抗血小板聚集药物作用机制的研究进展_李敏

中国人民解放军后勤学院门诊部（100858）李敏

抗血小板聚集药物作用机制的研究进展

摘要：目的

目的 阐述现有的抗血小板聚集药物的作用机制。方法

方法 根据近几年发表的文献，按血小板发生聚集作用的机制来分类，阐明具体的作用机制。结果与结

结果与结论对于这些抗血小板聚集药物机制的研究，可为开发新药提供良好的依据。

关键词：抗血小板聚集；作用机制；GP IIb/IIIa；ADP受体拮抗剂；Atrase A

中图分类号：R552文献标识码：A

文章编号：1005-8257（2013）09-0015-04血小板的聚集（platelet aggregation）是指血小板与血小板之间的相互粘着，这一过程需要纤维蛋白原、Ca2+及血小板膜上的GPIIb/IIIa的参与。在未受刺激的静息血小板膜上的GPIIb/IIIa并不能与纤维蛋白原结合。在致聚剂的激活下，GPIIb/IIIa分子上的纤维蛋白原受体暴露，在Ca2+的作用下纤维蛋白原可与之结合，从而连接相

邻的血小板，充当聚集的桥梁，使血小板

聚集成团。

血小板聚集反应的形式可因致聚剂

的种类及浓度的不同而有差异。如低浓度

ADP引起的血小板聚集只出现在第一聚集

时相，并很快解聚；中等浓度ADP引起的

聚集，在第一时相结束和解聚后不久，又

出现不可逆的第二聚集时相，第二聚集时

相的出现是由于血小板释放内源性ADP所

致；高浓度ADP引起的聚集，由于第一聚

集时相和第二聚集时相相继发生，只出现

单一的不可逆性聚集。凝血酶所引起的血

小板聚集反应与ADP相似，也呈剂量依赖

方式，引起单相或双向血小板聚集。胶原

只引起血小板单相的不可逆聚集，聚集反

应与释放反应同时发生，故胶原所诱发

的血小板单相聚集与内源性ADP的释放和

TXA2的形成有关[1]。

目前，从血小板发生聚集作用的机

制来看，抗血小板聚集药物主要有：①抑

制血栓烷A2（thromboxane A2，TXA2）诱

导的血小板聚集，以阿司匹林（aspirin）

为代表；②抑制二磷酸腺苷（adenosine

diphosphate，ADP）诱导的血小板聚集，

以噻氯匹啶（tic1opidine）、氯吡格雷

（clopidogrel）为代表；③血小板糖蛋

白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗药，抑制血小板聚集

的最终共同途径，代表药物为阿昔单抗

（abciximab）、替罗非班（tirofiban）、依

替巴肽（eptifibatide）。此外，血小板激活

因子（PAF）受体拮抗剂、凝血酶和凝血

因子Xa（FXa）抑制剂、钙离子（Ca2+）通

道拮抗剂、5-HT2受体拮抗剂等均有抑制

志,2006,(3):214～215

4 蒋光亮,周桥,张志国,等.右下肺滑膜肉瘤一例[J].中国胸心血管外科临床杂志,2005,(2):101

5 刘坤,李为民.原发性肺肉瘤19例临床分析[J].中国肺癌杂志,2012,(6): 375～380

6 林滔,李力,戈烽,等.原发肺滑膜肉瘤一例[J].中华肿瘤杂志,2003,(5):436

7 范钦和.软组织病理学[M].南昌:江西科学技术出版社,2003

8 Nambu A,Kurihara Y,Ichikawa T,et al.Lung involvement in angiotropic l y m p h o m a:C T f i n d i n g s[J].A J R,1998,170(4):940～942

9D u r a n-M e n d i c u t i A,C a s t e l l o P,Vargas SO.Primary synovial sarcoma of the chest: radiographic and clinicopathologic correlation[J].J Thorac Imaging,2003,18(2):87～93

10 Tateishi U,Gladish GW,KusumotoM,

et al.Chest wall tumors:radiologic

findings and pathologic correlation.

p a r t2M a l i g n a n t t u m o r s[J].

