壬基酚对斑马鱼精巢组织及性激素合成酶基因表达的影响
文献综述-斑马鱼及其应用
斑马鱼及其研究应用 作者：杜颖指导老师：张源淑 摘要：斑马鱼作为一种新兴的重要模式动物之一，体外受精、胚胎透明，因此可在显微镜下直接观察发育过程及检测药物引起的内脏组织变化，在生命科学领域中应用前景十分广阔。斑马鱼体型小,适合高通量研究,还具有生长繁殖周期短及其与人类高度相似的基因组等优点，已经广泛用于人类疾病模型的建立、新药研发和药物的筛选，此外，斑马鱼还被应用于毒理学、发育生物学和遗传学等的研究。因为斑马鱼对污染物反应灵敏，现已用于监测环境污染物及污水检测。本文主要从几个方面对斑马鱼的研究进展进行了整理和归纳。 关键字：斑马鱼模式动物科学研究发育感染药物 Zebrafish and Its Application Abstract:Zebrafish as an important model animal emerging, its in vitro fertilization, transparent embryo, internal organs can be directly observed during the development and testing organ change caused by drugs under the microscope, has very broad application prospects in the field of life sciences. zebrafish also has a live, high-throughput, growth and short reproduction cycles and highly similar to the human genome, etc., it is widely used in modeling human diseases, drug screening, and secondly, zebrafish also is applied in toxicology research, developmental biology and genetics, etc.. Because of its sensitivity, it has been used to monitor environmental pollutants and water testing.This paper mainly from several aspects of zebrafish research progress has been collated and summarized Key words:zebrafish Animal models Scientific research Development Infection Drug 斑马鱼(Danio rerio)又名蓝条鱼、花条鱼、蓝斑马鱼、印度鱼、印度斑马鱼,产于孟加拉、印度东部、巴基斯坦、缅甸、尼泊尔等地,是一种常见的热带淡水硬骨鱼。属辐鳍鱼纲( Actinopterygii)鲤科( Cyprinidae)。斑马鱼身体细长,呈纺锤形，成鱼体长约4-6cm,因全身布满深蓝色条纹似斑马样而得名。斑马鱼雌雄鉴别容易,雄鱼体型细长，颜色偏黄，条纹较为显著，纵纹为柠檬色；雌鱼身体肥胖，颜色较淡，纵纹呈蓝色加银灰色，在性成熟后腹部肥大。雌鱼每次可产卵300多枚，鱼卵易收集，其胚胎透明,繁殖能力强且生长发育速度快，对饲养要求低，可高密度饲养，与其他实验动物相比有很大优势，是一种非常受欢迎的实验动物模型。近三十年来，已有约20个斑马鱼品系的基因数据库资料，全球已有超过1500个斑马鱼实验室，而我国也有超过250个实验室利用斑马鱼开展相关研究。英国桑格研究所（Wellcome Trust Sanger Institute）于2013年完成了斑马鱼的参考基因组，研究人员在此基础上比较了斑马鱼与人类基因组的异同，并进行了系统性的全基因组分析.在此综合近几十年的研究，在胚胎及遗传发育学、基因组学、药物筛选、疾病模型的建立等方向探讨斑马鱼的研究成果及进展。 1.胚胎及遗传生物学方向 斑马鱼的发育分为6个阶段：卵裂期，囊胚期，原肠胚期、分裂期、成形期
性激素六项检查的正常参考值精编版
