隐丹参酮在小肠吸收机制的实验研究

Ｖ０１．２１Ｎｏ．２Ｍａｒｃｈ，２００５（ＳｅｒｉａｌＮｏ９４）

隐丹参酮在小肠吸收机制的实验研究

Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｃｒｙｐｔｏｔａｎｓｈｉｎｏｎｅｓｉｎｇｌｅ—?ｐａｓｓｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐｅｒｆｕｓｉｏｎｍｏｄｅｌ

毕惠嫦１，关溯１，陈齐慧敏３，苏启表１，黄孝２，民１

（１．中山大学药学院临床药理研究所，广东广州５１００８０；２．中山大学附属第一医院药学部，广东广州５１００８０；３．ｊＢ京大学临床药理研究所，北京１０００８３）

ＢＩＨｕｉ．ｃｈａｎ９１，ＧＵＡＮＳｕｌ，

ＣＨＥＮＸｉａ０２，ＱＩＨｕｉ—ｍｉｎ３，

ＳＵＱｉ—ｂｉａ０１．ＨＵＡＮＧＭｉｎｌ

（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｒｎａｃｏ—ｌｏｇｙ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉ—ｅｎｃｅｓ，ＳｕｎＹａｔ—ｓｅｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１００８０，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅ—ｐａｒｔｍｅｎｔ．ｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＴｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｕｎＹａｔ—ｓｅｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１００８０，Ｃｈｉｎａ；３．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，＆彬ｎｇ１０００８３，Ｃｈｉｎａ）

收稿日期：２００４—０９—０６

修回日期：２００４—１２—１０

基金项目：广州市重大项目——创新药物药

理毒理评价研究技术平台资助项

目（２００３２２一Ｅ４０７１）

作者简介：毕惠嫦（１９７５一），女，博士，主要

从事药代动力学研究

通讯作者：黄民，教授，博导

Ｔｅｌ：（０２０）８７３３４５２１

Ｆａｘ：（０２０）８７３３４７１８

Ｅ—ｍａｉｌ：Ｈｕａｎｇｎ＠ｇｚｓｕｎ＊．ｅｄｕ．ｃｎ

圈

摘要：目的研究隐丹参酮在大鼠小肠的吸收机制。方法用大鼠在体一过式肠灌流方法，通过肠系膜静脉插管采集血样，同时收集灌流流出液，以高效液相色谱法测定样品中隐丹参酮含量，计算其通透率。结果隐丹参酮在大鼠小肠

的肠管通透率（Ｐｋ一）和血管通透率（尸酬）随浓度的增加而下降；加入Ｐ一糖蛋白抑制剂维拉帕米后其通透率增高。结论隐丹参酮在大鼠小肠的转运机制可能为主动转运，隐丹参酮可能为Ｐ一糖蛋白底物。

关键词：隐丹参酮；肠吸收；肠灌流模型；Ｐ一糖蛋白

中图分类号：Ｒ９６５．２；Ｒ２８５．５文献标识码：Ａ

文章编号：１００１—６８２１（２００５）０２—０１０７—０４

Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｃｒｙｐｔｏｔａｎｓｈｉ—ｎｏｎｅｉｎｔｈｅｒａｔ

ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅｉｎｓｉｔｕｒａｔｓｉｎｇｌｅ—ｐａｓｓｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐｅｒｆｕｓｉｏｎｍｏｄｅｌｗｉｔｈｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃｖｅｉｎｃａｎｎｕｌａｔｅｄｗａｓｕｓｅｄ．Ｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｌｙｆｒｏｍｔｈｅｏｕｔｌｅｔｐｅｒｆｕｓａｔｅａｎｄｔｈｅｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃｖｅｉｎ．Ｔｈｅｃｒｙｐｔｏｔａｎｓｈｉｎｏｎｅｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｈｉｇｈ——ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａ??ｔｏｇｒａｐｈｙ，ａｎｄｔｈｅｎ

ｔｈｅｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓｗｅｒｅｃａｌｃｕｌａｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ

Ｔｈｅｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｖａｌｕｅｓｄｅｃｒｅａｓｅｄａｔｔｈｅ

ｈｉｇｈｅｒｃｒｙｐｔｏｔａｎｓｈｉｎｏｎｅｃｏｎｃｅｎｔｒａ－ｔｉｏｎ，ｗｈｉｃｈｓｕｇｇｅｓｔｅｄａｓａｔｕｒａｂｌｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｐｒｏｃｅｓｓ．Ａｎｄｔｈｅｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ

ｗｈｅｎ

ｃｒｙｐｔｏｔａｎｓｈｉｎｏｎｅｗａｓｐｅｒｆｕｓｅｄ

ｗｉｔｈＰ——ｇｌｙｃｏ?－ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｖｅｒａｐａｍｉｌ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ

Ｔｈｅａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｏｆ

ｃｒｙｐｔｏｔａｎｓｈｉｎｏｎｅａｃｒｏｓｓｒａｔｉｌｅｕｍｉｓｓｉｍｉｌａｒｔｏａｎａｃｔｉｖｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｍｅｃｈａｎｉｓｍ，ａｎｄＰ—ｇｌｙｃｏ－ｐｒｏｔｅｉｎｍａｙｐｌａｙａｒｏｌｅｉｎｔｈｅａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｒｙｐｔｏｔａｎｓｈｉｎｏｎｅ；ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ；ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐｅｒｆｕｓｉｏｎｍｏｄｅｌ；Ｐ—ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ

隐丹参酮（ｃｒｙｐｔｏｔａｓｈｉｎｏｎｅ，ＣＴ）是从传统中药丹参中提取的一种脂溶性二萜醌类化合物，ＣＴ对金黄色葡萄球菌及其耐药菌株、链球菌等病源菌有较强的杀来和抑制作用。临床用于治疗一些感染性疾病，收到较好效果¨。。有文献报道旧ｏ，猪口服ｃＴ后，大多数血样均不能检测到ＣＴ，即生物利用度较低，但机制不明。本文用大鼠在体一过式肠灌流模型，研究ＣＴ的吸收机制及Ｐ一糖蛋白对小肠吸收ＣＴ的影响，为ＣＴ的剂型研究提供理论依据。

１材料

材料与方法

　万方数据

１０８

中国临床药理学杂志

实验动物Ｓｐｒａｇｕｅ—Ｄａｗｌｅｙ（ｓＤ）大鼠，６，体质量为２５０９～３００９，清洁级（合格证号：２００４１００），中山大学动物实验中心提供。

药品与试剂隐丹参酮，纯度＞９８％，中山大学药学院提供；酚红，天津市化学试剂研究所提供；内标：氟西汀（ｆｌｕｏｘｅｔｉｎｅ，ＦＸＴ），纯度＞９９％，中国药品生物制品检定所提供；甲醇，色谱纯，Ｄｉｋｍａ公司提供；乌拉坦，中国医药集团上海化学试剂公司提供；其他试剂均为分析纯。

仪器ＷＺＳ一５０Ｆ２双道微量注射泵，浙江大学医疗仪器有限公司产品；ＢＴ００—３００Ｔ型蠕动泵，保定兰格蠕动泵有限公司产品；ＤＢ一１不锈钢电热板，金坛市富华仪器有限公司产品；高效液相色谱系统：５１５泵、７１７ｐｌｕｓ自动进样器、２４８７紫外检测器、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ３２色谱数据处理软件，美国Ｗａｔｅｒｓ公司产品；Ｓｈｉｍａｄ—ＺＵＵＶ一１６０１ＰＣ型分光光度计，日本岛津产品。

２ＨＰＬＣ测定ＣＴ浓度

２．１色谱条件

色谱柱：ＨｙｐｅｍｉｌＢＤＳＣ１８柱（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，５“ｍ）（大连依利特公司生产），流动相：甲醇一硼酸／氯化钾缓冲液一三乙胺（７２：２８：０．０５），用盐酸调ｐＨ至９．４０；流量：１．２ｍＬ?ｍｉｎ～；检测波长：２７０ｎｍ；进样量：血浆样品５０肛Ｌ，灌流液样品２０斗Ｌ。

２．２样品处理

血浆、肠灌流液各１００ＩｘＬ，分别加内标９０斗ｇ?ｍＬ。１氟西汀１０，１５灿混匀，加入乙醚３００ｔｚＬ。涡旋１ｍｉｎ后静置１０ｍｉｎ，６０００ｒ?ｍｉｎ“离心１２ｍｉｎ，吸取上清液。２０℃以下真空挥干，甲醇一水（１：１）２００ＩｘＬ充分溶解，１６０００ｒ?ｍｉｎ。高速离心３ｍｉｎ后，取上清液进样。

