ACE基因和CYP基因多态性与妊娠期高血压疾病的相关性研究

第20卷第4期中国现代医学杂志Vol.20No.4 2010年2月China Journal of Modern Medicine Feb.2010

文章编号：1005-8982（2010）04-0535-04

·论著·ACE基因和CYP基因多态性与妊娠期高血压

疾病的相关性研究*

牛建清1，李宏芬2，沈志霞2，张蕴霞1，代琪1，王健1，范淑英1

（华北煤炭医学院附属开滦医院1.妇产科；2.检验科，河北唐山063000）

摘要：目的探讨血管紧张素转换酶（ACE）基因插入/缺失（I/D）、醛固酮合成酶（CYP11B2）基因-344T/C位点突变多态性与妊娠期高血压疾病的相关关系。方法采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长

度多态性技术（PCR-R FLP），分别检测87例妊娠期高血压疾病组和175例正常对照组ACE基因I/D、

CYP11B2基因-344T/C突变位点的基因型。结果妊娠期高血压疾病组中ACE基因I/D的ID和DD基因

型频率明显高于正常对照组，分别为41.4%和28.7%；相对于II基因型，携带ID和DD基因型人群患妊娠期高

血压疾病的OR值分别为1.981和2.347；D等位基因频率也高于正常对照组为49.42%，差异有显著性；相对于

I等位基因，D等位基因患妊娠期高血压疾病的OR值为1.737；妊娠期高血压疾病组CYP11B2基因

-344T/C的TC和CC基因型频率分别为40.2%和17.2%；相对于TT基因型，携带TC和CC基因型人群患

妊娠期高血压疾病的OR值分别为1.577和6.081；C等位基因频率为37.4%，相对于T等位基因，C等位基因

患妊娠期高血压疾病的OR值为2.114；ACE和CYP11B2两组联合基因分析：相对于II-TT联合基因型，同时

携带TC-DD联合基因型患妊娠期高血压疾病的OR值为6.019；CC-II、CC-ID、CC-DD联合基因型由于样

本量小，不具有代表性，应加大样本量。其余联合基因型，差异均无显著性（P>0.05）。结论ACE基因中D等

位基因及CYP11B2基因-344T点突变等位基因C可能增加妊娠期高血压疾病的遗传易感性；在妊娠期高血

压疾病的发生中，ACE基因及CYP11B2基因可能共同对妊娠期高血压疾病的发生起作用。

关键词：妊娠期高血压疾病;血管紧张素转换酶基因;醛固酮合成酶基因;多态性

中图分类号：R714.246文献标识码：A

Angiotensin converting enzyme and aldosterone synthase

gene polymorphism in patients with hypertensive disorder

complicating pregnancy*

NIU Jian-qing1,LI Hong-fen2,SHEN Zhi-xia2,ZHANG Yun-xia1,

DAI Qi1,WANG Jian1,FAN Shu-ying1

(1.Department of Obstetrics and Gynecology,2.Clinical Laboratory,the Affiliated Kailuan

Hospital,North China Coal Medical College,Tangshan,Hebei063000,P.R.China)

Abstract:【Objective】To Investigate the relationship between polymorphism of an insertion/deletion(I/D)for angiotensin converting enzyme(ACE)genes and aldosterone synthase(CYP11B2)gene-344T/C mutation and

hypertensive disorder in pregnancy.【Methods】A total of87patients with hypertensive disorder complicating

pregnancy and175normal controls were surveyed.The genotype for I/D of ACE and-344T/C mutation of CYP11B2

were determined by polymerase chain reaction(PCR)and restriction fragment length polymorphism(RFLP),

respectively.【Results】The odds ratios(OR)calculated for those exposed to I/D genotype,DD genotype and D

allele were1.981,2.347and1.737respectively in ACE gene;OR calculated for those exposed to TC-genotype,CC-

genotype and C allele were1.577,6.081and2.114in CYP11B2gene.In the same cases,the OR of combinational

