ELISA抗体水平评价口蹄疫灭活疫苗免疫效果的可行性分析_施程洪

中国兽医科学　２０１２，４２（０４）：３９４－４００

Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｓｃｉｅｎｃｅ

中图分类号：Ｓ　８５５．３　文献标志码：Ａ　文章编号：１６７３－４６９６（２０１２）０４－０３９４－０７

ＥＬＩＳＡ抗体水平评价口蹄疫灭活疫苗

免疫效果的可行性分析

施程洪，刘绍阳，朱明旺，王继华，代保坤，赵文祥，彭正啟＊

（中牧实业股份有限公司保山生物药厂，云南保山　６７８０００）

摘要：为了探讨免疫抗体评价口蹄疫灭活疫苗效果的可行性，分别用５批次的口蹄疫Ｏ型－亚洲１型二价灭活疫苗（ＯＳ／９９株＋ＪＳＬ／０６株）、５批次的猪口蹄疫Ｏ型灭活疫苗（ＯＺＫ／９３株＋ＯＳ／９９株）免疫动物，在攻毒的同时采血分离血清，用液相阻断ＥＬＩＳＡ测定抗体效价，以分析抗体效价与免疫保护的关系。统计学分析表明，二价灭活疫苗的Ｏ型免疫抗体值与攻毒保护率（概率单位）之间呈正相关关系（Ｐ＜０．０１），相关系数为０．９８６；亚洲１型免疫抗体值与攻毒保护率（概率单位）之间呈正相关关系（Ｐ＜０．０５），相关系数为０．９９７，猪口蹄疫Ｏ型灭活疫苗免疫抗体值与攻毒保护率（概率单位）之间不呈正相关关系（Ｐ＞０．０５）。结果表明，应用抗体水平评价二价灭活疫苗的免疫效果是完全可行的，但用其评价猪Ｏ型灭活疫苗的免疫效果不具有可行性。

关键词：口蹄疫；灭活疫苗；抗体水平；百分率；免疫效果

Ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｆｏｏｔ－ａｎｄ－ｍｏｕｔｈ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ

ｖａｃｃｉｎｅ　ｂｙ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｉｔｅｒ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ

ＳＨＩ　Ｃｈｅｎｇ－ｈｏｎｇ，ＬＩＵ　Ｓｈａｏ－ｙａｎｇ，ＺＨＵ　Ｍｉｎｇ－ｗａｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｊｉ－ｈｕａ，ＤＡＩ　Ｂａｏ－ｋｕｎ，

ＺＨＡＯ　Ｗｅｎ－ｘｉａｎｇ，ＰＥＮＧ　Ｚｈｅｎｇ－ｑｉ

（Ｂａｏｓｈａｎ　Ｂｉｏ－ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｆａｃｔｏｒｙ，Ｃｈｉｎａ　Ａｎｉｍａｌ　Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　Ｃｏ．Ｌｔｄ．，Ｂａｏｓｈａｎ６７８０００，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｆｏｏｔ－ａｎｄ－ｍｏｕｔｈ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｖａｃｃｉｎｅ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ａｎｔｉｂｏｄｙｌｅｖｅｌ，ｆｉｖｅ　ｂａｔｃｈｅｓ　ｏｆ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅ　ａｇａｉｎｓｔ　ｆｏｏｔ－ａｎｄ－ｍｏｕｔｈ　ｄｉｓｅａｓｅ（ＦＭＤ）ｔｙｐｅ　Ｏ　＆Ａｓｉａ　１ａｎｄ　ｆｉｖｅｂａｔｃｈｅｓ　ｏｆ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅ　ａｇａｉｎｓｔ　ｓｗｉｎｅ　ＦＭＤ　ｔｙｐｅ　Ｏ　ｗｅｒｅ　ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ａｎｉｍａｌｓ．Ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｉｔｅｒｓ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ　ｗａｓ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｂｙ　ｌｉｑｕｉｄ　ｂｌｏｃｋｉｎｇＥＬＩＳＡ．Ｔｈｅ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｄａｔａ　ｐｒｏｖｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　Ｏ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｉｔｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅ　ａｇａｉｎｓｔ　ＦＭＤ　ｔｙｐｅ　Ｏ＆Ａｓｉａ　１ｗａｓ　ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ（ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ　ｕｎｉｔｓ）ｐｏｓｔ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ（Ｐ＜０．０１，ｒ＝０．９８６）．Ａｓｉａ　１ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｉｔｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅ　ａｇａｉｎｓｔ　ＦＭＤ　ｔｙｐｅ　Ｏ　＆Ａｓｉａ　１ｗａｓ　ｐｏｓｉ－ｔｉｖｅｌｙ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ（Ｐ＜０．０５，ｒ＝０．９９７）ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ（ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ　ｕｎｉｔｓ）ｐｏｓｔ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ，ｂｕｔ　Ｏ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｉｔｅｒｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅ　ａｇａｉｎｓｔ　ｓｗｉｎｅ　ＦＭＤ　ｔｙｐｅ　Ｏ　ｗｅｒｅ　ｎｏｔ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ（Ｐ＞０．０５）ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ（ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ　ｕｎｉｔｓ）ｐｏｓｔ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｉｔ　ｉｓ　ｅｎ－ｔｉｒｅｌｙ　ｆｅａｓｉｂｌｅ　ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅ　ａｇａｉｎｓｔ　ＦＭＤ　ｔｙｐｅ　Ｏ　＆Ａｓｉａ　１ｕｓｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｉｔｅｒｓ，ａｎｄ　ｎｏｔ　ｆｅａｓｉｂｌｅ　ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅ　ａｇａｉｎｓｔ　ＦＭＤ　ｔｙｐｅ　Ｏｓｗｉｎｅ　ｕｓｉｎｇ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｉｔｅｒｓ．

