Super1300植物表达载体
Super1300
编号 载体名称
北京华越洋生物VECT0510 Super1300
Super1300载体基本信息
出品公司: --‐--‐
载体名称: Super1300
质粒类型: 植物双元表达载体
高拷贝/低拷贝: --‐--‐
启动子: --‐--‐
克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶
载体大小: --‐--‐
5' 测序引物及序列: --‐--‐
3' 测序引物及序列: --‐--‐
载体标签: --‐--‐
载体抗性: --‐--‐
筛选标记: --‐--‐
备注: --‐--‐
产品目录号: --‐--‐
稳定性: --‐--‐
组成型: --‐--‐
病毒/非病毒: --‐--‐
其他植物载体质粒：
pBI101 pDF15
pBI121 pEarleyGate 100 pBI221 pEarleyGate 101 pBI221--‐GFP pEarleyGate 102 pBin19 pEarleyGate 103 pBINPLUS pEarleyGate 104 pCambia0105.1R pEarleyGate 201 pCambia0305.1 pEarleyGate 202 pCambia0305.2 pEarleyGate 203 pCambia0380 pEarleyGate 204 pCambia0390 pEarleyGate 205 pCambia1105.1 pEarleyGate 301 pCambia1105.1R pEarleyGate 302 pCambia1200 pEarleyGate 303 pCambia1201 pEarleyGate 304 pCambia1281Z pFGC5941 pCambia1291Z pGA643 pCambia1300 pGreen
pCambia1300GFP pGreen 0029 pCambia1301 pGreen0029 pCambia1302 pGreen029 pCambia1303 pGreenII pCambia1304 pGreenII 0049 pCambia1305.1 pGreenII 0179 pCambia1305.2 pGreenII 0229 pCambia1380 pGreenII 0579 pCambia1381 pHANNIBAL pCambia1381Xa pHELLSGATE pCambia1381Xb pHELLSGATE 12 pCambia1381Xc pHELLSGATE 4 pCambia1381Z pHELLSGATE 8 pCambia1390 pKANNIBAL pCambia1391 pPZP100 pCambia1391Xa pPZP101 pCambia1391Xb pPZP102 pCambia1391Xc pPZP111 pCambia1391Z pPZP112 pCambia2200 pPZP121 pCambia2201 pPZP122 pCambia2300 pPZP200 pCambia2301 pPZP201 pCambia2301--‐101 pPZP202 pCambia3200 pPZP211 pCambia3201 pPZP212 pCambia3300 pPZP221 pCambia3301 pPZP222 pCambia35s--‐ECFP pPZp--‐RCS2--‐Bar pCambia35s--‐EGFP pRI 101--‐AN pCambia35s--‐EYFP pRI 101--‐ON pCambia5105 pRI 201--‐AN pSB1 pRI 201--‐ON pSB11 pRI 909 pSoup pRI 910 pSPYCE(MR) pRI101
pTCK303 pSAT1--‐cCFP--‐C Super1300 pSAT1--‐cCFP--‐N pSAT6nCeruleanC(A+) pSAT4--‐nVenus--‐C
pCambia 1391Xb植物表达载体
pCambia 1391Xb 编号 载体名称 北京华越洋生物VECT0020 pCambia 1391Xb pCambia 1391Xb载体基本信息 出品公司: Cambia 载体名称: pCambia1391Xb, p Cambia 1391Xb 质粒类型: 植物表达载体 高拷贝/低拷贝: 低拷贝 启动子: -- 克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶 载体大小: 10647 b p 5' 测序引物及序列: -- 3' 测序引物及序列: -- 载体标签: GusA 载体抗性: 卡那和潮霉素 筛选标记: HPTII 备注: -- 产品目录号: 1391Xb 稳定性: 稳定表达 组成型: 非组成型 病毒/非病毒: 非病毒
pCambia 1391Xb载体质粒图谱和多克隆位点信息 其他植物载体质粒： pBI101 pDF15 pBI121 pEarleyGate 100 pBI221 pEarleyGate 101 pBI221--‐GFP pEarleyGate 102 pBin19 pEarleyGate 103 pBINPLUS pEarleyGate 104 pCambia0105.1R pEarleyGate 201 pCambia0305.1 pEarleyGate 202 pCambia0305.2 pEarleyGate 203 pCambia0380 pEarleyGate 204 pCambia0390 pEarleyGate 205 pCambia1105.1 pEarleyGate 301 pCambia1105.1R pEarleyGate 302 pCambia1200 pEarleyGate 303 pCambia1201 pEarleyGate 304 pCambia1281Z pFGC5941 pCambia1291Z pGA643 pCambia1300 pGreen pCambia1300GFP pGreen 0029
