质粒载体介绍(质粒基本特性和种类及标记基因)

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质粒载体介绍(质粒基本特性和种类及标记基因)2010-01-25 13:25:29 来源:易生物实验浏览次数:6084 网友评论 0 条

一、质粒的基本特性

二、标记基因

三、质粒载体的种类

关键词:质粒载体质粒载体标记基因

一、质粒的基本特性

1.质粒的复制

通常一个质粒含有一个与相应的顺式作用控制要素结合在一起的复制起始区(整个遗传单位定义为复制子)。在不同的质粒中,复制起始区的组成方式是不同的,有的可决定复制的方式,如滚环复制和θ复制。在大肠杆菌中使用的大多数载体都带有一个来源于 pMB1 质粒或 ColE1 质粒的复制起始位点。图

3-1 是其复制其始示意图。

在复制时,首先合成前 RNAⅡ,即前引物,并与 DNA 形成杂交体;而后RNase H 切割前 RNAⅡ,使之成为成熟的 RNAⅡ,并形成三叶草二级结构,该引物引导质粒的复制。形成的 RNAⅠ可控制 RNAⅡ形成二级结构,同时Rop 增强 RNAⅠ的作用,从而控制质粒的拷贝数。削弱 RNAⅠ和 RNAⅡ之间相互作用的突变,将增加带有 pMB1 或(ColE1)复制子的拷贝数。

图 3-1 带 pMB1(或 ColE1)复制起点的质粒在复

制起始阶段所产生的转录的方向及其粗略大小。

2.质粒的拷贝数

质粒拷贝数分为严谨型与松驰型。严谨型质粒每个细胞中拷贝数有限,大约1 ~几个;松驰型质粒拷贝数较多,可达几百。表 5-1 就是不同类的质粒与复

制子及拷贝数的大致关系。

表 3-1 :质粒载体及其拷贝数

质粒 复制子 拷贝数

pBR322 及其衍生质粒 pMB1 15~20

pUC 系列质粒及其衍生质

突变的 pMB1 500~700

pACYC 及其衍生质粒 p15A 10~212

pSC101 及其衍生质粒 pSC101 ~5

ColE1 ColE1 15~20

pUC 系列质粒的复制单位来自质粒 pMB1 ,但其拷贝数较高。 pMB1 质粒的复制并不需要质粒编码的功能蛋白,而是完全依靠宿主提供的半衰期较长的酶(DNA 聚合酶Ⅰ,DNA 聚合酶Ⅲ),依赖于 DNA 的 RNA 聚合酶,以及宿主基因dnaB 、 dnaC 、 dnaD 和danZ 的产物。因此,存在抑制蛋白质合成并阻断细菌染色体复制的氯霉素或壮观霉素等抗生素时,带有 pMB1(或ColE1)复制子的质粒将继续复制,最后每个细胞中可积聚2~3 千个质粒。3.质粒的不相容性

两个质粒在同一宿主中不能共存的现象称质粒的不相容性,它是指在第二个质粒导入后,在不涉及 DNA 限制系统时出现的现象。不相容的质粒一般都利用同一复制系统,从而导致不能共存于同一宿主中。两个不相容性质粒在同一个细胞中复制时,在分配到子细胞的过程中会竞争,随机挑选,微小的差异最终被放大,从而导致在子细胞中只含有其中一种质粒。而不相容群指那些具有不相容性的质粒组成的一个群体,一般具有相同的复制子。在大肠杆菌中现已发现 30 多个不相容群,如 ColE1 和 pMB1 , pSC101 和 p15A。

4.转移性

质粒具转移性。它是指在自然条件下,很多质粒可以通过称为细菌接合的作用转移到新宿主内。它需要移动基因mob,转移基因tra ,顺式因子bom 及其内部的转移缺口位点 nic。

二、标记基因

按其用途可将标记基因分为选择标记基因和筛选标记基因。选择标记用于鉴别目标 DNA (载体)的存在,将成功转化了载体的宿主挑选出来,筛选标记可用于将特殊表型的重组子挑选出来。

(一)选择标记

抗生素抗性基因是目前使用最广泛的选择标记。

1.氨苄青霉素抗性基因(Ampicillin resistance gene, amp r)

氨苄青霉素抗性基因是基因操作中使用最广泛的选择标记,绝大多数在大肠杆菌中克隆的质粒载体带有该基因。青霉素可抑制细胞壁肽聚糖的合成,与有关的酶结合并抑制其活性,抑制转肽反应。氨苄青霉素抗性基因编码一个酶,该酶可分泌进入细菌的周质区,抑制转肽反应并催化β-内酰胺环水解,从而解除了氨苄青霉素的毒性。青霉素是一类化合物的总称,其分子结构由侧链 R-CO- 和主核 6-氨基青霉烷酸(6-APA)两部分组成。在 6-APA 中有一个饱和的噻唑环(A)和一个β-内酰胺环, 6-APA 为由 L- 半脱氨酸和缬氨酸缩合成的二肽。2.四环素抗性基因(Tetracycline resistance gene,tet r)

四环素可与核糖体 30S 亚基的一种蛋白质结合,从而抑制核糖体的转位。四环素抗性基因编码一个由 399 个氨基酸组成的膜结合蛋白,可阻止四环素进入细胞。 pBR322 质粒除了带有氨苄青霉素抗性基因外,还带有四环素抗性基因。3.氯霉素抗性基因(chloramphenicol resistance gene, Cm r, cat)氯霉素可与核糖体 50S 亚基结合并抑制蛋白质合成。目前使用的氯霉素抗性基因来源于转导性 P1 噬菌体(也携带 Tn9)。cat 基因编码氯霉素乙酰转移酶,一个四聚体细胞质蛋白(每个亚基 23kDa)。在乙酰辅酶 A 存在的条件下,该蛋白催化氯霉素形成氯霉素羟乙酰氧基衍生物,使之不能与核糖体结合。4.卡那霉素和新霉素抗性基因(kanamycin/neomycin resistance gene, kan r, neo r)

卡那霉素和新霉素是一种脱氧链霉胺氮基糖苷,都可与核糖体结合并抑制蛋白质合成。卡那霉素和新霉素抗性基因实际就是一种编码氨基糖苷磷酸转移酶(APH(3')-Ⅱ, 25kDa)的基因,氨基糖苷磷酸转移酶可使这两种抗生素磷酸化,从而干扰了它们向细胞内的主动转移。在细胞中合成的这种酶可以分泌至外周质腔,保护宿主不受这些抗生素的影响。

5.琥珀突变抑制基因 supF

在基因的编码区中,若某个密码子发生突变后变成终止密码子,则称这样的突变为赭石突变(突变为 UAA),或琥珀突变(突变为 UAG),或乳白突变(突变为 UGA)。supF 基因编码细菌的抑制性 tRNA ,可在 UAG 密码子上编译酪氨酸。如果在某一宿主中含具琥珀突变的 tetr 基因和 ampr 基因,只有当宿主含有 supF 基因时才会对 Amp 和 Tet 具有抗性。相应的,supE 基因在UAG 密码子上编译谷氨酰氨。由于目前所用的标记基因使用方便,因此用这类标记的载体较少。

6.其它

还有一些正向选择标记,表达一种使某些宿主菌致死的基因产物,而含有外源基因片段插入后,该基因便失活。如蔗糖致死基因SacB ,来自淀粉水解芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),编码果聚糖蔗糖酶。在含蔗糖的培养基上sacB 基因的表达对大肠杆菌来说是致死的,因此该基因可用于插入失活筛选重组子。

(二)筛选标记

筛选标记主要用来区别重组质粒与非重组质粒,当一个外源 DNA 片段插入到一个质粒载体上时,可通过该标记来筛选插入了外源片段的质粒,即重组质粒。1.α-互补(α-complementation)

