姜黄素对动脉粥样硬化模型大鼠主动脉ICAM_1mRNA表达的影响_丁奇峰
=实验研究>
姜黄素对动脉粥样硬化模型大鼠
主动脉ICAM-1mRNA表达的影响
丁奇峰1,陈志强1v,黄怀鹏2,尹智炜1,方敬1
(11河北医科大学中西结合研究所,河北石家庄050017;
21神威药业有限公司,河北石家庄051430)
摘要:目的:探讨姜黄素对大鼠动脉粥样硬化模型的治疗作用及其机理。方法:用维生素D3和高脂饲料诱发大鼠动脉粥样硬化模型。4周后,按血清胆固醇水平将大鼠随机分为:模型组和大、小剂量姜黄素组、空白对照组;第10周后检测各组大鼠血脂、主动脉内膜P中膜厚度比值及斑块面积,RT-PCR法检测主动脉中细胞间黏附分子(IC AM-1)mRNA的表达水平。结果:血清总胆固醇水平两姜黄素组和模型组均显著高于空白对照组,而两姜黄素组低于模型组;主动脉内膜P中膜厚度比值、斑块面积、主动脉ICAM-1mRNA表达量姜黄素组与模型组相比均显著降低,大剂量姜黄素组作用更为明显。结论:姜黄素具有抗动脉粥样硬化作用,其降低血脂和抑制主动脉ICAM-1mRNA 表达可能是其作用机制之一。
关键词:姜黄素;动脉粥样硬化;ICAM-1
中图分类号:R28515文献标识码:B文章编号:1006-3250(2005)12-0902-03
姜黄素是治疗高脂血症的中药新药,药理药效学研究表明[1、2],姜黄素能明显降低甘油三酯、胆固醇和低密度脂蛋白,提高高密度脂蛋白的含量,具有抗氧化作用,但其对动脉硬化(artherosclerosis,AS)中主动脉细胞间黏附分子(Intercellular adhesion molecule,IC AM-1)表达影响的研究尚未见报道。本实验通过观察姜黄素对大鼠AS主动脉ICAM-1mRNA表达的影响,进一步探讨其抗AS的部分可能机制。
1材料与方法
111材料
11111动物健康SD大鼠60只,体重200g~ 250g,雄性,由河北医科大学实验动物中心提供,合格证书:冀医动管字04259号。
11112药品与试剂姜黄素(神威药业有限公司,批号0404205),总胆固醇、甘油三酯测定试剂盒为北京利德曼生化技术有限公司生产(批号200406051),高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒由上海科华生物工程股份有限公司生产(批号20040612),TRIzol RNA抽提试剂为GIBC O公司产品。M-MLV逆转录酶、随机引物、RNasin、Taq DNA Polymerase为Promega公司产品。PCR引物由北京赛百盛公司合成。
11113仪器PC R仪(英国Thermo Hybaid), DYY-12型电脑三恒多用电泳仪(北京市六一仪器厂),TGL-16GA型低温高速离心机(上海安亭科学仪器厂),日立7170-A全自动化生化分析仪(HI TACHI 公司),数码凝胶图像定量分析系统E LEC TRO-P HORESIS DOC UME NTATI ON AND ANALYSIS SYSTE M120型(美国Kodak公司),HMIAS-2000医学图像分析系统(武汉千屏影像技术有限责任公司)。
112方法
11211模型制作及分组处理动物适应饲养1周,随机分为2组:空白对照组(简称正常组)12只,喂饲普通饲料;高脂饲料组48只,按70万I U P kg的总剂量灌胃给予维生素D3,分3d给完,之后每天喂高脂饲料[3](高脂饲料配方[4]:2%胆固醇、013%去氧胆酸钠、715%猪油、012%丙基硫氧嘧啶、5%蛋黄粉、85%基础饲料),随体重增长及时调整药量。进食量控制在15g P100g P d,均自由摄食、饮水。第4W 末取血检测血脂,按血胆固醇水平将SD大鼠随机分为:模型对照组(简称模型组)16只、姜黄素小剂量治疗组(简称JHSXJL组)16只;姜黄素大剂量治疗组(简称JHSDJL组)16只。自实验第5W开始JHSXJL组以01285g P kg P d(相当于临床用量的10倍)、JHSDJL组以01571g P kg P d(相当于临床用量的20倍)的剂量分别用015%羧甲基纤维素钠溶液配成混悬液按10ml P kg灌胃;正常组、模型组以同等剂量的015%羧甲基纤维素钠溶液灌胃;各组喂食饲料不变,实验周期共10W。
11212指标检测
血脂测定:动物实验第4周和实验后第10周末取血,用酶法测定各组血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白(HDL)的浓度。根据公式计
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算动脉硬化指数(AI)。AI=(TC-HDL-C)P HDL-C 。
主动脉标本的制备及初步处理:10周后麻醉动物,剖开胸腹腔,剥离主动脉全长,除去外膜脂肪组织,纵行切开,一半立即放入液氮中保存,随后再转入-80e 冰箱保存,另一半置入4%多聚甲醛溶液中保存,进行常规HE 染色,光镜下观察。
内膜、中膜厚度及斑块面积测定方法:应用医学图像分析系统,定量测定血管内膜厚度、中膜厚度以及血管内膜粥样硬化斑块占整个血管面积的百分比。
内皮细胞间黏附分子mRNA 表达的测定:总RNA 提取:按照试剂盒提供的方法)Trizol 一步法提取组织总RNA 。用核酸蛋白分析仪鉴定RNA 纯度和量,所用RNA 的OD 260P OD 280均在118~210之间。
cDNA 制备:采用随机引物法逆转录,取总RNA 2L g,按PROMEGA 公司M -MLV 逆转录说明书操作。产物置于-80e 保存,以备PCR 扩增。
PC R 扩增:ICAM -1上游引物:5c -AAA CGG GAG ATG AAT GGT -3c ;下游引物:5c -TC T GGC GGT AAT
AGG TGT A -3c 。扩增产物长度为:184bp 。B -actin 上游引物:5c -GAG GGA AAT C GT GCG TGA C -3c ,下游引物:5c -C TG GAA GGT GGA C AG TGA G -3c 扩增产物长度为445bp 。反应条件:95e 预变性10min,95e 40s,54e 40s,72e 40s,30循环,72e 延伸10min 。115%琼脂糖凝胶电泳经凝胶图像定量分析系统成像,以B -actin 为内参照,测定各样本IC AM -1RNA 的相对表达量。
113 统计学方法
结果以均数?标准差( x ?s )表示,数据处理采用统计软件SPSS1115。两组间计量资料采用t 检验,多组间计量资料采用单因素方差分析,以P <0105为差异显著。
2 结果
211 各组大鼠血脂水平比较(见表1)模型组、JHSXJL 组和JHSDJL 组血浆中TC 、TG 、AI 均显著高于空白对照组,而JHSXJL 组和JHSDJL 组TG 、TC 、AI 低于模型组(P <0105或P <0101)。两治疗组比较TG JHSDJL 组低于JHSXJL 组。
表1 实验第10周末各组大鼠血脂水平比较( x ?s ,mmol P L)
组别n TC TG HD L -C AI 正常
组111114?0123
n
0161?0113n
0137?
0109n
2113?0134n
模型组1218183?41830187?01111153?01318116?3179J HSDJ L 组159183?2162n m 0139?0107n 2142?0152n n 4153?1143n J HSXJ L
组
14
13112?
5120n
0140?
0113n
2114?
0171n
5132?
