Roche 454(GS FLX Titanium System)超高通量测序技术原理

Roche 454(GS FLX Titanium System)超高通量测序技术原理
Roche 454(GS FLX Titanium System)超高通量测序技术原理

Roche 454(GS FLX Titanium System)超高通量测序技术原理

2005年底,454公司推出了革命性的基于焦磷酸测序法的超高通量基因组测序系统——Genome Sequencer 20 System,被《Nature》杂志以里程碑事件报道,开创了边合成边测序(sequencing-by-synthesis)的先河。之后,454公司被罗氏诊断公司以1.55亿美元收购。2007年,他们又推出了性能更优的第二代基因组测序系统—— Genome Sequencer FLX System (GS FLX)。2008年10月,454推出了全新的GS FLX Titanium系列试剂和软件,让GS FLX的通量一下子提高了5倍,准确性和读长也进一步提升。

想当年,GS 20的出现,揭开了测序历史上崭新的一页。Jonathan Rothberg博士就是大规模并行测序的发明者,同时也是454的创始人。上世纪90年代,很多学者也都想到了大规模并行测序,他们试图将Sanger测序移到芯片上,但都以失败告终,因为这项技术没有可扩展性。1999年,Rothberg的儿子出世,他放了两个星期的陪产假。小家伙出生后被送入婴儿特护病房,Rothberg非常担心,甚至想获取儿子的基因组信息。这段担惊受怕的经历给了他灵感,他突然意识到焦磷酸测序(pyrosequencing)不仅简单,而且具有可扩展性。两个星期之后,Rothberg就开始设计芯片和流动室,让测序在更小的反应室中进行,并同时进行几百万个反应。

硬件的设计和制造也只是成功的一半,在样品制备上还有同样漫长的路要走。Rothberg摒弃了传统的细菌克隆与挑选,将DNA打断成随机片段,并寻找一种方法来克隆每个片段。受到其他学者乳液实验的启发,他也想将DNA放入油包水的乳液中,这样就省去了反应管。一个好汉三个帮。在Joel Bader等人的帮助下,Rothberg验证了这些想法的可行性,并利用了炸药中的表面活性剂来维持乳液的热稳定性。就这样,乳液PCR终于诞生了。

对细菌的16S rDNA的V6/V3可变区进行测序分析,不需进行克隆筛选,测序的通量高,获得的数据量大,周期短,能更加全面的反映微生物群体的物种组成,真实的物种分布及丰度信息。

GS FLX 测序原理

GS FLX系统的测序原理和GS 20一样,也是一种依靠生物发光进行DNA序列分析的新技术;在DNA聚合酶,ATP硫酸化酶,荧光素酶和双磷酸酶的协同作用下,将引物上每一个dNTP 的聚合与一次荧光信号释放偶联起来(图 1)。通过检测荧光信号释放的有无和强度,就可以达到实时测定DNA序列的目的。此技术不需要荧光标记的引物或核酸探针,也不需要进行电泳;具有分析结果快速、准确、灵敏度高和自动化的特点。

Roche GS FLX System是一种基于焦磷酸测序原理而建立起来的高通量基因组测序系统。在测序时,使用了一种叫做“Pico TiterPlate”(PTP)的平板,它含有160多万个由光纤组成的孔,孔中载有化学发光反应所需的各种酶和底物。测序开始时,放置在四个单独的试剂瓶里的四种碱基,依照T、A、C、G的顺序依次循环进入PTP板,每次只进入一个碱基。如果发生碱基配对,就会释放一个焦磷酸。这个焦磷酸在各种酶的作用下,经过一个合成反应和一个化学发光反应,最终将荧光素氧化成氧化荧光素,同时释放出光信号。此反应释放出的光信号实时被仪器配置的高灵敏度CCD捕获到。有一个碱基和测序模板进行配对,就会捕获到一分子的光信号;由此一一对应,就可以准确、快速地确定待测模板的碱基序列。

图1:GS FLX 高通量测序方法原理示意图

GS FLX系统的工作流程

GS FLX系统的流程概括起来,就是“一个片段 = 一个磁珠 = 一条读长(One fragment = One bead = One read)”。

1)样品输入并片段化:GS FLX系统支持各种不同来源的样品,包括基因组DNA、PCR产物、BAC、cDNA、小分子RNA等等。大的样品例如基因组DNA或者BAC等被打断成300-800 bp的片段;对于小分子的非编码RNA或者PCR扩增产物,这一步则不需要。

2)文库制备:借助一系列标准的分子生物学技术,将A和B接头(3’和5’端具有特异性)连接到DNA片段上。接头也将用于后续的纯化,扩增和测序步骤。变性处理回收单链的DNA (sstDNA),具有A、B接头的单链DNA片段组成了样品文库。

3)一个DNA片段=一个磁珠:单链DNA文库被固定在特别设计的DNA捕获磁珠上。每一个磁珠携带了一个独特的单链DNA片段。磁珠结合的文库被扩增试剂乳化,形成油包水的混合物,这样就形成了只包含一个磁珠和一个独特片段的微反应器。

4)乳液PCR扩增:每个独特的片段在自己的微反应器里进行独立的扩增,而没有其他的竞争性或者污染性序列的影响。整个片段文库的扩增平行进行。对于每一个片段而言,扩增后产生了几百万个相同的拷贝。随后,乳液混合物被打破,扩增的片段仍然结合在磁珠上。

5)一个磁珠=一条读长:携带DNA的捕获磁珠随后放入“Pico TiterPlate”(PTP)板中进行后继的测序。PTP孔的直径(29um)只能容纳一个磁珠(20um)。然后将PTP板放置在GS FLX 中,测序开始。放置在四个单独的试剂瓶里的四种碱基,依照T、A、C、G的顺序依次循环进入PTP板,每次只进入一个碱基。如果发生碱基配对,就会释放一个焦磷酸。这个焦磷酸在ATP硫酸化酶和萤光素酶的作用下,经过一个合成反应和一个化学发光反应,最终将萤光素氧化成氧化萤光素,同时释放出光信号。此反应释放出的光信号实时被仪器配置的高灵敏度CCD相机捕获到。有一个碱基和测序模板进行配对,就会捕获到一分子的光信号;由此一一对应,就可以准确、快速地确定待测模板的碱基序列。这也就是大名鼎鼎的焦磷酸测序。

6)数据分析:GS FLX系统在10小时的运行当中可获得100多万个读长,读取超过4-6亿个碱基信息。GS FLX 系统提供两种不同的生物信息学工具对测序数据进行分析,适用于不同的应用:达400 MB的从头拼接和任何大小基因组的重测序。

GS FLX系统的准确率在99%以上。其主要限制来自同聚物,也就是相同碱基的连续掺入,如AAA或GGG。由于没有终止元件来阻止单个循环的连续掺入,同聚物的长度就需要从信号强度中推断出来。这个过程就可能产生误差。因此,454测序平台的主要错误类型是插入-缺失,而不是替换。