α-互补是指lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶(β -galactosidase ,由 1024 个氨基酸组成)阴性的突变体之间实现互补。α-互补是基于在两个不同的缺陷β-半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。大肠杆菌的乳糖lac 操纵子中的lacZ 基因编码β-半乳糖苷酶,如果lacZ 基因发生突变,则不能合成有活性的β-半乳糖苷酶。例如,lacZ△M15 基因是缺失了编码β-半乳糖苷酶中第 11-41 个氨基酸的lacZ 基因,无酶学活性。对于只编码 N-端 140 个氨基酸的lacZ 基因(称为lacZ'),其产物也没有酶学活性。但这两个无酶学活性的产物混合在一起时,可恢复β-半乳糖苷酶的活性,实现基因内互补。

在lacZ' 编码区上游插入一小段 DNA 片段(如 51 个碱基对的多克隆位点),不影响β-半乳糖苷酶的功能内互补。但是,若在该 DNA 小片段中再插入

一个片段,将几乎不可避免地导致产生无α-互补能力的β-半乳糖苷酶片段。利用这一互补性质,可用于筛选在载体上插入了外源片段的重组质粒。在相应的载体系统中,lacZ△M15 放在 F 质粒上, 随宿主传代;lacZ' 放在载体上, 作为筛选标记(图 3-2)。相应的受体菌有 JM 系列、 TG1 和 XL1-Blue ,前二者均带有 D (lac - proAB)F'[ proAB + lac Iq lacZ D M15] 基因型。其中lac I 为lac 阻抑物的编码基因,lac Iq 突变使阻抑物产量增加,防止lacZ 基因渗漏表达。

lacZ 基因是乳糖lac操纵子中编码β-半乳糖苷酶的基因,乳糖及其衍生物可诱导其表达。乳糖既是lac 操纵子的诱导物,也是作用的底物。异丙基-β-D- 硫代半乳糖苷(IPTG)是乳糖的衍生物,可作为lac 操纵子的诱导物,但不能作为反应的底物; 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-gal)可作为lac 操纵子的底物,但不能作为诱导物。底物 X-gal 还可充作生色剂,被β-半乳糖苷酶分解后可产生兰色产物,可使菌落或噬菌斑呈兰色。

2.插入失活

通过插入失活进行筛选的质粒主要有 pBR322 ,该质粒具有四环素抗性基因(tet r)和氨苄青霉素抗性基因(amp r)两种抗性标记。当外源 DNA 片段插入tet r 基因后,导致tet r 基因失活,变成只对氨苄青霉素有抗性。这样就可通过对抗生素是双抗还是单抗来筛选是否有外源片段插入到载体中。

三、质粒载体的种类

(一)克隆载体

克隆载体主要用于扩增或保存 DNA 片段,是最简单的载体。

1.pBR322

pBR322 质粒的大小为 4361bp , GenBank 注册号为 V0lll9 和 J01749 ,含有 30 多个单一位点,具有四环素抗性基因(tetr)和氨苄青霉素抗性基因(ampr),其质粒复制区来自 pMB1 (如图 3-3)。目前使用广泛的多质粒载体几乎都是由此发展而来的。利用四环素抗性基因内部的 BamHⅠ位点来插入外源 DNA 片段,可通过插入失活进行筛选。

2.pUC18 和 pUC19

pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ,是最常用的质粒载体,其结构组成紧凑,几乎不含多余的 DNA 片段,GenBank注册号为 L08752(pUC18)和X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而来,其中 lacZ (MSC)来自M13mp18/19 图 3-4 是其质粒图谱。

这两个质粒的结构几乎是完全一样的,只是多克隆位点的排列方向相反。这些质粒缺乏控制拷贝数的rop 基因,因此其拷贝数达 500-700 。 pUC 系列载体含有一段lacZ 蛋白氨基末端的部分编码序列,在特定的受体细胞中可表现α-互补作用。因此在多克隆位点中插入了外源片段后,可通过α-互补作用形成的蓝色和白色菌落筛选重组质粒。

图 3-4 : pUC18/19 质粒图谱

3.pUC118 和 pUC 119

由 pUC18/19 增加了一些功能片段改造而来,大小为 3162bp , GenBank 注册号为 U07649(pUC118)和 U07650(pUC119)。相当于在 pUC18/19 中增加了带有 M13 噬菌体 DNA 合成的起始与终止以及包装进入噬菌体颗粒所必需的顺式序列。

4.pGEM-3Z/4Z

pGEM-3Z/4Z由 pUC18/19 增加了一些功能片段改造而来,大小为 2.74kb, GenBank 注册号为 X65304(pGEM-3Z, 2743bp)和 X65305(pGEM-4Z, 2746)。与 pUC18/19 相比,在多克隆位点的两端添加了噬菌体的转录启动子,如 Sp6 和 T7 噬菌体的启动子。 pGEM-3Z 和 pGEM-4Z 的差别在于二者互换了两个启动子的位置。

5.多功能质粒载体

在上述载体的基础上,人们设计出一些多功能的质粒载体,这类质粒载体综合了以上质粒的特点。除了作为质粒载体基本要素外,综合了上述功能要素,如

多克隆位点、α-互补、噬菌体启动子和单链噬菌体的复制与包装信号。典型的这类质粒有 pBluescriptⅡKS(±),这类质粒一般由 4 个质粒组成一套系统,其差别在于多克隆位点方向相反(根据多克隆位点两端KpnⅠ和SacⅠ的顺序,用 KS 或 SK 表示),或单链噬菌体的复制启始方向相反(或者说,引导DNA 双链中不同链合成单链 DNA ,用 + 或 - 表示), pBluescriptⅡKS(+)的 GenBank注册号为 X52327 。 pBluescriptⅡKS(±)的多克隆位点与pUC18/19 的不同,且使用 f1 噬菌体的复制与包装信号序列,质粒图谱如图3-5 。

6.表达载体

该类载体是在常规克隆载体的基础上衍生而来的,主要增添了强启动子,以及有利于表达产物分泌、分离或纯化的元件.

色彩与视觉:色彩三要素及色彩对比

色彩与视觉:色彩三要素及色彩对比 (一)色相对比的基本类型 两种以上色彩组合后,由于色相差别而形成的色彩对比效果称为色相对比。它是色彩对比的一个根本方面,其对比强弱程度取决于色相之间在色相环上的距离(角度),距离(角度)越小对比越强,反之则对比越强。 1.零度对比 (1)无彩色对比无彩色对比虽然无色相,但它们的组合在实用方同很有价值。如黑与白、黑与灰、中灰与浅灰,或黑与白与灰、黑与深灰与浅灰等。对比效果感觉大方、庄重、高雅而富有现代感,但也易产生过于素净的单调感。 (2)无彩色与有彩色对比如黑与红、灰与紫,或黑与白与黄、白与灰与蓝等。对比效果感觉既大方又活泼,无彩色面积大时,偏于高雅、庄重,有彩色面积大时活泼感加强。 (3)同种色相对比一种色相的不同明度或不同纯度变化的对比,俗称姐妹色组合。如蓝与浅蓝(蓝+白)色对比,橙与咖啡(橙+灰)或绿与粉绿(绿+白)与墨绿(绿+黑)色等对比。对比效果感觉统一、文静、雅致、含蓄、稳重,但也易产生单调、呆板的弊病。 (4)无彩色与同种色相比如白与深蓝与浅蓝、黑与桔与咖啡色等对比,其效果综合了(2)和(3)类型的优点。感觉既有一定层次,又显大方、活泼、稳定。 2.调和对比 (1)邻接色相对比色相环上相邻的二至三色对比,色相距离大约30度左右,为弱对比类型。如红橙与橙与黄橙色对比等。效果感觉柔和、和谐、雅致、文静,但也感觉单调、模糊、乏味、无力,必须调节明度差来加强效果。