2142n
注:与模型组比较:n
P <0101,
n n
P <0105;与J HSXJL 组比较:m P <0105(下同)
212 主动脉内膜P 中膜厚度比值及斑块面积测
定(见图1~4、表
2)
图1 正常组SD 大鼠主动脉内膜
主动脉内膜光滑完整,单层内皮细胞连接紧密,无
脂质条纹或纤维斑块(HE 染色@200)
表2 主动脉内膜P 中膜厚度比值、斑块面积及
ICA M -1mRNA 表达量比较( x ?s )
组
别
n (只)主动脉内膜P 中膜厚度斑块面积(%)
ICA M -1mRNA 正常组110135?0106n )
01660?01293n
模型组121103?012771165?918611790?01527JHSDJ L 组150151?0115n m 29163?5147n m
01759?01212n m JHSXJ L 组
14
0168?0116n
37133?7183n
11086?01325n
在实验的第10周末,模型组大鼠形成典型的动
脉粥样硬化斑块,提示SD 大鼠动脉粥样硬化模型
图2 模型组SD 大鼠主动脉内膜
主动脉内膜明显增厚,内皮细胞广泛损伤脱落,脂质沉积(HE 染色@200)
复制成功。JHSXJL 组和JHSDJL 组主动脉内膜P 中膜厚度比值显著低于模型组(P <01001),斑块面积占血管总面积百分率也显著低于模型组(P <01001),而JHSDJL 组低于JHSXJL 组(P <0105)。
213 姜黄素对ICAM -1mRNA 表达的影响(见图5、表2)
以B -actin 为内参照,姜黄素对IC AM -1mRNA 表达的影响采用目的基因扩增片段(184bp)的灰度值与B -actin 扩增片段(445bp)的灰度值的比值表示。结果显示,JHSXJL 组和JHSDJL 组ICAM -1mRNA 表达量均低于模型组(P <01001),且JHSDJL 组低于JHSXJL 组(P <0105)。
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图3 姜黄素小剂量组SD 大鼠主动脉内膜
主动脉内膜增厚、内皮细胞损伤及脂质沉积均较模型组减轻(HE 染色@
200)
图4 姜黄素大剂量组SD 大鼠主动脉内膜
主动脉内膜光滑完整,单层内皮细胞连接紧密,脂质条纹或纤维斑块明显减少(HE 染色@
200)
图5 各组间ICAM -I mRNA 表达量的比较
Li ne 1:正常对照组;Line 2:J HSDJ L 组;Line 3:J HSXJL 组;Line 4:
模型组
3 讨论
脂质代谢紊乱是动脉粥样硬化发生发展的重要
原因之一。大量临床流行病学和基础研究表明[5]
,血浆中TC 、TG 或低密度脂蛋白胆固醇(LDL -C)升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL -C)降低,可促进动脉粥样硬化的发生。本实验结果显示:1模型组、JHSXJL 组和JHSDJL 组血浆中TC 、TG 、AI 均显著高于空白对照组,而JHSXJL 组和JHSDJL 组TG 、TC 、AI 低于模型组;两治疗组比较TG 水平JHSDJL 组低于JHSXJL 组。说明姜黄素具有调节血脂,降低TC 、TG 、AI 的作用,此结果与文献报道一致,且JHSDJL 疗效较好。oJHSXJL 组和JHSDJL 组主动脉内膜P 中
膜厚度比值显著低于模型组,斑块面积占血管总面积百分率显著低于模型组,而JHSDJL 组低于JHSXJL 组。说明姜黄素具有较好的抗动脉粥样硬化的作用,且大剂量姜黄素作用更为明显。
近年来动脉粥样硬化被认为是一个慢性炎性过程,诸多研究证明黏附分子的表达与AS 的发生发
展有关。高脂血症能促进超氧阴离子(O -2)产生,使低密度脂蛋白氧化修饰,是AS 的危险因子之一,同时高脂血症引发血管内皮功能障碍,此时内皮细胞可诱导性地表达多种黏附分子,使内皮细胞表面呈异常高黏性。氧化型低密度脂蛋白可以上调内皮细胞IC AM -1、VC AM -1、P -selec tin 的表达,这可能是诱
导单核细胞浸润的始动因素[6]
,ICAM -1和VC AM -1等能促进免疫细胞浸润,使单核细胞和淋巴细胞黏附于内皮,然后迁移入内皮下,单核细胞分化为巨噬细胞,表达识别氧化低密度脂蛋白的清道夫受体,使胆固醇沉积失去限制,形成泡沫细胞进而促进动脉
粥样硬化的发生。马爱玲等[7]
通过RT -PCR 的方法检测大鼠动脉壁内黏附分子,结果表明大鼠摄入高脂饲料后,血管壁内黏附分子VCAM -1和ICAM -1的表达较喂饲基础饲料的对照组动物显著增高(P <0105)。本实验表明,高脂饮食能使ICAM -1mRNA 的表达明显增加,而姜黄素各剂量组可以不同程度地下调血管壁内黏附分子ICAM -1mRNA 的表达。而且姜黄素高剂量组的作用效果明显优于低剂量组,能起到更好地抑制黏附分子表达,抑制单核细胞浸润和免疫黏附,从而预防动脉粥样硬化的发生。
参考文献:
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收稿日期:2005-03-19
v 通讯作者
作者简介:丁奇峰,男,45岁,副主任医师,医学硕士,河北医科大学中西结合研究所博士研究生,从事中药抗动脉粥样硬化的实验研究。
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动脉粥样硬化病理变化
动脉粥样硬化病理变化 动脉粥样硬化（atherosclerosis）是严重危害人类健康的常见病，近年来发病逐年上升，发达国家发病率高于落后国家。 动脉硬化一般是指一组动脉的硬化性疾病，包括：动脉粥样硬化，主要累及大中动脉，危害较大：动脉中层钙化，老年人常见，危害较小；细动脉硬化，见于高血压病。 一、动脉粥样硬化的危险因素 1．高脂血症（hyperlipemia）： 高脂血症是动脉粥样硬化的重要危险因素，研究表明，血浆低密度脂蛋白（LDL），极低密度脂蛋白（VLDL）水平升高与动脉粥样硬化的发病率呈正相关。高甘油三酯亦是本病的独立危险因素。相反，高密度脂蛋白（HDL）有抗动脉粥样硬化作用。 2．高血压： 高血压可引起血管内皮细胞损伤和（或）功能障碍，促使动脉粥样硬化发生。另一方面，高血压时有脂质和胰岛素代谢异常，这些均可促进动脉粥样硬化发生。 3．吸烟： 大量吸烟可使血液中LDL易于氧化；烟内含有一种糖蛋白，可引起SMC增生；吸烟可使血小板聚集功能增强，儿苯酚胺浓度升高，但使不饱和脂肪酸及HDL水平下降，这些均有助于动脉粥样硬化的发生。 4．性别： 女性的血浆HDL水平高于男性，而LDL水平却较男性为低，这是由于雌激素可降低血浆胆固醇水平的缘故。 5．糖尿病及高胰岛素血症： 糖尿病患者血液中HDL水平较低，且高血糖可致LDL糖基化。高胰岛素血症可促进SMC 增生，而且胰岛素水平与血HDL含量呈负相关。 6．遗传因素： 冠心病的家族聚集现象提示遗传因素是本病的危险因素。遗传性高脂蛋白性疾病可导致动脉粥样硬化的发生。 二、动脉粥样硬化发生机制学说： 动脉粥样硬化的发病机制至今尚不明确，主要学说有： 1. 脂源性学说： 高脂血症可使血管内皮细胞损伤及脱落，管壁透性增高，脂蛋白进入内膜引起巨噬C反应，SMC增生并形成斑块。 2. 致突变学说： 认为动脉粥样硬化斑块内的平滑肌细胞为单克隆性，即由一个突变的SMC子代细胞迁入内膜，分裂增殖形成斑块，犹如平滑肌瘤一般。 3. 损伤应答学说： 各种原因引起内皮损伤，使之分泌生长因子，吸引单核C附着于内皮，并移入内膜下刺激SMC增生，并分泌各种因子相互作用形成纤维斑块。 4．受体缺失学说： 若血浆中LDL受体数目过少，则导致细胞从循环血中清除LDL减少，从而使血浆LDL升高。 三、病理变化 动脉粥样硬化病变的发生与年龄的关系十分密切，动脉杈、分支开口，血管弯曲的凸面为病变的发生部位。病变过程由轻至重，分为四期： 1．脂纹（fatty streak）：
