四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识(2015年版)

218例急性白血病流式细胞术免疫表型分析

【全科临床论著】 218例急性白血病流式细胞术免疫表型分析 赵皓,余晾,吕合作,郑宏波,项平 【摘　要】　目的　研究急性白血病(AL)免疫表型特征及诊断价值。方法　采用流式细胞术(FC M)对218例初诊急性 白血病患者进行免疫分型。结果　急性髓系白血病(AML)患者均表达两种以上髓系抗原,其中部分伴有淋系抗原 (C D7)表达。急性淋系白血病(ALL)患者均表达淋系抗原,部分表达一种或两种髓系抗原。14例混合型白血病同时表 达两种以上淋系和髓系抗原标志。4例慢粒急淋变既表达髓系抗原又表达淋系抗原。结论　FC M免疫分型是在细胞形 态学和细胞化学染色基础上对急性白血病诊断与分型的重要补充。 【关键词】　急性白血病;免疫表型;流式细胞术 【中图分类号】　R733.7　R446.63　【文献标识码】　A　【文章编号】　167424152(2010)1021239202 Ana lysis of Imm unophenotype in218Ca ses w ith Acute L eukem i a by Flow Cyto m etry　ZHAO Hao,YU L iang,LV He2zuo, et al.Central L aboratory,the First A ffiliated Hospital of B engbu M edical College,B engbu233004,A nhui,China 【Abstract】O bjecti ve　To exp l ore the acute Leukem ia i m munophenotype and its diagnosis value.M ethods　A ssay the i m mune phenotype in218patients with acute leuke m ia by fl ow cyt ometer.Results　The patients with acute myel oid leukem ia(AML)ex2 p ressed more than t w o kinds of myel oid antigens;part of the m exp ressed ly mphatic antigens(CD7).The patients with acute ly m2 phoblastic leuke m ia(ALL)exp ressed ly mphatic antigens;part of them exp ressed one or t w o kinds of myel oid antigens.Fourteen patients with m ixed acute leuke m ia(MAL)showed t w o kinds or more ly mphoid and myel oid antigens.Four patients with chr onic granular differentiated t o acute ly mphatic leukem ia not only exp ressed myel oid antigens but als o exp ressed ly mphatic antigens. Conclusi on　The i m munophenotype by fl ow cyt ometry is the i m portant supp lementary t o acute leuke m ia diagnosis and typ ing in mor phol ogy and cyt oche m ical dyeing foundati on. 【Key words】　Acute leuke m ia;I m munophenotype;Fl ow cyt ometry 白血病细胞是一种高度异源性、异质性并具有一定增殖活力的恶性细胞。传统的F AB(法国、美国和英国形态学标准)分型是在细胞形态学和细胞化学染色基础上进行的,对急性白血病诊断与分型有其局限性。流式细胞术(Fl ow cyt ometry,M)是根据白血病细胞表面和胞内的特异性抗原,采用单克隆抗体对白血病细胞的来源和分化阶段进行更精细的检测和判断,从而弥补F AB分型的不足,对确定诊断、选择治疗方案和判断预后具有重要意义[1]。本文采用FC M对218例AL患者进行免疫表型分析,现将结果报告如下。 1　资料与方法 111　临床资料　218例患者为我院2008年10月-2010年2月血液科住院患者,年龄10～79岁,男性132例,女性86例。112　研究方法 1.2.1　取材　E DT A2K2抗凝骨髓或血液标本1m l。 1.2.2　仪器与试剂　F ACSCalibur流式细胞仪,购自BD公司。单克隆抗体:F I T C标记的CD2、C D33、HLA2DR、C D15、CD10,PE 标记的CD7、C D13、C D34、C D11b、C D19,Per CP标记的CD45, APC标记的CD5、CD14、CD20、C D45,同型对照I gG1/I gG2a以及混合抗体CD3/M P O/CD79a,透膜剂F I X&PER M及溶血素,以上试剂均购自BD公司,鞘液为自配的P BS缓冲液。 1.2.3　试验方法　表面标志染色:在各试管中分别加入E D2 T A2K2抗凝骨髓或血液50μl,按表1中的抗体组合分别加入相应的抗体或同型对照(F I TC、PE及PercP标记的抗体为30μl, APC标记的抗体为5μl)室温避光孵育15m in,分别加1000μl 溶血素,室温避光孵育10m in,离心去上清,P BS洗涤细胞一次,去上清,加入0.5m l P BS重悬细胞,上机检测。胞内标志染色:先用CD452APC同上进行表面染色、溶血、洗涤,然后加200μl 作者单位:233004安徽省蚌埠医学院第一附属医院中心实验室 通讯作者:赵皓,电子信箱:icecool1980@https://www.360docs.net/doc/e82089896.html, 固定液室温固定细胞15m in,P BS洗涤细胞一次,去上清,加200μl透膜液及胞内染色抗体或同型对照30μl,室温避光孵育10m in,离心去上清,P BS洗涤细胞一次,去上清,加入0.5m l P BS重悬细胞,上机检测。检测结果采用Cell Q uest软件进行分析:首先,在FSC/SSC散点图中,根据细胞大小和颗粒度进行设门选中有核细胞群体;然后,在C D45/SS C散点图中,根据CD45表达强度和颗粒度,对有核细胞进行设门,选中幼稚细胞群体;最后,再对幼稚细胞群体进行分析,确定各种标志的阳性率。判断阳性的标准为:胞内染色标志CD3/M P O/CD79a>10%,其他表面标志>20%。 表1　AL流式细胞术免疫分型抗体组合 抗体A1A2A3A4A5A6B1B2 F I TC I gG1CD2CD33DR CD15CD10I gG1CD3 PE I gG2a CD7CD13CD34CD11b CD19I gG2a MP O Per Cp CD45CD45CD45CD45CD45CD45-CD79a APC I gG1CD5--CD14CD20CD45CD45 2　结果 119例经临床确诊的AML各种抗原表达的阳性率依次为M P O(95.80%)、C D13(90.76%)、C D33(81.51%)、HLA2DR (73.95%)、CD34(54.62%)、CD15(30.25%)、C D11b (22.69%)、CD14(10.92%),其中有19例AML患者伴有淋系抗原C D7的表达。 经临床确诊为ALL的83例患者中,经FC M免疫分型,有21例为T系ALL,各种抗原表达的阳性率依次为CD3 (100.00%)、C D7(100.00%)、CD2(90.48%)、CD5(85.71%)、HLA2DR(61.90%)、C D34(42.86%),其中有4例患者伴有CD13等髓系抗原的表达;有62例为B系ALL,各种抗原表达的阳性率依次为CD79a(100.00%)、CD19(93.55%)、CD20 (82.26%)、C D10(69.35%)、HLA2DR(83.87%)、CD34 (69.35%),其中有5例患者伴有CD13等髓系抗原的表达。

