细胞生物学基本技术071203
实验二、细胞生物学基本技术
第一部分生物绘图法
一、目的与要求
(1)了解生物绘图的要求。
(2)初步掌握生物绘图的基本方法。
二、材料和用具
HB及2H或3H绘图铅笔、橡皮、直尺、绘图纸、铅笔刀、各种细胞标本玻片，显微镜。
三、实验操作与观察
(一)、生物绘图的要求
1.具有高度的科学性，不得有科学性错误。形态结构要准确，比例要正确，要求真实感，立体感，精确而美观。
2.图面要力求整洁，铅笔要保持尖锐，尽量少用橡皮。
3.绘图大小要适宜，位置略偏左，右边留着注图。
4.绘图的线条要光滑、匀称，点点要大小一致。
5.绘图要完善，字体用正楷，大小要均匀，不能潦草。注图线用直尺画出，间隔要均匀，且一般多向右边引出，图注部分接近时可用折线，但注图线之间不能交叉，图注要尽量排列整齐。
6.绘图完成后在绘图纸上方要写明实验名称、班级、姓名、时间，在图的下方注明图名及放大倍数。
(二)、生物绘图的方法
生物绘图的方法有多种，最长见的是点点衬阴法。点点衬阴法即将图形画出后，用铅笔点出圆点，以表示明暗和深浅，给予立体感。在暗处点要密，明处要疏，但要求点要均匀，点点要从明处点起，一行行交互着点，物体上的斑纹描出再点点衬阴，点点衬阴法要求不能用涂抹阴影的方法以代替点点，此点初学者要尤为注意。
如下图：轮廓图（左）和细胞图（右）
(三)、生物绘图的步骤
1.绘图前认真的观察标本，搞清实物标本的结构特点，切忌抄书或平空想象。
2.用HB铅笔轻轻将图轮廓画出，作为草图要掌握好比例和位置。
3.在草图的基础上绘详图，此时要用2H和3H铅笔，线条要流畅，点要匀称，点线不要重复描绘。
4.按注图要求绘图，写上图名及班级、姓名等。
（四）、绘图练习
取准备好的标本材料在显微镜下观察并绘制观察的图像。
第二部分临时装片法
对于某些新鲜而柔嫩的材料，不用做切片，仅进行简单处理即可进行观察的方法。这种方法制成的标本可以保持材料的生活状态和天然的色彩，一般多作为临时观察使用。常用方法有：
(一)涂片法：
主要用于血液、精液、尿、痰、微生物等无固定组织结构的样品。取一干净载玻片，将一滴待观察样品滴在载玻片左侧，用另一干净载玻片的窄边接触样品。此时液态样品沿两载玻片接触处展成一细线，迅速将上边载玻片以45度角向右侧推动，即在第一张载玻片上形成一薄层样品膜，可自然风干待用。
(二)铺片法：
主要用于动、植物组织的表皮层观察。可活体取待观察的动、植物组织，用尖头镊撕去一小块表皮，迅速平铺在载玻片的水滴上（也可用染剂），用盖玻片盖上，避免气泡，除去多余水分，即可观察。
植物材料临时装片的制作方法:
1.擦净载玻片和盖玻片，即将
浸洗过的玻片用纱布擦干，擦
盖玻片时，应十分小心。
2.用玻璃滴管吸水，滴一滴在
载玻片的中央。用镊子或毛笔
挑选小而薄的材料放置于载玻
片上的水滴中。
3.加盖片：右手持镊子，轻轻
夹住盖玻片，使盖玻片边缘与
材料左边水滴的边缘接触，然
后慢慢向下落，方平盖玻片。
这样可使盖玻片下的空气逐渐
被水挤掉，以免产生气泡。如
果盖玻片下的水分过多，则材
料和盖玻片容易浮动，影响观
察，可用吸水纸条从盖玻片的侧面吸去一部分水。如果水未充满盖玻片时，容易产生气泡，可从盖玻片的一侧再滴清水将气泡驱走，即可进行观察。
图1制作洋葱表皮装片
(三)压片法：
一些幼嫩、柔软的材料可将其置于载玻片上，加染液一滴，再盖上盖玻片，用拇指垂直用力挤压，使组织散成一薄片，再进行观察。如植物根尖观察染色体，花粉观察发育阶段等。
(四)整装片法：
一些个体微小的原生动物或藻类，如水螅、线虫、四膜虫、衣藻、团藻等，可整体将其置于载玻片的水滴中，盖上盖玻片观察。
以上仅是临时观察所用玻片标本的制作方法，如形态良好，有保存的必要，则应将盖玻片揭开，用化学试剂进行固定、洗涤、染色、脱水、透明、封藏步骤，才可制成永久标本。
图2 整体装片法
第三部分徒手切片法
用光学显微镜观察的样品必须是透明的薄片，因此，要先把观察的材料制成透明的切片后，才能在显微镜下观察。徒手切片方法是观察植物内部构造的方法，徒手切片的重要工具是双面刀片，每次用后必须擦干净，注意保护，以免生锈。徒手切片的过程如下：
(一) 材料的选择:
一般选用软硬适度的植物根，茎或叶等，材料不宜太硬也不太软。切较软的材料时，可用马铃薯、胡萝卜根或肥皂将欲切的材料夹住；一起进行切片。有些叶片亦可卷成筒状再进行切片。欲切之材料应先截成适当的段块，并削平切面，一般截面的大小以不超过3-5mm2为宜，长度2-3cm，较便于手持并进行切片。
(二) 方法和步骤：
1. 切片前，在小培养皿中盛以清水，准备好毛笔，滴管和刀片等用具和欲切的材料。
2. 切片时用左手的三个指头拿住材料，并使材料稍突出在手指上，以免刀口损伤手指。右手持双面刀片，把刀刃放在经过削平的平面上，轻轻压住它，刀口向内，且与材料断面平行，然后以均匀的力量和平稳的动作，自左前方向右后方滑行切片，注意要用整个手臂向后拉（手腕不必用力）。切片时动作要敏捷，材料要一次切下（整个过程中应用清水湿润材料和刀面，使之润滑，否则材料容易破损）。如此连续动作，切下许多薄片后，就用湿毛笔将这些薄片轻轻移入已盛水的培养皿中备用。徒手切片时最重要的是切下一小片平而薄的组织，而并不要求切下一个完整的切片。
3. 用毛笔挑选最薄而透明的切片，取出放在载玻片上，制成临时装片观察；如标本有保留价值，则可再进行以下处理，制成永久标本。
（1）将切片移入小烧杯中，经50％、60％、70％各级乙醇中进行脱水及固定，每级5分钟，然后移入1％番红染液中（用70％乙醇溶液配制）中30分钟。（2）继续移入80％、90％、95％各级乙醇脱水，每级5分钟。再移入1％固绿染液（用95％乙醇配制）染色30分钟，再入95％乙醇中洗去浮色，最后进入无水乙醇脱水5分钟。
（3）切片置于无水乙醇:二甲苯＝1：1的溶液中5分钟，再移入纯二甲苯中5分钟，此时组织切片呈透明状态。
（4）将切片置于载玻片中央，加一滴树胶，盖上盖玻片封片，待干燥后即可使用。
实验三、血液涂片的制法
一、实验目的
1．学会血液涂片的制法。
2．学会各种血液细胞的识别。
二、用具及药品
采血针、滴管、载玻片、培养皿、记号笔、药棉、消毒用洒精、重蒸馏水或pH 6．5—7．0的缓冲液、赖特氏(Wright)染液(配法：加l克亚甲蓝于l00毫升0．5％重碳酸钠水溶液内，溶解后放在高压灭菌器或l00℃之锅内蒸lh，取出后速以冷水冷却，过滤除去沉淀。以此液100毫升加500毫升的0．1％曙红水溶液，随加随搅拌使混合均匀，过滤。保存滤纸上的沉淀，放在空气流通处或干燥箱中，待沉淀十分干燥后用研钵磨成细粉，就成赖特氏染色粉。再用0．1克赖特氏染色粉，溶解于60毫升纯甲醇中即配成赖特氏染液。也可购到配制成的赖特氏染色粉及赖特氏染色液)。
三、操作步骤
1．采血先揉搓采血的地方(人的手指背面或腹面或耳垂)，使血流通畅，以75％酒精擦皮肤消毒，待干燥后用左手拇指及食指夹着局部使皮肤紧张。再用消过毒的采血针迅速刺破皮肤，血液自然流出。将流出的第一滴血用药棉擦去不用，如血流不出，可用手轻轻揉挤，但不可用力过大。
2．涂片取洁净的载玻片一张，将流出的第二滴血滴在载玻片右端。另用一边缘光滑的洁净载玻片，以其末端边缘置于血滴左线，然后稍向后退，血液就充满在两载玻片的斜角中，再以30一40度(斜度愈小，涂片愈薄)角向左方推动，即涂成血液薄膜。推动时用力不能太大，要均匀并保持一定的速度。过慢，涂片则较厚。注意不能在同一张片上涂第二次。
3．染色待涂片完全干烷后，在欲染色的区域用记号笔画一方框，加数滴赖特氏染液在血膜上使染液将血膜完全覆没，用培养皿盖上，以防蒸发。l一2分钟后一滴一滴加上等量的重蒸馏水或缓冲液使与染液均匀混合，静置2—4分钟。用滴管吸蒸馏水将多余染液慢慢冲去即可观察。
4．封藏涂片完全干燥后，可用中性树胶或浓香柏油封藏保存，不能用一般树胶，以防退色。
四、结果红细胞呈粉红色或橘黄色，白细胞的细胞核为蓝紫色。
实验四蟾蜍骨髓细胞染色体的制备一、实验目的
学会动物骨髓细胞染色体标本制备的基本方法，了解操作步骤的原理。观察动物染色体的形态和数目。
二、实验材料器具
蟾蜍或小白鼠；普通显微镜，普通托盘天平，手摇离心机，蜡盘，剪刀，镊子，注射器，离心管，吸管，卫生纸；0.075摩尔/升氯化钾低渗液，甲醇乙酸固定液，100微克/毫升秋水仙素，吉姆萨(Giemsa)染液。
三、实验步骤
1.配制吉姆萨染液取吉姆萨1克，甘油66毫升，甲醇66毫升，保存在棕色瓶内成贮备液。在使用时用pH值6.8磷酸缓冲液1∶10稀释。
2.用秋水仙素处理实验前
3.5～4小时，选取幼龄活泼的蟾蜍或小白鼠，称重。按每克体重2－4微克的剂量，用注射器腹腔注射秋水仙素。由于秋水仙素能抑制纺锤体形成，从而使细胞有丝分裂在中期停止。
3.解剖取材注射秋水仙素后3.5～4小时，用毁脊髓法处死蟾蜍或小白鼠。在解剖蜡盘中剪开蟾蜍后肢大腿上皮肤和肌肉，暴露出股骨及其两端关节，然后从上端连关节剪下下肢，分离出股骨，用卫生纸剔尽残余肌肉。剪去两端少量软骨，使骨髓暴露。注射器针头插入股骨一端骨髓腔，用盛有5毫升氯化钾低渗液冲洗出腔内骨髓于离心管中，反复冲洗至骨髓腔变白为止(见图)。
4.静置低渗把获得的骨髓细胞悬液在15～25℃室温下静置20～30分钟。使细胞膨胀，促使中期染色体散开。这一步常常是成败的关键。
5.固定在低渗结束前1～2分钟，加入新鲜配制的甲醇乙酸(30∶1)1毫升，用吸管吹打混匀。用手摇离心机以800转/分的速度运转5分钟。小心吸去上清液，留下约0.5毫升沉淀物再加入5毫升固定液混匀，静置15～20分钟。再重复运转5分钟，弃去上清液。如果时间允许，为提高标本制片质量，减少杂质，必要时可以再固定一次。
6.滴片用吸管把离心管留下的0.5毫升固定液跟沉淀细胞吹打混匀，然后取一张洁净载玻片平放桌上，用吹管吸取细胞悬液从10厘米以上高度滴下1～2滴在载玻片中央，轻吹载玻片上液滴加速蒸发，以利染色体铺展。
7.染色载玻片蒸发干燥后，滴上1～2滴吉姆萨染液，染色12分钟，然后用水冲去染液，晾干后镜检。
