AFLP分子标记与作物改良

第24卷第1期河北农业大学学报V ol.24N o.1 2001年1月Journal of Agricultural University of Hebei　Jan.2001　文章编号:1000-1573(2001)01-0089-06

AF LP分子标记与作物改良

李爱丽,　马峙英

(河北农业大学农学院,河北保定071001)

摘要:建立于DNA基础之上的分子标记对于作物改良具有重要作用。AF LP(Am plified fragment length polym orphism,简称AF LP)国内译为扩增片段长度多态性,是一种DNA分子标记技术。利用这一方法,在不需要预先知道DNA序列信息的情况下就可以同时进行多数DNA酶切片断的PCR扩增。目前,该技术不仅在小麦、玉米、棉花和大豆等主要农作物上得以应用,而且在蔬菜(番茄、马铃薯、鹰嘴豆等)以及植物基因组研究的模式植物拟南芥上广泛应用。讨论了AF LP在主要作物的品种鉴定、遗传多样性分析、遗传作图、基因定位以及辅助选择等方面的应用进展。

关　键　词:AF LP;分子标记;作物改良

中图分类号:S512.1 文献标识码:A

AFLP molecular m arker and crop improvement

LI Ai2li,MA Zhi2ying

(C ollege of Agronomy,Agricultural University of Hebei,Baoding071001,China)

Abstract:M olecular markers based on DNA play a very im portant role in crop im provement.Am plified frag2 ment length polym orphism(AF LP)technology is a novel and powerful DNA fingerprinting technique.It is based on the selective am plification of restriction fragments from a total digest of genomic DNA.The AF LP ap2 proach is particularly powerful because it requires no prior sequence characterization of the target genome,and it is readily applicable to a wide variety of crops.This paper mainly discussed the application of AF LP in main crops to cultivars identification,genetic map construction,gene location,and assisted selection.

K ey w ords:AF LP;m olecular marker;crop im provement

植物育种的基础是遗传变异。传统的育种方式主要集中在从分离群体后代当中进行优化选择,而这种选择主要是建立在表现型基础之上的。尽管应用统计和遗传的方法来减少环境效应对于性状的干扰,但是环境对于性状的影响是十分复杂而难于避免的。随着分子生物学的迅猛发展和分子标记的日臻完善,建立在DNA基础之上,不受环境影响的分子标记技术,已逐渐应用于植物育种中。RF LP、RAPD、AF LP、SSR等已经广泛应用于DNA指纹分析、种质资源遗传多样性分析、基因定位、遗传作图、分子标记选择育种等。主要阐述AF LP在作物改良中的应用进展。

1　AF LP技术的发展及其基本原理

AF LP是1993年由荷兰科学家Z A BE AU和VOS发展起来的一种检测DNA多态性的新方法。这种方法虽已申请了欧洲专利(Z A BE AU M,1993)[1],但很快被人们知道并迅速传播开来,因此Z A BE AU和VOS不得不正式以论文形式发表出来(VOS P,1995)[2]。此后每年都有大量AF LP的文章发表。AF LP的原理是基于对植物基因组总DNA双酶切经PCR扩增后的限制片段进行选择[3]。具体是植物基因组DNA经限制性内切酶双酶切后,形成

收稿日期:2000-03-28

基金项目:河北农业大学重点科研基金项目

作者简介:李爱丽(1970-),女,河北省保定市人,在读博士研究生,从事作物抗病育种研究工作1

分子量大小不等的随机限制性片段,将特定双链接头(adapter )连接在这些DNA 片段的两端,形成一个带接头的特异片段,作为DNA 扩增的模板。接头序列以及与其相连的限制位点作为随后进行的限制片段扩增的引物结合位点。PCR 引物3′末端含有选择核苷酸,选择核苷酸延伸到酶切片段区,这样就只有那些两端序列能与选择核苷酸配对的限制性酶切片段被扩增。扩增片段通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离检测。