高脂血症资料
实验动物学综述 题目：《高脂血症动物模型的探讨》姓名：张阳慧 学号： 2010109118 院系专业班级：硕2010级12班生理学任课老师刘政江老师 付建华老师
高脂血症动物模型的探讨 张阳慧综述司军强?审校 （石河子大学医学院民族高发病与地方病教育部重点实验室电生理研究室石河子 832002） 摘要：随着生活水平日益提高,高脂血症( hyperlipidemia) 发病率在逐年升高,大量流行病学调查和研究均表明,高脂血症是导致动脉粥样硬化(AS) ,冠心病、糖尿病等多种疾病最重要的的危险因素之一。高脂血症已经成为研究热点,但至今尚未明显突破,除了其他原因外,理想的动物模型(animal model) 制备可能也是制约其发展的重要原因。在研究高脂血症的模型动物中,有野生型、自然缺损和基因修饰的,动物种类包括大鼠、小鼠、兔、金黄地鼠、豚鼠和小型猪等。本文就对先天性、化学物质诱导的和转基因动物模型作一综述,为研究高脂血症的模型选择提供依据。 关键词: 高脂血症; 动物模型; 文献标识码: A Discussion on the animal model of hyperlipidemia Yanghui Zhang, Si Jun-qiang? （Division of Electrophysiology, Key Laboratory of Xinjiang Endemic and Ethnic Diseases, Shihezi University Medical College, Xinjiang Shihezi, 832002） Abstract:With the increasing standard of living, hyperlipidemia incidence has increased year by year, a large number of epidemiological surveys and studies show that hyperlipidemia is a cause of atherosclerosis(AS), coronary heart disease, diabetes and the risk factors of other important disease . Hyperlipidemia is the hot point in the medicine field, but has not been broken through. Besides other reason, the experimental animal models play an important role in the study of the disease. In the study of animal models of hyperlipidemia, there are wild-type,natural defects and genetic modification, the animal species are including , rats, mice, rabbits, hamsters, guinea pigs and small pigs. To provide information for the choice of the animal models for the study of hyperlipidemia, congenital,chemical - induced and transgenic models were introduced in the review. Key words：hyperlipidemia ; animal model； 高脂血症( hyperlipidemia) 又称脂质代谢紊乱或异常, 是导致脂肪肝、动脉粥样硬化等多种疾病的重要因素。随着发病率的持续增加, 高脂血症的病因学、预防和治疗依然是医学界研究的热点。然而至今药物治疗尚未取得明显突破, 究其原因, 除了其它因素而外, 高脂血症动物模型的制备也可能是影响该类药物发展的重要原因之一, 因此, 选择理想的高脂血症动物模型是推进高脂血症研究进程的关键。本文就近年来高脂血症动物模型的研究概况作一综述, 为该领域的研究者正确合理选择高脂血症动物模型提供依据。 1常见高脂血症模型动物的种类及特点 1.1 大鼠建立大鼠高脂血症模型, 方法简单, 成本适中, 采血量较大, 可以满足一次做多种指标, 且模型建立的方法最多。更重要的是大鼠的食性与人类相似, 所形成的病变与人类早期病理改变相似, 且适应性较强, 是目前国内研究脂质代谢最多的实验动物。但大鼠有对抗动脉粥样硬化形成的能力, 不宜作为抗动脉粥样硬化药物
动脉粥样硬化模型的制备
动脉粥样硬化模型的制备 一、泡沫细胞模型的制备 (一)原理 巨噬细胞和血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)表面存在清道夫受体(scavenger receptor)，能大量地摄取修饰变性的低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)，特别是氧化LDL(oxidized LDL,OX-LDL)，使细胞内大量充盈脂质，在电镜或光镜下呈泡沫状，故称泡沫细胞。经油红O染色后呈红色颗粒状，含大量胆固醇，且胆固醇酯约占其50%。因而通过先制备OX-LDL，再使其作用于巨噬细胞或血管平滑肌细胞，即可造成泡沫细胞模型。 (二)实验步骤 1.LDL的制备：取新鲜全血200ml，不加抗凝剂分离出血清120ml，加入NaN324mg，EDTA(100mg/L)0.6ml以防腐和防氧化。调整血清密度为1.019，4?C，30000r/min，超速离心18小时。吸出上层乳白色液体(为极低密度脂蛋白，VLDL)及次层淡黄色液体(为中密度脂蛋白，IDL)；再调整密度为1.063，4?C，40000r/min，超速离心24小时。上层黄色液体即为LDL。经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为同一区带。在4?C，含10mg/L EDTA的磷酸缓(PBS)冲液中透析72小时，过滤除菌，4?C，保存备用。 2.OX-LDL的制备：将LDL在含10μmol/l CuSO4的PBS中，37?C,氧化72小时。然后于4?C，在含１００mg/L EDTA的PBS中透析，每８小时换液一次，透析２４小时。 LDL 的氧化程度通过测定样品中硫代巴比妥酸反应物质(thiobarbituric acid reactive substance,TBARS)的含量加以鉴定。取样品或丙二醛标准品0.1ml加入2.9ml复合液(CCl3COOH 0.92mol/L,C4H4N2O2S 0.026mol/L,HCl 0.25mol/L)中，置沸水浴30min，冷却后测定其在532nm的OD值，计算TBARS含量。再以胆固醇测定试剂盒测定LDL胆固醇含量。LDL的氧化修饰程度以每克LDL胆固醇的TBARS含量表示。 3.巨噬细胞源性泡沫细胞模型的制备：参考Leonard等的方法收集巨噬细胞。取雄性、10周龄C57BL/6J小鼠，腹腔注射无血清培养基RPMI 1640 2ml，4天后再次注射RPMI 1640 4ml 收集腹膜巨噬细胞，以109/L的密度种植于培养瓶中，培养12小时，弃培养液，用PBS冲洗掉未贴壁的细胞，重复3次。加入含OX-LDL(10mg/L)的RPMI 1640培养液，37?C下培养96小时(培养瓶中置盖玻片)。 1.VSMC源性泡沫细胞模型的制备：VSMC的培养参考本书有关章节。于培养液中加入OX-LDL
