲打,若材料分离,表明离析时间已够。这时移去离析液,用水清洗干净,保存在50%或70%的酒精中备用。

2、盐酸-草酸铵离析法适用于草本植物的髓、薄壁组织和叶肉组织等。把材料切成小块,约lcm×0.5cm×0.2cm大小,放入3:1的70%或90%酒精和浓盐酸中。若材料有空气,应抽气,抽气后更换一次离析液。24h后,用水清洗干净。放入0.5%草酸铵水溶液中,时间的长短视材料的性质而定。可以每隔l~2天作检查。其余与上法相同。

石蜡切片法(补充)

石蜡切片法是用石蜡作为包埋剂的一种显微制片方法,是显微技术中最重要最常用的方法之一。它的优点是能够切出薄而均匀的连续切片,便于进行器官的三维重构。此法多用手摇切片机切片。对于较硬的材料,也可以使用滑走切片机。

石蜡切片法的操作程序包括:取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、修块、切片、粘片、染色和封片。

实验步骤

1、取材:选取生长良好、有代表性的目标材料,洗净。用锋利的双面刀片截取材料,动作要迅速。材料的大小不超过0.5~lcm3。

2、固定:将选取的材料放人固定液中,固定液的体积大约是材料的20倍。固定是用化学试剂迅速杀死细胞的过程。目的是尽可能使细胞中的各个组分保持生活状态的结构,并固定在

它们原来的位置上。常用的固定剂有FAA、卡诺和纳瓦兴固定液。前两种固定液的固定时间是2~24h,后者是12~48h。FAA既是良好的固定剂,也是保存剂,材料可以在其中长久保存。而卡诺固定液和纳瓦兴固定液则不能长久保留材料,固定后,应尽快清洗,转人70%酒精中保存。若材料含有空气,固定时需要抽气。

3、脱水:固定好的材料经各级酒精脱水至纯酒精。各级酒精的浓度为:30%、50%、70%、85%、95%和l00%。

4、透明:纯酒精中的植物材料用l/2纯酒精和l/2二甲苯混合液处理2~3h,转入纯二甲苯中,处理两次。由于石蜡溶于二甲苯而不溶于酒精,因此透明的作用除了使材料变得透明外,另一方面是将材料中的酒精除去。

5、浸蜡:使石蜡慢慢溶于透明剂中,然后完全取代透明剂进人植物组织中。一般将透明好的材料换入新的二甲苯中,然后加入等体积的碎蜡,置于40℃左右的温箱中。随着碎蜡的溶解,不断加入碎蜡使石蜡饱和为止。时间大约l~2天。

6、包埋:浸蜡后,在60℃的温箱中,换两次已溶解的纯蜡,每次约2h。然后将材料和石蜡一起倒人小纸盒中,用加热的镊子迅速把材料按需要的切面和一定的间隔排列整齐,再将小纸盒平放于冷水中,使其很快凝固。

7、修块:将包埋好的材料切割成小块,每个小块包含一个材料。然后按需要的切面将蜡块切成梯形,切面在梯形的上部,注意上部矩形的对边平行。梯形的底部用烧热的蜡铲将其固定在木块上。

8、切片:用手摇切片机将蜡块切成连续的蜡带。切片时,把切片刀夹在刀架上,再把木块夹在固定装置上,调整固着位置,使材料的切与面刀口平行。然后调整厚度,转动切片机切片。

9、粘片:粘片是将切好的蜡片粘在载玻片上。在洁净的载玻片上,加少许粘贴剂并涂匀。然后加几滴3%福尔马林或蒸馏水,用解剖针或镊子轻轻将蜡片放在液面上。再将带有蜡片的载玻片放在温台上,温台的温度在45℃左右,蜡片受热后慢慢伸直。用滤纸吸去多余液体,表面烤干后,转入30℃温箱放置一昼夜。

10、染色和封片:切片干燥后,可以选用不同的染色法染色。染色前先要进行脱蜡,使材料内外的石蜡溶解。然后根据配制染液的溶液情况,决定是否需要复水。下面以植物生物学中最常见的番红-固绿染色方法,说明染色与制片过程。

冰冻切片法(补充)

冰冻切片的种类较多,有低温恒冷箱冰冻切片法,二氧化碳冰冻切片法,甲醇循环制冷冰冻切片法等。低温恒冷箱冰冻切片法目前应用得比较多。

实验步骤

1、取材,未能固定的组织取材,不能太大太厚,厚者冰冻费时,大者难以切完整。

2、取出组织支承器,放平摆好组织,周边滴上包埋剂,速放于冷冻台上,冰冻。小组织的应先取一支承器,滴上包埋剂让其冷冻,形成一个小台后,再放上细小组织,滴上包埋剂。

3、将冷冻好的组织块,夹紧于切片机持承器上,启动粗进退键,转动旋钮,将组织修平。

4、调好欲切的厚度,根据不同的组织而定,原则上是细胞密集的薄切,纤维多细胞稀的可稍为厚切,一般在5~10um间。

5、调好防卷板。制作冰冻切片,关键在于防卷板的调节上,这就要求操作者要细心,准确地将其调较好,调校至适当的位置。切片时,切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道,平整地躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板,取一载玻片,将其附贴上即可。

6、应视不同的组织选择不同的冷冻度。冷冻箱中冷冻度的高低,主要根据不同的组织而定,不能一概而论。

注意事项

1、防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净,需经常用毛笔挑除切片残余和用柔软的纸张擦。有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次。因为这个地方是切片通过和附贴的地方,如果有残余的包埋剂粘于刀或板上,将会破坏甚至撕裂切片,便切片不能完整切出。

2、多例多块组织同时需做冰冻切片时,可各自放于不同的支承器上,于冷冻台上冻起来,然后依据不同的编号,依序切片,这样做既不费时也不会乱。

3、放置组织冰冻前,应视组织的形状及走势来放置,所谓“砍柴看柴势”,切片也是如此,如果胡乱放置,就不能收到很好的效果。

4、组织块不须经各种固定液固定,尤其是含水的固定液,在未达到固定前,更不能使用。临床快速冰冻切片,不须要预先固定,一是为了争取时间,二是固定了的组织,反而增加了切片的难度。如果使用未完全固定的组织做冰冻切片,就会出现冰晶。这是因为含水的固定液在组织未经固定前,其中的水份也可渗入到组织中去,当冰冻发生时,这些水份就存留于组织中,形成了冰晶。

5、当切片时,如果发现冰冻过度时,可将冰冻的组织连同支承器取出来,在室温停留片刻,再行切片,或者用口中哈气,或者用大拇指按压组织块,以此来软化组织,再行切片。另者,调高冰冻点。

6、用于附贴切片的载玻片,不能存放于冷冻处,于室温存放即可。因为当附贴切片时,从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有一种温度差,当温度较高的载玻片附贴上温度较低的切片时,由于两种物质间温度的差别,当它们碰撞在一起时,分子彼此间发生转移而产生了一种吸附力,使切片与载玻片牢固地附贴在一起。如果使用冷藏的载玻片来附贴切片,由于温度相同,没有发生上述的现象。

