唑来膦酸对LM8骨肉瘤细胞VEGF表达和分泌的影响

唑来膦酸对ＬＭ８骨肉瘤细胞ＶＥＧＦ表达和分泌的影响

刘家国１，杨述华２，何贤峰２，赵猛１，常巍１，何少斌１

ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＺｏｌｅｄｒｏｎｉｃＡｃｉｄｏｎＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＳｅｃｒｅｔｉｏｎｏｆＶＥＧＦｉｎＯｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａＬＭ８ＣｅｌｌＬｉｎｅ

ＬＩＵＪｉａ－ｇｕ０１，ＹＡＮＧＳｈｔｒｈｕａ：，ＨＥＸｉａｎ－ｆｅｎ９２，ＺＨＡＯＭｅｎ９１，ＣＨＡＮＧＷｅｉｌ，ＨＥＳｈａｏ－ｂｉｎｌ

１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ，ＴａｉｈｅＨｏｓｐｉｔａｌ，ＹｕｎｙａｎｇＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｓｈｉｙａｎ４４２０００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ

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Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＺｏｌｅｄｒｏｎｉｃａｃｉｄｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｓｅｃｒｅｔｉｏｎｏｆＶＥＧＦｉｎｏｓ－ｔｅｏｓａｒｃｏｍａＬＭ８ｅｅｌＩｌｉｎｅ．ＭｅｔｈｏｄｓＡｆｔｅｒＬＭ８ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＺｏｌｅｄｒｏｎｉｅａｃｉｄ，Ｓｅｍｉ－ｑｕａｎｔｉｔａ—ｔｉｖｅＰＣＲｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔＯａｓｓｅｓｓｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＶＥＧＦｍＲＮＡ：ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｓｅｃｒｅｔｉｏｎｏｆＶＥＧＦｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄＥＬＩＳＡｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆＶＥＧＦｍＲＮＡ。ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｓｅｃｒｅｔｉｏｎｏｆＶＥＧＦｐｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅｆｏｕｎｄｉｎＬＭ８ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ

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Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃａｃｉｄ；Ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ；Ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ

摘要：目的研究唑来膦酸对骨肉瘤ＬＭ８细胞株ＶＥＧＦ表达和分泌的影响。方法不同浓度的唑来膦酸处理Ｉ．Ｍ８细胞，用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＬＭ８细胞ＶＥＧＦｍＲＮＡ转录水平；免疫组化和ＥＬＩＳＡ法分别检测ＶＥＧＦ蛋白表达和分泌的水平。结果ＬＭ８细胞中均有ＶＥＧＦｍＲＮＡ转录，ＶＥＧＦ蛋白的表达和分泌；与对照组相比，唑来膦酸组（２５ｔｔｍｏｌ／Ｌ，５０ｔｌｍｏｌ／Ｉ。）作用ＬＭ８细胞２４ｈ下调了ＶＥＧＦｍＲＮＡ转录。ＶＥＧＦ蛋白的表达和分泌，且对照组和各浓度组之间的差异有统计学意义（Ｐ＜ｏ．０５）。结论唑来膦酸可抑制骨肉瘤１．ＭＳ细胞ＶＥＧＦ表达和分泌。

关键词：唑来膦酸；骨肉瘤；血管内皮生长因子

中图分类号：Ｒ７３８．１文献标识码：Ａ文章编号：１０００—８５７８（２００８）０３—０１７７—０４

０引言

血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）通过促进内皮细胞的增殖、生存和迁移而刺激血管的生成，在胚胎生成、骨骼的生长以及生殖活动中是一种生理性血管生成的关键调节因子［１］。新生血管过度增生是一些肿瘤的特征，在多种肿瘤组织中已经发现ＶＥＧＦ表达上调，而且它与肿瘤的进展和不良预后密切相关［２’３］，因此通过干预ＶＥＧＦ从而阻断新血管的生成可能成为一种新的肿瘤治疗手段。

双膦酸盐是一种强有力的骨吸收抑制剂，被广

收稿日期：２００７—０３—１２；修回日期：２００７—０７—２５

作者单位：１．４４２０００湖北十堰，郧阳医学院附属十堰市太和医院骨科；２．华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科