性激素六项检查的正常参考值 建议将检测的时间与月经周期的联系说明。女性六项激素测定的正常值及意义：1）促卵泡生成激素（FSH）：是垂体前叶嗜碱性细胞分泌的一种糖蛋白激素，其主要功能是促进卵巢的卵泡发育和成熟。血FSH的浓度，在排卵前期为 1.5～10mIU/ml，排卵期为8～20mIU/ml，排卵后期为2～10mIU/ml。一般以5～40mIU/ml 作为正常值。FSH值低见于雌孕激素治疗期间、席汉氏综合征等。FSH高见于卵巢早衰、卵巢不敏感综合征、原发性闭经等。FSH高于40mIU/ml，则对克罗米芬之类的促排卵药无效。 2）促黄体生成素（LH）：也是垂体前叶嗜碱性细胞分泌的一种糖蛋白激素，主要是促使排卵，在FSH的协同作用下，形成黄体并分泌孕激素。血LH的浓度，在排卵前期为2～15mIU/ml，排卵期为30～100mIU/ml，排卵后期为4～10mIU/ml。一般在非排卵期的正常值是5～25mIU/ml。低于5mIU/ml提示促性腺激素功能不足，见于席汉氏综合征，高FSH如再加高LH，则卵巢功能衰竭已十分肯定，不必再作其他检查。LH/FSH≥3则是诊断多囊卵巢综合征的依据之一。 3）催乳素（PRL）：由垂体前叶嗜酸性细胞之一的泌乳滋养细胞分泌，是一种单纯的蛋白质激素，主要功能是促进乳腺的增生、乳汁的生成和排乳。在非哺乳期，血PRL正常值为0.08～0.92nmol/L。高于1.0nmol/L即为高催乳素血症，过多的催乳素可抑制FSH及LH的分泌，抑制卵巢功能，抑制排卵。 4）雌二醇（E2）：由卵巢的卵泡分泌，主要功能是促使子宫内膜转变为增殖期和促进女性第二性征的发育。血E2的浓度在排卵前期为48～521皮摩尔/升，排卵期为70～1835皮摩尔/升，排卵后期为272～793皮摩尔/升，低值见于卵巢功能低下、卵巢功能早衰、席汉氏综合征。 5）孕酮（P）：由卵巢的黄体分泌，主要功能是促使子宫内膜从增殖期转变为分泌期。血P浓度在排卵前为0～4.8nmol/L，排卵后期为7.6～97.6nmol/L，排卵后期血P低值，见于黄体功能不全、排卵型功能失调性子宫出血等。
壬基酚检测
壬基酚检测 壬基酚是一种重要的精细化工原料和中间体，外观在常温下为无色或淡黄色液体，略带苯酚气味，不溶于水，溶于丙酮。主要用于生产表面活性剂、也用于抗氧剂、纺织印染助剂、润滑油添加剂、农药乳化剂、树脂改性剂、树脂及橡胶稳定剂等领域。壬基酚属有机污染物，有“精子杀手”之称。 壬基酚主要用于生产非离子表面活性剂，润滑油添加剂，油溶性酚醛树脂及绝缘材料，纺织印染，造纸助剂，橡胶，塑胶的防老抗氧剂TNP，抗静电ABPS，油田及炼厂化学品，石油制品洁净分散剂和铜矿及稀有金属浮选择剂，也用于入抗氧剂，纺织印染助剂，润滑油添加剂，农药乳化剂，树脂改性剂，树脂及橡胶稳定剂等领域用于环氧乙烷缩合剂制非离子表面活性剂，用作洗涤剂，乳化剂，分散剂，湿润剂等，进一步加工成硫酸脂和磷酸脂，制成阴离子表面活性剂。也用于制作除垢剂，抗静电剂，发泡剂等。 壬基酚乙氧基化物是十分重要的非离子型表面活性剂，此种表面活性剂在自然环境中会发生去乙氧基反应生成壬基酚类物质。 NPE在纺织业中都被广泛应用于印染、清洗的工序。而在纺织业之外，NPE也可以用做表面活性剂、清洁剂。具有内分泌干扰效应，可促进乳腺癌细胞增殖，属于内分泌干扰物，致癌物。壬基酚的危害： 环境标准(Environmental Standard)美国国家环保局(EPA)推荐标准，在淡水中，壬基酚的含量不应高于6.6ug/L，在咸水中不应高于1.7ug/L。 同时，NPE一旦进入到环境中，就会迅速分解成毒性更强的环境激素——NP，也就是壬基酚。NPE是全世界公认的环境激素。研究表明，即便这种物质排放的浓度很低，也极具危害性。2011年4月至5月间，绿色和平在中国、英国、阿根廷等全球18个国家采购了15个服装品牌的78件样品，其中包括运动服装、休闲服装及鞋类。这些样品的产地涉及中国、孟加拉国、印度尼西亚、斯里兰卡、泰国等13个纺织品生产国。绿色和平将这些样品送至具有资质的第三方实验室进行检测，结果表明，包括阿迪达斯、李宁等在内的2/3的样品被检测出含有NPE[2]。NP具有持久性以及生物蓄积性[3]。也就是说，它一旦被排入的环境中，它会在环境中存在很长时间，而且它可以进入食物链，并且通过食物链逐级放大。同时，它还具有模拟雌激素的作科标中心以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。
