台盼蓝染色法
PriCells:台盼蓝染色法
材料：
1.显微镜、玻片、盖玻片、滴管；
2.试剂：0.4%台盼蓝染液；
3.台盼蓝（Trypan blue）：0.4g；
4.生理盐水：100ml；
操作步骤：
1.用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液；
2.用0.5%胰蛋白酶：0.2%EDTA=1：1混合液来消化培养的贴壁细胞；
3.再加入适量Hanks液制成细胞悬液；
4.将待染色细胞稀释至所需浓度（方法及浓度范围与细胞计数相同）；
5.每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴，室温下染3—5min；
6.染色过的细胞材料，取一滴细胞悬液置玻片上，加盖玻片后放高倍镜下观察；
7.死亡的细胞着浅蓝色并膨大，无光泽。活细胞不着色并保持正常形态，有光泽；
8.计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目；
9.统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。
细胞活率（%）=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100
注意事项：
1.染色时间不能太长，否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色，使监测结
果偏低；
2.另可结合细胞计数方法，同时进行细胞计数和活力检测；
PriCells提供：
1.各种原代细胞特制基础培养基；
2.各种原代细胞培养特制添加剂；
3.原代细胞分离试剂盒；
4.原代细胞鉴定试剂盒；
5.原代细胞转染试剂盒；
6.原代细胞总蛋白质抽提物；
7.原代细胞总RNA；
8.原代细胞总DNA；
https://www.360docs.net/doc/d112348124.html,
革兰氏染色的实验原理
革兰氏染色的实验原理 ●G＋细胞壁的网状结构致密，交联度高，用乙醇处理后，发生脱水作用，肽聚糖层孔径缩小，透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。 ●G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多类脂质，故用乙醇处理后，类脂质被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，细胞被脱色，经沙黄复染呈红色。 涂片固定→结晶紫初染（碱性）→碘液媒染→乙醇（丙酮）脱色→番红复染（碱性）
◆◆◆原理： 当用结晶紫初染后，所有细菌都被染成初染剂的兰紫色，碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫-碘复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要有舦聚糖形成的网状结构组成，壁厚，类脂含量低，用酒精脱色时细胞壁脱水，使舦聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫碘复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的兰紫色。革兰氏阴性细菌则不同，由于其细胞壁舦聚糖层较薄，类脂含量较高，，所以当脱色处理时，类脂质被酒精溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。 ◆◆实验步骤： 1、制片 涂片——干燥——固定 2、初染 滴加结晶紫染色1——2分钟，水洗； 3、媒染 用碘液冲去残水，并用碘液覆盖1分钟； 4、脱色 滴加95%酒精脱色，25-30秒，立即水洗； 5、复染 用番红液复染约2分钟，水洗； 6、镜检 干燥后，用油镜观察。 细菌：细菌是一种具有细胞壁的单细胞微生物，在适宜条件下，能进行无性二分裂繁殖，其形态和结构相对稳定。一般体积微小，通常需要借助光学显微镜才能看到，其测量单位用微米表示。
微生实验报告 2012.10.10 实验一 细菌的简单染色和革兰氏染色
微生实验报告 姓名： xx 专业年级：2011级生物技术 学号：1032 实验二细菌的简单染色和革兰氏染色 一、实验目的 学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法的实验原理和实验操作。 二、实验原理 用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电何，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红、或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物，又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。 简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法，简单染色一般难于辨别细菌细胞的构造。 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G—菌的细胞壁中含有较多的易被乙醇溶解的类脂质，增加了细胞壁的通透性，使处染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔
径缩小，通透性降低，草酸铵结晶紫与碘的复合物不易被脱掉，因此细菌仍保留处染时的紫色。 三、实验器材 1、菌种： 金色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌。 2、染色剂和试剂： 草酸铵结晶紫染液，卢哥氏碘液，95%酒精，番红复染液，复红染液，吕氏美蓝染液，显微镜擦拭液（乙醚： 乙醇=7:3），xx柏油。 3、器材： 废液缸，洗瓶，载玻片，接种环，酒精灯，擦镜纸，双层瓶，显微镜。 四、实验方法 （一）简单染色 1．涂片： 取干净载玻片一片，在载玻片的左右各加一滴生理盐水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂大肠杆菌，做成浓菌悬液。再取干净载玻片一块将刚制成的金黄色葡萄球菌浓菌悬液挑1~2环涂在左边制成薄的涂片，将大肠杆菌的浓菌悬液取1~2环涂在右边制成薄涂片。亦可直接在载玻片上制薄的涂片，注意取菌不要太多。 2．晾干： 让涂片自然晾干。 3．固定：
台盼蓝染色鉴别死活细胞的原理
台盼蓝染色鉴别死活细胞的原理 通常认为细胞膜丧失完整性，细胞即可被认为已经死亡。台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝，而死亡的细胞，膜的完整性丧失，通透性增加，细胞可被台盼蓝染成蓝色。依据此原理，细胞经台盼蓝染色后，可通过显微镜，直接镜下计数或拍照后计数，实现对细胞存活率比较精确的定量分析。 染色原理: 正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。 台盼蓝拒染法 台盼蓝拒染法是利用台盼蓝只能将死细胞染成蓝色而活细胞不能被染上的方法检测细胞存活率的一种快速简便的方法。 染色原理: 正常细胞具有完整的细胞膜结构，而死亡的细胞其细胞膜结构被破坏。台盼蓝无法通过正常的细胞膜因而正常的细胞不被台盼蓝染上，而死细胞则可被台盼蓝染成蓝色。 流程: （1）将对数生长期的细胞浓度调整为1~10×10细胞/ml，按10~10个细胞接种于96孔板，每孔100 μl； （2）培养细胞24小时后，对其进行不同处理，每个处理设三个平行对照； （3）收集细胞，经台盼蓝染色，在倒置显微镜下计数蓝染及不染色细胞，计算细胞存活率； （4）结果统计： 镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染。 根据下式求细胞活力： 活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100 注意事项:
