输血科SOP

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输血科SOP

输血科工作制度

1.输血科(血库)工作人员必须遵守劳动纪律,坚守工作岗位,如有特殊情

况需暂时离开,必须向有关人员交接,说明去向、事由、时间并按时返回,杜绝脱岗现象。

2.一般输血应预先填写血型申请单测定血型,需输血时再填写输血申请单,

各申请单均应由医生逐项填写清楚(包括已测知的血型)。急诊输血亦应同时将血型申请单及输血申请一并送血库,否则应拒收并立即通知有关医生补齐。

3.血库人员在收到申请单及血样后,应认真核对申请单上的病人姓名、性别、

年龄、住院号、病区、床号及临床诊断,并与血样标签核对是否完全相符,如血样所贴标签与申请单内容不符,应立即退回重送,经核实无误后方可进行血型及配血交叉试验。

4. 血库人员应严格按操作规范操作,如确遇难以判断的结果,应向科室负责

人或有关上级医生报告,并认真复查,直至结果明确无误,方可发血以确保安全。

5.如发现采供血机构所发血液的血型标记有误,或标签内容模糊不清,应作

好记录,然后通知采供血机构退回复核,并应即时向科室负责人及医务科报告。

6.血液的申请,须按“输血申请和审批制度”严格执行。

7.血液一经领出,原则上不得退回。

交叉配血(凝聚胺法)

1. 原理

凝聚胺(polymatching)法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度,减少红细胞周围的阳离子云,促进血清(浆)中的抗体与红细胞相应抗原结合,再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液,中和红细胞表面的负电荷,缩短细胞间距,形成可逆的非特异性聚集,并使IgG型抗体直接凝集红细胞。加入中和液后,仅由凝聚胺引起的非特异性聚集,会因电荷中和而分散,而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。

2. 标本采集:

2.1 标本种类:抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清,将细胞配成5%盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液。

2.2 标本要求:抗凝和干燥管均可,如用抗凝血主张用EDTAK2(mg/dz)抗凝标本应无溶血,切标签齐全。

3. 标本储存:急诊标本30分钟内完成操作,标本应至4℃冰箱保存7天。

4. 标本运输:室温运输。

5. 标本拒收标准:细菌污染。溶血标本,标签不齐全不能作测定。

6. 试剂:

6.1 试剂名称:凝聚胺试剂(polymatching)

6.2 试剂生产厂家:(台资)珠海贝索生物技术有限公司。

6.3 试剂组成:

试剂1. 低离子介质(LowLonic Medium,LIM).试剂打开使用后,可置室温贮存,未开封者2-10度贮存,有效期为2年。

试剂2. 凝聚胺溶液(PolybreneSolution).贮存及有效期同上。

试剂3. 重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上。

试剂4. 8.5%生理盐水。

7. 仪器:

7.1 血型血清索离心机:XTL-4.7 上海离心机械研究所

7.2 离心机:800-2

7.3 电热恒温水箱:北京长源实验设备厂

7.4 显微镜:广州

8. 操作步骤及结果判断:

8.1 供受者红细胞用生理盐水配成3-5%的细胞悬液。加样量均为:血清2滴,红细胞悬液1滴。主管:受血者血清+供者红细胞悬液;次管:受者红细胞悬液+供者血清;(阴阳对照管另设)。

8.2 各管分别加低离子介质0.6ml混匀置室温1分钟。加凝聚胺溶液2滴,混匀,置室温15秒。

8.3 1000g(3000rpm),离心20秒,弃上清液,管底保留约2滴液体。轻摇试管,观察是否形成凝块。如未形成凝块,则重做前面试验。

8.4 加入2滴重悬液,轻轻混合,肉眼或显微镜下观察结果。

8.5 凝块在1分钟内分散,试验结果为阴性,供受者血液配合;反之,如依照为不同强度的凝块,试验结果判为阳性,供受者血液不配合。实验结果必须在3分钟内判读。

9. 操作性能:快速简便,特异性强,灵敏度较高,重复性好。

10. 超出范围结果处理:

10.1 细胞自凝:在冬天气温较低时,某些病人血清中含有冷凝集素而导致交叉配血假阳性;遇此现象可用37℃-40℃生理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动,观察结果。

10.2 若病人血清(血浆)含有肝素,如洗肾患者能影响配血,须多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。

10.3 红细胞悬液为5%为宜,过浓或过淡可使抗原抗体比例不适当,反应不明显易误判。

10.4 各种原因引起的红细胞溶解,误判为不凝集,部分溶血时,可溶性血型物质中和了相应的抗体。

11. 方法局限性:

11.1 试管,滴管吸头和玻片必须清洁干燥,防止溶血。

11.2 操作方法应按规定,先加血清,然后再加红细胞悬液,以便容易核实是否漏加血清。

11.3 离心时间不宜过长或过短,速度不宜过快或过慢,以防假阳性或假阴性结果。

11.4 观察时应注意红细胞呈特异性凝集,继发性凝固及线状排列的区别。

ABO血型鉴定(生理盐水法)

1. 原理

根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原,将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A型红细胞膜上含有A抗原,B型红细胞膜上含有B抗原,AB 型红细胞膜上含有A、B抗原,抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验,通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型,是用已知的抗A、抗B试剂与受检者的红细胞混合时,与抗A 试剂发生凝集者即为A型,与抗B分型试剂发生凝集者即为B型,与抗A、抗B试剂均发生凝集者即为AB型,与抗A、抗B试剂均不凝集者即为O型。所谓反定型,是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。

2. 标本采集

2.1 标本种类:新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。

2.2 标本要求:

2.2.1 抗凝剂:如用抗凝血,多主张用EDTA K2(㎎/dL)抗凝。

2.2.2 用手指末梢血作血型检测时,最少样品量为100ul,如手指有

冻疮,则主张采耳垂血。

3. 标本储存:2小时内完成实验,室温放置下不超过8小时,4℃-8℃

保存不超过48小时。

4. 标本运输:室温运输

5. 标本拒收标准:细菌污染、溶血标本不能作测定

6. 试剂

6.1 试剂名称:ABO血型检测试剂

6.2 试剂生产厂家:南京华欣药业生物工程有限公司

6.3 试剂组成

试剂1:抗A分型试剂(蓝色),效价1:128,2℃-8℃避光保存,室温放置不宜过久。

试剂2:抗B分型试剂(黄色),效价1:128,2℃-8℃避光保存,室温放置不宜过久。

试剂3:5%A、B及O型红细胞盐水悬液,自制。配制方法:分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞,经盐水洗涤3次,以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液。

红细胞悬液的配制

悬液浓度(%)压积红细胞(滴)盐水(滴)

2 5 10 20 1

1

1

1

2ml(40)

0.8ml(16)

0.4ml(8)

0.2ml(4)

为了防止红细胞悬液敏感性不一致,可随机采取3个或以上的健康成人血液,按A、B、O型分别混合后,按上法制备。

7. 操作步骤

7.1 玻片法

7.1.1 取清洁玻片1张(或白瓷板1块),用肥皂水刷洗后晾干,用蜡

笔划出小格,并注明A、B字样。将抗A试剂、抗B试剂各一滴分别滴于玻片(或瓷盘)上A、B处。分别取等体积待检血样(5%-10%红细胞悬液或全血)于抗A试剂和抗B试剂。

7.1.2 另取洁净玻片1张(或白瓷板1块),用蜡笔划成方格,标明A

细胞、B细胞和O细胞,用滴管各加受检者血清1滴,再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。

7.1.3 用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀,同时不停的摇动玻

片(或瓷盘)并观察血型凝集(或溶血)反应。如以玻片做试验时,也可用低倍镜观察结果。

7.2 试管法

7.2.1 取洁净小试管(内径10mm×60mm)2支,分别标上A、B字样,

用滴管分别向A管滴加抗A分型试剂1滴。向B管滴加抗B分型试剂1滴。向A、B管各滴加待检血样的5%红细胞悬液各1滴,混合。

7.2.2 另取洁净小试管(内径10mm×60mm)3支,分别标明A、B和

O细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部,再分别以滴管加入A、B和O型5%红细胞悬液1滴,混合。