２．３标准曲线制备

配制隐丹参酮一乙醇储备液（２５０Ｉｘｇ?ｍＬ“），梯度稀释为１．０，５．０，５０．０斗ｇ?ｍＬ“的标准溶液。空白血浆或空白灌流液１００ｔｘＬ，加入不同浓度ＣＴ标准溶液，使血浆或灌流液中终浓度为０．０５，０．１，０．２，０．５，１．０和２．０斗ｇ?ｍＬ～，按“样品处理”项下操作，以浓度（“ｇ?ｍＬ。１）为横坐标，以测得的ｃＴ与内标ＦＸＴ的峰面积比为纵坐标进行回归，得血浆中ｃＴ标准曲线为Ｙ＝２．６２６６Ｘ一０．０９０１（１２＝０．９９９５）；灌流液中ＣＴ标准曲线为Ｙ＝３．４２８７Ｘ一０．０９９８（ｒ＝０．９９９５）。２．４回收率与精密度

该法药物和内标分离良好，绝对回收率大于７０％，血浆、灌流液样品日内精密度分别小于６．８％和

３．７％，日间精密度分别小于７．３％和８．５％。

２．５稳定性

冻融试验偏离度分别小于７．２％和１１．６％，长期冰冻（血浆３０天，灌流液７天）试验偏离度分别小于１３．６％和６．９％，符合生物样品分析的一般要求。

３分光光度法测定灌流液中酚红浓度

３．１标准曲线制备

精密吸取（５００峭?ｍＬ。１）酚红标准贮备液１．０，２．０，４．０，６．０和８．０ｍＬ，用Ｋｒｅｂ—Ｒｉｎｇｅｒ§缓冲液（ｐＨ６．８０）稀释定容至５０ｍＬ，得１０．０，２０．０，４０．０，６０．０和８０．０ｔｘｇ?ｍＬ‘１的系列浓度酚红溶液，按文献［３］以双波长分光光度法在５５８和５７０ｎｍ处进行测定，以酚红浓度（Ｉｘｇ?ｍＬ。１）对吸光度差值△Ａ作线性回归，得标准曲线方程：Ｙ＝０．００４７Ｘ＋０．００４０（１２＝０．９９９７）。

３．２精密度

该法的日内精密度小于０．９％，日间精密度小于１．７％，亦符合生物样品分析的一般要求。

４吸附与稳定性试验

４．１在肠灌流液中稳定性考察

配制ＣＴ浓度为１．０Ｉｘｇ?ｍＬ。的肠灌流液，分别在室温（２５℃）和３７℃水浴放置２ｈ，在０，３０，６０，９０，１２０ｍｉｎ取样测定ＣＴ含量，分别考察室温和３７℃时ＣＴ在肠灌流液中的稳定性。

４．２药物物理吸附试验

配制ｃＴ浓度为１．０Ｉｘｇ?ｍＬ“的肠灌流液（ｐＨ６．８０），注入微量注射泵的５０ｍＬ注射器及其延长管中，流量为０．２ｍＬ?ｍｉｎ～，并分别在０，３０，６０，９０，１２０ｍｉｎ取样，测定ＣＴ含量，考察注射器及延长管对ＣＴ的吸附。

５在体肠灌流实验

５．１手术及插管操作

ｓＤ大鼠，６，禁食１２ｈ，自由饮水，腹腔注射２０％乌拉坦溶液（０．８ｍＬ／１００９）麻醉，固定于３７。（２恒温加热板。剃毛，暴露术野。手术过程主要有３部分Ｈ’５１：①右颈静脉插管：右颈术野作一约０．５ｍｍ切口，钝性分离出右颈静脉，结扎远心端后作一小切口，插入外径为０．８ｍｍ的ＰＥ管后结扎固定；②肠管插管：肠系膜血管插管前１０ｍｉｎ，从右颈静脉注射１００Ｕ?ｍＬ“肝素溶液０．８ｍＬ；ＰＥ管与蠕动泵泵管连接，在完成肠系膜血管插管且开始流出血样，开始补血（所用血液从供血鼠心脏采血后，按５：１用生理盐水稀释所得）；