新升级让性能全面提升

去年底发布的Titanium系列试剂,是对现有GS FLX平台的重要升级。升级内容包含耗材、试剂和软件。你无需对仪器的硬件做任何昂贵的升级,只改进试剂和软件,就能立刻实现性能提升。升级之后,每轮测序能产生100万个读长片段,高质量(Q20)的读长增加至400 bp。第400个碱基的准确率是99%,之前的更高。通量也提高了5倍,目前每轮运行能获得4-6亿个碱基对,所需时间为10小时。

?PTP平板的创新重设计重新设计之后,PTP平板上孔的密度更高,利用更小的DNA捕获磁珠进行金属覆盖,改善了信号质量,因此读长的数量和长度都明显改善,同时准确性更高。目前孔的直径是29 um,DNA捕获磁珠的大小是20 um。

?改进的测序试剂改进的GS FLX Titanium试剂显著降低了背景噪音,因此在几乎相同的运行时间内,读长更加长。

?升级的软件优化用于超高通量测序的软件,能轻松对更大、更复杂的基因组进行拼接和作图。

?GS FLX 2.0版它与以前版本的输出数据也完全兼容,让片段能够共同拼接和作图。

广阔的应用天地

在新一代测序技术中,GS系统是最多产的。截至2008年9月,已经发表了250多篇高质量的paper。其中Nature 20篇、Science 13篇、Cell 6篇、Genome Research 20篇、PNAS 24篇。光是这些数据就让人咂舌。这些研究跨越了测序应用的多个方面:82篇全基因组测序论文包括比较基因组学的从头测序和重测序;54篇小分子RNA研究;37篇聚焦快速兴起的宏基因组学;27篇关于转录组图谱分析,包括全转录组拼接和表达图谱;13篇研究染色体结构和表观遗传学;10篇有关稀有变异检测的超深度测序这个新领域;11篇研究古老RNA。其余的文章关注454测序系统的技术和生物信息学。多种多样的应用彰显出454测序系统的能力,那些传统意义上无法用测序来解决的问题现在也一并解决了。

Sivelestat sodium salt_白细胞弹性蛋白酶抑制剂_150374-95-1_Apexbio

产品名: Sivelestat sodium salt 修订日期: 6/30/2016产品说明书 化学性质 产品名: Sivelestat sodium salt Cas No.: 150374-95-1 分子量: 456.44 分子式: C20H21N2NaO7S 化学名: sodium;2-[[2-[[4-(2,2-dimethylpropanoyloxy)phenyl]sulfonylamino]b enzoyl]amino]acetate SMILES: CC(C)(C)C(=O)OC1=CC=C(C=C1)S(=O)(=O)NC2=CC=CC=C2C(=O)NCC(=O)[O-].[Na+] 溶解性: Soluble in DMSO > 10 mM 储存条件: Desiccate at RT 一般建议: For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37°C and shake it in the ultrasonic bath for a while.Stock solution can be stored below -20°C for several months. 运输条件: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or blue ice upon request 生物活性 靶点 : Proteases 信号通路: Elastase 产品描述: Selective leukocyte elastase inhibitor (IC50 = 44 nM) that displays no activity at a range of other proteases. Inhibits NF-κB activation and LTB4-induced neutrophil transmigration in vitro. Significantly attenuates ischemia-induced spinal cord injury, decreases serum cytokine levels and reduces acute inflammatory lung injury in vivo.

职业规划测评结果

M B T I人格测验 王帅 2012年10月19日 06:37 本报告仅供参考 MBTI人格测验--王帅

前言 本报告是对你测验结果的基本诠释,分析解释你的个人特点,并帮助你有效地理解其它的报告并加以运用。本测评的理论框架——“MBTI人格理论”。 MBTI人格理论始于著名心理学家卡尔?荣格先生的心理类型的学说,后经Katharine Cook Briggs 与Isabel Briggs Myers 深入研究而发展成型。这种理论可用于解释为什么不同的人对不同的事物感兴趣、擅长不同的工作、及人们有时不能互相理解。30年来,这种理论在全球范围得到了广泛的运用,公司利用它进行招聘选拔、人岗匹配、组织诊断、改善团队沟通及人际关系;青年人利用它进行职业生涯规划; 老师学生利用它提高学习、授课效率;夫妻利用它融洽关系、增进感情…… 本测评从个人角度:能有效反映人们的心理特性,如积极性、自信心、主动性等,这些往往是我们未来事业成功与否的关键因素。从企业的角度:企业整体的工作绩效与员工是否适合从事现在的工作直接相关。同时,本测评更是特别注意大学生的实际特点,着眼于为大学生的职业生涯规划提供良好的建议。 报告阅读说明: 本报告对你的人格特点进行了详细描述,它能够帮助你拓展思路,接受更多的可能性,而不是限制你的选择; 报告结果没有“好”与“差”之分,但不同特点对于不同的工作存在“适合”与“不适合”的区别,从而表现出具体条件下的优、劣势; 你的人格特点由遗传、成长环境和生活经历决定,不要想象去改变它,但却可以通过对报告有效利用,扬长避短,更好的发挥个人潜力; 报告展示了你性格和做事的偏好,而不是你的知识、经验、技巧; MBTI已有近50年历史、上万例的研究报道,并有正在进行的权威研究支持这些理论的应用。 本报告包括以下内容: MBTI人格理论 (2) 维度解释 (2) 测验结果 (3) 类型说明 (4) 工作中的优势 (5) 工作中的劣势 (6) 适合的岗位特质 (7) 职业类型 (8) 对组织的贡献 (10) 行为风格 (10) 潜在缺陷 (10) 适合的工作环境 (10)

Roche Benchmark XT(罗氏全自动免疫组化仪)

瑞士罗氏全自动多功能组织病理检测系统 品牌:瑞士罗氏Roche 型号:Benchmark XT 上市时间:2008年应用于免疫组化(IHC)、原位杂交(ISH)及FITC标记抗体(IF)的免疫组织或细胞化学检测 实现单次运行同时完成30张IHC、ISH及IF检测,为实现个体化医疗及分子靶向治疗提供强有力的技术保障。 具备最佳检测性能,包括以下指标: 高敏感性:专利的小分子多聚体Multimer检测技术,减少空间位阻,更容易进入细胞,增加反应敏感性。 高特异性:采用单克隆抗体技术,保证抗原抗体结合的高特异性;非生物素标记的检测试剂最大程度的降低内源性生物素的背景干扰。高稳定性:试剂对温度变化具有高度的耐受;避免因试剂变质而引起的浪费。 快速工作流程:单次循环免疫组化只需要2.5~3小时完成;原位杂交需6小时完成。 条形码技术:罗氏专利技术。存储试剂信息量大,节省手工输入错误。专利的喷射清洗:双清洗与喷气清洗工作站,减少非特异背景干扰,节省一抗与探针用量。 专利液体封盖膜技术:有效防止试剂挥发,防止干片,提供稳定反应环境,保证染色均一。 专利空气涡流混匀技术:保证组织全层覆盖,试剂充分混匀,避免“边