白血病的分类及分型

白血病分类和分型 保定第七医院肿瘤科穆铁军 时间：年月日时分 地点：肿瘤科医办室 参加人员： 白血病是造血系统的一种恶性疾病。其特征为一种或几种血细胞成分的自发性、进行性异常增殖，具有质和量改变的异常白细胞（白血病细胞）在骨髓和其他器官的广泛浸润，导致正常血细胞进行性减少，临床以贫血、出血、发热、白血病细胞浸润为主要表现。 白血病的治疗是根据不同类型选择不同治疗方案，故今日讲解白血病的分类分型。 分类 一、按自然病程及细胞的成熟度分类 （一）急性白血病起病急、病情重、自然病程一般在六个月以内。骨髓及外周血中主要为异常的原始细胞和早期幼稚细胞。 （二）慢性白血病起病缓、发展慢，病程一般一年以上，骨髓和外周血以较成熟的细胞占多数。 二、按细胞类型分类 分为淋巴细胞型、粒细胞型、单核细胞型及一些少见类型，如红白血病、巨核细胞型、浆细胞型、嗜酸细胞型、嗜硷细胞型白血病等。 三、按外周白细胞的多少分类 （一）白细胞增多性外周血中白细胞明显增多，并有较多幼稚细胞出现。 （二）白细胞不增多性外周血中白细胞不增多或甚至低于正常。血片中没有或较难找到幼稚细胞。 分型 一、急性白血病分型 急性白血病分为急性淋巴细胞性白血病（ALL）和急性非淋巴细胞性白血病（ANLL）两大类，结果如下： ①ANLL分为8个亚型：急性髓性白血病微分化型（M0）、粒细胞白血病未分化型（M1）、粒细胞白血病部分分化型（M2）、早幼粒细胞型（M3）、粒-单核细胞型（M4）、单核细胞型（M5）、红白血病（M6）、巨核细胞型（M7）； ②ALL分为三个亚型：FAB分型：L1、L2和L3型。

近年来又根据细胞的免疫学特点，ALL根据免疫表型不同可分为B-细胞和T-细胞两大类。2000WHO将急性淋巴细胞白血病（ALL）分为三种亚型：（1）前体B细胞急性淋巴细胞白血病（细胞遗传学亚型）：t（9；22）（q34；ql1），BCR/ABL；t（4；llq23），（MLL重排）；t（1；19）（q23；p13）；（E2A/PBX1）；t（12；21）（p12；q22），（ETV/CBFα）。（2）前体T细胞急性淋巴细胞白血病（T—ALL）。（3）Burkitt细胞白血病。FAB分型中的急淋形态学亚型分型方法，因可重复性较差，现已基本放弃，不再把急性淋巴细胞白血病分为L1、L2、L3。骨髓中幼稚细胞>25%时诊断采用ALL的名称，幼稚细胞≤25%称为母细胞淋巴瘤。我们这里介绍白血病的类型分类分型，主要是因为白血病治疗方式和治疗效果往往是根据病的类型而不同的。 二、慢性白血病分型 可分为：慢性淋巴细胞白血病(慢淋)；慢性粒细胞白血病(慢粒)；慢性粒－单核细胞白血病；单核细胞；红血病。 三、特殊类型白血病， 可分为：慢粒急变；低增生性；淋巴肉瘤；组织细胞肉瘤；浆细胞；多毛细胞；嗜酸性粒细胞；嗜碱性粒细胞；组织嗜碱细胞；巨核细胞；未分化型急性白血病。

WHO软组织肿瘤免疫表型大全

2013版WHO软组织肿瘤免疫表型大全2014-11-06艾迪康病理诊断 主要根据2013年“WHO肿瘤分类——软组织和骨肿瘤”翻译而来 第1章脂肪细胞肿瘤（adipocytictumours） 良性 1、脂肪瘤（lipoma） 免疫表型：成熟脂肪细胞表达S-100、leptin和HMGA2阳性。 2、脂肪瘤病（lipomatosis） 免疫表型：和正常脂肪相似。 3、神经脂肪瘤病（lipomatosisof nerve）

免疫表型：因为病变的所有成分均存在于正常神经内，故免疫组化对诊断没有帮助。 4、脂肪母细胞瘤（lipoblastoma）/脂肪母细胞瘤病（lipoblastomatosis）免疫表型：脂肪细胞表达S-100和CD34，原始间叶细胞常表达desmin。 5、血管脂肪瘤（angiolipoma） 免疫表型：血管内皮成分CD31等内皮标记阳性，细胞性血管脂肪瘤增生的梭形细胞CD31阳性，证明为血管内皮。 6、软组织平滑肌脂肪瘤（myolipomaof soft tissue） 免疫表型：梭形细胞SMA和desmin染色弥漫强阳性，证明为平滑肌分化；ER 和PR阳性也有报道；HMB-45阴性。 7、软骨样脂肪瘤（chondroidlipoma） 免疫表型：成熟脂肪细胞S-100强阳性，脂肪母细胞S-100弱阳性，随脂肪细胞逐渐成熟S-100染色逐渐增强。无脂肪母细胞分化特征的细胞S-100阴性。少数病例角蛋白阳性，但EMA一致阴性。 8、梭形细胞脂肪瘤/多形性脂肪瘤（spindlecell lipoma/pleomorphic lipoma） 免疫表型：梭形细胞脂肪瘤和多形性脂肪瘤中的梭形细胞均为CD34强阳性， S-100罕见阳性，偶见desmin阳性。