台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。 科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面，严禁用于人体。本品为生物染色剂，在细胞毒性试验中用于检测死亡细胞和垂死细胞，也可用于细胞活性的常规评估。如病毒检验，注入循环系统可使肾小管着色，哺乳动物、低等脊椎动物和昆虫的各种组织活体染色。 台盼蓝染色的主要（原理）步骤： 1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液； 2. 用0.5%胰蛋白酶：0.2%EDTA=1：1混合液来消化培养的贴壁细胞； 3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液； 4. 将待染色细胞稀释至所需浓度（方法及浓度范围与细胞计数相同）； 5. 每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴，室温下染3—5min； 6. 染色过的细胞材料，取一滴细胞悬液置玻片上，加盖玻片后放高倍镜下观察； 7. 死亡的细胞着浅蓝色并膨大，无光泽。活细胞不着色并保持正常形态，有光泽； 8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目； 9. 统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。 细胞活率（%）=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100。 死细胞的细胞膜无屏障作用，台盼蓝马上进入细胞而显蓝色。活细胞细胞膜有选择透性，对台盼蓝的透性小，进入细胞慢。若染色时间过长，台盼蓝可能通过胞吞或胞饮作用进入细胞。 通常认为细胞膜丧失完整性,细胞即可被认为已经死亡.台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂.健康的正常细胞能够排斥台盼蓝,而死亡的细胞,膜的完整性丧失,通透性增加,细胞可被台盼蓝染成蓝色.依据此原理,细胞经台盼蓝染色后,可通过显微镜,直接镜下计数或拍照后计数,实现对细胞存活率比较精确的定量分析。 作为细胞染色剂之一的台盼蓝(Trypan Blue)已被证明受到活体细胞的排斥，而死亡细胞摄入染料显示蓝色。通过常用的光学显微镜可以观察到细胞染色情况，同时可以定量计数，但是该染色无法区别自杀细胞还是坏死细胞。
革兰氏染色实验
革兰氏染色实验 革兰氏染色（Gram Staining）是用来鉴别细菌的一种方法：这种染色法利用细菌细胞壁上的生物化学性质不同，可将细菌分成两类，即革兰氏阳性（Gram Positive）与革兰氏阴性（Gram Negative）。(这种染色法是由一位丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884年所发明)。 未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。 阳性紫色，阴性红色 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌： 革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要的病原菌。
革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆 菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎 双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克 雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢 疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜 血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍 乱弧菌、阴沟肠杆菌等。革兰氏阴性菌在院内感染中的细菌感染中 占了大约65%，且大多菌株容易对抗菌药物耐药，产生“新德里金 属酶”（NDM-1）的绝大多数细菌都是革兰氏阴性菌（主要是大肠 杆菌、鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯杆菌）。 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌是利用革兰氏染色法来鉴别的两大类细菌。大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们产生内毒素，靠内毒素使人致病。 细胞形态和结构 细胞的基本结构包括细胞壁和原生质体两部分。原生质体位于细胞壁内，包括细胞膜（细胞质膜）、细胞质、核质和内含物。另外细胞还含有有些特殊结构，主要有荚膜、芽孢、鞭毛和菌毛等4种。 1.细胞壁
台盼蓝染色实验原理和步骤
创作编号： GB8878185555334563BT9125XW 创作者：凤呜大王* 台盼蓝染色实验原理 台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水（10mg/ml)。 实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显
微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。实验步骤： 1、配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。使用时用PBS稀释至0.4 %。 2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。 3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。（终浓度0.04%） 4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。 5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。 6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100% 注意： 1.保存条件：室温保存。
