薄层色谱法分离有机化合物2

薄层色谱法分离有机化合物

一、实验目的

1.学习薄层色谱法、纸色谱法、柱色谱法分离有机化合物的原理；

2.掌握薄层色谱法分离有机化合物的方法。

二、实验原理

我们有机实验过程中经常要合成一些有机化合物，纯度相对较低，要进行下一步反应必须进行提纯，通常的提纯手段（可先问学生，再总结）：重结晶、萃取法、色谱法、减压蒸馏、蒸馏、水蒸气蒸馏、分馏等，色谱法就是其中之一，通常用来分离、纯化和鉴定有机化合物。

基本原理就是利用待分离各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同 ，使混合物溶液流经过该种物质，进行反复吸附或分配等作用，分开各组分。按照操作条件不同分为：柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气相色谱及高效液相色谱等，今天介绍柱色谱、纸色谱、薄层色谱，操作薄层色谱。

柱色谱：利用色谱柱

（1）色谱柱（2）吸附剂（3）溶剂

（1）色谱柱（拿根柱子介绍）

（2）吸附剂：吸附剂：表面积很大、经过活化的多孔性或粉状固体（常用氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙、活性炭等：

（3）溶剂，先考虑被分离各组分的极性和溶解性，非极性化合物用非极性溶剂，先溶解在非极性溶剂中，从柱顶加入柱中，再用稍有极性的溶剂使谱带色，再用极性更大的溶剂洗脱被吸附物质

简单介绍操作（1）装柱（2）装样，将待分离各组分的混合物溶液从上端装入色谱柱，流过吸附柱时，停在上端（3）洗脱 利用吸附能力不同，流下去的洗脱速度不同，形成不同层次（即有若干色带），再用不同的洗脱剂洗下不同组分分开收集；

纸色谱：主要用于多官能团或高极性化合物如糖、氨基酸等的分析分离

（1）固定相：特制滤纸（2）溶剂：水和有机溶剂的混合物(3)展开剂：含一定比例水的有机溶剂

简单介绍操作（1）选择固定相特制滤纸（2）溶解待分离各组分（3）划线：在滤纸一端2~3cm 处用铅笔画好起始线，（4）点样：将待分离组分溶液用毛细管在起始线上点一点样点，（5）展开：将滤纸划好的线前端的滤纸接触到展开剂，展开剂利用毛细管作用沿纸条上升，当有机相沿滤纸经过原点时，即在滤纸上水与流动相多次分配，流动相中溶解度较大的物质随溶质移动速度较快，在水中溶解度较大的物质则随溶剂移动速度较慢，则达到分离目的，展开剂前沿接近滤纸另一个端点时取出，标出展开剂位置。

比移值（R f ）表示物质移动的相对距离。溶液移动的距离溶质移动的距离 f R

薄层色谱法

是快速分离和定性分析少量物质的一种重要的实验技术，也用于跟踪反应进程（看有没有新物质产生或者副产物产生，或者反应是否进行完全），也是利用被分离物质极性的差异达到分离目的的一种手段。分为吸附色谱（常用硅胶和氧化铝作吸附剂）和分配色谱（常用硅藻土和纤维素为支持剂），告诉学生今天讲的是吸附色谱，

（1）粘合剂（2）吸附剂（3）溶剂（4）展开剂

薄层吸附色谱常用的吸附剂因粘合剂（有无及种类）或荧光剂不同分为硅胶H 、硅胶G 、硅胶HF 254、硅胶GF 254；氧化铝G ，氧化铝GF 254及氧化铝HF 254等

常用的粘合剂淀粉、羧甲基纤维素钠、煅石膏等，今天用的就是硅胶G （含煅石膏粘合剂）。

展开剂：跟柱色谱类似，根据物质极性、溶解度和吸附剂活性综合考虑，溶剂极性大，洗脱能力大，R f 大，反之相反。若各组分R f 均较大，则可换用较小的或原溶剂中加入适量极性较小的，反之相反。要经过多次试验。

薄层吸附色谱和柱色谱一样化合物吸附能力与其极性成正比，具有较大极性的化合物吸附较强，则利用极性差异可将一些结构相近或顺、反异构体分开。

今天用的吸附剂硅胶G ，粘合剂0.5%羧甲基纤维素钠溶液，样品：0.5%的偶氮苯氯仿溶液、0.5%苏丹Ⅲ的氯仿溶液、二者1：1的混合物，展开剂：环己烷：乙酸乙酯=9：1的溶液

步骤：（1）调制浆料；（2）制板（3）活化（4）点样（5）展开（6）计算R f

记录点样后原点至展开后主斑点中心及展开剂前沿的距离，计算比移值（R f ）

距离溶剂前沿至原点中心的原点中心的距离溶质的最高浓度中心至 f R

三、实验操作

薄层色谱板的制作：

1.调制浆料：

先配制0.5%羧甲基纤维素钠（CMC ）溶液，然后按照1g 硅胶G 需3~4ml 0.5%的羧甲基纤维素钠溶液的比例，称取硅胶G 和CMC 溶液（一个组分配30mlCMC 溶液），将硅胶G 缓慢加到CMC 溶液中，边加边搅，直至浆料即能以小球状低下，又不至于结团，或粘度过大。

2.制板

用手一只手拿住玻板的一端（拿平），用玻棒蘸取两到三滴浆料滴到玻板上，用玻棒将浆料在玻板上轻轻铺开，不够再滴，直至铺满玻板的绝大部分，离手持一端端点约<1cm 时，用手指或者用干净玻棒轻弹玻板下面，利用浆料的流动性（制作浆料时不能太稠），使浆料在玻板上分散均匀，并用带少许浆料的玻棒斜着轻轻刮玻板边沿，使玻板边沿浆料丰满，分散均匀（避免走板时路线弯曲，浆料厚度影响走板快慢和路线），放在水平的桌面上自然蒸发掉大部分溶剂；（太薄，易点样时易弄破，太厚则走不均匀，均不行）（每个同学制4块玻板）

3．活化

将风干到一定程度的薄板放到烘箱中在105~110℃烘干30min 。

4.点样

先用铅笔在离覆盖有吸附剂的一端1cm 左右的位置轻轻画一条横线，为起点，然后用1mm 直径的管口平整的毛细管轻轻在样品瓶中蘸取样品，不要蘸太多，垂直点在横线上，点的直径一般不超过2mm ，如果点一次不够，则等溶剂干后再点第二次（一般只点一次）；同一个板上点几个点时，一般间隔1~1.5cm ，点不要太靠边沿，以免不均匀，走不好，拖尾。本实验用0.5%的偶氮苯氯仿溶液，0.5%苏丹Ⅲ的氯仿溶液和二者1：1混合物三种样品

5.展开

将点好样的板用镊子放到装有展开剂的广口瓶中，展开剂不能淹没起点线，但要浸住吸附剂（想想为什么？），用毛玻片盖住广口瓶，观察溶剂的痕迹，不要让溶剂走过粘合剂覆盖位置，只要两个点走开了就可以了。拿出来，立即画出记下溶剂走的顶点位置，以免干了找不到。然后根据颜色最浓的几个点在记录本上临摹出玻板，并标出起点，以及展开后各点的位置，并用a ，b ，c ，d 标示，记住要给老师检查，回收用过的活化完毕后的玻板（一

个学生2块），计算出相应的R f值。

四、计算

R f1=

R f2=

R f3=

判断哪个点属于哪种物质？