纯化水微生物限度方法适应性试验方案

纯化水微生物限度方法适应性试验方案
纯化水微生物限度方法适应性试验方案

XXXXXXXXX有限公司

纯化水微生物限度检查方法适用性试验方案

文件编号:YZF-QC-001-01

起草人:(QC)年月日审核人:(QA)年月日批准人:(质量负责人)年月日

目录

1.验证目的

2.验证原理

3.验证人员

4.相关文件

5.验证内容

6.验证周期

7.验证综合结论

1. 验证目的

建立微生物限度检查方法适用性试验验证,通过验证确认检测所采用的方法

适合于本公司所用纯化水的微生物限度的测定。

2. 验证原理

通过试验数据结果,比较实验组中试验菌的恢复生长结果来评价整个验证方

法的准确性、有效性和重现性。

3. 验证人员

职位姓名负责内容

QC检验员负责验证方案的起草和实施,并对所测数据准确性负责。QC负责人负责验证方案的审核及按照规定的取样计划对标准检验操作

程序的准确执行,负责组织实施。

QA负责人负责验证实施过程中的监督检查,取样,确保结果的可靠性。审核人负责验证方案及报告的审核和批准。

4. 相关文件

《中国药典》2015版四部《通则1105、通则1106》

5. 验证内容

通过验证以确认所采用的方法适合于纯化水需氧菌总数的测定。根据样品特

性制订检验方法和检验条件,按制定的方法进行试验,根据验证结果判断是否符

合验证标准。若符合,就按验证的方法和条件进行药品的微生物限度检查;若不

符合,重新建立制订检验方法和检验条件,再进行验证,直至验证结果符合设立

的验证标准。

5.1微生物计数法验证

当建立产品的微生物限度检查时,应进行需氧菌总数计数的验证,以确认所

采用的方法适合于产品的需氧菌总数的测定。验证试验可与供试品的需氧菌总数

计数同时进行。

5.1.1验证用菌种

枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501(第一代)

金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003(第一代)

铜绿假单胞菌CMCC(B)44102(第一代)

白色念珠菌CMCC(F)98001(第一代)

黑曲霉CMCC(F)98003(第一代)

5.1.2验证依据:中国药典2015版四部

5.1.3验证步骤

5.1.3.1菌液制备

5.1.3.1.1分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物

至胰酪大豆胨液体培养基中,经30~35℃培养18~24小时后,分别取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的肉汤培养物0.9%无菌氯化钠溶液1ml+9ml 0.9%无菌氯化钠溶液,10倍稀释至10-6~10-7,细菌数为不大于100cuf/ml,做活菌计数备用。

5.1.3.1.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中,经20~25℃

培养2到3天后,取1~2环白色念珠菌斜面培养物加入9ml 0.9%无菌氯化钠溶液,10倍稀释至10-4~10-7,菌液为不大于100 cfu/ml,做活菌计数备用。

5.1.3.1.3接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中,经20~25℃培养

5~7天后,取黑曲霉斜面培养物,加3~5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液将孢子洗脱,吸出孢子悬液1ml+9ml 0.9%无菌氯化钠溶液,10倍稀释至10-4,菌液为不大于100cuf/ml,做活菌计数备用。

5.1.3.2 阴性对照

为确认试验条件是否符合要求,应进行阴性对照试验。

5.1.3.3 计数方法适用性试验

5.1.3.3.1供试液制备

取供试品10ml,加45℃PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,振摇,放置45℃水浴保温使其完全溶解,摇匀,作为1:10供试液,备用。

5.1.3.3.2试验组:

取1:10的供试液加入试验菌,使1ml供试液中含菌量不大于100cfu。

经薄膜过滤处理,取出滤膜,菌面朝上贴于琼脂培养基平板上,每株试验菌平行制备2个平皿,按平皿法测定其菌数。

5.1.3.3.3菌液组:

取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液同试验组操作。测定所加的试验菌数。

5.1.3.3.4供试品对照组:

取制备好的供试液。以稀释液替代菌液同试验组操作。按菌落计数方法测定供试品本底菌数。

5.1.3.3.4阴性对照组:

取0.9%无菌氯化钠溶液,空白对照。

5.1.4结果

至少应进行3次独立试验。若试验组的菌回收率均0.5~2,则照该供试液制备方法和计数法测定供试品的需氧菌总数;若任一次试验中试验组的菌回收率不在范

围内,应采用自然沉降法、培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性,并重新进行方法验证,使试验组菌回收率在规定范围内。

5.1.4.1试验组的菌回收率=[(试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数)/菌液组平均菌落数]

5.1.4.2连续3批验证的菌落计数结果

5.1.4.2.1取样口:总出水口

验证试验结果(常规法)单位(cuf/ml)

技术方法试验菌株菌浓度

(ml)

试验次

菌液

供试

对照

实验

回收率

实际

回收率

理论

需氧菌总数计数大肠埃

希菌

10-6 1 0.5~2

10-6 2 0.5~2

10-6 3 0.5~2金黄色

葡萄球

10-6 1 0.5~2

10-6 2 0.5~2

10-6 3 0.5~2枯草芽

孢杆菌

10-6 1 0.5~2

10-6 2 0.5~2

10-6 3 0.5~2白色念

珠菌

10-5 1 0.5~2

10-5 2 0.5~2

10-5 3 0.5~2黑曲霉

10-5 1 0.5~2

10-5 2 0.5~2

10-5 3 0.5~2

霉菌和酵母菌总数计数白色念

珠菌

10-5 1 0.5~2

10-5 2 0.5~2

10-5 3 0.5~2黑曲霉

10-5 1 0.5~2

10-5 2 0.5~2

10-5 3 0.5~2

检验人:复核人:日期:年月日

5.1.4.2.2取样口:总回水口

验证试验结果(常规法)单位(cuf/ml)

技术方法试验菌株菌浓度

(ml)