(2)类似色相对比色相对比距离约60度左右,为较弱对比类型,如红与黄橙色对比等。效果较丰富、活泼,但又不失统一、雅致、和谐的感觉。 (3)中差色相对比色相对比距离约90度左右,为中对比类型,如黄与绿色对比等,效果明快、活泼、饱满、使人兴奋,感觉有兴趣,对比既有相当力度,但又不失调和之感。 3.强烈对比 (1)对比色相对比色相对比距离约120度左右,为强对比类型,如黄绿与红紫色对比等。效果强烈、醒目、有力、活泼、丰富,但也不易统一而感杂乱、刺激、造成视觉疲劳。一般需要采用多种调和手段来改善对比效果。 (2)补色对比色相对比距离180度,为极端对比类型,如红与蓝绿、黄与蓝紫色对比等。效果强烈、眩目、响亮、极有力,但若处理不当,易产生幼稚、原始、粗俗、不安定、不协调等不良感觉。 (二)明度对比的基本类型 两种以上色相组合后,由于明度不同而形成的色彩对比效果称为明度对比。它是色彩对比的一个重要方面,是决定色彩方案感觉明快、清晰、沉闷、柔和、强烈、朦胧与否的关键。 其对比强决于色彩在明度等差色级数,通常把1——3划为低明度区,8——10划为高明度区,4——7划为中明度区。 (图)在选择色彩进行组合时,当基调色与对比色间隔距离在5级以上时,称为长(强)对比,3——5级时称为中对比,1——2级时称为短(弱)对比。据此可划分为九种明度对比基本类型。 (1)高长调如10:8:1等,其中10为浅基调色,面积应大,8为浅配合色,面积也较大,1为深对比色,面积应小。该调明暗反差大,感觉刺激、明快、积极、活泼、强烈。

色彩的特性

色彩的特性 一、色彩的情感与象征 色彩本身并无固定的情感和象征意义,但由于色彩作用于人的感官,往往会引起人们的联想和感情的共鸣,从而产生一系列心理活动给色彩披上情感的轻纱,并由此迸发出对色彩的好恶感受和象征意义。因此,构成色彩的情感和象征意义的因素,主要来源于人们的社会生活和文化生活,来源于历史文化的影响和遗传的影响。 我国古代服装色彩受到“阴阳五行论”的影响,长期以来黄色最为高贵,象征中央。红色代表南方,青色代表东方,白色代表西方,黑色代表北方。隋代开始,以服装的颜色区分官员的等级,紫色和白袍为五品以上官员的常服,六品以下穿绯衫。唐代制定官员的服色为:“三品以上服紫,五品以上服绯,六品、七品服绿,八品、九品服青。”在中国帝王时代,黄色是帝王的专用色,是皇权的象征色,黄龙是帝王的徵记,诏书称“誊黄”,御车称“黄屋”,出巡用黄旗。 同样是黄色,却有不同的情感和象征。黄色迎春花,由于花开最早,迎来百花齐放的春天。迎春花的黄色和油菜花的黄色,给人以清新、舒适之感。成熟的谷物,称为金黄色,象征丰收与欢乐。 黄色具有浓厚的宗教气息,古代道士的黄色服,朝山进香的黄色香袋,佛教的建筑、服装及其装饰都用黄色。在这里,黄色的意义是“超世脱俗”。 在欧洲,由于人们对宗教的信仰和崇敬,黄色象征着太阳与光明。希腊传说中的美神穿黄色服装,罗马结婚的礼服为黄色,在希腊、罗马黄色象征吉祥;巴基斯坦民族则厌烦黄色,因为他们联想到婆罗门教的影响;阿拉伯人也讨厌黄色,因为他们把黄色与不毛之地的沙漠联在一志;叙利亚却把黄色象征死亡。等等。 中国对红色有着特殊的情感。由于红色具有兴奋、温暖、热情、喜庆、欢乐、吉祥等感情象征,因而每逢佳节张灯结彩必有红色,婚庆喜事都有红色。红色又象征威武、力量、搏斗、光荣、胜利等意义。无产阶级革命的兴起,红色又具有革命的新意。在我国,解放军的前身称为“红军”,我们的国旗、党旗的红色是革命、胜利的象征。 在印度,红色表示生命活力、朝气、热烈。印度妇女额头上点红印,不仅不装饰美,而且表示三层含义;一是表示她已婚;二是表示她的丈夫健在;三是表示她在家庭平安、吉祥。日本的国旗是红与白,红与白是日本人宗教信仰的概念。 红、橙、黄称为暖色调,红的波长0.76-0.63μm,是一种刺激性较强的色光。人们看到红色,可以联想到阳光、烈火,有“热”感;黄色的波长为0.6-0.57μm,是一种温和的暖色;橙色的波长在红与黄之间,“热”感不如红色,但比黄色“热”

质粒载体的发展

质粒载体的发展 质粒载体即,在由限制性核酸内切酶修饰过的质粒DNA序列中插入外源的目的基因,以质粒为载体,将目的基因通过转化或转导的方法导进宿主细胞,进行重组、筛选、扩增的过程。 目录

的易感或抗性、产生限制酶、产生稀有的氨基酸和毒素、决定毒力、降解复杂有机分子,以及形成共生关系的能力和在生物界内转移DNA的能力。 编辑本段质粒的基本特征 质粒(plasmid)是细菌或细胞染色质以外的,能自主复制的,与细菌或细胞共生的遗传成分。其特点如下: 是染色质外的双链共价闭合环形DNA (covalently closed circuar DNA,cccDNA),可自然形成超螺旋结构,不同质粒大小在2-300kb之间,<15kb的小质粒比较容易分离纯化,>15kb 的大质粒则不易提取。 能自主复制,是能独立复制的复制子 (autonomous replicon)。一般质粒DNA复制的质粒可随宿主细胞分裂而传给后代。按质粒复制的调控及其拷贝数可分两类:严紧控制(stringent control)型质粒的复制常与宿主的繁殖偶联,拷贝数较少,每个细胞中只有1个到十几个拷贝;另一类是松弛控制(relaxed control)型质粒,其复制宿主不偶联,每个细胞中有几十到几百个拷贝。每个质粒DNA上都有复制的起点,只有ori能被宿主细胞复制蛋白质识别的质粒才能在该种细胞中复制,不同质粒复制控制状况主要与复制起点的序列结构相关。有的质粒的可以整合到宿主细胞染色质DNA中,随宿主DNA复制,称为附加体,例如细菌的性质粒就是一种附加体,它可以质粒形式存在,也能整合入细菌的DNA,又能从细菌染色质DNA上切下来。F因子携带基因编码的蛋白质能使两个细菌间形成纤毛状细管连接的接合(conjugation),通过这细管遗传物质可在两个细菌间传递。 质粒对宿主生存并不是必需的 这点不同于线粒体,线粒体DNA也是环状双链分子,也有独立复制的调控,但线粒体的功能是细胞生存所必需的。线粒体是细胞的一部分,质粒也往往有其表型,其表现不是宿主生存所必需的,但也不妨碍宿主的生存。某些质粒携带的基因功能有利于宿主细胞的特定条件下生存,例如,细菌中许多天然的质粒带有抗药性基因,如编码合成能分解破坏四环素、氯霉素、氨芐表霉素等的酶基因,这种质粒称为抗药性质粒,又称R质粒,带有R质粒的细菌就能在相应的抗生素存在生存繁殖。所以质粒对宿主不是寄生的,而是共生的。医学上遇到许多细菌的抗药性,常与R质粒在细菌间的传播有关,F质粒就能促使这种传递。 现在分子生物学使用的质粒载体都已不是原来细菌或细胞中天然存在的质粒,而是经过了许多的人工的改造。从不同的实验目的出发,人们设计了各种不同的类型的质粒载体,近年来发展很快,新的有特定用途的质