pCambia1391Z 植物表达载体
北京华越洋?生物?首页关于我们新闻中?心产品展?示在线留?言加?入我们 联系我们 pCambia1391Z pCambia1391Z 产品编号载体名称北京华越洋?生物VECT0010 pCambia1391Z pCambia 1391Z 载体基本信息 出品公司:Cambia 载体名称: pCambia1391Z, pCambia 1391Z 质粒类型: 植物表达载体?高拷贝/低拷贝:低拷贝启动?子:CAMV 35S 克隆?方法 :多克隆位点，限制性内切酶 载体?大?小: 11227 bp 5' 测序引物及序列:M13-F: TGTAAAACGACGGCCAGT 3' 测序引物及序列 : M13-R: CAGGAAACAGCTATGAC 载体标签: GusA 载体抗性: 卡那和潮霉素筛选标记: HPTII 详情产品分类 ?生化试剂 精细化学品 中间体/标准品 病理实验试剂 其他关键词： 热线电话：400-818-1148150 1148 1284
备注:-- 产品?目录号:1391Z 稳定性:稳定表达 组成型:?非组成型 病毒/?非病毒:?非病毒 pCambia 1391Z载体质粒图谱和多克隆位点信息 pCambia 1391Z载体序列 LOCUS pCAMBIA1391Z 11227 bp ds-DNA circular SYN DEFINITION Agrobacterium binary vector for plant transformation, with hygromycin- and kanamycin-resistance and LacZ-GUS genes plus the pUC9 MCS. ACCESSION AF234312 VERSION . KEYWORDS pCAMBIA1391Z SOURCE synthetic DNA construct ORGANISM synthetic DNA construct REFERENCE 1 (bases 1 to 11227) AUTHORS Cambia TITLE Direct Submission JOURNAL Exported from SnapGene Viewer COMMENT The GenBank record was corrected by inserting a G at position 4743. FEATURES Location/Qualifiers
几种新型植物基因表达载体的构建方法
几种新型植物基因表达载体的构建方法 摘要:利用基因工程技术手段研究基因功能过程中，构建基因表达载体处于转基因植物的主导地位，采用合适的构建方法会使实验效果事半功倍。植物基因表达载体的构建方法除了传统构建法、Gateway 技术、三段T-DNA 法、一步克隆法等，还有近年来出现的几种新型的载体构建方法：基于竞争性连接原理快速构建小片段基因表达载体；Micro RNA 前体PCR 置换法适用于构建小分子RNA 表达载体；重组融合PCR 法特别适用于插入片段中含有较多限制性酶切位点的载体构建；利用In-Fusion 试剂盒可以将任何目的片段插入一个线性化载体的某个区域；构建多片段复杂载体可采用不依赖序列和连接的克隆方法(Sequence and ligation-independent cloning, SLIC) 法；Gibson 等温拼接法。本文将在总结分析前人工作的基础上，分析这6种新方法的特点，期望通过这几种新的方法给植物基因工程表达载体的构建提供新的思路。 关键词: Micro RNA 前体PCR 置换法，In-Fusion 试剂盒法，重组融合PCR 法，Gibson 等温拼接法，Golden Gate 拼接法 基因克隆、载体构建是植物功能基因组研究中的常规步骤[ 1 ]。而载体构建是基因工程和分子生物学研究中常用的基础技术。随着植物基因工程技术的发展，适合于不同研究目的各种载体系统应运而生，其中在转基因植物中最常用的是质粒载体。传统的载体构建方法在进行构建多片段拼接的复杂载体时，需要精心选择酶切位点[ 2 ]，有时还需要构建多个中间载体，操作比较麻烦，费时费力，因此寻找简单、高效、快捷的载体构建方法具有重要的现实意义。从1969 年Arber 等发现了限制性内切酶，载体的构建方法逐步发展，从传统构建方法到
pcambia2301-101植物表达载体
pCambia2301--‐101 编号 载体名称 北京华越洋生物VECT0470 pCambia2301--‐101 pCambia2301--‐101载体基本信息： 出品公司: --‐--‐ 载体名称: pcambia2301--‐101 质粒类型: 植物双元表达载体 高拷贝/低拷贝: --‐--‐ 启动子: --‐--‐ 克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶 载体大小: --‐--‐ 5' 测序引物及序列: --‐--‐ 3' 测序引物及序列: --‐--‐ 载体标签: --‐--‐ 载体抗性: --‐--‐ 筛选标记: --‐--‐ 备注: --‐--‐ 产品目录号: --‐--‐ 稳定性: --‐--‐ 组成型: --‐--‐ 病毒/非病毒: --‐--‐ 其他植物载体质粒： pBI101 pDF15 pBI121 pEarleyGate 100 pBI221 pEarleyGate 101 pBI221--‐GFP pEarleyGate 102 pBin19 pEarleyGate 103 pBINPLUS pEarleyGate 104 pCambia0105.1R pEarleyGate 201 pCambia0305.1 pEarleyGate 202 pCambia0305.2 pEarleyGate 203 pCambia0380 pEarleyGate 204 pCambia0390 pEarleyGate 205 pCambia1105.1 pEarleyGate 301 pCambia1105.1R pEarleyGate 302 pCambia1200 pEarleyGate 303 pCambia1201 pEarleyGate 304 pCambia1281Z pFGC5941 pCambia1291Z pGA643 pCambia1300 pGreen