斑马鱼动物模型的应用介绍
斑马鱼动物模型的应用 斑马鱼（Danio rerio）属于辐鳍亚纲（Actinopterygii）鲤科（Cyprinidae）短担尼鱼属（Danio）的一种硬骨鱼，原产于南亚，是一种常见的热带观赏鱼，因其体侧具有斑马一样暗蓝与银色相间的纹条而得名。 斑马鱼个体小，易于饲养，成体长4-5cm，雄鱼体修长，雌鱼体肥大。可在有限空间里养殖相当大的群体，可满足样本需求量大的研究。斑马鱼发育迅速，在28.5℃培养条件下受精后约40min完成第一次有丝分裂，之后大约每隔15min分裂一次，24h后主要器官原基形成，相当于28d的人类胚胎，幼鱼孵出后约3个月达到性成熟。雌雄鱼通过调控光周期控制14:10（光照:黑暗）产卵时间，成熟鱼每周可产卵一次，一尾雌鱼每次可产卵100-300枚。胚胎体外受精，体外发育，胚体透明，易于观察。受精卵直径约1mm，易于进行显微注射和细胞移植等操作。 一、斑马鱼的品系 经过30多年的研究应用和系统发展，已有约20个斑马鱼品系，斑马鱼基因数据库-ZFIN （http://zfin/org）里有相关的资料可供查询和下载。目前研究中常用的斑马鱼野生型品系主要为AB 品系、Tuebingen（Tu）品系、WIK 品系，斑马鱼基因组计划所用品系是Tu。AB 品系是实验室常用的斑马鱼品系，由单倍体细胞经早期加压法获得。Tu品系斑马鱼具有胚胎致死突变基因，用于基因组测序前敲除该致死突变基因。WIK品系较Tu品系具有更多的形态多样性。此外，还保存有3000多个突变品系和100多个转基因品系。这些品系资源对于利用斑马鱼开展各种科学研究起着很大的推动作用。 二、斑马鱼突变品系的筛选 斑马鱼突变的方法主要有三种：已基亚硝脲（ENU）化学诱导、γ或χ射线照射和插入诱变。ENU是一种DNA烃基化试剂，在生殖细胞减数分裂前诱导碱基对的替换，诱导产生的突变率为0.1%-0.2%，涉及单个基因的突变。射线照射导致染色体大片段的缺失或染色体重排，产生突变率达1%。插入诱变是以逆转录病毒为载体，用显微注射法将目的基因片段导入斑马鱼受精卵，整合到基因组中，干扰正常基因表达。射线照射产生的突变率是ENU 化学诱导的10倍，但由于突变涉及多个基因，突变的表型是受若干基因调控的结果，不利于基因功能的分析，因此，ENU化学诱导法是斑马鱼突变的主要方法。研究含有纯合致死
内分泌失调性激素六项
内分泌失调性激素六项 女人查性激素六项的临床意义有哪些？在这个内分泌失调的年代，估计很多人都需要知道 一、检查性激素常识 检查基础性激素前至少一个月不能用性激素类药物（包括黄体酮、雌激素类），否则结果不可靠（治疗后需要复查性激素除外）。 月经任何时间检查性激素都可以，每个时段的正常值不同。但是诊治不孕症一定要了解基础性激素水平，首先要选择月经第2～5天检查，称为基础性激素水平，第3天测定最好。确定是来月经第3天，检查性激素5项即可，可以不查孕酮，孕酮应该在黄体期检查（月经21天或排卵后7天）；但不能肯定阴道流血是否月经，应该检查6项，以防止误诊（根据P数据可以大概判断月经周期时段）。 月经稀发及闭经者，如尿妊娠试验阴性、阴道B超检查双侧卵巢无≥10mm卵泡，EM厚度﹤5mm，也可做为基础状态。 基础性激素化验单应该这样看：基础LH和FSH正常值为5～10IU/L，基础E2正常值为25～50pg/ml（这3项结果不能看化验单上的参考值，要按这个标准）；PRL、T可以对照该医院化验单参考值，P正常值见后。 二、性激素检查的临床意义 （一）FSH和LH：基础值为5～10IU/L 正常月经周期中，卵泡早期(月经2~3天)血FSH、LH均维持在低水平，排卵前迅速升高，LH高达基础值的3~8倍，可达160IU/L甚更高，而FSH只有基础值的2倍左右，很少﹥30IU/L，排卵后FSH、LH迅速回到卵泡期水平。监测卵泡早期的FSH、LH水平，可以初步判断性腺轴功能。FSH在判断卵巢潜能方面比LH更有价值。 1、卵巢功能衰竭：基础FSH﹥40IU/L、LH升高或﹥40IU/L，为高促性腺激素（Gn）闭经，即卵巢功能衰竭；如发生于40岁以前，称为卵巢早衰（POF）。 2、基础FSH和LH均﹤5IU/L为低Gn闭经，提示下丘脑或垂体功能减退，而二者的区别需借助促性腺激素释放激素（GnRH）试验。 