石蜡切片的制作

说明 石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日,但标本可以长期保存使用,为永久性显微玻片标本。文档来自于网络搜索 取材 应根据要求选取材料来源及部位。例如植物细胞有丝分裂多选取洋葱根尖,细胞分裂快又便于切取;猪的肝小叶边界清晰明确;耳蜗以豚鼠的内耳易于定位和剥离。材料必须新鲜,搁置时间过久则产生蛋白质分解变性,导致细胞自溶及细菌的滋生,而不能反映组织活体时的形态结构。文档来自于网络搜索 固定 用适当的化学药液——固定液浸渍切成小块的新鲜材料,迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化,尽可能保持其活体时的结构。固定能使组织硬化,有利于切片的进行,而且也有媒浸作用,有利于组织着色。固定液的种类很多,其对组织的硬化收缩程度以及组织内蛋白质、脂肪、糖类等物质的作用各不相同。例如纯酒精可固定肝糖而能溶解脂肪,甲醛能固定一般组织,但溶解肝糖和色素。固定液可分为单一固定液及混合固定液。前者有甲醛(蚁醛、福尔马林)、酒精、醋酸或冰醋酸、升汞、锇酸(四氧化锇)、重铬酸钾及苦味酸等,单一固定液不能固定细胞中的所有成分;混合固定液可以互补不足,常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa 液(配方见有关技术书籍)。因此,应根据所要显示的内容来选择适宜的固定液。10%福尔马林(4%甲醛)或10%磷酸缓冲福尔马林是病理切片常规使用的固定液,不仅适用于常规HE(苏木精-伊红)染色,还可以用于组织学有关的其他技术的切片染色。固定液的用量通常为材料块的20倍左右,固定时间则根据材料块的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定,可以从1小时至数天,通常为数小时至24小时。文档来自于网络搜索 洗涤与脱水 固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀,否则会影响以后的染色效果。多数用流水冲洗;使用含有苦味酸的固定液固定的则需用酒精多次浸洗;如果组织经酒精或酒精混合液固定,则不必洗涤,可直接进行脱水。固定后或洗涤后的组织内充满水分,如不除去水分就无法进行以后的透明、浸蜡与包埋,因为透明剂多数是苯类,苯类和石蜡均不能与水相

石蜡切片制作标准程序

动物病理组织学 石蜡切片制作标准操作程序(SOP) 一、\器材和试剂准备 (一)载玻片和盖玻片的清洁 1.载玻片和盖玻片清洗方法 (1)锅内倒入适量清洗液(100 mL水+30 m L洗洁精+30 mL 84消毒液); (2)将玻片逐片放入锅中, 加热至沸腾10 min, 停止加热, 自然冷却; (3)捞出玻片流水冲洗10min,彻底冲净泡沫(弹簧夹上后,单片过水); (4)将玻片从水中取出, 用蒸馏水冲洗三遍(最好单片过水); (5)将玻片放入 95%乙醇(分析纯)中浸泡; (6)取出玻片,码在切片盒,自然干燥(或无风适度高温干燥)备用; 注意:由于盖玻片很薄,不能同载玻片放在一起处理;盖玻片从95%乙醇溶液中取出后要放在吸水纸上摊开,干燥后,放在小盒子中备用。 2.粘片剂(蛋白甘油)的制作及载玻片的预处理 (1)蛋白甘油的制作取新鲜鸡蛋,先将其尖端用眼科剪或拨针挑破一小孔,再将蛋的另一端挑破一小孔并稍加扩大,大孔端朝下,使蛋白流入100~200毫升的烧杯中(不要蛋黄),以玻棒打拌蛋白完全变为雪花状泡沫,然后倒入垫有几层纱布的漏斗中过滤而得到透明、清凉的的蛋白液,再加入等量甘油,振摇使之充分混合,加入1%麝香草酚或樟脑防腐。一般将其盛入滴瓶或树胶瓶中备用,不用时盖好防尘。 或1个鸡蛋的蛋清+500mL双蒸馏水,混匀,加10mL浓氨水。 (2)将蛋白甘油倒在小烧杯中,载玻片用弹簧夹夹上后侵入蛋白甘油中,贴壁刮干,放在切片盒内晾干备用。 二、石蜡组织切片的制作 (一)取材 注意事项: 1.材料质量:材料必须新鲜,应争取在死后半小时内处理完毕。 2.取材体积:组织块力求小而薄(厚度不要超过5mm,以2mm最佳) 3.取材力度:取材器具锋利。勿使组织块受挤压,切割时不可来回挫动。夹取组织时,切勿猛压,以免挤压损伤组织。取材时,组织块可稍大一点,以便在固定后,将组织块的不平整部分修去。 4.固定形状:固定尽量保持组织的原有形态新鲜组织经固定后,或多或少会产生收缩现象,有时甚至完全变形。为此可将组织展平,以尽可能雅持原形。对神经、肌肉、皮肤组织等,则可将其两端用线扎在木片上或硬纸片上固定。 5.切向选择:选好组织块的切面应熟悉器官组织的结构并据此决定其切面的走向。纵切或横

石蜡切片的基本操作流程

石蜡切片的基本操作流程 一、取材选取目的组织块,修剪到合适的大小; 二、固定 将组织块放入福尔马林固定液(10%甲醛溶液),固定时间由组织块大小而定,一般不少于24h;体积1cm3的组织块,一般为3-7天; 三、冲水自来水洗几下,泡1小时; 四、系列酒精脱水 50%酒精,1h; 70%酒精,1h; 80%酒精,1h; 90%酒精,1h; 100%酒精(I),1h; 100%酒精(II),1h; 五、透明 酒精:二甲苯=1:1溶液,过夜; 二甲苯,1h; 六、包埋 二甲苯:石蜡=1:1,65-70 ℃,2h; 新鲜石蜡(I),65-70 ℃,1h; 新鲜石蜡(II),65-70 ℃,4h; 新鲜石蜡包埋; 七、切片切片厚度为5-7um; 八、展片温水(40-42 ℃)展片; 九、捞片将展好的片子贴于载玻片上; 十、烘片42 ℃将片子上的水烘干; 十一、烤片60 ℃烤片12-24h; 十二、脱腊 二甲苯(I):2min; 酒精:二甲苯=1:1溶液:2min; 十三、水化 100%酒精(I):1min; 100%酒精(II):1min; 95%酒精:1.5min; 80%酒精:1.5min; 70%酒精:1.5min; 50%酒精:1.5min; 自来水洗:2min 十四、H&E染色 Hematoxylin染色3-5min(2.5min时取出观察染色效果),自来水洗3次,盐酸分化(2/3杯玻璃缸+3滴1N盐酸),10s;自来水洗蓝化,镜下观察染色效果;(伊红)Eosin染色30-50s,直接脱水(90%酒精-----100%酒精I,100%酒精II各1分------酒精:二甲苯=1:1溶液:1-1.5min);十五、脱水 90%酒精-100%酒精-100%酒精,各1min; 十六、透明 二甲苯:酒精:1-1.5min;二甲苯:2min;