2　AF LP 技术的关键

AF LP 流程包括模板制备、片段扩增和凝胶分析这3个主要步骤。其中模板DNA 制备、引物选择以及引物标记是AF LP 技术的关键所在。

2.1　模板DNA 制备

在进行AF LP 分析时,首先要制备高分子量(H MW )基因组DNA 。H MW 基因组DNA 的成功制备和避免部分降解是AF LP 成功的关键。在制备过程中要特别注意避免核酸酶及各种失活物质的污染。其次,在用限制性内切酶酶解时,一定要彻底[3]。

2.2　引物选择

在AF LP 引物中,3′末端上选择核苷酸数目的多少决定了AF LP 扩增产物的多少[4]。实验中可根据基因组DNA 的大小确定引物末端所需的选择性核苷酸数目。一般大于108bp 的基因组DNA 可以用两个末端各有3个选择性核苷酸的引物进行扩增,即文献中常看到的3+3引物组合;105～108bp 的基因组DNA 可以用两个分别含有2个或3个选择性核苷酸的引物进行扩增(即2+3引物)。另外,引物中用作选择性核苷酸的G 和C 含量也对扩增出的产物数目有较大影响。一般而言,G 和C 含量越高,扩增出的产物数目越少。

2.3　引物标记

为检测AF LP 扩增产物,通常对选择性扩增产物之一进行放射性标记。一般是用γ-32P 或γ-33P ATP 在T 4多核苷酸激酶的作用下对引物进行末端磷酸化标记。在实际应用中,33P 比32P 更受青睐,因为33P 标记后形成的放射性自显影条带不易扩散,更为清晰易于分辨,而且33P 的放射性半衰期长,是32P 的2倍,用起来也更为经济。

有些研究者采用在选择性扩增时直接掺入放射性标记dNTP 的办法;也有研究者不用放射性标记而用银染的办法。一般同位素标记法优于硝酸银染色法,在同位素标记中,33P 标记优于32P 标记[5]。

关于AF LP 扩增产物的检测最近有研究者报道了荧光检测法[6]。一方面,该方法加快了检测程序的进行,对于操作人员来说,避免了放射性污染;另一方面,通过该方法获得的DNA 指纹与相应的放射自显影相比,减少了一些没有意义的条带,加强了该技术的高效性和可重复性。

3　AF LP 与其它分子标记的比较

表1　常用的分子标记特性比较T able 1　Comp arison of several often used molecular m arker ch aracters 特性Characters RF LP RAPD AF LP SSR 分布普遍

普遍普遍普遍可靠性高

中等高高重复性高

中等高高遗传性共显性

显性显性或共显性共显性多态性中等

高非常高高DNA 需求2～30ng

1～100ng 100ng 50～100ng 放射性一般有

无有或无无技术难度中等

简单中等简单样品生产率中低

高非常高高时间因素长

快中等快探针类型低拷贝DNA 或

cDNA 克隆

随机序列特异DNA 序列特异DNA 重复序列探测部分低拷贝编码区域

整个基因组整个基因组整个基因组检测位点

1-31-1020-1001-5 在植物育种中,每一种分子标记

都具有其优点和缺点(如表1)。与其

它分子标记相比,AF LP 的特点主要表

现在:它结合了RF LP 及RAPD 各自的优点,方便快速。只需要极少量DNA 材料,不需要S outhern 杂交,不需要预先知道DNA 的顺序信息,试验结果稳定可靠,可以快速获得大量的信息。而且再现性高,重复性好,因而非常适合于品种指纹图谱的绘制,遗传连锁图的构建及遗传多样性的研究。在一些多态性很少,而且待测样品较少的情况下(如近等基因系和BS A 分析),

用AF LP 分析能达到满意的结果。高密度基因图谱的绘制或对某个基因所在区域的精细作图,AF LP 是较为

09河北农业大学学报第24卷

理想的方法。AF LP 技术目前不仅在小麦、水稻、玉米、大豆、棉花等主要作物上得以应用,而且在蔬菜(马铃薯、番茄、鹰嘴豆等)、林木(垂枝桦、辐射松)以及拟南芥上广泛应用(翁跃进,1996)[7]。以上多数作物的研究结果均表明AF LP 所产生的多态性远远超过了RF LP 、RAPD 等,目前被认为是DNA 指纹图谱技术中多态性最为丰富的一项技术。