缘效应”及“阶梯效应”。 专利Thermopad温控技术:每张切片独立温控,37 ℃ 至95 ℃ 4分钟,95 ℃ 至37 ℃ 仅 7 分钟。提供最佳的反应动力学环境。 检测方案多样化及个性化(为各厂家最齐全的):支持多种实验方案(IHC, ISH, SISH, IF);支持多种样本(石蜡切片、冰冻切片、细胞学样本);支持多种染色方式(单染/双染/多重染色);支持多种反应温度同时监控;支持多种抗原修复方式;支持多种复染方式。专利的脱蜡液EZ prepTM:不含酒精与二甲苯的脱蜡液,符合环保标准。 Benchmark XT组织病理检测系统技术参数 条形码技术; 喷射清洗技术; 液体封盖膜技术(LCS); 空气涡流式混匀技术; Themopad独立温控技术: 专利环保脱蜡液EZ prepTM; 快速工作流程,单次免疫组化需2.5~3小时,原位杂交只需6小时; 多样化的检测方案,可在一切片上同时实现多重染色; 个性化的设置,用户可自行设置修复方式,反应温度及复染方式等。

蛋白酶抑制剂的研究进展

蛋白酶抑制剂的研究进展 郭川 微生物专业,200326031 摘要:自然界共发现四大类蛋白酶抑制剂:丝氨酸蛋白酶抑制剂、巯基蛋白酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂和酸性蛋白酶抑制剂,本文就各大类蛋白酶抑制剂的结构特点,活性部位的研究概况及其在各领域应用的原理及进展。 关键词:蛋白酶抑制剂;结构;应用 天然的蛋白酶抑制剂(PI)是对蛋白水解酶有抑制活性的一种小分子蛋白质,由于其分子量较小,所以在生物中普遍存在。它能与蛋白酶的活性部位和变构部位结合,抑制酶的催化活性或阻止酶原转化有活性的酶。在一系列重要的生理、病理过程中:如凝血、纤溶、补体活化、感染、细胞迁移等,PI发挥着关键性的调控作用,是生物体内免疫系统的重要组成部分。从Kunitz等最早分离纯化出一种PI至今,已有多种PI被发现,根据其作用的蛋白酶主要分以下几类:抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等的丝氨酸蛋白酶抑制剂,抑制木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶等的巯基蛋白酶抑制剂,抑制胃蛋白酶、组织蛋白酶D等的羧基蛋白酶抑制剂、抑制胶原酶、氨肽酶等的金属蛋白酶抑制剂等。而根据作用于酶的活性基团不同及其氨基酸序列的同源性,可将自然界发现的PI分为四大类:丝氨酸蛋白酶抑制剂、巯基蛋白酶抑制剂(半胱氨酸蛋白酶抑制剂)、金属蛋白酶抑制剂和酸性蛋白酶抑制剂[1]。 1 结构与功能 1.1丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine Protease Inhibitor,Serpin) 丝氨酸蛋白酶抑制剂是一族由古代抑制剂趋异进化5亿年演变而来的结构序列同源的蛋白酶抑制剂。Sepin为单一肽链蛋白质。各种serpin大约有30%的同源序列,疏水区同源性高达70%。血浆中的serpin多被糖基化,糖链经天东酰胺的酰胺基与主链相连。位于抑制性serpin表面、距C端30~40个氨基酸处的环状结构区RSL(reactive site loop)中,存在能被靶酶的底物识别位点识别的氨基酸P1[2];近C端与P1相邻的氨基酸为P1’,依此类推,即肽链结构表示为N端-P15~P9~P1-P1’~P9’~P15’-C端。在对靶酶的抑制中。Serpin 以RSL中的类底物反应活性位点与靶酶形成紧密的不易解离的酶-抑制剂复合物,同时P1-P1’间的反应活性位点断裂。几种perpin氨基酸序列比较发现,serpins各成员的抑制专一性是由P1决定的,且被抑制的酶特异性切点一致。如抗凝血酶,抑制以Arg羧基端为敏感部位的丝氨酸蛋白酶,其中P1为Arg[2]。 1.2巯基蛋白酶抑制剂(Cytsteine Proteinase Inhiitor,CPI) 对于丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)已有大量研究,巯基蛋白酶抑制剂(CPI)的研究则相对要晚一些。而动物和微生物来源的CPI已有一些研究,发现它们在结构上具有同源性,Barrett等将CPI统称为胱蛋白超家族,并按分子内二硫键的有无与数量,分子量大小等将此家族分为3个成员(F1、F2、F3)。在3个家族中,大多数F1和F3的CPI中都有Glu53-Val54-Val55-Ala56-Gly57保守序列,其同源序列在其它CPI中也被发现,如F2中的Gln-X-Val-Y-Gly和CHα-ras基因产物中的Gln-Val-Val肽段。人工合成的Glu-Val-Val-Ala-Gly 短肽也显示对木瓜蛋白酶有抑制活性,因此可以认为这一保守区段在抑制活性中起着全部或部分的关键作用[3]。对植物来源的CPI研究的不多,已有报道的有水稻、鳄梨和大豆。水稻巯基蛋白酶抑制剂(Oryzacystatin,OC) 具有102个氨基酸残基,有典型的Glu-Val-Val-Ala-Gly保守序列,应与动物CPI同源进化而来。从OCI没有二硫键来看,它应归为F1成员,但从序列比较看,则更接近F3。对OCIGlu---Gly保守序列进行点突变试验表明,突变使其抑制活性大幅度下降,其中当Glu被Pro替代时则活性全无,由此说明,这一段保守序列在OCI的抑制活性中,同动物CPI一样必不可少。除Glu---Gly保守区域外,OCI序列中其

职业兴趣测试及结果分析

职业兴趣测试 指导语: 请你仔细阅读下面的问题,对于每项活动,如果你的回答是肯定的话,则在"是"一栏中打"勾";如果你的回答是否定的话,则在"否"一栏中打"勾"。最后把"是"一栏的回答次数相加,填入"总计次数"一栏中。 一、测试内容: 第一组 1. 你喜欢自己动手修理收音机、自行车、缝纫机、钟表、电线开关一类器具吗?是否 2. 你对自己家里使用的电扇、电熨斗、缝纫机等器具的质量和性能了解吗?是否 3. 你喜欢动手做小型的模型(诸如滑翔机、汽车、轮船、建筑模型等)吗?是否 4. 你喜欢与数字、图表打交道(诸如记账、制表、制图)一类的工作吗?是否 5. 你喜欢制作工艺品、装饰品和衣服吗?是否 总计次数 第二组 1.你喜欢给别人买东西当顾问吗?是否 2.你热衷于参加集体活动吗?是否 3.你喜欢接触不同类型的人吗?是否 4.你喜欢拜访别人、爱与人讨论各种问题吗?是否 5. 你喜欢在会议上积极发言吗?是否 总计次数 第三组 1.你喜欢没有干扰地、有规则地从事日常工作吗?是否 2.你喜欢对任何事情都预先作周密的安排吗?是否 3.你善于查阅字典、辞典和资料索引吗?是否 4.你喜欢按固定的程序有条不紊地工作吗?是否