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｆｏｏｔ－ａｎｄ－ｍｏｕｔｈ　ｄｉｓｅａｓｅ；ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅ；ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｌｅｖｅｌ；ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ

收稿日期：２０１１－１０－１７；修回日期：２０１２－０１－１１

基金项目：中牧实业股份有限公司２０１０年技改项目

作者简介：施程洪（１９８２），男，云南建水人，工程师，硕士。＊通讯作者，从事动物疫苗的检验和研发工作，Ｔｅｌ：０８７５－２８４８５８，－：ｐｇｈｑ＠

口蹄疫（ｆｏｏｔ－ａｎｄ－ｍｏｕｔｈ　ｄｉｓｅａｓｅ，ＦＭＤ）是由口蹄疫病毒（ｆｏｏｔ－ａｎｄ－ｍｏｕｔｈ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｖｉｒｕｓ，ＦＭＤＶ）感染引起的，以感染和危害偶蹄动物为特征的一种热性、急性、高度接触性传染病［１］。该病以传播迅速、发病率高著称，世界动物卫生组织（ＯＩＥ）和联合国粮农组织（ＦＡＯ）将其列为Ａ类烈性传染病之首，我国将其列为一类传染病第一位。目前，在我国，口蹄疫灭活疫苗的效果仍然是通过本动物攻毒试验来检验的，这不仅需要大量的未接种口蹄疫灭活疫苗的动物（这与我国口蹄疫疫苗实行政府强制免疫，试验用健康动物来源越来越困难存在矛盾），增加疫苗的成本，而且受检动物由于地域、品质、健康情况存在个体差异，在一定情况下也导致了检验结果不能反映疫苗效力的实际情况。此外，用该方法进行疫苗效力检验时，需用到大量的感染性病毒，一旦安全设施出现故障，就会使活病毒逃逸到外界环境中，造成生物安全事故。

本试验以口蹄疫Ｏ型－亚洲１型二价灭活疫苗（ＯＳ／９９株＋ＪＳＬ／０６株）、猪口蹄疫Ｏ型灭活疫苗（ＯＺＫ／９３株＋ＯＳ／９９株）为研究对象，旨在通过对口蹄疫灭活疫苗免疫抗体水平进行跟踪监测，并将免疫抗体与攻毒保护率（概率单位）进行比较，以分析二者是否存在相关关系，是否具备在今后口蹄疫灭活疫苗效力检验中应用免疫抗体水平来评价疫苗效果的可行性。

１　材料与方法

１．１　试剂

Ｏ型口蹄疫抗体检测液相阻断ＥＬＩＳＡ试剂盒、亚洲１型口蹄疫抗体检测液相阻断ＥＬＩＳＡ试剂盒为中国农业科学院兰州兽医研究所产品。牛羊口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒、猪口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒为上海优耐特公司产品。

１．２　实验动物

１～２岁健康黄牛１５４头（经液相阻断ＥＬＩＳＡ检测，其口蹄疫Ｏ型、亚洲１型基础血清抗体≤１∶１６；经非结构蛋白抗体检测为阴性），购自云南省大理州云龙县。

３月龄健康ＤＬＹ仔猪１５４头（经液相阻断ＥＬＩＳＡ检测，其口蹄疫Ｏ型基础血清抗体≤１∶８；经非结构蛋白抗体检测为阴性），购自云南省保山市施甸县。

１．３　疫苗

１．３．１　Ｏ－１价（ＯＳ／９９株＋ＪＳＬ／０６株）　中牧实业股份有限公司保山

生物药厂提供，批号为１０００１、１０００２、１０００３、１０００４、１０００５。

１．３．２　猪口蹄疫Ｏ型灭活疫苗（ＯＺＫ／９３株＋ＯＳ／９９株）　中牧实业股份有限公司保山生物药厂提供，批号为１１００１、１１００２、１１００３、１１００４、１１００５。１．４　攻毒用强毒