3、卵巢储备功能不良（DOR）：基础FSH/LH﹥2～3.6提示DOR（FSH可以在正常范围），是卵巢功能不良的早期表现，往往提示患者对超排卵（COH）反应不佳，应及时调整COH方案和Gn的剂量以提高卵巢的反应性，获得理想的妊娠率。因为FSH/LH升高仅仅反映了DOR，而非受孕能力下降，一旦获得排卵时期，仍能获得理想的妊娠率。 4、基础FSH﹥12IU/L，下周期复查，连续﹥12IU/L提示DOR。 5、多囊卵巢综合征（PCOS）：基础LH/FSH﹥2～3，可作为诊断PCOS的主要指标(基础LH水平﹥10IU/L即为升高，或LH维持正常水平，而基础FSH相对低水平，就形成了LH与FSH比值升高)。 6、检查2次基础FSH＞20IU/L，可认为是卵巢早衰隐匿期，提示1年后可能闭经。 （二）P：基础值一般＜1ng/ml 正常情况下，卵泡期血P一直在较低水平，平均0.6~1.9nmol/L，一般＜10nmol/L(3.15ng/ml)；排卵前出现LH峰时，P分泌量开始增加，排卵后卵巢黄体产生大量P，血P浓度迅速上升；黄体成熟时(LH峰后的6~8天)，血P浓度达高峰，可达47.7~102.4nmol/L(15~32.2ng/ml)或更高，然后不断下降，月经前期达最低水平。整个黄体中外周血的P含量变化呈抛物线状。 1、判断排卵：黄体中期（月经周期28日的妇女为月经第21日）P＞16nmol/L (5ng/ml)提示排卵，﹤16nmol/L(5ng/ml)提示无排卵。 2、诊断黄体功能不全（LPD）：黄体中期P﹤32nmol/L(10ng/ml)、或排卵后第5、7、9天3次测P，总和﹤95.4nmol/L(30ng/ml)为LPD；或孕10周前P ﹤47.7nmol/L(15ng/ml)为诊断LPD的标准。 3、判断体外受精-胚胎移植（IVF-ET）预后：排卵前P水平可以估计IVF-ET预后。肌注HCG日P≥3.18nmol/L(1.0ng/ml)应视为升高，种植率及临床妊娠率均下降，P﹥4.77nmol/L(1.5ng/ml)提示过早黄素化。 在IVF-ET长方案促排卵中，肌注HCG日即使并无LH浓度的升高，若P(ng/ml)×1000/E2(pg/ml)＞1，提示卵泡过早黄素化，且该类患者临床妊娠率明显降低。过早黄素化也是DOR的表现。 4、鉴别异位妊娠：异位妊娠血P水平偏低，多数患者血P﹤47.7nmol/L (15ng/ml)。仅有1.5%的患者≥79.5nmol/L(25ng/ml)。正常宫内妊娠者的P90%﹥79.5nmol/L，10%﹤47.6nmol/L。血P水平在宫内与宫外孕的鉴别诊断中，可以作为参考依据。 （三）E2:基础值为25～45pg/ml 正常月经周期中，卵泡早期E2约为183.5pmol/L(50pg/ml)，排卵前达第一个高峰，可达917.5～1835pmol/L（250～500pg），排卵后迅速下降，黄体期形成第二个高峰，约458.8pmol/L（124.80pg），维持一段时间后，黄体萎缩时下降至早卵泡期水平,即来月经第3天应该为91.75～183.5pmol/ml（25～50pg/ml）。 1、基础E2＞165.2～293.6pmol/L(45～80pg/ml)，无论年龄与FSH如何，均提示生育力下降。
液相色谱-串联质谱法同时测定纺织品和食品包装材料中的壬基酚、辛基酚和双酚A
第３８卷 ２０１０年２月分析化学（ＦＥＮＸＩＨＵＡＸＵＥ）研究报告 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｍａｌｏｆ ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ 第２期 １９７～２０１ ＤＯＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１０９６．２０１０．００１９７ 液相色谱－串联质谱法同时测定 纺织品和食品包装材料中的壬基酚、辛基酚和双酚Ａ 马强１白桦“王超１张庆１周新１董辉２王宝麟１（中国检验检疫科学研究院，北京１００１２３）２（国家质量监督检验检疫总局检测监管司，北京１０００８８） 摘要建立了纺织品和食品包装材料中壬基酚、辛基酚和双酚Ａ的液相色谱．串联质谱分析方法。不同类型的纺织品和食品包装材料样品采用加速溶剂萃取法，以无水乙醇为提取剂，在１０．