动脉粥样硬化动物模型的建立
动脉粥样硬化动物模型的建立 摘要：动脉粥样硬化 (atherosclorosis , As) 是一种动脉疾病，是心脑血管疾病的主要病理基础。由于确切发病原因不明，建立As动物模型成为对其病因研究及探讨治疗措施的主要方法之一。 关键词：动脉粥样硬化动物模型 一、疾病简介 1.临床表现及危害 动脉粥样硬化(atherosclorosis , As) 是一种动脉疾病，是心脑血管疾病的主要病理基础。近年来有人提出As是一种慢性炎症过程。As的特征是发病缓慢，其临床症状在主要病变出现之前表现轻微。它主要造成三种临床表现：脑中风、冠心病和周围性血管性疾病。 2.病理过程 ①低密度脂蛋白(LDL) 在易损区域动脉内皮下间质内沉积。 ②单核细胞粘附于内皮细胞表面。 ③单核细胞进入内膜层增生，并吞噬氧化型LDL而转化成泡沫细胞。 ④泡沫细胞死亡并释放出脂质，形成坏死中心。 ⑤平滑肌细胞迁移、增生和聚集，并分泌纤维样物质，使形成的斑块增大。 3. 研究进展 As发病机理的研究已经经历了一个半世纪,主要是围绕三种学说:脂质浸润学说、血栓形成学说和损伤反应学说。Virchow曾提出As 是一种炎症的观点, 1998 年12 月法国卫生研究院及Merieux 基金会在法国的Annecy 组织了一次感染与As 研讨会。初步得出“As过程是炎症反应过程”这一基本观点。 然而从现有的流行病学、病理学和动物模型的研究资料来看,感染与As 之间是否存在着必然的因果关系,还不能作出最后判断。As 病变中发现的病原体是直接引起病理变化还是通过免疫反应起作用尚未明确，可能与其他危险因子共同起作用。
而以As 是一种炎症的观点出发,就必须从解决炎症发生发展的基本环节出发,去打断这一网络形成的主要环节,才能真正达到防治的目的,当然要做到这点还需要进行大量深入的研究。 4.预防及治疗 阻断动脉粥样硬化的形成过程 改善饮食习惯控制高脂血症 改善不良习惯是防治AS的重要措施 控制高血压及糖尿病阻断AS的发生和发展 AS的药物治疗 扩血管药 抗血小板药阿司匹林 溶栓与抗凝药 AS手术介入治疗 基因治疗及干细胞移植 二、可用于建立实验模型的动物 目前可以作为模型的动物有：大白兔、鸡、鼠、猪和猴等。其中猪和猴的系统发育和饮食结构类似于人．能够产生自发性的动脉粥样硬化，是研究人类AS的理想模型。家兔和鼠是现在研究AS最常用的模型动物，两者比较各有优缺点：家兔不易自发性产生AS，但它对高脂饮食特别敏感，但是家兔的As病变只与人的病变表面上相似，其病变中的脂类和巨噬细胞含量远比人类大。鼠具有抗As性，但是作为实验动物，具有经济效益比较高，生存能力强，死亡率低的特点。为此，人们不断摸索建立造型简便且重复性好的AS模型。 ⑴兔是最早用以制造高脂血症和动脉粥样硬化症模型的动物，至今仍然多被采用。它对外源性胆固醇的吸收率高，可达75～95%，大白鼠仅为40%，对高血脂的清除能力低，静脉注入胆固醇后脂血症可持续3～4天，大鼠仅为12小时，狗介于两者之间。只要给兔含胆固醇较高的饲料，不必附加其它因素，经3～4月即可形成明显的动脉粥样硬化症，而且与人体发生的病变相似，取血检查也较方便。但
动脉粥样硬化健康指导
动脉粥样硬化健康指导 1、定义 动脉就是将氧气与营养物质从心脏输送到身体其她部分得血管。健康得动脉柔软而坚固,同时还富有弹性。然而,随着年龄得增长,动脉中过大 得压力会使得血管壁变得肥厚而坚硬,有时甚至会阻碍血液 向身体中其她得器官与组织流动。这个过程就被称为动脉硬 化。 动脉粥样硬化就是动脉硬化得一种特殊得类型,但在实际应 用中,这两个概念往往会被混淆。动脉粥样硬化指得就是脂肪 在动脉壁上聚积,形成粥样硬化斑块,这会阻碍血液在动脉中得流动,如果斑块破裂,则可能造成血液栓塞。它往往被认为就是一种心脏疾病,但事实上,它可能会影响到身体得每个部分。值得庆幸得就是,动脉粥样硬化就是一种可以预防与治疗得疾病。 2、症状 动脉粥样硬化就是一种逐步发展得疾病,在发病前 往往没有什么症状。直到动脉变得狭窄甚至阻塞,不 再能够为组织与器官提供足够得血液。有时,血液栓 塞会将血流完全得阻断,从而诱发心脏病或中风。 动脉粥样硬化得症状往往取决于就是哪条动脉受到了影响,例如: 如果您得心脏动脉中存在动脉粥样硬化得现象,那么您会表现出类似于心脏病发作得症状,比如胸部疼痛(心绞痛)。
如果您得脑动脉中存在动脉粥样硬化得现象,那么您将会表现出突发性麻木、四肢无力、讲话困难、口齿不清或就是面部肌肉下垂等症状。 如果您得四肢动脉中存在动脉粥样硬化得现象,那么您将 表现为外周动脉疾病,例如行走时会有腿痛得症状(间歇性 跛行)。 有时,动脉粥样硬化还可能造成男性得勃起功能障碍。 ●何时去瞧医生 如果您认为您有动脉粥样硬化得症状,或者就是有动脉硬化得危险因素,请告诉您得医生。同时还要注意一些早期得血流量不足所导致得症状,例如心绞痛、腿痛或者就是四肢麻木。早期诊断与治疗可以有效得阻止动脉粥样硬化得进一步恶化,防止紧急医疗事件得发生。 3、病因 动脉粥样硬化就是一种慢性得、进行性得疾病,可能在童年时期就已经开始了。虽然我们现在还不知道疾病确切得原因,但研究人员推测,动脉粥样硬化就是始于动脉内膜得损伤得。这种损伤可能就是由于: ?高血压 ?高胆固醇 ?一些刺激性得因素,例如尼古丁 ?某些疾病,例如糖尿病 动脉内壁一旦受损,一种被称为血小板得血液细胞将聚集在受损得部位以试图修复血管,从而导致炎症反应。随着时间得推移,血管中由胆固醇与其她废物而造成得脂肪沉积也将逐步堆积在受损得部位,造成动脉得硬化与狭窄。与阻塞得动脉相连得器官与组织也将无法得到足够得血液来维持其正常得功能。 最终,这些脂肪沉积造成得斑块可能会破裂开来并进入血液循环系统,这会造成血液栓塞并损害您得器官,例如诱发心脏病。同时,这些血液栓塞也可能随着血液
动脉粥样硬化动物模型
（一）动脉粥样硬化模型 常选用兔、猪、大鼠、鸡、鸽、猴和犬等动物。常用的复制方法有下面几种（包括高血脂模型）： 1．高胆固醇、高脂肪饲料喂养法：是目前比较常用的方法，特点是死亡率低，可长期观察，但费时久。一般在家兔、鸽、鸡等，经数周喂养就可产生明显的高脂血症，经数月就能形成早期的动脉粥样硬化病变。大白鼠、小白鼠及犬则较难形成，如果饲料中增加蛋黄、胆酸和猪油等，可用促进作用。为了促进病变的形成，在高脂饲料中还可加入甲基硫氧嘧啶、丙基硫氧嘧啶、甲亢平、苯丙胺、维生素D、烟碱或蔗糖等。 具体复制方法：兔诱发模型：体重2kg左右，每天喂服胆固醇0.3g，4个月后肉眼可见主动脉粥样硬化斑块；若每天剂量增至0.5g，3个月后可出现斑块；若增至每天1g，可缩为2个月。在饲料中加入15%蛋黄粉、0.5%胆固醇和5%猪油，经3周后，将饲料中胆固醇减去，再喂3周，可使主动脉斑块发生率达100%，血清胆固醇可长高至2000mg%。大白鼠诱发模型：喂服1～4%胆固醇、10%猪油、0.2%甲基硫氧嘧啶、86～89%基础饲料，7～10天；或喂服10%蛋白黄粉、5%猪油、0.5%胆盐、85%基础饲料，7天后均可形成高胆固醇血症。小白鼠诱发模型：雄性小白鼠饲以1%胆固醇及10%猪油的高脂饲料，7天后血清胆固醇即升为343±15mg；若在饲料中再加入0.3%的胆酸，连饲7天，血清胆固醇可高达530±36mg%。鸡、鸽诱发模型：4～8周的莱克享鸡，在饲料中加入1～2%胆固醇或15%的蛋黄粉，再加5～10%的猪油，经过6～10周，血胆固醇升至1000～4000mg%，胸主动脉斑块发生率达100%。鸽喂饲胆固醇3g/kg/天，加甲基硫氧嘧啶0.1g，可以产生