试验次

菌液

供试

对照

实验

回收率

实际

回收率

理论

需氧菌总数计数大肠埃

希菌

10-6 1 0.5~2

10-6 2 0.5~2

10-6 3 0.5~2金黄色

葡萄球

10-6 1 0.5~2

10-6 2 0.5~2

10-6 3 0.5~2枯草芽

孢杆菌

10-6 1 0.5~2

10-6 2 0.5~2

10-6 3 0.5~2白色念

珠菌

10-5 1 0.5~2

10-5 2 0.5~2

10-5 3 0.5~2黑曲霉

10-5 1 0.5~2

10-5 2 0.5~2

10-5 3 0.5~2

霉菌和酵母菌总数计数白色念

珠菌

10-5 1 0.5~2

10-5 2 0.5~2

10-5 3 0.5~2黑曲霉

10-5 1 0.5~2

10-5 2 0.5~2

10-5 3 0.5~2

检验人:复核人:日期:年月日5.1.4.2.3取样口:贮罐口

验证试验结果(常规法)单位(cuf/ml)

技术方法试验菌株菌浓度

(ml)

试验次

菌液

供试

对照

实验

回收率

实际

回收率

理论

需氧菌总数计数大肠埃

希菌

10-6 1 0.5~2

10-6 2 0.5~2

10-6 3 0.5~2金黄色

葡萄球

10-6 1 0.5~2

10-6 2 0.5~2

10-6 3 0.5~2枯草芽

孢杆菌

10-6 1 0.5~2

10-6 2 0.5~2

10-6 3 0.5~2白色念

珠菌

10-5 1 0.5~2

10-5 2 0.5~2

10-5 3 0.5~2黑曲霉

10-5 1 0.5~2

10-5 2 0.5~2

10-5 3 0.5~2

霉菌和酵母菌总数计数白色念

珠菌

10-5 1 0.5~2

10-5 2 0.5~2

10-5 3 0.5~2黑曲霉

10-5 1 0.5~2

10-5 2 0.5~2

10-5 3 0.5~2

检验人:复核人:日期:年月日 5.1.5 结论

6. 验证周期

6.1.药品的组分发生改变可能影响检验结果时。

6.2.验证时检验条件发生改变可能影响检验结果时。

7. 验证综合结论

结论人:日期:年月日

无菌方法适用性试验记录

无菌方法适用性试验记录 记录编号: 2、培养基制备:按规定程序新鲜配制硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基,121℃灭菌15min,灭菌后备用。 4、实验用仪器设备 □立式压力蒸汽灭菌器型号:编号: □净化工作台型号:编号: □生物安全柜型号:编号: □电热恒温培养箱型号:编号: □霉菌培养箱型号:编号: □电热鼓风干燥箱型号:编号:

5、菌液制备 5.1取经30-35℃培养18-24h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体培养基新鲜培养物,分别用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液稀释为不大于100cfu/ml的菌悬液备用。 5.2取经30-35℃培养18-24h的生孢梭菌的硫乙醇酸盐流体培养基新鲜培养物,用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液稀释为小于100cfu/ml的菌悬液备用。 5.3取经20-25℃培养24-48h的白色念珠菌的沙式葡萄糖培养基新鲜培养物,用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液稀释为小于100cfu/ml的菌悬液备用。 5.4取经20-25℃培养5-7d的黑曲霉的沙式葡萄糖琼脂斜面培养基新鲜培养物,取3-5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨脂80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱,采用适宜的办法吸出孢子悬液至无菌试管里,用含0.05%(ml/ml)聚山梨脂80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液稀释为小于100cfu/ml的菌悬液备用。 6、实验操作 6.1薄膜过滤法:取6管滤器按规定加入供试品接种量过滤,其中3管加入硫乙醇酸盐流体培养基,分别接种上述金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌的菌液适量,另3管加入胰酪大豆胨液体培养基,分别接种上述枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉适量;再取6管滤器,3管加入硫乙醇酸盐流体培养基和分别接种上述金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌的菌液适量,作为对照,置于规定温度培养不超过3d;另3管加入胰酪大豆胨液体培养基和分别接种上述枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉适量,作为对照,置于规定温度培养不超过5d,观察结果。 6.2直接接种法:取6支各装有9ml流乙醇酸盐流体培养基的试管,分别接种上述金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌的菌液各2支,取6支各装有

中国药典纯化水检验标准

纯化水 汉语拼音: Chunhuashui 英文名: Purified Water 性状: 本品为无色的澄清液体;无臭,无味。 检查: 酸碱度取本品10ml,加甲基红指示液2滴,不得显红色;另取10ml,加溴麝香草酚蓝指示液5滴,不得显蓝色。 氯化物、流酸盐与钙盐取本品,分置三支试管中,每管各50ml。第一管中加硝酸5滴与硝酸银试液1ml,第二管中加氯化钡试液2ml,第三管中加草酸铵试液2ml,均不得发生浑浊。 硝酸盐取本品5ml置试管中,于冰浴中冷却,加10%氯化钾溶液0.4ml与0.1%二苯胺硫酸溶液0.1ml,摇匀,缓缓滴加硫酸5ml,摇匀,将试管子50℃水浴中放置15分钟,溶液产生的蓝色与标准硝酸盐溶液[取硝酸钾 0.163g,加水溶解并稀释至100ml,摇匀,精密量取1ml,加水稀释成100ml,再精密量取10ml,加水稀释成100ml,摇匀,即得(每1ml相当于1pg NO3)0.3ml,加无硝酸盐的水4.7ml,用同一方法处理后的颜色比较,不得更深(0.000 006%)。 亚硝酸盐取本品10ml,置纳氏管中,加对氨基苯磺酰胺的稀盐酸溶液(1→100)lml与盐酸菜乙H肢溶液(0.l+100)1ml,产生的粉红色,与标准亚硝酸盐溶液〔取亚硝酸钠0.750g(按干燥品计算),加水溶解,稀释至100ml,摇匀,精密量取1ml,加水稀释成100ml,摇匀,再精密量取1ml,加水稀释成50ml,摇匀,即得(每1ml相当于1μg NO2)]0.2ml,加无亚硝酸盐的水9.8ml,用同一方法处理后的颜色比较,不得更深(0.000 002%)。 氨取本品50ml,加碱性碘化汞钾试液2ml,放置15分钟;如显色,与氯化铵溶液(取氯化铵31.5mg,加无氨水适量使溶解并稀释成1000ml)1.5ml,加元氨水48ml与碱性碘化汞钾试液2ml制成的对照液比较,不得更深(0.000 03%)。 二氧化碳取本品25ml,置50ml具塞量筒中,加氢氧化钙试液25ml,密塞振摇,放置,小时内不得发生浑浊。 易氧化物取本品100ml,加稀硫酸10ml,煮沸后,加高锰酸钾滴定液(0.02mol/L)0.10ml,再煮沸10分钟,粉红色不得完全消失。