３ＭＰａ和１２０℃下静态循环提取２次，提取液经ＳｕｐｅｌｅｌｅａｎＥｎｖｉ—Ｃａｒｂ石墨化碳黑固相萃取柱净化，收集甲醇一二氯甲烷（１：４，ＷＶ）洗脱液，采用ＷａｔｅｒｓＸＢｒｉｄｇｅＣｉｓ色谱柱，以甲醇－０．１％氨水溶液为流动相，梯度洗脱分离后，在ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ多反应监测模式下进行定性与定量分析。壬基酚、辛基酚和双酚Ａ的方法检出限为０．５斗ｇ／ｋｇ，在０．５一ｌＯ肛ｇ／ｂ的３个添加水平范围内，纺织品样品的平均回收率为８６．９％一９２．５％，相对标准偏差均小于９．１％；食品包装材料样品的平均回收率为８７．８％一９３．０％，相对标准偏差均小于８．８％。本方法准确、快速、灵敏度高，可用于纺织品和食品包装材料的实际检验。 关键词加速溶剂萃取；固相萃取；液相色谱－串联质谱；纺织品；食品包装材料；壬基酚；辛基酚；双酚Ａ １引言 壬基酚、辛基酚和双酚Ａ作为典型酚类环境雌激素。壬基酚和辛基酚被广泛用作纺织整理剂、塑料增塑剂、工业和家用洗涤剂、农药和印染乳化剂等，大量用于合成非离子型表面活性剂烷基酚聚氧乙烯醚一Ｊ。双酚Ａ是生产聚碳酸酯塑料和环氧树脂的重要原料，涉及的产品包括食品包装材料、粘合剂等，也可用于生产增塑剂、阻燃剂、抗氧化剂等精细化工产品旧Ｊ。壬基酚和辛基酚作为内分泌干扰物质，通过食物链进入人体【３’４Ｊ，会在生物体内积累，对人体癌细胞生长及生殖能力均会造成严重影响∞１，被欧盟列为优先危害物质№Ｊ。奥斯陆一巴黎公约（ＯＳＰＡＲ）也已将壬基酚和辛基酚列入优先控制污染物质名录＂Ｊ。欧盟２００３／５３／ＥＣ指令规定纺织品等商品中壬基酚的含量不得高于０．１％ＩＳ］。国际环保纺织协会颁布的“Ｏｅｋｏ—ＴｅｘＳｔａｎｄａｒｄ１０００”中明确规定，禁止在纺织品生产过程中使用壬基酚一Ｊ。２００８年，加拿大卫生部宣布双酚Ａ为危害物质，禁止进口和销售含有双酚Ａ的聚碳酸酯婴儿奶瓶。挪威污染控制署颁布的“关于限制特定有害物质在消费品中的使用”（ＰｏＨＳ指令）也限制双酚Ａ在消费品中的使用。 目前，壬基酚、辛基酚和双酚Ａ的分析方法主要有高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）¨ｏ，…、超临界流体色谱法（ＳＦＣ）０１２］、胶束电动色谱法（ＭＥＣ）¨３。、毛细管电泳法（ＣＥ）０１４］、酶联免疫吸附分析法（ＥＬＩＳＡ）¨５｜、气相色谱一质谱法（ＧＣ／ＭＳ）¨６’Ⅲ及液相色谱一串联质谱法（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）¨８’１９１等，主要涉及生物¨０１、环境。１２，１３，１６，１８］、食品¨９｜、纸张［１７３等样品，而对于纺织品和食品包装材料样品测定的报道较少。本研究采用加速溶剂萃取、固相萃取、液相色谱．串联质谱等技术建立了同时测定纺织品和食品包装材料中壬基酚、辛基酚和双酚Ａ的分析方法，在１０ｒａｉｎ内完成了壬基酚、辛基酚和双酚Ａ的快速分离检测，为纺织品和食品包装材料样品的高通量快速检测提供了可靠的分析平台，并对不同类型的纺织品和食品包装材料样品进行了筛查。本方法准确、快速、灵敏度高。 ２实验部分 ２．１仪器与试剂 Ａｌｌｉａｎｃｅ２６９５高效液相色谱仪、ＱｕａｔｔｒｏｍｉｃｒｏＡＰＩ质谱仪（美国Ｗａｔｅｒｓ公司）；ＡＳＥ３００型加速溶剂 ２００９－０６—１５收稿；２００９－０８－２７接受 本文系国家质量监督检验检疫总局科技计划（Ｎｏ．２００７ＩＫ０９４）资助项目 ｝Ｅ—ｍａｉｌ：ｂａｉｈｌｌｌ＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ
怎么样看内分泌(性激素六项)化验单(1)
有很多妇产科医生和患者，在看到性激素六项化验单时，只要看到其值在正常范围内，就认为是正常的，这是完全错的。 我告诉你： 1，FSH卵泡刺激素值在月经的第三天一般是在5.8。 LH 促黄体生成激素值在4.8。这样才比较正常。 2，雌激素(E2)在月经第三天的值应在62~70才正常。 如E2＜50pg/ml，那就是子宫内膜雌激素准备不够，是雌激素偏低，会有明显的临床症状。 3，当雌激素偏低时，PRL催乳素会高，而且当你在化验时紧张，PRL也会升高。 这是生理性升高，如果不是垂体微腺瘤引起的是不用服嗅隐亭的。 4，一般在月经的第三天不需要化验孕激素(P)，可在月经的第22 天化验它，既省钱又有意义。 当女性垂体功能不全时，除了引起雌激素分泌减少外，还引起“隐性甲状腺功能减退”。 这种病在临床上如果没有经验就很容易被忽视。特别是雌低又伴“隐甲减”时易误诊。 隐性甲状腺功能减退可具有如下症状： 1，疲劳感，肌痉挛，关节痛，麻痹，体重增加，嗜睡，低体温，皮肤干燥，便秘，胃口差。 2，青春期发育迟缓(偏瘦小、或“豆芽菜型身材)，月经失调。