5.你喜欢把事物分类和归档的工作吗?是否 总计次数 第四组 1.你喜欢倾听别人的难处并乐于帮助别人解决困难吗?是否 2.你愿意为残疾人服务吗?是否 3.在日常生活中,你愿给人们提供帮助吗?是否 4.你喜欢向别人传授知识和经验吗?是否 5.你喜欢防病治和照顾病人的工作吗?是否 总计次数 第五组 1. 你喜欢主持班级集体活动吗?是否 2. 你喜欢接近领导和老师吗?是否 3. 你喜欢在人多时当众发表自己的观点和意见吗?是否 4.如果老师不在时,你能主动维持班里学习和生活的正常秩序吗?是否 5.你具有强烈的责任感和工作魄力吗?是否 总计次数 第六组 1.你特别爱读文学著作中对人内心世界的细致描写吗?是否 2.你喜欢听人们谈论他们的活动和想法吗?是否 3.你喜欢观察和研究人的心理和行为吗?是否 4.你喜欢阅读有关领导人物、政治家、科学家等名人传记吗?是否 5.你很想了解世界各国的政治和经济制度吗?是否 总计次数 第七组 1.你喜欢参观技术展览会或收听(收看)技术新消息的节目吗?是否 2.你喜欢阅读科技杂志(诸如《我们爱科学》、《科学24小时》、《科学 动态》吗?是否 3.你想了解生机勃勃的大自然的奥秘吗?是否 4.你想了解使用科学精密仪器和电子仪器的工作吗?是否

罗氏全自动免疫组化染色仪特点之欧阳家百创编

目前罗氏独有的SISH技术和北京金菩嘉的FISH技术两者区 别如下: 欧阳家百(2021.03.07) 由于FISH方法中的荧光容易淬灭,保存时间短,不利于病理科存档。没有相应的仪器完成全自动检测,对操作人员技术要求高,荧光显微镜价格昂贵;但技术开展较早,有较好的市场声誉。SISH与目前应用的FISH方法对比其结果符合率大于98%;可用仪器全自动完成检测;操作相对简单;不需特殊显微镜;结果可长期保存;将是未来分子病理发展的重点,目前罗氏可提供Her2和EGFR探针,可同时和17号染色体在同一张片子上显色,未来会有TOP2,MIT等各种新的探针提供给临床。 FISH:荧光原位杂交,需用荧光显微镜观察。 SISH:银染原位杂交,可用光学显微镜观察。 ●Benchmark XT 仪器介绍 Benchmark XT病理检测系统是罗氏于2008年推出的最新型全自动多功能的组织病理检测系统,具有以下优势:?运用于免疫组化和原位杂交技术

免疫组织化学技术与原位杂交技术是近年来病理诊断发展先进的检测技术;为临床实现个体化及分子靶向治疗提供有力的支持。 ?具备最佳检测性能,包括以下指标:1.高灵敏度2.高特异性检测3.高稳定性4.全液体试剂5.条形码技术6.专利的喷射清洗7.多喷头分配器8.专利液体封盖膜技术(LCS)9专利空气涡流混匀技术10.专利Themopad温控技术11.检测方案多样化及个性化(为各厂家最齐全的)12.专利的脱蜡液 1.仪器可以开展哪些新项目?会对学科发展和临床诊断有哪些指导作用? 仪器除了解决常规IHC的工作,还可以进行基因检测ISH,如鼻咽癌和Bukitt’s淋巴瘤的EBER,宫颈HPV 6和16型检测, 乳腺癌her2/new基因检测等。这些基因检测目前对临床的靶向治疗有指导作用,同时在病人癌前预测方面有价值,值得推广。 2.新的广东省免疫组化收费是多少钱、银染原位杂交收费是多 少钱? 新的广东省免疫组化收费,大概是200元左右/项;银染原位杂交收费大概是2200元左右/项。 3.该设备可给医院和科室解决哪些问题? 减少免疫组化染色工作中手工操作带来的误差,使操作程序标准化,缩短实验时间,提高科室工作效率,可满足科室免疫组化质量控制。满足免疫组化需求及分子病理项目的开展,为临床实现个体化及分子靶向药物治疗提供有力的支持。环保

常见蛋白酶抑制剂

当前位置:生物帮 > 实验技巧 > 生物化学技术 > 正文 蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全 日期:2012-06-13 来源:互联网 标签: 相关专题:解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新进展 摘要: 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶,这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中,需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点,因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同,因此需要调整各种蛋白酶的浓度 恩必美生物新一轮2-5折生物试剂大促销! Ibidi细胞灌流培养系统-模拟血管血液流动状态下的细胞培养系统 广州赛诚生物基因表达调控专题 蛋白酶抑制剂 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶,这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中,需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点,因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同,因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低,尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。 常用抑制剂 PMSF 1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶,胰蛋白酶,凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶); 2)10mg/ml溶于异丙醇中; 3)在室温下可保存一年; 4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L); 5)在水液体溶液中不稳定,必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。 EDTA 1)抑制金属蛋白水解酶; 2)0.5mol/L水溶液,pH8~9;

蛋白酶抑制剂选择指南

蛋白酶抑制剂选择指南 1 蛋白酶抑制剂选择指南 抑制剂 工作浓度 分子量 抑制蛋白酶种类 稳定性 AEBSF终浓度1mM MW:239.5不可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,抑制胰蛋白酶,糜 蛋白酶,纤溶酶,凝血酶及激肽释放酶. 可溶于水,其pH7的水溶液在4o C可保持稳定1-2个月,在pH>8的情况下会发生缓慢水解 Aprotinins 抑肽酶终浓度2ug/ ml MW:6512 可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制纤溶酶,激肽 释放酶,胰蛋白酶,糜蛋白酶,但不抑制凝血酶和 Factor Xa。 非常稳定,当pH>12.8时失去活性,可溶于 水(10mg/ml),-20o C下可长期保存 Bestatin终浓度10uM MW:308.4 可逆的丙氨酰-氨基肽酶抑制剂, 工作液可保存一天,1mM的甲醇贮存液在 -20o C可保存至少一个月 E-64 Protease Inhibitor终浓度10uM MW:357.4 不可逆的半胱氨酸酸蛋白酶抑制剂,抑制半胱氨酸 酸蛋白酶而不会影响其他酶的半胱氨酸残基,与小 分子量的巯基醇如beta-巯基乙醇不会产生反应, 具有高度特异性。工作液在正常pH值下可保持稳定数天,1mM的水溶液在-20o C可保存几个月 EDTA, 4Na终浓度10mM MW:380.2 金属蛋白酶的可逆性螯合物,可能同时影响其他金 属依赖性生物过程。其水溶液很稳定,其贮存液(pH8.5的0.5M 水溶液)在4o C可保存数月 Leupeptin, 半硫酸盐 亮抑酶肽(亮肽素) 终浓度100uM MW:493.6 可逆的丝氨酸及半胱氨酸蛋白酶制剂,可抑制胰蛋 白酶样蛋白酶及一些半胱氨酸蛋白酶如:Lys-C内 切蛋白酶,激肽释放酶,木瓜蛋白酶,凝血 酶,Cathepsin B及胰蛋白酶。 工作液的稳定期为数小时,贮存液(10mM 水溶液)在4o C时稳定期为一周,-20o C时 稳定期为一个月 Pepstatin A 终浓度1uM MW:685.9 可逆的天冬氨酸蛋白酶,可抑制胃蛋白 酶,Cathepain B&L,血管紧张肽原酶(renin)及以1mg/ml溶于甲醇,搅拌过夜可以 1mg/ml溶于乙醇,333mg/ml溶于6N的