１．４．１　口蹄疫Ｏ型－亚洲１型二价灭活疫苗（ＯＳ／９９株＋ＪＳＬ／０６株）免疫动物攻毒用强毒　Ｏ型毒为ＯＳ／９９ＣＦ

１２

强毒株，ＬＤ

５０

为１０－８．５０／０．２ｍＬ，ＩＤ

５０为１０－９．００／０．２ｍＬ。

亚洲１型毒为Ａｓｉａ　１ＪＳＬ／ＧＳＺＹ／０６ＭＦ９强毒

株，ＬＤ

５０

为１０－９．０／０．２ｍＬ，ＩＤ

５０

为１０－７．５０／０．２ｍＬ。１．４．２　猪口蹄疫Ｏ型灭活疫苗（ＯＺＫ／９３株＋ＯＳ／９９株）免疫动物攻毒用强毒　ＯＺＫ／９３ＭＦ７强毒株，ＩＤ５０为１０－６．５／２．０ｍＬ，ＬＤ５０为１０－９．５／０．２ｍＬ。ＯＲ／８０ＭＦ８强毒株，ＩＤ５０为１０－６．０／２．０ｍＬ，ＬＤ５０为１０－８．５／０．２ｍＬ。

１．５　免疫效力检测

按照２０１０版《中国兽药典》［２］推荐的ＰＤ５０试验检验疫苗的效力。

１．６　免疫接种

１．６．１　口蹄疫Ｏ型－亚洲１型二价灭活疫苗（ＯＳ／９９株＋ＪＳＬ／０６株）　每批疫苗分为１头份、１／３头份和１／９头份３个免疫剂量组，每个剂量组分别于颈部肌肉注射１０头牛，攻毒时均分为Ｏ型和亚洲１型组（各５头）；另设Ｏ型和亚洲１型对照组各２头牛。

１．６．２　猪口蹄疫Ｏ型灭活疫苗（ＯＺＫ／９３株＋ＯＳ／９９株）　每批疫苗分为１头份、１／３头份和１／９头份３个免疫剂量组，每个剂量组分别于耳后肌肉注射１０头猪，攻毒时均分为ＯＺＫ／９３型和ＯＲ／８０型组（各５头），另设ＯＺＫ／９３型和ＯＲ／８０型对照组各２头猪。

１．７　攻毒和结果判定

１．７．１　口蹄疫Ｏ型－亚洲１型二价灭活疫苗（ＯＳ／９９株＋ＪＳＬ／０６株）　免疫后第２１天，Ｏ型和亚洲１型组的免疫牛连同对照组，舌上表面两侧分两点皮内分别注射牛口蹄疫病毒Ｏ型强毒和亚洲１型强

毒，每点０．１ｍＬ（共０．２ｍＬ，含１０　０００ＩＤ

５０

）。连续观察１０ｄ，对照组牛应３个以上蹄出现病变（水泡或溃烂），则试验成立。免疫牛仅在舌面出现水泡或溃烂，而其他部位无病变时判为保护，除舌面以外任一部位出现典型口蹄疫病变（水泡或溃烂）时则判为不保护。

５

９

３

第４期 施程洪等：ＥＬＩＳＡ抗体水平评价口蹄疫灭活疫苗免疫效果的可行性分析

１．７．２　猪口蹄疫Ｏ型灭活疫苗（ＯＺＫ／９３株＋ＯＳ／９９株）　免疫后第２８天，ＯＺＫ／９３型和ＯＲ／８０型的免疫猪连同对照组，耳根后肌肉分别注射１　０００ＩＤ

５０ＯＺＫ／９３型和ＯＲ／８０型强毒。连续观察１０ｄ，对照组猪均应至少有一蹄出现水泡或溃烂。免疫猪出现任何口蹄疫症状即判为不保护。

１．８　血清抗体的检测

免疫期满攻毒前对免疫牛和免疫猪进行采血分离血清，参照液相阻断ＥＬＩＳＡ试剂盒的方法检测Ｏ型和亚洲１型免疫抗体水平。

２　结果

２．１　口蹄疫Ｏ型－亚洲１型二价灭活疫苗（ＯＳ／９９株＋ＪＳＬ／０６株）攻毒保护情况

１０００１、１０００２、１０００３、１０００４、１０００５批二价灭活疫苗免疫后第２１天，连同对照组牛一起进入强毒试验负压区进行Ｏ型、亚洲１型强毒攻击试验。试验结果见表１、表２。

表１　Ｏ型攻毒保护结果

Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ　ｃａｔｔｌｅ　ｐｏｓｔ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ　ｗｉｔｈ　ｔｙｐｅ　Ｏ　ｖｉｒｕｓ

疫苗批号Ｂａｔｃｈｅｓ

牛头数

Ｂｏｖｉｎｅ　ｃｏｕｎｔｓ

攻毒后保护情况

Ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ　ｃｏｕｎｔｓ

ｐｏｓｔ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ

ＰＤ５０

１０００１　１５　１２／１５　７．４９

１０００２　１５　１１／１５　７．０５

１０００３　１５　１０／１５　５．２０

１０００４　１５　１３／１５　１０．８１

１０００５　１５　１２／１５　９．００

对照Ｃｏｎｔｒｏｌ　２　０／２

表２　亚洲１型攻毒保护结果

Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ　ｃａｔｔｌｅ　ｐｏｓｔ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ　ｗｉｔｈ　ｔｙｐｅ　Ａｓｉａ　１ｖｉｒｕｓ