3，习惯性流产，不孕。 治疗需用甲状腺素。---------------- 有很多人问我：在妊娠期间不小心服了一些药物，去医院里医生说不能要，就做了流产，对吗？ 其实在卵子受精后的1周内用药，受精卵尚未种植在子宫内膜，一般不受药物影响； 如在受精后的1-2周内用药，受精卵虽已种植于子宫内膜，但组织尚未分化， 药物产生的影响除造成流产之外，并不引起致畸，属安全期。 故在孕前或孕早早期服用了一些药物对胎儿不会有太大的影响， 不必过分担心,也不必因此作人工流产。----------------------- 激素测定的常用检测方法与单位 目前临床上用于激素测定的常用检测方法有： （1）放射免疫分析法 (RIA)，灵敏度10-9 ~ 10-12 g (ng，pg，nmol/L, pmol/L)； （2）酶联免疫吸附分析法(ELISA) ，灵敏度 10-9~10-10 g (ng，pg，nmol/L, pmol/L)； （3）免疫放射分析法(IRMA) 抗体作标记，灵敏度高于10-9~10-12 g (ng，pg，nmol/L, pmol/L)； （4）时间分辨荧光免疫分析(DELFIA)，灵敏度达： 10-12~10-15 g （ng，fg，nmol/L, fmol/L）；
壬基酚聚醚禁用的欧盟具体法规
一壬基酚聚醚禁用的欧盟具体法规 欧盟法规1907/2006/EC化学物质之注册、评估、许可和限制(REACH)附录17(ANNEX XVII)之修订 本文內容主要是修订2008年12月18日欧洲国会及协会法规1907/2006/EC 化学物质之注册、评估、许可和限制(REACH)附录17的规定，设立欧洲化学总署以修改指令1999/45/EC，以及废除协会法规793/93/EEC、法规1488/94/EC、指令76/769/EEC、指令91/155/EEC、93/67/EC、93/105/EC 和2000/21/EC，特別是第131条文的相关內容。 46. (a)壬基苯酚Nonylphenol C6H4(OH)C9H19 (b)壬基酚聚氧乙烯醚Nonylphenol ethexylate; (C2H4O)nC15H24O 物质或混合物浓度大于0.1%(w/w)者，不可置于市场以作为下列用途：(1) 工业或常用清洗剂，但下列除外： ― 经控制密闭干洗系统，其洗涤剂将回收或焚化处理； ― 特殊处理之清洗系统，其洗涤剂將回收或焚化处理； (2) 家居清洁； (3) 纺织品和皮革制品之处理，但下列除外： ― 不会排出废水之处理方式 ― 前述处理方式是指具特殊处理之系统，在该系统下，废水经过生物废水处理前，会先完全移去其中有机物的部分；
(4)农业用乳化剂； (5) 金属加工，但下列除外：使用于经控制之密闭系统，其洗涤剂将回收或焚化处理； (6) 纸浆和纸张的制造； (7) 化妆品； (8) 其他个人护理用品，但杀精剂除外； (9)杀虫剂或杀菌剂之配方。但国家级授权的农药或生物农药产品含有壬基酚聚氧乙烯醚的配方，在2003年7月17日之前，将不会受到这种限制。 二壬基酚聚醚禁用的相关原因 烷基酚聚氧乙烯醚(APEO)是一类非离子表面活性剂，是乳化剂、渗透剂、洗涤剂等纺织助剂的主要成分，广泛应用于皮革、纺织印染加工中，其中又以辛基酚聚氧乙烯醚(OPEO)和壬基酚聚氧乙烯醚(NPEO)的使用最为广泛。虽然APEO本身不具有致畸和致癌性，但其合成的副产物却可能有致癌性，且其生物降解性差，降解代谢的最终产物烷基酚(AP)，即壬基酚(NP)和辛基酚(OP)为内分泌干扰物，对水生物体具有高毒性。 基于此，欧盟先后颁布了2003/53/EC指令和1907/2006/EC 指令，规定纺织品，皮革和农药中NP和NPEO的含量均不能高于1000mg/kg。该法令已于2005年1月17日起正式生效。 三壬基酚聚醚国内生产及使用现状
壬基酚和双酚A检测方法