作者简介：刘家国（１９７３一），男，硕士，主治医师，主要从事骨肿瘤的研究泛地应用于治疗骨质疏松症，变形性骨炎和恶性肿瘤引起的高钙血症和骨痛症等［４］。除了强大的抗骨吸收功能外，双膦酸盐抗肿瘤作用受到越来越多的重视。本研究采用最新一代的双膦酸盐一唑来膦酸作用于骨肉瘤ＬＭ８细胞株，观察其对骨肉瘤ＬＭ８细胞ＶＥＧＦ表达和分泌等生物学效应的影响，为唑来膦酸抗骨肉瘤的临床应用提供理论依据。

１材料与方法

１．１主要试剂

唑来膦酸（择泰，瑞士诺华制药产品，北京诺华公司惠赠）；骨肉瘤细胞株ＬＭ８购于第四军医大学实验动物中心；ＲＰＭｌｌ６４０培养液为Ｈｙｃｌｏｎｅ公司产品；ＲＴ＿ＰＣＲ相关试剂购于北京中山生物公司；ＶＥＧＦ抗体和免疫组化ＳＡＢＣ试剂盒为武汉博士德生物工程有限公司产品；ＥＬＩＳＡ试剂盒为晶美公

万方数据

司产品。

１．２细胞培养

骨肉瘤细胞株ＬＭ８贴壁生长于含１０％新生牛血清（ＮＣＳ）ＲＰＭｌｌ６４０培养液中，于３７℃、５％Ｃ０２的饱和湿度孵箱中培养。生长至７０％～８０％融合时将细胞用０．２５％的胰酶消化后传代，取对数生长期细胞作后续实验。

１．３半定量ＲＴ－ＰＣＲ检测ｍＲＮＡ表达

ＬＭ８细胞置于含不同浓度唑来膦酸的培养液中作用２４ｈ，收获培养细胞，Ｔｒｉｚｏｌ法提取细胞总ＲＮＡ。逆转录反应体系（２０ｔｄ）组成：ＤＥＰＣ处理水

７弘ｌ，５×Ｂｕｆｅｒ４弘ｌ，ｄＮＴＰｓ（１０ｍｍｏｌ／Ｉ。）２肛ｌ，ＭｇＣｌ２（２５ｍｒｎｏｌ／Ｌ）３肛ｌ，Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１ｔＡ，ＲＮａｓｉｎ１ｔＡ，总ＲＮＡ１弘ｌ，逆转录酶１一。４２℃１ｈ，９５℃１０ｍｉｎ灭活逆转录酶。ＰＣＲ引物序列如下：ＶＥＧＦ上游５，－ＡＴＧＡＡＣＴＩ＇ＴＣＴＧＣＴＧＴＣＴＴ（Ｘ；－３’，下游５，－ＴＣＡＣ＿ｏ（Ⅺ口旧Ｇ（）ＣＴＫ汀１（：Ａ（：Ａ－３７（ＶＥＧＦｌ６５５７６ｂｐＶＦ＿＿’ＧＦｌ２１４４４ｂｐ）；１３－ａｃｔｉｎ上游５’一僦衄邛Ｇ００ＧＡＣＡＧＧｆ４∞｝ＣＡＧＡＡ－－３，下游５，－Ｃ阳ＧＴＣ衄ＡＣＴ唧ＪＣＴＴ－ＧＣｒＧＡＴ～３（１７２ｂｐ）。ＰＣＲ反应体系（５０ｔＡ）：ｃＤＮＡ

模板２肛１＋上下引物各３肛ｌ＋Ｔａｑ聚合酶０．５ｔＡ＋ｄＮＴＰｓ１ｔＡ＋ＭｇＣｌ２３ｔＡ＋１０×Ｂｕｆｅｒ５ｔＡ＋ｄｄＨ２０３２．５ｕｌ，９４℃１ｒａｉｎ，５５℃１ｒａｉｎ，７２℃１ｍｉｎ，共３０个循环，７２℃再延伸１０ｒａｉｎ。２％琼脂糖凝胶电泳鉴定ＰＣＲ产物，数码照相并行灰度值分析（Ｇｅｌ－ＰｒｏＡｎａｌｙｚｅｒ４．ｏ分析软件）。

１．４ＶＥＧＦ免疫组化染色

置盖玻片于６孔板内。取对数生长期的ＬＭ８

细胞（细胞浓度１Ｘ１０５／ｍ１）２ｍｌ铺于盖玻片上，待细胞贴壁后吸出培养液，每孑Ｌ加入含唑来膦酸（２５肛ｍｏｌ／Ｉ。，５０／生ｍｏｌ／Ｌ）的培养液２ｍｌ，以未加药者为对照组，与细胞共培养２４ｈ后，吸去６孑Ｌ板中的培养液，ＰＢＳ漂洗后，用无水甲醇和丙酮混合液（１：１）固定２０ｍｉｎ。按照免疫组化ＳＡＢＣ法试剂盒操作进行。