急性白血病分型

急性白血病分型 一、急性非淋巴细胞白血病（ANLL） 1、微小分化急性髓系白血病（M0型）骨髓有核细胞增生程度较轻，原始细胞大于30%，可达90%以上，核圆形，核仁明显。胞质小，嗜碱性，无颗粒，无Auer小体。 2、急性原始粒细胞白血病未分化型（M1）骨髓增生极度活跃或明显活跃，少数病例可增生减低，骨髓中I型加II型原始粒细胞大于90%（NEC），可见小原粒细胞（胞体小，与淋巴细胞相似，胞似圆形，核染色质呈细颗粒状，较正常原粒细胞密集，核仁1－2个，有伪足）。 3、急性原始粒细胞白血病部分分化型（M2）骨髓增生极度活跃或明显活跃，骨髓原粒I型II型大于30%－90%，单核细胞小于20%，早幼以下各阶段大于10%，约50%病例的白血病细胞内可见Auer小体。 分两个亚型： M2a：骨髓中原粒I型＋II型＞30%－90%，单核细胞＜20%，早幼以下各阶段＞1%。 M2b：骨髓中粒系统明显增生，异常的原始及早幼粒细胞增多，以异常的中性中幼粒细胞增多为主，常＞30%，这类中幼粒细胞有核仁1－2个，核浆发育不平衡。有的晚幼粒亦见有核仁。有核凹陷处常有淡染区，胞浆可见空泡。(亚急粒) 4．急性早幼粒细胞白血病(M3) 骨髓中以颗粒增多的或异常的早幼粒细胞增生为主，>30％，胞体呈椭圆形，核可偏向一边，大小不一，另一端为大小不等的异常颗粒，胞浆可见束状Auer小体，也可逸出胞体之外。 5．急性粒-单核细胞型白血病(M4) 骨髓增生极度活跃或明显活跃，粒、单核两系同时增生，红系、巨核系受抑制。根据原始粒和单核细胞的比例、形态不同以及嗜酸细胞的数量，分为下例四个亚型： M4a：以原始及早幼粒细胞增生为主。幼单核细胞>20％。 M4b：以原、幼单核细胞增生为主。原粒和早幼粒<20％。 M4c：原始细胞具有粒细胞系和单核细胞系共同的形态特征者>30％。 4EO：除上述特征外，骨髓中嗜酸细胞>5％一30％，外周血嗜酸细胞不一定增高。 6．急性单核细胞白血病(M5) 骨髓增生极度或明显活跃，原单幼单细胞大于30％，白血病细胞形态特点：体积小，不规则，质多有伪胞质，有空泡和被吞噬的细胞。 7．急性红白血病(M 6) 骨髓增生极度活跃或明显活跃，红系增生为主，原红、早幼红多见，常有中幼红细胞阶段缺如的红血病裂孔现象，且有形态学异常。后期发展为急性髓

2020年常见的恶性淋巴瘤的免疫表型特征

作者：非成败 作品编号：92032155GZ5702241547853215475102 时间：2020.12.13 临床上常见的恶性淋巴瘤免疫表型特征: 1、T细胞和NK细胞淋巴瘤 (1)前体T淋巴母细胞淋巴瘤(T-LBL)：此型淋巴瘤TDT，CD7，cCD3表达最具特征。同时还可表达CD38，CD2，CD5，CD10;LCA，CD3常阴性。髓系相关抗原CD13和/或CD33在此型中常有表达。 (2)T前淋巴细胞淋巴瘤(T-PLL)：表达T细胞相关抗原，约60%病例CD4+/CD8-，而CD4+/CD8+或CD4-/CD8+较少，不表达TDT，CD10可与T-LBL区别。 (3)成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)：表达T细胞相关抗原，绝大部分病例呈CD4+/CD8-，通常不表达CD7，特征为几乎全部病例CD25阳性，粒酶B，TIA-1阴性。 (4)NK-T细胞淋巴瘤：瘤细胞表达CD56、CD3，多数病例表达粒酶B、穿孔系，约90%以上病例表达细胞毒性颗粒相关蛋白TIA-1。一般不表达CD4/CD8、CD25、CD57，B细胞和组织细胞分化抗原阴性。 (5)血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AILT)：CD45R0、CD3阳性，通常CD4阳性细胞多于CD8+，滤泡树突状细胞标记物CD21阳性，常可异常表达CD5、CD7。 (6)外周T细胞淋巴瘤(PTL)：T细胞相关抗原阳性，但常有部分丢失，尤以CD7、CD5多见，以大细胞为主者，可见CD30+/-，但ALK、EMA阴性可与ALCL区别。 (7)间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)：特征性肿瘤大细胞表达CD30，多数表达EMA，约10-20%表达CD15，须注意与HL区别。60-80%表达ALK，据报导此标记物阳性表达者5年生成率可达80%，儿童常ALK、EMA共表达，成人多为 ALK+/EMA-或ALK-/EMA+。ALCL在多数情况下仅表达少数T细胞相关抗原，通常CD45R0，CD2、CD4阳性，而CD3、CD5、CD7常不表达。 2.B细胞恶性淋巴瘤： (1)前B淋巴母细胞淋巴瘤(B-LBL)：瘤细胞表达TdT、HLA-DR，CD79a，几乎全部病例表达CD19、大多数病例表达CD10，还不同程度表达cCD22。LCA、CD20常阴性。 (2)B前淋巴细胞淋巴瘤(B-PLL)：强表达B细胞相关抗原，1/3病例可异常表达CD5，SIg阳性。不表达CD23可与CLL/SLL鉴别。 (3)慢性淋巴细胞白血病/小细胞淋巴瘤(CLL/SLL)：同时表达CD5、CD23、CD43及B细胞相关抗原，但CD20表达可能很弱。不表达CD10、CyclinD1。CD5异常表达为其持征，但CD5对组织处理，尤其是组织固定要求较高，要注意假阴性。

