大肠杆菌O157的志贺毒素基因克隆和测序
．６６．ｓ嚣龆ＣｈｉｎａＢｒｅｗｉｎｇＲｅｓｅ砌Ｒｅｐ。ｒｔ
的ｓｔｘ２基因序列一起进行多序列比对。用ｍｅｇａ４．１软件采用邻位相连法（Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇ）构建进化树。根据基本的进化树拓扑结构，采用１０００次Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ抽样对树进行评价分析。
２结果与分析
２．１ｓｔｘ２基因全长扩增
将０１５７菌株ＰＣＲ扩增ｓｔｘ２基因全长后，经电泳检测表明有目的ＰＣＲ条带，ＰＣＲ产物大小与预期一致，结果见图１。２．２ｓｔｘ２基因克隆与测序分析
测序所得的ｓｔｘ２核苷酸序列见图２ＧＡｙ－３’）。０１５７菌株与ＮＣＢＩ数据库中收录的大肠杆菌ｓｔｘ２基因同源性为９８％。０１５７菌株ｓｔｘ２基因序列的３个突变碱基下加有下划线标识。
从ＧｅｎＢａｎｋ数据库下载ｓｔｘ２基因各亚型代表株序列，与０１５７菌株的ｓｔｘ２基因序列一起比对，构建进化树，结果见图３。
１．－４：０１５７菌株ＰＣＲ扩增产物：Ｍ：１００ｂｐｐｌｕｓＤＮＡｌａｄｄｅｒ分子量标准
图１０１５７菌株Ｓｂ（２基因全长扩增
Ｆ．叼ｕ帕１．ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｅｎｔｉｒｅｓｉｘ２ｇｅｎｅｏｆＥｃｏｌｉ０１５７ｉｓｏｌａｔｅ
、ＡＴＧＡＡＧｔ匝峨ＫｒｔＫｒｒｔｈｈ》飞ＱＱ吼Ⅺ飞讯ＱＣ吼帆ｈＣ、ＧＧＧｎｍＣｎＣ嗽峨ＣＣ６ｌＴＡｌｆｒＣＣＣＧＧＧＡＧＴＴＴＡＣＧＡＴＡＧＡＣ几－ｎ℃ＧＡＣＣＣＡＡＣＡＡＡＧＴｒＡＴＧｒＣＴＣｒｒＧＧ订ＡＡＡＴ１２１ＡＧＴＡＴＡＣＧＧＡＣＡＧＡＧＡＴＡＴＣＧＡＣＣＣＣＴＣ兀＇ＧＡＡＣＡＴＪ盯ＡＴＣＴＣＡＧＧＯＧＡＣＣＡＣＡＴＣＧＧＴＧ１８１ＴＣ“、１℃ＡｒｒＡＡＣＣＡＣＡＣＣＣＣＡＣＣＧＧＧＣＡＧｒｒＡｌ’几’ｒＧＣＴＧＴＧＧＡＴＡＴＡＣＧＡＧＧｏＣＴＴＧＡＴ２４１ＧＴＣＴＡＴＣＡＧＧＣＧＣＧＴｍＧＡＣＣＡＴＣＴ＿ｒＣＧＴＣＴＧＡ丌ＡＴｒＧＡＧＣＡＡＡＡＴＡＡｍＡＴＡＴＧＴＧ３０ｌＧｃＣＧＧＧｌｖｒＣ（订ＴＡＡＴＡＣＧＧＣＡＡＣＡＡＡＴＡＣｒｒｒＣｒＡＣＣＧＴｒｒｌｌ℃ＡＧＡＴｒｒｒＡＣＡＣＡＴＡＴＡ３６１ＴＣＡＧＴ（ⅪＣＣＧＧｒＧＴＧＡＣＡＡＣＧＧｌＴＴＣＣＡＴＧＡＣＡＡＣＧＧ＿ＡＣＡＧＣＡ鲫ＡＴＡＣＣＡ咖ＣＡＡ４２１ＣＧＴＧｒＩＸ℃ＡＧｃＧＣｒｌ３ＧＡＡＣＧ兀℃ＣＧＧＡＡＴｏＣＡＡＡＴＣＡ（订℃ＧＴＣＡＣＴＣＡＣｒｏＧｌｌ’ｒＣＡＴＣＡ