四、分析和讨论
1.如果标本中不见分裂相，或只有胀大的细胞核，说明低渗不足。
2.如果染色体铺展不好，可以重新固定一次，或从更高处滴液，依借重力使染色体分散。还可以试用冰冻过的载玻片，趁冷滴液。
3.如果染色体缩得太短，可能是秋水仙素浓度太高或作用时间太长。
4.如果分裂相不见或太少，可能是动物老化、细胞分裂不旺盛；秋水仙素作用不够；操作技术有问题。
5.本方法为气干法制片，可以直接用树胶封片，也可以不封片，直接保存数年。
6.蟾蜍作为实验材料受季节性限制，可以改用小白鼠等其他脊椎动物代替，方法基本相同。
7.染色体制备是一项技术性工作，初学时往往会失败，经不断练习，成功率在80%以上即可认为基本掌握。
小白鼠染色体的制备和观察
一、实验目的
通过实验，掌握空气干燥法制片技术。
二、实验原理
在骨髓细胞中，有丝分裂的指数是相当高的，因此可以直接得到中期细胞而不必像血淋巴细胞那样要经过体外培养。通过骨髓得到染色体是比较简便的，一般也无需无菌操作。在临床上多用于白血病的研究，在实验条件下，这种染色体是机体内真实情况的反映，而且用骨髓制片的方法易于观察毒性物质在体内对细胞和染色体的影响。
直接制片法，是直接从骨髓中取出细胞，经压片法或空气干燥法制片。所谓空气干燥法，实际上是将细胞经过秋水仙素处理─低渗处理─充分的固定─滴片等步骤之后在载玻片上得到染色体制片的技术。有时，有人把滴片的步骤叫做染色体分散，也有人把这一步和随后的干燥称为空气干燥法。
“空气干燥”就是滴片后，不加热或任何处理，使载片在室温下自然干燥的方法。空气干燥法是一个十分有用的基本技术，要熟练掌握。
三、实验材料
小白鼠
四、实验器具和药品试剂
冰箱、离心机、恒温水浴锅、显微镜、分析天平、药物天平、试管架、离心管、吸管、烧杯、量筒、注射器(1ml、5ml)、5号针头、载玻片、解剖盘、解剖刀、剪刀、镊子、酒精灯、切片盒、切片架、纱布。
秋水仙素、柠檬酸钠、氯化钾、冰醋酸、甲醇、磷酸缓冲液、Giemsa、甘油、
硫酸、重铬酸钾。
五、实验方法和步骤
(一) 秋水仙素处理取骨髓前3～4小时先给小白鼠经腹腔注入0. 1％的
秋水仙素，注射剂量为4毫克／每公斤动物体重。
(二) 取骨髓经秋水仙素处理的小白鼠，可用损伤脊髓法处死，然后用剪刀剪开大腿上的皮肤和肌肉，
取出大腿骨和胫骨，用一小块纱布来回搓干净附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨两端膨大的关节头，然后将股骨剪碎投入小烧杯中，用2毫升1％柠檬酸钠溶液搅烂碎骨，使骨髓细胞游离出来。静止片刻，用吸管把悬浮液吸到离心管中，可重复冲洗一次。此时离心管中的细胞悬浮液可达 4～5毫升。
(三) 低渗将所获得的细胞悬浮液先进行平衡(注意：每次离心前都要平衡)，然后以 1000rpm离
心10分钟，吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加0.075M KCL 溶液至8 毫升刻度，将细胞沉淀物吹散打匀，在水浴37℃低渗20～30分钟。
(四) 固定低渗处理后的材料，以1000rpm离心10分钟，吸去上清液，留0.2ml沉淀物，用吸
管吹散沉淀物，沿管壁加固定液至6毫升, 冲匀后静止固定20分钟，即第一次固定。按上述条件离心，去上清液，再次加入固定液至6ml，进行第二次固定。20分钟后离心吸去上清液，留0.2ml 沉淀物,再往沉淀物中滴加4滴固定液，冲匀制成细胞悬液。
(五) 滴片取事先在冰箱中预冷的载玻片(载玻片须经硫酸洗液浸泡10天以上，经清水冲洗，用蒸
馏水浸泡)，滴2～3滴细胞悬液于粘有冰水的载玻片上，用嘴吹气，使细胞迅速分散。将载片插放在切片架上晾干。
(六) 染色取2张制片平放在玻璃板上，用10：1 Giemsa染液染色20分钟，流水冲洗后晾干即
可镜检。
(七) 观察用中倍镜选择分散适度，不重迭的染色体分裂相，转高倍镜详细观察小白鼠染色体的形态
特征，并计算2n的染色体数目。
实验七动物骨髓细胞染色体的制备与观察
[实验目的]
1. 通过青蛙或小白鼠骨髓细胞染色体的制备，初步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体的方法。
2. 熟悉染色体的形态、种类及青蛙、小白鼠等动物染色体的数目或类别。
[实验原理]
骨髓细胞是具有旺盛分裂能力的细胞，从这些分裂细胞中，可观察到处于分裂中期的染色体，能对一种动物染色体的形态特征、数目进行准确的观察和分析。由于骨髓直接涂片观察到的分裂相少，效果差，因此要对骨髓细胞进行必要的处理。这个处理方法称为低渗法，其基本要求首先是要获得较多的中期分裂相。秋水仙素对分裂期纺锤丝的形成具有破坏作用，当动物被注射适量的秋水仙素后，处于分裂增殖中的骨髓细胞由于纺锤丝不能形成，中期染色体不能正常趋向两极，到达后期、末期，因而大量的细胞处于观察染色体形态最佳的分裂中期。其次是要能够清楚的观察染色体的形态。为了达到此目的，取出的骨髓细胞要经过低渗（kcl溶液）使细胞膨胀、染色体适当的分散。固定（甲醇、冰醋酸）使染色体保持完好的形态。染色（giemsa液）使染色体易分辨、观察。制备优良的标本可获得满意的观察效果。利用动物骨髓制作染色体观察标本取材容易，不需培养，不需无菌操作，比较简便，是生物学实验教学中常用的方法。一般选用的动物有青蛙、蟾蜍、小白鼠、大白鼠等。
[实验用品]
1. 动物：青蛙或小白鼠、大白鼠、蟾蜍，雌雄均可。
2. 试剂：0.02﹪秋水仙素、0.075mol/l氯化钾(kcl)、3:1甲醇、冰醋酸固定液、吉姆萨（giemsa）染液、香柏油或液体石蜡、二甲苯。
3. 器材：解剖盘、小镊子、剪刀、注射器（2ml、5ml各一支）、刻度离心管、玻璃吸管、
预冷载玻片、染色缸、玻片盒、量筒（10ml、50ml、100ml各一支），恒温水浴箱，盘架天平（配备等大的小烧杯两个）、电吹风、显微镜、吸水纸、擦镜纸、酒精灯、火柴。
[实验内容与方法]
一、试剂配制
1. 0.02﹪秋水仙素溶液：秋水仙素2mg，灭活生理盐水（蛙类0.65﹪、哺乳类0.85﹪的nacl）10ml溶解，避光保存。
2. 0.075mol/l kc1溶液：
原液：kcl 11.8g双蒸水100ml溶解。
使用液：原液1份，双蒸馏水19份混合，
3. 吉姆萨(giemsa)染液：
原液：吉姆萨染粉0.5g，甘油33ml，甲醇33ml，配制时先将giemsa粉置于研体中，加入少量甘油，研磨至无颗粒，再加入余下的甘油，拌匀后放入56℃温箱中保温2小时，然后取出加入甲醇，充分拌匀，滤纸过滤用棕色瓶密封，避光保存，一般要放置2周后才能使用。
使用液：原液1份，ph6.8磷酸缓冲液9份稀释。使用液不宜长期保存，一般现配现用。
4. ph6.8磷酸缓冲液：该液可先配成甲液和乙液，然后混合使用。
甲液：kh2po4 0.907g蒸馏水100ml溶解。
乙液：na2hpo4·2h20 1.18g（或na2hpo4·12h20 2.38g）加蒸馏水100ml溶解。
使用液(ph6.8)：甲液50.8ml，乙液49.2ml混合，该使用液也不易久放，一般也是现配现用。
二、染色体制备
各种动物骨髓细胞染色体的制备方法基本都采用低渗法，现以青蛙为例，说明其制备的过程。
1. 取健康小鼠一只，按每10g体重由腹腔注入含量为0.02% 的秋水仙素0.3ml（此步在实验前12～24小时完成，哺乳动物在实验前2～4小时完成）。
2. 将青蛙处死，迅速取出后腿长骨，包括股骨和胫骨，为了获得较多的骨髓细胞，前肢亦可使用。
3. 用剪刀、镊子剥离肌肉及结缔组织，剪去两头的骨结，迅速用5ml注射器抽取0.075mol/l 的kcl溶液，从一头插入骨髓腔冲洗，冲洗液接入刻度离心管内，反复多次，直至骨髓腔变白。此时不要让组织块掉进离心管，如掉入，一定要用镊子或吸管取出。加低渗液至5ml或8ml刻度，放入37℃恒温水浴箱内低渗处理25分钟。
4. 低渗完毕，取出离心管，向离心管中加入1ml左右3﹕1甲醇、冰醋酸固定液进行预固定。1～2分钟后，每两支离心管成对放在天平上配平，使两支管的重量相等，然后将这两支管对应的放入离心机内的孔中，以1 500r/min 离心5～8分钟。
5. 取出离心管，弃去上清液，再加固定液至6～8ml，用玻璃吸管沿离心管壁吹打，使沉淀的细胞团块在固定液中充分均匀，然后放入37℃水浴箱中固定15～20分钟。
6. 再取出离心管，配平后离心5～8分钟，转速同样为1 500r/min。离心完毕，去掉上清液，再加入1ml左右的固定液，用吸管吹打，制成细胞悬液。
7. 取预冷湿玻片一张，用吸管吸取细胞悬液，从30cm左右的高度滴到载玻片上，再用口吹散滴液，置于酒精灯上微微火烤，最后放玻片架或玻片盒中晾干。
8. 将晾干的玻片放入吉姆萨应用液染色缸中，或将玻片平放于桌上，将染液滴在片上染色。染色10分钟后，用蒸馏水或自来水小心冲去染液，电吹风吹干后镜检。
三、染色体观察
将制好的玻片置于显微镜下，首先观察标本的制备效果，检验操作过程是否正确。一般来说，制得好的标本应是细胞多、颜色为紫红色。此时间期细胞由于低渗和固定处理，细胞膜和质已被去掉，镜下看到的仅为膨胀后呈圆形的细胞核。分裂期细胞染色体集中在一起，其外也无细胞膜包裹，染色体之间无重叠，易分辨，臂的长度适中。但最重要的是分裂相要多。分裂相的多
少主要取决于秋水仙素的用量和时间。秋水仙素还影响染色体的形态，如用量过大，常使染色体过于缩短，不利于观察。
青蛙体细胞的染色体数目(2n)为26条，性染色体机制为xx - xy，即雌性为xx，雄性为xy。
染色体的形态随青蛙种类不同略有差异，主要表现为亚中着丝粒染色体的序号和数目不同，如黑斑蛙的亚中着丝粒染色体为3、7、8、11、12等5对染色体，金线蛙为3、7、11、12等4对染色体，虎纹蛙为3、6两对染色体。
小白鼠的染色体数目（2n）为40条，但全部为端着丝粒染色体，大小区别不明显，较难分组编号。
图6-1 小鼠染色体核型
大白鼠的染色体（2n）为42条，家兔的染色体（2n）是44条。