但是,AF LP 技术流程长、难度较大,对操作人员的技术水平要求高,在一般实验室开展此项技术尚存在一定困难。

4　AF LP 标记在作物改良中的应用

随着AF LP 技术的日臻完善,它已广泛应用于作物遗传育种的各个方面,如种质资源分类、系统发育、品种鉴别、遗传图谱构建及目的基因定位等各项研究。

4.1　鉴定品种绘制指纹图谱

传统上,表型和农艺性状构成了品种描述的基础。然而大多数表型性状容易受环境条件的影响,因而地区间、年度间表现一定程度的变化,从而影响了品种遗传性描述和品种间遗传变异性评价的准确性。对品种的遗传本质(包括典型性、稳定性和特异性)的客观描述是品种鉴定和品种保护(Plant variety protection ,PVP )的前提。从遗传本质上对作物现有优良品种进行客观描述,无论对育种过程本身还是对品种的推广应用都有十分重要的指导意义。AF LP 最适的应用范围,也是Z ABE AU Marc 和VOS Pieter 申请专利的关键,即利用AF LP 技术鉴定品种的指纹(Fingerprint ),检测品种的质量和纯度,辨别真伪,十分灵敏。著名的美国先锋种子公司首先引用了AF LP 技术用于玉米自交系和杂交中的鉴定工作,建立品种档案,保护品种专利。法国FAYE [8]用1个AF LP 引物在玉米2个基因型中发现30条以上的多态性带纹,十分适合于玉米基因型的鉴定。中国科学院遗传研究所陈洪、朱立湟等[9](1995)应用单酶切的AF LP 标记构建了8种致病性念珠菌DNA 的指纹图谱,证明了AF LP 在构建指纹图谱中的优越性。

4.2　遗传多样性的研究

表2　AF LP 标记在作物系统发育分析、品种鉴定和种质资源筛选上的应用T able 2　Application of AF LP on the analysis of crop system development ,

the identification of cultivars and the screen of germplasm resource 作物Crop 性状T rait 参考文献Reference 玉米自交系遗传多样性PE J IC ,1998[12]遗传多样性及其与杂种表现的关系M ARS AN ,1998[13]小麦AF LP 以及系谱两种遗传多样性分析方法的比较BARRET ,1998[14]遗传多样性分析BARRET ,1998[10]遗传相似性及对后代变异的预测BOH N ,1999[15]预测后代遗传变异性BURK H AMER ,1998[16]水稻生物多样性研究ZH U ,1998[17]遗传多样性分析FUE NTES ,1999[18]DNA 指纹SI NG H ,1999[19]种质分类S UBUDHI ,1997[20]大麦遗传相似性SCH UT ,1997[21]利用不同分子标记进行遗传多样性的比较RUSSE LL ,1997[22]大豆野生豆核心种质基因池分析T OH ME ,1996[23]木薯

AF LP 指纹用于遗传关系研究HI LL ,1996[24] 遗传变异是植物品种

改良的基础。对当前优良品种(系)的遗传多样性进

行准确的评价可以为亲本

选配、后代遗传变异程度及

杂种优势水平的预测提供

预见性的指导,这是关系到

育种目标能否成功实现的

关键。目前AF LP 技术已

广泛应用于作物优良栽培

品种资源遗传多样性的研

究(表2)。BARRETT B A

等[10](1998)利用AF LP 技

术评价适应于西北太平洋

旱地生产的春、冬小麦代表

品种的遗传多样性,结果表

明AF LP 对于小麦遗传多样性的研究来说是一种非常有效的技术。美国康耐尔大学的BLAIR [11]利用AF LP 技术评价54份水稻品种的遗传多样性,研究其系统发育和分类,并与同工酶生化标记及RF LP 标记比较,发现不仅其结论一致,而且认为AF LP 对于研究水稻品种的遗传变异和构建基因组图谱更为理想。