四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识(完整版)

四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识（完整版） 白血病免疫分型是利用不同单克隆抗体检测白血病细胞胞膜和胞质抗原，通过流式细胞术(FCM）分析其表型，实现对白血病细胞系列来源及其分化程度的诊断。白血病免疫分型已成为诊断白血病的必要依据，同时也可为微小残留病（MRD)的检测以及白血病的治疗和预后提供重要信息。白血病免疫分型是细胞形态学分型的重要补充和进一步深化，以荧光标记技术联合FCM检测并判定白血病免疫表型，具有准确、快速、客观、重复性好、特异性强等特点，提高了白血病诊断的准确性[1, 2]。 采用不同数量及组合的荧光标记免疫抗体处理白血病细胞并进行荧光检测及分型是免疫分型的关键环节。准确诊断需要选择一定数量的抗体，白血病免疫分型涉及多个造血系列的抗原，但目前国内甚至国际上均无规范化的方案可以借鉴；国内不同的医疗单位所用的抗体数量和种类均有较大的异质性，有些单位由于应用的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。鉴于国内的实际情况，中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次讨论，提出以CD45/侧向散射光（SSC）为基础的中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，本方案以2组表面抗原作为筛查抗原，试图利用相对少的抗体，达到对各个类型白血病进行较全面的检测，具有快速、客观、准确的特点。已在国内的多家医疗单位试用，证明此方案能够满足临床的需要[3, 4]。目前，虽然国际上有八色甚至十色方案[5, 6, 7]，但对仪器及操作人员的技术要求较高。鉴于国内的实际情况，我们首先提出中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，

供从事急性白血病免疫分型的实验室参考，以期促进我国急性白血病免疫分型诊断的规范化及整体水平的提高。 一、四色方案的基本要求 理想的急性白血病免疫分型方案应满足以下几点要求：①识别白血病细胞，能将其与正常细胞或反应性细胞相区别；②鉴别白血病细胞的系列来源；③根据细胞的分化程度对疾病进行亚型分型；④鉴别用于检测MRD 的白血病相关免疫表型(LAIP) ;⑤帮助判断某些特异分子改变，即基因型检测；⑥提供预后相关及治疗靶点的免疫标志检测结果。 为了保证免疫分型的准确度，满足不同的临床需要，本共识将抗体应用分为诊断必选抗体和可选择抗体：必选抗体包括诊断必选及MRD检测必选抗体，后者主要是用于筛查治疗后MRD检测的LAIP，如果在治疗前未进行检测，治疗后可能难以弥补，因此均作为必需检测的抗体；可选择抗体包括白血病亚型诊断、基因型检查及治疗靶点等检测所需的抗体。各单位可根据具体情况进行选择性应用。 常用免疫荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）、PE（藻红蛋白）、CY5（花青素）、preCP（叶绿素蛋白）、ECD（藻红蛋白-得克萨斯红）、APC（别藻蓝素）等，本共识推荐的荧光染料为perCP、FITC、PE及APC。 二、四色方案相关推荐 （一）适应范围 1．急性淋巴细胞白血病（ALL）：

多参数流式细胞术检测急性白血病及浆细胞肿瘤微小残留病中国专家共识(完整版)

多参数流式细胞术检测急性白血病及浆细胞肿瘤微小残留病中国专 家共识（完整版） 多参数流式细胞术（multiparameter flow cytometry, MP-FCM）是运用不同荧光标记的多种抗体组合对造血细胞表面或胞内抗原的表达状况进行检测，进而对细胞的系列来源、分化程度、表型异常与否进行分析判断的高通量、高敏感性检测技术，其在恶性血液病的诊断分型、治疗监测、预后评估及治疗靶点筛查中已成为必不可少的实验诊断手段[1,2]。微小残留病（minimal residual disease, MRD）是指恶性血液病经过治疗达到血液学完全缓解后体内残存的通过形态学等传统方法无法检测到的任何水平的微量肿瘤细胞状态[3,4]。近年来，也有学者根据现有检测技术的局限性将MRD定义为可检测的残留病（measurable residual disease）。运用FCM检测恶性血液病MRD的研究始于20世纪80年代，利用2~4色FCM对急性白血病的治疗后样本进行检测，并基于在正常细胞分布之外的"空白"区域检测到异常表型的理论对MRD进行分析鉴别[5,6]；在过去的10年中，随着FCM水平的不断提高，特别是8~10色MP-FCM在MRD检测中体现出敏感性高、特异性好、适用范围广的优势，MRD的FCM检测从小规模样本的临床研究发展到大规模样本的临床验证，目前已成为恶性血液病临床疗效判断和预后分层的重要依据，而基于MRD指导下的个体化治疗可以使不同危险度分层组中的患者避免过度治疗或治疗不足，以提高患者的长期生存率[7,8,9]。