观察染色体时，不需加盖玻片，镜下先用低倍镜调好焦距，找到无离散，无重叠，形态好，可记数的一个分裂相，然后转高倍镜或油镜观察、记数，观察完毕后也不需擦试玻片，这样的玻片可保存数月。
实验三、线粒体和液泡系的超活染色与观察
活体染色是能使生活有机体的细胞或组织特异性着色但对活样品又没有毒害作用的一种活体染色方法，其目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学”特性。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。一般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别具有专一性。
实验目的
1、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布；
2、学习一些细胞器的超活染色技术。
实验原理
线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿B是线垃体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
中性红为弱碱性染料，对液泡系(即高尔基体)的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
实验用品
1、器材
显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、解剖盘．载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
2、试剂
（1）Ringer溶液：
氯化钠0.85g (变温动物用0.65g)
氯化钾0.25g
氯化钾0.25g
氯化钙0.03g
蒸馏水100ml
（2）10%、1/3000中性红溶液：
称取0.5g中性红溶于50ml Ringer液，稍加热(30~40℃)使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml，加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。
（3）1%、1/5000詹纳斯绿B溶液
称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加微热(30~40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。取1%原液l ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液装入瓶中备用。最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。
实验材料
人口腔上皮细胞，小麦种子或黄豆幼根根尖。
实验方法
1、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察
清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上
↓
滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液
↓
用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞
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刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中
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染色10~l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液)
↓
盖上盖玻片,显微镜下观察
2、植物细胞液泡系的超活染色与观察
取豆芽的根尖
↓用刀片纵切根尖
放入中性红染液滴中，染色5~10min。
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吸去染液，滴一滴Ringer液
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盖上盖玻片进行镜检(镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察)
实验结果
在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大，数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部分，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。
实验报告
（1）. 绘口腔上皮细胞示线粒体的形态与分布
（2）. 绘蟾蜍胸骨剑突软骨细胞示液泡系的形态与分布
山大分子细胞生物学题库
ft大分子细胞生物学题库 一、填空 1、第一个观察到细胞的是英国物理学家，他把它称为cell，并记载在书名为的书里，这被认为是细胞学史上第一个细胞模式图。第一个观察到活细胞的是 --------- 。目前发现的最小的细胞是------ 。 2、次级溶酶体根据内含物的不同分为-----------和 ------ 两种。 3、线粒体各组成部分的标志酶分别为：外膜：-------------；膜间隙：------------；内膜： ------- ；基质中--------------。 4、染色体的三个关键序列为、、。 5、细胞表面受体根据传导机制不同分以下三类：------------、----------------、-------- 。 6、具分拣信号的蛋白有以下3 种不同的基本转运途径--------------、-------------、--------- ，上述三种运输均需消耗能量。 7、不同的细胞有不同的基因表达，表达的基因可分为两类--------------和 -------- 。细胞的分化是由于基因的----------- 。 8 、原癌基因激活的方式有--------------- 、------------ 、--------------- 、---------- 。 9、骨骼肌中细肌丝的组成包括-----------------、-------------、----------- 。 10、根据蛋白质与膜脂的结合方式，质膜蛋白可分为----------------、-------------、----------- 三类。 10、组成糖氨聚糖的重复二糖单位是和。 11、细胞学说的创始人是德国植物学家------------和德国动物学家------ 。 12、动物细胞之间对一些水溶性小分子具有通透作用的连接方式是-------- ，其基本结构单位称为------------。 13、物质穿膜中主动运输有和两种方式，被动运输有和两种。 14、在蛋白质合成过程中，核糖体大亚单位为------------中心，小亚单位为-------------- 中心。 15、核膜上孔膜区的特征性蛋白为一种跨膜糖蛋白----------；核纤层通过 ------ 与核 膜相连，其主要功能是--------------、-------------和------- 。 16、信号分子根据分泌方式可分为--------------、-------------、-------------、--------- 四种。 17、动物细胞表面存在由糖类物质组成的结构称为------- 。 18、内质网驻留蛋白的特点为C 端有由4 个氨基酸组成的驻留信号序列，在动物中为------- 。 19、再生的类型可分---------------和---------- 两种。 20、桥粒、半桥粒与胞内的------------相连，黏合带、黏合斑与胞内的------- 相连。 21、肌球蛋白的两个酶切位点分别是--------------- 和-------- 。 22、在细胞周期调控中，组成MPF 分子的CDC 是---------亚基，Cyclin 是 ----- 亚基。 23、负责联系细胞与细胞外基质（基膜）的细胞连接形式分别为------和 --- 。参与这两种连接方式的跨膜连接蛋白质又称为。 24、细胞中的离子泵主要有、和。 25、膜泡运输中的内吞作用主要包括和两种方式，其中--- 也是原生生物获取食物的重要方式。 26、肌球蛋白的两个“活动关节”分别能够被-----酶和------酶作用，--- 酶可将肌球蛋白从头部和杆部连接处断开。 27、细胞凋亡时细胞膜的主要变化为-----，细胞核的主要变化为-----；此外还会形成--- ，从而被其它细胞吞噬掉。
(完整版)分子生物学实验技术考试题(卷)库
一、名词解释 1.分配常数：又称分配系数，是指一种分析物在两种不相混合溶剂中的平衡常数。 2.多肽链的末端分析：确定多肽链的两末端可作为整条多肽链一级结构测定的标志，分为氨基端分析和羧基端分析。 3.连接酶：指能将双链DNA中一条单链上相邻两核苷酸连接成一条完整的分子的酶。 4.预杂交：在分子杂交实验之前对杂交膜上非样品区域进行封闭，用以降低探针在膜上的非特异性结合。 5.反转录PCR：是将反转录RNA与PCR结合起来建立的一种PCR技术。首先进行反转录产生cDNA,然后进行常规的PCR反应。 6.稳定表达：外源基因转染真核细胞并整合入基因组后的表达。 7.基因敲除：是指对一个结构已知但功能未知或未完全知道的基因，从分子水平上设计实验，将该基因从动物的原基因组中去除，或用其它无功能的DNA片断取代，然后从整体观察实验动物表型，推测相应基因的功能。 8.物理图谱：人类基因组的物理图是指以已知核苷酸序列的DNA片段为“路标”，以碱基对(bp，kb，Mb)作为基本测量单位(图距)的基因组图。 9.质谱图：不同质荷比的离子经质量分析器分开后，到检测器被检测并记录下来，经计算机处理后所表示出的图形。 10.侧向散射光：激光束照射细胞时，光以90度角散射的讯号，用于检测细胞内部结构属性。