职业取向测试结果分析

职业取向测试结果分析 请根据你在上面自测过程中画圈子的序号,在下表中相同的数字上同样画圈。 R C E S A I 123456 789101112 131415161718 192021222324 252627282930 313233343536 373839404142 434445464748 495051525354 555657585960 接着,根据每一栏所画圈的多少将排在前三位的栏目顶上的字母填在下面。 第一:第二:第三:

职业取向测试结果分析 (1)实际型(R) 实际型劳动者愿意从事“看得见、摸得着”的工作。喜欢使用工具,特别喜欢操作大型机器。他们做起事来手脚灵活、动作协调。但不善言辞,不善交际,在社交场合往往觉得很不自在,最不喜欢教育工作与接待他人的工作。 给人的印象是:不合群的、实利主义的、谦卑的(避免抛头露面的)、循规蹈矩的、自然的、倔强的(不可变通的)、直率的、精神健全的、节俭的、坦诚的、有毅力的、缺少见识的、固执的、注重实际。 对应职业类型:实际型职业主要是指各类工程技术工作与农业工作。 主要有:机械、汽车、飞机、土木、采矿等方面的工程师和技术员;机械操作、维修、安装、热处理工人,矿工、电工、木工、鞋匠等;公共汽车、出租汽车、工业卡车的司机;轮船、火车驾驶员;测绘员、描图员、消防队员等;农业机械师、牧民、渔民等。 (2)研究型(I) 研究型劳动者乐于解决抽象问题,喜欢运用词、符号和观念进行工作。非常好奇,急于了解周围的未知世界。宁愿思考问题而不愿动手去处理问题,喜欢独立的和富有创造性的工作,而不喜欢从事社会性的和重复性的活动。通常不愿意受人督促,也不愿意督促别人。知识渊博,为自己的学识和才能感到自豪,而对自己的领导能力缺乏信心。 给人的印象是:分析型的、独立的、理性的、细心谨慎的、有智慧的、冷漠的(沉默寡言的)、不满的(善批评的)、内向的、孤独的、复杂的、悲观主义的、不摆架子的、好奇的、精确的和不合群的(不讨人喜欢的)。 对应职业类型:探索型职业主要是指科学研究和科学实验工作。 主要有:物理、化学、数学、生物学、动物学、植物学、经济学、人类学等方面的专家和助手;化学、飞机、电子、冶金、无线电和电视等方面的工程师和技术员;飞机驾驶员、电子计算机操作人员等。 (3)艺术型(A) 艺术型劳动者喜欢在以写作、作曲、绘画、摄影、建筑等各种艺术形式表现自己的环境里工作。乐于创造新颖的与众不同的东西,渴望表现自己的个性。比较敏感,易动感情,喜欢独立工作,而不过多关心社会纠纷。一般对单调的或经

粗粮含蛋白酶抑制剂

粗粮含蛋白酶抑制剂。荞麦、燕麦、莜麦、高粱面、红薯等粗粮中,含有抗营养素蛋白酶抑制剂。其中,荞麦、莜麦含量最高。粗粮发酵以后,酵母菌大大降低蛋白酶抑制剂的活性,所以粗粮发酵后蒸窝头、贴饼子等食用为好。 各种粗 粮 甘蓝含有硫苷。卷心菜、紫甘蓝、荠菜、萝卜、洋葱、花菜等十字花科蔬菜中,含有抗营养素——硫苷。硫苷降解的某些产物能抑制甲状腺素的合成和对碘的吸收。硫苷具有两面性,虽然它有副作用,但对子宫癌、乳腺癌等多种癌有显著的抑制作用。硫苷对热敏感,将蔬菜炒熟后,可去除其中的大部分硫苷。理想的做法是,将其一半生吃一半熟吃,这样既可保留防癌成分,又有利于其他营养成分的吸收。 黄瓜等含有抗坏血酸氧化酶。黄瓜、西葫芦、莴笋、水芹、花菜、南瓜等食物中,含有抗营养素——抗坏血酸氧化酶。抗坏血酸氧化酶会破坏蔬菜和水果中维生素C的含量。所以食用黄瓜时不必切开,生吃即可。西葫芦、莴笋、水芹、花菜等蔬菜宜大火快炒,最好不要加醋。 蛋白质抑制剂:这是大豆和其它豆类中存在的一种特殊蛋白质,可以抑制体内胰蛋白酶等十几种消化酶的流活性,其代表为胰蛋白酶抑制剂,它能抑制蛋

白酶对蛋白质的消化吸收。它需经蒸发气加热30分钟或高压蒸气加热15~2 0分钟才能被破坏。 皂角素:大豆中含有的皂角素,对消化道粘膜有强烈的刺激性,人吃了没有煮熟的大豆或豆浆,常会产生恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状,就是由于皂角素没有完全破坏所引起。皂角素需加热至100度才破坏,因此食用豆类或豆浆必须煮开10~20分钟后才能食用。 凝血素:也是一种特殊蛋白质,称为植物血球凝集素,可使人体细胞凝集,但加热即可被破坏,或在体内经蛋白酶作用也可使其失去活性,不致被肠道吸收后引起凝血。 棉子糖合成酶:众所周知,多吃大豆后肚子容易胀气。其原因是大豆中含有一种棉子糖合成酶,它进入人体后,可以合成大量低聚糖,如棉子糖、水苏糖等。这些糖不能被子人体吸收,大部分在肠中被细菌分解利用,同时产生大量二氧化碳、氢和甲烷。但大豆充分加熟后,此酶即被破坏,产气也随之减少;加工成豆制品或发酵制品也可去除这种酶,故吃豆腐、腐乳等豆制品就不会胀气。 植酸:这是一种含磷化合物,一般植物性食品中都含有。但大豆中含量很高,大豆中占60%~80%的磷都是以植酸形式存在,植酸可与蛋白质、无机盐及矿物元素钙、磷、铁、锌等结合而影响其消化吸收。大豆中的锌很难吸收,就是受了植酸的影响,可利用发芽米分解植酸,提高大豆中铁、锌、钙、镁等矿物元素的生物利用率。