基因工程原理讲义:基因克隆的质粒载体

第六讲基因克隆的质粒载体 中国科学院遗传与发育生物学研究所 2017年8月

基因克隆的质粒载体 一、导言 1.质粒是一类引人注目的亚细胞有机体 其结构比病毒还要简单,既无蛋白质外壳,也无细胞外生命周期,只能在寄主细胞内增殖,并随着寄主细胞的分裂而被遗传下去。2.质粒的类型多种多样 F质粒:F因子或性质粒(Sex plasmid),它能够使寄主染色体上的基因与F因子(F factor)一道转移到原先不存在该质粒的 寄主受体细胞中去。 R质粒:通称抗药性因子(Resistant factor, R factor),编码一种或数种抗菌素抗性基因,并能将此抗性转移到缺乏该质粒 的适宜的受体细胞中去。 Col质粒:所谓Col质粒,即是一种产生大肠杆菌素的因子,编码控制大肠杆菌素合成的基因。大肠杆菌素可使不带Col 质粒的亲缘关系密切的细菌菌株致死。 3.质粒载体 70年代在实验室构建的一类最普遍使用的基因克隆载体。

二、质粒的一般特性 1.质粒DNA(细菌质粒定义) *1.大肠杆菌的质粒是独立于寄主染色体以外的自主复制的共价、闭合、环形的双链DNA分子(covalently closed circular DNA, cccDNA)。除了酵母的杀伤质粒(Killer plasmid)是RNA质粒外,所有的质粒都是质粒DNA。但是质粒DNA的复制又必须依赖 于寄主提供核酸酶及蛋白质。 *2.质粒DNA分子大小 文献中有3种说法:小的仅有103KD,仅能编码2-3种蛋白质; 大的可达105KD,两者相差上百倍。 1Kb~200Kb (Sambrok et al.) 5Kb~400Kb (Lehninger) MD(megadaltons)=106D (兆道尔顿) 1.5Kb≈1MD *3.质粒DNA与寄主染色体DNA间的关系 一般情况下,质粒DNA可持续地处于寄主染色体外的游离状

常见医用塑料品种的介绍-

常见医用塑料品种的介绍 与玻璃和金属材料相比,塑料的主要特点: 成本较低,可以不必消毒重复使用,适合用作一次性医疗器械的生产原料;加工简单, 利用其塑性可以加工成各种各样有用的结构,而金属和玻璃很难制造成复杂结构的制 品; 坚韧,富有弹性,不象玻璃那样易破碎;具有良好的化学惰性和生物安全性。 这些性能优势使塑料在医疗器材中具有广泛应用,主要包括聚氯乙烯(PVC),聚乙 烯(PE)、聚丙烯(PP)、聚苯乙烯(PS)、聚碳酸酯(PC )、ABS、聚氨酯、聚酰胺、热塑性弹性体、聚砜和聚醚醚酮等。共混可以改善塑料的性能,使不同树脂的最佳性能体现出来,如聚碳酸酯/ABS、聚丙烯/弹性体等共混改性。 一般的塑料合成以后,从大石化厂的合成塔出来,都是面粉状的粉末,不能用来直接生产产品,这就是人们常说的从树汁中提取出脂的成份是一样的,也称为树脂,也叫粉料,这是一种纯净的塑料,它流动性差,热稳定性低,易老化分解,不耐环境老化。人们为了改善以上缺陷,在树脂粉中加入热稳定剂、抗老化剂、抗紫外光剂、增塑剂等,经过造粒改性,增加它的流动性,生产出适应各种加工工艺的、有特殊性能的、不同牌号的塑料品种。所以,同一种塑料品种有很多牌号,按照加工方法来分,有注塑级的,有挤出级的,有吹膜级的;按照性能来分,有高刚性的,有增韧的,等等。医疗器械厂家普遍使用的塑料材料都是经过改性可以直接使用的塑料颗粒。对于市场中没有的具有特殊性能的产品,器械厂可以引进造粒生产线,通过不同的配方设计,加工生产塑料颗粒。 由于要与药液接触或与人体接触,医用塑料的基本要求是具有化学稳定性和生物安全性。简单来说,塑料材料中的组成成分不能析出进入药液或人体,不会引起组织器官的毒性和损伤,对人体是无毒无害的。为了确保医用塑料的生物安全性,通常在市面销售的医用塑料都是通过医疗权威部门的认证和检测,并且明确告知使用者哪些牌号是医疗级的。 美国的医用塑料通常会通过FDA 认证和USP VI 生物检测,我国医疗级的塑料通常经过山东医疗器械检测中心的检测。目前国内还有相当一部分医用塑料材料未经严格意义上的生物安全认证,但随着法规的逐渐健全,这些情况会越来越改善。 根据器械制品的结构和强度要求,我们来选择合适的塑料类型和恰当的牌号,并确定材料的加工工艺。这些性能包括加工性能、力学强度、使用成本、装配方式、可灭菌 现将常用的几种医用塑料加工性能和物理化学性能进行介绍。 性 等。 1.聚氯乙烯PVC 5.ABS 2.聚乙烯PE 6.聚碳酸酯PC 3.聚丙烯PP7.聚四氟乙烯PTFE 4.聚苯乙烯(PS)和K树脂

所有质粒载体汇总

酿酒酵母表达载体 pYES2,pYES2/NT,pYES2/CT,pYES3,pYES6, pYCplac22-GFP, 酵母载体pAUR123,pRS303TEF,pRS304, pRS305,pRS306,pY13TEF,pY14TEF pY15TEF, pY16TEF, 酵母基因重组表达载体pUG6, pSH47, 酵母单杂载体pHISi,pLacZi,pHIS2, pGAD424,酵母双杂交系统:酿酒酵母Y187, 酿酒酵母AH109;质粒pGADT7,pGBKT7 ;对照质粒pGBKT7-53 , pGBKT7-lam , pGADT7-T , PCL1,酿酒酵母菌株INVSc1,YM4271, AH109,丫187,丫190, 毕赤酵母表达载体 pPIC9K,pPIC9K-His,pPIC3.5K,pPICZalphaA,B,C,pPICZA,B,C,pGAPZ a A,pAO815,pPIC9k-His,pHIL-S1,pPink hc , 配套毕赤酵母Pichiapink, 毕赤酵母宿主X33, KM71 , KM71H , GS115, 原核表达载体pQE30,31,32,40,60,61,62等原核表达载体,包括pET系列,pET-GST, pGEX 系列(含GST标签),pMAL 系列pMAL-c2x,-c4x,-c4e,-c5x,- p5x,pBAD,pBADHis,pBADmycHis 系列,pQE 系列,pTrc99a,pTrcHis系列, pBV220,221,222,pTXB 系列,pLLP-ompA,pIN-III-ompA (分泌型表达系列),pQBI63 (原核表达带荧光)pET3a, pET 3d, pET 11a, pET 12a, pET 14b, pET 15b, pET 16b, pET 17b, pET 19b, pET 20b, pET 21a,b,d, pET 22b, pET 23a, pET 23b, pET 24a,b, pET 25b, pET 26b, pET 27b, pET 28a,b, pET 29a, pET 30a, pET 31b, pET 32a, pET 35b, pET 38b, pET 39b, pET 40b, pET 41a,b pET 42a, pET 43.1a,b pET 44a, pET 49b pET302,303 pET His,pET Dsb,pET GST,pET Trx pQE2, pQE9 pQE30,31,32, pQE 40 pQE70 pQE80L pQETirs system pRSET-A pRSET-B pRSET-C pGEX4T-1,-2,-3,5x-1,6p-1,6p-2,2tk,3c pBV220,221,222 pTrcHisA,B,C pBAD24,34,43 pBAD HisA,B,C pPi nPoi nt-Xa1,Xa2,Xa3 pMALc2x, p2x pBV220 pGEM Ex1, pGEM7ZF (+) , pTrc99A, pTwin1, pEZZ18 pkk232-8,pkk 233- 3,pACYC184,pBR322,pUC119 pTYB1,pTYB2,pTYB4,pTYB11 pBlueScript SK (+) ,pBlueScript SK (-) pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C,大肠杆菌冷激质粒:pColdI pColdII pColdIII pColdTF原核共表达质粒:pACYCduet-1,pETduet- 1,pCDFduet-1, pRSFduet-1 Takara公司大肠杆菌分子伴侣:pG-KJE8 pGro7 pKJE7 pGTf2 pTf16 大肠杆菌宿主细胞:DH5a JM101 JM103