植物标本制作心得

植物标本制作心得 植物标本制作心得一:制作植物标本的体会 在野外采集、制作植物标本,是一件很有意义和乐趣的事。春天来了,还能趁此机会去郊外走走,享受大自然的乐趣。我为制作植物标本准备了植物标本夹和吸水的草纸。标本夹是自己用木条制作的,两条留绑绳的木架之间放吸水草纸,绑好后随身携带。我选了全株植物(包括根、茎、叶、花的)做标本。采下后,先将花瓣整理好压放在草纸上,然后将茎、叶整理好,每片叶展平。不能因为叶多把叶子摘掉,一部分叶要反放,这样压好的标本叶正反面均有。之前我还做了学习准备,知道植物标本不能在太阳下晒,会变色的,压在标本夹内的标本每天要翻倒数次,标本夹压标本要靠吸水草纸将植物的水分吸干,使标本,花、茎、叶的颜色不变。 压好的植物标本可用来做教学用品和装饰品,自己动手真的很有趣 >植物标本制作心得二:植物叶标本制作的心得>>(960 字) 当初出于对制作标本的浓厚兴趣,而选择了这门课,经过了三个星期的学习和实践,我 基本掌握了制作标本的原理、方法及一些小技巧。我所学的是食品科学与工程专业,将来很有可能会需要这方面的知识,比如当我们要了解某一植物的一些构造等方面的知识 时,我就可以将它做成标本,以便日后研究,同时也让我认识了许多植物,这对于我来说是一个很大的收获。 通过采集树叶使我对植物有了一定的认识,包括它的形态、结构、习性、科名、学名等一些特性,还有需要用怎么的词汇来描述它的这些特性。同样地也了解了如要描述一种植物,需要从那几个方面写。也认识了一些专业术语,如胸径是指正常成年人的胸部位置的所在高度该植物的树干的直径。 样品的采集是我了解标本知识的开始。采集标本是制作标本的整个过程中是个十分重要的部分,它直接影响成品的质量。采集时尽可能选择根、叶、茎、花、果。因为花和果实是鉴定植物的主要依据,同时还要尽量保持标本的完整性。采集矮小的草本植物,要连根掘出,如标本较高,可分为上、中、下三段采集,使其分别带有根、叶、花、果实,而后合为一标本。属乔木植物的最好取一小片树皮制作标本。要采健康的植物。采下后应立即系上标号纸,并记录低点、海拔、环境、树高等数据。

石蜡切片步骤

石蜡切片制作 大致步骤:取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。 1、取材 植物材料选择时必须尽可能不损伤植物体或所需要的部分。 取材必须新鲜,尽可能割取所需要的组织块,并随即投入固定液。 取材时刀要锐利,避免因挤压细胞使其受到损伤。 切取的材料应该小而薄,便于固定剂迅速渗入内部。一般厚度不超过2mm,大小不超过5*5mm2。 2、固定 用适当的化学药液—固定液浸渍切成小块的新鲜材料,迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化,尽可能保持其活体时的结构。 固定液的选用:FAA固定液 FAA固定液配制:福尔马林(38%甲醛)5 ml 冰醋酸 5 ml 70%酒精 90 ml 5 ml甘油(丙三醇) 固定时间根据材料块的大小及松密程度而定。 3、洗涤与脱水 固定后的组织材料需要除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀,否则会影响以后的染色效果。多数用流水冲洗:使用含有苦味酸的固定液固定的则需要用酒精多次浸洗;如果组织经酒精或酒精混合液固定,则不必洗涤,可直接进行脱水。 酒精为常用的脱水剂,为了减少组织材料的急剧收缩,应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行,通常从30%或50%酒精开始,经70%、85%、95%直至纯酒精(无水乙醇),每次时间为1-数小时,如不能及时进行脱水,材料可以放在70%酒精中保存,因高浓度酒精易使组织收缩硬化。 4、透明 选用二甲苯为酒精和石蜡的浸媒液,替换出组织内的酒精。通常组织先经过纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1-2小时,再转入纯透明剂中浸渍。时间根据材料块大小而定。 5、浸蜡与包埋 用石蜡取代透明剂,使石蜡浸入组织而起支持作用。通常把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1-2小时,再先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍3小时左右,浸蜡应在高于石蜡熔点3℃左右的温箱中进行,以利于石蜡浸入组织内。浸蜡后的组织材料块放在装有蜡液的容器中(摆好在蜡中的位置),待蜡液表层凝固即迅速放入冷水中冷却,即做成含有组织块的蜡块。容器可用光亮且厚的纸折叠成纸盒或金属包埋框盒。如果包埋的组织块数量多,应进行编号,以免差错。石蜡熔化后应在蜡箱内过滤后使用,以免因含有杂质而影响切片质量,且可能损伤切片刀。 6、切片 包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台,以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上,夹在轮转式切片机的蜡块钳内,使蜡块切面与切片刀刃平行,旋紧。切片刀的锐利与否、蜡块硬度适当都直接影响切片质量,可用热水或冷水等方法适当改变蜡块硬度。通常切片厚度为 4-7微米,切出一片接一片的蜡带,用毛笔轻托轻放在纸上。 7、贴片与烤片

动植物标本采集制作方案

综合实践活动方案 动植物标本采集及制作 单位:鹤壁市第一中学 主办:万物生学社 辅导教师:孙溥辉

活动名称:动植物标本采集及制作 活动类型:综合实践类 适用年级:高一、高二年级 指导思想: 开发学生个性潜能,培养学生创新精神和实践能力,开阔学生视野,充分利用当地资源,促进学生自主合作探究,培养学科学、爱科学的精神及审美情趣,培养爱自然爱家乡的道德情操,促进学生的全面发展,促进学校特色的形成。 目的任务: 1.从学生的兴趣爱好出发,开发适合学生水平,符合学生特 点的综合活动型校本课程。 2.通过学习不同类型动植物标本的采集和制作,让学生学会 动植物标本采集、制作的具体操作过程,锻炼和培养学生的动手能力。 3.通过采集和制作动植物标本,增强学生对自然界生物的益 害的认识和了解,增强自觉保护生物多样性的观念。 4.通过对校园植物的认识,让学生亲近自然,提高学生热爱 自然、热爱生物、珍惜生命的理念。 活动内容: 1、学会采集、制作当地常见的动植物标本。 2、学会利用网络解决制作过程中的疑问。 3、师生合作将社会实践活动取得的成果进行展评,从而激发学生的学习兴趣,丰富课余生活,使学生意识到获取知识和技能,培养思想和方法不仅仅在课堂,而更多的应该在课外,在社会实践活动中。活动用具: 采集制作动植物标本的用具:旧报纸或草纸,刷子或纱布,标本夹或两块比台纸大一些的木板和书,吸水纸或棉絮,台纸,标签,胶水,胶带或缝衣针和线,毛笔,刀片,剪刀,玻璃纸。 活动时间:

1.采集制作:5月1日——5月10日; 2.集中展评:2017年5月 20日。 活动组织:孙溥辉、王杰 活动地点: 1.采集地点:校内或校外; 2.制作参评地点:学校生物实验室、校园内 纪律安全: 组织活动的教师负责对学生进活动安全教育,学生必须遵守安全规定,在校内、外采集标本时一定注意人身安全,对人类有安全威胁的生物,一律不准采集(指导教师必须明确要求)。 课时安排:6课时 活动实施: 活动组织形式:分组实验 实施步骤:本课程分为6个课时。 评估方法 每小组在每次标本制作实验后,每人上交一份实验成果,每个实验成果按等级打分,占总成绩的55%。 书面测试。试题主要考核学生对几种比较常用动植物标本制作的掌握情况,要求学生能写出具体的制作流程,并且加强试题的探究性和开放性。这部分占总成绩的35%。 出勤率和课堂参与态度占总成绩的10%。 I 植物标本采集和制作部分 一、藻类植物标本制作 (一)水绵整体封芷法 1、取纯净的水绵丝状体少许—→表面皿洗培养—→分散—→眼科剪刀分割成几段。 2、固定:将分割的材料放入小口瓶或小培养皿中,用弱性铬酸醋固定液固定12-24小时。 配方:铬酸1g 或10%铬酸2.5ml 冰醋酸1g 或10%醋酸5 ml H2:99ml 或H292.5ml

石蜡切片的制作

石蜡切片的制作 试验药品和仪器 试验药品:酒精、二甲苯、石蜡、番红、固绿、冰醋酸、甲醛、明胶、甘油、石碳酸、中性树胶。 试验仪器:石蜡切片机、组织包埋机、水浴锅、染缸、烘箱。 试验方法 1 叶片组织结构的观察 对叶片组织结构的观察采用石蜡切片法。具体操作步骤如下: 1. 取材。选取生长良好的叶片,用水清洗干净,擦干,沿主脉切取2mm x 5mm 的小段。 2. 固定。将切取的植物材料立即放入FAA 固定液中(材料与固定液比例1:20),用真空泵抽气(使固定液尽快渗入材料中,并排除材料内气泡的干扰),固定时间 48h以上。FAA固定液配方:50%酒精、冰乙酸、甲醛(37%-40%)按18:1:1的比例配置。 3. 冲洗。材料从固定液中取出后,用70%的酒精冲洗3次,每次间隔2h,并在70%酒精中过夜。 4. 脱水。酒精为常用脱水剂,它既能与水相混合,又能与透明剂相混,为 了减少组织材料的急剧收缩,应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行:70%酒精一80%酒精一95%酒精一无水酒精一无水酒精,每级酒精中放2h,无水酒精分2次,一次2h。 5. 透明。纯酒精不能与石蜡相溶,还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液,替换出组织内的酒精。材料块在这类媒浸液中浸渍,出现透明状态,此液即称透明剂,透明剂浸渍过程称透明。通常组织先经纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍 1?2小时,再转入纯透明剂中浸渍。具体为:1/3二甲苯+2/3无水酒精(加番红染色,以便透明后找到材料)一1/2二甲苯+1/2无水酒精一2/3二甲苯+1/3无水酒精一二甲苯一二甲苯,每级二甲苯中放2h,纯二甲苯分2次,每次放1h。材料进入无水的透明剂

石蜡切片详细步骤

石蜡切片 1.仪器 石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。 2. 试剂 FAA固定液(70%酒精90ml、冰醋酸5ml、福尔马林5ml)、10%番红水溶液、0.5%固绿(用95%的酒精配制)、酒精(100%、95%、80%、70%、50%)、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。 3.取材 幼嫩的油菜植株叶片和茎 4.方法与步骤(参照) 1.固定: FAA固定液固定48小时以上。 2.脱水: 50%酒精→70%酒精→83%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。每级2h。100%酒精中1.5h。其中70%酒精处可长期保存。 3.透明: 1/2二甲苯+1/2无水乙醇 (2h) →纯二甲苯(1.5h) →纯二甲苯(1.5h) 4.浸蜡: 将处理的材料置于1/2石蜡(固体粉末状)+1/2二甲苯中,40℃烘箱敞口过夜。 5.包埋: 先提升恒温箱的温度至60℃,换纯蜡3次,每次1-2h,用硬的电光纸、牛皮纸叠纸盒,置于45-60℃的烫板上,倒入材料,摆放好材料,把标签(正面向外置于底部),补足石蜡,倒好后轻轻的置于冷水盆中,注意底面要接触盆中凉水,待石蜡全部凝固后可取出晾干,也可在凉水盆中放置过夜。 6.切片 对包埋的材料进行修块、粘块、整修后,保证材料四周都有石蜡包围。但不可太多。切面的上、下边平行。用加热的解剖刀蘸取少许石蜡碎屑,并迅速将石蜡块四周的碎屑烫平,使石蜡块牢固地粘在台木上。检查切片机,安装切片刀、调整好刀的角度,调整石蜡块与刀口之间的角度与位置后开始切片。

7.粘片 将粘贴剂置簿玻片上,再取切片浮置粘片剂上,然后置烘片台上,使切片展开烫平,材料不现皱纹为度。最后将切片依次排好,用滤纸吸去多余水分,同时以记号笔在玻片上编号,放入温箱中烘干,温度30~40℃中过夜。 8.脱蜡 脱蜡用二甲苯,把烤好的载玻片放于盛二甲苯的染缸中:纯二甲苯(10-20min)→纯二甲苯(5-10min) 9.染色 将纯二甲苯脱蜡完全的材料,1/2 二甲苯十1/2纯酒精→100%酒精→95%酒精→85%酒精→70%酒精→50%酒精→1%番红染色(4h以上) →50%酒精→70%酒精→85%酒精→95%酒精→0.5%固绿(1min)→95%酒精→100%酒精→100%酒精(未注明时间各级均为3min) 10.胶封 滴加加拿大树胶封藏。 11.镜检,拍照

石蜡切片的制作过程(精)