11.离子交换层析：是以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的层析。 12.Edman降解：从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。 13.又称为限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)：是能够特异识别双链DNA序列并进行切割的一类酶。 14.电转移：用电泳技术将凝胶中的蛋白质，DNA或RNA条带按原位转移到固体支持物，形成印迹。 15.多重PCR：是在一次反应中加入多对引物，同时扩增一份模板样品中不同序列的PCR 过程。 16.融合表达: 在表达载体的多克隆位点上连有一段融合表达标签（Tag），表达产物为融合蛋白（有分N端或者C端融合表达），方便后继的纯化步骤或者检测。 17.同源重组：发生在DNA同源序列之间，有相同或近似碱基序列的DNA分子之间的遗传交换。 18.遗传图谱又称连锁图谱(linkage map)，它是以具有遗传多态性的遗传标记为“路标”，以遗传学距离为图距的基因组图。 19.碎片离子：广义的碎片离子为由分子离子裂解产生的所有离子。 20.前向散射光：激光束照射细胞时，光以相对轴较小角度向前方散射的讯号用于检测细胞等离子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。 21.亲和层析:利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其他分子的一种层析法。(利用分子与其配体间特殊的、可逆性的亲和结合
细胞生物学实验
1. 什么是细胞培养？ 细胞生物学实验 指从动物活体体内取出组织，并将其分散为单个细胞（机械或酶消化），在体外模拟体内的生理环境，使其在人工培养条件下保持生长、分裂繁殖、细胞的接触性抑制以及细胞衰老过程等生命现象。 最常见的细胞一般有两种，一种是原代细胞，另一种是传代细胞。 原代细胞是指动物组织经过胰酶或胶原酶等酶类的消化，使其分散，从而获得单个细胞，再使这些单个细胞生长于培养容器中的过程。大多数组织可以制备原代细胞，但制备的方法略有不同，制备的细胞生长快慢及难易程度也不相同。 不同的原代细胞，其形态也不尽相同。一般将10代以内的细胞称之为原代细胞。 传代细胞一般指无限繁殖的细胞系，理论上这类细胞可以无限次的传代。做实验的时候也会经常使用这类细胞，如Hela、293、Vero 等细胞。 2. 细胞的生长周期 游离期：细胞刚接种到新的培养容器中到贴壁前的一段时期，这个时期的长短由细胞类型决定，从几分钟到几个小时不等。 贴壁期：细胞从游离状态变为贴附到培养器皿表面并展现出一定细胞形态的时期。 潜伏期：细胞在完成贴壁后，并不会马上进行增殖，会进行增殖所必须的物质和能量的储备，这个时候称之为潜伏期。
对数生长期：细胞在完成物质和能量储备后，开始大量的增殖的时期。这个时期的细胞活力旺盛，且状态稳定，我们所做的绝大多数实验都是在这个时期开展的。 停止期：随着细胞的生长，细胞密度越来越大，由于营养物质的消耗、细胞间的接触抑制等因素，细胞生长缓慢，甚至停止生长。这个时候，我们就要给细胞进行传代了，使细胞可以继续进行增殖，保持旺盛的活力。 3. 细胞生长所需要营养条件 细胞的培养所需要的营养成份一般来自于基础培养基（比如DMEM培养基）和血清。 基础培养基：主要是提供细胞生长所需要的氨基酸（组成蛋白质的基本单位）、维生素（细胞代谢中辅酶的组成成分）、无机离子（K+，Na+等）、碳水化合物（碳源和能量来源）和一些激素等营养物质。 血清：主要是提供一些基础培养基不能提供的生长因子和低分子的营养物质，此外它还有促进细胞的贴壁、中和有害重金属离子等作用。如果只提供基础培养基而不提供血清，绝大多数细胞是无法生长的。血清对于我们实验的重要性就不言而喻了，那么什么样的血清才算是合格的血清呢？ 合格的血清需要通过各种检测，包括无细菌，无真菌，无支原体检测，无病毒污染。血清一般呈现为淡黄色，透明状液体，由于含有大量的蛋白质等成分，会略有黏稠。以全式金公司的TransSerum EQ Fetal Bovine Serum (FS201-02)为例，它通过了牛腹泻病毒、牛副
细胞生物学常用研究方法
Southern杂交: 是体外分析特异DNA序列的方法，操作时先用限制性内切酶将核DNA或线粒体DNA切成DNA片段，经凝胶电泳分离后，转移到醋酸纤维薄膜上，再用探针杂交，通过放射自显影，即可辨认出与探针互补的特殊核苷序列。 将RNA转移到薄膜上，用探针杂交，则称为Northern杂交。 RNAi技术: 是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域。可以利用siRNA或siRNA表达载体快速、经济、简便的以序列特异方式剔除目的基因表达，所以现在已经成为探索基因功能的重要研究手段。 Southern杂交一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量]。 扫描电镜技术：是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与样品表面结构有关，次级电子由探测器收集，信号经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。 细胞显微分光光度计：用来描述薄膜、涂层厚度超过1微米的物件的光学性能的显微技术。 免疫荧光技术：将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位。 电镜超薄切片技术：超薄切片是为电镜观察提供极薄的切片样品的专门技术。用当代较好的超薄切片机，大多数生物材料，如果固定、包埋处理得合适，可以切成50-100微米的超薄切片。 Northern印迹杂交（Northern blot）。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。 放射自显影技术：放射自显影技术是利用放射性同位素的电离辐射对乳胶（含AgBr或AgCl）的感光作用，对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究的一种细胞化学技术。放射自显影技术（radioautography；autoradiography）用于研究标记化合物在机体、组织和细胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。其原理是将放射性同位素（如14C和3H）标记的化合物导入生物体内，经过一段时间后，将标本制成切片或涂片，涂上卤化银乳胶，经一定时间的放射性曝光，组织中的放射性即可使乳胶感光。 核磁共振技术：可以直接研究溶液和活细胞中相对分子质量较小(20，000 道尔顿以下)的蛋白质、核酸以及其它分子的结构，而不损伤细胞。 DNA序列分析：在获得一个基因序列后，需要对其进行生物信息学分析，从中尽量发掘信
医学细胞生物学实验的目的和任务
第一章绪论 （一）名词解释 1.细胞学 2.细胞生物学 3.医学细胞生物学 （二）填空题 1.细胞生物学是从、和三个水平上研究细胞生命活动的科学。 2.细胞是生物体和的基本单位。 3.细胞生物学的发展可分、、和四个阶段。 4.1841 年Remak在观察鸡胚的血细胞时，发现了细胞的分裂；其后Flemming在动物细胞中、Strasburger在植物细胞中发现了分裂。1883 年Van Beneden、1886 年Strasburger分别在动、植物细胞中发现了分裂。 5.1944 年Avery等在微生物的实验中证明了是遗传物质。 6.1953 年和共同提出了DNA 分子的结构模型。 7.1958 年Meselson等利用放射性同位素与梯度离心法，分析了DNA 的复制过程，证明了DNA 的复制是。 8.R.Feulgen于1924年发明了染色法，用于检测细胞核内的。 （三）选择题 1.最早发现细胞并对其命名的学者是 A. R.Hook B. Leeuwenhook C. R.Brown D. W .Flemming E . C.Darvin 2.细胞学说的创始人是 A.Watson and Crick B.Schleiden and Schwann C. W.Flemming D. R.Brown E. R.Hook and Leeuwenhook 3.在1855 年提出“一切细胞只能来自原来的细胞”论点的学者是 A.Remark B.W.Flemming C. R.Virehow D.R.Brown E. Schleiden
4.最早发现细胞直接分裂（无丝分裂）的学者是 A.W.Flemming B.Remark C. R.Virehow D.R.Brown E.Schwann 5.最早在动物细胞中发现间接分裂（有丝分裂）的学者是 A. Strasburger B. W.Flemming C. Remark D. Boveri E. Feulgen 6.最早在动物细胞中发现减数分裂的学者是 A. Van Beneden B. Strasburger C. Flemming D. Remark E. Boveri 7.Van Beneden和Boveri在1883年发现的细胞器是 A.线粒体 B.中心体 C.高尔基体 D.细胞核 E.纺锤体 8.Banda在1897年发现的细胞器是 A.中心体 B.线粒体 C.细胞核 D.高尔基体 E.纺锤体 9.最早提出染色体遗传理论的学者是 A.Schleiden and Schwann B.Watson and Crick C.R.Hook and Leeuwenhook D.Boveri and Sutton E. Van Beneden and Boveri 10.细胞遗传学的创始人是 A.Mendel B.Morgan C. Flemming D. Remark E. Feulgen 11.在1943 年应用高速离心机从活细胞中将细胞核和各种细胞器分离出来, 并研究其生理活性的学者是 A. Feulgen B. Brachet C. Casperson D. Cloude E. Ruska 12.在1924 年首创核染色反应，测定了细胞核内DNA的学者是 A. Cloude B. Brachet C. Feulgen