4.3　构建遗传连锁图

遗传图谱应用于基因组结构、功能、进化,质量性状和孟德尔方式遗传的数量性状基因的鉴定等方面的

19第1期李爱丽等:AF LP 分子标记与作物改良

研究。在遗传图谱构建方面,AF LP 在尚未建图或业已建图的植物上都有广阔的应用前景。由于AF LP 能够揭示大量的多态性位点,可以弥补传统的RF LP 标记多态性低的缺点,这对于构建高密度的遗传连锁图非常有用,特别是对诸如大豆、小麦、大麦、西瓜等由于多态性低而建图效率不高的物种。目前许多植物已开始了AF LP 建图工作,有的利用AF LP 标记填充原有遗传图的间隙(G ap ),使得遗传图的精度大大提高。W ANG Y H 等[25](1997)利用AF LP 技术构建了甜瓜(Cucumis melo L.)的遗传连锁图。并发现AF LP 标记在甜瓜图谱构建中比RAPD 及SSR 标记更有效。法国FAYE [8]一人利用3个玉米分离群体仅花费3个月的时间专门构建了玉米的AF LP 遗传图谱,共1032个AF LP 标记。德国BECKER J 等[26]则利用春大麦品种Procter ×Nudinka 杂种F 1创建的双单倍体(D oubles haploid )群体(113株)确定了116个AF LP 标记,补充到RF LP 遗传图谱上,不仅填补了大麦RF LP 遗传图谱上2H 及4H 染色体臂上的空隔区(G aps ),而且增加了大麦遗传图谱的长度。QI [27]等构建了小麦高密度的AF LP 标记遗传连锁图谱。HERMAN [8]利用马铃薯构建遗传图谱群体研究AF LP 标记,与217个已知的马铃薯形态的、同工酶的和RF LP 的标记相结合,构建多种标记综合的遗传图谱。表3总结了AF LP 在作物遗传作图中的应用。表3　AF LP 标记在作物遗传作图上的应用T able 3　Application of AF LP m arker on crop genetic m ap construction 作物Crop 性状T rait 参考文献Reference 玉米AF LP 遗传图谱FAYE [8]小麦高密度AF LP 遗传连锁图QI ,1997[27]水稻多态性水平和遗传图谱构建M ACHI LL ,1996[28]大麦AF LP 和RF LP 联合作图BECKER ,1995[26]三个作图群体的同源性W AUG H ,1997[29]大豆高密度遗传连锁图KEI M ,1997[30]马铃薯AF LP 和形态、同工酶、RF LP 标记共同构建遗传HERM AN ,1996[8]图谱共迁移的AF LP 标记的等位特异性用于图谱构建

ROUPPE ,1997[31]甜瓜

遗传图谱构建W ANG,1997[25]

4.4　目的基因定位

寻找与目标基因紧密连

锁的分子标记离不开强有力

的分子标记技术和特殊的遗

传材料及分析手段。目标基

因的近等位基因系分析

(Y OUNG,1988;MARTI N G

B ,1991)以及目标基因F 2代

分离群体的BS A (bulked seg 2

regant analysis )分析

(MICHE LMORE R W ,1991)是寻找与目标基因紧密连锁的分子标记的理想手段。

近等基因系(Near 2is ogenic Line )是由目标性状有差异的两个亲本杂交后,F 1代与轮回亲本多次回交后再自交获得的。近等基因系的遗传背景只有目的基因及附近区域与轮回亲本不同,故只要找到与轮回亲本之间的DNA 多态性差异,就可初步获得与目的基因连锁的分子标记。再通过进一步分析验证,即可获得目的基因标记,从而进行基因定位。利用近等基因系进行基因定位方法虽然简便,但要获得一个近等基因系需要多个世代的回交和自交,花费时间长,不利于基因的快速定位[32]。