微生物限度检查方法适用性验证方案

微生物限度检查方法适用性试验方案

验证方案组织与实施 微生物限度检查方法适用性试验工作应由质量管理部门负责组织,质量管理部门有关人员组成验证小组,参与实施。 方案起草 方案审核 方案批准

目录 一、概述 二、验证目的和风险评估 三、验证内容 四、方法判定 五、再验证周期 六、参考文献 七、结果评价及结论

1、概述: 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括需氧菌数、霉菌数和酵母菌数及控制菌检查。当建立产品的微生物限度检查法时,应进行需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法的适用性试验和控制菌检查方法的适用性试验,以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌、霉菌和酵母菌数的测定和控制菌检查。 依照中国药典2015版,需氧菌、霉菌和酵母菌及控制菌均采用平皿法进行方法适用性试验。 2、试验目的和风险评估: 验证目的:确认所采用的需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法及控制菌检查方法适合我公司所生产产品的微生物限度检查。 风险评估: 3、验证内容: 、培养基来源: 确认人:确认日期: 、检查用培养基配制方法:

确认人:确认日期: 、使用仪器 确认人: 确认日期: 、验证试验用菌种: 确认人:确认日期: 试验方法: 取供试品10 ml加氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml→1:10供试液。需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌采用

常规法。 菌液的制备: 取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨琼脂斜面培物一铂金饵,加入胰酪大豆胨液体培养基中置30~35℃培养箱中培养18~24h,取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体培养物1ml加入%无菌氯化钠溶液中,制成10-1 的菌液,依法10倍稀释至10~7,分取各菌悬液1ml注入平皿中,立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基20ml,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法培养计数,取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。 取白色念珠菌的沙氏葡萄糖琼脂斜面培养物,加入沙氏葡萄糖液体培养基中置20~25℃培养箱中培养24~48h,取白色念珠菌的沙氏葡萄糖液体培养物1ml加入%无菌氯化钠溶液中,制成10-1 的菌液,依法10倍稀释至10~7,取菌悬液1ml注入平皿中,立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基25ml,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法培养计数,取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。 取黑曲霉的新鲜培养物接种子沙氏葡萄糖琼脂斜面上,20-25℃培养5-7天,加入3-5ml含%聚山梨酯80的%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。取1ml加入含%聚山梨酯80的9ml %无菌氯化钠溶液中,制成10-1的菌液,依法10倍稀释至10~7,取,取菌悬液1ml注入平皿中,立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基25ml,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法培养计数,取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。 需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法适用性试验: 供试液制备: 取供试品10 ml,加氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml→1:10供试液。 实验条件: 需氧菌培养温度:30~35℃3~5天培养箱: 霉菌和酵母菌培养温度:20~25℃5~7天培养箱: 试验方法: 试验组: 分别取供试液,分别加入浓度为1000CFU的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌,混匀后取其中1ml注皿,倾注温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基20ml,置30~35℃或培养箱中培养不超过3天,计数,每株试验菌平行制备2个平皿。 分别取供试液,分别加入浓度为1000CFU白色念珠菌、黑曲霉菌液,混匀后分别取其中1ml注皿,倾注温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基20ml,置30~35℃或培养箱中培养不超过5天,计数,每株试验菌平行制备2个平皿。另分别取其中1ml注皿, 倾注温度不超过45℃的沙氏葡萄糖琼脂培养基20ml,置20~25℃或培养箱中培养不超过5天,计数,每株试验菌平行制备2个平皿。

微生物限度检测方法验证操作规程(2015年版)

微生物限度检测方法验证操作规程 1 目的 确认所采用的方法适合于该产品的微生物限度检测。 2 依据 《中国药典》2015版。 3 范围 所有需进行微生物限度检测的产品。 4 责任 4.1验证小组负责检验方法验证/确认方案的起草、验证/确认方案的实施。 4.2验证委员会负责验证/确认方案的审批,验证/确认结论的审核。 5 程序 5.1 由验证小组提出验证申请,验证方案编制完成后,填写《确认和验证方案审批表》,经验证小组会签,报验证委员会审核,由生产负责人和质量负责人批准后,验证方案编制人对验证小组其余人员进行培训后,方可按验证方案试验。 5.2 试验完成后及时编制验证报告,并填写《验证报告审批表》,经验证小组会签,报验证委员会审核,由生产负责人和质量负责人批准后,验证报告结论才可实施。 6 内容 6.1 概述 通过验证以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定及控制菌的检查。根据样品特性制订检验方法和检验条件,按制定的方案进行试验,根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合,按验证的方法和条件进行产品的微生物限度检查;若不符合,重新建立制订检验方法和检验条件,再进行验证,直至验证结果符合设立的验证标准。 6.2 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法的验证 6.2.1 验证用菌株

铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104] 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003] 枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501] 黑曲霉[CMCC(F)98 003] 白色念珠菌[CMCC(F)98 001] 6.2.2 验证用菌液制备 6.2.2.1接种铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌至胰酪大豆胨液体培养基中,于30~35℃培养18~24小时。取上述培养物各1ml,用0.9%无菌氯化钠溶液或pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液,备用。 6.2.2.2 接种白色念珠菌至沙氏葡萄糖液体培养基中,于20~25℃培养2~3天。取上述培养物1ml,用0.9%无菌氯化钠溶液或pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液,备用。 6.2.2.3接种黑曲霉至沙氏葡萄糖琼脂培养基上,于20~25℃培养5~7天,加入含0.05%(ml/ml)聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液,将孢子洗脱。然后,用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用含0.05%(ml/ml)聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的孢子悬液,备用。 6.2.3 供试液的制备 6.2.3.1 水溶性供试试品 取供试品,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1:10供试液。若需要,调节供试液pH值至6~8。必要时,用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。 6.2.3.2 水不溶性非油脂类供试品 取供试品,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1:10供试液。分散力较差的供试品,可在稀释液中加入表面活性剂如0.1﹪的聚山梨酯80,使供试品分散均匀。若需要,调节供试液pH值至6~8。必要时,用一稀释液将