7.2.3 摇匀后以1000转/分的速度离心1分钟判定结果。将试管轻轻

摇动,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象。如肉眼不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜检查。

8. 结果判断

8.1 观察结果时既要看有无凝集,更要注意凝集强度,此有助于A、

B亚型、类B或cisAB的发现。

8.2 凝集强度判断标准:

4+=红细胞凝集成一大块,血清清晰透明。

3+=红细胞凝集成数小块,血清尚清晰。

2+=红细胞凝块分散成许多小块,见到游离红细胞。

1+=肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞。

±=镜下可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多游离红细胞。

MF=混合凝集外观是指镜下可见少数红细胞凝集,而绝大多数红细胞仍呈分散分布。

-表示阴性,镜下未见凝集,红细胞均匀分布。

8.3 按下表报告受检者红细胞ABO血型

9. 临床意义:输血、器官移植与亲子鉴定

10. 操作性能:快速简便、特异性强、灵敏度高、重复性好。

11 超出范围结果处理

11.1 红细胞自凝:冷凝集系增高是最为常见原因。应用37℃-40℃的

生理盐水洗涤红细胞可去除红细胞表面附着的导致红细胞凝集的冷集素。11.2 正反定型结果不一致原因

11.2.1 分型血清效价太低、亲和力不强。如抗—A血清效价不高,可

将A亚型误定为O型,AB型误定为B型。

11.2.2 红细胞悬液过浓或过淡,抗原抗体比例则不适当,使反应不明

显,误判为阴性反应。

11.2.3 受检者红细胞上抗原位点过少(如亚型)或抗原性减弱(见于

白血病或恶性肿瘤)以及B类或cisAB等。

11.2.4 受检者血清中蛋白紊乱(高球蛋白血症),或实验时温度过高,

常引起红细胞呈缗钱状排列。

11.2.5 受检者血清中缺乏应有的抗—A和抗—B抗体,如丙种球蛋白缺乏症。

11.2.6 各种原因引起的红细胞溶解,误判为不凝集,部分溶血时,可

溶性血型物质中和了相应的抗体。

11.2.7 由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型

不符的原因。

11.2.8 血清中有意外抗体,如自身抗—I,常引起干扰。

11.2.9 老年人血清中抗体水平大幅度下降。

11.3 正反定型结果不一致的解决方法:

11.3.1 另从受检者采取1份新鲜血液标本,这样可以纠正因污染或搞

错样本造成的不符合。

11.3.2 将红细胞洗涤数次,配成2%盐水细胞悬液,用抗—A、抗—B、抗—AI,抗—A+B及抗—H做试验可以得到其它有用的信息。

11.3.3 对受检红细胞作直接抗球蛋白试验,如结果呈阳性,表示红细

胞已被抗体致敏。

11.3.4 用A1、A2、B、O红细胞从自身红细胞检查受检血清。如果

怀疑是抗—I,用O型(或ABO相合的)脐血红细胞检查。

11.3.5 如果试验结果未见凝集,应将细胞及血清试验至少在室温和

4℃放置30min,用显微镜检查核实。

11.3.6 如疑为A抗原或B抗原减弱,则可将受检红细胞与抗A或抗

—B血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作A、B、H血型物质测定。后者

只对80%HAB分泌型的人有用。

11.3.7 如试验结果红细胞呈缗钱状排列,加等渗盐水1滴,混合。往

往可使缗钱现象消失。应注意不应先加盐水1滴于受检者血清中而后和红细胞作试验,以免使血清中抗体被稀释。

11.3.8 如受检者为A型血而疑为有类B抗原时,可用下列方法进行鉴别:11.3.8.1 观察细胞与抗—A及抗B的凝集强度,与抗A的反应要比抗

—B的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。

11.3.8.2 用受检者红细胞与自身血清作试验,血清中的抗—B不凝集

自身红细胞上的类B抗原。

11.3.8.3 检查唾液中是否有A、B物质,如果是分泌型,可检出A物

质而无B物质。

11.3.8.4 核对患者的诊断,类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰

阴件杆菌感染有关。

12. 方法局限性

12.1 分型血清质量性能符合要求,用毕后,应放置冰箱保存,以免细菌污染。

12.2 试管、滴管和玻片必须清洁干燥,防止溶血。

12.3 操作方法应按规定,一般应先加血清,然后再加红细胞悬液,

以便容易核实是否漏加血清。

12.4 按理IgM抗—A和抗—B与相应红细胞的反应温度以4℃为最

强,但为了防止冷凝集现象干扰,一般仍在室温(20℃-24℃)内进行试验,37℃可使反应减弱。

12.5 离心时间不宜过长或过短,速度不宜过快或过慢,以防假阳性

或假阴性结果。

12.6 观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。

12.7 判断结果后应仔细核对、记录,避免笔误。

12.8 试剂一旦发现浑浊不得使用。

12.9 制红细胞悬液时防止自凝现象。

13. 参考文献

中国人民共和国卫生部医政司编. 全国临床检验操作规程(第三版)。

ABO血型反定型

(一)试管法

1.项目名称:血型鉴定试验

2.测定原理:

利用抗原抗体反应的原理,用已知A、B、O红细胞测定被检者血清中有无相应的抗A抗B抗体(反向定型),结合正定型结果判定病人的血型。

3.标本要求:

3.1抽取受血者静脉血3-4ml,于EDTA-Na2抗凝的试管中。

3.2受血者和供血者的血液样本必须密封,每次输血后,2-6℃保存7天。

4.试剂

4.1A1、B、O红细胞

4.2保存条件:2-8℃保存2个月

4.3使用条件:使用前试剂室温预0.5小时。

5.仪器和材料:

5.1血库专用离心机、37℃水浴箱。

5.2试管架、试管、吸管等。

6.操作程序:

6.1取试管3支,加入被检者血清或血浆各2滴。

6.2分别加入A、B、O红细胞各2滴。

6.3摇匀,将试管放入专用离心机中离心,3400rpm转15秒。

6.4离心后观察是否溶血,轻摇试管判读结果。

7.结果判定:

8

8.1试管、滴管和玻片必须清洁干燥,防止溶血。

8.2离心时间不宜过长过短,速度不宜过快过慢,以防止假阳性或假阴性结果。

8.3在有效期内使用,出现浑浊或变色不能使用。

9.临床意义:

输血是治疗与抢救生命的重要措施。输血前必须检查血型,选择血型相同的供血者,进行交叉配血完全相和才能输血。

(二)玻片法

1.取洁净玻版或白瓷专用蜡笔划格,依次标明A、B、O。

2.按标记滴加相应的标准红细胞各一滴。

3.滴加被检血清各一滴。

4.不断转动玻片使之充分混匀,置室温15min后观察结果。

5.结果观察:方法同上。

【正反定型结果不一致的解决办法】

如发现ABO正反定型结果不一致,首先要重复做试验一次。严格执行操作规程,使用质量合格的试剂以及细心观察结果,可解决明显的问题,对一些疑难问题必须请示上级主管,并进一步检查。初步的检查步骤如下。