DD-TC gene was6.019.The samples of II-CC、ID-CC gene and DD-CC gene were not enough.There was no 收稿日期：2009-10-15

*2005年河北省科学技术研究与发展指导计划课题（No：0527611008）

statistical difference in other combination genes(P>0.05).【Conclusion】Site mutation allele gene of insertion(I)/ deletion(D)polymorphism for angiotensin converting enzyme(ACE)gene and-344T/C aldosterone synthase (CYP11B2)gene might increase the susceptibility of hypertensive disorder complicating pregnancy.It has a positive co-influence on the hypertensive disorder complicating pregnancy.

Key words:hypertensive disorder complicating pregnancy;angiotensinⅡtype1receptor gene;aldosterone synthase gene;gene polymorphism

妊娠期高血压疾病是妊娠期特有的疾病，发病率在我国约占9.4%，国外报道7%~12%。该病严重影响母婴健康，是导致孕产妇及围产儿死亡的主要原因，但其确切的发病机制至今未明[1]。有研究表明，妊娠期高血压疾病具有较高的遗传倾向。有关血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme，ACE）和醛固酮合成酶（aldosterone synthase，CYP11B2）基因与妊娠期高血压疾病的相关研究，鲜有报道。本文通过病例-对照研究，探讨ACE基因I/D多态性及CYP11B2基因-344T/C多态性与妊娠期高血压疾病患者的相关关系，有助于从遗传学角度解释妊娠期高血压疾病的病因，为临床早期预防、诊断和治疗提供了分子遗传学的依据。

1对象与方法

1.1研究对象

选择87例2000~2003年开滦医院产科妊娠期高血压疾病的住院患者，妊娠期高血压疾病诊断标准参照乐杰主编的《妇产科学》第6版[2]。妊娠期高血压疾病患者87例，平均年龄（27±6.5）岁，连续测量非同日血压3次，平均值为SBP≥140mmHg和/或DBP≥90mmHg，经询问病史和化验检查排除原发性高血压、糖尿病、肾病患者。对照组为年龄相匹配的175名同期住院分娩者，经检查孕期（既往）无高血压、冠心病、脑血管病、糖尿病、肾病等病史。

1.2方法

1.2.1DNA的提取抽取外周静脉血5mL，乙二胺四乙酸二钠（EDTA）抗凝，采用氯仿/异戊醇经典方法提取DNA。

1.2.2ACE基因检测PCR扩增参照文献[3]设计引物（上海生工合成）。上游：5'-CTGGAGAC-CACTCCCATCCTTTCT-3'；下游：5'-GATGTGGC-CATCACATTCGTCAGAT-3'。ACE基因检测方法见参考文献[4]。PCR扩增产物出现490bp片段长度者为II纯合型，出现190bp片段长度者为DD纯合型，出现190、490bp两条片段长度者，为ID杂合型。

1.2.3CYP11B2基因型检测PCR扩增参照文献[5]设计引物序列（上海生工）。上游：5'-CAGGAG-GAGACCCCATGTGAC-3'；下游：5'-CCTCCACCCT-GTTCAGCCC-3'。CYP11B2基因检测方法见参照文献[6]。PCR扩增产物为537bp，在这个片段中存在2个自然的酶切位点，经HaeⅢ内切酶消化后产生273、138、126bp长度的片段，若扩增片段中存在T-344C碱基替换，则产生新的HaeⅢ酶切点（GGCC），片段273bp经HaeⅢ内切酶消化后产生202bp和71bp长度的2个片段，所以TT基因型有273、138、126bp共3个片段，TC基因型有5个片段：273、202、71、138、126bp，CC基因型有4个片段：202、71、138、126bp。