2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。 创作编号： GB8878185555334563BT9125XW 创作者：凤呜大王*
2021年革兰氏染色实验步骤
革兰氏染色 欧阳光明（2021.03.07） 一．实验流程： 1、取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）。涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。 2、涂片： 液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。 固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。 3、晾干：让涂片在空气中自然干燥。 4、固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。 5、染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。 6、水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。简单染色结束可观察细胞形态。 7、媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。 8、脱色：吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液
无紫色，立即水洗。 9、复染：滴加蕃红复染3-5min，水洗。至此，革兰氏染色结束。 二．染色结果：革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。 备注： 1.革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌。 2.革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。
台盼蓝染色实验原理和步骤
台盼蓝染色实验原理和 步骤 标准化管理部编码-[99968T-6889628-J68568-1689N]
台盼蓝染色实验原理台盼蓝（TrypanBlue)是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量:960.82，可溶于水（10mg/ml)。 实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和。台盼蓝是组织和中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后，通过显微镜下或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞进行比较精确的定量。台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。 实验步骤： 1、配制4%台盼蓝：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至 100ml，用滤纸过滤，4℃保存。使用时用PBS稀释至0.4%。 2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。
3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。（终浓度0.04%） 4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。 5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而拒染呈无色透明状。 6、统计细胞活力：活细胞率（%）=活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100% 注意： 1.保存条件：室温保存。 2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
实验四 细菌的革兰氏染色与芽孢染色
实验四细菌的革兰氏染色与芽孢染色 一、目的要求 1.学习并初步掌握细菌的革兰氏染色法。 2.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 二、实验材料 1.菌种：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）大肠杆菌（E.coli） 2.试剂：草酸铵结晶紫、路哥氏碘液、95%乙醇、番红液 3.其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌水、香柏油、二甲苯等。 三、实验原理 革染氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。是1884年由丹麦病理学家Christain Gram创立的。通过革兰氏染色可把细菌区分为两大类。 革染氏染色的基本步骤：先用结晶紫初染、次经碘液媒染、再用95%乙醇脱色、最后用蕃红复染。经过此法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革染氏阳性菌；如果细胞染上复染的红色的细菌为革染氏阴性菌。大肠杆菌是标准的革染氏阴性菌，金黄色葡萄球菌是标准的革染氏阳性菌。 革染氏染色的机理，与细菌细胞壁的化学组成和结构有关。经结晶紫初染以后，所用的细菌都被染成蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合形成复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用乙醇脱色时，两类细菌的脱色效果是不同的，革染氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成、壁厚、类脂含量低，用乙醇脱色处理时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内；革染氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖层在内层且较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂被乙醇溶解、细胞壁透性增加，使结晶紫-碘的复合物被洗脱出来。用蕃红复染时染上红色。 四、操作步骤 1.细菌的活化：将细菌接种营养琼脂斜面，培养约24h。 2.制片：取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。 3.初染：于制片上滴加结晶紫染液，染色1min后，用水洗去剩余染料。 4.媒染：用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。 5.脱色：用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，直接用95%乙醇从载 玻片上端冲洗脱色，直到流下的酒精无明显的紫色时，立即水洗。酒精的浓度、用量及涂片厚度都会影响脱色速度。脱色是革兰氏染色中最关键的一步。 6.复染：滴加番红液，染色2min，水洗。 7.用滤纸吸干，油镜镜检。 五、注意事项 为了保证革染氏染色结果的正确性，制片过程中要注意：要选用活跃生长的幼培养物作革染氏染色，涂片不宜过厚，火焰固定不已过热，脱色时间的控制。另外，可选用标准的革染氏阳性菌和革染氏阴性菌和未知菌一起混合涂片和染色。 六、实验内容 1.分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌进行革兰氏染色 2.对上述两种菌进行混合涂片，再进行革兰氏染色。 七、实验报告