人中性粒细胞弹性蛋白酶及其抑制剂研究

人中性粒细胞弹性蛋白酶及其抑制剂研究 人中性粒细胞弹性蛋白酶(human neutrophi l elastase,HNE)在机体各种炎症反应、组织损伤重构(如肺炎)、成人呼吸窘迫综合征、肺纤维化、急(慢)性肺损伤、肺水肿、动脉粥样硬化、硬皮病等病理过程中起重要作用,并且具有促进病毒、细菌的侵人及癌细胞转移的功能。炎症机制研究显示,体内该酶及其内源性抑制剂的平衡失调可导致组织基质降解和炎症的恶化。目前,国外用HNE抑制剂来治疗这一类炎症疾病的研究非常广泛,并已成功开发出第一个以抑制HNE为治疗途径的上市药物西维来司钠(sivelestat sodium hydrate),从而促进了HNE抑制剂的研究与开发。 1 BM的生理、病理作用及结构特征 HNE,又称人白细胞弹性蛋白酶(human leukocyte elastase,IRE),属于基质金属蛋白酶类(matrix metalloproteinases,MMPs),即MMP-12,是一种金属离子依赖性基质降解酶,需要微量Zn2+和Ca2+离子的存在才具有酶活性,其底物类型非常广泛,几乎可降解细胞外基质中的所有蛋白。白细胞、巨嗜细胞、肥大细胞内都存在着这种酶,中性粒细胞中其含量很高,大约每106个细胞中含有HNE的总量为 3μg。生理条件下,HNE可以协助清除异源性物质,促进吞噬细胞消除有害病菌,并帮助消化受损组织,有助于伤口的愈合与组织再生。而HNE过量表达则会对机体组织、基质造成危害,表现为破坏血管壁组分,使中性粒细胞更容易渗出血管并向炎症部位趋化集中及释放IL-8、TNF-α等炎症因子;它还能降解细胞基质,催化caspase 3诱导的细胞凋亡。据报道,HNE还能增强病毒、细菌及癌细胞对正常细胞的黏附能力,促进微生物的入侵及癌细胞的增殖和转移。 HNE存在于中性粒细胞嗜苯胺蓝颗粒中,是由 218个氨基酸组成的单一肽链,分子质量大约25.9 kD,含4个二硫键,是丝氨酸蛋白酶家族一员,因此与其他丝氨酸家族蛋白酶具有30%~40%的同源性,最适pH值接近中性。HNE的基因位于19号染色体的短臂末端,是50kb的DNA片段,成熟的中性粒细胞中并无HNE的mRNA表达,说明此种酶只在未成熟的骨

职业生涯规划测评结果

职业生涯规划测评结果

学习风格探索报告--刘晴晴 学习风格探索报告 为了更好的方便你的理解,我们将你的结果放置在坐标图上如下: 你在反省型上得分最高,属于反省型的学习者。 反省型学习者在下列活动中学习效果最佳: 要求或鼓励进行观察和思考。

?不要求或允许非直接碰撞的学习方式,比如在一旁倾听、观察。 ?事前有时间准备,比如在行动前思考,在发表观点前综合别人的意见,有机会事先阅读介绍背景情况的简要?能够进行艰苦的研究,调查、汇总信息、探索真相。 ?有机会能复习和回顾经过和所学到的东西。 ?要求提交谨慎思考过的分析和报告。 ?平等地与他人交流,没有事先约定和没有结构化学习经验的束缚。 ?在没有压力及紧张期限的情况下思考,得出结论。 反省型学习者在下列活动中学习效果最差,也许会反对这些活动: ?被迫抛头露面,充当组织者、领导者,或在别人面前角色扮演。 ?卷入一些未经计划而需要马上进行的紧迫情况。在未经提醒的情况下投入某项工作,要求当即立断和即兴想?提供的数据不足以支持结论。 ?提供的指导死板沉闷。 ?较大的时间压力或在不同的活动之间奔忙,为了出结果而不得不走捷径或做表面文章。 这四种学习风格在一个人身上都可能存在,只是有侧重而已。同时,不同的学科对人的学习风格经常会有非常理、化学经常要进行一些实验操作,可能“行动型”风格更有优势一些;理论性研究则更倾向于对“反省型”有利。同,最终决定了一个人行动的风格。因此,基于对自己学习风格的认识,以及自己目前面临的学习任务,你需要为自做出思考与计划。 职业兴趣探索报告--刘晴晴 职业兴趣探索报告 每个人都有独特的兴趣特点,下图显示了你在六种职业兴趣类型上的分布状况, 你可以了解你的兴趣倾向的整体情况:

常见蛋白酶抑制剂

当前位置:生物帮〉实验技巧 > 生物化学技术>正文 蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全 日期:2012—06-13 来源:互联网 标签: 相关专题:解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新进展 摘要: 破碎细胞提取蛋白质得同时可释放出蛋白酶,这些蛋白酶需要迅速得被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中,需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解、以下列举了5种常用得蛋白酶抑制剂与她们各自得作用特点,因为各种蛋白酶对不同蛋白质得敏感性各不相同,因此需要调整各种蛋白酶得浓度 恩必美生物新一轮2-5折生物试剂大促销!?Ibidi细胞灌流培养系统-模拟血管血液流动状态下得细胞培养系统 广州赛诚生物基因表达调控专题 蛋白酶抑制剂 破碎细胞提取蛋白质得同时可释放出蛋白酶,这些蛋白酶需要迅速得被抑制以保持蛋白质不被降解、在蛋白质提取过程中,需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解、以下列举了5种常用得蛋白酶抑制剂与她们各自得作用特点,因为各种蛋白酶对不同蛋白质得敏感性各不相同,因此需要调整各种蛋白酶得浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中得溶解度极低,尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂得沉淀。在宝灵曼公司得目录上可查到更完整得蛋白酶与蛋白酶抑制剂表。 常用抑制剂 PMSF 1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶,胰蛋白酶,凝血酶)与巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶); 2)10mg/ml溶于异丙醇中; 3)在室温下可保存一年; 4)工作浓度:17~174ug/ml(0。1~1.0mmol/L); 5)在水液体溶液中不稳定,必须在每一分离与纯化步骤中加入新鲜得PMSF。 EDTA 1)抑制金属蛋白水解酶; 2)0.5mol/L水溶液,pH8~9; 3)溶液在4℃稳定六个月以上;