药品微生物限度检验方法标准操作规程

标准操作规程 目的:建立一个药品微生物限度检验标准操作规程。 范围:适用于本企业生产的所有品种,本企业所有洁净生产区域,QC微生物限度检查室,洁净工作室等。 责任者:QC主任、化验员。 规程: 本规程引至《中国药典》2000年版。 1. 概述:微生物限度检查系指非规定灭菌制剂及其原辅料受到微生物污染程度的一种检查方法,包括染菌量及控制菌的检查。我公司QC设无菌操作室,用于微生物限度检查。无菌操作室的管理及使用制度见本文附录一。 2. 抽样:供试品应按批号随即抽样,一般抽样量为检验用量(2个以上最小包装单位)的3倍。抽样时,凡发现有异常可疑的样品,应缺陷选用疑问的样品,但因机构损伤明显破裂的包装不得作为样品,凡已能从药品、瓶口(外盖内侧及瓶口周围)外观看出长螨、长霉、虫蛀及变质的药品,可直接判为不合格,无需要再抽样检验。 3. 供试品的保存:供试品在检验之前,应保存在阴凉干燥处,以防供试品中的污染菌因保藏条件所引起致死、损伤或繁殖。供试品在检验之前,应该保持原有包装状态,严禁开启,包装已开启的样品不得作为供试品。 4. 检查: . 使用设备:电热恒温培养箱、电热恒温水温箱、试管、刻度吸管、量筒、三角瓶、培养皿、试管架、注射器、针头、注射器盒、研钵、75%酒精棉球、紫外灯(365nm波长)。 . 检查的全过程应严格遵守无菌操作,严防再污染。使用设备、仪器、人员及无菌操作室常用的消毒、灭菌方法见本文附录二。除另有规定外,供试品制备成供试液后,均在均匀状态取样。制成供试液后,应该在60分钟内注皿操作完毕。 标准操作规程 . 培养:除另有规定外,本检查法中细菌培养温度为30-35℃,霉菌、酵母菌培养温

微生物限度检查办法验证方法

精心整理 微生物限度检查方法验证方案 1.目的: 为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查,包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查,特制定本验证方案,通过比较试验菌的恢复生长结果,来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性,以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计,所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。 2.3. 4.0.22um 121营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基(BL )、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基(MUG )等脱水培养基,按照相应的配制说明,用纯化水配制、分装后,在2小时内,放于湿热灭菌器中,在121℃,灭菌15 min ,在3周内使用。 4.4.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备:取在有效期内的试剂,按照相应的配制方法,配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%(ml/ml )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液等,用纯化水配制,加热使溶,过滤,分装,在121℃,灭菌15 min ,在3周内使用。

4.4.2 试验菌的制备和稀释: 4.4.2.1细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证用菌液: 4.4 4.4 4.4 4.4.2.2控制菌检查方法验证用菌液: 1ml 含菌10 3g单 45℃pH7.0 液。 3 4.4.4.2试验组: 4.4.4.2.1 平皿法:分1:20的供试液1ml和试验菌液(含菌50~100CFU)1ml,注入同一直径90mm的灭菌平皿中,每株试验菌平行制备2个平皿。 4.4 4.4

4.4.4.4.1 平皿法:取1:20供试液1ml,注入直径90mm的灭菌平皿中,每种培养基平行制备2个平皿。 4.4 4.4.4.5稀释剂对照组:若供试液制备需要分散、乳化、中和、离心等特殊处理时,需增加稀释剂对照组,以考察供试液制备过程中微生物受影响的程度。 4.4 养48 培养72 稀释剂对照组回收率= 结果判定:在3次独立的平行试验中,稀释剂对照组的回收率应均不低于%。试 菌回收率低于70%,则应采用薄膜过滤法、培养基稀释法、离心沉淀集菌法、中和法等方法或联合使用上述方法消除供试品的抑菌活性,并重新进行方法学验证。 4.4.4.11细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证结果:

001.纯化水微生物限度检查法操作规程

SOP/QC(09)001-01 纯化水微生物限度检查法操作规程 文件类别:标准操作规程 审批表 江西中兴汉方药业有限公司

1.目的 规范纯化水微生物检查的操作方法,确保药品检验的准确性。 2.适用范围 适用于纯化水的微生物检查。 3.责任人 QC:负责按此规程执行。 4.程序 4.1 概述 本规程是以营养琼脂培养基作为细菌培养基,采用平板表面涂布法测定纯化水菌落总数。其操作环境和全部过程应严格遵守无菌操作,防止微生物污染。 4.2 仪器与用具电热恒温培养箱(30~35℃)霉菌培养箱(23~28℃)超净工作台无菌双碟移液管0.45μm微孔滤膜过滤器抽滤泵 4.3 试药与试剂营养琼脂培养基玫瑰红钠培养基pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 4.4 纯化水的取样 4.4.1取样时,须先开启取样阀门,用工艺用水本身冲冼取样口,约冲水1升以上,而后以无菌具塞10ml试管取水,取水量约为试管高度的1/2~2/3。 4.4.2检测周期:见“工艺用水监测规程(SMP-ZL-016-)”规定。 4.4.3取样后的水样应立即检验。 4.5 检查方法量取9ml纯化水置盛有90ml pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液的锥形瓶中混匀,作为供试液;量取供试液10 错误!未找到引用源。供试液置安装好的无菌抽滤装置,进行过滤。用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜,冲洗后取出滤膜,菌面朝上贴于营养琼脂培养基平板及玫瑰红钠培养基平板上,盖好,倒置培养皿,分别将营养琼脂培养基平板及玫瑰红钠培养基平板置电热恒温培养箱(30~35℃)及霉菌培养箱(23~28℃)中培养。细菌培养3天后进行菌落计数,霉菌培养5天后进行菌落计数。计数结果即为每ml水中含细菌及霉菌的菌落数。 4.6 结果判定每1ml纯化水中的细菌数及霉菌数之和应不得过100个。 5 相关记录 6变更履历表