动脉粥样硬化的研究进展及动物模型的建立
动脉粥样硬化的研究进展及动物模型的建立 摘要：动脉粥样硬化 (atherosclorosis , As) 是一种动脉疾病，是心脑血管疾病的主要病理基础。由于确切发病原因不明，建立As动物模型成为对其病因研究及探讨治疗措施的主要方法之一。 关键词：动脉粥样硬化 As 动物模型 1、 疾病简介 1.临床表现及危害 动脉粥样硬化(atherosclorosis , As) 是一种动脉疾病，是心脑血管疾病的主要病理基础。近年来有人提出As是一种慢性炎症过程。As 的特征是发病缓慢，其临床症状在主要病变出现之前表现轻微。它主要造成三种临床表现：脑中风、冠心病和周围性血管性疾病。[1] 2.病理过程 [2][3] ①低密度脂蛋白(LDL) 在易损区域动脉内皮下间质内沉积。 ②单核细胞粘附于内皮细胞表面。 ③单核细胞进入内膜层增生，并吞噬氧化型LDL而转化成泡沫细胞。 ④泡沫细胞死亡并释放出脂质，形成坏死中心。 ⑤平滑肌细胞迁移、增生和聚集，并分泌纤维样物质，使形成的斑块增大。 3. 研究进展[2] As发病机理的研究已经经历了一个半世纪,主要是围绕三种学说:脂质浸润学说、血栓形成学说和损伤反应学说。Virchow曾提出As 是一种炎症的观点, 1998 年12 月法国卫生研究院及Merieux 基金会在法国的Annecy 组织了一次感染与As 研讨会。初步得出“As过程是炎症反应过
程”这一基本观点。 然而从现有的流行病学、病理学和动物模型的研究资料来看,感染与As 之间是否存在着必然的因果关系,还不能作出最后判断。As 病变中发现的病原体是直接引起病理变化还是通过免疫反应起作用尚未明确，可能与其他危险因子共同起作用。[3] 而以As 是一种炎症的观点出发,就必须从解决炎症发生发展的基本环节出发,去打断这一网络形成的主要环节,才能真正达到防治的目的,当然要做到这点还需要进行大量深入的研究。 4.预防及治疗 改善饮食习惯控制高脂血症 1 阻断AS的形成过程 改善不良习惯是防治AS的重要措施 控制高血压及糖尿病阻断AS的发生和发展 扩血管药 ②AS的药物治疗 抗血小板药阿司匹林 溶栓与抗凝药 ③AS手术介入治疗 ④基因治疗及干细胞移植 2、 可用于建立实验模型的动物[4] 目前可以作为模型的动物有：大白兔、鸡、鼠、猪和猴等。其中猪和猴的系统发育和饮食结构类似于人．能够产生自发性的动脉粥样硬化，是研究人类AS的理想模型。家兔和鼠是现在研究AS最常用的模型动物，两者比较各有优缺点：家兔不易自发性产生AS，但它对高脂饮食特别敏感，但是家兔的As病变只与人的病变表面上相似，其病变中的脂类和巨噬细胞含量远比人类大。鼠具有抗As性，但是作为实验动物，具有经济效益比较高，生存能力强，死亡率低的特点。为此，人们不断摸索建立造型简便且重复性好的AS模型。
(完整版)动脉粥样硬化发病机制
动脉粥样硬化发病机制 动脉粥样硬化的发生发展机制目前仍不能全面解释,但经过多年的研究和探索主要形成了以下几种学说，脂代谢紊乱学说、内皮损伤学说、炎症反应学说、壁面切应力以及肠道微生物菌群失调等，这些学说从不同角度阐述了动脉粥样硬化的发生过程。 1、脂质代谢紊乱学说 高血脂作为AS的始动因素一直是相关研究的热点。流行病学资料提示，血清胆固醇水平的升高与AS的发生呈正相关。在高血脂状态下血浆低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）浓度升高，携带大量胆固醇的LDL-C 在血管内膜沉积，并通过巨噬细胞膜上的低密度脂蛋白受体（LDL-Ｒ）携带胆固醇进入细胞内。同时血液中及血管内膜下低密度脂蛋白（LDL）经过氧化修饰后形成氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL），其对单核巨噬细胞表面的清道夫受体（如: CD36，SＲ-A，LOX1）具有极强的亲和力，导致Ox-LDL 被迅速捕捉并被吞噬。然而Ox-LDL 对巨噬细胞具有极强的毒害作用，可以刺激单核巨噬细胞的快速激活增殖聚集退化，然后凋亡为泡沫细胞，这些泡沫细胞的大量聚集便形成了As 的脂质斑块。此外，Ox-LDL 通过与血管内皮细胞LOX1 结合导致细胞内信号紊乱并引起内皮细胞功能障碍。Ox-LDL还能促进血管平滑肌细胞不断增殖并向外迁移在血管内壁形成斑块。从脂代谢紊乱学说的病变过程中可以看出，血管内皮功能受损和氧化应激是动脉粥样硬化发生的重要环节。同时对于AS 动物模型的诱导当前国内外使用最多的方法是饲喂高脂高胆固醇饲料促使脂代谢紊乱。 2、内皮损伤学说 在正常情况下动脉血管内膜是调节组织与血液进行物质交换的重要屏障。由于多种因素（如: 机械性，免疫性，LDL，病毒等）刺激内皮细胞使其受到严重损伤导致其发生功能紊乱与剥落，进而改变内膜的完整性与通透性。血液中的脂质会大量沉积于受损内膜处，促使平滑肌细胞和单核细胞进入内膜并大量吞噬脂质形成泡沫细胞，泡沫细胞的不断累积便形成脂肪斑块。同时内皮细胞的凋亡与脱落促使血液中血小板大量粘附与聚集，功能紊乱的内皮细胞、巨噬细胞、血小板分泌产生大量生长因子和多种血管活性物质刺激中膜平滑肌细胞不断增生并进入内膜，同时导致血管壁产生收缩。其结果是脂肪斑块不断增大，同时管腔在不断缩小，进而导致AS 病变的形成。 3、炎症反应学说 As 并不是单纯的脂质在血管壁沉积性疾病，而是一个慢性低度炎症反应的过程，氧化应激过程贯穿于动脉粥样硬化的整个过程。某些脂类如溶血磷脂、氧固醇等作为信号分子与细胞的受体结合后可激活特定基因表达，生成许多促进炎性反应的细胞因子。在动脉粥样硬化病变过程中，血管内膜功能受损，导致ICAM1、M-CSF、MCP1、VCAM1、MMP 等细胞因子和炎性因子的表达明显增加，促进单核细胞与内皮细胞粘附、迁移进入内膜并吞噬Ox-LDL 形成泡沫细胞，促使中层平滑肌细胞增殖并向内膜方向迁移摄取脂质形成泡沫细胞。随着动脉粥样硬化的进展，炎性细胞和吞噬了Ox-LDL 的巨噬细胞增多，并产生肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素8（IL-8）、白介素1（IL-1）等多种重要的炎性因子进一步加剧动脉粥样硬化的发生与发展。C 反应蛋白（CＲP）是一种急性炎症反应物质，在临床研究中常作为全身炎症反应的敏感指标，同时研究证明CＲP 是动脉硬化心血管事件的独立危险因子，对于心血管疾病预测的价值超过LDL-C 及一些传统的心血管预测因子。而CＲP 不仅是炎症标志物也是一种炎症促进因子，直接参与动脉硬化斑块的形成与聚集，促使炎症反应放大。综上所述，炎症反应可能是众多危险因素致Ａｓ的共同通路，这为Ａｓ新的防治策略——以炎症机制的不同环节为靶向研发新的抗炎药物、用于Ａｓ性疾病的治疗提供了理论基础。 4、壁面切应力
针对动脉硬化的老年人健康饮食指南
