常用溶液配方-例如,TAE TBE等
玻璃器皿的洗涤
(一)、浸泡
新瓶使用前应先用自来水简单刷洗,然后用稀盐酸溶液(5%)浸泡过夜;培养后的玻璃器皿用后要立即浸入清水中;注意:让水能完全进入瓶皿中,不应留有气泡。
(二)、刷洗
浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗涤剂洗涤(宜选用软毛刷和优质的洗涤剂,如高级洗衣粉或洗洁精),绝对不能使用含沙粒的去污粉!洗刷时特别注意洗刷瓶角部位。
(三)、浸泡
器皿要充满清洁液,勿留气泡。浸泡时间不应少于6小时;一般应浸泡过夜。
清洗液配方:
【强液】重铬酸钾63g
浓硫酸1000ml
蒸馏水200L
【次强液】重铬酸钾120g
浓硫酸200ml
蒸馏水1000ml
【弱液】重铬酸钾100g
浓硫酸100ml
蒸馏水100ml
矽酸钠洗液;
使用比较安全,可以代替清洗液,但价格较贵。
先配制成100Χ贮存液:矽酸钾80g,偏磷酸钠9g,加热溶解在1000ml蒸馏水中。使用时,用蒸馏水100倍稀释。
(四)、冲洗
刷洗和浸酸后都必须用水充分冲洗,使之不留任何残迹。冲洗宜用洗涤装置,以保证冲洗效果,如用手工操作,每瓶都得用水灌满,倒掉,重复十次以上,最后再用蒸馏水漂洗2~3次,凉干备用。
5×TBE的配方:54gTris,27.5g硼酸,20ml0.5MEDTA,加蒸馏水至1000ml,用时稀释10倍即成0.5×TBE
TE(PH值8.0) :1 mol/l Tris.Hcl(PH值8.0)5ml ,0.5mol/l EDTA(PH值8.0)1ml,定容至500ml 50×TAE:242g Tris碱,57.1ml冰乙酸,100 ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0),补足1L 。
10×TAE:48.4 g Tris碱,11.42ml冰乙酸,20 ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0),补足1L 。
TE缓冲液:10 mmo/L Tris·Cl (pH8.0),1 mmol/L EDTA (pH8.0)。高压灭菌后储存于4℃冰箱中。
100xTE缓冲液:1mo/L Tris·Cl (pH8.0)60.6g,100mmol/L EDTA (pH8.0)18.6g。HCL调节Ph,高压灭菌后储存于4℃冰箱中。
TBE是核酸电泳时的缓冲液,它的配方为
5×TBE缓冲液(Tris-硼酸): 配制1000 ml 5×TBE缓冲液方法:Tris 54 g,27.5g硼酸,20 ml 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)。加去离子水后搅拌溶解,将溶液定容至1 L后.调pH 8.0,高温高压灭菌,4℃保存.
TE是溶解核酸的及之后保存核酸的缓冲液,说白点就是溶解DNA用的。它的配方为:10 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM EDTA
TE:10mM Tris-HCl(pH 8.0),1mM EDTA(pH 8.0)。1M Tris-HCl(pH 8.0)1ml,0.5M EDTA(pH 8.0)0.2ml,加ddH2O至100ml。15 lbf/in2高压湿热灭菌20min,4℃保存备用。
Tris-HCl :控制溶液的PH。EDTA是一种Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂,可以抑制DNase 的活性,防止DNA被降解。总的来讲就是质粒DNA提取的一种缓冲液。
5×TBE:Tris 碱54g,硼酸27.5g,EDTA-Na2?2H2O 4.65g,加ddH2O 至1000ml。15 lbf/in2高压湿热灭菌20min,4℃保存备用。
TBE是一种电泳缓冲液,同类的还有TAE和TPE。B指的是硼酸盐,A是EDTA,P是磷酸盐。选择那种要看是什么样的DNA以及你的习惯啦。