Vitek 2 compact药敏实验操作方法
微生物抗菌素敏感试验
抗菌素敏感试验 一、实验目的 1、掌握药敏试验（K-B纸片琼脂扩散法）方法、原理及结果判读 2、掌握抗酸染色方法及结果判定 二、实验原理 1、抗菌药物分类： （1）β-内酰胺类：青霉素类和头孢菌素类（硫酶素类、单内酰环类、β-内酰酶抑制剂、甲氧青霉素类) （2）氨基糖甙类：链霉素、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、新霉素、核糖霉素、小诺霉素、阿奇霉素 （3）大环内脂类：红霉素、白霉素、乙酰螺旋霉素、麦迪霉素、交沙霉素 （4）四环素类：四环素、土霉素、金霉素、强力霉素 （5）氯霉素类：氯霉素、甲砜霉素 （6）作用于G+细菌的其它抗生素：林可霉素、氯林可霉素、万古霉素、杆菌肽 （7）作用于G-菌的其它抗生素：多粘菌素、磷霉素、、环丝氨酸、利福平、抗真菌抗生素、灰黄霉素 （8）抗肿瘤抗生素：丝裂霉素、放线菌素D、博莱霉素、阿霉素 （9）具有免疫抑制作用的抗生素：环孢霉素 2、抗菌药物敏感试验(antimicrobial susceptibility testing in vitro ) 1）抑菌试验：体外测定抗菌药物抑制细菌生长能力的试验 （1）纸片扩散法（disc diffusion test） K-B纸片琼脂扩散法原理:将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制,从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度,并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关。（2）稀释法（dilusion test） a.将被检菌株接种于一组含有不同稀释度抗菌药物的培养基内 b.37℃18-24小时后，抗菌药物能抑制被检菌肉眼可见生长的最低浓度（MIC）即该菌 对该抗菌药物的敏感度 c.MIC50 MIC90 d.根据MIC和常用剂量时该药所能达到的血药浓度来划定细菌对各种药物的敏感度或 耐药的界限（break point,折点) （3）E试验法（E test） 2）杀菌实验 3）联合药敏试验 4）检测细菌所产生的抗生素灭活酶试验 3、药物敏感性分级 1）敏感（S）
(推荐)纸片扩散法药敏试验
纸片扩散法药敏试验 纸片扩散法（K-B法）药物敏感试验是在涂有细菌的琼脂平板培养基上按照一定要求贴浸有抗菌药的纸片，培养一段时间后测量抑菌圈大小，并根据相关解释标准进行结果分析，从而得出受试菌株药物敏感性的结论。 中文名 纸片扩散法药敏试验 临床意义 得出受试菌株药物敏感性的结论 目录 .1试验原理 .2试验步骤 .3结果分析 .4注意事项 基本信息 中文名 纸片扩散法药敏试验 临床意义 得出受试菌株药物敏感性的结论 试验原理 纸片扩散药敏试验的原理：将含有定量的抗菌药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上，通过抗菌药物在培养基上的扩散，观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。 试验步骤
1. 待测菌株接种物制备 （1）通用情况：从过夜孵育的平板，优先选择哥伦比亚血琼脂平板上的菌落上挑取数个单个菌落，直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液，使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位，使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌（1-2）*1012CFU/mL浓度。 （2）特殊情况：嗜血杆菌属（本程序中所指的嗜血杆菌仅包括流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌）：从过夜孵育的HTM平板，直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液，使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位，使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌（1-2）*1012CFU/mL浓度。 2.接种平板 （1）调整好悬液的浊度后，用无菌棉签浸入悬液内，紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次，除去棉签上多余的液体，但也应适度。 （2）用拭子划线整个琼脂表面，从平板顶部到底部，均匀涂布，重复两次此过程（一共三次）每次旋转平板约60度，确保每次接种菌液均匀分布，最后在琼脂平板的边缘涂抹一圈，防止有流动的菌悬液，并使菌液涂布于整块平板的每个角落。 （3）涂布菌液完成的平板，可在室温放置一会（3-5分钟），以便在放置含有药物的纸片前使琼脂吸收表面多余的水分，但放置时间不应超过15分钟。 3.放置测试药敏纸片 根据测试菌的不同，按照预先设定的分组，将抗菌药物纸片贴于已接种细菌的琼脂表面，每个纸片必须压下以确保与琼脂表面完全接触无论是单独放置的纸片或有纸片分配设备纸片必须分布均匀，两纸片之间圆心的距离不少于24mm，纸片边缘距离琼脂边缘不少于15mm。我室使用的MH平板直径为90mm，放置不超过5块纸片。由于一些药物几乎是瞬间扩散的，因此，一旦纸片与琼脂表面接触就不能再移动位置，若位置不佳可在琼脂的另一个位置重新放置一个纸片。 4.孵育 （1）通用情况：在放置好纸片后，15分钟内，将MH琼脂倒置于号孵箱（35℃）中，孵育16～18小时（除外下面列出的需要延长孵育时间的情况）。嗜血杆菌属、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌和链球菌KB纸片法测试平板应放置于含有5% CO2的环境进行孵育。 （2）延长时间培养：①测试苯唑西林、头孢西丁对葡萄球菌的敏感性时，孵育时间必须达到24h，才能满足对结果判断的要求。②测试万古霉素对金黄色葡萄球菌及肠球菌属的敏感性，孵育时间必须达到24小时。 5.抑菌环直径测量 （1）通用情况：35℃，经过16～18小时的孵育后，将贴有纸片的MH平板置于黑色不反光的背景上，采用游标卡尺，来测量抑菌环的直径（完全抑制区的直径），可以从平板的背面，利用反射光，用肉眼观测，读取最接近的毫米数（读取一个整数）。没有肉眼可见的明显的生长的部位即是抑菌环的边缘。一般情况下，在抑菌环边缘出现只能在放大镜下观察到的微小菌落，可以忽略不计。 MH平板上的抑菌环呈均匀的圆形，测试菌株在平板上呈现融合生长菌苔，若出现单个菌落稀疏生长的情况，则说明接种时调制的菌液浓度过稀，需要寻找可能的原因，并重新再一次进行测试。 （2）特殊情况：①苯唑西林对葡萄球菌的抑菌环：抬起平皿，对向光源，利用透射光观察苯唑西林纸片周围的抑菌环中是否有任何细微的菌落生长，若是出现任何可以辨别的生长，均应判定苯唑西林耐药。②利奈唑胺对葡萄球菌的抑菌环：利用透射光，用游标卡尺读取抑菌环的数值。③复方新诺明的抑菌环：MH平板中存在一定量叶酸抑制剂的拮抗剂，会导致测试菌轻微的生长，因此，在测量复方新诺明的抑菌环直径时应当忽略细微的生长情况（约20%），而将明显出现生长的地方作为抑菌环的边界进行测量。 结果分析
药敏试验实验报告
药敏试验： 用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test 法），和自动化仪器等。 简介： 体外抗菌药物敏感性试验简称药敏试验（AST），是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的试验。 根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)近期推荐的标准，对非苛氧菌（肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、和其他非肠科杆菌、葡萄球菌属细菌、肠球菌属细菌）和苛氧菌（嗜血杆菌属细菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌和其他链球菌）选择常规药敏试验的首选药物（A 组抗生素）或临床使用的主要抗生素（B组抗生素）进行药敏试验。 抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。 随着新型致病菌的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参
考，并提高疗效。农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法，现简单介绍如下。 实验步骤： 实验材料 普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做沙门氏菌可选择血清培养基。 药敏试纸：购买或自制（详见实验准备） 细菌：待做药敏试验的细菌 仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头 实验准备 2.1 药敏片的准备：购买或自制 2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。 2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。
药敏试验方法1
药敏试验方法： K-B法： 1 从孵育了16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。 2 在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的菌液。 3 用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60度，每次接种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。 4 将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。每个纸片中心间距24mm。纸片一旦与平板接触，不应再移动。 5 贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。嗜血杆菌属，链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。 6 孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手册比较，作出结果判断。 说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照NCCLS操作，否则将失去意义。链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K-B法. 肺炎链球菌胶乳凝集测定法 1 在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。 2 从冰箱取出鉴定试剂(Slidexpneumo-kit)于室温。 3 在其中一滴生理盐水上滴加R1试剂，在另外一滴上滴加R2试剂，用搅拌棒混匀。 4 轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。 5 2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如R1和R2均未出现凝集为阴性。 注：R3为阳性对照。 