DPPH法和FRAP法测定用不同方法对苦参中的抗氧化物提取物抗氧化活性的鉴定

DPPH法和FRAP法测定用不同方法对苦参中的抗氧化物提取物

抗氧化活性的鉴定

魏立阳戚彦龙

（甘肃农业大学生命科学技术学院，甘肃 730070）

摘要：目的苦参中抗氧化物的提取方法并测定抗氧化提取物的抗氧化活性。方法:以水、甲醇、无水乙醇、乙酸乙酯为提取剂，分别提取苦参中的抗氧化物;采用DPPH法和FRAP法分别研究抗氧化提取物及其纯化物的体外抗氧化活性。结果:最佳提取工艺甲醇加热回流提取，3.5 h;抗氧化提取物的DPPH自由基清除率约为80%。结论:优选的提取液为甲醇溶液;苦参抗氧化物具有较强的体外抗氧化活性。

键字：DPPH；FRAP；苦参

关苦参（Sophara flavescens Ait）为豆科植物，除海南、新疆、青海外在中国各地均有分布，有很高的经济价值和药用价值。[2]苦参、苦参碱、苦参黄酮等均有抗心率失常作用。苦参有增加冠脉流量，保护心肌缺血及降血脂作用，总碱还有防止白细胞减低及抗辐射作用。醇提取物对阴道滴虫、阿米巴原虫有杀死作用。煎剂对结核杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有抑制作用、对多种皮肤真菌也有抑制作用。并有利尿、抗炎、抗过敏、镇痛及平喘、祛痰作用。。近年来，国内外具有较多关于苦参活性物质提取工艺及其药理活性等方面的相关研究报道"。但是，对苦参抗氧化活性物质提取工艺与采用生物活性追踪法对其抗氧化活性及其物质基础进行追踪发现的相关研究报道不太完善。为进一步了解苦参中抗氧化活性性的提取方法优缺，进一步开发和利用苦参抗氧化性物质提供帮助。

1材料与方法苦参的处理测试所用苦参购自本地市场, 取四个三角瓶并依次编号为1、2、3、4,分别称取5g苦参,在1号瓶加入乙酸乙酯混合后放于90摄氏度水浴锅中2h、2、3、4号三角瓶中分别加入5g苦参，2号加入50ml无水乙醇水浴锅中2.5h,3号加入50ml 蒸馏水水浴锅中3h,4号加入50ml甲醇溶液水浴锅中3.5h,4000r/min离心10min,取上清按下述FRAP法和DPPH法测定抗氧化活性

FRAP法参照Benzie与Strain的方法〔2〕。该法原理为Fe3+-三吡啶三吖嗪(tripyridyl-triazine,TPTZ,Sigma)可被样品中还原物质还原为二价铁形式,呈现出明显的蓝色,并于593nm处具有最大光吸收,根据吸光度的大小计算样品抗氧化活性的强弱。步骤如下:取适量样品上清(必要时稀释),加入反应10min,593nm测定吸光度,以FeSO4为标准,样品抗氧化活性以达到同样吸光度所需的Fe2SO4的毫摩尔数表示

DPPH法 DPPH法于1958年被提出，广泛用于地量测定生物试样、分类物质好和食品的抗氧化能力。

DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其纯溶液呈紫色，且需低温避光储藏，具有单一电子，故能接受一个电子或氢离子，在波长为517nm下具有最大吸收。有自由基清除剂存在时，DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅，在最大光吸收波长处的吸光值下降，且下降程度呈线性关系，吸光度水平的降低表明抗氧化性的增加，从而以评价试验样品的抗氧化能力。此抗氧化能力用抑制率来表示，抑制率越大，抗氧化性越强。

实验表明，该法简便易行，灵敏可靠，不失为筛选天然产物抗氧化剂的好方法之一

结果：

表1 DPPH法测得的苦参不同物质提取物数据

提取物吸光值甲醇的吸光值A0 对自由基的清除率

乙酸乙酯0.128 0.632 0.797

无水乙醇0.104 0.632 0.835

甲醇0.12 0.632 0.810

蒸馏水0.275 0.632 0.564

ASA 0.115 0.632 0.818

表2 FRAP法测得的苦参不同物质提取物数据

提取物吸光值甲醇的吸光值A0 FeSO4的吸光值FRAP值

乙酸乙酯0.057 0.012 0.654 34.40

无水乙醇0.042 0.012 0.654 22.93

甲醇0.046 0.012 0.654 25.99

蒸馏水0.036 0.012 0.654 18.34

ASA 0.108 0.012 0.654 73.39

3 讨论目前大多数测定抗氧化活性的方法是针对某一种自由基而言,如国外应

用较多的氧自由基清除力(oxygenradicalab2sorbancecapacity,ORAC)法〔4,5〕,用来测定样品清除ROO、OH等的能力,DPPH法是其中一种常用方法。而Benzie和Strain 建立的FRAP法原理明确,操作简便,不需特殊仪器,易于标准化,已用于测定不同抗氧化物质、食物与生物样品的抗氧化活性〔2,6,7〕,它反映的不是样品针对某一种自由基的清除活性,而是样品总还原能力,一些学者因此认为该法测定结果可用来反映样品总抗氧化活.本实验采用DPPH法和FRAP法两种方法来测定苦参中抗氧化物的抗氧化能力 .

本实验用甲醇、无水乙醇、水、乙酸乙酯四种液体分别作溶剂对苦参中抗氧化物提取，然后对提取物清除DPPH.能力、Fe3＋至Fe2＋还原能力进行了考察。结果显示甲醇提取物在清除DPPH.能力最强,甲醇提取物在还原Fe3＋能力也最强。无水乙醇和乙酸乙酯提取物在清除DPPH能力上也表现良好，但在还原Fe3＋能力上较弱。水提取物在清除DPPH能力上较弱，但在还原Fe3＋能力上较强。

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