疫苗批号Ｂａｔｃｈｅｓ

牛头数

Ｂｏｖｉｎｅ　ｃｏｕｎｔｓ

攻毒后保护情况

Ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ　ｃｏｕｎｔｓ

ｐｏｓｔ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ

ＰＤ５０

１０００１　１５　１２／１５　１０．３２

１０００２　１５　１２／１５　９．００

１０００３　１５　１１／１５　６．３４

１０００４　１５　１２／１５　７．４９

１０００５　１５　１３／１５　１０．８１

对照Ｃｏｎｔｒｏｌ　２　０／２

２．２　猪口蹄疫Ｏ型灭活疫苗（ＯＺＫ／９３株＋ＯＳ／９９株）攻毒保护情况

１１００１、１１００２、１１００３、１１００４、１１００５批猪口蹄疫Ｏ型灭活疫苗免疫后第２８天，连同对照组猪一起进入强毒试验负压区进行ＯＺＫ／９３株、ＯＲ／８０株强毒。３、４。

表３　ＯＺＫ／９３株攻毒保护结果

Ｔａｂｌｅ　３　Ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ　ｐｉｇｓ　ｐｏｓｔ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ　ｗｉｔｈ　ＯＺＫ／９３ｓｔｒａｉｎ

疫苗批号

Ｂａｔｃｈｅｓ

猪头数

Ｐｉｇ　ｃｏｕｎｔｓ

攻毒后保护情况

Ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ　ｃｏｕｎｔｓ

ｐｏｓｔ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ

ＰＤ５０

１１００１　１５　１１／１５　７．１９

１１００２　１５　１１／１５　７．１９

１１００３　１５　１０／１５　５．６２

１１００４　１５　１２／１５　７．４９

１１００５　１５　１２／１５　７．４９

对照Ｃｏｎｔｒｏｌ　２　０／２

表４　ＯＲ／８０株攻毒保护结果

Ｔａｂｌｅ　４　Ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ　ｐｉｇｓ　ｐｏｓｔ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ　ｗｉｔｈ　ＯＲ／８０ｓｔｒａｉｎ

疫苗批号

Ｂａｔｃｈｅｓ

猪头数

Ｐｉｇ　ｃｏｕｎｔｓ

攻毒后保护情况

Ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ　ｃｏｕｎｔｓ

ｐｏｓｔ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ

ＰＤ５０

１１００１　１５　１２／１５　７．４９

１１００２　１５　１１／１５　７．１９

１１００３　１５　１０／１５　５．４２

１１００４　１５　１２／１５　９．００

１１００５　１５　１１／１５　７．１９

对照Ｃｏｎｔｒｏｌ　２　０／２

２．３　口蹄疫Ｏ型－亚洲１型二价灭活疫苗（ＯＳ／９９株＋ＪＳＬ／０６株）抗体效价与攻毒保护情况

１０００１、１０００２、１０００３、１０００４、１０００５批二价灭活疫苗免疫后第２１天，采血进行Ｏ型、亚洲１型抗体效价测定，同时与攻毒保护结果进行比较，其结果见表５、表６。

２．４　猪口蹄疫Ｏ型灭活疫苗（ＯＺＫ／９３株＋ＯＳ／９９株）抗体效价与攻毒保护情况

１１００１、１１００２、１１００３、１１００４、１１００５批猪口蹄疫Ｏ型灭活疫苗免疫后第２８天，采血进行Ｏ型抗体效价测定，同时与攻毒保护结果进行比较，其结果见表７。

２．５　口蹄疫Ｏ型－亚洲１型二价灭活疫苗（ＯＳ／９９株＋ＪＳＬ／０６株）抗体效价与牛免疫保护率的相关性 将１０００１、１０００２、１０００３、１０００４、１０００５批二价灭活疫苗的Ｏ型、亚洲１型抗体效价为１∶１６～１∶１２８之间的数值对应的牛头数、攻毒保护头数、保护率及应用生物统计方法换算出的概率单位进行比较，结果，Ｏ型抗体效价与攻毒保护率、概率单位之间呈明显的正相关关系（见表８）。经统计学ｔ检验，Ｐ＜０．０１，相关系数为０．９８６。从表９中可以看出，亚洲１型抗体效价与攻毒保护率、概率单位之间呈明显的正相关关系。经统计学ｔ检验，Ｐ＜０．０５，相关系数为０．９９７。结果见表８、表９。

６

９

３中国兽医科学第４２卷

表５　Ｏ型抗体效价与攻毒保护结果

Ｔａｂｌｅ　５　Ｔｈｅ　ｒｅｌｅｖａｎｃｅ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ　ｗｉｔｈ　ｔｙｐｅ　Ｏａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｉｔｅｒｓ　ｐｏｓｔ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ

疫苗批号Ｂａｔｃｈｅｓ抗体效价

Ａｎｔｉｂｏｄｙ

ｂｉｔｅｒｓ

牛头数

Ｂｏｖｉｎｅ

ｃｏｕｎｔｓ

攻毒后保护情况

Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｓ

ｐｏｓｔ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ

保护率

Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ

ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ

１０００１≤１∶１６　２　１／２　５０／１００１∶２２　０　０／００／１００１∶３２　１　０／１　０／１００１∶４５　１　１／１　１００／１００１∶６４　１　１／１　１００／１００１∶９０　１　１／１　１００／１００≥１∶１２８　９　８／９　８９／１００

１０００２≤１∶１６　０　０／００／１００１∶２２　１　０／１　０／１００１∶３２　０　０／００／１００１∶４５　２　１／２　５０／１００１∶６４　１　０／１　０／１００１∶９０　２　１／２　５０／１００≥１∶１２８　９　９／９　１００／１００

１０００３≤１∶１６　０　０／００／１００１∶２２　２　１／２　５０／１００１∶３２　１　０／１　０／１００１∶４５　０　０／００／１００１∶６４　１　０／１　０／１００１∶９０　３　２／３　６７／１００≥１∶１２８　８　７／８　８７／１００

１０００４≤１∶１６　１　０／１　０／１００１∶２２　０　０／１　０／１００１∶３２　２　２／２　１００／１００１∶４５　２　１／２　５０／１００１∶６４　１　１／１　１００／１００１∶９０　２　２／２　１００／１００≥１∶１２８　７　７／７　１００／１００

１０００５≤１∶１６　０　０／００／１００１∶２２　１　１／１　１００／１００１∶３２　０　０／００／１００１∶４５　１　１／１　１００／１００１∶６４　２　１／２　５０／１００１∶９０　３　２／３　６７／１００≥１∶１２８　８　７／８　８９／１００

２．６　猪口蹄疫Ｏ型灭活疫苗（ＯＺＫ／９３株＋ＯＳ／９９株）抗体效价与猪免疫保护率的相关性

将１１００１、１１００２、１１００３、１１００４、１１００５批猪口蹄疫Ｏ型灭活疫苗的Ｏ型抗体效价为１∶１６～１∶６４之间的数值对应的猪头数、攻毒保护头数、保护率及应用生物统计方法换算出的概率单位进行比较，从表１０中可以看出Ｏ型抗体效价与攻毒保护率、概率单位之间不呈正相关关系（Ｐ＞０．０５）。结果详见表１０。

表６　亚洲１型抗体效价与攻毒保护结果

Ｔａｂｌｅ　６　Ｔｈｅ　ｒｅｌｅｖａｎｃｅ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ　ｗｉｔｈ　ｔｙｐｅＡｓｉａ　１ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｉｔｅｒｓ　ｐｏｓｔ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ

疫苗批号

Ｂａｔｃｈｅｓ

抗体效价

Ａｎｔｉｂｏｄｙ

ｂｉｔｅｒｓ

牛头数

Ｂｏｖｉｎｅ

ｃｏｕｎｔｓ

攻毒保护情况

Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｓ

ｐｏｓｔ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ

保护率

Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ

ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ１０００１

≤１∶１６　１　０／１　０／１００

１∶２２　０　０／００／１００

１∶３２　２　１／２　５０／１００

１∶４５　２　１／２　５０／１００

１∶６４　１　１／１　１００／１００

１∶９０　０　０／００／１００

≥１∶１２８　９　９／１０　９０／１００

１０００２

≤１∶１６　０　０／００／１００

１∶２２　１　１／１　１００／１００

１∶３２　１　０／１　０／１００

１∶４５　２　１／２　５０／１００

１∶６４　１　１／１　１００／１００

１∶９０　３　２／３　６７／１００

≥１∶１２８　７　７／７　１００／１００

１０００３

≤１∶１６　２　１／２　５０／１００

１∶２２　１　０／１　０／１００

１∶３２　０　０／００／１００

１∶４５　２　１／２　５０／１００

１∶６４　１　１／１　１００／１００

１∶９０　２　２／２　１００／１００

≥１∶１２８　７　６／７　８６／１００

１０００４

≤１∶１６　１　０／１　０／１００

１∶２２　１　０／１　０／１００

１∶３２　０　０／００／１００

１∶４５　１　１／１　１００／１００

１∶６４　２　１／２　５０／１００

１∶９０　１　１／１　１００／１００

≥１∶１２８　９　９／９　１００／１００

１０００５

≤１∶１６　０　０／００／１００

１∶２２　０　０／００／１００

１∶３２　１　１／１　１００／１００

１∶４５　０　０／００／１００

１∶６４　３　２／３　６７／１００

１∶９０　４　３／４　７５／１００

≥１∶１２８　７　７／７　１００／１００２．７　回归分析

２．７．１　口蹄疫Ｏ型－亚洲１型二价灭活疫苗（ＯＳ／９９株＋ＪＳＬ／０６株）概率单位与抗体效价的对数值的回归分析　将得到的概率单位数据与口蹄疫Ｏ型－亚洲１型抗体效价的对数值进行统计学分析，Ｏ型回归方程为ｙ＝１．６６２ｘ＋２．５５６（ｒ＝０．８６５，Ｐ＜０．０５），亚洲１型回归方程为ｙ＝１．１３５ｘ＋２．５３６（ｒ＝０．９６０，Ｐ＜０．０１），结果见图１，图２。从图１、图２可以看出，抗体效价的对数值与保护率（概率单位）之间的关系为明显的正相关线性回归，进一步可以说明，抗体效价与攻毒保护率（概率单位）之间存在着显著的正相关性。这说明在口蹄疫Ｏ型－亚洲１型二价灭活疫苗（ＯＳ９９＋ＪＳＬ／０６株）效果评价