石蜡切片的制作 目的要求:了解生物制片的基本原理和方法;了解石蜡切片制作的基本过程;学会制作石蜡切片。 一、生物制片的基本原理 (一生物制片的目的与发展概况 生物制片是研究生物有机体微观结构的基础方法,其目的是提供在显微镜下以适度的样品,有效地对其进行形态和功能观察研究。 (二生物制片的方法 当我们研究生物体的组织或细胞时,除了某些生物体可用相差显微镜或偏光显微镜等方法达到观察目的外,其余大部分生物体,因为组织较厚,光线不易透过内部等关系而达不到观察的要求,为了达到此目的,就必须将生物体的组织切成薄切片或不切片,经过一系列处理,使光线易于透过,即可进行观察。因此,根据标本的制作方法分为切片法和非切片法两种。这些方法,各有优缺点,应该适当的配合使用,才能获得比较理想的结果。 1.切片法 (1切片法的种类 切片法就是利用锐利的刀具,将器官组织或幼小个体分割成许多极薄的薄片,而制成切片标本的一种方法。切片法在切成薄片以前必须设法使组织内渗透某种支持物质。使组织保持一定的硬度,然后利用切片机进行切片。根据所用支持物质的不同切片法又可分为石蜡切片法、火棉胶切片法、冰冻切片法、炭蜡切片法等类型。现分述如下: ⅰ.石蜡切片法

石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法,因此用得最多,它有很多优点:比较省时间,容易操作,可切成极薄的切片(4um 以下,能制作连续切片,组织块可包埋在石蜡中永久保存。缺点是只能用于较小的组织块,较大的组织块不易切好,容易破碎,组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。制片时间太长。 ⅱ.火棉胶切片法 火棉胶切片法是以火棉胶为支持剂进行切片的方法。此法的优点是包埋过程中不用二甲苯及石蜡,不经高温,可避免组织收缩及变脆,适于精细材料(如脑的切片,也引火棉胶有韧性切片不知有折卷或破裂,适宜于大块组织及多空洞的组织(脑、眼球,硬度较高的组织(骨、肌腱。缺点:手续麻烦、费时间,切片不能切薄,起码在10um以上,不能作连续切片,因此,在生物制片技术上已经不经常采用。 ⅲ.冰冻切片法 冰冻切片法是利用液体二氧化碳或其它药剂(如氯乙烷在变成气体时吸收大量的热使组织迅速结成冰块而后再进行切片的方法。目前国内外用半导体致冷调节器来代替二氧化碳的冰冻,冷冻速度更快更为方便。 冰冻切片法的优点是较前两种方法简便,组织不经脱水、透明、包埋等手续即可切片,因而可节省很多时间,十分钟左右即能制成切片。常用于临床病理手术诊断,银材料不经溶媒处理就可直接进行切片,材料不受试剂的激烈刺激及温度影响,所以组织没有显著的收缩,细胞形态不致有大的改变,也引冰冻切片不需有机溶剂处理,所以能保存脂肪、类脂等成分,所以冰冻切片法常用于组织化学,尤其是神经组织,临床病理学等方面的研究。 新鲜的组织或已经固定的组织,经短时间处理后即可进行切片。用任何固定及处理的材料均适合冰冻切片,但一般的经验用福尔马林固定的材料最适合冰冻切片,而用酒精、甘油保存的材料必须充分水洗后才易于冰冻,否则不易切成完整的切片

制作植物标本的五个步骤

具体制作方法: (一)工具准备:吸水纸、标本夹、采集袋、记录本、号牌、台纸(白色、长40厘米、宽27米、卡纸) (二)标本采集 1、采集标本力求完整。(茎、叶、花、果) 2、采集时记录要详细。 3、及时挂上吊牌。 4、标本装入采集袋。 (三)标本压制 1、修剪:坏的、脏的叶子;叶子易脱落的植物可放在沸水中浸1分钟再晾干。 2、压制:给标本铺上几层吸水纸,用标本夹夹住,通风处晾干。 3、换纸:每天换纸一次,使标本保色。 (四)标本制作 1、整理标本:将干制的标本整理。 2、上台纸:标本平铺在台纸上,调整叶子排布均匀,使同一标本同时看到正面与反面叶的形态。

3、固定:用透明胶粘贴标本:透明胶宽度厘米最漂亮。 4、贴标签:在右下角贴上标签。内容:标本名称、采集地点、采集时间。 主题: 展植物原色,现浓浓春意。 目的: 学会采集植物和制作腊叶标本的方法。 用具: 采集箱(或塑料袋),标本夹,枝剪,掘根铲,绳子,号牌,标签,容易吸水的纸(草纸或旧报纸),台纸,盖纸,镊子,铅笔。 方法步骤: 一、植物标本的采集(遇到珍贵稀少的植物时,不仅不要采集,而且要加以保护)。 1.草本植物,应当采集根、茎、叶、花或果实尽可能齐全的植株。 2.木本植物,应当采集长有叶、花或果实的枝条。 3.给采集到的标本挂上号牌。

4.把采集到的标本轻轻地放进采集箱(或塑料袋)内。 5.采集标本的时候,要注意安全。不要乱吃乱尝,以防中毒。 二、腊叶标本的制作 二、植物蜡叶标本的制作 1.尽快把整理过的标本放在几层容易吸水的纸上,使叶、花的正面向上展平(要使少数叶、花的背面向上展平),然后盖上几层纸。 2.把标本层层摞起来,用标本夹夹好并缚紧,放到背阴通风处。 3.每隔一定时间,用干纸更换标本夹里的潮纸,同时对标本进行整形,力求标本尽快干燥。 4.用线或纸条把干燥的标本固定在台纸上,贴好标签,再贴上盖纸。 评分细则: 1、标本是否有代表性,可代表植物的特征; 2、标本修剪的程度,烂叶,黄叶不要但要保证完整性,有花有果最好; 3、标本压制是否干燥,是否平整,要求无卷曲; 4、台纸上标本布局是否合理,不要过分拥挤,不要东倒西歪,整齐; 5、台纸上标本整体外形是否美观; 6、小纸条固定是否牢固,是否合理;

石蜡切片制作过程

(一)材料与用具 1.材料: 鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。 2.用具: 溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。 (二)实验内容与步骤 1.取材及固定 取动物体上的小块组织成为组织块。组织块的大小以不超过 0.5立方厘米为宜。切去组织块时动作要轻,切忌用力牵引或挟持,以免组织内部发生变化。 组织块取下后,先用 0.85%的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍,如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净,可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次,使其管腔冲洗干净,切忌不可用刀或其他器具刮之。 由动物身上切取的组织必须是新鲜的,材料越新鲜越好,一般不应超过死后24小时。 如果是管状器官或是其中有分泌之消化液,则死后应迅速采取,以免组织自溶或上皮剥落。 材料由动物体取下后应当迅速固定,固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部,将组织固定,以保持其原有的结构。不同的组织应选用适当的固定液。固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1。不应使组织块贴于容器壁上,应记录固定液的名称,材料的种类,动物品种及开始固定的时间。 2.冲洗