分子细胞生物学
第一章绪论 1 [1、构成有机体的基本单位。2、代谢与功能的基本单位。3、遗传的基本单位。] 原核：除Cell质膜外，无其他膜相结构；有核糖体。（细菌，支原体） 2、细胞生物 3、细胞器能的细胞器。包括线粒体、高尔基复合体、内质网、溶酶体等。 非膜相结构：细胞质中没有膜包裹的细胞结构。包括微管、微丝、核糖体、 核仁、中间丝等。 4、细胞细胞学说细胞学细胞生物学分子细胞生物学 19世纪自然科学的三大发现之一（进化论、能量守恒及转换定律） 的科学。 华生和克里克对DNA分子双螺旋结构的阐明和“中心法则”的提出以及三联体遗传密码的证明，为细胞分子水平的研究奠定了基础。 透射式电镜：观察细胞内部结构。 5、电子显微镜 扫描式电镜：细胞或组织表面的观察。 第二章细胞的化学组成 1 质，如核酸、蛋白质。 2、蛋白质的一级结构：是蛋白质的基本单位，表示一种蛋白质中氨基酸的数目、种类和排 列顺序。 3、DNA的种类：A-DNA、B-DNA、Z-DNA。 4、RNA按功能分为三种：tRNA（转运核糖核酸）、rRNA（核糖体核糖核酸）、mRNA（信 使核糖核酸）。还有snRNA、hnRNA。 第四章细胞膜及细胞表面 1 夹板”式形态，称之为单位膜。 2、磷脂分为：卵磷脂（PC）、脑磷脂（PE）、鞘磷脂（SM）、磷脂酰肌醇（PI）、磷脂酰丝 氨酸（PS）。 3、细胞膜的分子结构模型：磷脂双分子层模型、“蛋白质-脂质双分子层-蛋白质”三夹板模 型、单位膜模型、流动镶嵌模型、脂筏模型。 4、细胞表面的结构（P55图4-10）：细胞被、细胞膜、细胞溶胶。 细胞表面蛋白质的作用：载体、受体、G蛋白（是一种酶）、受体介导入胞蛋白。 5、细胞通讯的机制（P61）：环腺苷酸（cAMP）信号通路[P61图4-17及最后一段解释）： 腺苷酸环化酶（AC）]、磷脂酰肌醇信号通路。 6、细胞表面的特化结构：微绒毛和内褶、伪足、纤毛和鞭毛。 第五章核糖体与蛋白质的生物合成 1、核糖体是由rRNA和蛋白质组成的核糖体颗粒。核糖体的大、小亚基来源于核仁。
分子细胞生物学思考题(2016))
分子细胞生物学思考题（2016年）: 一、肿瘤细胞的十大生物学特性？ 1.自给自足生长信号，可以自行其是的合成生长分化所需的生长信号，无需依赖外源性信号，神经胶母细胞瘤和恶性肉瘤中的癌细胞就分别获得了合成PDGF（血小板源生长因子）和TGFα（肿瘤生长因子α）的能力 2. 抗生长信号的不敏感，通过基因突变使得生长抑制信号失去活性，从而实现对抑制生长信号不敏感的目的。 3. 抵抗细胞死亡，主要方法是通过基因突变使p53蛋白失活 4. 潜力无限的复制能力；细胞的分裂能力与端粒有关，维持端粒的能力，主要是通过过量表达端粒酶实现的。 5. 持续的血管生成；肿瘤细胞中促进血管形成的信号分子如VEGF（血管内皮生长因子)和FGF（成纤维细胞生长因子）的表达水平都远高于相应的正常组织，而一些起抑制作用的信号分子如thrombospondin-1或β-interferon的表达则下降。 6. 组织浸润和转移；7避免免疫摧毁；8促进肿瘤的炎症炎症反应可为肿瘤微环境提供各种生物激活分子，例如包括生长因子（可维持癌细胞的增殖信号）、生存因子（可抑制细胞死亡）、促血管生成因子和细胞外基质修饰酶（可利于血管生长，癌细胞浸润和转移）、以及其它诱导信号（可激活EMT和癌细胞的其它一些特征）。此外，炎性细胞还会分泌一些化学物质，其中ROS可以加快临近癌细胞的基因突变9基因组不稳定和突变；，加速它们的恶化过程。10 细胞能量代谢异常即便在有氧气的条件下，癌细胞也会通过调控，使其能量主要来源于无氧糖酵解的代谢方式，这被称为“有氧糖酵解”。 二、简述DNA损伤检控点信号传导的一般途径，根据周期时相分为哪几类？并利用DNA 损伤检控点原理说明肿瘤发生的分子机制。 转导途径包括感受器（如ATM、A TR等）、转导因子（如Chk1、Chk2等）和效应器（如Cdc25A、Cdc25C、p21等）。感受器负责检测DNA结构的异常并启动检控点信号，转导因子进一步将信号转导给相应的效应器，效应器则引发这个路径上的生物学效应，引起细胞周期阻滞和对损伤DNA的有效修复。分三类：（1）G1期DNA损伤检控点：在进入下一个有丝分裂细胞周期之前将带有损伤的细胞阻滞在限制点；（2）S期DNA损伤检控点：当细胞内出现损伤时能够使DNA合成速度减慢或停止；（3）G2期DNA损伤检控点：功能是阻止带有DNA损伤的细胞进入有丝分裂期，阻滞在M期之前，为损伤修复提供足够的时间。机制：其主要在G1期和G2期发挥作用，G1期DNA损伤检测点关键分子有p53、Rb等，当DNA发生损伤严重时，p53等缺失细胞会停止DNA损伤修复，而细胞周期还进行，或者CdclinD上调加速细胞周期，使细胞逃避检测点，这都导致肿瘤发生；G2期检测途径主要是抑制Cdc2活性使细胞阻滞在G2期，且p53是其阻滞关键，p53及14-3-3δ蛋白缺失引起G2期检测点缺陷使细胞过早进入有丝分裂而导致肿瘤发生。 三、请举例说明信号通路与肿瘤细胞生物学特性的关系？ 当胞外的IL-6和IL-6Rα相互作用,引起gp130/IL-6Rα蛋白复合物形成,继而被激活, gp130通过Janus激酶(Januskinase, JAK)的磷酸化激活STAT转录因子, 特别是STAT3和SHP2。磷酸化的STAT3 形成二聚体,转移至细胞核中,激活调控基因的转录活性,而STAT3的过度激活可表现出促进肿瘤生长的作用,它的转录活性是调节癌病变的先决条件,同时, STAT3是gp130介导的细胞的存活和G1期到S期细胞转录信号的一个重要分子。c-Myc和Pim是STAT3的靶基因,它们可以补偿STAT3在细胞存活和细胞周期转变的作用。SHP2与Ras/MAP(mitogen-activatedprotein,细胞因子的受体有丝分裂原激活蛋白)激酶信号通路密切相关,并且对有丝分裂原激活起着重要的作用。另外,细胞周期蛋白D1(CyclinD1)是STAT3下游信号途径中的一个重要的调控基因,它参与细胞周期的调控,其异常表达可加速细胞周期循环,导致细胞持续异常增殖。如在大肠炎导致的肿瘤中,由STAT3介导的IL-6和IL-11依赖的IEC可以促进G1和G2/M周期转换,促进细胞的增殖,以一个自发的机制同时诱发肿瘤和炎症。此外NF-κB可诱导IL-6和尿激酶纤溶酶原激活物调控其周围的成纤维母细胞基质产生VEGF和细胞外基质降解酶,促进肿瘤细胞的浸润和转移。
细胞生物学实验
实验室规则和要求 一般规定 1.上课第一天请先熟悉环境，牢记“安全”是进行任何实验最重要的事项。 2.在实验室内请穿著实验衣（最好长及膝盖下），避免穿著凉鞋、拖鞋（脚 趾不要裸露）。留有长发者，需以橡皮圈束于后，以防止引火危险或污染实验。 3.在实验室内禁止吸烟、吃东西、饮食、化妆、嚼口香糖、嬉戏奔跑，食 物饮料勿存放于实验室的冰箱中，实验桌上勿堆放书包、书籍、衣服外 套及杂物等。 4.所有实验仪器、耗材、药品等均属实验室所有，不得携出实验室外。每 组分配之仪器、耗材请在课程开始前确定清点与保管，课程结束后如数 清点缴回。公用仪器请善加爱惜使用。实验前后，请把工作区域清理擦 拭，并随时保持环境清洁。 5.实验前详阅实验内容，了解实验细节的原理及操作，注意上课所告知的 注意事项。实验进行中有任何状况或疑问，随时发问，切勿私自变更实 验程序。打翻任何药品试剂及器皿时，请随即清理。实验后，适切记下 自己的结果，严禁抄袭，确实关闭不用之电源、水、酒精灯及瓦斯等。 6.身体不适、睡眠不足、精神不济或注意力无法集中，请立即停止实验。 实验时间若延长，请注意时间的管制及自身的安全，不可自行逗留实验 室。 7.实验完毕，请清理实验室、倒垃圾、灭菌、关闭灯光及冷气，离开实验 室前记得洗手。 8.任何意外事件应立即报告教师或实验室管理人员，并应熟知相关之应变 措施。
药品 1.使用任何药品，请先看清楚标示说明、注意事项，翻阅物质安全资料， 查明是否对人体造成伤害，使用完毕请放回原位。 2.新配制的试剂请清楚注明内容物、浓度、注意事项及配制日期，为避免 污染，勿将未用完的药剂倒回容器内。 3.挥发性、腐蚀性、有毒溶剂（如甲醇、丙酮、醋酸、氯仿、盐酸、硫酸、 -巯基乙醇、甲醛、酚等）要在排烟柜中戴手套量取配制，取用完应随即盖好盖子，若不小心打翻试剂，马上处理。 4.有毒、致癌药剂例如丙稀酰胺（神经毒）、溴化乙啶（突变剂）、SDS（粉 尘）请戴手套及口罩取用，并勿到处污染，脱下手套后，养成洗手的好 习惯。 5.使用后的实验试剂和材料，应放在专用的收集桶内。固体培养基、琼脂 糖或有毒物品不得倒入水槽或下水道中。 6.使用刻度吸管取物时，切勿用嘴吸取，请用自动吸管或吸耳球。 仪器 1.使用仪器前先了解其性能、配备及正确操作方法，零件及附件严禁拆卸， 勿私自调整，并注意插座电压（110V或220V）之类别。 2.使用离心机时，离心管要两两对称、重量平衡，离心机未停下不得打开 盖子。冷冻离心机于开机状态时，务必盖紧盖子，以保持离心槽之低温并避免结霜。 3.电源供应器有高电压，切勿触摸电极或电泳槽内溶液，手湿切勿开启电 源。
医学细胞生物学实验课教学大纲.