植物表达载体 Pcambia1302 序列图谱
载体质粒图谱和多克隆位点信息 载体简介 载体序列 LOCUS AF234298 10549 bp DNA circular SYN 24-APR-2000 DEFINITION Binary vector pCAMBIA-1302, complete sequence. ACCESSION AF234298 VERSION AF234298.1 GI:7638073
KEYWORDS . SOURCE Binary vector pCAMBIA-1302 ORGANISM Binary vector pCAMBIA-1302 other sequences; artificial sequences; vectors. REFERENCE 1 (sites) AUTHORS Hajdukiewicz,P., Svab,Z. and Maliga,P. TITLE The small, versatile pPZP family of Agrobacterium binary vectors for plant transformation JOURNAL Plant Mol. Biol. 25 (6), 989-994 (1994) PUBMED 7919218 REFERENCE 2 (bases 1 to 10549) AUTHORS Roberts,C., Rajagopal,S., Smith,L.M., Nguyen,T.A., Yang,W., Nugrohu,S., Ravi,K.S., Vijayachandra,K., Harcourt,R.L., Dransfield,L., Desamero,N., Slamet,I., Hadjukiewicz,P., Svab,Z., Maliga,P., Mayer,J.E., Keese,P.K., Kilian,A. and Jefferson,R.A. TITLE A comprehensive set of modular vectors for advanced manipulations and efficient transformation of plants JOURNAL Unpublished REMARK Full description of constructs REFERENCE 3 (bases 1 to 10549) AUTHORS Roberts,C., Rajagopal,S., Smith,L.M., Nguyen,T.A., Yang,W., Nugrohu,S., Ravi,K.S., Vijayachandra,K., Harcourt,R.L., Dransfield,L., Desamero,N., Slamet,I., Hadjukiewicz,P., Svab,Z., Maliga,P., Mayer,J.E., Keese,P.K., Kilian,A. and Jefferson,R.A. TITLE Direct Submission
叶绿体表达载体--如何构建载体
如何构建载体 1 启动子的选用和改造 外源基因表达量不足往往是得不到理想的转基因植物的重要原因。由于启动子在决定基因表达方面起关键作用，因此，选择合适的植物启动子和改进其活性是增强外源基因表达首先要考虑的问题。 目前在植物表达载体中广泛应用的启动子是组成型启动子，例如，绝大多数双子叶转基因植物均使用CaMV35S启动子，单子叶转基因植物主要使用来自玉米的Ubiquitin启动子和来自水稻的Actinl启动子。在这些组成型表达启动子的控制下，外源基因在转基因植物的所有部位和所有的发育阶段都会表达。然而，外源基因在受体植物内持续、高效的表达不但造成浪费，往往还会引起植物的形态发生改变，影响植物的生长发育。为了使外源基因在植物体内有效发挥作用，同时又可减少对植物的不利影响，目前人们对特异表达启动子的研究和应用越来越重视。已发现的特异性启动子主要包括器官特异性启动子和诱导特异性启动子。例如，种子特异性启动子、果实特异性启动子、叶肉细胞特异性启动子、根特异性启动子、损伤诱导特异性启动子、化学诱导特异性启动子、光诱导特异性启动子、热激诱导特异性启动子等。这些特异性启动子的克隆和应用为在植物中特异性地表达外源基因奠定了基础。例如，瑞士CIBA-GEIGY公司使用PR-IA启动子控制转基因烟草中Bt毒蛋白基因的表达，由于该启动子可受水杨酸及其衍生物诱导，通过喷酒廉价、无公害的化学物质，诱导抗虫基因在虫害重发生季节表达，显然是一个十分有效的途径。 在植物转基因研究中，使用天然的启动子往往不能取得令人满意的结果，尤其是在进行特异表达和诱导表达时，表达水平大多不够理想。对现有启动子进行改造，构建复合式启动子将是十分重要的途径。例如，Ni等人将章鱼碱合成酶基因启动子的转录激活区与甘露碱合成酶基因启动子构成了复合启动子，GUS表达结果表示：改造后的启动子活性比35S启动子明显提高。吴瑞等人将操作诱导型的PI-II基因启动子与水稻Actinl基因内含子1进行组合，新型启动子的表达活性提高了近10倍（专利）。在植物基因工程研究中，这些人工组建的启动子发挥了重要作用。 2 增强翻译效率 为了增强外源基因的翻译效率，构建载体时一般要对基因进行修饰，主要考虑三方面内容： 2.1添加5｀-3｀-非翻译序列 许多实验已经发现，真核基因的5｀-3｀-非翻译序列（UTR）对基因的正常表达是非常必要的，该区段的缺失常会导致mRNA的稳定性和翻译水平显著下降。例如，在烟草花叶病毒（TMV）的126kDa 蛋白基因翻译起始位点上游，有一个由68bp核苷酸组成的Ω元件，这一元件为核糖体提供了新的结合位点，能使Gus基因的翻译活性提高数十倍。目前已有许多载体中外源基因的5｀-端添加了Ω翻译增强序列。