色彩复习题

单选题: 1.单项选择题(选出下列答案中正确的一项,并将字母填入题目中的括内) 1、色彩三原色是() A.红紫青蓝黄绿B.青蓝柠黄橙红 C.品红青蓝黄绿 D.品红湖蓝柠檬黄答案是:D 色彩三原色是品红湖蓝柠檬黄 2、色彩的基本物理特性( ) A.间色复色补色 B.明度纯度色相。 C.色调固有色环境色 D.色调间色复色 答案是:B 色彩的基本物理特性明度纯度色相。 3、在实际的色彩写生中,色彩的条件因素包括以下方面() A.观察方法和表现技法 B.色感、色温 C.光源色、固有色、环境色 D.间色、复色、原色 答案是:C 在实际的色彩写生中,色彩的条件因素包括以下方面光源色、固有色、环境色4.水彩画需要采用()的着色方法 A.从浅到深 B.从深到浅 C.从暗到亮 D.从深到灰 答案是:A 水彩画需要采用从浅到深的着色方法 5.物体的灰面部分因受光不足显的明度微弱,色彩以()为主,同时受上下左右不同方向的环境色的影响。 A.光源色 B.反光 C.环境色 D.固有色 答案是:D物体的灰面部分因受光不足显的明度微弱,色彩以固有色为主,同时受上下左右不同方向的环境色的影响。 6.在所有的色彩对比关系中,()是最有感情表现力的 A.明度对比 B.冷暖对比 C.色相对比 D.纯度对比 答案是:B在所有的色彩对比关系中,冷暖对比是最有感情表现力的 7.在实际的色彩写生中,光源色、固有色、环境色是色彩的()因素A.对比 B.色感 C.条件 D.间色 答案是:C 在实际的色彩写生中,光源色、固有色、环境色是色彩的条件因素

8、一般情况下的色彩静物写生是将静物摆放成()的观察角度 A.俯视 B.平行透视 C.平视 D.仰视 答案是:A 一般情况下的色彩静物写生是将静物摆放成俯视的观察角度 9、色彩作为客观实体,具有基本的物理特性() A.间色、复色、原色 B.色相、明度、纯度 C.红色、蓝色、黄色 D.冷色、暖色、灰色 答案是:B色彩作为客观实体,具有基本的物理特性色相、明度、纯度 10、在实际的色彩写生中,色彩的条件因素包括以下方面() A.观察方法和表现技法 B.色感、色温 C.光源色、固有色、环境色 D.间色、复色、原色 答案是:C 在实际的色彩写生中,色彩的条件因素包括以下方面光源色、固有色、环境色11、色彩的对比类型包括() A.同类色对比、类饰色对比、补色与补色关系对比 B.意境对比、写实对比 C.厚重对比、轻快对比 D.立体对比、平面对比 答案是:A 色彩的对比类型包括同类色对比、类饰色对比、补色与补色关系对比 12、()是指从静物的前侧面斜视静物,能看到对象三个面。 A.成角透视 B.平行透视 C.仰视 D.俯视 答案是:B 平行透视是指从静物的前侧面斜视静物,能看到对象三个面。 13、照射在物体表面的光线色彩是() A.光源色 B.固有色 C.环境色 D.对比色 答案是:A 照射在物体表面的光线色彩是光源色 14、物体的灰面部分因受光不足显的明度微弱,色彩以()为主,同时受上下左右不同方向的环境色的影响。 A.光源色 B.反光 C.环境色 D.固有色 答案是:D 物体的灰面部分因受光不足显的明度微弱,色彩以固有色为主,同时受上下左

(整理)质粒的分子生物学与质粒载体

第三章质粒的分子生物学与质粒载体 一、填空题 1.基因工程中有3种主要类型的载体:——-------、------------一、-----------. 2.由于不同构型的DNA插入EB的量不同,它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同,SC DNA的泳动速度—----------—,OC DNA泳动速度—---------—,L DNA居中,通过凝胶电泳和EB染色的方法可将不同构型的DNA分别开来。 3.质粒的复制像染色体的复制一样,是从特定的起始点区开始的。然而,质粒的复制可以是—---—向的、或是—----—向的。在杂种质粒中,每个复制子的起点都可以有效地加以使用。但是在正常条件下只有一个起点可能居支配地位。并认为:当某些具有低拷贝数的严紧型质粒与松弛性质粒融合后,在正常情况下—------—的复制起点可能被苯闭。 4.就克隆一个基因(DNA片段)来说,最简单的质粒载体也必需包括三个部分:—-----—、—---------—、—----------------—。另外,一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 5.如果两个质粒不能稳定地共存于同一个寄主细胞中,则属于—---------—群,这是因为它们的——————————所致。 6.质粒拷贝数是指细胞中—------------------------—。 7.复制子由三部分组成:(1)—-----------------—---(2)——-----------————(3)—--------------—。 8.酵母的2μm质粒有------------,可以配对形成哑铃结构。 9.一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后,一部分细胞中已测不出质粒,这种现象叫----------------。 10.pBR322是一种改造型的质粒,它的复制子来源于----——,它的四环素抗性基因来自于—-----------—,它的氨苄青霉素抗性基因来自于—---------—。 11.质粒的消失同染色体基因的突变是不同的,前者不能恢复,后者可以通过—------—恢复该基因的性状。 12.ColEl质粒复制的起始需要三种酶,即—-----------—、一------------和一------。 13.YAC的最大容载能力是—-----------—,BAC载体的最大容载能力是—---------—。 14.pSCl01是一种---------——复制的质粒。 15.把那些没有可检测表型的质粒称为—--------------—。 16.转座子主要由下列部分组成:(1)—-----————————(2)---------------—— (3)—----------------—。