MICHE LMORE 等提出的BS A 法为目的基因的标记和定位提供了更为简便有效的方法。选择表型性状具有差异的一对亲本进行杂交,F 1自交获得性状分离的F 2群体,根据表型性状将F 2群体分成两个小群,从每一个小群中随机取一定数量的个体,提取DNA 后等量混合,形成两个按表型性状区分的DNA 池(P ool ),两池内除目的基因所在的DNA 片段有差异外其余基本相同。因此分析两个池内DNA 的多态性差异即可迅速获得与目的基因连锁的分子标记。

AF LP 技术能够在同一个PCR 反应中检测大量的遗传位点,可以检测出DNA 样品间的细微差别,因此特别适合于与近等基因系或BS A 分析相结合寻找与目标基因紧密连锁的分子标记,并构建目标基因所在区域的精细遗传图和物理图。

目前许多学者正致力于应用AF LP 技术进行基因标记及定位(表4)。DWIEK AT 等[33](1997)以小麦近等基因系为材料定位了小麦抗麦蝇基因H6和H16,并且分别找到了与H5、H6、H10、H16紧密连锁的AF LP 标记。德国Max 2Planck 研究所MEK SE M K [34]报道了他们发现的3200个AF LP 位点与马铃薯V 染色体上抗Phytophthora infestans 基因R1具有连锁关系,其中8个位于R1基因的RF LP 标记G P21和G P147之间,最近遗传距离为0.8cM 。英国TH OMAS C M [35]利用番茄与野生种Lycoper sicon pennellii 种间杂交F 2群体发现42000条AF LP 带纹与番茄抗叶霉菌基因C f -9紧密连锁,其中3个标记与C f -9基因表现共分离。

29河北农业大学学报第24卷

表4　作物抗病虫性状AF LP 标记T able 4　AF LP m arker of disease or pest resistance trait of crop 作物Crop 性状T rait 分析方法Analysis method 参考文献Reference 小麦小麦抗麦蝇基因H6和H16NI Ls DWEIK AT ,1997[33]大豆一个病毒抗性基因NI Ls M AUG H AN ,1996[36]马铃薯抗Phytophthora infestans 基因R1BS A MEK SE M ,1995[34]线虫抗性基因G roI BA LLVORA ,1995[37]胞囊线虫抗性基因G pa2ROUPPE ,1997[38]番茄抗叶霉菌基因C f -9BS A TH OM AS ,1995[35]

4.5　数量性状位点的识别作物的很多重要农艺性

状,如产量性状、品质性状、对病虫害的抗性水平和对不

良环境因子的耐性,一般是

多个基因所控制的数量性

状。经典的遗传分析方法只

能把控制数量性状的多个基

因作为一个整体进行研究,难以有效地研究控制性状表达的基因数目、基因在染色体上的位置以及基因的效应及其作用方式。虽然利用遗传标记研究数量性状的遗传控制可以追溯到本世纪20年代,但由于形态标记和生化标记的数量有限,一直无法对整个植物基因组进行详细的分析。直到80年代起,随着RF LP 标记在作物遗传研究中的广泛应用,构建了各种重要作物的饱和连锁图谱,从而促使对数量性状基因的研究取得了突破性进展。分子标记正在被用于数量性状位点(QT Ls )分析。在玉米中,分子标记已经用来绘制和构建数量性状图谱。美国生物技术公司的LI N [39]利用AF LP 技术研究大豆的数量性状,发现每个反应均表现大量的多态性,每个引物具有高频率(>90%)的多态性,可以作为大豆数量性状的标记。虽然目前利用AF LP 标记分析作物的QT Ls 报道非常有限,但随着AF LP 技术的逐渐成熟,以及AF LP 技术在检测全基因组多态性方面所表现出的的优越性,在不久的将来,它势必将广泛用于作物QT Ls 分析。