７

９

３

第４期 施程洪等：ＥＬＩＳＡ抗体水平评价口蹄疫灭活疫苗免疫效果的可行性分析

中，应用抗体效价来评价疫苗效果是完全可行的。

表７　Ｏ型抗体效价与攻毒保护结果

Ｔａｂｌｅ　７　Ｔｈｅ　ｒｅｌｅｖａｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｙｐｅ　Ｏ　ａｎｔｉｂｏｄｙｔｉｔｅｒｓ

疫苗批号Ｂａｔｃｈｅｓ抗体效价

Ａｎｔｉｂｏｄｙ

ｔｉｔｅｒｓ

猪头数

Ｐｉｇ

ｃｏｕｎｔｓ

攻毒后保护情况

Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｓ

ｐｏｓｔ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ

保护率

Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ

ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ

１１００１≤１∶１６　２０　１８／２０　９０／１００１∶２２　３　２／３　６７／１００１∶３２　２　１／２　５０／１００１∶４５　２　１／２　５０／１００≥１∶６４　３　１／３　３３／１００

１１００２≤１∶１６　２０　１５／２０　７５／１００１∶２２　５　４／５　８０／１００１∶３２　１　１／２　５０／１００１∶４５　３　２／３　６７／１００≥１∶６４　１　０／１　０／１００

１１００３≤１∶１６　１３　８／１３　６２／１００１∶２２　１１　７／１１　６４／１００１∶３２　２　２／２　１００／１００１∶４５　３　２／３　６７／１００≥１∶６４　１　１／１　１００／１００

１１００４≤１∶１６　２４　２０／２４　８３／１００１∶２２　３　２／３　６７／１００１∶３２　１　１／１　１００／１００１∶４５　２　１／２　５０／１００≥１∶６４　０　０／００／１００

１１００５≤１∶１６　２０　１７／２０　８５／１００１∶２２　４　２／４　５０／１００１∶３２　２　１／２　５０／１００１∶４５　１　１／１　１００／１００≥１∶６４　３　２／３　６７／１００

表８　Ｏ型抗体效价与牛免疫保护率的相关性

Ｔａｂｌｅ　８　Ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ　ａｎｄａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｉｔｅｒｓ　ｏｆ　ｔｙｐｅ　Ｏ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ　ｃａｔｔｌｅ

Ｏ型抗体效价（ｌｇ）Ｏ　ａｎｔｉｂｏｄｙ

ｔｉｔｅｒｓ牛头数

Ｂｏｖｉｎｅ

ｃｏｕｎｔｓ

攻毒保护头数

Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ

ｐｏｓｔ－

ｃｈａｌｌｅｎｇｅ

保护率

Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ

ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ

概率单位

Ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ

ｕｎｉｔ

≤１．２（１∶１６）３　１　３３／１００　４．５６１．３５（１∶２２）４　２　５０／１００　５．００１．５０（１∶３２）４　２　５０／１００　５．００１．６５（１∶４５）６　４　６７／１００　５．４４１．８０（１∶６４）６　３　５０／１００　５．００１．９５（１∶９０）１１　８　７３／１００　５．６１

≥２．１０（１∶１２８）４１　３８　９３／１００　６．４８

２．７．２　猪口蹄疫Ｏ型灭活疫苗（ＯＺＫ／９３株＋ＯＳ／９９株）概率单位与抗体效价的对数值的回归分析　将得到的概率单位数据与口蹄疫

Ｏ型抗体效价的对数值进行统计学分析，Ｏ型回归方程为ｙ＝－０．７９３ｘ＋６．５９０（ｒ＝０．７２８，Ｐ＞０．０５），结果见图３。从图３可以看出，抗体效价的对数值与保护率（概率单位）两者之间的关系不呈正相关线性回归，进一步可以说明，抗体效价与攻毒保护百分率（概率单位）之间不存在正相关性。这说明在对猪口蹄疫Ｏ型灭活疫苗（ＯＺＫ／９３株＋ＯＳ／９９株）效果评价中，应用抗体效价来评价疫苗效果不具备可行性。

表９　亚洲１型抗体效价与牛免疫保护率的相关性

Ｔａｂｌｅ　９　Ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ　ａｎｄａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｉｔｅｒｓ　ｏｆ　ｔｙｐｅ　Ａｓｉａ　１ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ　ｃａｔ－