药敏纸片的选择 1、革兰阴性杆菌（肠杆菌科） 头孢噻肟（CTX）头孢唑林（CZ）头孢他定（CAZ） 氨苄西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN） 头孢噻吩（CF）环丙沙星（CIP）头孢呋辛（CXM） 庆大霉素（GM）头孢噻肟/棒酸（CTX/CA） 头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB） 奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ） 亚安培南头孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC） 2、铜绿假单孢菌/不动杆菌 妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT） 头孢哌酮（CFP）哌拉西林（PIP）头孢匹肟 头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ） 左旋氧氟沙星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦 3、金黄色葡萄球菌 苯唑西林（OX）青霉素G（P）头孢唑林（CZ）阿米卡星（AN） 红霉素（E）头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP） 万古霉素奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦 头孢噻吩（CF） 4 、肠球菌 氨苄西林（AM）万古霉素环丙沙星（CIP） 庆大霉素（GM）红霉素（E）氧氟沙星（OFL） 5、除肺炎链球菌外链球菌 氨苄西林（AM）头孢噻肟（CTX）万古霉素
药敏实验流程
药敏实验流程Last revision on 21 December 2020
药敏实验1.目的 提供细菌对抗菌药物的敏感试验的标准采集与操作方法，选择敏感药物用于临床。 2.范围 适用于实验室分离菌及常见菌的抗菌药物敏感试验。 3.采样对接人 服务专家针对病死猪进行解剖根据临床症状采集相应的病料。 4.设备和材料 无菌剪刀、无菌手术刀、无菌试管、无菌生理盐水、无菌平皿、三角烧瓶、酒精灯、接种环、打火机、75%酒精棉球、一次性手套、营养琼脂培养基、M-H琼脂培养基或特殊培养基、标准麦氏比浊管、药敏纸片、待测病料、记号笔、眼科镊子、2ml或5ml一次性注射器、试管架、超净工作台、恒温培养箱、带刻度直尺。 5.采样及送样操作 采集：病料新鲜度→无菌操作采样→有目的进行采样→保证组织完整性→独立存放到封口袋中并做好标记。 运输：采集好病料放入保温箱（泡沫纸箱+冰袋）中，冷藏即可，不可冷冻。 要求有样品编号、样品名称、样品来源、样品数量、初步诊结果抽样日期及周龄、检测项目等内容。 采样数量 猪一般采集3-5头， 6.细菌分离
在无菌操作条件下，将待测病料（含有典型临床症状部分）用平板划线分离法接种于普通营养琼脂培养基或特殊培养基上（血琼脂、SS琼脂、麦康凯琼脂、BP琼脂等），于37℃±1℃恒温培养箱中培养18-24h 后备用。 细菌在培养基上生长特点 制作待检菌液 在超净工作台内挑取培养18-24h普通营养琼脂平板上的菌落，悬于含3ml无菌生理盐水的试管中。混匀后与比浊管比浊，调整浊度至麦氏标准（相当于1-2*10 cfu/ml）。 接种细菌 在超净工作台内用无菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上挤压去掉多余的菌液，均匀涂抹整个平板表面，最后沿平板内缘涂抹一周（用接种环密集划线法也可以）。 贴药敏片 将涂抹均匀的培养皿底部用记号笔做好标记，眼科镊子在酒精灯上灼烧灭菌待冷却后，镊取各种购买或自制的药敏片，分别贴于相应的位置上，用镊子轻轻按压纸片使药敏纸片与培养基表面密贴；药敏纸片应在培养基表面均匀分布，各纸片中心距离大于24mm，纸片距边缘距离大于 15mm，这样一个直径90mm的培养皿可贴7个药敏纸片。 培养 最后将贴好药敏纸片的平板倒置放于37℃±1℃恒温培养箱培养16-18h后取出观察结果。 8结果观察与判定 抑菌圈直径观察
细菌药物敏感试验实验报告
细菌药物敏感试验实验报告 药物敏感性试验的基本原则 1药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药： 天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2药敏试验测试的前提条件： 实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。 错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3测试结果应准确： 实验室应遵照CLSI文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理
体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。 具体的专业要求 1标本类型 临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。在规范临床送检的前提下，实验室进行药敏试验和报告药敏结果时，应首先考虑标本的特殊性。实际工作中需重点考虑的标本如下。 1．脑脊髓液： 正常和疾病状态不能穿透血脑屏障的药物，常规不应报告。报告审核时，对于分离自脑脊髓液的菌，下列药物不能报告：仅有口服剂型的抗菌药物、一、二代头孢菌素(除外静脉用头孢呋辛)、头霉素类、克林霉素、大环内酯类、四环素类和喹诺酮类。
纸片法药敏试验相关知识