１．５ＥＩ。ＩＳＡ法检测ＶＥＧＦ的分泌

对照组和试验组经不同浓度唑来膦酸作用２４ｈ

后，收集培养上清液，按ＥＬＩＳＡ试剂盒说明书进行操作，反应终止后即刻用酶标仪测定４５０ｎｍ波长处的吸光度Ａ值，标准品和样品孔的Ａ值减去空白孔的Ａ值。以标准品的Ａ值为纵坐标，标准品的浓度（ｎｇ／Ｌ）为横坐标，绘制标准曲线并拟合标准曲线方程，通过样品的Ａ值在标准曲线方程内求出各样品ＶＥＧＦ浓度。

１．６统计学方法

采用ＳＰＳＳ１１．５统计软件进行统计分析，采用单因素方差分析进行多组样本均数问的比较。

２结果

２．１唑来膦酸对ＬＭ８细胞ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达的影响

经唑来膦酸作用２４ｈ，ＶＥＧＦｍＲＮＡ目的条带的灰度随唑来膦酸浓度的增高而逐渐减弱。用目的基因条带与内参条带的比值进行分析，结果显示ＶＥＧＦｍＲＮＡ的表达在唑来膦酸浓度为０ｔｌｍｏｌ／Ｉ。，２５ｔｉｍｏｌ／Ｌ，５０ｔｌｍｏｌ／Ｌ处理组分别为（０．８８±０．０７），（０．６３±０．０９）和（０．１８±０．１０），三组总体上的差异具有统计学意义（Ｆ＝５０．９９７，Ｐ＜０．０５），并且三组之间的两两比较差异有统计学意义（对照组与２５ｔｔｍｏｌ／Ｉ。唑来膦酸组比较，Ｐ＝０．０１２；对照组与５０ｐ．ｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸组比较，Ｐ＝０．０００；２５ｔ－ｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸组与５０ｔｔｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸组比较，Ｐ＝０．００１）。说明经唑来膦酸处理２４ｈ，ＶＥＧＦｍＲＮＡ的表达呈剂量依赖性减弱，唑来膦酸在转录水平影响ＶＥＧＦ的表达，见图１。

Ｍ：ＤＮＡｍａｒｋ１：５０ｔｔｍｏｌ／ｌ。唑来膦酸组；

２：２５ｔｔｍｏｌ／ｌ。唑来膦酸组；３：对照组

图１唑来膦酸作用２４ｈ后ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达水平

２．２唑来膦酸对ＬＭ８细胞ＶＥＧＦ蛋白表达的影响

免疫组化ＳＡＢＣ法结果显示正常培养条件下骨肉瘤ＬＭ８细胞中等强度表达ＶＥＧＦ蛋白，主要分布在胞浆，也有少量胞核着色。２５ｔｌｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸作用２４ｈ后，ＶＥＧＦ蛋白表达明显减弱，５０弘ｍｏｌ／Ｌ的唑来膦酸几乎完全抑制ＬＭ８细胞的ＶＥＧＦ的表达，见图２。

２．３唑来膦酸对ＬＭ８细胞ＶＥＧＦ蚤白分泌的影响

ＥＬＩＳＡ测定结果显示，０ｔＪ￡ｍｏｌ／Ｌ，２５肚ｍｏｌ／Ｌ，５０＂ｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸处理组的细胞培养上清液中ＶＥＧＦ蛋白浓度分别为（２３７．７±１７．５）ｐｇ／ｍｌ，（１２６．４±６．５）ｐｇ／ｍｌ，（７７．９±５．５）ｐｇ／ｍｌ，三组总体

上的差异具有统计学意义（Ｆ＝１６０．２１０，Ｐ＜０．０５），

万方数据

ａ：对照±ｆｌ；ｂ：２５／ａｎｏｌ／ｌ唑来膦酸组；ｃ：５０／ｚｍｏｌ／Ｉ唑来膦酸组

图２唑来膦酸作用２４ｈ对ＬＭ８细胞ＶＥＧＦ表达的影响（×４００）

并且三组之间的两两比较差异均具有统计学意义（对照组与２５／２ｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸组：Ｐ＝０．０００；对照组与５０肚ｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸组：Ｐ＝０．０００；２５ｐ．ｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸组与５０ｐｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸组：Ｐ＝０．００２）。因此唑来膦酸抑制ＬＭ８细胞分泌ＶＥＧＦ蛋白呈浓度依赖性。