ｔｌｅ

Ａｓｉａ　１型

抗体效价（ｌｇ）

Ａｓｉａ　１ａｎｔｉｂｏｄｙ

ｔｉｔｅｒｓ

牛头数

Ｂｏｖｉｎｅ

ｃｏｕｎｔｓ

攻毒保护头数

Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ

ｐｏｓｔ－

ｃｈａｌｌｅｎｇｅ

保护率

Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ

ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ

概率单位

Ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ

ｕｎｉｔｓ

≤１．２（１∶１６）４　１　２５／１００　４．３３１．３５（１∶２２）３　１　３３／１００　４．５６１．５０（１∶３２）４　２　５０／１００　５．００１．６５（１∶４５）７　４　５７／１００　５．１８１．８０（１∶６４）８　６　６７／１００　５．４４１．９５（１∶９０）１０　８　８０／１００　５．８４

≥２．１０（１∶１２８）３９　３８　９７／１００　６．８８

表１０　Ｏ型抗体效价与猪免疫保护率的相关性

Ｔａｂｌｅ　１０　Ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ　ａｎｄ　ａｎｔｉ－ｂｏｄｙ　ｔｉｔｅｒｓ　ｏｆ　ｔｙｐｅ　Ｏ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ　ｐｉｇｓ

Ｏ型抗体效价（ｌｇ）

Ｏ　ａｎｔｉｂｏｄｙ

ｔｉｔｅｒｓ

猪头数

Ｐｉｇ

ｃｏｕｎｔｓ

攻毒保护头数

Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ

ｐｏｓｔ－

ｃｈａｌｌｅｎｇｅ

保护率

Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ

ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ

概率单位

Ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ

ｕｎｉｔｓ

≤１．２（１∶１６）９７　７０　７２／１００　５．５８１．３５（１∶２２）２６　１７　６５／１００　５．３９１．５０（１∶３２）８　６　７５／１００　５．６７１．６５（１∶４５）１１　７　６４／１００　５．３６

≥１．８０（１∶６４）８　４　５０／１００　５．００

图１　Ｏ型抗体效价的对数值与保护率（概率单位）之间的线性回归关系

Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　Ｏ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｎｄ　ｐｒｏ－ｔｅｃｔｉｏｎ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ（ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ　ｕｎｉｔｓ）

８

９

３中国兽医科学第４２卷

图２　亚洲１型抗体效价的对数值与保护率（概率单位）之间的线性回归关系

Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　Ａｓｉａ　１ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｎｄｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ（ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ　ｕｎｉｔｓ

）

图３　Ｏ型抗体效价的对数值与保护率（概率单位）之间的线性回归关系

Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　Ｏ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｎｄ　ｐｒｏ－ｔｅｃｔｉｏｎ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ（ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ　ｕｎｉｔｓ）

３　讨论

通过对口蹄疫Ｏ型－亚洲１型二价灭活疫苗免疫抗体效价、保护率、概率单位进行的分析可以看出，Ｏ型抗体效价在１．３５（１∶２２）～１．８０（１∶６４）时有５０％免疫牛得到了保护，１．９５（１∶９０）时有７０％免疫牛得到了保护，≥２．１０（１∶１２８）时有９３％免疫牛得到了保护。亚洲１型抗体效价在１．５０（１∶３２）～１．８０（１∶６４）时有５０％免疫牛得到了保护，１．９５（１∶９０）时有８０％免疫牛得到了保护，≥２．１０（１∶１２８）时有９７％免疫牛得到了保护。以上结果与ＥＬＩＳＡ试剂盒中介绍的“当抗体效价在１∶２２～１∶９０时，可获得５０％的保护；当抗体效价≥１∶１２８时，可获得９９％保护”的结果一致。

Ｏ≤１．２０（１∶１６）３３％的免疫牛得到保护，亚洲１型抗体效价在≤１．２０（１∶１６）时有２５％的免疫牛得到保护，该结果与ＥＬＩＳＡ试剂盒中介绍的“当抗体效价≤１∶１６时，不保护”的结果相差较大。造成这一结果的原因可能为：一、由于动物品种、地域、个体健康情况存在差异，对攻毒毒株的敏感性存在一定的差异，而笔者在进行统计分析时，前提条件是动物个体之间没有个体差异的存在。二、在试验中，对于有的牛抗体水平较低，但攻毒后仍有较好的保护，不引起发病，可能与其存在较高的细胞免疫有关［３］。三、口蹄疫病毒１４６Ｓ抗原包括很多抗体位点，在进行ＥＬＩＳＡ检测时，只能够检测抗原中的部分位点，ＥＬＩＳＡ读数实际上是这些位点分别和ＥＬＩＳＡ试剂反应的总体结果［４］，这种结果是否存在一定的误差有待进一步的研究。四、中和抗体的数量（或效价）只是反映动物保护力的一项指标，抗体的亲和力和中和抗体对吞噬细胞的调理作用也是影响保护力的重要因素［５］。五、有限的样本数在一定程度上也影响了统计结果的精确性。 通过对猪口蹄疫Ｏ型灭活疫苗免疫抗体效价、保护率、概率单位进行分析可以看出，Ｏ型抗体效价在１．２０（１∶１６）～１．８０（１∶６４）时５０％以上免疫猪均得到了保护，结果并没有随着抗体效价的升高而出现保护率的升高，与免疫牛得到保护的结果形成鲜明的反差。