微生物限度检查法应用指导原则

微生物限度检查法应用指导原则 为更好应用微生物限度检查法(附录ⅪJ),特制定本指导原则。 微生物限度检查法可用于判断非规定灭菌制剂及原料、辅料是否符合药典的规定,也可用于指导制剂、原料、辅料的微生物质量标准的制定,及指导生产过程中间产品微生物质量的监控。本指导原则将对标准和方法中的特定内容及标准的应用做进一步的说明。 1.微生物限度检查过程中,如需要使用表面活性剂、灭活剂及中和剂,在确定其能否适用于所检样品及其用量时,除应证明该试剂对所检样品的处理有效外,还须确认该试剂不影响样品中可能污染的微生物的检出(即无毒性),因此无毒性确认试验的菌株不能仅局限于验证试验菌株,而应当包括产品中可能污染的微生物。 2.供试液制备方法、抑菌成分的消除方法及细菌、霉菌及酵母菌计数方法应尽量选择微生物限度检查法中操作简便、快速的方法,且应避免损伤供试品中污染的微生物。对于抑菌作用较强的供试品,在供试品溶液性状允许的情况下,应尽量选用薄膜过滤法进行试验。 3. 微生物限度检查法(附录ⅪJ)收载的离心沉淀法仅适用于制备细菌计数或控制菌(细菌)检查用的供试液,规定的500转/分钟、不超过3分钟只用于去除供试液中的沉淀物。采用该方法时,供试液中的样品颗粒大小、粘稠度及污染的微生物大小,转速等直接影响着样品中微生物的回收,易造成检验结果不能真实反映供试品的污染情况。因此,供试液制备时尽量避免使用该方法,更不宜采用高速离心沉降集菌。 4.对照培养基系指按培养基处方特别制备、质量优良的培养基,用于培养基适应性检查。由中国药品生物制品检定所研制及分发。 5. 进行验证试验时,若因没有适宜的方法消除供试品中的抑菌作用而导致微生物回收的失败,应采用能使微生物生长的更高稀释级供试液进行方法验证试验。此时更高稀释级供试液的确认要从低往高的稀释级进行,但最高稀释级供试液选择应根据供试品应符合的微生物限度标准和菌数报告规则,如供试品应符合的微生物限度标准是1克细菌数不得过1000cfu,那么最高稀释级是1:10-3。

微生物限度检查方法验证方案

微生物限度检查方法验证方案 1.目的: 为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查,包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查,特制定本验证方案,通过比较试验菌的恢复生长结果,来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性,以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计,所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。 验证过程应严格按照本方案规定的容进行,若因特殊原因确需变更时,应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准 2.围: 本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。 3.规性引用文件: 根据《中国药典》2010年版二部附录ⅪJ 微生物限度检查法的要求,由于某些供试品具有抗菌活性,在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时,可能影响检验结果的准确性,必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。 4.验证实施: 4.4.1 试验前的准备: 4.4.1.1 试验用具的准备:将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、 滤膜(孔径0.22um、直径50mm)、平皿、空三角瓶、称量纸等,用牛皮纸包扎 好后,放于湿热灭菌器中,在121℃,灭菌30 min,在3天使用。 4.4.1.2试验用培养基的制备:取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫 瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基(BL)、改良马丁琼脂 培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基(MUG)等脱水培养基,按照相应的配制 说明,用纯化水配制、分装后,在2小时,放于湿热灭菌器中,在121℃,灭 菌15 min,在3周使用。 4.4.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备:取在有效期的试剂,按照 相应的配制方法,配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、

2010版中国药典纯化水标准

纯化水質量要求 參照《中国药典》2010版二部标准p411页 【性状】本品为无色的澄清液体;无臭,无味。 【检查】酸碱度取本品10ml,加甲基红指示液2滴,不得显红色;另取10ml,加溴麝香草酚蓝指示液5滴,不得显蓝色。 【硝酸盐】取本品5ml置试管中,于冰浴中冷却,加10%氯化钾溶液0.4ml与0.1%二苯胺硫酸溶液0.1ml,摇匀,缓缓滴加硫酸5ml,摇匀,将试管于50℃水浴中放置15分钟,溶液产生的蓝色与标准硝酸盐溶液[取硝酸钾0.163g,加水溶解并稀释至100ml,摇匀,精密量取1ml,加水稀释成100ml,再精密量取10ml,加水稀释成100ml,摇匀,即得(每1ml相当于1μgNO3)]0.3ml,加无硝酸盐的水4.7ml,用同一方法处理后的颜色比较,不得更深(0.000006%)。 【亚硝酸盐】取本品10ml,置纳氏管中,加对氨基苯磺酰胺的稀盐酸溶液(1→100)1ml 与盐酸萘乙二胺溶液(0.1→100)1ml,产生的粉红色,与标准亚硝酸盐溶液[取亚硝酸钠 0.750g(按干燥品计算),加水溶解,稀释至100ml,摇匀,精密量取1ml,加水稀释成100ml,摇匀,再精密量取1ml,加水稀释成50ml,摇匀,即得(每1ml相当于1μgNO2)]0.2ml,加无亚硝酸盐的水9.8ml,用同一方法处理后的颜色比较,不得更深(0.000002%)。 【氨】取本品50ml,加碱性碘化汞钾试液2ml,放置15分钟;如显色,与氯化铵溶液(取氯化铵31.5mg,加无氨水适量使溶解并稀释成1000ml)1.5ml,加无氨水48ml与碱性碘化汞钾试液2ml制成的对照液比较,不得更深(0.00003%)。 总有机碳不得过0.50mg/L (附录ⅧR) 。 【易氧化物】取本品100ml,加稀硫酸10ml,煮沸后,加高锰酸钾滴定液 (0.02mol/L)0.10ml,再煮沸10分钟,粉红色不得完全消失。 以上总有机碳和易氧化物两项可选做一项。 不挥发物取本品100ml,置105℃恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干,并在105℃干燥至恒重,遗留残渣不得过1mg。 【重金属】取本品100ml,加水19ml,蒸发至20ml,放冷,加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml 与水适量使成25ml,加硫代乙酰胺试液2ml,摇匀,放置2分钟,与标准铅溶液1.0ml加水19ml用同一方法处理后的颜色比较,不得更深(0.00001%)。 【微生物限度】取本品,采用薄膜过滤法处理后,依法检查(附录ⅪJ),细菌、霉菌和酵母菌总数每1ml不得过100个。 【另外要求】:電導率:<0.8US/CM;電阻率:>15MΩ.CM;NO指標: 合格。 2012-10-07