Ingelbrecht等曾对多种基因的 3｀-端序列进行过研究，发现章鱼碱合成酶基因的3｀-端序列能使NPTII基因的瞬间表达提高20倍以上。另外，不同基因的3｀-端序列增进基因表达的效率有所不同，例如，rbcS3｀-端序列对基因表达的促进作用比查尔酮合酶基因的3｀-端序列高60倍。 2.2 优化起始密码周边序列 虽然起始密码子在生物界是通用的，然而，从不同生物来源的基因各有其特殊的起始密码周边序列。例如，植物起始密码子周边序列的典型特征是AACCAUGC,动物起始密码子周边序列为CACCAUG，原核生物的则与二者差别较大。Kozak详细研究过起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响，并总结出在真核生物中，起始密码子周边序列为ACCATGG时转录和翻译效率最高，特别是-3位的A对翻译效率非常重要。该序列被后人称为Kozak序列，并被应用于表达载体的构建中。例如，有一个细菌的几丁质酶基因，原来的起始密码周边序列为UUUAUGG，当被修饰为ACCAUGG，其在烟草中的表达水平提高了8倍。因此，利用非植物来源的基因构建表达载体时，应根据植物起始密码子周边序列的特征加以修饰改造。 2.3对基因编码区加以改造
双元表达载体系统
双元表达载体系统 双元表达载体系统主要包括两个部分： 一部分为卸甲Ti质粒，这类Ti质粒由于缺失了T－DNA 区域，完全丧失了致瘤作用，主要是提供Vir基因编码表达Vir蛋白的功能，VIR基因编码的virD2蛋白相当于反式作用元件，能够识别农杆菌转运DNA（T-DNA）两端24bp序列,进而将T-DNA以单链的形式切割下来，同时，VIR基因编码的virE2能够与单链T-DNA结合，形成T-复合物，在核定位序列的作用下，经过宿主细胞T4SS转运体系进入宿主细胞质。之后便是宿主细胞的转运过程，激活处于反式位置上的T－DNA的转移。 另一部份是微型Ti质粒(Mini-Ti plasmid)，它在T－DNA左右边界序列之间提供植株选择标记如NPTII基因以及Lac Z基因等。 双元载体系统的构建的原理是Ti质粒上的Vir基因可以反式激活T－DNA 的转移。 与共整合载体所不同的是，它不依赖两个质粒之间的同源序列，不需要共整合过程就能在农杆菌内独立复制。 原理 1.一般植物表达载体是成套使用的，一套中有两个，一个是带有可以供插入外源表达基因的MCS和筛选标签的融合蛋白（通常是GFP或Gus）的普通载体。另一个载体就是双元载体（binary-vector）了。通常我们是先将外源基因插入带有筛选标记的载体，然后将此载体上的35S promoter-expression gene-gfp这段全部切下，然后构建亚克隆，其过程就是将上述的片断插入双元载体的LB和RB之间，其插入方向是可以任意的。然后将带有35S promoter-expression gene-gfp的双元载体转化农杆菌，在通过农杆菌转染植物，最后可以通过农杆菌特有的ti-DNA转染机制，将双元载体的LB和RB之间的片段融合进宿主的基因组上。我以前用的是pCAMBIA3101+pUC-35S-GFP以及pZPZ211和pAA等 2.双元表达载体系统主要包括两个部分 3.一部分为辅助Ti质粒，这类Ti质粒由于缺失了T－DNA 区域，完全丧失了致瘤作用，主要是提供ir基因功能，激活处于反式位置上的T－DNA的转移。 4.另一部份是微型Ti质粒(Mini-Ti plasmid)，它在T－DNA左右边界序列之间提供植株选择标记如NPTII基因以及Lac Z基因等。 5.双元载体系统的构建的原理是Ti质粒上的ir基因可以反式激活T－DNA 的转移。与共整合载体所不同的是，它不依赖两个质粒之间的同源序列，不需要共整合过程就能在农杆菌内独立复制。 6.外源DNA克隆到微型Ti质粒T－DNA左右边界序列之间
双元表达载体
双元表达载体 与共整合载体(cointegrating vector) 相对，binary vector 指转化由两个载体来完成，相容。vir基因在实现T-DNA转移过程中，没有与T-DNA在同一质粒上。 小Ti质粒含T-DNA区，而缺少vir区的质粒，比如，pBIN19, pBI121 带vir区的质粒主要功能是利用vir基因的作用，激活T-DNA 的转移。比如常用农杆菌菌株LBA4404，其中带有这种T-DNA缺失而保留vir的质粒pAL4404. 也就是说，在转化时农杆菌中是有两个质粒了？ 另，野生型的Ti质粒是不是vir 和T－DNA都有了？ -------------------------------------------------------------------------------- 双元表达载体系统主要包括两个部分 一部分为卸甲Ti质粒，这类Ti质粒由于缺失了T－DNA 区域，完全丧失了致瘤作用，主要是提供Vir基因功能，激活处于反式位置上的T－DNA的转移。 另一部份是微型Ti质粒(Mini-Ti plasmid)，它在T－DNA左右边界序列之间提供植株选择标记如NPTII基因以及Lac Z基因等。 双元载体系统的构建的原理是Ti质粒上的Vir基因可以反式激活T－DNA 的转移。与共整合载体所不同的是，它不依赖两个质粒之间的同源序列，不需要共整合过程就能在农杆菌内独立复制。 -------------------------------------------------------------------------------- 双元载体系统又叫二元载体系统，是指农杆菌中用于把Ｔ－ＤＮＡ区域转入受体细胞的双质粒系统。其中一个质粒带有毒性基因，另一质粒带有改造过的Ｔ－ＤＮＡ区域，用于携带外源基因。 我们一般构建的载体通常都是在一类实验材料中进行，当试验需要不同的实验材料时就需要双元载体来介导了，本人表述欠缺给你举个例子吧：做转基因植物是用到binary vector非常正常的，首先要拿到目的片段，这一系列的操作肯定也是在载体中进行的，这里的载体因为都是在细菌中进行的，所以只用一元载体就可以了，当我们把目的片段往植物中导入时，就需要用到双元载体了，现将载体在菌体中扩增，数量达到以后再介导到植物中，常用的就是农杆菌介导（构建的载体质粒在农杆菌中可以随菌体一起扩增），然后进入到植物体内后再通过双元载体中的转导序列将目的片段融合到植物基因组中，所以双元载体有两套不同的筛选因子，在菌体中用一种，在植物中用一种！