1.另从受检者采取1份新鲜血液标本,这样可以纠正因污染或搞错标本造成的不符合。

2.将红细胞洗涤数次,配成5%盐水细胞悬液,用抗A、抗B、抗A1、抗A+B及抗H做试验,

可以得到其它有用的信息。

3.对受检红细胞作直接抗人球蛋白试验,如果呈阳性,表示红细胞已被抗体致敏。

4.用A1、A2、B、O红细胞及自身红细胞检查受检血清。如果怀疑是抗I,用O型(或ABO

相合的)脐血红细胞检查。

5.如果试验未见凝集,应将细胞及血清试验至少在室温和4℃放置30min,用显微镜检查

核实。

6.如疑为A抗原或B抗原减弱,则可将受检红细胞与抗A或抗B血清作吸收及放散试验,

以受检者唾液作A、B、H血型物质测定。后者只对80%HAB分泌型的人有用。

7.如试验结果红细胞呈缗钱状排列,加等渗盐水1滴混匀,往往可使缗钱状现象消失。应

注意不应先加盐水1滴于受检者血清中,再加试剂红细胞做试验,以免血清中抗体被稀释。

8.如受检者为A型血而疑为有类B抗原存在时,可用下列方法进行鉴别。

(1)观察细胞与抗A及抗B凝集强度与抗A的反应要比抗B反应强。这种区别用于玻片法做试验更为明显。

(2)用受检者红细胞与自身血清做试验,血清中的抗B不凝集自身红细胞上的类B抗原。(3)检查唾液中是否有A、B物质,如果是分泌型可检出A物质或(和)B物质。

(4)核对患者的诊断。类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌革兰氏阴性杆菌感染有关。9.如发现多凝集现象,应考虑由遗传产生的Cad抗原活性、被细菌酶激活的T或TK受体、

或产生机制不太明了的Tn受体所引起。多凝集红细胞具有以下特点。

(1)被人和许多家兔的血清凝集。

(2)能与大多数成年人的血清凝集,不管有无相应的同种抗体。

(3)不被脐带血清凝集。

(4)通常不与自身的血清凝集。

(5)如有条件可用外源凝集素加以鉴别。

参考文献:全国临床检验操作规程(第3版)

Rh(D)血型鉴定

1.测定原理:

从理论上讲人类红细胞上有Rh抗原应有C、D、E、c、d、e 6种,但目前尚未发现抗d,因此也未肯定d抗原,故RH抗原主要有5种。Rh血型形成的天然性抗体极少,主要是免疫性抗体,已知有抗C、抗D、抗E、抗c抗e等5种。抗D抗体是Rh血型系统中最常见的抗体。RH抗体有完全抗体和不完全抗体两种,完全抗体在抗体受抗原刺激初期出现,一般IGM型。集体再次受抗原刺激则产生不完全抗体,属IgG型。RH抗体主要是不完全抗体,可分为18个型别。在临床上,应D抗原的抗原性最强,出现频率高,临床意义又较大,故一般只做D抗原的血型鉴定。

利用抗原抗体反应的原理,根据抗D抗体与对应红细胞表面的抗原的凝集反应,区分RhD阳性和RhD阴性。

2.标本要求:

2.1抽取受血者静脉血3-4ml,于EDTA-Na2抗凝的试管中。

2.2受血者和供血者的血液样本必须密封,每次输血后,2-6℃保存7天。

3.试剂

3.1抗D血清(IgM+IgG):美国进口,国内分装。

3.2保存条件:2-8℃保存2年

3.3使用条件:使用前试剂室温预0.5小时。

4.仪器和材料:

4.1血库专用离心机、37℃水浴箱。

4.2试管架、试管、吸管等。

5.操作程序:

5.1制备RBC悬液:试管中加盐水1ml,压积RBC40ul,混合均匀。

(一)试管法

5.2取试管1支,抗D2滴。

5.3加样:在试管中分别加RBC悬液2滴,摇匀。

5.4离心:将试管放入专用离心机中离心,3400rpm转15秒,离心后判读结果。

6.结果判定:

阳性反应:出现红细胞凝集为RhD阳性

阴性反应:红细胞不出现凝集为RhD阴性

(二)玻片法

1、取清洁玻片1张,滴加抗Rh(D)血清,再加受检者红细胞悬液1滴,混匀。

2、将玻片轻轻转动,使血清与细胞充分混匀,连续约1-5min,肉眼观察有无凝集反映,也可以用低倍镜观察结果。

六、结果判断

凝集为阳性

不凝集为阴性

【注意事项】:

1试管、滴管和玻片必须清洁干燥,防止溶血。

2离心时间不宜过长过短,速度不宜过快过慢,以防止假阳性或假阴性结果。

3若为阴性结果,需在37℃孵育15-30分钟,然后再离心观察结果。

4在有效期内使用,出现浑浊或变色不能使用。

【临床意义】:

输血是治疗与抢救生命的重要措施。输血前必须检查血型,选择血型相同的供血者,进行交叉配血完全相和才能输血。

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