Radiographcs,2003,23(6):1491～1508

11 FrazierAA,Franks TJ,Pugatch

RD,et al.From the archives of the

AFIP:Pleuropulmonary synovial

sarcoma1[J].Radiographics,2006,26:

923

12 Hartel PH,Fanburg Smith JC,Frazier

AA,et al.Primary pulmonary and

mediastinal synovial sarconla:a

clinicopathologic study of 60 cases

and comparis on with five prior

series[J].Mod Pathol,2007,20:760

13 Zompi S,Coudere LJ,Cadranel J,et

al.Clonality analysis of alveolar

B lymphocytes contributes to the

diagnostic strategy in clinical

suspicion of pulmonary lymphoma[J].

Blood,2004,103(8):3208～3215

14 SAITO T,NAGAI M,LADANYI M.SYT－

SSX1 and SYT－SSX2 interfere with

repression of E-cadherinby snail

and slug:a potential mechanism for

aberrant mesenchymal to epithelial

t r a n s i t i o n i n h u m a n s y n o v i a l

sarcoma[J].Cancer Res,2006,66(14):

6919～1927

15 Okamoto S,Hisaoka M,Daa T,et

al.Primary pulmonary synovial

s a r c o m a:a c l i n i c o p a t h o l o g i c,

immunohistochemical,and molecular

s t u d y o f11c a s e s[J].H u m

Pathol,2004,35(7):850～856

（20130626收稿）

血小板聚集作用，本文依次仅从以上3个方面对抗血小板药物进行综述，并简述一些重要的抗血小板活性。

1 血栓烷A

2（TXA

2

）抑制剂

1.1 阿司匹林（ASA） 阿司匹林是最早被应用于抗栓治疗的抗血小板药物，主要用于无ASA过敏或未接受溶栓、抗凝治疗的心、脑血管动脉血栓疾病的一、二级预防。ASA的一级预防疗效由迄今最大的一项Meta分析再次予以肯定[2]，ASA已经被确立为治疗急性心肌梗死（AMI）、不稳定心绞痛及心肌梗死（MI）二级预防的经典用药。ASA在体内具有抗血栓的特性，能明显减少周围动脉内阻塞性血栓的形成。

1971年，Vane阐明了低浓度阿司匹林的主要作用机制是不可逆阻断乙酰化环氧酶（COX2）活性部分，从而阻断TXA2生成的作用，而后者是血小板聚集的一个强力促进因素。高浓度阿司匹林能直接抑制血管壁中合成酶，减少前列环素的合成，不利于对TXA2作用的对抗和平衡，而且发生明显的胃肠道不良反应。因此，使用阿司匹林应选择合适的剂量，阿司匹林经肠胃吸收后30～40min可达峰值，当给予低于160mg的口服剂量在30min可最大程度抑制血小板功能，大多数人每天只要服用80～100mg的阿司匹林，即可较好地防止动脉血栓形成。在我国，阿司匹林用于脑卒中二级预防推荐剂量为50～100mg/d[3]，而用于预防急性心肌梗死或冠心病介入治疗手术后，应每日1次口服300mg[4]。

1.2 鱼油制剂 花生四烯酸（AA）是膜磷脂的正常组成部分，为血栓烷（TXA2）生物合成的前体，经环氧化酶途径生成不稳定的环内过氧化物，再经血小板内血栓烷合成酶作用生成TXA2。鱼油制剂的主要成分是二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）。动物实验表明，于动脉腔内成形术前3周开始应用鱼油制剂可降低动脉腔内成形术时及术后血小板的黏附功能，增加血小板膜的流动性，这有助于减轻手术局部血小板与血管壁的相互作用，的增殖。

集本质上是一个Ca

Ca2+

2.1

2.1.1

用。

2.1.2 西洛他唑[6] 西洛他唑是喹啉类衍生

3 糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）受体拮抗剂

血小板G PⅡb/Ⅲa是一种膜结合蛋白，在静息血小板表面约有8万个分子。它是纤维蛋白原受体，由α和β两个亚单位组成的异二聚体，每个亚单位都有胞外区、跨膜区和胞内区。在激活剂作用下，血小板活化并导致GPⅡb/Ⅲa受体的空间构象发生变化，以便与纤维蛋白原或Von Wllebrand因子等结合，从而诱导血小板发生聚集。血小板GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂结合到受体上，使其不能与黏附蛋白结合，从而抑制了血小板的聚集，但并不消除血小板的黏附和分泌等重要功能。