然而，由于白血病等恶性血液病存在不同程度的克隆异质性、不同治疗方案对免疫表型和克隆筛选的影响、化疗后不同时间点骨髓造血恢复的状况不一、不同基因背景的残留肿瘤细胞在复发时的增殖动力学不同等疾病自身因素的复杂性，以及不同检测中心在抗体组合、荧光搭配、样本处理、圈门策略、分析逻辑、主观经验、质控管理等诸多技术环节中的差异，目前国内外对于MRD的检测和分析还缺乏规范化，导致对MRD检测结果的临床解读和预后评估标准存在不一致性。为了使国内各检测中心对于MRD的FCM检测和分析逐步实现规范化和标准化，在可控因素范围内尽量减少检测结果之间的差异，中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组通过各种学术讨论、多中心室间比对等一系列努力，形成了基于MP-FCM检测MRD的国内共识，供大家参考，也希望在此基础上不断完善，以期提高我国恶性血液病MRD检测的整体水平。本共识涉及病种包括急性髓系白血病（aute myeloid leukemia, AML）、急性T淋巴细胞白血病（T-cell precursor acute lymphoblastic leukemia/lymphoma, T-ALL），急性B淋巴细胞白血病（B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia/lymphoma, B-ALL）和浆细胞肿瘤（plasma cell neoplasms, PCN）。 一、MRD检测原理及方法 （一）MRD检测原理 FCM检测MRD的原理是通过分析细胞表面或胞内一系列抗原的表达模式来识别只在白血病细胞中出现而正常骨髓中不存在或存在比例极低的免疫表型，即"白血病相关免疫表型"（leukemia-associated

急性髓系白血病的免疫表型分析及临床意义

急性髓系白血病的免疫表型分析及临床 意义 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【摘要】目的探讨成人急性髓细胞白血病(AML)的免疫表型特征及临床意义。方法采用流式细胞仪对113例AML患者进行免疫表型分析。结果髓系抗原表达阳性率依次为CD13＞CD33＞CD15＞CD14，AML患者CD34阳性表达率为35.40％。113例患者中有28例(24.78％)伴有淋系抗原表达，以CD7多见，表达阳性率为71.43％，其次CD19表达阳性率为35.71％。Ly+AML与Ly－AML相比较，两者在个别形态学亚型、临床体征及CD34表达差异有统计学意义，而在异常染色体核型检出率方面无统计学意义。CD+34组CR率(69.23％)较其阴性组(78.05％)低，但两者差别无统计学意义；Ly+AML组CR 率为52.94％(9/17)，低于Ly－AML组78％(39/50)，其中，CD+7组CR率(41.67％)与其阴性组(80％)相比差别有统计学意义。结论 AML 患者高表达CD13、CD33，部分患者同时表达髓系、淋系抗原；CD34及CD7阳性与治疗反应显著相关。 【关键词】急性髓系白血病免疫表型骨髓细胞 随着系列单克隆抗体的应用，白血病细胞免疫分型的广泛开展，使白

血病得到正确的诊断和分型，而免疫标记结合FAB(法、美、英三国学者制定)形态学分型［1］，对急性髓系白血病(AML)各亚型的鉴别及特殊类型急性白血病(AL)的发现、指导治疗及判断预后有重大意义。本文对113例急性髓系白血病的免疫分型及临床特点进行分析，现报告如下。 1 资料和方法 1.1 病例资料宁夏医科大学附属医院血液科2002—2007年间的住院初治AML患者113例，男58例，女55例，年龄14～76岁，中位年龄39岁。根据骨髓细胞形态学、细胞化学染色及免疫分型而确诊。FAB分型：M04例，M114例，M230例，M318例，M49例，M528例，M65例，CML急变5例。 1.2 免疫表型分析受检者抽取骨髓或外周血经肝素抗凝，采用活细胞三色免疫荧光法标记，流式细胞仪检测(型号为FACS Calibur，美国Becton-Dickinson公司生产)，通过二维点图分析抗原表达情况；所用单克隆抗体均为美国BD公司产品。B淋巴细胞系单抗：CD10、CD19、CD20；T淋巴细胞系单抗：CD3、CD5、CD7；髓系单抗：CD13、CD14、CD15、CD33；造血干/祖细胞单抗：CD34。结果判定用Cell Quest 软件分析，CD45/SSC设计中的白血病细胞群表面标记检测阳性率≥20％判断为阳性。 1.3 细胞遗传学检查染色体标本采自治疗前骨髓，用直接培养法和24h短期培养法，按常规制备染色体并进行R显带染色分析20～30个中期分裂相，根据《人类细胞遗传学国际命名制(ISCN)》(1995)

版WHO软组织肿瘤免疫表型大全

2013版WHO软组织肿瘤免疫表型大全 2014-11-06艾迪康病理诊断 主要根据2013年“WHO肿瘤分类——软组织和骨肿瘤”翻译而来 第1章脂肪细胞肿瘤（adipocytictumours） 良性 1、脂肪瘤（lipoma） 免疫表型：成熟脂肪细胞表达S-100、leptin和HMGA2阳性。 2、脂肪瘤病（lipomatosis） 免疫表型：和正常脂肪相似。 3、神经脂肪瘤病（lipomatosisof nerve） 免疫表型：因为病变的所有成分均存在于正常神经，故免疫组化对诊断没有帮助。

4、脂肪母细胞瘤（lipoblastoma）/脂肪母细胞瘤病（lipoblastomatosis） 免疫表型：脂肪细胞表达S-100和CD34，原始间叶细胞常表达desmin。 5、血管脂肪瘤（angiolipoma） 免疫表型：血管皮成分CD31等皮标记阳性，细胞性血管脂肪瘤增生的梭形细胞CD31阳性，证明为血管皮。 6、软组织平滑肌脂肪瘤（myolipomaof soft tissue） 免疫表型：梭形细胞SMA和desmin染色弥漫强阳性，证明为平滑肌分化；ER和PR阳性也有报道；HMB-45阴性。 7、软骨样脂肪瘤（chondroidlipoma） 免疫表型：成熟脂肪细胞S-100强阳性，脂肪母细胞S-100弱阳性，随脂肪细胞逐渐成熟S-100染色逐渐增强。无脂肪母细胞分化特征的细胞S-100阴性。少数病例角蛋白阳性，但EMA一致阴性。 8、梭形细胞脂肪瘤/多形性脂肪瘤（spindlecell lipoma/pleomorphic lipoma） 免疫表型：梭形细胞脂肪瘤和多形性脂肪瘤中的梭形细胞均为CD34强阳性， S-100罕见阳性，偶见desmin阳性。 9、冬眠瘤（hibernoma） 免疫表型：冬眠瘤细胞通常表达S-100阳性。除梭形细胞亚型中梭形细胞成分CD34阳性外，其他冬眠瘤亚型CD34均阴性。新的冬眠瘤标记物还包括UCP1。 中间性（局部侵袭性） 10、非典型性脂肪瘤性肿瘤/高分化脂肪肉瘤（atypicallipomatous tumour/well differentiated） 免疫表型：脂肪细胞一般S-100免疫组化染色阳性，高分化脂肪母细胞S-100 也可阳性。与基因扩增一致，MDM2和（或）CDK4在多数病例中呈核阳性。MDM2核阳性也见于许多良性脂肪病变中，但表达率明显低于非典型性脂肪瘤性肿瘤/高分化脂肪肉瘤。MDM2在梭形细胞脂肪肉瘤中一般不表达，故此标记物有助于二者鉴别诊断。