1.2.4统计学分析所得结果用SPSS11.5软件分析，基因型及等位基因风险率以比数比（OR）及95%可信区间（95%CI）表示。

2结果

2.1妊娠期高血压ACE基因I/D多态性

妊娠期高血压疾病组中ACE基因I/D的ID和DD基因型频率高于正常对照组，分别为41.4%和28.7%；相对于II基因型，携带ID和DD基因型人群患妊娠期高血压疾病的OR值分别为1.981（95% CI 1.081～3.631）和2.347（95%CI 1.191～4.627）；根据分离分析方法计算等位基因频率，D等位基因频率也高于正常对照组，为49.42%；相对于I等位基因，携带D等位基因患妊娠期高血压疾病的OR 值为1.737（95%CI 1.202～2.512）（表1）。

2.2妊娠期高血压CYP11B2基因-344T/C位点多态性

妊娠期高血压疾病组CYP11B2基因-344T/C 位点TC和CC基因型频率高于正常对照组，分别为40.2%和17.2%；相对于TT基因型，携带TC和CC 基因型人群患妊娠期高血压疾病的OR值分别为

1.577（95%CI0.903～

2.754）和6.081（95%CI

2.300～16.078）；根据分离分析方法计算等位基因频率，C等位基因频率也高于正常对照组，为37.4%；

中国现代医学杂志第20卷

第4期牛建清，等：ACE 基因和CYP 基因多态性与妊娠期高血压疾病的相关性研究

相对于T 等位基因，C 等位基因患妊娠期高血压疾

病的OR 值为2.114（95%CI 1.420～3.147）（表2）。2.3妊娠期高血压ACE 基因I/D 和CYP11B2基因-344T/C 多态性的联合基因型频率

为探讨ACE 基因I/D 及CYP11B2基因-344T/C 基因多态性与妊娠期高血压疾病发病的相互关系，以每个个体的ACE 基因I/D 多态性基因型

和CYP11B2基因-344T/C 位点变异的基因型构成，

进行联合分析：相对于II-TT 联合基因型，同时携带TC-DD 联合基因型患妊娠期高血压疾病的OR 值为6.019（95%CI 2.089～17.336）；CC-II 、CC-ID 、CC-DD 联合基因型由于样本量小，不具有代表性，应加大样本量；其余联合基因型，差异均无显著性（P >0.05）（表3）。

基因妊娠期高血压疾病组对照组

OR

95%CI

例数

例数

频率（%）

基因型II 2629.98347.41ID 3641.45833.1 1.981 1.081～3.631DD 25

28.7

34

19.4

2.347

1.191～4.627

等位基因

I 8850.622464.01D

86

49.4

126

36.0

1.737

1.202～

2.512

频率（%）

表1妊娠期高血压疾病组与正常对照组ACE 基因I/D 多态性基因型和等位基因分析

基因妊娠期高血压疾病组对照组

OR

95%CI

例数

例数

频率（%）

基因型TT 3742.510560.01TC 3540.26336.0 1.5770.903～2.754CC 15

17.2

7

4.0

6.081

2.300～16.078

等位基因

T 10962.627378.01C

65

37.4

77

22.0

2.114

1.420～3.147

频率（%）

表2妊娠期高血压疾病组与正常对照组CYP11B2基因-344T/C 多态性基因型和等位基因分析

ACE 及CYP11B2联

合基因型妊娠期高血压疾病组对照组

OR 95%CI

例数例数频率（%）II-TT 1213.85028.61II-TC 1011.53117.7 1.3440.519～3.480II -CC 4 4.62 1.28.333 1.363～50.948ID-TT 1517.23117.7 2.0160.835～4.868ID-TC 1213.82313.1 2.1740.849～5.567ID-CC 910.44 2.39.375 2.465～35.651DD-TT 1011.52413.7 1.7630.658～4.580DD-TC 1314.99 5.1 6.019 2.089～17.336DD-CC