4.6　分子标记辅助育种

分子标记辅助选择(M olecular marker 2assisted selection ,简称MAS )是现代分子生物学与传统遗传育种的结合点,借助分子标记可以对育种材料从DNA 水平上进行选择,从而达到作物产量、品质和抗性等综合性状的高效改良。理论上只要回交3代就可选到理想的材料。

美国VANT OA L [8]用AF LP 技术指导大豆回交育种,比较大豆双亲与回交1代C 0及回交2代C 1的异质程度,平均每个AF LP 引物均产生10个多态性标记,10对AF LP 引物可以检测出100多个位点的纯合或异质程度。1996年美国T exes 大学的RE DDY 等[40]报道利用AF LP 技术筛选与棉花长绒及高产性状有关的分子标记,他们将长绒的海岛棉3-79与高产的陆地棉T M -1进行远缘杂交,结果表明,所使用的64对引物中,每一对引物均检测到3～10个AF LP 标记,在杂交后代F 2群体中发现300个标记与亲本的长绒及高产性状有关。AF LP 标记还可以转换成SC AR (sequence characterized am plified region )标记,将更有利于分子标记在育种选择中的应用。由于小麦的RF LP 及RAPD 多态性较低,在应用中有很大的局限性。因此AF LP 技术在小麦的遗传研究和选择中将有很大的应用潜力[41]。

参考文献:

[1]　Z ABE AU M ,VOS P.Selective restriction fragment am plification ;a general method for DNA fingerprinting [P].European Patent Appli 2

cation 94202629.7(Publication N o.0534858A 1).Paris :European Patent O ffice ,1993.

[2]　VOS P ,H OGERS R ,BLEE DER M ,et al .AF LP :a new technique for DNA fingerprinting [J ].Nucleic Acids Research ,1995,23

(21):4407-4414.

[3]　尹佟明,黄敏仁.AF LP 分子标记及其在植物育种上的应用[J ].生物工程进展,1997,17:16-11.

[4]　翁曼丽,谢纬武,伏健民,等.新一代分子标记技术———AF LP[J ].应用与环境生物学报,1996,2(4):424-429.

[5]　李传友.AF LP 标记在杂交水稻研究中的应用[D].北京:中国科学院遗传研究所,1999.

[6]　H UY S G,SWI NGJ.Evaluation of a fluorescent am plified fragment length polym orphism (FAF LP )methodology for the genotypic dis 2

crimination of Aerom onas taxa[J ].Fems microbiology letters ,1999,177(1):83-92.

[7]　翁跃进.AF LP ———一种DNA 分子标记新技术[J ].遗传,1996,18(6):29-31.

[8]　International plant genome con ference ⅣJanuary[C].San dieg o ,US A.1996.

[9]　陈洪,朱立湟,李冬梅,等.致病性念珠菌DNA 的AF LP 指纹图谱[J ].科学通报,1996,41(10):935.

[10]　BARRETT B A ,KI DWE LL K K.AF LP 2based genetic diversity assessment am ong wheat cultivars from the Pacific N orthwest[J ].Crop

3

9第1期

李爱丽等:AF LP 分子标记与作物改良

Science,1998,38(5):1261-1271.

[11]　International plant genome con ferenceⅢJanuary[C].San Dieg o,US A.1995.

[12]　PE J IC I,A JM ONE2M ARS AN P,M ORG ANTE M,et al.C om parative analysis of genetic similarity am ong maize inbred lines detected

by RF LPs,RAPDs,SSRs,and AF LPs[J].Theoretical and Applied G enetics,1998,97(8):1248-1255.

[13]　M ARS AN P A,C ASTIG LI ONI P,FUS ARI F,et al.G enetic diversity and its relationship to hybrid per formance in maize as revealed

by RF LP and AF LP markers[J].Theoretical and Applied G enetics,1998,96(2):219-227.

[14]　BARRETT B A,KI DWE LL K K,FOX P N.C om paris on of AF LP and pedigree2based genetic diversity assessment methods using wheat

cultivars from the Pacific N orthwest[J].Crop Sci,1998,38:1271-1278.