血浆蛋白的测定及临床意义

血浆蛋白的测定及临床意义 一、血浆蛋白质测定方法的进展: (一)、比色法:例如总蛋白的测定方法:双缩脲反应法;白蛋白的测定方法:溴甲酚绿法。 (二)、电泳法:是进一步分离蛋白质的方法。 (三)、免疫测定法:是利用抗原抗体反应检测标本中微量物质的分析方法。 特点:(1)特异性好:即某一抗原只与其相应的抗体起反应。 (2)敏感性高,可检测出纳克(ng)水平的的量。 免疫测定法包括: 1、免疫扩散法:敏感度在ug/ml,因此只能用于检测含量较高的蛋白质。且操作 繁琐、时间长,需18-48小时。 2、免疫电泳法:是区带电泳与免疫扩散相结合的方法。一般不能定量,仅用于检 测异常蛋白成分。 3、免疫浊度法:基本原理是:当可溶性抗原与相应抗体特异结合,在二者比例合 适,并有一定浓度的电解质存在时,可以形成不溶性的免疫复合物,即沉淀反 应。 二、免疫浊度法的原理: 免疫浊度法可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。 1、透射免疫比浊法:当一定波长的光线通过抗原抗体反应混合液时,被形成的免 疫复合物反射、遮挡或吸收而减弱。在一定范围内,吸光度(A)与IC量呈正 相关。因此当抗体量固定时,根据吸光度可计算出抗原量。要求形成的IC达到 一定的数量,而且分子颗粒较大,否则难以精确测定,因此检测灵敏度相对较 低。 2、散射免疫比浊法:光线通过检测溶液时,被反应形成的抗原抗体复合物折射而 部分偏转,产生散射光,散射光强度(I)与样本的IC量、散射夹角(θ)成 正比,而与入射光波长成反比。 散射免疫比浊法又可分为终点散射比浊法和速率散射免疫比浊法 (1)终点散射免疫比浊法:当反应达到平衡时进行检测,通常需10-30min,且灵敏度较低。 (2)速率散射免疫比浊法:由于抗原与抗体结合形成免疫复合物的速度在单

职业测评结果

职业测评结果 一.霍兰德职业兴趣测评结果。 研究型:喜欢对各种现象进行分析判断和推理,喜欢同观念而不是同人或事物打交道; :是思想家而非实干家,抽象思维能力强,求知欲强,肯动脑,善思考,但有时不愿动手; :考虑问题理性,做事喜欢精确,好奇心强,喜欢不断探索未知领域; :注重内心的感受,关注如何创造性的解决问题,一般具有较强的创新精神,而不愿,循规蹈矩; :知识渊博,有学识才能,但不善于领导他人。 企业型:精力充沛自信善于交际热情洋溢富于冒险支配欲强; :通常具有领导才能,能够影响说服他人共同达到组织或个人的目标; :为人务实,通常追求权力财富和地位,习惯以利益得失,权利地位金钱等来衡量做事的价值,做事有较强的目的性。 二.职业环境。 研究型:喜欢独立的和富有创造性的工作,勇于向即使暂时还不是很明确的问题挑战,高度结构化的环境会让他们觉得厌烦 :领导欲望不强,不喜欢劝说机械重复类和要求很高的人际交往能力和动手操作能力的工作; :喜欢智力的抽象的分析的独立的定向任务,比较适合需要具备智力或分析才能,并将其用于观察估测衡量形成理论最终解决问题的工作。 发展建议:在职业发展过程中,可以充分发挥善于运用抽象思维逻辑推理等能力来分析解决问题的优势,发扬独立钻研的学习精神;在工作中应该有意识地加强团队合作,注意提高自己的领

导能力。 :可考虑从事的职业包括:临床研究员、化工实验室研究员、软件工程师、电子技术研发工程师、课程设计开发专员、(各类)科研人员、(各类)专家学者等。 企业型:往往不喜欢那些需要精耕细作的常规性的日常工作,以及长期智力劳动和复杂思维的工作; :富于冒险喜欢竞争,比较适合那些需要胆略冒风险和承担责任的工作; :适合可以展示自己的经营管理劝服监督和领导才能,并实现机构政治社会及经济目标的工作; :该类型的人适合经常和人打交道。 发展建议:在职业发展过程中,可以充分发挥自己在劝说支配和言语方面的技能,以及自信精力充沛领导力强的优势;应尽量避免过于冲动的想法和行为,多注意日常工作和工作中的细节。 :可考虑从事的职业包括:项目经理、房地产销售人员、职业经理人、律师、拍卖师等。二.职业性格测试结果。外向型(E),感觉型(S),思考型(T),判断型(J)。 1.外向。 先行动在思考 说的比听的多 希望成为注意的焦点 较之精深,更喜欢广博 关注自己如何影响外部环境 易于被了解,愿与人分享个人信息 注意力集中在外部世界的人或事 2.感觉。崇尚现实主义 着眼于现实,安于现状 相信确定而有形的食物 关注细节,喜欢描述 循序渐进地给出信息 喜欢运用和琢磨已有的技能

全自动免疫组化染色机报告

全自动免疫组化染色机可代替手工操作,使染色结果更稳定,更标准,消除了多步骤人为因素的影响,可显着缩短出结果时间,可使我院的病理诊断真正做到规范化、标准化、精准化。可以对患者的早诊断、早治疗。使用免疫组化染色机可以开展更多的病理实验项目。病理科在使用全自动免疫组化染色机可在协助诊断、鉴别诊断、指导放化疗尤其在恶性肿瘤的个体化治疗——选择放化疗方案和选择靶向药物方面意义重大。根据卫生部三级综合医院评审指南,三级甲等医院必须装备全自动免疫组化染色机,如具有该设备,设备要求项可达到“A”。如我院装备全自动免疫组化染色机,将大大提升我院的免疫组化实验水平和病理诊断水平。 全自动免疫组化染色机的基本要求: 易于掌握及操作的英文或中文实验程序界面,为免疫组化标准提供了科学,可靠的平台。 主要性能 ●开放式系统,适合不同厂家抗体。从烤片、脱蜡、抗原修复、封闭、标记一抗、标记二抗、显色直到苏木素复染全程自动化。 ●适合多种标本:石蜡、冰冻、穿刺、细胞涂片、骨髓片。玻片盘对于上载的玻片无特殊的选择要求。 ●精密微量加样,滴液量可调,最少可达100ul,节约昂贵的试剂。 ●不同切片可设定不同的抗体滴液量。 ●大瓶溶液包括脱蜡液、修复液1、修复液2、酒精及清洗缓冲液。当大瓶试剂报警存量不足时,主动提示需给大瓶容器添加新试剂。每次添加新试剂前剩余的部分旧试剂也一并投入新的运行中,为了避免检测过程中出现因大瓶溶液存量不足而影响染色运行的状况,每日运行仪器前设备自动检查各溶液的仓位,确认液量足够本批次染色运行。 ●专业切片分区定位,保证最小的试剂用量发挥最大的效果,一次同时染色三十张切片。 ●用户可根据实际工作流程选择整批上载或小批次连续上载,最大限度减少等待时间,提高实验室效率。