３讨论

肿瘤血管形成的调控机制是当今肿瘤研究的热点之一。肿瘤血管形成对实体瘤的生长和转移有重要作用，新生血管为肿瘤组织提供充足的养分，同时发育不完善的微血管也为肿瘤细胞进入循环转移扩散提供便利。抗肿瘤血管生成已经成为众多治疗恶性肿瘤策略中重要靶点。

肿瘤血管生成（ｔｕｍｏｒａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，ＴＡ）是指肿瘤细胞诱导的毛细血管生长及肿瘤血液循环建立的过程，是实体肿瘤生长、侵袭、扩散转移的关键，受多种促血管生成因子及抑制因子的作用，并有多种酶、细胞黏附分子的参与。其中ＶＥＧＦ可特异性作用于血管内皮细胞，是肿瘤扩增和维持血管功能的关键因子。ＶＥＧＦ作为诱导血管生成的重要因子，主要通过与两种酪氨酸激酶受体ＶＥＧＦＲ－１和ＶＥＧＦＲ－２高度特异性结合，使受体自身磷酸化而激活细胞内信号传导通路，实现生物学效应［５３。（如诱导内皮细胞增殖、迁移，调节内皮细胞整合素、组织型纤维蛋白溶酶原激活因子、尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活因子、纤溶酶原激活抑制因子以及间质胶原酶在内的多种蛋白酶激活因子的表达，促进胞外基质降解，增加微血管通透性，加速血浆蛋白外渗，最终导致新的基质及新生血管腔形成［ｓ］。）研究表明，ＶＥＧＦ不但可以通过特异地作用于内皮细胞上的受体而发挥作用，即通过旁分泌途径诱导血管生成，促进肿瘤生长，而且还可以通过自分泌途径促进肿瘤的生长［６。，进而增加ＶＥＧＦ的分泌，加强其诱导肿瘤血管新生的旁分泌作用。进一步研究显示，Ⅵ好Ｆ受体并非特异表达于血管内皮细胞，肿瘤细胞亦可表达［７］，这是ＶＥＧＦ自分泌作用机制存在的基础。ＶＥＧＦ在临床实践中具有重要价值，骨肉瘤组织中ＶＥＧＦ的表达水平及血清中ⅦＧＦ的含量与肿瘤微血管密度、恶性程度和转移情况呈高度正相关，而与患者的预后则呈显著负相关［８］。本项研究检测了骨肉瘤ＬＭ８细胞ＶＥＧＦｍＲＮＡ转录、蛋白表达和分泌的水平以及唑来膦酸对骨肉瘤ＬＭ８细胞ＶＥＧＦ表达和分泌的影响。研究结果显示唑来膦酸可反向调节骨肉瘤ＬＭ８细胞ＶＥＧＦｍＲＮＡ转录水平以及ＶＥＧＦ蛋白表达和分泌。ＲＴ－ＰＣＲ结果显示，随唑来膦酸的浓度增加，ＶＥＧＦｍＲＮＡ转录水平明显降低。免疫组化和ＥＬＩＳＡ实验结果进一步显示，唑来膦酸剂量依赖性抑制ⅦＧＦ蛋白的表达和分泌。提示唑来膦酸可以通过抑制骨肉瘤细胞ＶＥＧＦ表达和分泌，以旁分泌的方式影响血管内皮细胞的增殖、生长及血管通透性从而抑制肿瘤新生血管的形成，抑制肿瘤的生长和转移，还可能通过自分泌的途径影响ＶＥＧＦ与肿瘤细胞自身表面的受体结合，发挥抑制肿瘤生长等生物学效应。

虽然目前已有一些血管生成抑制药物，但大部分由于其毒副作用不能用于临床，寻找新的高效无毒的血管生成抑制剂已引起人们的重视。唑来膦酸等双膦酸盐药物是一类广泛应用于临床的骨吸收抑制剂，对骨组织尤其是骨转换活跃区域具有很高亲和力，从一定程度上作为天然的骨靶向剂，理论上可以在骨肉瘤组织中积聚很高的浓度以及其相对较小的毒副作用［９，１０］，在骨肉瘤等骨肿瘤中有着广阔的临床应用前景。

参考文献：

Ｅ１］ＲｏｂｉｎｓｏｎＣＪ，ＳｔｒｉｎｇｅｒＳＥ．Ｔｈｅｓｐｌｉｃｅｖａｒｉａｎｔｓｏｆｖａｓｃｕｌａｒａｎ—ｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）ａｎｄｔｈｅｉｒｒｅｃｅｐｔｏｒｓ［Ｊ］．ＪＣｅｌｌＳｃｉ。２００１，１１４（５）：８５３—８６５．