医学细胞生物学实验课教学大纲 (供临床医学专业七年制使用) 汕头大学医学院细胞生物学与遗传学教研室 2007年6月
前言 细胞生物学是生命科学中最重要的基础学科和前沿学科，细胞生物学课程是培养医学生基础理论知识、实践能力、创新能力的关键环节。优秀的细胞生物学课程高等医学院校课程体系建设的重要内容。结合汕头大学医学院人才培养目标，我们将锻造理论与实践、临床与基础重组渗透，能力培养贯穿始终的、特色鲜明的医学细胞生物学课程体系作为本课程建设的目标，力争通过本课程的学习使临床医学专业学生掌握细胞生物学的基本原理、研究方法，掌握相关疾病的分子机制，提高科学素养，为其今后的终身学习、临床实践、科学研究奠定良好基础。 实验课教学是理论教学的重要补充，是人才培养的关键环节。在实验教学上我们以科研与教学相结合、科研应用于教学为指导思想，坚持实验内容的先进性和综合性，创造条件改善和提高学生的动手能力，为培养学生基本科研技能奠定基础。力争通过实验课学习使学生掌握医学细胞生物学的基本理论和实验技能，提高学生独立分析问题和解决问题的能力，培养学生学习的主动性，使其具备一定的科研思维和科研能力，提高科学素养，为其今后的终身学习、临床实践和科学研究奠定良好基础。 七年制细胞生物学实验课程包括基础性实验-综合设计性实验-科研活动三个层次的实验课课程体系。通过该课程体系对七年制学生实验能力进行全程培养。本教学大纲规定基础性实验和综合设计性性实验的内容。科研活动的内容和要求由学生和教师讨论后自行确定。 汕头大学医学院细胞生物学与遗传学教研室 2007年5月
七年制医学细胞生物学实验课内容 实验项目名称学时层次教学手段 实验一数码互动系统使用及细胞 基本形态观察4 基础实验 数码互动系统讲授 示教讨论 实验二细胞生理活动观察 4 基础实验数码互动系统多媒体演示 讲授、示教讨论 实验三细胞染色体标本制备 与观察4 基础实验 数码互动系统 讲授、示教讨论 实验四细胞的原代与传代培养 6 基础实验数码互动系统多媒体演示 讲授、示教讨论 实验五细胞组分的分离与鉴定>12 综合实验讨论多媒体 实验六细胞骨架对细胞、细胞器的影响>12 综合实验 讨论 多媒体 实验七药物对细胞增殖与凋亡 的影响>12 综合实验 讨论 多媒体 实验八定位信号与蛋白亚细胞 定位>12 综合实验 讨论 多媒体 大学生科研活动项目科研活动综合应用多种教学手段
(完整版)第三章细胞生物学研究方法总结
第三章 细胞生物学研究方法 第一节细胞形态结构的观察方法 分辨率： 肉眼0.2mm 光镜0.2μm 电镜0.2nm 一、光学显微镜技术 （light microscopy ） （一）普通复式光学显微镜技术 a ． 光学放大系统：目镜和物镜 光镜 照明系统：光源、折光镜和聚光镜，有时另加各种滤光片 组成 机械和支架系统 b ．分辨率D ：分开两个质点间的最小距离。 0．61 λ 其中： λ为光源波长 D ＝ α为物镜镜口张角 N ·sinα/2 N 为介质折射率 c.普通光镜样品制备： 固定（如甲醛）、包埋（如石蜡）、切片（约5μm）、染色 （二）荧光显微镜技术（fluorescence microscopy 光镜水平对特异蛋白定性定位） 1．FM 包括免疫荧光技术和荧光素直接标记技术 2．不同荧光素的激发光波长范围不同，所以同一样品可以同时用两种以上荧光 素标记。荧光显微镜中只有激发荧光可以成像。 （三）激光共焦点扫描显微镜技术（laser scanning confocal microscopy ） 1．特点：瞬间只用很小一部分光照明，保证只有来自焦平面的光成像，成像清晰 分辨率比普通荧光显微镜提高1.4－1.7倍。 通过改变焦平面位置可以观察较厚样品的内部构造，进行三维重构。 2． 共焦点是指物镜和聚光镜同时聚焦到同一小点。 （四）相差和微分干涉显微镜技术 1．相差显微镜（phase-contrast microscopy ） 光线通过不同密度物质产生相位差，相差显微镜将其变成振幅差。它与普通光镜 的不同是其物镜后有一块“相差板”，夸大了不同密度造成的相位差。 2．微分干涉显微镜（differential －interference microscopy ）——用的是平面偏振光 光经棱镜折射成两束，通过样品相邻部位，再经棱镜汇合，使样品厚度上的微 小 差别转化为明暗区别，使样品产生很强的立体感。 二、电子显微镜技术（electron microscope ） （一）电子显微镜基本知识 1．与光镜的基本区别：电子束作光源、电磁透镜聚焦、镜筒高真空、荧光屏等成像 2．分辨本领与有效放大倍数： 分辨率0.2nm ，比肉眼放大有效放大倍 数 分辨本领指电镜处于最佳状态下的分辨率。 实际情况中，分辨率受样品限制。 3．电子显微镜 电子束照明系统：电子枪、聚光镜 基本构造 成像系统：物镜、中间镜、投影镜等 真空系统：用两级真空泵不断抽气 记录系统：荧光屏或感光胶片成像 （二）主要电镜制样技术介绍
医学分子细胞生物学
1．“医学分子细胞生物学”共六次课，你对其中的哪些内容最感兴趣？为什么？ 答：细胞周期及调控。 理由：细胞周期的准确调控对生物的生存、繁殖、发育和遗传均是十分重要的。对简单生物而言，调控细胞周期主要是为了适应自然环境，以便根据环境状况调节繁殖速度，以保证物种的繁衍。复杂生物的细胞则需要面对来自自然环境和其他细胞、组织的信号，并做出正确的应答，以保证组织、器官和个体的形成、省长以及创伤愈合等过程能正常进行，以及创伤愈合等过程能正常进行，因而需要更为精细的细胞周期调控机制。 这些都是与了解生物整个生长过程必不可少的知识，我是一个热爱自然的人，所以，我对这方面的知识最感兴趣。 2．你希望能听到哪些领域或主题的深入介绍？为什么？ 答：转基因食品。 理由：含有转基因生物成份的食品称为转基因食品。目前为止，科学家不能完全预知对生物进行转基因改造，有可能导致何种突变而对环境和人造成危害。虽然实验非常成熟，但其对人类可能造成的影响，或许要在未来几代人后才显现。然而，中国作为多种生物的起源地和生物多样性中心，蕴藏了大量的物种资源。一旦受到转基因生物的基因污染，不仅是对世界的生物多样性的环境，还会影响到科学家运用物种和基因多样性资源解决粮食安全问题的能力。转基因技术将外来基因，植入人类的日常食物，例如大豆、玉米甚至大米中。长期进食转基因食品，对人类健康有何影响仍是未知之数。在国际上对转基因食品安全还有争议的时候，部分转基因食品已经在消费者不知情的情况下被端上了饭桌，严重伤害了消费者对转基因食品的知情权和选择权。显然目前发展生态农业与有机农业、保护农业遗传资源、推动农业走可持续道路是有待我们解决的重大问题。所以，我们应该多学习和研究这方面的课题，避免对人类、对自然界造成不必要的伤害。 3.请给我们一些建议？ 答：1.几乎一次课一个老师，老师换得过于频繁，让人感觉什么都讲了点，可是知识没有了衔接性，又觉得什么都没有学到。所以，建议一个老师来完成所有的课时。 2.内容太深奥了，全校性选修课是每个专业每个年级都可以选，而我们非医学专业的学生（医事法律专业）去听建立在一定理论基础上的专业性很强的课显然难以消化。所以，希望老师讲一些基础理论或者是在教务处网站的选课系统中注明建议医学专业的学生选。 3.多举一些生活实例来帮助我们消化理解知识，并且可以多一些视频或者图片让教学更形象具体。 4.就医学细胞生物学或医学的相互渗透和影响，你预期哪些方面会有长足的发展，怎样的发展，并给我们的生活带来变化？ 答：发酵工程。现代发酵技术给我们带来了一些以前不曾存在的新型产品，比如说一种被称作单细胞蛋白的新型动物饲料，就是利用发酵工程以农作物秸杆、造纸废液等废弃物培养藻类、放线菌、细菌、酵母等单细胞生物而获得的高产产品，这不仅含有高蛋白，而且含有丰富的维生素和脂类等，既是家禽家畜的良好饲料，又可用来生产高营养的人造蛋白食品。在食品、药品、原材料等方面应该可以发展，通过发酵可以生产抗生素以及氨基酸，还可以获得一些药物的中间原料，例如癌症和心血管疾病。所以，我相信，发酵工程以后会在各个领域给我们的生活带来意想不到的利益。