固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。组织块应用纱布包好,注名,放金属水洗网中用流水冲洗,甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时,Bouins固定液固定的组织水洗24小时。AFA固定液则不需要水洗。 3.脱水和硬化 经过固定后的组织在水洗后要进行脱水,脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来,使组织逐渐变硬,便于油类或其他透明及浸入,为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。 常用的脱水剂是不同浓度的酒精,因为酒精与水有很大的亲和力,酒精浓度可以逐渐升高,置换出组织中的水。脱水必须充分,脱水不充分会影响透明和浸蜡。脱水过程要逐级上升,不能操之过急,跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。 脱水所用的酒精浓度及过程如下: 30%—→50%—→70%—→80%—→90%—→95%—→100%(Ⅰ)—→100%(Ⅱ)组织块在各级较低浓酒精(小于70%)中脱水的时间应视组织块的大小而定,大小不超过 0.5立方厘米的组织块脱水时间为6~12小时,在高浓度酒精中(大于70%)脱水时间为3小时左右。组织块在无水酒精中需经过两次处理,以保证脱净水分。由于无水酒精有使组织变脆的缺点,故在无水酒精中脱水的时间不宜过长,一般应在15~30分钟左右。 在脱水瓶中酒精的量与组织块之比约为50:1。 简化步骤如下: 70%(一夜)——80%(1小时)——90%(30分)——95%(30分)——100%(15分)——酒精+二甲苯(15分)——二甲苯(3分)——石蜡+二甲苯(30分)——石蜡(80分) 4.透明

21常规石蜡切片制片规范

常规石蜡切片制片规范 1.制片过程中的每一个环节,应确保切片号和蜡块号一致,自始至终不能将号码弄错,一旦发生应重新取材,以防事故发生。 2.制片完成后,应在HE切片上及时粘贴写好本病理科病理号的标签,并认真仔细地核对。 3.认真检查制片质量。切片优良率(甲、乙级片所占的比例)≥90%,优级率(甲级片所占的比例)≥35%。不合格切片应立即重做。4.制片完成后,技术人员应将所制作的切片连同相应的申请单/记录单、取材工作单等一并移交给病理医师,双方经核对无误后,办理移交签字手续。 5.制片工作一般应在取材后2个工作内完成(需要脱钙、脱脂等特殊处理的除外)。 6.制片过程中如发生意外情况,有关技术人员和技术室负责人应及时向病理科主任汇报,并积极设法予以补救。 7.具体HE切片制作技术参见《病理组织学常规制片技术》。 附: 1.取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序,根据教学、科研及外检的具体要求取自人体(外科手术切除标本、活检标本、尸检标本)或动物,并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识,还要掌握实际操作技术,每个组织器官的取材都有一定的部位和方法,不能任意切取组织作为制片材料,不然,无法达到教学、科研和临床诊断的目的,具体要求如下: (1)材料新鲜:取材组织愈新鲜愈好,人体组织一般在离体后,应迅速固定,以保证原有的形态学结构。

(2)组织块的大小:所取组织块较理想的体积为 2.0cm×2.0cm×0.3cm,以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部,但根据制片材料和目的不同,组织块的较理想体积也不同,如制作病理外检、科研切片,其组织块可以薄取0.1~0.2cm即可,这样可以缩短固定脱水透明的时间,若制作教学切片厚取0.3 ~0.5cm,这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。 (3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利,切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧,以免因挤压而使组织、细胞变形。 (4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材,病理标本取材按照各病变部位、性质的不同,根据要求规范化取材。 (5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构,决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键,如长管状器官以横切为好。 (6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等,可用水冲洗干净后再放入固定液中。 (7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后,或多或少会产生收缩现象,有时甚至完全变形。为此可将组织展平,以尽可能维持原形。 2.固定 (1)小块组织固定法:这是最常用的方法,从人体取下的小块组织,须立即置入液态固定剂中进行固定,通常,标本与固定液的比例为1:4~20,但组织块不宜过大过厚,否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。 (2)注射、灌注固定法:某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入内部,或需要对整个脏器或整个动物体进行固定。这时宜采用注射固定或灌注固定法。将固定液注入血管,经血管分支到达整个组织和全身,从而得到充分的固定。 最常用的固定液有10%甲醛固定液和95%乙醇固定液。

石蜡切片的制作

石蜡切片的制作 一:试验目的 掌握石蜡切片的制作 二:器材和试剂 实验动物、手术刀、手术剪、镊子、托盘、标本缸、石蜡切片机、恒温箱、水浴锅、温度计、烧杯、电磁炉、石蜡、包埋纸盒、毛笔、载玻片、盖玻片、中性树胶、染色架、鸡蛋清、甘油、甲醛、各级浓度的酒精(50%、70%、80%、85% 、90%、95%、100%)、二甲苯、苏木精、伊红、盐酸、蒸馏水、30%三氯化铁液。 三:试剂配制 苏木精染液:甲液:苏木精1g、无水酒精100ml;乙液:30%三氯化铁液4ml、蒸馏水 100ml、盐酸1ml。使用时将甲液、乙液等量混合。 伊红染液:伊红1g、95%酒精100ml、冰醋酸1-2滴。 1%盐酸酒精:盐酸1ml、70%酒精99ml。 福尔马林:甲醛10ml、蒸馏水90ml。 蛋白甘油1:1配制 四:实验步骤 1.取材和固定 处死实验动物,迅速取出所需的组织,清洗干净放入福尔马林中固定,12h后换福尔马林。 注意事项: (1)取材动作要迅速,不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。 (2)切片材料应根据需要观察的部位进行选择,尽可能不要损伤所需要的部分。 (3)材料固定完毕后,保存于严密紧塞或加盖的标本缸里,同时在容器外上标签。标签上注明固定液、材料来源、日期等。 ⑷如需清洗的材料可用生理盐水轻轻擦洗。 2.清洗 材料固定后,用清水清洗4小时 2.脱水: 50%酒精12h,在依次经70%、85%、95%、100%各级酒精溶液脱水1-2h。 注意事项: (1)脱水必须在有盖的玻璃品中进行,防止吸收空气中的水分和酒精挥发。 (2)在低浓度酒精中,每级停留不宜太长,否则易使组织变软,助长材料的解体。

植物标本的采集制作与保存方法(最全)

植物标本的采集、制作与保存方法(全) 植物标本包含着一个物种的大量信息,诸如形态特征、地理分布、生态环境和物候期等,是植物分类和植物区系研究必不可少的科学依据,也是植物资源调查、开发利用和保护的重要资料。在自然界,植物的生长、发育,有它的季节性以及分布地区的局限性。为了不受季节或地区的限制,有效地进行学习交流和教学活动,也有必要采集和保存植物标本。 第一节国内外主要植物标本馆简介 据不完全统计,目前世界上约有大小植物标本馆(室)2639个,共收藏标本近3亿份。这些标本的76%保存在15个国家内,其中美国占22.1%,法国占7.4%,原苏联占6.6%,英国占5.7%,德国占5.6%,中国占3.7%。世界上馆藏100万份以上的标本馆有55个,其中500万份以上的标本馆有7个。这55个标本馆分布在22个国家,其中美国最多有12个,其次是英国、瑞典、德国和原苏联各4个,再次是法国、瑞士、日本各3个。上述数据表明植物标本收藏数量与国家的发达程度成正相关,不仅发达国家标本搜集起步早、搜集范围广,而且近年来增长速度也是最快的。如瑞典自然博物馆以每年16万份的速度增长;美国不仅大标本馆最多、占世界标本总数的比例最高,标本增加速度也最快,5年增加490万,占同期世界增长量的27.7%。 一、世界最大的10个植物标本馆 二、亚洲最大的5个植物标本馆