由于GPⅡb/Ⅲa与纤维蛋白原的结合是血小板聚集的终末共同途径，因而血小板GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂可有效地预防血小板介导的血栓形成。目前，已获美国FDA批准的主要有3种经静脉的血小板GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂，即阿昔单抗、依替巴肽和替罗非班。

GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂的化学类型不尽相同，在抗血小板效力上也存在差异，这也许就是它们在减少患者血栓缺血事件上疗效不同的原因之一[13]。阿昔单抗是血小板GPⅡb/Ⅲa受体的人与鼠嵌合单克隆抗体（C7E3），可以与GPⅡb/Ⅲa受体非特异性结合，使纤维蛋白原不能与GPⅡb/Ⅲa 结合，从而发挥抑制血小板聚集的作用。依替巴肽是肽类GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂，通过与血小板膜上GPⅡb/Ⅲa受体结合，占据其结合位点，使血小板膜上GPⅡb/Ⅲa受体与纤维蛋白原不能结合而抑制血小板的聚集。依替巴肽对血小板糖蛋白上Ⅱb/Ⅲa受体的抑制作用是竞争性抑制，浓度越高时抑制作用越强。依替巴肽与Ⅱb/Ⅲa受体的结合是可逆性的，停药后4h依替巴肽的作用减弱一半。替罗非班（tirofiban）是非肽类GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂，不具有抗原性，可以与GPⅡb/Ⅲa受体可逆性结合，选择性抑制GPⅡb/Ⅲa，进一步阻断纤维蛋白原与GPⅡb/Ⅲa结合，抑制血小板聚集。

4 通过酶切血小板膜糖蛋白GPIb

从中华眼镜蛇毒中分离纯化出一个新

的金属蛋白酶atrase A，Atrase对ristocetin

和thrombin诱导的血小板聚集有明显的抑

制作用，这种抑制作用可能是与血小板膜

糖蛋白GPIb和vWF关系密切，Western blot

结果也证实了atrase A能特异性酶切血小板

膜糖蛋白GPIb，而对vWF没有表现出裂解

作用。在实验中笔者还发现，atrase A对

ristocetin诱导的人PRP血小板聚集有明显

的抑制作用，但对兔PRP诱导的血小板聚

集的抑制作用则不明显，且ristocetin诱导

兔血小板的聚集率明显低于其他5种诱导

剂。Atrase A对thrombin诱导的兔血小板聚

集有明显的抑制作用，对人PRP的抑制作

用不明显，造成这些差别的原因和机制尚

不清楚，可能与实验材料的种属差异性有

关，有待于进一步深入研究。

实验结果还显示，与血小板预孵5min

时，atraseA对ADP、PAF、AA、collagen引

起的血小板聚集有微弱的抑制作用。随着

预孵时间延长至30min，atrase A对ADP、

PAF、AA、collagen引起的血小板聚集有明

显的抑制作用。由于上述4种诱导剂引起血

小板聚集的机制不一样，并有文献报道[14]