奥扎格雷钠注射液无菌检查方法适用性试验

奥扎格雷钠注射液无菌检查方法适用性试验 发表时间:2018-03-05T11:28:42.313Z 来源:《中国医学人文》2017年第12期作者:张春景王晓旦王强周欣盈黄庆春 [导读] 本文对奥扎格雷钠注射液的无菌检查方法进行试验研究,以确定奥扎格雷钠注射液的无菌检查方法的有效性。 浙江北生药业汉生制药有限公司浙江省 322100 摘要:目的建立奥扎格雷钠注射液的无菌检查方法的适用性试验。方法按《中国药典》2015年版四部无菌检查方法要求,采用薄膜过滤法,对奥扎格雷钠注射液(规格5 ml:80 mg)进行无菌检查方法适用性试验。结果奥扎格雷钠注射液采用薄膜过滤法,以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌,进行无菌检查方法学验证,验证结果符合《中国药典》2015年版四部无菌检查方法适用性试验要求。结论该方法可作为奥扎格雷钠注射液的无菌检查方法。 关键词:奥扎格雷钠注射液;无菌检查;薄膜过滤法;方法学适用性试验 中图分类号:R284.1;R917.101 文献标志码:A 文章编号:1007-7693 奥扎格雷钠注射液主要用于治疗急性血栓性脑梗塞和脑梗塞所伴随的运动障碍,及改善蛛网膜下腔出血手术后的脑血管痉挛收缩和并发脑缺血症状。临床上也可联合用药,如与纳洛酮注射液联合用药治疗脑梗死。与低分子肝素钙治疗不稳定型心绞痛效果显著,有助于改善患者血液流变学指标。有研究表明奥扎格雷钠注射液对慢性阻塞性肺病有保护作用。奥扎格雷钠注射液无抑菌性,可直接采用薄膜过滤法进行该产品的无菌检查。本文对奥扎格雷钠注射液的无菌检查方法进行试验研究,以确定奥扎格雷钠注射液的无菌检查方法的有效性。 1 仪器与试剂 1.1 供试品奥扎格雷钠注射液(规格:5 ml:80 mg;批号:1704271、1704272、1704273;),供试品均由浙江北生药业汉生制药有限公司提供。 1.2 培养基和试剂硫乙醇酸盐流体培养基(批号:150605)、胰酪大豆胨液体培养基(批号:150629)、胰酪大豆胨琼脂培养基(批号:1612262)、沙氏葡萄糖琼脂培养基(批号:1611283)、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(批号:1310292),培养基生产厂家均为北京三药科技开发公司。聚山梨酯80(批号:20150608),生产厂家为国药集团化学试剂有限公司。 1.3 试验菌株金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B) 26003]、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B) 63501]、大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B) 44102]、白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98001]、黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F) 98003]、生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B) 64941],菌种均来自浙江省食品药品检验研究院,所用菌种均为3代菌种。 1.4 仪器集菌培养器(杭州泰林生物技术设备有限公司)、隔水式电热培养箱(上海浦东荣丰科技仪器有限公司)、生化培养箱(上海申贤恒温设备厂)、电热手提压力蒸汽消毒器(上海医用核子仪器厂)、立式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂)、电热恒温鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)、集菌仪(杭州高得(泰林)医疗器械有限公司)、生物安全柜(济南鑫贝西生物技术有限公司)。 2 方法与结果 2.1 菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌至胰酪大豆胨液体培养基中,30~35 ℃培养18~24小时。取经培养的菌液培养物1 ml,加入9 ml pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液,10倍稀释成含菌数不大于100 cfu的菌悬液,稀释级别为10-7、10-7、10-4、10-7,。接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中,30~35 ℃培养18~24小时。取经培养的菌液培养物1 ml,加入9 ml pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液,10倍稀释成含菌数不大于100 cfu的菌悬液,稀释级别为10-5。接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中,20~25 ℃培养24~48小时。取经培养的菌液培养物1 ml,加入9ml pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液,10倍稀释成含菌数不大于100cfu的菌悬液,稀释级别为10-5。接种黑曲霉的新鲜培养物,至沙氏葡萄糖琼脂培养基上,20~25℃培养5~7天。取培养物,加入3ml含0.05%(ml·ml-1)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液将孢子洗脱,吸出孢子悬液转移至无菌空试管作为原液,加含0.05%(ml·ml-1)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10倍稀释成含菌数不大于100cfu的菌悬液,稀释级别为10-3。 2.2 试剂的制备 培养基及所选的的溶剂按照《中国药典》2015年版四部无菌检查的规定进行配制、分装和灭菌后备用。 2.3 培养基适用性检查 2.3.1 无菌性检查每批培养基随机取5瓶,硫乙醇酸盐流体培养基置30~35℃,培养14天,胰酪大豆胨液体培养基置20~25℃,培养14天,观察,无菌生长。 2.3.2 灵敏度检查取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支,分别接种小于100cfu金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支,另1支不接种,作为空白对照,培养3天;取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体流体培养基7支,分别接种小于100cfu枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支,另1支不接种,作为空白对照,培养5天,逐日观察结果。培养基的灵敏度检查符合规定。结果见表1:表1 培养基灵敏度检查结果 Tab 1 The medium sensitivity tests results