台盼蓝染色液(1%)
台盼蓝染色液(1%) 简介： 台盼蓝(Trypan blue)又称锥蓝或锥虫蓝等，分子式为C 34H 24N 6Na 4O 14S 4，分子量为960.81，CAS Number 72-57-1，是一种阴离子型染料。Trypan blue 不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色，即产生所谓的拒染现象,而死亡细胞的细胞膜通透性增加，可使染料通过细胞膜进入细胞内，使死细胞着色呈蓝色，是最常用的检测细胞活率的方法。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。 Leagene Trypan blue stain(1%)常用于检测细胞膜的完整性以及细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。台盼蓝可被巨噬细胞吞噬，故可用于巨噬细胞的活体染色剂。台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。 组成： 自备材料： 1、 PBS 2、 细胞计数板 3、 显微镜 操作步骤(仅供参考)： 1、收集细胞： 如果收集贴壁细胞，应用胰蛋白酶-EDTA 溶液消化细胞，收集细胞。如果收集悬浮细胞，则可以直接收集细胞。收集好的细胞在离心，弃上清，用PBS 重新悬浮细胞沉淀。 2、台盼蓝染色： 吸取细胞悬液到离心管内， 加入Trypan blue stain(1%)轻轻混匀，静置染色 (染色时间可适当延长，但不宜超过10min)。 3、细胞计数： 吸取经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个 编号 名称 DA0066 DA0066 Storage Trypan blue stain(1%) 10ml 50ml 4℃ 使用说明书 1份
台盼蓝染色液(0.4%)
北京雷根生物技术有限公司 台盼蓝染色液(0.4%) 产品简介： 台盼蓝(Trypan blue)又称锥蓝或锥虫蓝等，分子式为C 34H 24N 6Na 4O 14S 4，分子量为960.81，CAS Number 72-57-1，是一种阴离子型染料。Leagene Trypan blue stain(0.4%)常用于检测细胞膜的完整性以及细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。台盼蓝可被巨噬细胞吞噬，故可用于巨噬细胞的活体染色剂。台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量，0.4%为最常用的浓度。 产品组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、收集细胞： 如果收集贴壁细胞，应用胰蛋白酶-EDTA 溶液消化细胞，收集细胞。如果收集悬浮细胞，则可以直接收集细胞。收集好的细胞在1000～2000g 离心1min ，弃上清，用1ml PBS 重新悬浮细胞沉淀。 2、台盼蓝染色： 吸取100μl 细胞悬液到1.5ml 或0.5ml 离心管内， 加入100μl Trypan blue stain(0.4%)轻轻混匀，静置染色3min(染色时间可适当延长，但不宜超过10min)。 3、细胞计数： 吸取经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少需要数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下： 细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×100% 注意事项： 1、 Trypan blue stain 对人体有轻微毒性，请注意小心防护。 2、 注意凋亡小体偶尔也有台盼蓝拒染现象。 3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期： 6个月有效。 编号 名称 DA0065 DA0065 Storage Trypan blue stain(0.4%) 50ml 100ml 4℃ 使用说明书 1份
细胞染色专题之一：台盼蓝
细胞染色专题之一：台盼蓝 台盼蓝（Trypan Blue，也称Direct blue 14）：一种死细胞染色用色素 化学名： 3,3'-{[3,3'-Dimethyl(1,1'-biphenyl)-4,4'-diyl]bis(azo)}bis(5-amin o-4-hydroxy-2,7-naphthalenedisulfonic acid), tetrasodium salt3,3’-{[3,3’-二甲基-(1,1’-二苯基)-4,4’-二基]双(偶氮)}-双(5-氨基-4-羟基-2,7-萘二磺酸)，四钠盐分子式：C34H24N6Na4O14S4 分子量：960.81 CAS Number： 72-57-1 外观：黑褐色结晶粉末 摩尔吸光度：>69,000(在606nm附近) 染色原理： 细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。严格来说，台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性，通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。这被称为染料排除测试（dye exclusion），Erythrosin B(红色)、negrosine、eosin Y、AO和EB也用于此目的。通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞，并可使用细胞计数器进行计数。 溶于水，可以配制成10mg/ml的水溶液，水溶液呈深蓝色。 台盼蓝主要用来鉴定原代培养细胞时,细胞分离后的存活情况，用0.4%台盼蓝直接染色5-10分钟，在显微镜下观察即可。 应用于细胞凋亡： 如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。尽管在凋亡的早期到中期检测是很困难的，此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。 储存条件：常温保存 注意事项： 1. 台盼蓝对人体有毒 2. 台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。 3. 台盼蓝染色法对于悬浮细胞来说，还比较方便，对贴壁细胞来说，较为繁琐。因为要消化，有时，96孔板不一定能消化干净。而且，该法是测定细胞浓度的方法，与细胞悬液的体积有关，加入的胰蛋白酶或1640要计入终体积。可以说，该法相对准确，可能有一些人为因素的干扰。 细胞染色专题之二：美蓝 美蓝 英文名：Methylene blue，Swiss blue 中文名：亚甲基蓝、次甲基蓝、品蓝、美蓝、亚甲蓝、四甲基蓝、盐基湖蓝、碱性亚甲天蓝等。 分子式：C16H18ClN3S