常见蛋白酶抑制剂

蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全 标签: 相关专题:解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新进展 摘要: 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶,这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中,需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点,因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同,因此需要调整各种蛋白酶的浓度 恩必美生物新一轮2-5折生物试剂大促销! Ibidi细胞灌流培养系统-模拟血管血液流动状态下的细胞培养系统 广州赛诚生物基因表达调控专题 蛋白酶抑制剂 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶,这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中,需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点,因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同,因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低,尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。 常用抑制剂 PMSF 1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶,胰蛋白酶,凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶); 2)10mg/ml溶于异丙醇中; 3)在室温下可保存一年; 4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L); 5)在水液体溶液中不稳定,必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。 EDTA 1)抑制金属蛋白水解酶; 2)0.5mol/L水溶液,pH8~9; 3)溶液在4℃稳定六个月以上;

4)工作浓度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml); 5)加入NaOH调节溶液的pH值,否则EDTA不溶解。 胃蛋白酶抑制剂(pepst anti n) l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶,血管紧张肽原酶,组织蛋白酶D和凝乳酶; 2)1mg/ml溶于甲醇中; 3}储存液在4℃一周内稳定,-20℃稳定6个月; 4)1作浓度:0.7ug/ml(1umol/L) 5)在水中不溶解。 亮抑蛋白酶肽(leupeptin) 1)抑制丝氨酸和巯基蛋白酶,如木瓜蛋白酶,血浆酶和组织蛋白酶B; 2)lOmg/ml溶于水; 3)储存液4℃稳定一周,-20℃稳定6个月; 4)工作浓度0.5mg/ml。 胰蛋白酶抑制剂(aprotinin) 1)抑制丝氨酸蛋白酶,如血浆酶,血管舒缓素,胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶; 2)lOmg/ml溶于水,pH7~8 3}储存液4℃稳定一周,-20℃稳定6个月; 4)工作浓度:0.06~2.0ug/ml(0.01~0.3umol/L); 5)避免反复冻融: 6)在pH>12.8时失活。 蛋白酶抑制剂混合使用 35ug/ml PMSF…………………………………丝氨酸蛋白酶抑制剂 0.3mg/ml EDTA…………………………………金属蛋白酶抑制剂 0.7ug/ml胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)…………酸性蛋白酶抑制剂 0.5ug/ml亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)……………广谱蛋白酶抑制剂

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C的临床应用

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C的临床应用 摘要:半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C)是半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族的成员之一,由机体所有有核细胞产生,产生速率稳定,可用于评价肾小球滤过率(GFR)。它能敏感反映早期肾功能损害,可用于肾脏透析、糖尿病肾病、肾移植和肿瘤患者肾功能的监控。 关键词:半胱氨酸蛋白酶抑制剂;肾小球滤过率;肌酐 半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C),又称为胱抑素C、γ-微球蛋白,属于半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族的成员之一,自从1985年以来,cystatin C已被视为检测肾功能的良好标志物,由于其不受许多生理病理因素的影响,同肾小球滤过率(GFR)的其他标志物相比具有众多优越性。cystatin C在一系列生理病理过程中也发挥着作用,有重要的临床意义。本文对其临床应用作一综述。 1 cystatin C的生物学特性 1.1 结构和基因半胱氨酸蛋白酶是一种淀粉生成酶,主要存在于小动脉壁,产生淀粉样物质。而cystatin C是半胱氨酸蛋白酶的细胞外抑制剂,在cystatin 中含量最为丰富,并对细胞内蛋白的转换起作用。cystatin C又称γ-微量蛋白( γ-trace)或后γ-球蛋白(post-γ-globulin),它是由120个氨基酸构成的非糖基化的碱性蛋白,相对分子质量低(13.26×1 03)[1],与木瓜蛋白酶、二肽酶、组织蛋白酶有很高的亲和力[2]。编码cystatin C的基因位于染色体20pl1,长约4.3kb,包括3个外显子和2个内含子。研究表明cystatin C基因属于管家基因[3],但是与含有CAAT盒的经典看家基因有所不同,它的启动子在转录区域没有CAAT盒,存在GGGCGG区带和富含AT序列[4],所含GATAAA位点与转录因子结合位点2D相似,同时也是转录因子AP一2(activator protein 一2,激活蛋白)和MEP一1(metal element protein一1金属组成蛋白一1)的结合位点[5]。cystatin C在合成过程中先形成具有26个氨基酸的前体蛋白,进而形成包括120个氨基酸的一条多肽链,分子内由二硫键连接。 1.2 生成、分布和分泌由机体所有有核细胞产生,产生速率比肌酐稳定[4]。

职业测评结果

霍兰德职业兴趣报告 一、测评项目说明 霍兰德的职业兴趣理论,其核心是按照不同的职业特点和个性特征将人分为六类:现实型、探索型、艺术型、社会型、企业型、常规型,这六种类型的人具有不同的典型特征。每种类型的人对相应职业类型感兴趣,当我们就业择业的时候,我们的兴趣与职业环境的匹配是形成职业满意度、成就感的基础。 本测试以霍兰德职业兴趣( Holland Vocational Interest Theory )理论为基础,从你想、喜欢干什么 ( 兴趣 ) 、和你擅长干什么 ( 能力 )2 个方面测查个体的职业倾向,同时在题目内容设计方面结合了当代中国大学生的实际情况。通过本测试,可以帮助测试者较为准确地了解自身的个体特点和职业特点之间的匹配关系,同时为测评者在进行专业选择和职业选择时,提供客观的参考依据。 二、得分统计表 得分说明: 您在某种职业类型中的总分越高,表明您越适合从事该职业环境的相关工作,得分最高的项就是最适合您的职业类型;反之,您在某个类型的得分越低,表明您越不适合从事该类型的职业。您在择业时应尽量避免选择得分最低的职业类型,因为该类型的工作与您的自我兴趣相差很远,可能会不利于您在工作中获得快乐和满足感并做出成绩;如果您有两种(或以上)的职业类型的得分相同,表明那两种(或以上)职业类型都比较符合您。 技能型:( 5) 该类型的人往往看重现实事物的价值,安分随流,做事保守,较为谦虚,踏实稳重,诚实可靠,情绪稳定,不善交际应酬,通常喜欢独立做事。 研究型:(13) 该类型的人坚持性强,有韧性,喜欢钻研,重视科学性和不断地学习,善于分析思考,为人好奇,独立性强,做事谨慎。 文艺型:(9) 该类型的人属于理想主义者,追求完美,不重实际,想象力丰富,富有创造性,具有独创的思维方式,直觉强烈、敏感,情绪波动大,较冲动,不服从指挥。 社会型:(13) 该类型的人有强烈的社会责任感和责任心,关心社会问题,渴望发挥自己的社会作用,为人友好,热情,开朗,善良,善解人意,助人为乐,易于合作。 企业型:(13) 该类型的人为人乐观,对自己充满自信,喜欢冒险,精力旺盛,有支配愿望,好交际,喜欢发表意见和见解,善辩,独断。 事务型:(12) 该类型的人服从权威,讲究秩序,责任感强,高效率,稳重踏实,细心仔细,有条理,耐心谨慎,依赖性强。

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