CTAB法提取DNA

试剂：

1）2×CTAB 提取液（PH 8.0）：2% CTAB，1.4MNacl，0.02MEDTA，0.1MTris-cl，0.2%巯基乙醇。即称取CTAB 2 g加蒸馏水40ml，加1M Tris-cl（PH8.0）10ml，0.5M EDTA（PH 8.0）4ml 和5M NaCl 28ml,待CTAB溶解后用蒸馏水定容到100ml（提取前加入2%的巯基乙醇，100ml 加0.2ml巯基乙醇）

2）1M Tris-cl（PH 8.0）100 ml:12.11g Tris碱；ddH2O ，80ml；HCl，4.9 ml三者混匀充分溶解后，滴加浓盐酸调PH至8.0，定容至100ml

3）0.5M EDTA（PH 8.0）100ml：在80ml水中加入18.01g EDTANa2.2H2O搅拌溶解，用NaOH 调PH至8.0（约2gNaOH颗粒），定容至100ml

4）5M NaCl 100ml：称取29.22g NaCl，用ddH2O定容到100ml

5）3M NaAc10ml：称取2.46g NaAc，用ddH2O定容到10ml

操作步骤：

1、称取1.0g幼嫩的叶片，在研钵中加入液氮预冷，将叶片放到液氮中研磨均匀，直至全部

研磨至粉末，转入1.5ml离心管中，加入600 ul 65℃预热的CTAB溶液（用前加入2%的巯基乙醇）

2、将装有CTAB和样品的EP管放入65℃水浴，约1h

3、冷却后，加入600ul 的酚：氯仿：异戊醇(25:24:1=300:288:12)，混匀，12000rpm，离心

15min

4、吸上清，装入一新的EP管

5、加入600ul 氯仿：异戊醇（24:1=576:24），12000rpm。离心15min

6、吸上清，转入一新的离心管中，加入1/3体积的NaAc（3mol/l）

7、加入1ml-20℃预冷的无水乙醇，混匀后置于-20℃（-80℃，30min）3-4h

8、12000rpm，10min弃上清

9、向离心管中加入75%的乙醇洗涤2-3次，置于吸水纸上倒置晾干

10、加入ddH2O（10-20ul）溶解

药品：Tirs碱、浓盐酸、EDTANa2.2H2O、NaOH、NaCl、CTAB、酚、氯仿、异戊醇、无水乙醇、NaAc、液氮、巯基乙醇

研钵、恒温水浴、离心机、离心管