色彩的种类与基本特性

色彩的种类与基本特性 色彩的种类 丰富多样的颜色可以分成两个大类无彩色系和有彩色系: 1.无彩色系无彩色系是指白色、黑色和由白色黑色调合形成的各种深浅不同的灰色。无彩色按照一定的变化规律,可以排成一个系列,由白色渐变到浅灰、中灰、深灰到黑色,色度学上称此为黑白系列。黑白系列中由白到黑的变化,可以用一条垂直轴表示,一端为白,一端为黑,中间有各种过渡的灰色。纯白是理想的完全反射的物体,纯黑是理想的完全吸收的物体。可是在现实生活中并不存在纯白与纯黑的物体,颜料中采用的锌白和铅白只能接近纯白,煤黑只能接近纯黑。无彩色系的颜色只有一种基本性质——明度。它们不具备色相和纯度的性质,也就是说它们的色相与纯度在理论上都等于零。色彩的明度可用黑白度来表示,愈接近白色,明度愈高;愈接近黑色,明度愈低。黑与白做为颜料,可以调节物体色的反射率,使物体色提高明度或降低明度。 2.有彩色系(简称彩色系)彩色是指红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等颜色。不同明度和纯度的红橙黄绿青蓝紫色调都属于有彩色系。有彩色是由光的波长和振幅决定的,波长决定色相,振幅决定色调。 色彩的基本特性 有彩色系的颜色具有三个基本特性:色相、纯度(也称彩度、饱和度)、明度。在色彩学上也称为色彩的三大要素或色彩的三属性。 1.色相色相是有彩色的最大特征。所谓色相是指能够比较确切地表示某种颜色色别的名称。如玫瑰红、桔黄、柠檬黄、钴蓝、群青、翠绿……从光学物理上讲,各种色相是由射人人眼的光线的光谱成分决定的。对于单色光来说,色相的面貌完全取决于该光线的波长;对于混合色光来说,则取决于各种波长光线的相对量。物体的颜色是由光源的光谱成分和物体表面反射(或透射)的特性决定的。 2.纯度(彩度、饱和度)色彩的纯度是指色彩的纯净程度,它表示颜色中所含有色成分的比例。含有色彩成分的比例愈大,则色彩的纯度愈高,含有色成分的比例愈小,则色彩的纯度也愈低。可见光谱的各种单色光是最纯的颜色,为极限纯度。当一种颜色掺人黑、白或其他彩色时,纯度就产生变化。当掺人的色达到很大的比例时,在眼睛看来,原来的颜色将失去本来的光彩,而变成掺和的颜色了。当然这并不等于说在这种被掺和的颜色里已经不存在原来的色素,而是由于大量的掺人其他彩色而使得原来的色素被同化,人的眼睛已经无法感觉出来了。 有色物体色彩的纯度与物体的表面结构有关。如果物体表面粗糙,其漫反射作用将使色彩的纯度降低;如果物体表面光滑,那么,全反射作用将使色彩比较鲜艳。 3.明度明度是指色彩的明亮程度。各种有色物体由于它们的反射光量的区别而产生颜色的明暗强弱。色彩的明度有两种情况:一是同一色相不同明度。如同一颜色在强光照射下显得明亮,弱光照射下显得较灰暗模糊;同一颜色加黑或加白掺和以后也能产生各种不同的明暗层次。二是各种颜色的不同明度。每一种纯色都有与其相应的明度。黄色明度最高,蓝紫色明度最低,红、绿色为中间明度。色彩的明度变化往往会影响到纯度,如红色加入黑色以后明度降低了,同时纯度也降低了;如果红色加白则明度提高了,纯度却降低了。 有彩色的色相、纯度和明度三特征是不可分割的,应用时必须同时考虑这三个因素。 =================================================== 色彩生理理论:色彩的错视与幻觉 当外界物体的视觉刺激作用停止以后,在眼睛视网膜上的影像感觉并不会立刻消失,这种视

查询质粒方法汇总

如何查找质粒图谱之我见——plasmid map, Vector Sequence方法汇总 经常在坛子里看到一些人求助质粒图谱,很多时候我发现其实有些质粒图谱还是很容易找到了,刚开始帮忙查找了下,还公布了一些查找质粒图谱比较好的网站,后来看得多了,很多时候,这样的帖子直接跳过了。今天又看到几个求质粒图谱的帖子,因此决定就查找质粒图谱的方法,写个总结帖子,希望对虫子们有些帮助。这些方法,大部分是自己学习的过程中积累的,也许总结得还不够全面,望其他虫友指正。 方法一:安装软件Vector NT 做分子实验,经常和不同的质粒打交道,了解各种质粒的图谱信息是必需的,invitrogen公司的这款软件绝对是分子生物学虫子们的福音,功能强大、界面美观,使用起来很人性化。后面的很多方法都是基于在这款软件的使用之上,因此个人觉得要想对质粒图谱了解更直观,安装这款软件是非常必要的。而且,一旦安装了这款软件,你就发现这款软件的软件包里面会包括invitrogen公司的所有质粒图谱信息和其他比较常见和经典的质粒图谱。这里就不一一细说,各位虫子可以自己体验下。(这款软件的下载和使用说明书站内很多) 方法二:查找质粒图谱的网站: 这个之前有人求助质粒图谱时,我在回应求助帖里面公布过几个我经常用的网址,估计不是专题,很多人没看到,现在在此重新总结下 1.Vector Database 地址:https://https://www.360docs.net/doc/d16507620.html,/g?a=vdb 这个网站很页面很人性化,直入主题,也是我经常用到一个网站,比如同样这个帖子求pRS类质粒图谱(注意,是一类质粒图谱,没关系,照样能找到),直接在搜索框输入pRS,可以看到,之类质粒一共有三十多个。

色彩的基本知识

色彩的基本知识 一、色彩的三要素 一切家纺色彩都具有干大届件——色相、纯度、明皮。在色彩学上也称为色彩的子要素。熟悉 和掌据色彩的二要素,对于认识色彩和表现色彩极为重要。二要素的任何一要素改变都将影响原色彩的面貌。它nJ用色相、明皮、纯度的农色记号表示,例如红5/6,即为中明度、巾纯度的红咖啡色。 (“)包相 色相是色彩的最大特征,指能够比较确切地表水果种颜色色别的名称。色相由光的波长决 定,如红、核、黄、绿、育、蓝、紫等。一般以色相环上的纯色为准。通常色相环有12色、20色、24 色、40色等色州组成。 (二)纯度 纯度义称彩度、饱和度、鲜艳度、含从皮等。纯度指色彩的纯净程度,即色彩合有某种单色 光的纯净程度。纯净程度越高,色彩越纯。反之,色彩纯度越低。可见光谱中的各种单色光具 有极限纯度,是最纯的颜色。当一种色彩加入黑、白或其他颜色时,纯度就会产:生变化。加入其 他色越多,纯度越低o (三)明度 明度也称光度、深浅度。明度指色彩的明亮程度,是内色彩光波的振幅决定的。由于各种 色彩光波的振幅有大小区别,形成厂色彩的明暗有强弱之分。色彩的明度有两种情况广是同一种色相的明度,因光源的强弱会产生不同的变化。而同——色相如加上不同比例的黑色或白色 混合后.明度也产个变化。第二种情况是,各种不同色相之间的明度不同,每一种纯色都有与其 相应的明度。在色彩学中常以黑白之间的差别来作为参考依据。美国孟赛尔色系采用11级作 为研究参考,黑色为o级,白色为10级。黄色明度最高,蓝紫色明度最低.红、绿色的明度中等。 色彩的明度变化会影响纯度的强弱,某一纯色加白提高明度,加黑降低明度,二者都将引起该色相的纯度降低。 考虑o :要素在具体府用中是同时存在、不可分割的整体,必须同时加以 二、色调 色调指色彩外观的重要特征和基本领向。色调由色彩的色相、纯度、明度三要素决定。从包相方面来分,有红色调、黄色调、绿色调、蓝色调、紫色调…… 从色彩的uj度来分,有明色调、灰色调、暗色调等。把明度与色相结合起来,又有对比强烈 色调(包括色相强对比)、柔和色调(明度与色相差都较小)、明快色调(明度较高的类似色为主的配色)等。

质粒载体分类及阅读

质粒载体分类及阅读 一.九种表达载体 Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C, pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA 二.克隆载体 pTZ19R DNA pUC57 DNA PMD18T PQE30 pUC18 pUC19 pTrcHisA pTrxFus pRSET-A pRSET-B pVAX1 PBR322 pbv220 pBluescript II KS (+) L4440 pCAMBIA-1301 pMAL-p2X pGD926 三.PET系列表达载体 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Dsb Fusion Systems 39b and 40b Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression System 33b Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? p ET Expression Systems Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression Systems plus Competent Cells Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET GST Fusion Systems 41 and 42 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET NusA Fusion Systems 43.1 and 44 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Vector DNA Protein Purification ? Purification Systems ? Strep?Tactin Resins and Purification Kits 四.PGEX系列表达载体 T EcoR pGEX-1 I/BAP pGEX-2T pGEX-2TK pGEX-3X