健康饮食指南 一、主要问题 血管硬化,这是由于血液中胆固醇、血小板附着在血管内壁，血管内腔变窄,使得血液循环不顺畅，继续恶化容易导致血管完全堵塞,引发危险。 二、致病原因 造成血管硬化的主要原因有高血压、糖尿病、发、高血脂等，同时,肥胖、吸烟、过度饮酒、内分泌紊乱、压力大、精神刺激、不良饮食与生活习惯、运动量不足以及年龄都与动脉硬化有关。 三、防治方法 血管硬化是老年人常见疾病，大多数老年人都存在不同程度的血管硬化，不必过度忧虑。合理饮食,适当进行体育锻炼，保持良好的精神状态，是目前治疗动脉硬化的最好方法。 四、合理饮食的要点 饮食应保证低盐、低糖、低油、低胆固醇! 1.适当控制总热量：糖和含糖量较高的糖果、糕点应尽量少吃。 2.少吃高胆固醇食物:高胆固醇食物如动物内脏、皮蛋等应尽量少 吃，特别是血浆胆固醇升高者,更应严格控制,但要保证足够的蛋白质摄入量。蛋黄虽然含胆醇较高，但其中含有卵磷脂，对动脉硬化有防治作用,可以适当食用,但每天不宜超过2个。 3.少吃动物油(猪油)：防治动脉硬化应多吃不饱和脂肪酸,要以植物 油为主。因为动物油中主要为饱和脂肪酸，所以应尽量少吃,但也
不能完全不吃动物油,否则会给全身带来一些其他的不良影响，一般应使动物油和植物油的比例在1:３左右为宜。 4.多食含维生素和纤维素较丰富的食物:多种维生素都具有降低胆 固醇、防止动脉硬化的作用，在饮食中可多吃些含维生素和纤维素较丰富的食物,如新鲜水果、豆类、蔬菜，主食不要吃得太精，因为谷类的胚芽中含有较丰富的维生素E等有益成分。 5.多吃富含钾、碘、铬的食物:钾盐可保护心血管，而钠盐会增加心 脏负担，因此动脉硬化病人，食物不宜太咸,同时要多食含钾丰富的食物，如蘑菇、豆类(黄豆、绿豆、赤豆、蚕豆)、菠菜、紫菜、莲子、苋菜等。碘能降低血中胆固醇，对防治动脉硬化有好处，所以，含碘丰富的食物,如海鱼、海参、海虾、海带、海菜等应多吃。经常食用含铬较高的食物,如豆类、鸡肉、贝类等，也有防治动脉硬化的作用。 6.少吃多餐、禁烟酒、常喝茶:进食次数多些有利于降低机体的低密 度脂蛋白,在保证每天进食总量不变的情况,可安排一天４~5餐。 此外由于烟酒会影响心血管系统功能，故动脉硬化患者应戒除烟酒,但适量饮用红葡萄酒能防治动脉硬化。经常喝茶是可以预防血管硬化的，因为茶叶中含有的儿茶酸,能减轻血清胆固醇浓度和胆固醇与磷脂的比值,有增加血管柔韧性、弹性和渗透性的作用，能预防血管硬化。
ApoE小鼠动脉粥样硬化模型的建立_图文.
体内的脂类物质代谢异常时，多余的脂质沉积在血管壁上，并逐渐形成斑块，使血管内皮增厚、变硬，是引起动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS ）的重要原因之一。载脂蛋白E （apolipoprotein E, apoE ）主要存在于乳糜微粒 （chylomicron, CM ）、极低密度脂蛋白（very low desity lipoprotein, LDL ） ApoE -/-小鼠动脉粥样硬化模型的建立 欧海龙，张礼林，何晓兰，李红梅，雷霆雯* (贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室，中国贵州贵阳550004 摘 要：ApoE -基因敲除小鼠（ApoE -/-）经含有21％脂肪和0.15％胆固醇的高脂饲料喂食12周后进行各项血脂 胆固醇水平检测，以及整体主动脉油红O 染色与主动脉根部病理切片油红O 染色等动脉粥样硬化病理分析。结果显示经过高脂诱导的ApoE -/-小鼠的血浆总胆固醇和甘油三酯水平均比未经饮食诱导的ApoE -/-小鼠、经同样饮食处理的野生型小鼠以及未经处理的野生型小鼠均显著升高（P <0.05）；低密度脂蛋白-胆固醇水平与野生型（正常饮食组和高脂组）相比升高了近3倍多；高脂诱导ApoE -/-小鼠的主动脉斑块面积占整体主动脉面积的65％，显著高于ApoE -/-小鼠的正常饮食组（21％）（P <0.05），同时主动脉根部的血管壁明显增厚，管腔变窄。实验结果表明通过高脂饲料饮食诱导，成功建立了动脉粥样硬化模型小鼠，可为下游的药物筛选、基因治疗以及动脉粥样硬化机理的体内研究提供理想的实验材料。关键词：ApoE -/-小鼠；动脉粥样硬化；胆固醇；血脂；主动脉中图分类号： R394文献标识码：A 文章编号：1007-7847(201502-0141-04
动脉粥样硬化食疗方法
1.动脉粥样硬化是动脉硬化的血管病中常见而最重要的一种。各种动脉硬化的共同特点是动脉发生了非炎症性、退行性和增生性的病变，导致管壁增厚变硬，失云弹性和管腔缩小。动脉粥样硬化的特点是在上述病变过程中，受累动脉的病变从内膜开始，先后有多种病变合并存在，包括局部有脂质和复合糖类积聚，纤维组织增生和钙质沉着，并有动脉中层的还渐退化和钙化。现代细胞和分子生物学技术显示动脉粥样硬化病变是具有平滑肌细胞增生，大量胶原纤维、弹力纤维和蛋白多糖等结缔组织基质形成，以及经细胞内、外脂质积聚的特点。由于动脉内膜积聚的脂质外观黄色粥样，因此称为动脉粥样硬化。动肪硬化会导致血液循环不畅、血流受阻，甚至会导致血管破裂，继而导致各种心脑血管疾病，如冠心病、脑血栓、脑溢血等。 2.动脉硬化发生的原因，主要是现在人们过食（过量饮食）、饱食、美食以及饮食了环境污染中的有害物质所造成的。由于现在人们饮食不当，血液中存在着大量脂肪、糖、蛋白质、重金属等物质，也正是由于血液中存在着这些过多的物质，过多脂质、粘多糖、重金属等物质沉淀于血管壁，形成了动脉硬化病。 3.对于早期的动脉硬化病患者，大多数患者几乎都没有任何临床症状，都处在隐匿状态下潜伏发展。 4.对于中期的动脉硬化的病患者，大多数患者都或多或少有心悸、心慌、胸痛、胸闷、头痛、头晕、四肢凉麻、四肢酸懒、跛行、视力降低、记忆力下降、失眠、多梦等临床症状，不同的患者会有不同的症状。此时，做许多常规的医学检查如心电图、血脂、血流变、脑电图、脑血量等，都查不出什么病变。临床医师大都让患者不以为然、无大妨碍，不了了之。这让患者又继续病入膏盲。 5.对于晚期的动肪硬化病患者，大多数患者都已发展成了心绞痛、心肌醒塞、脑卒中、肾动脉硬化等病症，常规的医学检查就很容易检查出了。这时，临床医师再为患者开了许多降脂、降压增加心肌供氧功能等药物，进行对症治疗，比如让高血压患者终年服用降压药、高血脂患者张年服用降脂药等，这些对逆转病情已无能为力了，着时光的流逝而病这终究会一天天加重，直至病入膏盲而死亡于高血压、冠心病等心血管疾病，以及其它的疾病，同时也包括其它的许多种常见的多发病、慢性病，采用西医西药，十有八九都是治不好的，只是对症治疗，病因治疗十分困难，主样病魔无情地夺走了许多患者的宝贵生命。 二、防治要点 1.控制热量：摄入的热量必须与消耗的热量相平衡，要通过合理平衡膳食和加强体力活动，把这种平衡保持在标准体重范围内。 2.低脂饮食：少食动物油，代之以植物油，如豆油、花生油、玉米油等，用量为每人每日25号，每月在750克以内为宜。要限制食物中的胆固醇量，每日每人应在300毫克以内。蛋黄以及肝、肾等动物内脏中脂肪含量较高，应少信用。 3.低糖饮食：限制精制糖和含糖类的甜食，包括点心、糖果和饮料的摄入。随着饮料工业的发展，各种含糖类饮料不断增加，当过多饮用含糖饮料时，体内的糖会黑心化成脂肪，并在体内蓄积，不公会增加体重，而且会增设血粮、血脂及血液粘稠度，对动脉硬化的恢复极为不利，所以也要控制饮料的应用。现在一些厂家生产的保健型饮料，用一些甜味物质来声价十倍代蔗糖，既满足了喜好甜食者的口感，又不会给机体增加负担，受到了人们的普遍欢迎。 4.低盐饮食：动脉硬化病人往往合并高血压，因而要采用低盐饮食，每日食盐不要超过5克，在烹调后加入盐拌匀即可。如果在烹调中放入盐，烹调出来的菜仍然很淡，难以入口，为了增加食欲，可以在炒菜时
动脉粥样硬化的发病机制