４８１ＴＡＴＣｒｌ３ＧＣＧＴＴＡＡＴＧＧＡＧＴＴＣＡＧＴＧＧＴＡＡＴＡＣＡＡＴＧＡＯＣＡＧＡＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＧＡＧＣＡ（、１Ｔ５４１ＣＴＧＣＧｒ兀－ｒ（订℃ＡＣｒＧＴＣＡＣＡＧＣＡＧ从ＧＣＣｒｒＡＣＧＣＴｒＣＡＧＧＣＡＧＡＴＡ（ＭＧＡＧＴＧＡＡｒｒｒ６０ｌｏＧＴＣＡＧＧＣＡＣＴＧＴＣＴＧＡＡＡＣ“Ｘ１℃ＣｒＧｒＧＴ』盯ＡＣＧＡＴＧＡＣＧＣＣ００ＧＡＧＡＣＧＴＯＧＡＣＣＴＣ６６ｌＡＣｒ（：ＴＧＡＡＣＴ００ＧＧＧＣＧＡＡＴＣＡｏＣＡＡＴＧＴＧ（１ＴＣＣＧＧＡａｒＡＴＣＧＧＧＧＡＧＡｏＧＡＴＧＧＴＧＴｃ７２ｌＡＧＡＧＴＧＧＧＧＡＧＡＡＴＡＴＣＣＴＴＴＡＡＴＡＡＴＡＴＡＴＣＡＧＣＧＡＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＴＧｒｒＧＧＣＣＧＴＴＡＴＡ
７８１ｃＴＧＡＡｒｒ（配ＣＡＴＣＡＴＣＡＧＧＧＧＧＣＧＣＧＴＴＣＴＧ兀℃ＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＴＧＡＡ（认ＧＡＧＴＣ从ＣＣＡ鼬’、Ｑｋ讯（ｎｃ啦甑ｋ砥飞ＧＧＣＧｂＣＫ岛Ｘ：＠丽峨ｈ＾＾ｈ＾弋＾Ａ＾ＣＫ峨憾Ｋｎ心ＧＱＧＡＡ＾讯
９０ｌＡＡＴＡＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＴＴＣ粥ＡＡＣＡＧＡＡＡＧＴＣＡＣＡＧＴｌｌ耵ＡＴＡＴＡＣ从ＣＧＧＧＴＡＡＡＴＡＡ
９６１ＡＧＧＡＧＴＴＡＡＧＣＡＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＧｌ．ｒｒＡＴＧＧＯＧＩ口【．几＇ｒＡｒ丌ＧＣＡｒｒＡＧＣＴｒＣＴＧ，丌ＡＡＴＧ１０２ｌＣＡＡＴＩ了ｏＣＧ６ＥＧＧＧ兀’ＧＴＧＣＴＡＡＡｏＧＴＡＡＡＡｒｒＧＡＧｎＴｒＣＣＡＡＧＴＡＴＡＡＴＧＡｏＧＡＴＣ认ＣＡ１０８１ＣＡｌ，盯ＡＣＡＧｒＧＡＡＧＧＴｌⅪＡＣＧＧＧＡＡＡＧＡＡＴＡＣＴＧＣｈ～ＣＣＡ（玎ＣＧＣＴＧＧＡＡＴＣｌ、ＧＣ从ＣＣＧＴｌ１４ｌＴＡＣＴＧＣＡＡＡＧＴＧＣＴＣＡＧＴＴＧＡＣＡＧＧ从ＴＧＡＣＴＧＴＣＡＣＡＡＴＣＡＡＡＴＣＣＡＧＴＡＣＣＴＧＴＧＡＡＴ１２０ｌＣＡＧＧＣｒｃ＇ＣＧＧＡｌ’ｎ’ＧＣｒＧＡＡＧＴＧＣＡａ丌－ｒＡＡＴＡＡＴＧＡＣＴＧＡ
图２０１５７菌株ｓＤ盘基因序列
Ｆ．嵋ｕ怕２．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｓｔｘ２ｇｅｎｅｏｆ０１５７ｉｓｏｌａｔｅ
百一
图３ｓ６眨基因进化树
Ｆ蛔ｕ旧３．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔ哟ｆｏｒｓｌｘ２ｇｅｎｅ由图３可知，０１５７菌株为ｓｔｘ２ｃ基因亚型。
ｓｔｒ．Ⅺ
、｝魄
３讨论
大肠杆菌致病菌的毒力与志贺毒素主要类型和亚型均有关。如志贺毒素ｓｔｘ２比ｓｔｘｌ更容易引起出血性肠炎、
溶血性尿毒综合症等并发症。同种类型毒素中，携带ｓｔｘ，，
基因的大肠杆菌引起尿毒症和肾衰竭等严重疾病的几率
高于携带其他ｓｔｘ２基因亚型的大肠杆菌旧。研究对保存的
一株０１５７大肠杆菌的ｓｔｘ２基因进行克隆和测序分析，结果
表明，该菌株ｓｔｘ２基因属于‰亚型，且在３个碱基位点存
在突变，与ＮＣＢＩＧｅｎＢａｎｋ数据库公布的大肠杆菌ｓｔｘ２基
因最高同源性为９８％。对大肠杆菌志贺毒素基因进行序列