　万方数据

Ｖ０１．２１

Ｎｏ．２

Ｍａｒｃｈ，２００５（Ｓｅｒｉａｌ

Ｎｏ

９４）

血流速度根据肠系膜血液流出量进行调整（约０．２～

０．３

ｍＬ?ｍｉｎ“）；③肠系膜静脉插管：沿腹中线打开

腹腔，分出７—１１ｃｍ回肠，用３７％生理盐水将肠内容

物冲洗干净后再以空白灌流液１０ｍＬ灌注肠管，插入

直径约０．５ｃｍ玻璃管，用线固定。用２２

ＧＡ

ＩＶ导管

进行灌流段肠管肠系膜静脉插管，滴Ｃｙａｎｏａｃｒｙｌａｔｅ胶水固定∞。，血流流出正常后，将导管内导针拔去，导管

连于肝素化１．５ｍＬ离心管中采集血样。

５．２药物灌流及采样

ＣＴ浓度分别为０．５，２．０Ｉｘｇ?ｍＬ～；（２．０

ｉｘｇ?ｍＬ“ＣＴ＋０．１

Ｉｘｍｏｌ?ｍＬ＿维拉帕米）灌流溶液５０

ｍＬ

注于微量注射泵中，先以流量１ｍＬ?ｍｉｎ“平衡２ｒａｉｎ，然后以０．２ｍＬ?ｒａｉｎ。１速率灌流。流出液每５ｒａｉｎ收集１次，至６０ｍｉｎ，加入抗氧化剂Ｖ。（２．０ｍｇ?

ｍＬ“）后，立即置一２０％冰箱中冷冻，保存待测。

血样每５ｍｉｎ采集１次，至６０ｍｉｎ，采集于肝素化离心管中，１６

０００

ｒ?ｍｉｎ。１离心３ｍｉｎ，分取血浆，加入

抗氧化剂Ｖ。（２．０ｍｇ?ｍＬ‘１）后，立即置一２０％冰箱

中冷冻，保存待测。实验结束，量度灌流肠管长度和

直径，大鼠处死。６药物通透率计算

所测ＣＴ浓度，用下式校正Ｈ＇５Ｊ。

Ｃｃｏｒｒｅｃｔｅｄ－－－－Ｃｍｅａｓｕｒｅｄ

Ｘ兰

其中：ｃ。～耐校正浓度；ｃ。。俐为实测浓度；ｃ一。她为开

始灌流时灌流液中酚红起始浓度；Ｃｍｅａｓ。利。。为各采样点灌流的流出液中酚红浓度。

ＣＴ在大鼠小肠的通透率可通过肠管中药物的损失变化（Ｐ。。。。。）Ｈ’５１以及血管中出现药物的变化（Ｐｂｌ００ｄ）‘４’５’７３计算。

‰。一景Ｉｎ詈

（２）

Ｐ：—ｄＸ／—ｄｔｂｌｏｄ

（

３）Ａ—

ｃ．

＼。／

其中：Ｐ；一。为药物的肠管通透率；Ｐ。‰。为药物的血管

通透率；Ｑ为灌流流量（０．２ｍＬ?ｍｉｎ“）；ｒ为灌流肠管的半径；Ｚ为灌流肠管的长度；Ｃ，为稳态时肠管药物

浓度；Ｃ。为灌流前ＣＴ初始浓度（经过注射器及玻璃

管后浓度）；ｄＸ／ｄｔ为单位时间内血管出现药物量；Ａ为灌流肠段的表面积。

结

果

１

在肠灌流液的稳定性

ＣＴ浓度为１．０Ｉ．ｚｇ?ｍＬ“的肠灌流液分别在

２５℃和３７ｃＣ水浴放置２ｈ，在０，３０，６０，９０，１２０ｍｉｎ时

测得ＣＴ浓度见表１。由表１可见，３７℃时，２ｈ内ＣＴ在肠灌流液中稳定；２５％时，２ｈ后稍有下降但仍稳定，放置２ｈ与放置前药量比较大于８０％。２药物的物理吸附

ＣＴ浓度为１．０ｔｘｇ?ｍＬ“的肠灌流液，以０．２

ｍＬ

?ｍｉｎ“的流量，流过微量注射泵的５０ｍＬ注射器及其延长管，在０，３０，６０，９０，１２０ｍｉｎ时测得的ＣＴ浓度

见图１。由图１可见，注射器及其延长管对该药物有强烈的物理吸附作用２ｈ后，药物仅余７．７９％。对注射器及其延长管作预处理，用浓度为４ｔｘｇ?ｍＬ“的

ＣＴ灌流液饱和２４ｈ后，其吸附现象有较大改善，２

ｈ

后药物余３５．９２％，但仍不能达到实验要求。后将延

长管改为直径为０．５ｃｍ的玻璃管，与注射器相连，并用上法饱和２４ｈ后，达到理想的效果，２ｈ后药物余８９．７４％，且２ｈ内药物浓度基本不变。

Ｆｉｇｕｒｅ１．Ｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｃｒｙｐｔｏｔａｎｓｈｉｎｏｎｅ

ｉｎ

ｓｙｒｉｎｇｅａｎｄｔｕｂｉｎｇ（ｔｒｅａｔｅｄ

０１＂ｕｎ

—ｔｒｅａｔｅｄ）ｗｉｔｈｉｎ２ｈ

Ｔａｂｌｅ１．Ｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｃ吖ｐｔｏｔａｎｓｈｉｎｏｎｅｉｎｐｅｒｆｕｓａｔｅａｔｒｏｏｍｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（２５。Ｃ）ａｎｄ