纸片法药敏试验相关数据 表一纸片法药敏试验纸片含药量和结果解释（肠杆菌科、铜绿假单胞菌）抗菌药物纸片含药量抑菌圈直径(mm) 耐药中介敏感青霉素G 10unit ≤28 －≥29 氨苄青霉素30ug ≤13 14～16 ≥17 苯唑青霉素1ug ≤10 11～12 ≥13 氧哌嗪青霉素100ug ≤17 －≥18 先锋Ⅵ* 30ug ≤14 15~17 ≥18 先锋Ⅴ30ug ≤14 15~17 ≥18 复达欣30ug ≤14 15～17 ≥18 阿莫西林* 100ug ≤19 20～22 ≥23 氨苄西林/舒巴坦10/10ug ≤11 12～14 ≥15 丁胺卡那霉素30ug ≤14 15～16 ≥17 庆大霉素10ug ≤12 13～14 ≥15 复方新诺明 1.25/23.75ug ≤10 11～15 ≥16 万古霉素* 30ug －－≥17 诺氟沙星10ug ≤12 13～16 ≥17 安灭菌20/10ug ≤13 14～17 ≥18 克林霉素2ug ≤14 15～20 ≥21 克拉霉素15ug ≤13 14～22 ≥23 氯霉素30ug ≤12 13～17 ≥18 表二纸片法药敏试验纸片含药量和结果解释（葡萄球菌）抗菌药物纸片含药量抑菌圈直径(mm) 耐药中介敏感青霉素G 10unit ≤28 －≥29 氨苄青霉素30ug ≤28 －≥29 苯唑青霉素1ug ≤10 11～12 ≥13 氧哌嗪青霉素100ug ≤17 －≥18 先锋Ⅵ* 30ug ≤14 15~17 ≥18 先锋Ⅴ30ug ≤14 15~17 ≥18 复达欣30ug ≤14 15～17 ≥18 阿莫西林* 100ug ≤19 20～22 ≥23 氨苄西林/舒巴坦10/10ug ≤11 12～14 ≥15 丁胺卡那霉素30ug ≤14 15～16 ≥17 庆大霉素10ug ≤12 13～14 ≥15 复方新诺明 1.25/23.75ug ≤10 11～15 ≥16 万古霉素30ug －－≥15 诺氟沙星10ug ≤12 13～16 ≥17 安灭菌20/10ug ≤19 －≥20 克林霉素2ug ≤14 15～20 ≥21 克拉霉素15ug ≤13 14～17 ≥18 氯霉素30ug ≤12 13～17 ≥18
药敏试验方法
药敏试验方法： 默认分类 2009-05-06 22:37 阅读285 评论0 字号：大中小 K-B法： 1 从孵育了16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单 位。 2 在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤 出过多的菌液。 3 用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60度，每次接 种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。 4 将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。每个 纸片中心间距24mm。纸片一旦与平板接触，不应再移动。 5 贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。嗜血杆菌属，链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。 6 孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手册比较，作出结果判断。 说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照NCCLS操作，否则将失去意义。链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K- B法. 肺炎链球菌胶乳凝集测定法 1 在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。 2 从冰箱取出鉴定试剂(Slidex pneumo-kit)于室温。 ·3 在其中一滴生理盐水上滴加R1试剂，在另外一滴上滴加R2试剂，用搅拌棒混匀。 4 轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。 5 2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如R1和R2均未出现凝集为阴性。 注：R3为阳性对照。 药敏纸片的选择 1、革兰阴性杆菌（肠杆菌科）
头孢噻肟（CTX）头孢唑林（CZ）头孢他定（CAZ） 氨苄西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN） 头孢噻吩（CF）环丙沙星（CIP）头孢呋辛（CXM） 庆大霉素（GM）头孢噻肟/棒酸（CTX/CA） 头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB） 奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ）亚安培南头孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC） 2、铜绿假单孢菌/不动杆菌 妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT） 头孢哌酮（CFP）哌拉西林（PIP）头孢匹肟 头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ） 左旋氧氟沙星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦 3、金黄色葡萄球菌 苯唑西林（OX）青霉素G（P）头孢唑林（CZ）阿米卡星（AN）红霉素（E）头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP） 万古霉素奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦 头孢噻吩（CF） 4 、肠球菌 氨苄西林（AM）万古霉素环丙沙星（CIP） 庆大霉素（GM）红霉素（E）氧氟沙星（OFL） 5、除肺炎链球菌外链球菌 氨苄西林（AM）头孢噻肟（CTX）万古霉素 红霉素（E）氧氟沙星（OFL）克林霉素(CM) 肺炎克雷伯菌产酸克雷伯菌和大肠杆菌ESBLs的检测