1目的 建立该程序为规范壬基酚和双酚A测定提供指导性文件。 2 适用范围 本规程适用于婴幼儿食品及食用植物油和包材等双酚A、壬基酚含量的液相色谱-串联质谱法测定。 3 原理 试样中(婴幼儿乳粉及粉状原料）的壬基酚和双酚A经乙酸乙酯-环己烷（体积比按1:1）提取后，同位素稀释高效液相色谱-串联质谱技术（UPLC-MS/MS）检测，与标准系列比较定量。 样品（油类）经过凝胶渗透色谱法（GPC）除脂净化（乙酸乙酯:环己烷（1:1，v/v）超声提取），同位素稀释高效液相色谱-串联质谱技术（UPLC-MS/MS）检测，与标准系列比较定量。 样品（膜）经过正己烷浸泡提取，氮吹（42℃）至干，用1ml甲醇定容后，同位素稀释高效液相色谱-串联质谱技术（UPLC-MS/MS）检测，与标准系列比较定量。 4 试剂和材料 除非另有规定，本方法所用试剂均为色谱纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 乙酸乙酯 环己烷 壬基酚和双酚A 及其同位素内标（NP-d4、BPA-d4） 甲醇 氨水（分析纯） 乙腈 标准溶液 壬基酚和双酚A标准储备液（ml）：分别称取壬基酚和双酚A的标准品（精确到），溶于甲醇中，用甲醇定容到100ml容量瓶中，放置于4℃冰箱中。 壬基酚和双酚A标准中间夜（2ug/ml）：分别吸取1ml壬基酚和双酚A标准储备液，用甲醇定容至100mL。壬基酚和双酚A标准工作液：分别吸取壬基酚和双酚A标准中间夜10μl，25μl，50μl，75μl，100μl，150μl，250μl，然后分别加入50μl壬基酚和双酚A的同位素内标物标准中间液，最后加甲醇定容至1ml，配制成工作液浓度分别为20ng/ml，50ng/ml，100ng/ml，150ng/ml，200ng/ml，300ng/ml，500ng/ml。内标物溶液 壬基酚和双酚A同位素内标物标准储备液（ml）：分别称取壬基酚和双酚A的同位素内标物（精确到），溶于甲醇中，用甲醇定容到100ml容量瓶中，放置于4℃冰箱中。 壬基酚和双酚A的同位素内标物标准中间液（2ug/ml）：分别吸取1ml壬基酚和双酚A的同位素内标物标准储备液，用甲醇定容至100mL。 5 仪器和设备 天平：感量为。 涡旋振荡器 氮吹仪 低温低速离心机 超高效液相-质谱联用仪 凝胶渗透色谱仪 6 分析步骤 试样处理 婴幼儿乳粉及粉状原料 称取试样1g（原料根据实际情况酌情减少称样量）精确到于50ml干燥的玻璃离心管中，向样品中分别加入50μl壬基酚和双酚A的同位素（200ng/ml）内标物（NP—4-n-NP-d4和BPA-d4）,加入8ml乙酸乙酯-环己烷溶液（体积比按1:1），涡旋振荡30s，离心10min（1000转/min）。然后再重复上述操作进行
食品中壬基酚的测定-高效液相色谱串联质谱法
DB 北京市食品安全地方标准 DB 11/ XXXXX—XXXX 食品安全地方标准 食品中壬基酚的测定 高效液相色谱/串联质谱法 （征求意见稿） XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施
前言本标准为首次发布。
食品安全地方标准 食品中壬基酚的测定高效液相色谱/串联质谱法 1 范围 本标准规定了多类食品中壬基酚痕量检测的制样方法和高效液相色谱/串联质谱检测方法。 本标准适用于动物肌肉、鸡蛋、奶粉、牛奶、植物油、粮谷等食品中壬基酚含量的液相色谱串联质谱测定和确证。 2 原理 试样中的目标化合物经有机溶剂提取，凝胶渗透色谱或在线固相萃取技术净化，高效液相色谱-质谱/质谱仪测定，同位素稀释内标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明，本法所用试剂均为色谱纯。 3.1 试剂 3.1.1 甲醇(LC-MS级)。 3.1.2 乙腈。 3.1.3 水（LC-MS级）。 3.1.4 乙酸乙酯。 3.1.5 环己烷。 3.2 试剂配制 乙酸乙酯-环己烷溶液（1+1，体积比）：取50 mL乙酸乙酯（3.1.4）与50 mL环己烷（3.1.5）混合。 3.3 标准品 3.3.1 4-壬基酚（4-NP，分子量：220，纯度≥98.5%）。 3.3.2 4-正壬基酚氘代同位素内标（4-n-NP-d4，分子量:224，纯度≥97.8%）或相当者。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 标准储备液