３７。（３

　

万方数据

１１０

中国临床药理学杂志

３药物通透率

据式２，３分别计算药物肠管通透率（Ｐ。…。）和血管通透率（Ｐ。。。。。），结果见表２。由表２可见，给予不同

剂量的ＣＴ，其肠管通透率Ｐ。。。。随浓度的增加而略微

下降，（１．５０±０．２０）Ｘ１０～ｃｍ?ｓ。到（１．４４±０．６３）

Ｘ１０～ＣＩＩＩ?ｓ～；而血管通透率ＰＭ。。。随浓度的增加明显

下降，由（２．２３±Ｏ．５７）Ｘ１０～ｃｍ?ｓ。１降至（１．４０±０．３０）

Ｘ１０一ｃｍ?ｓ一（Ｐ＜０．０５）。说明ＣＴ在大鼠小肠的吸

收存在饱和现象。

Ｔａｂｌｅ２．Ｐ。ａｎｄＰｈⅧｖａｌｕｅｓｏｆｃｒｙｐｔｏｔａｎｓｈｉｎｏｎｅａｃｒｏｓｓｒａｔ

ｉｌｅｕｍ

ｎ＝３，ｍｅａｎ±ＳＤ；ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＣＴ２．０雌?ｍＬ～，＋＋Ｐ＜Ｏ．０１；

△：ＣＴ（２．Ｏ雌?ｍＬ一１）＋ｖｅｒａｐａｍｉｌ（０．１Ｉ－Ｌｍｏｌ?ｍＬ一１）；Ｐｌｕｍｅｎ：Ｐｅａｒｍｅ?

ａｂｉｌｉｔｙｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｂａｓｅｄｏｎｄｒｕｇｄｉｓａｐｐｅａｒａｎｃｅｆｒｏｍｔｈｅｌｕｍｅｎ；Ｐｂｌ“：Ｐｅｒ－

ｍｅａｂｉｌｉｔｙｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｂａｓｅｄｏｎｄｒｕｇ

ａｐｐｅａｒａｎｃｅ

ｉｎｂｌｏｏｄ

４维拉帕米对小肠吸收ＣＴ的影响

在灌流液中加入Ｐ一糖蛋白抑制剂维拉帕米后，

其肠管通透率Ｐｌ。一从（１．４４±０．６３）×１０一ｃｍ?Ｓ“略增至（１．６０±０．４９）Ｘ１０一ｃｍ?ｓ～；而血管通透率Ｐｂｌ００ｄ则从（１．４０±０．３０）Ｘ１０～ｃｍ?ｓ“显著增至（３．６３±０．４４）Ｘ１０～ｃｍ?ｓ“（Ｐ＜０．０１）。提示ＣＴ很可能为Ｐ一糖蛋白的底物，加入Ｐ一糖蛋白抑制剂维拉帕米可抑制其外排作用，增加药物吸收。

讨论

有文献报道博。，丹参的另一个脂溶性成分丹参酮Ⅱ。（ＣＴ的结构类似物）在大鼠小肠的吸收存在饱和现象，其转运机制类似于主动转运。本实验用在体大鼠肠灌流模型，研究ＣＴ在大鼠小肠的吸收特点，发现ＣＴ在小肠内的吸收存在饱和现象，其转运机制亦类似于主动转运；抑制Ｐ一糖蛋白可降低其对ＣＴ的外排作用，增加药物吸收。据文献报道一１，所有Ｐ一糖蛋白底物都有共同的特性即疏水性。ＣＴ为脂溶性化合物，这提示ＣＴ很可能是Ｐ一糖蛋白的底物。

ＣＴ为脂溶性成分，几乎不溶于水，参考文献［８］，并经溶解度试验后，用０．０５，０．１，０．２，０．５，１．０和２．０斗ｇ?ｍＬ。１的浓度，以排除ＣＴ的析出现象，获得良好的线性范围。另外，ＣＴ在碱性条件不稳定，在酸性条件下相对稳定¨…，按中国药典，人工肠液的ｐＨ值为６．８０，所以用ｐＨ６．８０的Ｋｒｅｂ—Ｒｉｎｇｅｒ奄缓冲液作为肠灌流液基质。