142 例儿童急性白血病的流式分析

142 例儿童急性白血病的流式分析 发表时间：2014-04-17T16:03:42.373Z 来源：《中外健康文摘》2013年38期供稿作者：刘俊闪刘炜王国锋 [导读] 骨髓涂片进行瑞吉氏染色，镜下分类500 个细胞，细胞化学染色包括过氧化物酶染色、糖原染色、α- 乙酸萘酚酯酶染色，按F A B 标准进行白血病分型。 刘俊闪刘炜王国锋( 河南省郑州市儿童医院血液科河南郑州 4 5 0 0 0 3 ) 【摘要】目的探讨四色流式细胞术检测儿童急性白血病免疫表型的意义。方法应用流式细胞仪分析、形态学、细胞化学染色相结合的方法对142 例儿童急性白血病进行诊断。结果 142 例儿童急性白血病中AML39 例，占27.5%，ALL103 例，占73%，ALL 中B-ALL90 例，占63.4%，T-ALL13 例，占9.1%。AML,B-ALL,T-ALL 分别有不同抗原的高表达，且存在部分AML 表达淋系抗原，某些ALL 表达髓系抗原。结论四色流式细胞术对儿童急性白血病的准确诊断有重要意义。 【关键词】儿童急性白血病流式分析 【中图分类号】R733.7 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）38-0113-02 白血病（A L）是一组高度异质性的造血系统恶性肿瘤，血细胞形态学及细胞组织化学染色一直是白血病诊断与分型的基石，随着免疫学技术的不断发展，在此基础上加上免疫分型，诊断率可从70% 左右提高到90% 以上，我们总结了142 例儿童急性白血病的形态学及免疫分型特点，报告如下。 1资料与方法 1.1 病例 选择2011 年8 月-2013 年6 月我院收治的AL 患者共142 例，其中男性63 例，女性79 例，年龄4 月-14 岁，平均年龄39.3 月。分类按照法国、美国、英国三国协作组(FAB 分型)[1] 方案分型，其中急性髓系白血病(AML)39 例，急性淋巴细胞白血病（ALL）103 例。 1.2 细胞化学染色方法 骨髓涂片进行瑞吉氏染色，镜下分类500 个细胞，细胞化学染色包括过氧化物酶染色、糖原染色、α- 乙酸萘酚酯酶染色，按F A B 标准进行白血病分型。 1.3 免疫分型试剂及方法 1.3.1 仪器与试剂仪器为美国BD 公司FACScalibur 型流式细胞仪。单抗包括C D2、C D3、C D4、C D5、C D7、C D8、C D10、CD13、CD14、CD15、CD19、CD20、CD22、CD33、CD34、CD38、CD64、CD117、HLA-DR、MPO、cCD79a、cCD3、 cCD22,TdT。流式细胞仪及所有单抗均购自Becton-Dickson 公司。 1.3.2 荧光标记染色方法每个病例在治疗前抽取肝素抗凝骨髓或外周血3ML , 取B D 专用流式细胞仪专用试管，每管中加入4 种荧光标记抗体（FITC/PE/PerCP/APC）和标本，并同时设定阴性对照管，混匀后避光15m i n，然后加入1X 溶血素，混匀避光10m i n，离心450g，5min，弃上清，加PBS 混匀，再离心450g，5min，弃上清加PBS 混匀，上机检测。 1.3.3 流式细胞仪检测测定前以标准校正荧光微球校正仪器，应用Ce l l Q u e s t 软件设置获取条件，每测定管获取分析30000 个细胞。用C D45/ S S C 双参数建立二维点图，根据细胞C D45 抗原表达及S S C 将不同细胞分群，然后对各群细胞设门，分析所圈定的白血病细胞群的表面标记。以表面抗原阳性率≥ 20% 为阳性判断[2]。 2结果 2.1 形态学分布 2 年内收治的142 例儿童急性白血病中 AML38 例，其中M0 型 3 例，M1 型2 例，M2 型11 例，M3 型5 例，M 4 型7 例，M 5 型10 例； A L L100 例，其中L1 型46 例，L2 型34 例，L3 型20 例；形态学不能准确归类的白血病的4 例。 2.2 免疫分型 142 例A L 中急性髓细胞系白血病（AML）39 例，急性淋巴细胞白血病（A L L）103 例。133 例形态学+ 组织化学诊断与流式细胞免疫分型符合，符合率为93.7%。形态学诊断为AML -M0 中有2 例经流式细胞检测分别诊断为B - A L L（1 例）、T- A L L（1 例）。而形态学诊断为A L L 中有3 例经流式细胞检测分别确诊为M0(1 例)、M5(1 例)、M7(1 例)，形态学不能准确分类的4 例流式细胞仪最后分别为B-ALL(3 例)、 M7(1 例)。 39 例髓系AML 中C D33 表达率最高为89.7%（35/39）, 同时或分别表达髓系标志抗原C D64, C D13，C D117, C D15, MP O，分别为79.5%（31/39）、69.2%（27/39）、69.2%（27/39）, 59.0% （23/39）,48.7%（19/39）。其中15 例AML 伴随有淋系抗原 CD7(7/39),CD56(6/39),CD19 (2/39) 。 103 例ALL 中，B-ALL 为63.4%（90/142），主要表达CD19、cCD79a,cCD22，HLA-DR、CD10，分别为100%（90/90）、100%（90/90）、100%（90/90）、98.9%（89/90）、91.1%（82/90）。T-ALL 为9.1% （13/142），主要表达cCD3，CD7、CD5、CD2，分别为100%（13/13）、100%（13/13），92.3%（12/13），76.9%（10/13）。其中29 例A L L 伴随髓系标志抗原CD13 （11/103），CD13+33（6/103）， CD33（2/103），CD15（8/103）表达,T-ALL 伴随CD10（2/13）。 3讨论 白血病为小儿常见的恶性肿瘤，小儿白血病以急淋多见，在A L L 免疫亚型中，又以B-ALL 最多见。本研究借助CD45/SSC 双参数散点图进行设门将白血病细胞与正常细胞分开，诊断急性白血病具有形态学不可比拟的优势。 在本组病例，儿童急性白血病中B-ALL最多见，占63.3%（90/142），与国内外文献报道相符。主要表达C D19, c C D79a , c C D22,HLA-DR,CD45 可以阴性。而T-ALL 以cCD3，CD7,CD5,CD2 为主。AML 所占比值较成年人低，主要表达CD33, CD64， CD13,CD117 MPO，其中急性早幼粒白血病占AML12.8% (5/39)，C D34、H L A - D R 表达均较低，与文献报道一致。AML -M5 细胞化学染色MP O 经常为阴性或弱表达，C D14 对于形态不典型的单核细胞白血病较高的特异性。AML - M7 在AML 中所占比例为5% , 两例均表达C D117、C D41a、CD61, 而MPO、TdT 和其他的T、B 标志均为阴性。 本组病例白血病细胞表面分化抗原存在交叉表达现象，其中L y + A M L 表达淋系抗原主要为C D7、C D19，C D56, 而A M L 伴随弱CD19+(CD56+)、弱CD33+ 时多提示存在t（8；21）及AML1/ E T O 融合基因，文献报道此型A M L 患者对化疗反应好，预后相对好。