2010年版药典微生物限度检查法

附录Ⅺ J 微生物限度检查法 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。 微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作,防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。 供试品检查时,如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂,应证明其有效性及对微生物无毒性。 除另有规定外,本检查法中细菌及控制菌培养温度为30℃~35℃;霉菌、酵母菌培养温度为23℃~28℃。 检验结果以1g、1ml、10g、10ml、10cm2为单位报告,特殊品种可以最小包装单位报告。 检验量 检验量即一次试验所用的供试品量(g、ml或cm2)。 除另有规定外,一般供试品的检验量为10g或10ml;膜剂为100cm2;贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品,其检验量应增加20g或20ml(其中10g用于阳性对照试验)。 检验时,应从2个以上最小包装单位中抽取供试品,膜剂还不得少于4片。 一般应随机抽取不少于检验用量(两个以上最小包装单位)的3倍量供试品。 供试液的制备 根据供试品的理化特性与生物学特性,采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时,应均匀加热,且温度不应超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基,不得超过1小时。 除另有规定外,常用的供试液制备方法如下。 1.液体供试品 取供试品10ml,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,混匀,作为1∶10的供试液。油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。 2.固体、半固体或黏稠性供试品 取供试品10g,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,用匀浆仪或其他适宜的方法,混匀,作为1∶10的供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80,并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。 3.需用特殊供试液制备方法的供试品 (1)非水溶性供试品 方法1取供试品5g(或5ml),加至含溶化的(温度不超过45℃)5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中,用无菌玻棒搅拌成团后,慢慢加入45℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,边加边搅拌,使供试品充分乳化,作为1∶20的供试液。 方法2取供试品10g,加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯(制法见附录ⅩⅢB 无菌检查法中供试品的无菌检查项下)和无菌玻璃珠的适宜容器中,必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量,充分振摇,使供试品溶解。然后加入45℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml,振摇5~10分钟,萃取,静置使油水明显分层,取其水层作为1∶10的供试液。 (2)膜剂供试品 取供试品100cm2,剪碎,加100ml的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(必要时可增加稀释液),浸泡,振摇,作为1∶10的供试液。 (3)肠溶及结肠溶制剂供试品 取供试品10g,加pH6.8无菌磷酸盐缓冲液(用于肠溶制剂)或pH7.6无菌磷酸盐缓冲液(用于结肠溶制剂)至100ml,置

几种检测方法的适用性

几种检测方法的适用性: 静载试验法 这是目前公认的检测基桩竖向抗压承载力最直接、最可靠的试验方法。但在工程实践中发现,基准桩的问题有时会被检测人员所忽视,容易出现基准桩打入深度不足,试验过程产生位移的问题。 钻芯法 这种方法具有科学、直观、实用等特点,在检测混凝土灌注桩方面应用较广。一次完整、成功的钻芯检测,可以得到桩长、桩身混凝土强度、桩底沉渣厚度和桩身完整性的情况,并判定或鉴别桩端持力层的岩土性状。抽芯技术对检测判断的影响很大。某工程先用XY-1型工程钻机,采用硬质合金单管钻具,用低压慢速小泵量及干钻相结合的钻进方法,结果采芯率不到70%,芯样完整性极差,大多呈碎块;后来改用SCZ-1型液压钻机,采用金刚石单动双管钻具,采芯率达99%,芯样呈较完整的圆柱状。所以,《技术规范》对钻机和钻头作了相应的规定,就是为了避免抽芯验桩的误判。 反射波法 目前在国内,绝大多数的检测机构采用反射波法(瞬态时域分析法)检测桩身完整性,主要原因是其仪器轻便、现场检测快捷,同时将激励方式、频域分析方法等作为测试、辅助分析手段融合进去。当然,低应变法检测时,不论缺陷的类型如何,其综合表现均为桩的阻抗变小,而对缺陷的性质难以区分,这是其最大的局限性。 高应变法 它的主要功能是判定桩竖向抗压承载力是否满足设计要求。高应变法在判定桩身水平整合型缝隙、预制桩接头等缺陷时,能够在查明这些“缺陷“是否影响竖向抗压承载力的基础上,合理判定缺陷程度,可作为低应变法的补充验证手段。目前在某些地区,利用高应变法增加承载力和完整性的抽查频率,已成为一种普遍做法。

声波透射法 与其他完整性检测方法相比,声波透射法能够进行全面、细致的检测,且基本上无其他限制条件。但由于存在漫射、透射、反射,对检测结果会造成影响。 低应变动测法 低应变动测法是使用小锤敲击桩顶,通过粘接在桩顶的传感器接收来自桩中的应力波信号,采用应力波理论来研究桩土体系的动态响应,反演分析实测速度信号、频率信号,从而获得桩的完整性。该方法检测简便,且检测速度较快,但如何获取好的波形,如何较好地分析桩身完整性是检测工作的关键。 测试过程是获取好信号的关键,测试中应注意:①测试点的选择。测试点数依桩径不同、测试信号情况不同而有所不同,一般要求桩径在120cm 以上,测试3~4 点。②锤击点的选择。锤击点宜选择距传感器 20~30 cm 处不必考虑桩径大小。③传感器安装。传感器根据所选测试点位置安装,注意选择好粘贴方式,一般有石蜡、黄油、橡皮泥在保证桩头干燥,没积水的情况下。④尽量多采集信号。一根桩不少于10 锤,在不同点,不同激振情况下,观测波形的一致性,以保证波形真实且不漏测。 综述 在桩基检测中,各个检测手段需要配合使用,利用各自的特点和优势,按照实际情况,

微生物限度检查法验证方案模板

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验证文件
******微生物限度 检查法验证方案
********有限责任公司

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验 证 文 件
目 录
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适用范围 目的 概述 验证所需要的仪器设备及文件 可接受的限度范围标准 测试方法 异常情况处理 测试结果 结论
10 再验证周期 11 附表