本实验模型可得药物小肠吸收的肠管通透率Ｐ，。。。。和血管通透率Ｐ‰甜，前者是基于灌流肠管中药物的损失来计算。由于造成肠管中药物损失的原因，除药物被吸收外，还有肠壁吸附、药物代谢等，所以通常

Ｐ。。一的值会偏大Ｈ“川，而Ｐ。。。。是基于药物被吸收到血液的量变化来计算，能真实反映药物在小肠吸收的通透情况，使Ｐ。。。。。更具参考价值Ｍ。６１。这是本模型较经典单纯肠管灌流模型的显著优点之一¨“。

本实验用大鼠在体一过式肠灌流模型，初步探讨了ＣＴ在大鼠小肠的吸收机制及Ｐ一糖蛋白对药物吸收的影响。结果显示，ＣＴ在小肠内的转运机制类似于主动转运；ＣＴ可能是Ｐ一糖蛋白的底物，Ｐ一糖蛋白可减少ＣＴ的吸收。

参考文献：

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［３］吴刚，孙长海，吴洪斌，等．大鼠小肠循环液中酚红的双波长分光光度法的测定［Ｊ］．中国现代应用药学杂志，２００１；１８：１２３—１２４．［４］ＣｕｍｍｉｎｓＣＬ，ＳａｌｐｈａｔｉＬ，ＲｅｉｄＭＪ，ｅｔａ１．Ｉｎｖｉｖｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆｉｎｔｅｓｔｉ—ｎａｌＣＹＰ３ＡｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｂｙＰ—ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ：ｓｔｕｄｉｅｓｕｓｉｎｇｔｈｅｒａｔｓｉｎｇｌｅ—ｐａｓｓｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐｅｒｆｕｓｉｏｎｍｏｄｅｌ［Ｊ］．ＪＰｈａｒｍａｃｏｌＥｘｐＴｈｅｒ，２００３；

３０５：３０６—３１４．

［５］ＳｉｎｇｈａｌＤ，ＨｏＮＦ，ＡｎｄｅｒｓｏｎＢＤ．Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎａｎｄｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ

ｏｆ

ｐｕｒｉｎｅｄｉｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ

ａｎｄａｎａｄｅｎｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ

ｐｒｏｄｒｕｇｏｆ２．３７一ｄｉｄｅｏｘｙｉｎｏｓｉｎｅｉｎｔｈｅｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃｖｅｉｎｃａｎｎｕｌａｔｅｄｒａｔｉｌｅｕｍ［Ｊ］．ＪＰｈａｒｍＳｃｉ，１９９８；８７：５６９—５７７．

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　万方数据

隐丹参酮在小肠吸收机制的实验研究

作者：毕惠嫦， 关溯， 陈孝， 齐慧敏， 苏启表， 黄民， BI Hui-chang， GUAN Su， CHEN Xiao， Qi Hui-min， SU Qi-biao， HUANG Min

作者单位：毕惠嫦,关溯,苏启表,黄民,BI Hui-chang,GUAN Su,SU Qi-biao,HUANG Min(中山大学,药学院,临床药理研究所,广东,广州,510080)， 陈孝,CHEN Xiao(中山大学,附属第一医院药学部

,广东,广州,510080)， 齐慧敏,Qi Hui-min(北京大学临床药理研究所,北京,100083)

刊名：

中国临床药理学杂志

英文刊名：THE CHINESE JOURNAL OF CLINICAL PHARMACOLOGY

年，卷(期)：2005，21(2)

被引用次数：7次

参考文献(11条)

1.高玉桂.宋玉梅.杨友义丹参酮的药理 1979

2.薜明.崔颖.汪汉卿隐丹参酮及其代谢物在猪体内的药代动力学研究[期刊论文]-药学学报 1999

3.吴刚.孙长海.吴洪斌大鼠小肠循环液中酚红的双波长分光光度法的测定[期刊论文]-中国现代应用药学杂志2001

4.Cummins CL.Salphati L.Reid M J In vivo modulation of intestinal CYP3A metabolism by P-glycoprotein: studies using the rat single - pass intestinal perfusion model 2003

5.Singhal D.Ho NF.Anderson BD Absorption and intestinal metabolism of purine dideoxynucleosides and an adenosine deaminase- activated prodrug of 2',3 '-dideoxyinosine in the mesenteric vein cannulated rat ileum 1998

6.Deferme S.Gelder JV.Ingels F Intestinal absorption characteristics of the low solubility thiocarboxanilide UC -781 2002

7.Johnson BM.Chen WQ.Borchardt RT A kinetic evaluation of the absorption, efflux, and metabolism of verapamil in the autoperfused rat jejunum 2003