纸片法 KB 药敏实验原理及实际操作方法
纸片扩散药敏试验的原理：将含药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上，通过药物在培养基上的扩散，观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。药敏试验根据美国临床标准委员会 (NCCLS) 推荐的 K–B 琼脂法进行。本实验通过纸片药敏试验法观察多酸化合物对细菌有无抑制作用，为试管二倍稀释法提供有效基础数据。 用无菌棉拭子蘸取已经校正的 0.5 麦氏比浊浓度的菌液，挤掉多余菌液。用棉拭子涂布整个 MH 培养基表面，每次将平板旋转 60°，涂抹三次，最后沿周边擦绕两圈，以保证菌液涂抹均匀。待平板上的水分被琼脂完全吸收后贴含药纸片。用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面，纸片一贴后不可再拿起。每个平板贴 5 张纸片，纸片间距不少于 24 mm，纸片中心距平皿边缘不少于 15 mm。在菌接种后 15 min内贴完纸片。将平板反转，37℃恒温孵育 18~24 h 后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径，由平板背面测量最接近的整数毫米数并记录，每个平板各设三个平行组平板，测量抑菌直径时，应取三个平板的平均值为最终结果。抑菌环边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。 每次药敏试验用大肠杆菌 ATCC25922 和金黄色葡萄球菌 ATCC25923 做质控。药敏判读标准根据 CLSI 标准 (2009 年) 所载受试药对质控菌的抑菌环直径范围作为实验质控标准（判读标准见表 5-2）[84]。 表5-2 纸片扩散法－用质控菌株抑菌环直径(mm)允许范围监测抗菌药物敏感性试验准确性Table 5-2 Disc diffusion test － according the admissible range of quality-control strain’s inhibition zone diameter to monitor the accuracy of antibiotics susceptibility test (mm) 抗菌药物纸片含药量 （μg） 抑菌环直径(mm) S I R 大肠埃希菌 ATCC25922 金黄色葡萄球菌 ATCC25923 KF 30 ≥1815–17 ≤1416–22 27–35 AMP 10 ≥1714–16 ≤1328–35 27–28 CIP 5 ≥2116–20 ≤1530–40 22–30 NOR 5 ≥1713–16 ≤1215–21 29–37
南方医科大学微生物实验报告
2016年南方医科大学医学微生物学实验报告 日期 2016年5月22号 一、实验目的 1、掌握培养基制备的原则和一般方法。 2、掌握病原菌的分离与培养方法。 3、掌握油镜的正确使用、细菌涂片标本的制备、革兰氏染色法，熟悉细菌基本形态。 4、熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。 5、掌握血浆凝固酶试验的原理、方法及用途。 6、熟悉药物敏感性试验方法的种类、原理及应用，掌握纸片扩散法。 7、掌握玻片凝集试验的原理、方法、结果观察与判断。 二、实验器材 1、天平、称量纸、干粉培养基、锥形瓶、量筒、15支试管、试管架、试管筐、5ml 刻 度吸管、平皿、洗耳球、酒精灯 2、脓汁标本1支，粪便标本1支；伊红美兰平板2个，营养琼脂平板2个，伊红美蓝 平板2个，接种环，酒精灯 3、斜面4支、细菌分离培养物（上次实验平板） 题目 脓汁和粪便标本中病原菌的检测 成绩 实验者 作者：马浩楠 3140020007 参与者名字：马浩楠 丁超 王尧鑫 桂文茁 年级专业 2014级医学影像专业 指导老师 罗军
4、斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1 本，载玻片4张，染色瓶，染色架 5、斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4 个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，眼科镊子2把 6、半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。 三、方法与步骤 1、培养基的制备： 培养基称量干粉培 养基(g) 水量(ml) 煮沸(次）分装(ml) 备注 营养琼脂11.4 300 3瓶，500ml 瓶，平板 营养琼脂 2.7 70 3 5 14支×3，中试管，斜面 营养肉汤 1.3 60 1 3 20支×2，小试管，肉汤 半固体琼脂 1.7 60 3 4 14支×3，小试管，高层 （1）营养琼脂培养基的制备：称量11.4g琼脂，置于三角烧瓶中，加入300ml蒸馏水，分2瓶装，用于倒平板。 （2）营养琼脂培养基的制备（用于制作斜面）：称量2.9g琼脂，置于三角烧瓶中，加入75ml蒸馏水，放在电炉上，先后煮沸3次，分15支中试管装，每支试管5ml。 （3）肉汤培养基的制备（用于制作液体培养基）：称量1.1g琼脂，置于三角烧瓶中，加入50ml蒸馏水，放在电炉上，煮沸1次，分15支小试管装，每支试管5ml。 （4）半固体琼脂培养基的制备：称量1.7g琼脂，置于三角烧瓶中，加入60ml蒸馏水，放在电炉上，先后煮沸3次，分15支中试管装，每支试管4ml。 2、细菌的分离培养 平板划线分离法
如何看药敏实验