大肠杆菌O157的志贺毒素基因克隆和测序
作者：李睿， 孙言凤， 王芳， 熊燕， LI Rui， SUN Yanfeng， WANG Fang， XIONG Yan
作者单位：李睿,孙言凤,LI Rui,SUN Yanfeng(武汉工业学院,生物与制药工程学院,湖北,武汉,430023)， 王芳,熊燕,WANG Fang,XIONG Yan(武汉市疾病预防控制中心,湖北,武汉,430015)
刊名：
中国酿造
英文刊名：CHINA BREWING
年，卷(期)：2010(9)
参考文献(8条)
https://www.360docs.net/doc/e13366301.html,W D Virulence factors of Escherichia coli O157 and other Shiga toxin-producing E.coli[外文期刊] 2000(05)
2.王燕;谢贵林大肠杆菌O157:H7感染流行概况[期刊论文]-微生物学免疫学进展 2008(01)
3.周勇大肠杆菌O157:H7的毒力岛与毒力因子的研究进展[期刊论文]-微生物学免疫学进展 2006(02)
4.FRIEDRICH A W;BIELASZEWSKA M;ZHANG W L Escherichia coli harboring Shiga toxin 2 gene
variants;frequency and association with clinical symptoms[外文期刊] 2002(01)
5.EKLUND M;LEINO K;SIITONEN A Clinical Escherichia coli strains carrying six genes:six variants and six-positive virulence profiles[外文期刊] 2002(12)
6.MIAO E A;MILLER S I Bacterinphages in the evolution of pathogen-host interactions 1999(17)
7.PERSSON S;OLSEN K E P;ETHERLBERG S Subtyping method for Escherichia coli Shiga toxin (verocytotoxin) 2 variants and eorrelations to clinical manifestations[外文期刊] 2007(06)
8.KAWANO K;OKADA M;HAGA T Relationship between pathogenicity for humans and stx genotype in Shiga toxin-producing Escherichia coli serotyp O157 2008(03)
本文链接：https://www.360docs.net/doc/e13366301.html,/Periodical_zgnz201009020.aspx