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍 (2011-04-23 11:01:29)转载▼ 标签：分子生物学细胞生物学常用实用技术基本实验室技术生物学实验教育 常用的分子生物学基本技术 核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针（probe）,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。 固相杂交 固相杂交（solid-phase hybridization）是将变性的DNA固定于固体基质（硝酸纤维素膜或尼龙滤膜）上，再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。 斑步杂交（dot hybridization） 是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后加入过量的标记好的DNA或RNA探针进行杂交。该法的特点是操作简单，事先不用限制性内切酶消化或凝胶电永分离核酸样品，可在同一张膜上同时进行多个样品的检测；根据斑点杂并的结果，可以推算出杂交阳性的拷贝数。该法的缺点是不能鉴定所测基因的相对分子质量，而且特异性较差，有一定比例的假阳性。 印迹杂交（blotting hybridization） Southern印迹杂交：凝胶电离经限制性内切酶消化的DNA片段，将凝胶上的DNA 变性并在原位将单链DNA片段转移至硝基纤维素膜或其他固相支持物上，经干烤固定，再与相对应结构的已标记的探针进行那时交反应，用放射性自显影或酶反应显
分子细胞生物学作业
分子细胞生物学 1．简述表达调控的基本概念和真核基因表达调控的特点（10分）。 2．简述转录后水平的基因沉默现象、基因表达调控的新途径及其应用现状（10分）。3．请你简述细胞分化，干细胞发展现状，如何理解认识现状与应用关系（10分）？ 4．请叙述细胞周期内容与细胞周期调控实验的基本原理，请你设计一种有关细胞周期调控的实验（10分）。 5．细胞信号理论与实践的应用现状，从你所理解的几种细胞信号通路，谈谈验证实验设计及其依据原理（10分）。 6．由基因选择性表达结果与细胞分化关系，生物的表观遗传的关系（10分）。 7．细胞凋亡及其信号转导关系说明细胞凋亡须具备必要的基本元件，请举一列叙述说明（10分）。 8．如何理解真核细胞基因表达调控的复杂性（10分）？ 9．根据你所从事的研究方向，探讨与分子细胞生物学的关系及应用（20分） 1.简述表达调控的基本概念和真核基因表达调控的特点（10分）。 答：基因表达调控：指位于基因组内的基因如何被表达成为有功能的蛋白质(或RNA)，在什么组织中表达，什么时候表达，表达多少等等。在内、外环境因子作用下，基因表达在多层次受多种因子调控。基因表达调控的异常是造成突变和疾患的重要原因。 真核基因表达调控的特点： （1）转录水平的调控。Britten和Davidson于1969年提出的真核生物单拷贝基因转录调控的模型——Britten—Davidson模型。该模型认为在整合基因的5’端连接着一段具有高度专一性的DNA序列，称之为传感基因。在传感基因上有该基因编码的传感蛋白。外来信号分子和传感蛋白结合相互作用形成复合物。该复合物作用于和它相邻的综合基因组，亦称受体基因，而转录产生mRNA，后者翻译成激活蛋白。真核生物基因组中等重复DNA序列和单
细胞生物学实验
细胞培养基本理论 一细胞培养概述 细胞培养（cell culture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。 群体培养（mass culture）将大量细胞置于培养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单层细胞或单细胞悬液。 克隆培养（clone culture）即将少数的细胞加入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一个细胞形成一个集落，称为克隆。 组织培养（tissue culture）指把活体的组织取出，分成小块，直接置于培养瓶底或通过胶原纤维血浆支持物的培养瓶底来进行培养。 特点：1.，组织不失散，细胞保持原有的组织关系。2，形成生长(cut growth)或形成由扁薄细胞构成的单层细胞培养物。3，在体外生长时，细胞间呈相互依存、互相影响的关系。 器官培养（organ culture）将活体中器官或器官一部分取出，在体外生长、生存，并使其保持器官原有的结构和功能特征的培养。 特点：1，培养的器官在合适的条件下能生长和分化，存活数周或1 年。2，观察受限，只能用组织切片的方法观察或用透射电镜、扫描电镜观察。 细胞培养优点：.1．活细胞：同时、大量、均一性、重复性；2．可控制：各种物理、化学、生物等因素可调控；3．研究方法多样：倒置、荧光、电子、激光共焦显微镜、流式细胞术、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记；4．应用广：不同物种、年龄、组织，正常或异常缺点：人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同；当细胞被置于体外培养后， 生活在缺乏动态平衡的环境中，时间久了，必然发生变化。 三细胞的形态和类型由不同生长方式造成的差异 呈悬浮生长时，因生长在液体环境中，胞内渗透压高于周围液体环境，因此胞体基本呈圆形。呈贴附于支持物上生长的细胞，开始为圆形，很快过渡成扁平形，并逐渐恢复至原先的细胞形态. 细胞来源：成纤维型细胞；上皮型细胞；其它，不定型 细胞按生长方式：贴壁型细胞（Monolayer cells）；悬浮型细胞（Suspension cells）绝大多数有机体细胞属贴壁型细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长。 按细胞形态(贴壁细胞）：成纤维型细胞；上皮型细胞；其它，不定型 贴壁型生长细胞或锚着依存性细胞 处于体外培养状态下的贴附生长型细胞在形态上表现单一而失去了在体内原有的某些特征。形态各异反映其胚层起源。如来源于内外胚层的细胞多呈上皮型；来自中胚层的则易呈成纤维细胞型。分为成纤维型细胞；皮型细胞；游走型细胞；多形型细胞 贴壁型细胞形态比较 成纤维型细胞：梭形或不规则三角形；中央有卵圆形核；胞质向外伸出长短不同的突起；中胚层间质起源 上皮型细胞：扁平不规则多角形；细胞中央有圆形核；紧密相连单层膜样生长；内、外胚层细胞如皮肤、表皮衍生物、消化管上皮等 游走型细胞：散在生长，一般不连成片；细胞质经常伸出伪足或突起；活跃的游走或变形运动；羊水细胞培养的早期 多形细胞型：难以确定规律和稳定的形态；如神经组织的细胞等
新乡医学院医学细胞生物学简答题