S（susceptible）， 是指细菌对抗菌药敏感，使用常规剂量时的平均血浓度超过MIC5倍以上，用常规剂量通常有效； 是指细菌对抗菌药中度敏感，常规剂量时平均血浓度等于或略高于MIC，需用高剂量或对体内药物浓缩部位的感染可能有效； R（resistance）是指细菌对某种抗菌药耐药，药物对细菌的MIC高于应用常规剂量时的血浓度，应用常规剂量治疗通常无效。 SDD：susceptible-dose dependent剂量依赖性性敏感：细菌对抗生素药物的敏感性依赖于对患者的用药方案，为了使血药浓度达到临床疗效，采用的给药方案可以是以较高的给药剂量或增加给药频率。 MIC 最低抑菌浓度 定量方法：MIC 定性分析法：纸片扩散法（RAD） MIC值那个小选哪个？MIC值一样选哪个？根据数值和中介的距离。（我们的没法看） 不同标本报告的药物不同。 脑脊液标本一般不常规报告口服药物，第一二代头孢菌素、克林霉素、大环内酯类、四环素、喹诺酮类。 药敏报告出现WT,WT为野生型菌株的意思。这种细菌无耐药机制。 如果报告中出现头孢曲松和头孢噻污一个中介，一个耐药，需要复核药敏。 折点有没有更新。现在头孢曲松和头孢噻污折点，≤1敏感，2中介，≥4耐药 亚胺培南和美罗培南一般抗菌活性一样，如果出现异常，可能需要复核。 分级报告 革兰阴性菌：万古霉素、利奈唑胺等不用做 一般报告中，根据分级报告原则：如果对第一代头孢敏感，第二代、三代等也敏感。相反如果，二代等耐药，一代敏感可以问一下有没有复核。 临床应用有效，但是药敏中没有这个药。可能这个药还是有效。 呋喃妥因在尿路中敏感浓度5倍。如果是中介，也可以用。 替代原则 头孢唑啉敏感的话，头孢他定之类也可以用 苯唑西林和头孢西丁只报一个就行。苯唑西林耐药，头孢西丁也耐药。 BLAC：耐药 对四环素敏感的药物对多西环素和米诺环素也敏感，但对四环素耐药的，也可能对多西环素敏感。
实验11-抗生素的抑菌试验
实验十一抗生素的抑菌试验 一目的要求 1、掌握纸片法测定抗生素抗菌作用的基本方法 2、了解抗生素的抗菌谱 二实验原理 抗生素是某些植物与微生物生长到对数期前后所产生的次生代谢产物，其在低浓度下可其它微生物生长具抑制作用或杀死作用的物质。抗生素对敏感微生物的作用机理分为抑制细胞壁的形成、破坏细胞膜的功能、干扰蛋白质合成及阻碍核酸的合成。 由于不同微生物对不同抗生素的敏感性不一样，抗生素的作用对象就有一定的范围，这种作用范围成为抗生素的抗菌谱，作用对象广的抗生素称为广谱抗生素，作用对象少的抗生素称为窄谱抗生素。而且当某种抗生素长时间用于敏感微生物生长后，即使同一种菌的不同菌株对不同药物的敏感性也常发生改变，甚至出现耐药菌株，亦即产生抗性菌株，则抗生素将失去对抗性菌株生长的抵制，只以采用新的抗生素才可能控制抗性菌株的生长与繁殖，因而不断开发新的抗生素是保健人类身体健康的重要工作。新抗生素产生菌的分离筛选应通过拮抗菌发酵，然后以发酵产物进行抗菌活性实验，根据实验结果而获得产新抗生素的菌株。微生物代谢产物的抗菌活性常以管碟法与纸法进行检测，根据透明抑菌圈的有无与大小作为依据。 三实验器材 1、菌种枯草杆菌、大肠杆菌。 2、培养基MH（Mueller-Hintion）琼脂。 3、试剂青霉素、链霉素。 四方法步骤 1、无菌滤纸片以孔径6mm打孔器将滤纸打为圆形纸片，放入培养皿内，121℃蒸汽湿热灭菌，100℃烘干2h。 2、抗生素溶液制备将取适量青霉素、链霉素，以无菌水溶解。 3、指示菌悬浮液的制备枯草杆菌、大肠杆菌斜面菌种分别以无菌水洗下菌苔细胞，到入无菌三角瓶内，制备适宜浓度的细胞悬浮液。 4、混菌平板制备取批示菌细胞悬浮液1mL加入无菌培养皿内，再加入温度为43~45℃的PDA培养基或牛肉膏蛋白胨琼脂培养基20mL，立即振荡使细胞与培养基混合均匀，静置冷凝。 5、平板加抗生素溶液将滤纸片在抗生素溶液中充分浸泡2min以上，然后将纸片放于混菌平板上，每皿呈三角形放3点，每点贴放纸片2张。 6、培养与观察将平板放于33℃左右的温度培养，每24h测量一次透明抑菌圈直径，共测量3次。
药敏纸片的制备完整版
药敏纸片的制备 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】
药敏纸片的制备及药敏试验方法 抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。 一. 药敏纸片的制备 1.材料 抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等 2．方法 PBS的配制 A.制备L储备液 LNa 2HPO 4 ： +1000 mL蒸馏水 或 +1000 mL蒸馏水 L NaH 2PO 4 : +1000 mL蒸馏水 或 +1000 mL蒸馏水 B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用 L磷酸缓冲液的配制
抗菌药物原液的配制和保存期限 －20℃4℃抗菌药物溶剂浓度 （?g/mL） 青霉素 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类 PBS 1280 3个月4周四环素类 PBS 12803个月1周 PBS 12803个月2周多粘菌素B硫酸 盐 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉 素 12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再 用 PBS 1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再 用 PBS 12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用 PBS 万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周 12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺 溶解，再用蒸馏水 1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用L乳酸溶解再用蒸 馏水稀释 各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸2560长期长期