常见的恶性淋巴瘤的免疫表型特征

临床上常见的恶性淋巴瘤免疫表型特征: 1、T细胞和NK细胞淋巴瘤 (1)前体T淋巴母细胞淋巴瘤(T-LBL)：此型淋巴瘤TDT，CD7，cCD3表达最具特征。同时还可表达CD38，CD2，CD5，CD10;LCA，CD3常阴性。髓系相关抗原CD13和/或CD33在此型中常有表达。 (2)T前淋巴细胞淋巴瘤(T-PLL)：表达T细胞相关抗原，约60%病例CD4+/CD8-，而CD4+/CD8+或CD4-/CD8+较少，不表达TDT，CD10可与T-LBL区别。 (3)成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)：表达T细胞相关抗原，绝大部分病例呈CD4+/CD8-，通常不表达CD7，特征为几乎全部病例CD25阳性，粒酶B，TIA-1阴性。 (4)NK-T细胞淋巴瘤：瘤细胞表达CD56、CD3，多数病例表达粒酶B、穿孔系，约90%以上病例表达细胞毒性颗粒相关蛋白TIA-1。一般不表达CD4/CD8、CD25、CD57，B细胞和组织细胞分化抗原阴性。 (5)血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AILT)：CD45R0、CD3阳性，通常CD4阳性细胞多于CD8+，滤泡树突状细胞标记物CD21阳性，常可异常表达CD5、CD7。 (6)外周T细胞淋巴瘤(PTL)：T细胞相关抗原阳性，但常有部分丢失，尤以CD7、CD5多见，以大细胞为主者，可见CD30+/-，但ALK、EMA阴性可与ALCL区别。 (7)间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)：特征性肿瘤大细胞表达CD30，多数表达EMA，约10-20%表达CD15，须注意与HL区别。60-80%表达ALK，据报导此标记物阳性表达者5年生成率可达80%，儿童常ALK、EMA共表达，成人多为ALK+/EMA-或ALK-/EMA+。ALCL 在多数情况下仅表达少数T细胞相关抗原，通常CD45R0，CD2、CD4阳性，而CD3、CD5、CD7常不表达。 2.B细胞恶性淋巴瘤： (1)前B淋巴母细胞淋巴瘤(B-LBL)：瘤细胞表达TdT、HLA-DR，CD79a，几乎全部病例表达CD19、大多数病例表达CD10，还不同程度表达cCD22。LCA、CD20常阴性。 (2)B前淋巴细胞淋巴瘤(B-PLL)：强表达B细胞相关抗原，1/3病例可异常表达CD5，SIg阳性。不表达CD23可与CLL/SLL鉴别。 (3)慢性淋巴细胞白血病/小细胞淋巴瘤(CLL/SLL)：同时表达CD5、CD23、CD43及B 细胞相关抗原，但CD20表达可能很弱。不表达CD10、CyclinD1。CD5异常表达为其持征，但CD5对组织处理，尤其是组织固定要求较高，要注意假阴性。 (4)套细胞淋巴瘤(MCL)： 同时表达CyclinD1、CD5和B细胞相关抗原，但CyclinD1敏感性较差，组织固定和抗原修复方式是染色的关键。近年推出的兔源性单抗效果好些。KI-67的高表达与不良预后有关。此型不表达CD10、CD23，可与CLL/SLL、FL鉴别。