2

2.3

1

0.6

8.333

0.697～99.686频率（%）表3妊娠期高血压疾病组与对照组ACE 基因I/D 及CYP11B2基因-344T/C 多态性的联合基因型分析

3讨论

妊娠期高血压疾病的基本病理生理变化是全身

小动脉痉挛，血管内皮损伤，血管对血管紧张素Ⅱ敏

感性增强，血管内皮及其基底膜受损，凝血反应被激

活，血管活性物质比例失调，最终使小血管痉挛，子

宫胎盘缺血，导致妊娠期高血压疾病的发生[7]。

ACE 是肾素-血管紧张素-醛固酮系统

（renin-angiotensin-aldosterone system ，RAAS ）的关

键酶，ACE 基因位于人染色体17q 23上，ACE 的作用

产物-血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）是RAAS 作用于效应

器的关键成分。ACE 可将血管紧张素Ⅰ转换成具有

强烈血管收缩活性的血管紧张素Ⅱ，血管紧张素Ⅱ作用于血管紧张素受体Ⅰ，促进肾上腺皮质释放醛固酮，醛固酮再通过控制盐平衡和血管内容量调节血压。醛固酮合成酶是体内合成醛固酮的最后一步生化反应的催化酶，具有11-β羟化酶、18羟化酶和18氧化酶的活性，属于线粒体细胞色素P450酶超家族。醛固酮合成酶（CYP11B2）基因是编码醛固酮生物合成终末阶段的关键基因，精确定位在8q24.3。CYP11B2基因转录调空区存在-344C/T单核苷酸等位基因多态性，这个位点恰好是类固醇生成转录因子-1的部位[8]。有研究表明，CYP11B2基因的变异可致醛固酮分泌失调[9]。醛固酮过度分泌使体内水电解质平衡失调，水钠潴留，血容量增加，通过非基因快速作用，使血管平滑肌细胞通透性增高，水钠储留于细胞内，钠氢交换增加，细胞内钙及三磷酸肌醇浓度增高，从而使血管对加压物质反映增强，血管平滑肌张力增高[10~12]。

在妊娠期高血压疾病组中，D等位基因频率高于正常对照组，因此导致ACE水平升高，AngⅠ转变成AngⅡ增加，以致出现血管痉挛、血压升高，导致妊高征的病理变化[13]。本研究结果显示，携带ID和DD基因型的人群，患妊娠期高血压疾病的风险性分别增加了1.981倍和2.347倍；携带D等位基因的危险性增加了1.737倍，提示妊娠期高血压疾病的遗传倾向与ACE基因的D等位基因有关，D等位基因可能是妊娠期高血压疾病遗传标志之一。但亦有结论不同的报道[14]。

BENETOS等[15]发现，醛固酮合成酶（CYP11B2）基因-344C基因型的白人，其卧位血浆醛固酮水平高于醛固酮合成酶（CYP11B2）基因-344T基因型白人，提示醛固酮合成酶（CYP11B2）基因-344等位基因可能与原发性高血压发病有关。本研究结果表明，妊娠期高血压疾病组中CYP11B2基因-344T/C位点的TC基因型频率，高于正常对照组，患病风险（增加了1.577倍）虽有增高的趋势，但并无统计学差异；携带CC基因型人群患病风险增加了6.081倍；携带C等位基因的危险性增加了2.114倍，表明具有-334C位点突变的个体可能是妊娠期高血压疾病发生中的高危人群。

本研究对ACE基因I/D和CYP11B2基因-344T/C多态性进行联合基因型分析，发现相对于II-TT联合基因型，同时携带DD-TC联合基因型的个体患妊娠期高血压疾病的危险性增加了6.019

倍。上述结果提示，ACE基因缺失及CYP11B2基因点突变的多态性可能共同对妊娠期高血压疾病的发生、发展起作用。

总之，妊娠期高血压疾病的发病机理是极其复杂的，它可能是一种多基因决定和受多种因素影响的疾病。随着分子遗传学研究的不断深入，ACE基因和CYP11B2基因在妊娠期高血压疾病中的确切发病机制将进一步被阐明。

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中国现代医学杂志第20卷

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（王吉伟编辑）

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（王吉伟编辑）