供基础医学院临床17、20班参考使用 医学细胞生物学简答题集锦 第一章绪论 1.简述细胞生物学形成与发展经历的阶段 （1）细胞的发现与细胞学说的建立：R.Hook最早发现细胞并命名为cell，施莱登和施旺建立细胞学说。 (2)细胞学的经典时期：细胞学说的建立掀起了对多种细胞广泛的观察和描述的热潮，主要的细胞器和细胞分裂活动相继被发现。 (3)实验细胞学时期：人们广泛的应用实验的手段研究细胞的特性、形态结构和功能。 (4)分子生物学的兴起和细胞生物学的诞生：各个学科相互渗透，人们对细胞结构与功能的研究达到了新的高度。 第二章细胞的统一性与多样性 1.细胞膜的流动性有什么特点，膜脂有哪些运动方式，影响膜脂流动性的因素有哪些？ （1）膜脂既具有分子排列的有序性，又有液体的流动性；温度对膜的流动性有明显的影响，温度过低，膜脂转变为晶态，膜脂分子运动受到影响，温度升高，膜恢复到液晶态，此过程称为相变。（2）膜脂的运动方式有：侧向扩散、旋转运动、摆动运动、翻转运动，其中翻转运动很少发生，侧向扩散是主要运动方式。（3）影响流动性的因素：脂肪酸链的长短和饱和程度，胆固醇的双重调节作用，卵磷脂/鞘磷脂比值越大膜脂流动性越大，膜蛋白与周围脂质分子作用也会降低膜流动性。此为环境因素（如温度）也会影响膜的流动性，温度在一定范围内升高，流动性增强。2.简述膜蛋白的种类及其各自特点，并叙述膜的不对称性有哪些体现 (1)膜蛋白分为膜外在蛋白、膜内在蛋白、脂锚定蛋白。膜外在蛋白属于水溶性蛋白，分布在膜的两侧，与膜的结合松散，一般占20%-30%； 膜内在蛋白属于双亲性分子，嵌入、穿膜，是膜功能的 主要承担者，与膜结合紧密，占70%-80%。 脂锚定蛋白通过共价键与脂分子结合，分布在膜两侧， 含量较低。 (2)膜的内外两侧结构和功能有很大差异，称为膜的不对称 性，这种不对称决定了膜功能的方向性。 膜脂：磷脂和胆固醇数目分布不均匀，糖脂仅分布于脂 双层的非胞质面。膜蛋白：各种膜蛋白在质膜中都有一定 的位置。膜糖类：糖链只分布于质膜外表面。 3.比较说明单位膜模型与液态镶嵌模型有哪些不同点 单位膜是细胞膜和胞内膜等生物膜在电镜下呈现的三夹 板式结构，内外两层为电子密度较高的暗层，中间是电子 密度低的明层，“两暗夹一明”的结构叫做单位膜，单位膜 仅能部分反映生物膜的结构特点。 流动镶嵌模型强调膜的流动性和膜蛋白分布的不对称性 以及蛋白质与脂双层的镶嵌关系。认为膜蛋白和膜脂均能 产生侧向运动，膜蛋白有的在膜表面、有的嵌入或横跨脂 双分子层。该模型能解释膜的多种性质，但不能说明具有 流动性的细胞膜在变化过程中如何维持膜的相对完整。 第四章细胞连接、细胞黏附和细胞外基质 1.什么是细胞连接，细胞连接有哪些类型 细胞表面可与其它细胞或细胞外基质结合的特化区称为 细胞连接。分为紧密连接、黏着链接和通讯连接。 紧密连接的特点是细胞膜之间连接紧密无空隙，一般位 于上皮细胞间。 黏着链接中，与肌动蛋白纤维相关的有黏着带:分布于上 皮细胞，黏着斑:分布于上皮细胞基部；与中间丝有关的有 桥粒：分布于心肌和上皮，半桥粒：分布于上皮细胞基底 部。 通讯连接分为缝隙连接和突触，缝隙连接几乎存在于所 有类型的细胞之间，突触仅存在于可兴奋细胞之间用来传 到兴奋。 2.什么是细胞外基质，叙述细胞外基质的组成 细胞外基质是指由细胞分泌到细胞外间充质中的蛋白 质和多糖类大分子所构成的网络结构。 （1）纤维成分：如胶原、弹性蛋白。胶原是细胞外基质最 基本成分之一，是动物体内含量最丰富的蛋白，刚性及抗 张力强度最大。 （2）糖胺聚糖和蛋白聚糖：透明质酸是唯一不发生硫酸化 的糖胺聚糖，是增殖细胞和迁移细胞的细胞外基质的主要 成分，透明质酸向外膨胀产生压力，使结缔组织具有抗压 的能力；蛋白聚糖见于所有结缔组织和细胞外基质及许多 细胞的表面，可与多种生长因子结合，可视为细胞外的激 素富集与储存库，有利于激素分子进一步与细胞表面受体 结合，完成信号转导。 (3)层粘连蛋白和纤连蛋白：层粘连蛋白是个体细胞外基质 中出现最早的蛋白，对基膜的组装起到关键作用。纤连蛋 白主要介导细胞黏着，也能促进巨噬细胞和其它免疫细胞 迁移到受损部位。 3.叙述黏着带和黏着斑的区别 粘着带是细胞与细胞间的粘着连接,而粘着斑是细胞 与细胞外基质相连。 ①参与粘着带连接的膜整合蛋白是钙粘着蛋白,而参 与粘着斑连接的是整联蛋白,即细胞外基质受体蛋白; ②粘着带连接实际上是两个相邻细胞膜上的钙粘着 蛋白与钙粘着蛋白的连接,而粘着斑连接是整联蛋白与细 胞外基质中的粘连蛋白的连接,因整联蛋白是纤粘连蛋白 的受体，所以粘着斑连接是通过受体与配体的结合; 第五章小分子物质的跨膜运输 1. 以Na+-K+泵为例说明细胞膜的主动转运过程 Na+-K+泵又称Na+-K+ATP酶，由α和β两个亚基组成，均 为穿膜蛋白。在α亚基的外侧（朝向胞外）有两个K+的结 合位点，内测有3个Na+的结合位点和一个催化ATP水解 的位点。 工作中，细胞内的Na+与大亚基上的Na+位点相结合，同 时ATP分子被催化水解，大亚基改变空间构象，使3个Na+ 排除胞外，同时K+与α亚基外侧面相应位点结合，α亚基 空间结构恢复原状，将2个K+输入细胞，完成循环，每次 循环消耗一个ATP分子，3个Na+出胞，2个K+入胞。 第六章胞质溶胶、蛋白酶体和核糖体 1.核糖体有几种，合成的蛋白质在功能上有什么不同 核糖体分为游离核糖体和附着核糖体。 分布于细胞质基质中的核糖体是游离核糖体，主要合成 细胞本身所需的结构蛋白。附着在内质网膜和核膜表面的 是附着核糖体，主要合成外输性蛋白质。 第七章内膜系统与囊泡运输 1.内质网有哪些类型，在细胞中的作用是什么 内质网主要由脂类和蛋白质组成，是单层膜结构，分为 粗面内质网和光面内质网。 粗面内质网主要呈囊状，表面有核糖体附着，主要功能 是合成、加工修饰、分选转运一些蛋白质，提供核糖体附 着的支架。 光面内质网不合成蛋白质，是脂类合成和转运的场所， 并参与糖原的代谢，是细胞解毒的场所（肝细胞），SER特 化成肌质网可作为肌细胞储存钙离子的场所。 2.叙述高尔基体的组成，及主要功能 高尔基体是一种膜性囊泡复合体，由扁平囊泡、小囊泡、 大囊泡组成。 高尔基体是细胞内蛋白质运输分泌的中转站，是胞内物 质加工合成的主要场所，参与糖蛋白的加工合成、蛋白质 的水解加工、胞内蛋白质分选和膜泡定向运输的枢纽。 3.简述分泌蛋白的运输过程 ①核糖体阶段：合成并转运分泌蛋白；②内质网阶段： 运输并粗加工分泌蛋白；③细胞质基质运输阶段：分泌蛋 白以小泡的形式脱离粗面内质网并移向高尔基复合体与其 结合；④高尔基体加工修饰：分泌蛋白进一步在高尔基复 合体内进行加工，并以囊泡的形式释放到细胞质基质；⑤ 储存与释放：释放时，囊泡浓缩发育为分泌泡，与质膜融 合，释放到体外。 4.以肝细胞吸收LDL为例，说明受体介导的胞吞作用的过 程 肝细胞需要利用胆固醇合成生物膜时，细胞合成LDL受 体并分散嵌入细胞膜，当LDL与受体结合后，细胞膜向内 凹陷形成有被小窝。LDL受体集中在有被小窝内不断内陷， 进入细胞，脱离细胞膜形成有被小泡。 有被小泡脱去网格蛋白被摸与其它囊泡融合形成内体， 内体内LDL与受体分离，受体返回细胞膜，LDL被溶酶体 酶降解。如果游离胆固醇过多，LDL受体和胆固醇就会暂 停合成，这是一个反馈调节的过程。 5.叙述信号肽假说的内容 新合成的蛋白质分子N端含有一段信号肽，该信号肽一 经合成可被胞质中的信号识别颗粒（SRP）识别并结合，通 过信号肽的疏水性引导新生肽跨脂双分子层进入内质网腔 或直接整合在内质网膜中。 信号肽具有决定蛋白质在胞内去向或定位的作用。 第八章线粒体 1. 为什么说线粒体是一个半自主性的细胞器? 线粒体有自己的DNA(即mtDNA)，存在线粒体核糖体， 通过自己的蛋白质合成系统可以进行mtDNA的复制转录 翻译。 然而mtDNA的信息量少，只能合成近10%的线粒体蛋白， 绝大多数线粒体蛋白质仍依靠核基因组进行编码，再转运 进线粒体中；构成线粒体的蛋白质合成系统的许多酶仍依 靠核基因编码合成。 故线粒体是一种半自主性细胞器。 2.线粒体的半自主性有哪些体现 线粒体有自己的mtDNA，是动物细胞质中唯一含有DNA 的细胞器。有自己的核糖体和蛋白质合成系统，供mtDNA 复制转录翻译。遗传密码相较其它细胞有差异。有自己的 物质转运系统，指导线粒体蛋白运输进线粒体，不与细胞 质交换DNA和RNA，也不输出蛋白质。 3.画图显示线粒体的结构，并表明各部分名称（答案略） 4.说明线粒体基粒的结构组成和功能 基粒又称ATP酶复合体，由头部、柄部、基部组成； 头部又称偶联因子F1，具有酶的活性，能催化ADP磷酸 化生成ATP；柄部是一种对寡霉素敏感的蛋白质，能抑制 ATP的合成；基部又称偶联因子F0，起到连接F1与内膜的 作用。 5.叙述化学渗透假说的内容 线粒体内膜是完整的、封闭的，内膜中的电子传递链是 一个主动转移氢离子的体系，电子传递过程像一个质子泵， 将氢离子从内膜基质泵至膜间隙，由于膜对氢离子不通透， 形成膜两侧的浓度差，质子顺浓度梯度回流并释放出能量， 驱动结合在内膜上的ATP合酶，催化ADP磷酸化合成ATP。 第九章细胞骨架 1.何谓细胞骨架?细胞骨架有哪些类型和功能? 细胞骨架是指真核细胞质中的蛋白质纤维网架体系，细