[15]　BOH N M H F,ME LCHI NGER A E.G enetic similarities am ong winter wheat cultivars determined on the basis of RF LPs,AF LPs,and

SSRs and their use for predicting progeny variance[J].Crop Science,1999,39(1):228-237.

[16]　BURK H AMER R L,LANNI NG S P,M ARTE NS R J,et al.Prediction progeny variance from parental divergence in herd red spring

wheat[J].Crop Science,1998,38(1):243-248.

[17]　ZH U J,G A LE M D,QUARRIE S,et al.AF LP markers for the study of rice biodiversity[J].Theoretical and Applied G enetics,

1998,96(5):602-611.

[18]　FUE NTES J L,ESC OBAR F,A LVAREZ A,et al.Analysis of genetic diversity in Cuban rice varities using is ozyme,RAPD and

AF LP markers[J].Euphytica,1999,109(2):107-115.

[19]　SI NG H K N,NANDI R,SH ANM UG AS UNDRAM P,et al.High2res olution DNA fingerprinting of indian rice(Oryza sativa L)vari2

eties by am plified fragment length polym orphism[J].G enetic res ources and crop ev olution,1999,46(5):427-433.

[20]　S UBUDB P K,NANDI S,C AS A L C,et al.Classification of rice germ plasm:ⅢHigh2es olution fingerprinting of cytoplasmic male2

sterile(C MS)lines with AF LP[J].Theoretical and Applied G enetics,1998,96:941-949.

[21]　SCH UT J W,QI X,ST AM P.Ass ociation between relationship measures based on AF LP markers,Pedigree data and m orphological

traits in barley[J].Theor Appl G enet,1997,95(7):1161-1168.

[22]　RUSSE LL J R,FU LLER J D,M AC AU LAY,et al.Direct com paris on of levels of genetic variation am ong barley acessins detected by

RF LPs,AF LPs,SSRs and RAPDs[J].Theoretical and Applied G enetics,1997,95:914-922.

[23]　T OH ME J,G ONZ A LEZ D O,BEE BE S,et al.AF LP analysis of gene pools of a wild bean core collection[J].Crop Science,1996,

36:1375-1384.

[24]　HI LL M,WITSE NBOER H,Z ABE AU M,et al.PCR2based fingerprinting using AF LPs as a tool for studying genetic relationships in

Lactuca spp[J].Theortical and Applied G enetics,1996,93:1202-1210.

[25]　W ANG Y H,TH OM AS C E,DE AN R A.A G enetic Map of Melon(Cucumis melo L.)Based on Am plified Fragment Length P oly2

m orphsim(AF LP)markers[J].Theoretical and Applied G enetics,1997,95:5-6.

[26]　BECKER J,VOS P,K AIPER M,et al.C ombined mapping of AF LP and RF LP markers in barley[J].M olecular and G eneral G enet2

ics,1995,249(1):65-73.

[27]　QI X,LI NDH OUT P.Development of AF LP markers in barley[J].M olecular and G eneral G enetics,1997,254(3):330-336.

[28]　M ACHI LL D J,ZH ANG Z,RODONA E D.Level of polym orphism and genetic mapping of AF LP markers in rice[J].G enome,

1996,39:969-977.

[29]　W AUG H R,BONAR N,BAIRD E,et al.H om ology of AF LP products in three mapping populations of barley[J].M olecular and

G eneral G enetics,1997,255:311-323.

[30]　KEI M P,SCH UPP J M,TRAVIS S E,et al.A high2density s oybean genetic map based on AF LP marker[J].Crop Science,1997,

37(2):537-543.

[31]　ROUPPE VAN DER VOORT J N A M,Z ANDVOOT P,VAN ECK H J,et https://www.360docs.net/doc/f211870525.html,e of allele specificity of com ograting AF LP markers

to align genetic maps from different potato genotypes[J].M olecular and G eneral G enetics,1997,255:438-447.