［２］ＡｔｉｑｕｒＲａｈｍａｎＭ，ＴｂｉＭＡｎｔｉ－ａｎｇｉｏｇｅｎｉｅｔｈｅｒａｐｙｉｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＢｉｏｍｅｄＰｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ，２００３，５７（１０）：４６３—４７０．［３］ＳｈｅｌｌｍａｎＹＧ，ＰａｒｋＹＬ，ＭａｒｔⅨ；，ｅｔａ１．Ｒｅｌｅａｓｅｏｆｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｆｒｏｍａｈｕｍａｎｍｅｌａｎｏｍａｅｅｌｌ

ｌｉｎｅ，万方数据

ＷＭ３５。ｉｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｈｙｐｏｘｉａｂｕｔｎｏｔｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｒａｄｉａｔｉｏｎａｎｄｉｓｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｄｂｙａｃｔｉｖａｔｅｄＲａｓｍｕｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪＩｎｖｅｓｔＤｅｒｍａ—ｔｏｌ，２００３，１２１（４）：９１０－９１７．

［４］ＲｏｄａｎＧＡ，ＭａｒｔｉｎＴＪ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｐｐｒｏａｃｈｅｓｔｏｂｏｎｅｄｉｓｅａ—ｓｅｓ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００，２８９（５４８４）：１５０８—１５１４．

［５３ＭｃＣｏｌｌＢＫ，ＢａｌｄｗｉｎＭＥ，ＲｏｕｈｉｌＳ。ｅｔａ１．ＰｌａｓｍｉｎａｃｔｉｖａｔｅｓｔｈｅｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓＶＥＧＦ：ＣａｎｄⅦＧＦＤ［Ｊ］．ＪＥｘｐＭｅｄ，２００３，１９８（６）：８６３－８６８．

［６］ＢａｃｈｅｌｄｅｒＲＥ，ＣｒａｇｏＡ，ＣｈｕｎｇＪ，ｅｔａ１．Ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｉｓａｎａｕｔｏｃｒｉｎｅｓｕｒｖｉｖａｌｆａｃｔｏｒｆｏｒｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ－ｅｘ－ｐｒｅｓｓｉｎｇｂｒｅａｓｔｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００１，６１（１５）：５７３６－５７４０．

［７３ＢａｉｒｅｙＯ，ＢｏｙｃｏｖＯ，ＫａｇａｎｏｖｓｋｙＥ，ｅｔａ１．Ａｌｌｔｈｒｅｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓｆｏｒｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）ａｒｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄｏｎＢ－ｃｈｒｏｎｉｃｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ（ＣＬＬ）ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＬｅｕｋＲｅｓ，

２００４，２８（３）：２４３—２４８．

［８］ＳｈｉｈＣＨ，ＯｚａｗａＳ，ＡｎｄｏＮ，ｅｔａ１．ＶａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａＩｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｅｄｉｃｔｓｏｕｔｃｏｍｅａｎｄｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅ－ｔａｓｔａｓｉｓｉｎｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａｏｆｔｈｅｅｓｏｐｈａｇｕｓ［Ｊ］．ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２０００，６（３）：１１６１—１１６８．

［９］ＪｏｎａｔｈａｎＲ，ＭｉｃｈａｅｌＪ．ＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃＰｒｏｆｉｌｅｏｆＺｏｌｅｄｒｏｎｉｃＡｃｉｄ：ＡＨｉｇｈｌｙＰｏｔｅｎｔＩｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆＢｏｎｅＲｅＳｏｒｐｔｉｏｎ［Ｊ］．ＤｒｕｇＤｅｖＲｅｓ，２００２，５５（３）：２１０－２２４．

［１０］ＨｅｙｍａｎｎＤ，ＯｒｙＢ，ＢｌａｎｃｈａｒｄＦ，ｅｔａ１．Ｅｎｈａｎｃｅｄｔｕｍｏｒｒｅ－ｇｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｆｉｓｓｕｒｅｒｅｐａｉｒｗｈｅｎｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃａｃｉｄｉｓｃｏｒｎｂｉｎｅｄｗｉｔｈｉｆｏｓｆａｍｉｄｅｉｎｒａｔｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｒｎａ［Ｊ］．Ｂｏｎｅ，２００５，３７（１）：７４－８６．

［编辑：贺文；校对：刘红武］

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