常用几种塑料的识别及判别方法

塑料的认识 ABS是本公司最常见的一种塑料此塑料的原料的本色为米黄色;最常见的产品有电视机的前框;固定显像管的四角的转角等…;此塑料的特 性为柔韧度;刚性非常好;此料最大的特性就是可以电镀。 识别办法第一;肉眼识别法主要看产品的内侧是否是米黄色的如果是的话就可以断定是ABS料ABS料外观比较光滑 识别办法二;物理测试法在相似的颜色和产品中识别ABS要比其他相似料要硬柔韧度要高于其他的相似料特别脆弱的可能就不是ABS料为 什么说可能;因为有的产品年月较长经过长时间的风化可减化产品的有机物;在十年以上的产品这种办法是不好判断的。 识别办法三;火苗识别法ABS在燃烧的时候烟雾很浓火苗发红被燃掉的部分为焦的状态 废塑料回收乃是一个系统工程,要分清各种废塑料,恐怕还得去购买些关于高分子材料类书籍!雅之江在这里作一些简单的介绍,看看对你是否有所帮助。塑料的具体分类很多,就高分子材料而言,恐怕不是三言两语就能囊括的,但就塑料而言,可从以下几种分类法:热固性塑料与热塑性塑料热固性塑料的定义:高分子树脂通过加热塑化或引入助剂塑化,经冷却固化定型后不能再次通过热塑成型的物质,如酚醛塑料,脲醛塑料,191树脂钢化塑料等。即热固性塑料不能再次回收造粒。热塑性塑料的定义:高分子树脂通过加热塑化,通过冷却定型后,可以再次根据需要二次加热塑化成型,周而复始。塑料回收造粒指的就是这类塑料。进一步分类热塑性塑料又可分为常规热塑性通过用塑料和工程塑料,常用热塑性通用塑料有聚乙烯(PE)聚丙烯(PP)聚氯乙烯(PVC)聚苯乙烯(PS)等等,工程塑料有丙烯晴-丁二烯-苯乙烯(ABS)高抗冲击性聚苯乙烯(AS)或(HIPS)。简易的塑料鉴别,可用如下几种方法:直观鉴别法是指用人的感观去体验塑料的一些直观特征。眼看用外观:透明?半透明?不透明?颜色(未染色时)如何?放到水里,漂浮?下沉?用鼻闻:有无气味?什么气味?用手摸:光滑还是粗糙?感觉冷还是热?用手指甲划一下,有无痕迹?用手拉伸一下,是硬还是软?有无韧性和弹性?将塑料摔一摔,耳听其音声,响亮?清脆?或是低沉?易碎?或是坚韧?通过这些感官检查,可鉴别是哪种塑料。(PE)聚乙烯LDPE的原材料为白色蜡状物,透明;HDPE为白色粉末状或白色半透明颗粒状树脂。在水中漂浮,无臭无味,具有蜡样光滑感,划后有痕迹,膜软可拉伸。LDPE柔软,有延伸性,可弯曲,但容易折断;MDPE、HDPE较坚硬,刚性及韧性较好,音低沉 (PP)聚丙烯原材料白色蜡状、半透明,在水中漂浮,无臭无味,手感光滑,划后无痕迹,可弯曲,不易折断,拉伸强度与刚性较好,音响亮(PS)聚苯乙烯标准型玻璃般透明;耐冲击无光泽,在水中下沉,无臭无味,手感光滑,性脆,易折断用指甲弹打有金属声,俗称“响胶” ABS乳白色或米黄色,非晶态,不透明,无光泽,在水中下沉无臭无味,质材坚韧、质硬,刚性好。不易折断,音清脆 (PVC)聚氯乙烯制品视增塑与填料情况而异,有的不透明。在水中下沉,随品种而异硬制品加热到50℃时就软,且可弯曲;软制品会下垂, 有的还有弹性,硬制品如门窗,下水道管等, PA-6 PA-66聚酰胺(尼龙)原材料乳白色,如胶质。加热到250℃以上时成水饴状。在水中下沉无臭无味表面硬有热感,轻轻锤打时不会折断, 音低沉 PMMA聚甲基丙烯酸甲酯(有机玻璃),玻璃般透明,外观美。在水中下沉,无臭无味,加热到120℃时可自由弯曲,可手工加工,坚硬, 不易碎用手指弹打有钝重声 PTEE白色蜡状,透明度较低,光滑,不燃,不吸水,耐候性极佳。在水中下沉,无臭无味,有润滑感,音低沉 PU有泡沫、弹性体、涂料、合成革及粘合剂等五种形态,形态各异,在水中有的下沉,有的漂浮。无臭无味,随形态不同而异,音低沉(PC) 聚碳酸脂原材料为白色结晶粉末,浅黄色至琥珀色,透明固体,制品接近无色。为高级绝缘材料,无臭无味,有金属感,较硬,弯曲时的抵 抗力大,耐冲击,韧性强,音较响燃烧鉴别法可剪取一小块塑料试样,用镊子夹住,放在点燃的酒精灯或打火机上燃烧,仔细观察其燃烧的 难易程度,离开火源后是继续燃烧还是立即熄灭,火焰的颜色,冒烟情况,燃烧中和燃烧后塑料有什么状态变化,燃烧时有什么气味等。根 据塑料燃烧特点,确定其种类。热塑性塑料燃烧时发软、熔融,以至焦化;热固性塑料燃烧时变脆、发焦,但不软化。含氯、磷、氟和硅元 素的塑料不易燃烧并具有自熄性,含硫和硝基的塑料极易燃烧,有的塑料燃烧时冒黑烟,有的塑料燃烧时会分解并产生特殊气味……这些燃 烧时的现象,都可以作为鉴别塑料、区分品种的依据。塑料名称燃烧难易离火后情况火焰特征塑料状态变化气味 PE能燃继续燃烧明亮,底部蓝色,上端黄色熔融滴落后继续燃烧,无烟熔融滴落蜡烛吹熄气味 PP 上端黄,下端蓝,少量黑烟发软,起泡石油气味辛辣味 PS易燃明亮,橙黄色,浓黑烟,起炱熔化,起泡,稍发焦芳香气味(苯乙烯单体气味) ABS 黄色焰,明亮,黑烟软化,熔融,烧焦,无滴落带橡胶味 PA(聚酰胺)缓慢燃烧缓慢熄灭黄橙色,边缘蓝色熔融,滴落,起泡似烧羊毛、指甲的特殊气味 PC 黄色,明亮,起炱软化,熔融,起泡,焦化花果臭味

基因克隆的质粒载体

基因克隆的质粒载体 在大肠杆菌的各种菌体中找到了许多种不同类型的质粒,其中已经作了比较详尽研究的主要有F质粒、R质粒和Col质粒。 ①F质粒又叫F因子或性质粒(sex plasmid)。它们能够使寄主染色体上的基因和F质粒一道转移到原先不存在该质粒的受体细胞中去。 ②R质粒通称抗药性因子。它们编码有一种或数种抗菌素抗性基因,并且通常能够将此种抗性转移到缺管该质粒的适宜的受体细胞,使后者也获得同样的抗菌素抗性能力。 ③Col质粒即所谓产生大肠杆菌素因子。它们编码有控制大肠杆菌素合成的基因。大肠杆菌是一类可以使不带有Col质粒的亲缘关系密切的细菌菌株致死的蛋白质。 第一节质粒的一般生物学特性一.质粒DNA 细菌质粒是存在于细胞质中的一类独立于染色体的自主复制的遗传成份。绝大多数的质粒都是由环形双DNA组成的复制子(图4-1)。 质粒DNA分子可以持续稳定地处于染色体外的游离状,但在一定的条件下又可逆地整合到寄主染色体上,随着染色体的复制而复制,并通过细胞分裂传递到后代。 环形双链的质粒DNA分子具有三种不同的构型: 1.当其两条多核苷酸链均保持着完整的环形结构时,称之为共价闭合环形DNA(cccDNA),这样的DNA通常呈现超螺旋的SC构型; 2.如果两条多核苷酸链中只有一条保持着完整的环形结构,另一条链出现有一至数个缺口时,称之为开环DNA(ocDNA),此即OC构型; 3.若质粒DNA经过适当的核酸内切限制酶切割之后,发生双链断裂形成线性分子(IDNA),通称L构型(见图4-2)。 在琼脂糖凝胶电泳中,不同构型的同一种质粒DNA,尽管分子量相同,仍具有不同的电泳迁移就绪。其中走在最前沿的是SC DNA,其后依次是L DNA和OC DNA(图4-3)。 凡经改建而适于作为基因克隆载体的所有质粒DNA分子,都必定包括如下三种共同的组成部分,即复制基因(replicator)、选择性记和克隆位点。 二.质粒DNA编码的表型 质粒DNA仅占细胞染色体组的1%~3%左右,但却编码着一些重要的非染色体控制的遗传性状。其中对抗菌素的抗性最质粒的最重要的编码特性之一。