三、中国最大的6个植物标本馆 第二节腊叶标本的制作方法 植物标本因保存方式的不同可分许多种,有腊叶标本、液浸标本、浇制标本、玻片标本、果实和种子标本等。本书介绍最常用的腊叶标本和液浸标本的制作方法。 将植物全株或部分(通常带有花或果等繁殖器官)干燥后并装订在台纸上予以永久保存的标本称为腊叶标本。这种标本制作方法最早于16世纪初由意大利人卢卡·吉尼(Luca Ghini)发明的,世界上第一个植物标本室建于1545年的意大利帕多瓦大学。一份合格的标本应该是:(1)种子植物标本要带有花或果(种子),蕨类植物要有孢子囊群,苔藓植物要有孢蒴,以及其它有重要形态鉴别特征的部分,如竹类植物要有几片箨叶、一段竹竿及地下茎。(2)标本上挂有号牌,号牌上写明采集人、采集号码、采集地点和采集时间4项内容,据此可以按号码查到采集记录。(3)附有一份详细的采集记录,记录内容包括采集日期、地点、生境、性状等,并有与号牌相对应的采集人和采集号。 一、标本采集用具 1. 标本夹是压制标本的主要用具之一。它的作用是将吸湿草和标本置于其内压紧,使花叶不致皱缩凋落,而使枝叶平坦,容易装订于台纸上。标本夹用坚韧的木材为材料,一般长约43cm,宽30cm,以宽3cm,厚约5~7mm的小木条,横直每隔3~4厘米,用小钉钉牢,四周用较厚的木条(约2cm)嵌实。 2. 枝剪或剪刀用以剪断木本或有刺植物。 3. 高枝剪用以采集徒手不能采集到的乔木上的枝条或陡险处的植物。

小鼠部分组织的石蜡切片制作

小鼠部分组织的石蜡切片制作 一、实验原理:利用脱水剂除去组织中的水分,再用透明剂二甲苯可以去除脱水剂酒精,而二甲苯可以溶解石蜡并将其导入到已脱水的组织细胞中,然后用熔化的石蜡对组织进行包 埋,冷却后即可将柔软的组织包埋在石蜡中,使其具有一定硬度,且不改变其大小和形状。用旋转切片机可将其切为极薄的薄片,经染色、脱水、装片后在显微镜下可以清晰地观察其 组织结构。 二、材料与用具 1 ?材料:小鼠肝脏、脾脏等。 2 ?用具:溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。 三、实验内容与步骤 1 .取材及固定 取小鼠,采用拉颈处死或麻醉处死法将其杀死,取其脾脏和肝脏,切为边长约为0.5cm的组 织块。用先用0.85%的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍,如果是管状组织则必须把管腔中污 物洗净,可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次,使其管腔冲洗干净,切忌不可用刀 或其他器具刮之。 由动物身上切取的组织必须是新鲜的,材料越新鲜越好,一般不应超过死后24 hr。如果是 管状器官或是其中有分泌之消化液,则死后应迅速采取,以免组织自溶或上皮剥落。 取下的材料马上进行固定,采用FAA固定液,固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1 , 固定时间2 hr以上,超过24hr时可继续浸泡或转入70%酒精中保存。不应使组织块贴于容器壁上,应记录固定液的名称,材料的种类,动物品种及开始固定的时间。 2 .冲洗 固定后的组织块在进行脱水前用70%酒精洗去固定液。 3 .脱水和硬化 经过固定后的组织在水洗后要进行脱水,脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换 出来,使组织逐渐变硬,便于油类或其他透明及浸入,为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。 常用的脱水剂是不同浓度的酒精,因为酒精与水有很大的亲和力,酒精浓度可以逐渐升高,置换出组织中的水。脱水必须充分,脱水不充分会影响透明和浸蜡。脱水过程要逐级上升,不能操之过急,跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。 脱水所用的酒精浓度及过程如下: 30%> 5C%> 7%> 80%> 9%> 95%> 10(% (I )> 10(% (n ) 组织块在各级较低浓酒精(小于70% )中脱水的时间应视组织块的大小而定,大小不超过 0.5立方厘米的组织块脱水时间为6?12 hr,在高浓度酒精中(大于70%)脱水时间为3 hr 左右。组织块在无水酒精中需经过两次处理,以保证脱净水分。由于无水酒精有使组织变脆 的缺点,故在无水酒精中脱水的时间不宜过长,一般应在15?30 min左右。在脱水瓶中酒 精的量与组织块之比约为50:1。 简化步骤如下: 70% (一夜)——80% (1 hr)——90% (30 分)——95% (30 分)——100% (15 分)——酒精+二甲苯(15分)——二甲苯(3分)——石蜡+二甲苯(30分)——石蜡(80分) 4 .透明 透明是石蜡切片法切片前必经的一步。其目的在于用矿物油或植物油等透明剂置换出无水酒 精,以便于熔化的石蜡浸渗到组织间隙中,故透明剂必须是能分别与石蜡和酒精相溶的。经

植物压制标本制作方法

植物标本制作方法 (一)准备 准备采集必需的用品,主要有:标本夹(配以绳带)、标本纸(吸水性强的草纸,折成略小于标本夹的3~5张一叠若干,也可用报纸)、采集袋(塑料袋即可)、枝剪等。 二、种子植物标本的采集和制作 1.标本单株选择 从同种众多单株中,应选择生长正常,无病虫害,具该种典型特征的植株作为采集对象。力求有花有果(裸子植物有球花、球果)及种子。 草本植物要挖出根,植株高的可以反复折叠或取代表性的上、中、下3段。 2.采集步骤 按预定目标,选择合要求的单株,剪取具代表性枝条25~30cm(中部偏上枝条为宜),依次完成下列步骤: (1)初步修整。如去掉部分枝、叶,留下分枝及叶柄一部分。 (2)挂上标签,记录采集时间采集者、采集地点。 (3)将标本放于标本纸的中间,然后压于标本夹中。 (4)等待数日后,等标本干了后,可以进行标本后期制作。 (5)将标本放于标本纸上,按理想中的方式放好。然后利用小纸条,将标本固定在纸上。(6)填写标本记录表,包括该植物的学名、拉丁学名、科属、制作人、采集地点. 动植物标本评分细则 一、昆虫标本 1、虫体的完整性,分数占40%;(包括复眼、口器、触角、足、头、胸、腹、翅膀等完好 无缺), 2、虫针大小与插针位置,分数占10%;(不同昆虫大小需要用到不同型号的昆虫针,插针 位置应留针三分之一,而且不同种类的插针位置有所偏差) 3、虫体本身的美观性,分数占10%;(罕见且色彩斑斓) 4、标本简介,分数为10%;(种名、生活习性、简介,以小纸条的形式附上去) 5、加分环节,分数占40%; 创意:第一,可以充分利用昆虫的警戒色、伪装色、生活习性等,搭配一适合昆虫的环境;第二,利用植物、饰纸等点缀标本背景面(包括盒子的外部和内部),但切忌喧宾夺主等;第三,可以适当搭配一些动物,但主次要明确等等!