动脉粥样硬化的发病机制 动脉粥样硬化是一种慢性动脉疾病，可引起冠心病和脑梗塞。对动脉粥样硬化的病因和发病机制的了解，进展仍然较慢。其主要原因是动脉粥样硬化的病因复杂，病变发展缓慢且在早期无症状。故研究中所能得到的人体数据多是横断面的，难以肯定其因果关系；多种动物模型的动脉粥样硬化病变又都是“速成”的。尽管近年来有了遗传性高脂血兔的模型，但在动物模型中，仍难观察到类似人的多年来自然形成病变时那种细微而重要的变化。近年来，虽然很多实验室用了细胞培养等技术，但也与在体的情况有一定差距。临床和流行病学多年来随访观察所用的指标为急性心肌梗塞或猝死发生率，这类指标的影响因素极为复杂，不易确切地推测到动脉粥样硬化的程度。目前尚缺乏无创地、能比较准确地重复测量动脉壁(特别是冠状动脉及脑动脉)粥样硬化病变程度的可靠方法，因而对诸多危险因子的确定也是根据其并发病的症状或体征，而不是根据粥样硬化的程度。在动脉粥样硬化的研究中，过去多是对危险因子(特别是高脂血症、高血压)、人体尸检材料或动物模型动脉粥样硬化的形态以及生物化学等进行研究，后来才逐渐转向对动脉壁的有关细胞成分(内皮、平滑肌及单核／巨噬细胞)和细胞因子、生长因子及其受体的细胞和分子生物学方面的研究。近年来这方面的研究发展迅速。
为便于理解，下面简要复习一下正常动脉壁的基本结构、功能、动脉粥样硬化病变分类，然后简述动脉粥样硬化的病因学说和病变形成的机制。 一、正常动脉壁的主要结构与功能 正常动脉 (肌型和弹力型)壁从形态上可清楚地分为三层，即内膜、中膜及外膜。 (一)内膜 内膜位于动脉腔面，包括一连续的单层内皮细胞(EC)与其下一层断续的弹力纤维称内弹力膜。在内皮与内弹力膜之间，有结缔组织(胶原、弹性蛋白、细胞外基质)和平滑肌细胞(SMC，小儿偶有)。随着年龄的增长，其基质和SMC渐增，内膜变厚。内膜并非仅为循环血液与动脉壁之间的屏障。EC的代谢十分活跃，它参与血液-血管壁的许多重要生理功能，包括凝血、纤溶、血小板粘附和聚集、白细胞粘附和迁移，以及通过其合成与分泌的多肽、糖蛋白或直接的细胞间信息交流，调控动脉壁平滑肌细胞的功能(如增殖，舒张和收缩)。现将其与动脉粥样硬化密切有关者简述如下。 1．在动脉腔面形成“非血栓表面”。已知主要由于内膜上的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)和前列环素(PGI 2 )能抑制血小板的粘附和聚集。前者还能加速抗凝血酶Ⅲ对凝血酶的灭活作用以及EC表面的thrombospondin与凝血酶结合后，激活C蛋白；后者再与EC合成的
医学实验手册：动脉粥样硬化动物模型
医学实验手册：动脉粥样硬化动物模型 一、实验动物 目前可以作为动脉粥样硬化（AS）模型的动物有：兔、猪、鼠、鸡、鸽、猴和犬等。家兔和鼠是其中最常用的，两者比较各有优缺点：家兔对高脂饮食特别敏感易造模，然而其AS病变与 人的病变只在表面上相似，病变中的脂类和巨噬细胞含量远比人类大；鼠作为实验动物，具有经济效益高、生存能力强、死亡率低的特点，鼠AS模型病变的形态、斑块的破裂位置与人类十分 相似，但鼠模型的斑块破裂处缺乏纤维蛋白和血栓形成。 二、常用造模方法 1、高胆固醇、高脂肪饲料喂养法： 在基础饲料前提下，添加胆固醇、蛋黄、猪油，为了促进病变的形成，在高脂饲料中还可加入甲基硫氧嘧啶、丙基硫氧嘧啶、甲亢平、苯丙胺、维生素D、烟碱或蔗糖等，根据不同实验目的，采用不同配方。 2、灌胃法： 采用脂肪乳剂灌胃法（脂肪乳剂按胆固醇∶猪油∶蛋黄粉=1∶5∶4配制），同步氮气损伤（历时5min，150ml/min氮气流损伤血管内皮），可用于建立兔颈动脉粥样硬化模型。 3、机械损伤法： 包括球囊损伤法、辐射损伤法、空气干燥法、下丘脑弓状核损伤法、颈动脉内膜切除法等。其中球囊损伤法具有可靠性强、可重复性高、更符合临床动脉粥样硬化疾病的发生发展过程等优点。 4、免疫损伤法： AS的发病机制有免疫因素的存在，所以可以从免疫学的角度来建立AS模型，如使用牛血清白蛋白、卵清白蛋白、肺炎衣原体、EB病毒、巨细胞病毒、幽门螺杆菌、内毒素等进行免疫刺激，从而诱发AS的产生。 5、基因改造法： ApoE和LDL-R基因敲除鼠可自发形成动脉粥样硬化斑块，是动脉粥样硬化研究的常用模型。但由于基因改造小鼠体积小、临床性检查评估难、与人类脂类代谢差异较大，此法存在一定的局限性。 6、其他：
【CN110178792A】一种动脉粥样硬化易损斑块小鼠模型的构建方法【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910375476.6 (22)申请日 2019.05.07 (71)申请人 哈尔滨医科大学 地址 150081 黑龙江省哈尔滨市南岗区保 健路157号 (72)发明人 于波 田进伟 王雪羽 郭守利 田江天 符亚红 (74)专利代理机构 北京科龙寰宇知识产权代理 有限责任公司 11139 代理人 孙皓晨 马鑫 (51)Int.Cl. A01K 67/027(2006.01) (54)发明名称 一种动脉粥样硬化易损斑块小鼠模型的构 建方法 (57)摘要 本发明公开了一种动脉粥样硬化易损斑块 小鼠模型的构建方法。该方法是通过杂交的方法 获得具有原纤蛋白1(Fibrillin -1，Fbn1)基因杂 合点突变的低密度脂蛋白受体基因(LDLR )敲除 小鼠。本发明首次将Fbn1C1039G +/-点突变引入 LDLR -/-小鼠基因组，结合了两种基因型的特点， 方法简单易行，能形成具有大脂质核心、大量的 炎症细胞、典型薄纤维帽、丰富的新生血管和斑 块内出血、血管外向重构等特点的易损斑块，且 能模型上观察到类似于人的斑块破裂等导致急 性心脑血管事件的发生。其成模率高，可重复性 好，为药物研究、器械耗材改进提供良好的动物 基础，为探索动脉粥样硬化机制提供了良好平 台。权利要求书1页 说明书5页 附图4页CN 110178792 A 2019.08.30 C N 110178792 A
权 利 要 求 书1/1页CN 110178792 A 1.一种动脉粥样硬化易损斑块小鼠模型的构建方法，其特征在于，通过杂交的方法获得具有原纤蛋白1(Fibrillin-1，Fbn1)基因杂合点突变的低密度脂蛋白受体基因(LDLR)敲除小鼠。 2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的原纤蛋白1(Fibrillin-1)基因杂合点突变是指Fbn1C1039G+/-。 3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)将Fbn1基因杂合点突变鼠Fbn1C1039G+/-与低密度脂蛋白受体基因敲除(LDLR-/-)小鼠杂交，获得F1代鼠，F1代鼠的基因型为Fbn1C1039G+/+LDLR+/-或Fbn1C1039G+/-LDLR+/-； (2)选择基因型为Fbn1C1039G+/-LDLR+/-的F1代鼠与LDLR-/-小鼠杂交，获得F2代，F2代基因型为Fbn1C1039G+/-LDLR-/-、Fbn1C1039G+/-LDLR+/-、Fbn1C1039G+/+LDLR+/-或Fbn1C1039G+/+LDLR-/-； (3)选择F2代鼠中基因型为Fbn1C1039G+/-LDLR-/-的小鼠经高脂饲料喂养后，即为动脉粥样硬化易损斑块小鼠模型。 4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的高脂饲料的配方为：小鼠基础饲料中加入猪油10％w/w，奶粉4％w/w，胆固醇2％w/w，胆酸钠0.5％w/w。 5.由权利要求1-4任一项所述的构建方法所得到的动脉粥样硬化易损斑块小鼠模型在动脉粥样硬化与易损斑块研究中的应用，其特征在于，该研究是以非疾病的治疗为目的。 2
冠状动脉粥样硬化性心脏病的健康教育