蛇毒金属蛋白酶抑制上述4种诱导剂引起

血小板聚集的机制也不相同，而已分离纯

化出的atrase A是多结构域的金属蛋白酶，

它抑制上述4种诱导剂引起血小板聚集的

结构基础可能与其金属蛋白酶活性结构域

有关，也可能与其去整合素和类去整合素

样结构以及富含半胱氨酸结构有密切关

系，因此它抑制4种诱导剂引起血小板聚

集的具体作用机制还有待于进一步研究。

血小板的主要生理功能是参与止血与

血栓形成，并且在动脉粥样硬化、肿瘤转

移和炎症反应等病理损伤过程中起着重要

的作用。由于蛇毒中的一些金属蛋白酶能

广泛影响血液凝固、血小板聚集以及血栓

的形成，因此充分利用蛇毒资源开发抗血

栓药已经成为研究的热点。本实验发现，

从中华眼镜蛇毒中分离纯化出的金属蛋白

酶atrase A，通过特异性酶切血小板膜糖

蛋白GPIb从而抑制ristocetin和thrombin诱

导的血小板聚集，并对ADP、PAF、AA、

collagen诱导的血小板聚集的抑制作用具有

明显的时间依赖性。Atrase A是否在体内具

有抗凝活性以及能否作为一种潜在的抗血

栓药物尚需要进一步的研究和评价。

5 细胞质钙活化抑制剂和MAPK蛋白磷酸化

抑制剂（如ERK

2

或p38MAPK）

钙离子在血小板聚集中起重要作

用，并且能够被凝血酶、胶原或者ADP

内源性或者外源性激活细胞质膜上的受

体。Ca2+的增加来自于两种途径：内在

的储存和通过质膜钙通道进入。G蛋白

偶联受体的激活，如凝血酶受体PAR1和

PAR3或者P2Y ADP[15][16]受体，均导致磷

脂酶-β的激活。

此外，胶原与糖蛋白连结于血小板，

并且提高了PLC的活性，通过磷酰化酪氨

酸残基上的PLCγ-2。因此，两种类型的

受体均能刺激从fromphosphatidylinositol二

磷酸中释放三磷酸肌醇。IP3结合受体2型

IP3分泌颗粒，导致人类的血小板减少，减

少钙的动员[17][18][19]。这种细胞内钙离子的

上调，刺激下游区的靶蛋白，包括钙调蛋

白激酶，肌浆球蛋白轻链激酶和蛋白激酶

C。由于这个原因，笔者认为，在胶原活

化的血小板中，davallialactone的抗血小板

活性是由于对钙动员的抑制。

MAPKs包括ERK、p38MAPK和JNK在

血小板中可被许多激活剂激活，如胶原和

凝血酶[18][19][20][21]。虽然在血小板激活过程

中，ERK和p38MAPK所起的作用仍有争

议[22][23]。SB203580、p38MAPK特异性抑制

剂，能够抑制由胶原或凝血酶诱导的血小

板的活化[24]，研究表明，ERKs在胶原和凝

血酶刺激下被激活[25]，并且ERKs的激活

包含于胶原诱导的血小板的聚集和分泌。

在人的血小板中，ERK的级联反应需要激

活储存的Ca2+内流。虽然激动剂（包括胶

原和凝血酶）可以诱导钙动员，但结果显

示，为了使Ca2+浓度达到使血小板活化的

水平，必须有另外的Ca2+内流。因此，在

胶原诱导的血小板聚集中，davallia-lactone

对ERK2和p38MAPK磷酸化的抑制作用似

乎对此物的抗血小板活性有部分作用，细胞外信号调节激酶1和2均能在血小板中出现。笔者发现，ERK2可被胶原和凝血酶刺激而激活。

6 结语

综上所述，由于血小板在不同疾病、不同病人和不同疾病阶段中所起的作用不同，且影响血小板聚集的因素很多，因此应通过实验研究、病理检查、不断开发具有新适应症的抗血小板聚集药物，从分子生物学角度对血小板与血栓性疾病机制进行更为深入的研究，将有助于发现新的作用靶点，为研究开发新型的抗血小板药物提供更大的发展空间。多种重要有效成分具有显著抗血小板聚集作用，但对其作用机制的阐释尚需要深入。

参考文献

1 姚泰.生理学第六版[M].北京:人民卫生出版社,1978,12

2 Berger J S,Roncaglioni M C,Avanzini F,et a1.Aspirin for the Primary P r e v e n t i o n o f C a r d i o v a s c u l a r Events in Women and Men2A Sex2 S p e c i f i c M e t a2a n a l y s i s o f Ran2domized Cont rolled Trials[J]. JAMA,2006,295:306～313

3 郭辉,刘媛,胡玉龙.抗血小板药物研究进展[J].中国药物与临床,2007,7(9): 694～695

4 中华内科杂志编辑部.规范应用阿司匹林治疗缺血性脑血管病的专家共论[J].中华内科杂志,2006,45(1):81

5 邓云,叶松,徐秋萍.抗血小板药物研究概述[J].江西中医学院学报,2007,19(4): 94～97

6 韩红路.新型抗血小板聚集剂西洛他唑[J].中国科技信息,2005,21(9):55

7B o r n G V.A g g r e g a t i o n o f b l o o d p l a t e l e t s b y a d e n o s i n e diphosphate and its reversal[J]. Nature,1962,194:927～929