陆道培医院《流式细胞术进行急性白血病系别判断》专题讲座

陆道培医院《流式细胞术进行急性白血病系别判断》专题讲座 3月17日上午，我中心检验科副主任、流式细胞室主任王卉做了《流式细胞术进行急性白血病系别判断》专题讲座。 流式细胞仪于上个世纪七十年代问世，八、九十年代开始在临床广泛应用，成为血液淋巴系统肿瘤综合诊断的一个重要组成部分。流式细胞术属于一项免疫学技术，原理是采用抗体识别抗原的方法，结合激光激发荧光的技术，检测活细胞表达的免疫学标志，对细胞性质进行判断，从而达到准确诊断疾病的目的。 检验科副主任、流式细胞室主任王卉讲座现场 近年来随着仪器、免疫学抗体、荧光技术的发展，该技术在临床上应用越来越广泛。在急性白血病的诊断，尤其是系别和阶段判断方面，流式细胞术起着举足轻重的作用。

王卉主任给大家介绍了流式细胞术的工作原理、基础知识，如何正确使用该技术判断细胞系别，准确诊断疾病，目前使用的国际诊断标准的优缺点，以及该技术目前应用存在的问题，一些误区的解读。 会议场现 世界著名血液学家、亚洲骨髓移植第一人、血液届的泰斗陆道培院士全程参加了这次讲座，并提出自己的看法和建议。我中心移植科主任、著名血液学家吴彤教授、我中心化疗科和免疫治疗科主任、著名血液学家童春容教授，以及各位临床医生、检验科医生都参与了这次学术活动，大家就讲座涉及的问题，以及临床应用当中遇到的情况，进行了热烈的讨论，交换了看法，达成共识。 为了加强年轻医生的培养，我中心每周都会举行一次类似的讲座，在中心领导的关心和带领下，各个临床科室、检验科室的主任和主管们认真准备，大家积极参与，极大促进了各项学科的发展和临床与实验室之间的沟通，并多次碰撞出思想的火花，明确疑难病例的诊断和治疗，衍生出新的检测项目，从而达到更好为患者服务的目的。

软组织肿瘤的免疫表型

软组织肿瘤的免疫表型(转贴) 软组织肿瘤的免疫表型 翻译自2002年“WHO肿瘤分类——软组织肿瘤病理学与遗传学”，请多批评！ 第1章脂肪细胞肿瘤（adipocytic tumours） 1、脂肪瘤（lipoma） 免疫表型：成熟脂肪细胞vimentin、S-100和leptin染色阳性。 2、脂肪瘤病（lipomatosis） 免疫表型：脂肪组织vimentin和S-100染色阳性，和正常脂肪相似。 3、神经脂肪瘤病（lipomatosis of nerve） 免疫表型：因为病变的所有成分均存在于正常神经内，故免疫组化对诊断没有帮助。 4、软组织平滑肌脂肪瘤（myolipoma of soft tissue） 免疫表型：SMA和desmin染色弥漫强阳性证明肿瘤内存在平滑肌。 5、软骨样脂肪瘤（chondroid lipoma） 免疫表型：脂肪母细胞S-100弱阳性，随脂肪细胞逐渐成熟S-100染色逐渐增强。所有细胞vimentin一致阳性。少数病例角蛋白阳性，和超微结构的张力微丝相对应。EMA一致阴性。M1B1增殖指数<1%。 6、梭形细胞脂肪瘤/多形性脂肪瘤（spindle cell lipoma/pleomorphic lipoma） 免疫表型：梭形细胞脂肪瘤和多形性脂肪瘤中的梭形细胞均为CD34强阳性，S-100罕见阳性。 7、冬眠瘤（hibernoma） 免疫表型：冬眠瘤细胞不同程度表达S-100蛋白，有时强阳性。梭形细胞亚型中梭形细胞成分CD34阳性，与梭形细胞脂肪瘤相似，其他冬眠瘤亚型CD34阴性。 8、非典型性脂肪瘤性肿瘤/高分化脂肪肉瘤（atypical lipomatous tumour/well differentiated） 免疫表型：免疫组化对ALT/WD脂肪肉瘤的诊断帮助很小。脂肪细胞一般S-100免疫组化染色阳性，有助于显示病变中的脂肪母细胞。与类似脂肪肉瘤的血管平滑肌脂肪瘤相鉴别时，后者HMB45阳性有助于诊断。 9、去分化脂肪肉瘤（dedifferentiated liposarcoma） 免疫表型：免疫组化主要用于识别不同的化学成分，以及排除其他肿瘤。 10、黏液样脂肪肉瘤（myxoid liposarcoma） 免疫表型：大多数MLS不需要进行免疫组化即可正确诊断，但免疫组化对主要由圆形细胞构成的病例有一定帮助，绝大多数病例S-100弥漫阳性。 11、多样性脂肪肉瘤（pleomorphic liposarcoma） 免疫表型：肿瘤细胞vimentin阳性。尽管有明确的脂肪性分化，但只有不到一半的病例S-100阳性。某些上皮样多形性脂肪肉瘤局灶表达上皮性标记物。 第2章纤维母细胞/肌纤维母细胞性肿瘤（fibroblastic /myofibroblastic tumours） 1、结节性筋膜炎（nodular fasciitis） 免疫表型：SMA和MSA一般阳性，desmin罕见阳性，支持肌纤维母细胞性分化，但不能与其他间叶性增生性病变鉴别。破骨细胞样巨细胞CD68阳性，梭形细胞偶尔阳性。角蛋白和S-100阴性。 2、增生性筋膜炎和增生性肌炎（proliferatine fasciitis and proliferatine myositis） 免疫表型：增生性筋膜炎和肌炎在免疫组化方面和结节性筋膜炎相似，一般SMA和MSA阳性，desmin阴性。但神经节样细胞actins可仅局灶阳性或弱阳性。某些细胞CD68可阳性，但角蛋白和S-100阴性。 3、骨化性肌炎和指（趾）纤维骨性假瘤（myositis ossificans and fibroosseous pseudotumour of digits）