台盼蓝染色法教学提纲
台盼蓝染色法
精品资料 台盼蓝：细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。因此常用于检测细胞是否存活。基本性质 中英文名称：台盼蓝（Trypan Blue)或称台盼兰、锥虫蓝、曲利苯蓝 分子式：C34H24N6O14S4Na4 分子量: 960.82 可溶于水（10mg/ml) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。 台盼蓝可被巨噬细胞吞噬，故可用于巨噬细胞的活体染色剂。 机理 正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。 台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。 台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。 步骤 1、4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。（也可买Gibco的成品）; 2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。 3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。（终浓度0.04%） 4、计数：在三分钟内，分别计数活细胞和死细胞。 5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。 6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100% 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢2
台盼蓝染色方法
台盼蓝染色方法 基本性质 中英文名称：台盼蓝（Trypan Blue)或称台盼兰、锥虫蓝 分子式：C34H24N6O14S4Na4 分子量: 960.82 可溶于水（10mg/ml) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。还常用于细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。 机理 正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。 台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。 台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。 步骤 步骤：(来自supergama) 1、4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。（也可买Gibco的成品）; 2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。 3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。（终浓度0.04%） 4、计数：在三分钟内，分别计数活细胞和死细胞。 5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。 6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100% 其他 保存条件 室温保存 说明 有潜在致癌危险 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
台盼蓝染色法
台盼蓝：细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。因此常用于检测细胞是否存活。 基本性质 中英文名称：台盼蓝（Trypan Blue)或称台盼兰、锥虫蓝、曲利苯蓝 分子式：C34H24N6O14S4Na4 分子量: 960.82 可溶于水（10mg/ml) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。 台盼蓝可被巨噬细胞吞噬，故可用于巨噬细胞的活体染色剂。 机理 正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。 台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。 台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。 步骤 1、4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。（也可买Gibco的成品）; 2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。 3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。（终浓度0.04%） 4、计数：在三分钟内，分别计数活细胞和死细胞。 5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。 6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%
台盼蓝染色实验原理和步骤
台盼蓝染色实验原理和 步骤 LEKIBM standardization office【IBM5AB- LEKIBMK08- LEKIBM2C】
台盼蓝染色实验原理 台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: ，可溶于水（10mg/ml)。 实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和。台盼蓝是组织和中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后，通过显微镜下或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞进行比较精确的定量。台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。 实验步骤： 1、配制4%台盼蓝：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至 100ml，用滤纸过滤，4℃保存。使用时用PBS稀释至 %。 2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。 3、染色：细胞悬液与%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。（终浓度%） 4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。