美术的种类及主要特征

美术的种类及主要特征 美术种类较多,一般人通常把美术仅仅理解为绘画和雕塑。实际上,美术的范围应当包括绘画、雕塑、工艺美术和建筑艺术。由于它们都是用一定的物质材料(绘画用纸、布、木板、颜料等;雕塑用木、石、泥、铜等。工艺美术和建筑艺术使用的物质更广),塑造可视的平面或立体的形象,反映客观世界和表达作者对客观世界的感受。所以,美术又称“造型艺术”、“视觉艺术”。当然这是它们的共同点,但具体到每一种美术形式,它又有自己的一些特殊性,从而构成绘画、雕塑、工艺美术和建筑艺术的主要特征。 1.基本工具 1) 绘图用具:绘图铅笔、自动铅笔、针管笔、签字笔、彩色水笔、麦克笔、金银黑白笔、荧光笔、毛笔、喷笔、排笔、水彩画笔、鸭嘴笔、蘸水笔、铁笔等。 绘图铅笔、自动铅笔、针管笔、签字笔:画设计初稿时,运用最普遍的工具。 彩色水笔、麦克笔、毛笔:用于描绘、着色。金银黑白笔、鸭嘴笔:用于细部描绘,勾勒和刻画,画物体的高光部位。排笔、喷笔:用于涂背景,大面积着色。 2).绘图仪器绘图用的工具,宜求正确、精密、优质产品,误差小为好的绘图仪器。直尺、丁字尺、曲线尺、卷尺、放大尺、比例尺、三角板、槽尺(自己制作,市面无售)、切割用的直尺、万能绘图仪、大圆规等。 3).其它用具调色用具:调色盘、碟、笔洗。色标、描图台、制图桌、工具(包括裁纸刀、刻模用的各种美工刀和刻刀,以及胶水胶带)。 2. 应用材料 随着工业设计专业和科技的迅速发展,设计材料日新月异,品种繁多,设计工作者只要留意材料的信息,适时恰当地选择材料,运用到设计当中去,可取得事半功倍的效果。 1).颜料水彩颜料、压克力颜料、广告颜料、中国画颜料、荧光颜料、彩色墨水、针笔墨水、染料,还有照相透明色等。 2).纸张设计用的纸特别多而杂,一般市面上的各类纸都可以使用。使用时根据自己的需要而定。但是太薄、太软的纸张不宜使用。一般纸张质地较结实的绘图纸,水彩、水粉画纸,白卡纸(双面卡、单面卡),铜版纸和描图纸等均可使用。市面上有进口的麦克笔纸、插画用的冷压纸及热压纸、合成纸、彩色纸板、转印纸、花样转印纸等,都是绘图的理想纸张。但是每一种纸都需配合工具的特性而呈现不同的质感,如果选材错误,会造成不必要的捆扰,降低绘画速度与表现效果。例如,平涂麦克笔不能在光滑卡纸上和渗透性强的纸张上作画。 3. 几种材料及画法特点 1).水彩颜料水彩颜料是传统的画设计图的材料,一直用至今日。水彩颜料多数较透明。要把设计图简单而迅速完成,只需以线条为主体,再涂上水彩颜色,即可。如铅笔淡彩、

质粒与载体

质 质粒 粒与 与载 载体 体 中央研究院 植物研究所 杜 镇 研究员 一、质粒 绝大多数的生物都是以 DNA 的形式来储藏其遗传信息。遗传物质要能生生不息地传给后代 的首要条件就是它至少要具有一个复制原(ori, origin of replication ,或译为复制起点),使整 个基因体得以复制。含有复制原的遗传物质称为 replicon ,我们姑且把它译为为复制体吧!。 原核性复制体分为原核染色体、质粒(plasmids)和噬菌体基因体(phage genome)等三类。其中 质粒的基因体和原核染色体类似,是由双绞炼 DNA 构成,并以超卷曲的形式存在。它们的 基因体约由 2,000 至 150,000 个碱基对组成,绝大多数呈环状,但也有极少数是线状构造(如 Borrelia burgdorfferi)。事实上你可以把它们视为比较小的原核染色体。在自然环境中它们相 当普遍地生存在原核生物细胞内,并和其宿主的许多特殊功能有关,诸如:赤贺氏杆菌 (Shigella)的抗药、根瘤菌(Rhizobium)的固氮、农杆菌(Agrobacterium)的引瘤及假单胞杆菌 (Pseudomonas)对环状有机物的分解等等。以下我们谈的以细菌性质粒为主,尤其是革兰氏阴 性菌的质粒。 二、质粒的类型 当我们谈到质粒的类型时,就要看你从哪个角度来看它们,譬如说抗药性、结合生殖能力、 宿主范围及 DNA 复制方式等等。这些分型标准之间并无横向关联。你无法说能结合生殖的 质粒一定抗药或不抗药,也无法确定宿主范围和质粒套数的调控有何关联。我们用到这些名 词时,只是对特定质粒的性状做一些描述而已。质粒的真正系统分类标准并非靠些性状,而 是依据它们的不共容性(incompatibility)。 有的质粒带有显著特征可供我们侦测它们的存在,无已知特征的质粒称为隐性质粒(cryptic plasmids);有特征者称为显性质粒(acryptic plasmids);带有抗药基因的天然质粒称为 R-质 粒(R-plasmids)。有些质粒能在多种不同菌属细胞中生存,我们称它们为泛宿主性质粒 (broad-host-range plasmids);有一些质粒只能在少数相关宿主中生存,我们称它们为狭宿主 性质粒(narrow-host-range plasmids)。具有结合生殖(conjugation)能力的质粒为结合质粒 (conjugative plasmids);没有这种能力的质粒便是非结合质粒(non-conjugative plasmids)。其 它如侵袭性质粒(virulence plasmid)、 共生质粒(symbiotic plasmids)及巨型质粒(megaplasmids) 等等有关质粒性状叙述的名词不一而足。 三、质粒的复制 环状质粒的复制形式主要分 theta (θ)及 rolling circle 两种。基因体的复制都是由复制原开始。 原核性复制原约由 250 个碱基对组成,一般质粒的复制原常称为 oriV (origin of vegetative replication);有时 R-质粒的复制原称为 oriR ;大肠杆菌的复制原称为 oriC 。Theta 形式的质 粒复制与细菌基因体复制一样,以 RNA 聚合脢(RNA polymerase)在复制原制造 RNA 引子 (RNA primer),然后由 DNA 聚合脢(DNA polymerase)接手由此向两个方向分别复制 DNA , 直到整个基因体复制完成。在复制过程中当然还有许多其它酵素的参与,这些酵素多由宿主 提供。有的质粒自己携带一些与复制有关的基因,这些基因多被命名为 rep ,如 repA 、repB

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