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验 证 文 件
1 适用范围 本验证方案适用于******微生物限度检查法的验证。 2 目的 建立该产品的微生物限度检查方法,并对其有效性进行评价,确保试验方法的 完整性,保证检验结果的可靠性。 3 概述 3.1******处方中含有盐酸氨基葡萄糖以及常用辅料等成分,文献报道盐酸氨基葡 萄糖有抑菌活性。根据以上特点,按《中国药典》2010 年版附录Ⅺ J《微生物限度 检查法方法》的“供试品的制备”项下需用特殊方法制备供试液中(6)制备供试 液。“细菌,霉菌,酵母菌计数”项下检查法 2 薄膜过滤法进行细菌,霉菌及酵母 菌的计数方法验证,控制菌检查项下控制菌的检查法验证。 3.2 验证时间:************批平行三次试验。 4 验证所需要的仪器设备及文件 4.1 验证需用仪器设备 器具名称 电热恒温培养箱 多用生化培养箱 蒸汽灭菌器 规格型号 HG101-3 SP-80 ZDX-35B 检定日期 检定单位 有效期
4.2 验证所需要的文件及存放地方 资料名称 《HG101-3 电热恒温培养箱操作维护保养 SOP》 《SP-80 型生化培养箱操作维护保养 SOP》 《ZDX-35B 蒸汽灭菌器操作维护保养 SOP》 《微生物限度检查法 SOP》 5 可接受的限度范围标准 5.1******微生物限度检查质量标准 项目 细菌总数 霉菌、酵母菌 标准规定 ≤1000 个/g ≤100 个/g 存放地点

2015年版微生物限度检验操作规程

2015 版微生物限度检验操作规程 目的建立微生物限度检查操作规程,规范操作,保证结果的准确性。范围成品、辅料、内包装袋及纯化水的检验。 内容概述:本检验操作规程依据中国药典2015 年版四部《通则1105 非无菌产品微生物限度检查:微生物计数法》和《通则1106 非无菌产品微生物限度检查:控制菌检查法》进行检查。 微生物计数法 一、计数方法 1.微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 2、计数方法本法包括平皿法、薄膜过滤法。 3、计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性检查供试品微生物计数中所使用的 培养基应进行适用性检查。供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验,以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。 4、菌种及菌液的制备试验用菌株的传代次数不得超过5代(从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 袋),并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验见表 1。 菌液制备按表 1 规定培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物,用无菌氯化钠- 蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液;取黑曲霉的新鲜培养物加入3-5ml含%(ml/ml )聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中,用含%(ml/ml )聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉抱子悬液。菌液制备后若在室温下放置,应在2小时内使用;若保存在2-8 C,可在24小时内使用。黑曲霉抱子悬液可保存在2-8 C,在验证过的贮存期内使用。 表 1 试验菌液的制备和使用 阴性对照为确认试验条件是否符合要求,应进行对照试验,阴性对照试验应无菌生长。培养基适用 性检查按照表1规定,接种不大于100cfu 的菌液至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板,置规定的条件下培养。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在范围内,且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。被检 液体培养基管与对照培养基管比较,试验菌应生长良好。 5、计数方法适用性检查

微生物限度检查办法验证方法

微生物限度检查方法验证方案 1. 目的: 为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查,包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查,特制定本验证方案,通过比较试验菌的恢复生长结果,来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性,以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计,所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。 验证过程应严格按照本方案规定的内容进行,若因特殊原因确需变更时,应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准 2. 范围: 本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。 3. 规范性引用文件: 根据《中国药典》2010 年版二部附录ⅪJ 微生物限度检查法的要求,由于某些供试品具有抗菌活性,在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时,可能影响检验结果的准确性,必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。 4. 验证实施: 4.4.1 试验前的准备: 4.4.1.1 试验用具的准备:将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤膜(孔径 0.22um、直径50mm)、平皿、空三角瓶、称量纸等,用牛皮纸包扎好后,放于湿热灭菌器中,在121℃,灭菌30 min,在3 天内使用。 4.4.1.2 试验用培养基的制备:取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基(BL)、改良马丁琼脂培养基、4- 甲基伞形酮葡糖苷酸培养基(MUG)等脱水培养基,按照相应的配制说明,用纯化水配制、分装后,在 2 小时内,放于湿热灭 菌器中,在121℃,灭菌15 min,在3 周内使用。 4.4.1.3 试验用稀释剂/ 缓冲液、冲洗液的制备:取在有效期内的试剂,按照相应的配制方法, 配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%(ml/ml )聚山梨酯80的 0.9%无菌氯化钠溶液等,用纯化水配制,加热使溶,过滤,分装,在121℃,灭菌15 min,在3

微生物限度检查方法适用性试验方案模板2015版药典

验证文件 类别: 编号: 部门: XXXX微生 物限度检查方法适用性试验方案 XXXXX公司 2016年

XXXX微生物限度检查方法适用性试验方案审批

目录 1、适用范围 2、目的 3、概述 4、适用性所需要的仪器设备及文件 5、可接受的限度范围标准 6、测试方法 7、异常情况处理 8、测试结果 9、结论 10、再适用性周期 11、附表

1、适用范围 本适用性方案适用于XXXX微生物限度检查的方法适用性试验。 2、目的 因《中华人民共和国药典》(2015年版)颁布实施,为确保该产品的微生物限度检查方法的可靠性和可操作性,故对其检验方法进行适用性试验,以符合《中华人民共和国药典》规定。 3、概述 3.1根据《中华人民共和国药典》2015年版四部通则1105非无菌产品微生物限度检查:微生物计数法、1106非无菌产品微生物限度检查:控制菌检查法,对XXXX进行需氧菌、霉菌和酵母菌、大肠埃希菌检查方法的适用性试验,以确认供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性。 3.2适用性试验时间及批号:年月日开始分别对、、三 批XXXX进行独立的方法适用性试验。 3.3验证小组 4、仪器设备及文件 4.1需用仪器设备

5、可接受的限度范围标准 5.1XXXX微生物限度检查质量标准 5.2需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法采用《中华人民共和国药典》2015版四部通则1105非无菌产品微生物限度检查:微生物计数法中叙述的平皿法中的倾注法。控制菌检查方法采用1106非无菌产品微生物限度检查:控制菌检查法中大肠埃希菌检查方法 6、测试方法 6.1供试品 XXXX 批号: 6.2培养基及菌种 6.2.1采用符合中国药典规定的干燥培养基,并经过培养基适用性检查。 胰酪大豆胨琼脂培养基批号:胰酪大豆胨液体培养基批号: 沙氏葡萄糖琼脂培养基批号:沙氏葡萄糖液体培养基批号: 麦康凯琼脂培养基批号:麦康凯液体培养基批号: MUG培养基批号: 6.2.2菌种均购于:

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