冠状动脉粥样硬化性心脏病的健康教育 冠心病又称冠状动脉硬化性心脏病。是由于供应心肌血液的冠状动脉发生粥样硬化，使冠状动脉变窄，心肌供血不足造成的。由于冠状动脉病变引起管腔狭窄或闭塞经过的时间长短、程度轻重不同，可表现为隐性心脏病、心绞痛、心肌梗塞、心肌硬化和心源性猝死等形式。【心理指导】 1.保持良好的心态，因精神紧张、情绪激动、焦虑不安等不良心理状态，可使体内茶酚胺 释放增多，心率加快，心脏负荷加重，诱发和加重病情。 2.对心肌梗塞病人，克服焦虑、恐惧等情绪更为重要，改变这不良的心理状态，是病人心 情放松，安心治疗，以最佳心理状态，度过危险期。 【饮食指导】 1.心绞痛病人饮食宜以清淡、易消化、低盐、低脂、低胆固醇饮食，避免暴饮暴食。 2.心肌梗塞病人前三天进食流食，特症状减轻后改为半流食、软食、普食，进食不易过饱， 因为进食不易消化的食物或进食过多可增加胃肠血流量而使心脏负担加重。 3.戒烟、酒。 【休息、活动指导】 严格按医务人员指导和活动。 1.心绞痛发作时立即休息、发作频繁者卧床休息。 2.心肌梗塞病人必须保持环境绝对安静，严格限制探视和不良刺激。 3.心肌梗塞一周内绝对卧床休息，一切日常活动由他人护理。以降低心脏耗氧，防梗塞面 积扩大；无严重并发症者，第二周可在床上做肢体被动活动，第三周在床边活动，第四周可在室内活动。 【用药指导】 1.硝酸甘油是缓解心绞痛的首选药，正确的用药方法：如心绞痛发作时可用短效制剂1-2 片含化，勿吞服，如药物不易被溶解，可轻轻嚼碎继续含化。 2.应用硝酸脂类药物时可能出现头昏、头胀痛、面红、心悸，继续用药数日后可自行消失。 3.急性心梗溶栓治疗，可有出血倾向，如皮肤出血点、鼻紐等，及时报告医护人员。 4.输液过程中如低右、利多卡因等应严格由医护人员控制滴数，其他人员不可自行调整。【出院指导】 1.日常生活中避免过度劳累，冬天避免寒冷刺激。洗澡时水温与体温相当，时间不宜过长。
ApoE—／—小鼠动脉粥样硬化模型的建立
ApoE—／—小鼠动脉粥样硬化模型的建立 摘要：ApoE-/-基因敲除小鼠（ApoE-/-）经含有21%脂肪和0.15%胆固醇的高脂饲料喂食12周后进行各项血脂胆固醇水平检测，以及整体主动脉油红0染色与主动脉根部病理切片油红0染色等动脉粥样硬化病理分析。结果显示经过高脂诱导的ApoE-/-小鼠的血浆总胆固醇和甘油三酯水平均比未经饮食诱导的ApoE-/-小鼠、经同样饮食处理的野生型小鼠以及未经处理的野生型小鼠均显著升高（P＜0.05）；低密度脂蛋白-胆固醇水平与野生型（正常饮食组和高脂组）相比升高了近3倍多；高脂诱导ApoE-/-小鼠的主动脉斑块面积占整体主动脉面积的65%，显著高于ApoE-/-小鼠的正常饮食组（21%）（P＜0.05），同时主动脉根部的血管壁明显增厚，管腔变窄。实验结果表明通过高脂饲料饮食诱导，成功建立了动脉粥样硬化模型小鼠，可为下游的药物筛选、基因治疗以及动脉粥样硬化机理的体内研究提供理想的实验材料。关键词：ApoE-/- 小鼠；动脉粥样硬化；胆固醇；血脂；主动脉中图分类号：R394 文献标识码：A 文章编号：1007-7847（2015）02-0141-04The Establishment of Atherosclerosis Model in ApoE-/- MiceOU Hai-long，ZHANG Li-lin，HE Xiao-lan，LI Hong-mei，LEI Ting-wen （Department of Biochemistry and Molecular Biology，Guiyang Medical University，Guiyang 550004，Guizhou，China）Abstract ：The ApoE gene knockout mice （ApoE-/-）were fed with a high-fat （HF）diet containing 21% fat and 0.15% cholesterol for 12 weeks to establish atherosclerosis model. After diet induction，the ApoE-/- mice were sacrificed and plasma total cholesterol （TC），triglyceride （TG），low -density lipoprotein -cholesterol （LDI-C）and high-density lipoprotein-cholesterol （HDL-C）levels were measured. The whole aortas and sequential sections of the aortic root were stained with oil red 0. Results showed that the plasma levels of TC and TG from HF diet induced ApoE-/- mice were both dramatically higher than normal diet（ND）-fed ApoE-/- mice as well as wild-type mice fed with normal diet or HF diet （P <0.05）. The contents of LDL-cholesterol in plasma were elevated by three-fold compared with wild-type （ND and HFD）. Atherosclerotic lesion sizes were significantly increased in whole aorta （65%）as compared with normal diet ApoE-/-mice （21%）. Similar result was obtained from cross -sections of the aortic root analysis. The results demonstrated that HF diet treatment greatly enhanced atherosclerosis development in ApoE-/-mice. The establishment of atherosclerosis model mice provides a valuable tool for drug screen，gene therapy and even in vivo mechanism analysis in atherosclerosis disease.Key words ：ApoE-/-mice；atherosclerosis；cholesterol；lipoprotein；aorta（Life Science Research，2015，19（2）：141 ?144）体内的脂类物质代谢异常时，多余的脂质沉积在血管壁上，并逐渐形成斑块，使血管内皮增厚、变硬，是引起动脉粥样硬化（atherosclerosis AS）的重要原因之一。载脂蛋白E（apo；ipoprotein E，apoE）主要存在于乳糜微粒（chylomicrom，CM）、极低密度脂蛋白（verylowdesitylipoprotein，LDL）等多种血浆脂蛋白中，可介导脂蛋白残粒的摄取，维持血浆胆固醇的平衡、促进泡沫细胞中胆固醇的外流以及具有抗氧化和消炎等作用，该基因缺陷将使体内脂代谢发生紊乱。ApoE基因敲除的纯合小鼠（ApoE-/-）可正常存活和繁殖，当给予适当的高脂饮食时，可导致各种高脂蛋