[32]　王芙蓉,张军,李汝忠.分子标记及其在棉花遗传育种中的应用[J].棉花学报,1998,10(3):113-117.

[33]　DWEIK AT.Abstract of International T riticeae Mapping Initiative,1997,25-27.

[34]　MEK SE M K,LEISTER D,PE LE M AN J,et al.A high2res olution map of the vicinity of the R1locus on chrom os ome V of potato based

on RF LP and AF LP markers[J].M ol G en G enetics,1995,249:74-81.

[35]　TH OM AS C M,VOS P,Z ABI AU M,et al.Identification of am plified restriction fragment polyphism(AF LP)markers tightly linked to

the tomato C f29gene for resistance to Cladosporium fulvum[J].The Plant Journal,1995,8(5):785-794.

(下转第112页)

rived leaf rust resistance gene Lr24in wheat[J].Theor Appl G enet,1995,90:982-990.

[10]　FE UI LLER C,MESS MER M,SCH ACHERM AY R G,et al.G enetic and physical characterization of the Lr1leaf rust resistance locus

in wheat(Triticum aestivum L.)[J].M ol G en G enet,1995,248:553-562.

[11]　AUTRI QUE E,SI NG H R P,T ANK S LEY S D,et al.M olecular markers for four leaf rust resistance genes introgressed into wheat from

wild relatives[J].G enome,1995,38:75-83.

[12]　NAIK S.,GI LL K S,PRAK AS A RAO V S,et al.Identification of a STS marker linked to the Aegilops speltoides2derived leaf rust re2

sistance gene Lr28in wheat[J].Theor Appl G enet,1998,97:535-540.

[13]　SIE D LER H,SCH ACHERM AY R G,G A LE M D,et al.DNA marked2based analysis of near2is ogenic wheat lines with Lr9resistance

gene[A].LI Z S,XI N Z Y.Proc.8th Intern.Wheat G enetics Sym posium,V ol II[C].Beijing,China:China Agricultural Scitech Press,1993.813-815.

[14]　WI LLAM H M,H OISI NG T ON D,SI NG H R P,et al.Detection of quantitative trait loci ass ociated with leaf rust resistance in bread

wheat[J].G enome,1997,40:253-260.

[15]　SCH ACHERM AY R G,SIE D LER H,G A LE M D,et al.Identification and localization of m olecular markers linked to the Lr9leaf rust

resistance gene of wheat[J].Theor Appl G enet,1994,88:110-115.

[16]　DE DRY VER F.M olecular markers linked to the leaf rust resistance gene Lr24in different wheat cultivars[J].G enome,1996,39:830

-835.

(编辑:李　川)

(上接第94页)

[36]　M AUG H AN P J,S AG H AI M AROOF M A,BUSS G R,et al.Am plified fragment length polym orphism(AF LP)in s oybean:S pecies

diversity,inberitance and nearis ogenic line analysis[J].Theortical and Applied G enetics,1996,93:392-401.

[37]　BA LLVORA A,HESSE LBACH J,NIEW OH NER J,et al.Marker enrichment and high2res olution map of the segment of potato chro2

m os omeⅦharbouring the nematode resistance gene G roⅠ[J].M olecular and G eneral G enetics,1995,249:82-90.

[38]　ROUPPE,VAN DER VOORT J N A M,W O LTERS P,et al.Mapping of the cyst nematode resistance locus G pa2in potato using a

strategy based on comigration AF LP markers[J].Theortical and Applied G enetics,1997,95:874-880.

[39]　LI N J J,K UO J,M A J,et al.Internation of M olecular Markers in S oybean2C om paring RF LP,RAPD,and AF LP DNA Mapping

T echniquesv[J].Plant M olecular Biology Reporter,1996,14(2):156-169.

[40]　潘家驹.棉花育种学[M].北京中国农业出版社,1997.

[41]　马渐新,周荣华,董玉琛,等.小麦抗条锈病基因定位及分子标记研究进展[J].生物技术通报,1999(1):1-6.

(编辑:郭桂仙)