口蹄疫病毒是极易变异的病毒，由于几个碱基或者是氨基酸的变化，就会导致毒力、宿主范围、适应性的变化。本研究中，在对免疫牛和免疫猪进行攻毒时，由于使用的攻毒毒株、攻毒方法及动物对毒株的敏感性不同，可能导致免疫牛和猪出现不同的保护结果。高效价病毒特异性抗体与抗感染攻击的保护作用相关，但这种相关关系也不是绝对的，因为特异性抗体效价相同的动物对口蹄疫病毒感染的抵抗力也可能各不相同［６］。

抗口蹄疫保护常常与高水平的血清中和抗体相关［７－１０］，但是特异性抗体应答本身并不保证临床保护［７，１０］，病毒感染性的中和只能提供体内保护，而且只是一种针对特定构想表位的抗体［８］。实际上，抗体效价的血清学检测存在着灰色地带，当抗体效价位于这一区域时，介于这种灰色地带的动物就是无法肯定地区分它们是已经具有抗口蹄疫病毒攻毒感染的保护性免疫力，还是对口蹄疫病毒仍然是易感的［７］，原因主要是研究者在体外试验用检测的免疫抗体效价表示动物体内攻毒的保护能力，只是检测与病毒作用的抗体，而保护性免疫应答的前提是必须毁灭病毒的感染性，保护作用必须由免疫系

９

９

３

第４期 施程洪等：ＥＬＩＳＡ抗体水平评价口蹄疫灭活疫苗免疫效果的可行性分析

统的网状内皮区室的组织吞噬病毒／抗体复合物，并导致病毒感染性的毁灭［１１－１２］。

在本研究中，尽管存在一些数据的特例，但统计学分析结果表明，在口蹄疫Ｏ型－亚洲１型二价灭活疫苗（ＯＳ／９９株＋ＪＳＬ／０６株）效果评价中，抗体效价的对数值与保护率（概率单位）之间的关系呈线性回归，存在显著的正相关性，应用抗体效价评价疫苗效果是完全可行的；在猪口蹄疫Ｏ型灭活疫苗（ＯＺＫ／９３株＋ＯＳ／９９株）效果评价中，抗体效价的对数值与保护率（概率单位）之间不存在正相关性，应用抗体效价方法评价疫苗效果不具备可行性。

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［９］　ＰＡＹ　Ｔ　Ｗ，ＨＩＮＧＬＥＹ　Ｐ　Ｊ．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　１４０Ｓａｎｔｉｇｅｎ　ｄｏｓｅｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｉｎ　ｃａｔｔｌｅ　ｂｙ　ｆｏｏｔ－ａｎｄ－ｍｏｕｔｈ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｖａｃｃｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｖａｃｃｉｎｅ，１９８７，５（１）：６０－６４．

［１０］　ＶＡＮ　ＭＡＡＮＥＮ　Ｃ，ＴＥＲＰＳＴＲＡ　Ｃ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ａ　ｌｉｑｕｉｄ－ｐｈａｓｅ　ｂｌｏｃｋｉｎｇ　ｓａｎｄｗｉｃｈ　ＥＬＩＳＡ　ａｎｄ　ａ　ｓｅｒｕｍ　ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ

ｔｅｓｔ　ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ　ｉｎ　ｐｏｔｅｎｃｙ　ｔｅｓｔｓ　ｏｆ　ｆｏｏｔ－ａｎｄ－ｍｏｕｔｈ

ｄｉｓｅａｓｅ　ｖａｃｃｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９８９，１２４（１）：１１１－

１１９．

［１１］　ＭＣＣＵＬＬＯＵＧＨ　Ｋ　Ｃ，ＣＲＯＷＴＨＥＲ　Ｊ　Ｒ，ＢＵＴＣＨＥＲ　Ｒ　Ｎ，ｅｔａｌ．Ｉｍｍｕｎｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ａｇａｉｎｓｔ　ｆｏｏｔ－ａｎｄ－ｍｏｕｔｈ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｖｉｒｕｓｓｔｕｄｉｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｖｉｒｕｓ　ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ　ａｎｄ　ｎｏｎ－ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ　ｃｏｎｃｅｎ－

ｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９８６，５８

（３）：４２１－４２８．

［１２］　ＭＣＣＵＬＬＯＵＧＨ　Ｋ　Ｃ，ＰＡＲＫＩＮＳＯＮ　Ｄ，ＣＲＯＷＴＨＥＲ　Ｊ　Ｒ．Ｏｐｓｏｎｉｚａｔｉｏｎ－ｅｎｈａｎｃｅｄ　ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ｆｏｏｔ－ａｎｄ－ｍｏｕｔｈ　ｄｉｓ－

ｅａｓｅ　ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９８８，６５（２）：１８７－１９１．

（责任编辑　张文举）　

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４中国兽医科学第４２卷