5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而拒染呈无色透明状。 6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100% 注意： 1.保存条件：室温保存。 2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
台盼蓝染色实验原理和步骤
台盼蓝染色实验原理和 步骤 集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）
台盼蓝染色实验原理 台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染 成淡蓝色。分子式：C 34H 24 N 6 O 14 S 4 Na 4 ，分子量: 960.82，可溶于水 （10mg/ml)。 实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和。台盼蓝是组织和中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后，通过显微镜下或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞进行比较精确的定量。台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。 实验步骤： 1、配制4%台盼蓝：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。使用时用PBS稀释至0.4 %。 2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。 3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。（终浓度 0.04%） 4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。 5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而拒染呈无色透明状。 6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100% 注意： 1.保存条件：室温保存。 2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
台盼蓝染色实验原理和步骤
台盼蓝染色实验原理和步 骤 This manuscript was revised on November 28, 2020
台盼蓝染色实验原理台盼蓝（TrypanBlue)是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量:960.82，可溶于水（10mg/ml)。 实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和。台盼蓝是组织和中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后，通过显微镜下或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞进行比较精确的定量。台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。 实验步骤： 1、配制4%台盼蓝：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至 100ml，用滤纸过滤，4℃保存。使用时用PBS稀释至0.4%。 2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。
3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。（终浓度0.04%） 4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。 5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而拒染呈无色透明状。 6、统计细胞活力：活细胞率（%）=活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100% 注意： 1.保存条件：室温保存。 2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
台盼蓝染色液使用说明书
台盼蓝染色液使用说明书 货号：C0040 规格：50mL/100mL 保存：4℃保存，一年有效。 产品简介： 台盼蓝（Trypan Blue)或称台盼兰、锥虫蓝，是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性与细胞的存活率，是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。正常的活细胞细胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，细胞不会被染成蓝色；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。 台盼蓝可被巨噬细胞吞噬，故可用于巨噬细胞的活体染色剂。凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。染色时间只需3-5分钟，操作简单。 使用说明： 1.收集细胞： 用胰酶和/或EDTA消化贴壁细胞，悬浮细胞可直接收集。收集细胞时用1000-2000rpm离心1分钟，弃上清，制备单细胞悬液，并做适当稀释。 2.台盼蓝染色： 细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1比例混匀（终浓度0.04%），染色3分钟(染色3分钟时间已经足够，但染色时间可以更长一些，但不宜超过10分钟)。 3.细胞计数： 吸取少量经过染色的细胞，用血细胞计数板计数。死细胞着蓝色并膨大，无光泽；活细胞不着色并保持正常形态，有光泽。通常要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞。 细胞存活率（%）=活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100% 注意事项： 1.染色时间不能太长，否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色，使检测结果偏低。
2.染色前染液若有沉淀，需过滤除掉沉淀后再用。 3.有潜在致癌危险，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。相关产品： 12100DMEM(H) 31800RPMI Medium1640 24800通用细胞冻存液 H1025Hanks，含钙镁，不含酚红（HBSS） P10201×PBS，PH7.2-7.4，0.01M，液体 T1300胰蛋白酶－EDTA消化液(0.25%)不含酚红 P1400青链霉素混合液(100×) M1020MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒
台盼蓝染色液(1%)
北京雷根生物技术有限公司 https://www.360docs.net/doc/d112348124.html, 台盼蓝染色液(1%) 简介： 台盼蓝(Trypan blue)又称锥蓝或锥虫蓝等，分子式为C 34H 24N 6Na 4O 14S 4，分子量为960.81，CAS Number 72-57-1，是一种阴离子型染料。Trypan blue 不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色，即产生所谓的拒染现象,而死亡细胞的细胞膜通透性增加，可使染料通过细胞膜进入细胞内，使死细胞着色呈蓝色，是最常用的检测细胞活率的方法。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、收集细胞： 如果收集贴壁细胞，应用胰蛋白酶-EDTA 溶液消化细胞，收集细胞。如果收集悬浮细胞，则可以直接收集细胞。收集好的细胞离心，弃上清，用1ml PBS 重新悬浮细胞沉淀。 2、台盼蓝染色： 吸取100μl 细胞悬液到1.5ml 或0.5ml 离心管内， 加入Trypan blue stain(1%)轻轻混匀，静置染色 (染色时间可适当延长，但不宜超过10min)。 3、细胞计数： 吸取经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少需要数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下： 细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×100% 注意事项： 1、 Trypan blue stain 对人体有轻微毒性，请注意小心防护。 2、 注意凋亡小体偶尔也有台盼蓝拒染现象。 3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 编号 名称 DA0066 DA0066 Storage Trypan blue stain(1%) 10ml 50ml 4℃ 使用说明书 1份
台盼蓝染色液
仅供科研版本号：170801 台盼蓝染色液 【产品组成】 【保存条件】 4℃,12个月 【产品概述】 台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒(Trypan Blue Staining Cell Viability Assay Kit）是利用正常的健康细胞能够排斥台盼蓝不被染色即拒染特性，而丧失细胞膜完整性的细胞可以被台盼蓝染色的原理研制而成。严格来说，台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性，通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的计算。 台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒主要由Trypan Blue stain、细胞重悬液组成，1ml规格试剂大约可以染色10次。 【使用方法】 1、收集细胞： 收集贴壁细胞时应采用胰蛋白酶消化细胞，收集细胞。如果收集悬浮细胞，则可以直接收集细胞。把收集的细胞在1000～2000g离心1min，弃上清，用1ml或适当试剂(B)重新悬浮起细胞沉淀。 2.台盼蓝染色： 吸取100μl重悬的细胞到常规1.5ml或0.5ml离心管内，加入100μl Trypan Blue stain(2×)轻轻混匀，染色3min(染色时间可适当延长，但不宜超过10min)。 3.计数： 吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至需要500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下： 细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×100% 【注意事项】 1、最好在超净台内进行无菌操作，避免细菌污染。 2、台盼蓝对人体有害，请注意小心操作。 3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 南京森贝伽生物科技有限公司网址：https://www.360docs.net/doc/d112348124.html,/ 第1页
细胞染色专题之一：台盼蓝(精)
细胞染色专题之一:台盼蓝 台盼蓝(Trypan Blue,也称Direct blue 14:一种死细胞染色用色素 化学名: 3,3'-{[3,3'-Dimethyl(1,1'-biphenyl-4,4'-diyl]bis(azo}bis(5-amin o-4-hydroxy-2,7-naphthalenedisulfonic acid, tetrasodium salt3,3’-{[3,3’-二甲基-(1,1’-二苯基-4,4’-二基]双(偶氮}-双(5-氨基-4-羟基-2,7-萘二磺酸,四钠盐分子式:C34H24N6Na4O14S4 分子量:960.81 CAS Number: 72-57-1 外观:黑褐色结晶粉末 摩尔吸光度:>69,000(在606nm附近 染色原理: 细胞损伤或死亡时,台盼蓝可穿透变性的细胞膜,与解体的DNA 结合,使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。严格来说,台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性,通常认为细胞膜丧失完整性,即可认为细胞已经死亡。这被称为染料排除测试(dye exclusion,Erythrosin B(红色、negrosine、eosin Y、AO和EB也用于此目的。通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞,并可使用细胞计数器进行计数。 溶于水,可以配制成10mg/ml的水溶液,水溶液呈深蓝色。 台盼蓝主要用来鉴定原代培养细胞时,细胞分离后的存活情况,用0.4%台盼蓝直接染色5-10分钟,在显微镜下观察即可。 应用于细胞凋亡:
如果细胞膜不完整、破裂,台盼蓝染料进入细胞,细胞变蓝,即为坏死。如果细胞膜完整,细胞不为台盼蓝染色,则为正常细胞或凋亡细胞。尽管在凋亡的早期到中期检测是很困难的,此方法对反映细胞膜的完整性,区别坏死细胞有一定的帮助。 储存条件:常温保存 注意事项: 1. 台盼蓝对人体有毒 2. 台盼蓝染细胞时,时间不宜过长。否则,部分活细胞也会着色,会干扰计数。 3. 台盼蓝染色法对于悬浮细胞来说,还比较方便,对贴壁细胞来说,较为繁琐。因为要消化,有时,96孔板不一定能消化干净。而且,该法是测定细胞浓度的方法,与细胞悬液的体积有关,加入的胰蛋白酶或1640要计入终体积。可以说,该法相对准确,可能有一些人为因素的干扰。 细胞染色专题之二:美蓝 美蓝 英文名:Methylene blue,Swiss blue 中文名:亚甲基蓝、次甲基蓝、品蓝、美蓝、亚甲蓝、四甲基蓝、盐基湖蓝、碱性亚甲天蓝等。 分子式:C16H18ClN3S 分子量:319.85 g/mol CAS Number:61-73-4 EINECS Number: 200-515-2 熔点:100 ℃