pCambia35s-ECFP植物表达载体
pCambia35s--‐ECFP 编号 载体名称 北京华越洋生物VECT1010 pCambia35s--‐ECFP pCambia35s--‐ECFP载体基本信息 出品公司: --‐--‐ 载体名称: pcambia35s--‐ECFP 质粒类型: 植物双元表达载体 高拷贝/低拷贝: --‐--‐ 启动子: --‐--‐ 克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶 载体大小: --‐--‐ 5' 测序引物及序列: --‐--‐ 3' 测序引物及序列: --‐--‐ 载体标签: ECFP 载体抗性: --‐--‐ 筛选标记: --‐--‐ 备注: --‐--‐ 产品目录号: --‐--‐ 稳定性: --‐--‐ 组成型: --‐--‐ 病毒/非病毒: --‐--‐ 其他植物载体质粒： pBI101 pDF15 pBI121 pEarleyGate 100 pBI221 pEarleyGate 101 pBI221--‐GFP pEarleyGate 102 pBin19 pEarleyGate 103 pBINPLUS pEarleyGate 104 pCambia0105.1R pEarleyGate 201 pCambia0305.1 pEarleyGate 202 pCambia0305.2 pEarleyGate 203 pCambia0380 pEarleyGate 204 pCambia0390 pEarleyGate 205 pCambia1105.1 pEarleyGate 301 pCambia1105.1R pEarleyGate 302 pCambia1200 pEarleyGate 303 pCambia1201 pEarleyGate 304 pCambia1281Z pFGC5941 pCambia1291Z pGA643 pCambia1300 pGreen
NP1和GAFP双价抗病基因植物表达载体的构建
N P 1和GA F P 双价抗病基因植物表达载体的构建3 陈 英1,戴咏梅1,2,王义琴3,孙勇如3,黄敏仁1,王明庥1 (1.国家林业局林木遗传与基因工程重点实验室(南京林业大学),江苏 南京 210037;2.上海市花卉育种中心,上海 200072; 3.中国科学院遗传与发育生物研究所,北京 100101)摘 要:防御素对病毒、细菌和真菌都具有一定的抗性。天麻抗真菌蛋白可抑制多种真菌的生长。笔者利用DNA 重组技术,将这两个抗病机制不同、抗菌谱均较广的抗病基因(天麻抗真菌蛋白GA FP 和防御素N P1基因)构建在一个植物表达载体pBin GA FP 2N P1上,为一次性地获得含双价抗病基因的植株奠定了基础。 关键词:防御素基因N P1;天麻抗真菌蛋白基因GA FP ;双价抗病基因;表达载体 中图分类号:S722.3;Q813 文献标识码:A 文章编号:1000-2006(2005)06-0007-04The Construction of Tw o Disease 2resistance G ene N P 1and GA F P V ector CH EN Y ing 1,DA I Y ong 2mei 1,2,WAN G Y i 2qin 3,SUN Y ong 2ru 3,HUAN G Min 2ren 1,WAN G Ming 2xiu 1 (1.The Key Laboratory of Forest Tree Genetics and Engineering State Forestry Administration (Nanjing Forestry University ), Nanjing 210037,China ;2.Shanghai Flower Breeding Centre ,Shanghai 200072,China ; 3.Institute of Genetics and Development Biology ,CAS ,Beijing 100101,China ) Abstract :Defensin is resistant to many kinds of virus ,bacterium and f ungusl.Gast rodia An 2tif ungal Protein (GA FP )has t he resistant ability to more t han twenty kinds of f ungi.The antidisease mechanisms and spectrum of t he two genes are different.U sing DNA reconst ruc 2tion met hod a vector (pBin35SGA FPN P1)t hat contains two antidisease genes :N P 1and GA F P were const ructed.Then two disease 2resistance genes could be t ransferred into t he same plant just t hrough one time of t ransformation t hat can improve t he disease 2resistant a 2bility of t he t ransgenic plant to more kinds of pat hogens.So t he proceeding of plant antidise 2se breeding could be accelerated. K ey w ords :Defensin N P1;Gast rodia antif ungal p rotein (GA FP );Two antidisease genes ;Vector const ruction 植物病害主要由真菌、细菌、病毒和线虫引起。