8.袁媛.蒋爱华.周静丹参酮ⅡA在大鼠体肠的吸收机理[期刊论文]-华西药学杂志 2002(04)

9.刘文操.刘卓拉P-糖蛋白参与机体正常的药物代谢、分布及转运功能的研究进展[期刊论文]-山西医科大学学报2003

10.梁英珍.薜磊丹参中丹参酮ⅡA和隐丹参酮在不同pH值条件下含量变化规律探讨[期刊论文]-西北药学杂志 2003

11.Stretch GL.Nation RL.Evans AM Organ perfusion techniques in drug development 1999

相似文献(2条)

1.学位论文苏慧丽丹参脂溶性成分丹参酮ⅡA的肠吸收和乌药质量分析方法研究2008

口服给药是最常用的临床给药方式。吸收是药物体内过程的第一步，也是药物发挥作用的前提。丹参酮ⅡA(TSIIA)是丹参的主要药效成分之一，具有广泛的药理活性，但其口服生物利用度很低。为揭示TSIIA生物利用度低的原因，为剂型设计提供依据，本文研究了TSIIA的肠吸收情况以及丹参提取物中多种活性组分在吸收过程中对TSIIA的影响。

采用大鼠离体肠囊外翻模型，建立了同时测定丹参脂溶性成分中TSIIA和隐丹参酮(CTS)吸收的方法，该方法简便，准确性高，回收率好。考察了TSIIA的肠吸收机制，以及不同肠段和不同药物浓度等因素对它们吸收的影响，比较了TSIIA在单体给药和丹参提取物给药时的吸收差异。

结果表明，TSIIA在大鼠小肠各段均有吸收，吸收百分率按十二指肠、空肠、回肠依次下降，但无显著性差异；在试验时间和浓度范围内，按一级吸收动力学特征，可能为被动扩散；丹参提取物中的共存物质没有促进TSIIA的吸收。

采用大鼠在体肠袢模型，比较了不同给药方式(单体给药或者提取物给药)对TSIIA吸收的影响，并考察了P-糖蛋白(P-gp)抑制剂维拉帕米对TSIIA吸收的影响。

结果显示，提取物给药时大鼠血浆中TSIIA的峰浓度Cmax较单体给药大，但不存在显著性差异。加入维拉帕米能微弱增力TSIIA的吸收，经t检验，无显著性差异。说明P-gp在实验浓度下对小肠吸收的作用不明显。P-gp对药物的外排作用不是影响其生物利用度的原因。

本文除主要研究TSIIA的肠吸收外，为评价浙江道地药材乌药的质量，建立了同时测定乌药中四种生物碱的HPLC法。色谱条件为AgilentZORBAXSB-

C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：A相为水(先加入1.5‰的二乙胺，再用冰醋酸调pH=3.0)，B相为乙腈，线性梯度洗脱；UV检测波长289nm。

结果显示，波尔定碱在0.428～8.56μg，降波尔定碱在2.122～31.83μg，网状香荔枝碱在0.760～15.20μg，Linderegatine(新发现的化合物)在0.0204～0.4008μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均加样回收率为99.18％、100.94％、100.31％、99.17％，RSD分别为1.69％、2.51％、

2.13％、2.95％。本方法快速简便、准确，可用于乌药的质量评价。

2.学位论文戴海学隐丹参酮在大鼠体内外的代谢转化与吸收动力学2008

药物代谢研究机体对药物的生物转化功能，并探讨代谢反应的化学和生物化学本质，阐明其生物学意义，同时，药物代谢也是了解药物作用机制的重要环节。药物吸收则可反映药物的作用起效的快慢和程度的大小。研究药物吸收和代谢不仅可以指导临床合理用药，而且可以通过研究药物代谢后化学结构的变化以及这些变化结果与药效和毒性问的关系，为新药设计与研制提供十分重要的信息，因此具有新结构类型的药物或先导物的筛选与评价必须要在创新药物研究的前期阶段就要考虑到先导物在体内的吸收和代谢转化。

隐丹参酮是从我国传统名贵中药丹参中分离提取的一类具有多种药理活性并具有较新结构的丹参二萜醌类化合物。其具有抗菌消炎、抗脂质过氧化、抗肿瘤、抑制内皮细胞产生内皮素—1以及诱导细胞的分化等多种药理学活性。隐丹参酮是一种脂溶性较强的醌类物质，很难溶于水或以水为基质的体液与组织液中，在动物体内的吸收和代谢转化具有特点。本文在以前工作的基础上主要进行了以下工作：