8 Gachet C.Regulati on of platelet functions by P2 receptors[J].Annu Rev Pharmacol Toxico,2006,46:277～300

9 VialC,H e c h l e r B,LeonC,et al.

Presence of P2X1 purinoceptors in

human platelets and megakaryoblastic

celllines[J].Thromb,Haemost,1997,78:

1500～1504

10 SAVI P.Role of P2Y1 purinocept or

in ADP-induced platelet activation[J].

FEBS Lett,1998,422:291～295

11 张禹,于淑梅.常用抗血小板药物的临

床应用[J].中国临床医药研究杂志,2008,

14(179):122

12 刘宏,侯凡凡,梁敏.终末糖基化产物对

培养的人脐静脉内皮细胞粘附分子表达的

影响[J].中国病理生理杂志,2005,21(10):

1934～1937

13 杨永昌,黎燕.糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮

抗剂在抗血小板治疗中的应用及其研究

进展[J].国外医学药学分册,2003,30(2):

86～90

14 Holmsen,H.Significance of testing

platelet functions in vitro[J].Eur J

ClinInvest,1994,24:3～8

15 Daniel,J.L.,Dangelmaier,C.A.,

Selak M.,Smith,J.B.ADP stimulates

IP3 formation in human platelets[J].

FEBS Lett.,1986,206:299～303

16 Rosado,J.A.,Sage,S.O.The ERK

cascade,a new pathway involved inthe

activation of store-mediated calcium

entry in human platelets[J].Trends

Cardiovasc,Med,2002,12:229～234

17 Smith,J.B.,Selak,M.A.,Dangelmaier,

C.,Daniel,J.L.Cytosolic calciumas a

se cond me ss en ge r fo r collagen-

induced platelet responses[J].Biochem.

J.,1992,288:925～921

18 Bugaud,F.,Nadal-Wollbold,F.,

Levy-Toledano,S.,Rosa,J.P.,Bryckaert,

M.Regulation of c-jun-NH2 terminal

kinase and extracellular-signal

regulated kinase in human platelets[J].

Blood,1999,94:3800～3805

19 Garcia,A.,Shankar,H.,Murugappan,S.,

Kim,S.,Kunapuli,S.P.Regulation and

functional consequences of ADP

receptor-mediated ERK

2

activation in

platelets[J].Biochem.J.,2007,404:

299～308

20 Kuliopulos,A.,Mohanlal,R.,Covic,L.

Effect of selective inhibition o f

t h e p38M A P k i n a s e p a t h w a y o n

platelet aggregation[J].Thromb.

Haemost,2004,92:1387～1393,19～20

Human Chromosomes

21 Li,Z.,Zhang,G.,Feil,R.,Han,J.,

Du,X.Sequential activation of

p38 and ERK pathways by cGMP-

dependent protein kinase leading

to activation chloride of the

platelet integrin alphaIIb beta3[J].

Blood,2006,107:965～972

22 McNicol,A.,Jackson,E.C.Inhibition

of the MEK/ERK pathway has no effect

on agonist-induced aggregation of

human platelets[J].Biochem,Pharmac

ol,2003,65:1243～1250

23 K r a m e r,R.M.,R o b e r t s,E.F.,

Strifler,B.A.,Johnstone,E.M.Thrombin

induces activation of p38 MAP

kinase in human platelets[J].J Biol

Chem,1995,270:27395～27398

24 Borsch-Haubold,A.G.,Kramer,R.

M.,Watson,S.P.Cytosolic phospho-

lipase A2 is phosphorylated in

collagen-and thrombin-stimulated

human platelets independent of

protein kinase C and mitogen-

activated protein kinase[J].J.Biol.

Chem,1995,270:25885～25892

25 Rosado,J.A.,Sage,S.O.Role of

the ERKpathway in the activation

of store-mediated calcium entry

in human platelets[J].J.Biol.

Chem,2001,276:15659～15665

（20130807收稿）