传统的抗病育种方法主要是利用植物本身的抗病特性通过有性杂交进行新品种选育。但由于可利用的抗性资源少、费时、耗资较大,并且病原小种或环境的变化也会导致抗性退化,使育种效果往往不理想。而现代分子生物学和基因工程的迅速发展开辟了抗病育种的新途径。目前在植物抗病基因工程中常只转入单个抗病基因,但有时由于单基因表达强度不够,抗病效果不甚理想;或者这些基因可以强表达,但作用机制比较单一,只能控制某一病原或生理小种和株系,同时高选择压会增强病原的变异速度,大面积推广单一抗病品种可能会引起品种抗病性的快速丧失。因此提高转基因植物的广谱抗病性和持久性十分重要。而同时转入两个或两个以上的起协同作用的抗病基因是解决这一问题的有效途径[1],这一策略在培育抗病、抗虫等抗逆性转基因植物方面已得到应用[2]。 兔防御素是抗微生物谱最广的防御素(Defensin )之一,它的抗病机理特殊,微生物对其不易产生抗性,兔防御素基因已转入多种植物,在植物抗病育种中应用前景较为广泛[3]。天麻块茎中所含的天麻 第29卷第6期2005年11月 南京林业大学学报(自然科学版)Journal of Nanjing Forest ry University (Nat ural Sciences Edition ) Vol.29,No.6 Nov.,2005 3收稿日期:2005-03-28 修回日期:2005-09-08 基金项目:上海市农业科技攻关项目(第4-4号);南京林业大学高学历引进人才资助项目 作者简介:陈 英(1973-),女,讲师,博士。
pCambia1291Z植物表达载体
pCambia1291Z VECT0110 pCambia1291Z pCambia 1291Z : Cambia : pCambia1291Z, p Cambia 1291Z : /: : CAMV 35S : : 11379 b p 5' : M13-F: T GTAAAACGACGGCCAGT 3' : M13-R: C AGGAAACAGCTATGAC : GusA : : HPTII : -- : 1291Z : : /: pCambia 1291Z
pCambia 1291Z LOCUS pCAMBIA1291Z 11379 b p d s-DNA circular S YN DEFINITION Agrobacterium b inary v ector f or p lant t ransformation, w ith hygromycin- a nd c hloramphenicol-resistance a nd L acZ-GUS g enes plus the p UC9 M CS. ACCESSION AF234295 VERSION . KEYWORDS pCAMBIA1291Z SOURCE synthetic D NA c onstruct ORGANISM synthetic D NA c onstruct COMMENT This f ile i s c reated b y V ector N TI COMMENT The G enBank r ecord w as c orrected b y i nserting a G a t p osition 4743. FEATURES Location/Qualifiers source 1..11379 /organism="synthetic D NA c onstruct" /lab_host="Plant C ells" /mol_type="other D NA" CDS join(2..16,207..2024)
植物表达载体pCAMBIA230_省略__ros的构建及其在草莓上的验证_金万梅
基金项目：北京市重要农作物转基因技术创新研究(No.KJCX201102003)收稿日期：2013-11-01接受日期：2013-12-23 Online system:https://www.360docs.net/doc/ed110605.html, 农业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2014,22(3):389~396 DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2014.03.015 植物表达载体pCAMBIA2301-del -ros 的构建及其在草莓上的验证 金万梅*王华 北京市农林科学院林业果树研究所，北京100093*通讯作者，jwm0809@https://www.360docs.net/doc/ed110605.html, 摘要为了研究多基因互作，减少多次转化的不确定性，本研究在花青素合成调节基因del (delila )和ros (rosea1)的上下游分别引入CaMV 35S 启动子和nos 终止子，以pBI121-del 和pCAMBIA1301-ros 做中间载体，并利用Bam H Ⅰ和Bgl Ⅱ产生相同4碱基末端的片段，在连接酶的作用下将CaMV 35S 启动子分别驱动的del 和ros 基因构建在同一个植物表达载体pCAMBIA2301上，利用所构建的载体pCAMBIA2301-del -ros 通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens )LBA4404介导的方法转化草莓(Fragaria ananassa Duch.)，并进行PCR 检测，获得转基因草莓。通过组织观察发现，转基因草莓的根和叶的颜色变成红紫色；实时RT-PCR 分析表明，在转基因草莓中花青素合成的结构基因花色素合成酶(anthocyanidinsynthase,ANS )、查尔酮异构酶(chalcone-flavanone isomerase,CHI )、查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS )、二羟黄酮醇-4-还原酶(dihydroflavonol-4-reductase,DFR )、黄烷酮-3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H )和类黄酮-3-O-葡糖基转移酶(UDP glucose-flavonoid 3-O-glcosyl-transferase,UFGT )在转基因株系中的表达均上调，这也进一步证实通过该方法构建的植物表达载体pCAMBIA2301-del -ros 可以用来转化植物。