1.采用制备型液相色谱法分离纯化丹参二萜醌类主要脂溶性成份隐丹参酮、丹参酮ⅡA和丹参酮Ⅰ。所分得的成分经薄层色谱、HPLC及LC—ESI—MS分析鉴定，并与文献和标准品比较，证明所得到的为纯品，纯度均>99％。该制备方法简单，重复性好，快速有效。

2.采用电子轰击质谱(EI—MS)和电喷雾电离质谱(ESI—MS)分析技术并借助Mass Frontier质谱解析软件对隐丹参酮、丹参酮ⅡA及丹参酮Ⅰ进行了结构及其裂解途径研究，分析其主要特征碎片离子的质谱特征与结构信息及其裂解途径，同时比较了三者的EI源、ESI源裂解特征。结果表明：由于丹参酮ⅡA与隐丹参酮结构上基本相同，结构差异主要在D环—呋喃环，因此二者的ESI裂解规律基本相同，主要裂解碎片均相差2个质子，主要裂解途径及其机制均相同，均通过丢失—H2O、—CO、—CH3而发生裂解；二者EI源裂解所产生的小分子碎片m/z41、55、76、95、115、128、141、152、165也相同。丹参酮Ⅰ与隐丹参酮、丹参酮ⅡA由于A环存在差异，故在ESI源裂解途径上与丹参酮ⅡA和隐丹参酮存在着一些差异，但裂解规律还比较相似，主要通过丢失—H2O、—CO、—CH3而发生裂解。EI源裂解所产生的分子碎片与ESI源裂解碎片的相差较大。本结果为研究丹参二萜醌类活性成分的生物转化与结构修饰提供了重要依据。

3.应用LC—ESI—MSn等方法系统研究了隐丹参酮在大鼠体内外的代谢转化。隐丹参酮经过大鼠体外肝匀浆温孵转化后，采用薄层层析法和制备型高效液相色谱法相结合的技术，分离制备出8种代谢产物，此外还从粗成分中发现10种代谢产物。隐丹参酮经过大鼠体内的生物转化后，可鉴定出19个Ⅰ相代谢产物和6个Ⅱ相结合产物，其中Ⅰ相产物中18个代谢产物与体外法相一致。采用LC—DAD—ESI—MSn技术对代谢物进行了结构分析和裂解途径的解析。结果表明，隐丹参酮的代谢途径主要有两条：1，发生在隐丹参酮原药上的羟基化、脱氢化、氧化反应和呋喃环裂解；2，隐丹参酮主要代谢成丹参酮ⅡA后在丹参酮ⅡA分子上进行羟基化、脱氢化、氧化反应以及呋喃环裂解。Ⅱ相结合反应主要为硫酸和葡萄糖醛酸结合反应。并分析了这些代谢物可能的转化途径。

4.采用体外翻转肠囊法和体内法研究隐丹参酮单用和复合应用后，隐丹参酮在大鼠体内的吸收动力学和影响。研究了不同浓度的隐丹参酮、P—糖蛋白抑制剂、隐丹参酮粗成分中的其他成份以及丹芎方成分在离体小肠中对隐丹参酮吸收的影响。结果表明，隐丹参酮的体外吸收存在剂量依赖关系

，P—糖蛋白抑制剂、隐丹参酮粗成分中其他成份以及丹芎方成分均能促进离体小肠吸收隐丹参酮。采用LC—MS/MS定量方法研究了隐丹参酮在大鼠体内的药物动力学。结果表明，单用隐丹参酮与在丹芎方中的隐丹参酮的AUC之间存在显著性差异，而平均滞留时间及消除常数无显著性差异。

引证文献(6条)

1.张茜.杨劲.王广基.涂家生雷诺嗪大鼠在体肠灌流及其缓释片在犬体内药动学研究[期刊论文]-中国新药杂志2009(2)

2.翁榕安.李小曼药物小肠吸收的常用方法比较[期刊论文]-医学综述 2009(2)

3.程锦.狄留庆在体肠段灌流模型在中药吸收研究中的应用[期刊论文]-中国中医药信息杂志 2008(2)

4.谭晓斌.贾晓斌.陈彦.Ming Hu在体肠灌流模型及其在中药研究中的应用[期刊论文]-中成药 2007(11)

5.陈束叶.李铜铃.张洁.张婷婷.贾毅敏盐酸帕罗西汀大鼠在体肠吸收动力学研究[期刊论文]-中国药学杂志

2007(8)

6.柴士伟.潘桂湘药物代谢研究方法简述[期刊论文]-天津中医药 2006(1)

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