特殊细菌药敏试验规范化操作
特殊细菌药敏试验的规范化操作 一、目前我国细菌药敏试验现状 20年以来，我国在卫生部和各地临床检验中心和检验学会的共同努力下引进CLSI药敏系列标准，使全国微生物实验室能在同一标准下进行质量控制活动。当前，微生物实验室对常见临床分离细菌的药物敏感试验的水平已有了显著的提高，但对特殊细菌的药敏试验的各个环节的规范操作还不能得到普及，对目前还无折点的细菌能否做药敏试验，以及如何判断细菌的药物敏感和耐药，仍然概念模糊，有待进一步规范和普及。 目前常见错误做法： （一）铜绿假单孢菌的药敏判断标准用于其他非发酵细菌；嗜血杆菌的标准用于卡他莫拉菌等的错误做法时有发生。 （二）借用同属细菌敏感标准 （三）借用同类抗生素的敏感标准 二、各菌属的药物敏感性报告及试验方法的CLSI药敏标准 （一）“嗜麦芽”菌属药敏报告标准 1.CLSI对“嗜麦芽”纸片药敏判断标准 2.CLSI对“嗜麦芽”稀释法判断标准 （二）无折点细菌的药物敏感试验报告 1. 其他药物的敏感性报告: CLSI推荐的药物可以报告MIC值和敏感度（S、I、R），临床需要的其他药物的药敏试验报告可以直接报告MIC值但不报告S、I、R。 2. 不要用认为相近细菌的折点代替报告S、I、R，这会误导医生用药。
（三）洋葱伯克霍德菌的药物敏感试验 1.CLSI 洋葱伯克霍德菌纸片法折点： 2. CLSI洋葱伯克霍德菌稀释法折点： （1）氯霉素不常规报告结果,只有在尿路感染时分离的细菌才报告结果。 （2）在纸片法药敏中只允许报告表中4个药物的敏感性,对其他药物可用于临床治疗但还没有足够的研究建立纸片扩散的折点。 （四）莫拉菌属的药物敏感试验报告 莫拉菌属至今尚无由CLSI颁布的标准操作方法和敏感性折点,该菌属是人体皮肤、黏膜、呼吸道正常细菌，很少会致病，有过报道的病例有该菌属引起的眼结膜炎、气管炎、肺炎、脑膜炎、脑脓肿、心包炎和心内膜炎。实验室药敏报告只能报告MIC 值但不能报告敏感性。文献报告的资料是推断性。 （五）金黄杆菌属的药敏试验报告 脑膜败血性黄杆菌是最常见于临床标本，是条件致病菌，有文献报道的病例有新生儿脑膜炎，对成人很少致病，感染与插管有关。CLSI未颁布标准操作方法和敏感折点，药敏试验可报告MIC值。该菌属耐药特点：对氨基糖甙类、β-内酰胺类、四环素类、氯霉素类天然耐药；对治疗革兰阳性细菌药物利福平、红霉素、克林霉素、司帕沙星、复方新诺明和万古霉素敏感。 （六）丛毛菌属和食酸菌属的药敏试验 推荐用肉汤稀释方法或E-test方法，报告MIC值，不适合用纸片药敏方法。 （七）产碱杆菌属、无色杆菌属和苍白杆菌属的药敏试验
纸片扩散法药物敏感试验
纸片扩散法药物敏感试验 若只根据是否出现抑菌环而不考虑抑菌环的直径大小来判断细菌是否对抗菌药物敏感的实验方法，其结果是不正确的。而纸片扩散法试验是应用标准的方法学原理，根据抑菌环直径大小与最低抑菌浓度的相关性，结合临床上已知敏感或耐药菌株的状态，其结果是可靠的。WHO推荐K-B法，其目的在于技术的简单和可重复性。本法特别适用于肠杆菌科细菌，也可用于快速生长的致病菌，但不适用于其他细菌，如嗜血杆菌、奈瑟菌、专性厌氧菌及酵母样菌等。 无论用哪种方法接种，只要质控菌株的抑菌环在预期范围内，均可按同一解释标准报告结果。但并非从感染患者分离到的微生物都必须做敏感试验，对于污染、机体共生的正常细菌群和那些与感染无关的细菌，可不必做敏感试验，只有那些被认为引起感染的微生物，应先分离提纯、鉴定菌种后再做敏感试验。 试验方法： 一、试验材料： (一)培养基： Kirby-Bauer法指定用Mueller-Hinton琼脂。多年大量的有关敏感试验的方法学研究，均采用该培养基；维持细菌正常发育，绝大多数细菌在此培养基上生长良好。此培养基不拮抗抗菌药物活性以及商品的批次间差异等方面均优于其他培养基。若检测肺炎链球菌的敏感性
时，须在培养基中加5％的脱纤维羊血，制成血平板。测嗜血杆菌及淋病奈瑟菌的敏感性时，在培养基中须加入1％血红素和 2.5mg/ml 辅酶I后应校正pH 7.2～7.4。 制备MH琼脂平板应用直径90cm平皿。在水平的实验台上倾制。琼脂厚为4mm，允许误差为土1mm。琼脂凝固后，应测一下pH。琼脂于板应放4℃保存，在7日内用完。若当天不用，用塑料袋密封包装贮藏于冰箱（2-8℃）。 每批平板都应抽样，在30-50℃下培养24h或更长时间检查是否被感染。 MH琼脂培养基配方(1L)： Beef Extract 2.0g Acid Hydrolysis of Casein 17.5g Starch 1.5g Agar 17.0g Final PH 7.3 at 25℃ 高压灭菌后立即水浴冷却至45-50℃。 (二)药物纸片 抗菌药物纸片直径约为6.00～6.35mm，每片的吸水量约20μl。采用K-B法，纸片的药物含量必须与该法规定的一致，不得任意更改。药物纸片可以购买，也可自制，用前必须做质量鉴定。用以下两个指标判定纸片的质量： 1、片间差：是衡量不同纸片含药是否均一的指标。 测定方法：以质控菌株接种M-H琼脂平板，一块平板上贴6张相同的纸片。35C过夜培养后，记录6个抑菌环直径，其最大和最小之
微生物实验报告
脓汁和粪便标本中病原菌的检测 专业：学号：姓名： 一、实验目的 探究检测其病原菌的类型并通过一系列的观察与鉴定从而确定其病原菌的名称和性质。在实践中学习培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定等技巧。从而掌握微生物实验的各种操作方法，培养对微生物实验的兴趣。 二、实验材料 器材 打火机、油性笔、酒精灯、接种环、接种针、污物盘、普通冰柜、隔水式电热恒温培养箱、奥林巴斯CX21型生物显微镜、电炉、试管（带棉塞）、称量纸、药勺、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、尺子、锥形瓶、高压蒸汽灭菌器、镊子、玻片、吸水纸、拭镜纸 试剂药品 普通营养琼脂培养基、蒸馏水、脓汁标本、粪便标本、石蜡油、生理盐水、结晶紫、卢戈碘液、95%乙醇、稀释复红、葡萄糖微量发酵管（2支）、乳糖微量发酵管（2支）、青霉素抗菌素纸片、链霉素抗菌素纸片、庆大霉素抗菌素纸片、血浆、福氏志贺菌诊断血清 三、方法与步骤 1、培养基制备 干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌→（1）平板培养基：倾注平板10ml→琼脂完全凝固后，平板倒放→4℃冰箱保存备用。（2）斜面培养基：培养基趁热斜放→琼脂凝固以后，4℃冰箱保存备用。