石蜡切片步骤

石蜡切片基本步骤 (一)取材和固定 根据实验目的选择材料。将整个虫体或虫体的内部器官(如肠道、马氏管、唾液腺等)取出后,立即投入固定液。 取材大小:0.5cm×0.5 cm×0.2或者1.0 cm×1.0 cm×0.2,厚度不宜超过3mm。 固定液:2.5%的戊二醛固定液,Bouin氏液,10%甲醛等。 固定时间:4oC固定24小时。 注意事项: 取材:1.勿使组织块受挤压切取组织块所用刀、剪要锋利,切割时不可来回切割。夹取组织时,镊子要轻,切勿挤压,以免损伤组织。取材时,组织块可稍大一点,以便在固定后,将组织块的不平整部分修去。 2.选好组织块的切面应熟悉器官组织的组成,并根据观察目的来确定纵切或横切。 3.保持材料的清洁组织块上如有血液、污物、粘液、食物等,先用生理盐水冲洗干净,再入固定液。 4.切除(清除)不需要的部分特别是组织周围的脂肪等,应尽可能清除掉,以免影响以后的程序和观察。 固定:1.材料新鲜取出组织后须立即固定。否则时间相隔过久,体积就要收缩变形或发生自溶现象。 2.抽气生物组织常有气体的存在,使材料不能沉入固定液中,抽气使得固定液有效渗入。真空泵抽气或者用空针管抽气。昆虫整体固定,固定前用解剖针刺数个小孔,以利用固定液渗透。 3.固定剂用量一般为组织体积的10~20倍。勿使组织贴于瓶底或瓶壁,以免影响固定剂的渗入。 4.避免阳光尽可能避免接触阳光以免失去固定作用。 5.加速固定轻轻摇动盛器使组织移动有利于固定液渗入,对长期固定的标本可经常更换固定液。

(二)洗涤 2.5%戊二醛固定液固定的组织:0.2M, pH7.2磷酸缓冲液漂洗三次,每次10min Bouin氏固定液固定的组织:直接入70%酒精更换数次即可脱水,注意苦味酸。 甲醛固定的组织:直接投入50%或70%酒精脱水,不经水洗。但如果在甲醛中时间过长,则仍应当用流水冲洗。 陈旧性标本和混合性固定液应及时洗涤,有利于脱水、切片和染色。否则会影响以后的染色效果。 (三)脱水与透明 漂洗后即入酒精脱水,经50%,70%,80%,90%,95%,100%酒精脱水,其中95%,100%酒精需重复两次。每级10min。 脱水后,入1/3二甲苯+2/3乙醇混合液→1/2二甲苯+1/2乙醇混合液→2/3二甲苯+1/3乙醇混合液→二甲苯→二甲苯,每次约10min,至组织透明为止。 注意: 1. 一般经水洗的材料脱水可从35%开始,柔弱的材料从15%开始,若用酒精洗涤,则可直接移入50%或70%酒精中继续脱水。 2. 每级脱水时间,依照材料的大小、性质以及留在固定液中的时间长短和固定液的溶解性而定。动物组织每级10~30min。 3. 脱水应彻底,否则与二甲苯混合后混浊,必须倒回重脱水且效果不好;如需过夜,则停留在70%酒精中。 (四)透蜡 透明后,先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍3小时,再先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍6小时左右,直至用石蜡完全置换了组织块中的二甲苯,浸蜡应在高于石蜡熔点3℃左右(60°C)的温箱中进行,以利石蜡浸入组织内。便于今后的包理与切片。

植物标本的制作方法

植物标本制作方法 植物标本的制作主要过程是采集、整理、装作、标签和编号等过程,现将几种植物标本制作介绍如下: 准备: 采集前应先收集有关采集地的自然环境及社会状况方面的资料,以便周密安排采集工作。同时应准备采集必需的用品,主要有:标本夹(45×30cm方格板2块,配以绳带)、标本纸(吸水性强的草纸,折成略小于标本夹的3~5张一叠若干)、采集袋(塑料袋)、枝剪、标签、野外记录纸、照相机、海拔仪、罗盘、望远镜、地形图等。采集方法及要求按植物类别加以分述。 一、种子植物标本的采集和制作 1、标本采集的要求 (1)尽可能选择根、叶、茎、花、果。因为花和果实是鉴定植物的主要依据,同时还要尽量保持标本的完整性。采集矮小的草本植物,要连根掘出,如标本较高,可分为上、中、下三段采集,使其分别带有根、叶、花(果),而后合为一标本。 (2)要有代表性。要采集在正常环境下生长的健壮植物,不采变态的、有病的植株,要采能代表植物特点的典型枝,不采徒长枝、萌芽枝、密集枝等。 (3)保护好所采集的植株。把采集到的标本放到采集箱里,如植株

较柔软,应垫上草纸,并压在标本夹里。 (4)要给所采集的标本挂上标签,并注明所采集的地点、日期及采集人的姓名,并且记下植物的生长环境和形态特征如陆地、水池、向阳、气味、颜色、花的形态、乳汁等。 二、腊叶标本的压制与装帧 压制是标本在短时间内脱水干燥,使其形态与颜色得以固定。标本制作是将压制好的标本装订在台纸上,即为长期保存的腊叶标本。压制与制作标本须注意以下各点: (1)顺其自然,稍加摆布,使标本各部,尤其是叶的正背面均有展现。可以再度取舍修整,但要注意保持其特征。 (2)叶易脱落的种,先以少量食盐沸水浸0.5~1分钟,再以75%酒精浸泡,待稍风干后再压。 (3)及时更换吸水纸。采集当天应换干纸2次,以后视情况可以相应减少。换纸后放置通风、透光、温暖处。捆绑标本夹时,松紧要适度,过紧易变黑,过松不易干。标本间夹纸以平整为准。如球果、枝刺处可多夹些。换下的潮湿纸及时晾干或烘干,备用。标本压制干燥后即可装订,装订前应消毒和做最后定形修整,然后缝合在台纸上(30~40cm重磅白版纸)。将野外记录贴左上方,定名签填好贴右下角,此签不得随意改动。对定名签鉴定的名称有异议,可另附临时定名签。照片、散落物小袋等贴在另角。贴时均不要用浆糊,以防霉变。

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