本研究结果表明，植物表达载体pCAMBIA2301-del -ros 成功构建，为多基因植物表达载体的构建提供了一种思路，也为在植物体内同时研究多个基因的互作提供借鉴。关键词植物表达载体，构建，草莓，转基因 Construction of Plant Expression Vector pCAMBIA2301-del -ros and Genetic Transformation in Strawberry(Fragaria ananassa Duch.) JIN Wan-Mei *WANG Hua Institute of Forestry and Pomology,Beijing Academy of Agriculture and Forestry Science,Beijing 100093,China *Corresponding author,jwm0809@https://www.360docs.net/doc/ed110605.html, Abstract In order to study multi-gene interaction and reduce the blindness of many transformation,CaMV 35S promoter and nos terminator were added into gene del and ros upstream and downstream,respectively.del and ros genes can regulate anthocyanin synthesis.Intermediate vector pBI121-del and pCAMBIA1301-ros were constructed.Bam H Ⅰand BglⅡproduced the same end tetra-nucleotide segments.The CaMV 35S promoter separately driven del and ros genes were constructed in plant expression vector pCAMBIA2301under ligase.Strawberries(Fragaria ananassa Duch.)were treated by the constructed vector pCAMBIA2301-del -ros via Agrobacterium tumefaciens LBA4404mediated transformation method.Transgenic strawberry lines were screened by PCR analysis.Observed by organizations,the roots and leaves of transgenic strawberry lines became reddish purple. The expression of anthocyanin biosynthetic genes anthocyanidinsynthase(ANS ), chalcone-flavanone isomerase(CHI ), flavanone 3-hydroxylase(F3H ),
真核细胞表达系统的类型与常用真核细胞表达载体
标签：真核细胞酵母表达系统细胞表达载体真核表达系统昆虫表达系统动物表达系统 摘要 : 原核表达系统是常被用来研究基因功能的成熟系统，由于原核表达系统具有包涵体蛋白不易纯化、蛋白修饰不完整等缺陷，人们也开始利用真核细胞表达系统来研究基因。 原核表达系统是常被用来研究基因功能的成熟系统，由于原核表达系统具有包涵体蛋白不易纯化、蛋白修饰不完整等缺陷，人们也开始利用真核细胞表达系统来研究基因。 自上世纪70年代基因工程技术诞生以来，基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行，在技术方法上得到了很大发展，时至今日已取得令人瞩目的成就。随着人类基因组计划的完成，越来越多的基因被发现，其中多数基因功能不明。利用表达系统在哺乳动物细胞内表达目的基因是研究基因功能及其相互作用的重要手段。 在各种表达系统中，最早被采用进行研究的是原核表达系统，这也是目前掌握最为成熟的表达系统。该项技术的主要方法是将已克隆入目的基因DNA段的载体(一般为质粒)转化细菌(通常选用的是大肠杆菌)，通过iptg诱导并最终纯化获得所需的目的蛋白。其优点在于能够在较短时间内获得基因表达产物，而且所需的成本相对比较低廉。但与此同时原核表达系统还存在许多难以克服的缺点：如通常使用的表达系统无法对表达时间及表达水平进行调控，有些基因的持续表达可能会对宿主细胞产生毒害作用，过量表达可能导致非生理反应，目的蛋白常以包涵体形式表达，导致产物纯化困难;而且原核表达系统翻译后加工修饰体系不完善，表达产物的生物活性较低。 为克服上述不足，许多学者将原核基因调控系统引入真核基因调控领域，其优点是： ①根据原核生物蛋白与靶DNA间作用的高度特异性设计，而靶DNA与真核基因调控序列基本无同源性，故不存在基因的非特异性激活或抑制; ②能诱导基因高效表达，可达105倍，为其他系统所不及; ③能严格调控基因表达，即不仅可控制基因表达的“开关”，还可人为地调控基因表达量。 因此，利用真核表达系统来表达目的蛋白越来越受到重视。目前，基因工程研究中常用的真核表达系统有酵母表达系统、昆虫细胞表达系统和哺乳动物细胞表达系统。 1.酵母表达系统 最早应用于基因工程的酵母是酿酒酵母，后来人们又相继开发了裂殖酵母、克鲁维酸酵母、甲醇酵母等，其中，甲醇酵母表达系统是目前应用最广泛的酵母表达系统。目前甲醇酵母主要有H Polymorpha，Candida Bodini，Pichia Pastris3种。以Pichia Pastoris 应用最多。