→贴上标签后灭菌使用。 2、空气与人体体表细菌学检查 ①空气的细菌学检查 每组1个营养琼脂平板，选择采样地点（实验室、卫生间或任选地点）→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15min→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24h→观察结果。 ②人体体表的细菌学检查 甲乙常规洗手，丙丁标准洗手。甲和乙、丙和丁共用1个平板 按规定在普通平板上接种手指上的细菌。第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。 3、细菌的分离培养 接种环烧灼灭菌→分别取脓汁标本与粪便标本点在普通平板和依红美蓝平板上，各做两份，→烧掉接种环上多余的标本→冷却后，应用分区划线分离法，将脓汁标本接种于营养琼脂平板（2份），粪便标本接种于伊红美蓝平板（2份）→接种环烧灼灭菌→将平板倒置37℃培养18～24h→观察结果。 4、细菌的群体生长特性观察和纯化培养 接种环烧灼灭菌→挑选平板上典型的四种单菌落（白色、黄色、紫黑色、粉红色）进行斜面接种纯培养→做好标记→接种环烧灼灭菌→斜面培养基置于37℃培养过夜→保存备用 5、细菌的个体形态特征的观察 ①革兰氏染色： 取洁净载玻片→用灭菌操作后的接种环取生理盐水1-2环于玻片上→挑取细菌培养物少许与盐水轻轻抹匀→待涂片干燥后在酒精灯火焰外侧快速来回2-3回合→结晶紫初染1min→水洗→卢戈碘液媒染1min→水洗→95％乙醇脱色约20s→水洗→稀释品红→复染1min→水洗→吸干,镜检。 ②肉汤接种法: 接种环烧灼灭菌→分别在斜面培养物中挑取菌苔少许→立即移入肉汤培养基管中→在接近液面的管壁上轻轻研磨→沾取少量肉汤调和→混匀→试管口通过火焰2-3次灭菌→塞好棉塞→35℃培养4~6h 6、药敏试验 接种环烧灼灭菌→分别取之前实验中得到的四种菌液在普通平板密集涂布→接种环烧灼灭菌→标记:青、链、庆→镊子火焰消毒→贴青霉素、链霉素、庆大霉素纸片→按压→镊子消毒→倒置37℃培养18～24h→观察结果
药敏试验程序及步骤
药敏试验程序及步骤 微生物标本的采集 通常有血液、脑脊液、尿液、伤口的脓液、胸水腹水、粪便、痰液及泌尿生殖系统的分泌物。1）采集的一般原则： a早期采集 b 无菌采集注意对局部及周围皮肤的消毒，渎道底部采集的标本（外通道）正常菌群 寄生部位采集的标本应明确目的菌，采用选择培养基。 C 不同菌不同采集方法 D 采集适量标本，量不应过少，注意采集不同时间不同部位标本，要全面有特征 E 安全采集 2）标本处理 2h送到检验处，部分菌应保温于一定环境中保存注意安全尤其对烈性传染病。有时可以直接用抽取标本的注射器 如尸检组织、支气管洗液、心包液、痰、尿等标本要保存于4℃环境中，脑脊液保存于25℃ 3）各部位标本的采集及注意事项 A 血液 皮肤消毒采血部位采血量采血次数采血时间不同动物有所不同血液应马上送检室温保存不可冷藏。 配置的培养基血液和肉汤比为1：5～1：10 血液中常见的病原体引起的疾病有葡萄球菌菌血症，肠球菌菌血症、革兰隐性杆菌、厌氧菌菌血症真菌血症。 B 脑脊液 采集脑脊液一般用腰椎穿刺术获得。采集后立即送检，一般不要超过1h，避免凝固和混入血液一般取3～5ml 35度保温送检不可至于冰箱保存做病毒检查时应放置冰块4度保存72h
常见细菌性脑膜炎如流行性脑脊髓膜炎肺炎球菌脑膜炎，链球菌脑膜炎等 真菌性脑膜炎常见隐球菌脑膜炎假丝酵母菌脑膜炎等特别是免疫功能低下和恶性疾病患者易并发。如AIDS 恶性肿瘤严重糖尿病等 流行性乙型脑炎是一种人兽共患病肠道病毒可见多种病毒引起脑膜炎和肺炎 c 脓液标本的采集 首先用无菌生理盐水清洗脓液及病灶的杂菌，在采集标本，用针和注射器抽吸采取，再移入无菌容器立即送检也可用拭子在伤口深部采集渗出物，对于皮肤或下表皮的散播性感染，应采集病灶出边缘而非中央处的感染组织送检。脓肿标本以无菌注射器抽取为好，也可用排液法取得，先用70的酒精擦拭病灶部位，袋干燥后用以无菌刀切开排脓，以无菌拭子采取，不能及时送检可放冰箱冷藏，厌氧菌培养的标本只能放于室温下。厌氧菌感染的脓液常有腐臭味，采集和运送要注意不要接触空气，可直接针筒送检或置于厌氧运送培养基送检。 外伤性创伤感染以葡萄球菌和链球菌多见，放线菌，结核分枝杆菌，大肠埃希菌，铜绿假单胞杆菌也常见。深部感染极易引起破伤风和气性坏死感染。 烧伤创面最常见革兰阴性杆菌感染和革兰阳性球菌感染 急性化脓性骨关节炎常由金黄色葡萄球菌感染溶血性链球菌肺炎链球菌感染所致慢性化脓性骨关节炎慢性骨髓炎常由结合分支杆菌感染所致。 放线菌感染可发生在免疫功能下降时或由于拔牙口腔粘膜损伤一起的感染。 d痰液标本的采集 自然咳痰法和支气管镜采集法对呼吸道感染诊断有重要意义，细菌性肺炎为下呼吸道感染最常见的类型。支原体肺炎常以不典型肺炎表现。真菌性肺炎和病毒性肺炎也常见。 E 粪便标本的采集 用药前自然排便采集脓血粘液部分2～3g，粪便表面采样，液体便取絮状物1～2ml置于无菌容器内送检。 细菌性痢疾细菌真菌病毒引起的胃肠炎细菌性食物中毒致病性大肠埃希菌的肠道感染幽门螺杆菌感染导致消化性溃疡，主要部位是十二指肠球部。 F 尿液标本采集 采集清洁中段尿最好早晨取样，先清洗尿道口。必要时导尿或膀胱穿刺留尿样本采集容器要求清洁无菌、密封、加盖、防渗透、广口、容积大于50ml。主要主要经尿道口上行感染，极少数血道感染，可反映肾脏，膀胱，尿道，前列腺等处的炎症变化。