几种新型植物基因表达载体的构建方法
几种新型植物基因表达载体的构建方法 文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-
几种新型植物基因表达载体的构建方法 摘要:利用基因工程技术手段研究基因功能过程中，构建基因表达载 体处于转基因植物的主导地位，采用合适的构建方法会使实验效果事半 功倍。植物基因表达载体的构建方法除了传统构建法、Gateway 技术、 三段T-DNA 法、一步克隆法等，还有近年来出现的几种新型的载体构建 方法：基于竞争性连接原理快速构建小片段基因表达载体；Micro RNA 前体 PCR 置换法适用于构建小分子 RNA 表达载体；重组融合 PCR 法特 别适用于插入片段中含有较多限制性酶切位点的载体构建；利用 In-Fusion 试剂盒可以将任何目的片段插入一个线性化载体的某个区域；构建多片段复杂载体可采用不依赖序列和连 接的克隆方法 (Sequence and ligation-independent cloning, SLIC) 法；Gibson 等温拼接法。本文将在总结分析前人工作的基础 上，分析这 6种新方法的特点，期望通过这几种新的方法给植物基因工 程表达载体的构建提供新的思路。 关键词: Micro RNA 前体 PCR 置换法，In-Fusion 试剂盒法，重组融合PCR 法，Gibson 等温拼接法，Golden Gate 拼接法 基因克隆、载体构建是植物功能基因组研究中的常规步骤[ 1 ]。而载 体构建是基因工程和分子生物学研究中常用的基础技术。随着植物基因 工程技术的发展，适合于不同研究目的各种载体系统应运而生，其中在 转基因植物中最常用的是质粒载体。传统的载体构建方法在进行构建多 片段拼接的复杂载体时，需要精心选择酶切位点[ 2 ]，有时还需要构建多 个中间载体，操作比较麻烦，费时费力，因此寻找简单、高效、快捷的
pFGC5941植物表达载体
pFGC5941 编号 载体名称 北京华越洋生物VECT0360 pFGC5941 pFGC5941载体基本信息 出品公司: --‐--‐ 载体名称: pFGC5941 质粒类型: 植物表达载体；植物干扰载体 高拷贝/低拷贝: --‐--‐ 启动子: --‐--‐ 克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶 载体大小: 11405 b p 5' 测序引物及序列: --‐--‐ 3' 测序引物及序列: --‐--‐ 载体标签: --‐--‐ 载体抗性: 羧苄西林 筛选标记: --‐--‐ 备注: --‐--‐ 产品目录号: --‐--‐ 稳定性: --‐--‐ 组成型: --‐--‐ 病毒/非病毒: --‐--‐ 载体质粒图谱和多克隆位点信息
其他植物载体质粒： pBI101 pDF15 pBI121 pEarleyGate 100 pBI221 pEarleyGate 101 pBI221--‐GFP pEarleyGate 102 pBin19 pEarleyGate 103 pBINPLUS pEarleyGate 104 pCambia0105.1R pEarleyGate 201 pCambia0305.1 pEarleyGate 202 pCambia0305.2 pEarleyGate 203 pCambia0380 pEarleyGate 204 pCambia0390 pEarleyGate 205 pCambia1105.1 pEarleyGate 301
pCambia1105.1R pEarleyGate 302 pCambia1200 pEarleyGate 303 pCambia1201 pEarleyGate 304 pCambia1281Z pFGC5941 pCambia1291Z pGA643 pCambia1300 pGreen pCambia1300GFP pGreen 0029 pCambia1301 pGreen0029 pCambia1302 pGreen029 pCambia1303 pGreenII pCambia1304 pGreenII 0049 pCambia1305.1 pGreenII 0179 pCambia1305.2 pGreenII 0229 pCambia1380 pGreenII 0579 pCambia1381 pHANNIBAL pCambia1381Xa pHELLSGATE pCambia1381Xb pHELLSGATE 12 pCambia1381Xc pHELLSGATE 4 pCambia1381Z pHELLSGATE 8 pCambia1390 pKANNIBAL pCambia1391 pPZP100 pCambia1391Xa pPZP101 pCambia1391Xb pPZP102 pCambia1391Xc pPZP111 pCambia1391Z pPZP112 pCambia2200 pPZP121 pCambia2201 pPZP122 pCambia2300 pPZP200 pCambia2301 pPZP201 pCambia2301--‐101 pPZP202 pCambia3200 pPZP211 pCambia3201 pPZP212 pCambia3300 pPZP221 pCambia3301 pPZP222 pCambia35s--‐ECFP pPZp--‐RCS2--‐Bar pCambia35s--‐EGFP pRI 101--‐AN pCambia35s--‐EYFP pRI 101--‐ON pCambia5105 pRI 201--‐AN pSB1 pRI 201--‐ON pSB11 pRI 909 pSoup pRI 910 pSPYCE(MR) pRI101 pTCK303 pSAT1--‐cCFP--‐C Super1300 pSAT1--‐cCFP--‐N