准确称取10.0 mg的标准品（3.3.1）于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制成1 mg/mL 的标准储备液，-18 ℃以下保存，在12个月内稳定。 3.4.2 内标储备液 准确称取10.0 mg的同位素内标（3.3.2）于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制成1mg/mL 的标准储备液，-18 ℃以下保存，在12个月内稳定。 3.4.3 中间浓度标准溶液 用甲醇将标准储备液（3.4.1）配制成浓度为1 μg/mL的中间浓度标准溶液，4 ℃以下保存，在3个月内稳定。 3.4.4 中间浓度内标溶液 用甲醇将内标储备液（3.4.2）配制成浓度为250μg/L的中间浓度内标溶液，4 ℃以下保存，在3个月内稳定。 3.4.5 标准工作溶液 根据需要，吸取一定量的中间浓度标准溶液（3.4.3）和中间浓度内标溶液（3.4.4），用甲醇配置成适当浓度的标准工作溶液（0.2、1、5、10、20、50、100和200 μg/L）并使得每个浓度点内标浓度均为10 μg/L。测定粮谷样品时，标准工作液浓度为0.01、0.02、0.1、0.5、2、10和20 μg/L，内标浓度为1 μg/L。标准工作溶液均在使用当天配制。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱/串联四极杆质谱仪：配电喷雾离子源。 4.2 在线固相萃取仪：含二元梯度泵或相当者、自动进样器（配100 μL或以上定量环）、柱温箱和在线脱气机。 4.3 电子天平：感量为0.0001 g和0.01 g。 4.4 组织匀浆机。 4.5 漩涡混合器。 4.6 冷冻离心机（最大转速10000 r/min）。 4.7 超声提取仪。 4.8 旋转蒸发仪。 4.9 凝胶渗透色谱仪：配玻璃样品管。 4.10 移液器。 4.11 粉碎机。 5 分析步骤
斑马鱼简介
它是发育生物学家的得力助手，是医学研究的后起之秀，是环境监测的哨兵，是指示兵，是药物研发的新宠，它就是脊椎类模式动物明星斑马鱼（zebrafish，Danio rario）。 一、斑马鱼基本特点： 原产地：热带淡水鱼，原产于喜马拉雅山南麓的印度、巴基斯坦、孟加拉和尼泊尔等南亚国家。成鱼体长3-100px，略呈纺锤形，头小而稍尖，吻较短，身躯玲珑而纤细，因其体侧具有像斑马一样纵向的暗蓝色与银色相间的条纹而得名。 http://www.mun.ca/biology/desmid/brian/BIOL3530/DEVO_03/ch03f09.jpg 斑马鱼是体外受精发育，胚体透明。胚胎发育快，受精后3天左右孵化出膜，天左右开口进食，约3个月达到性成熟，寿命可达2年以上。斑马鱼可常年产卵，繁殖周期3-4天，一对成年斑马鱼每次可产卵200-300枚，受精率通常在70%以上。养殖温度一般在23-31℃，15℃左右仍可存活，最佳养殖温度在25-28摄氏度之间，pH值在6.8~7.8，硬度在2~6之间。 二、斑马鱼作为模式生物的起源和发展 1938年，美国布朗大学Roosen-Rung教授首次报道斑马鱼发育形态学研究成果。1950年代，美国罗格斯大学K. Kenneth Hisaoka教授首次报道斑马鱼毒理学研究成果。1972年，美国俄勒冈大学George Streisinge教授开始斑马鱼发育生物学研究和模式动物建立工作。1989年，美国俄勒冈大学Monte Westerfield教授出版斑马鱼研究圣经The Zebrafish Book第一版。1998年，首个斑马鱼模式生物数据库ZFIN成立（https://www.360docs.net/doc/f513400415.html,）。1998年，全球第一家斑马鱼药物研发
如何看性激素六项化验单.
性激素六项的检测及其意义（第一篇文章） 一、检查性激素常识 检查基础性激素前至少一个月不能用性激素类药物（包括黄体酮、雌激素类），否则结果不可靠（治疗后需要复查性激素除外）。 月经任何时间检查性激素都可以，每个时段的正常值不同。但是诊治不孕症一定要了解基础性激素水平，首先要选择月经第2～5天检查，称为基础性激素水平，第3天测定最好。确定是来月经第3天，检查性激素5项即可，可以不查孕酮，孕酮应该在黄体期检查（月经21天或排卵后7天）；但不能肯定阴道流血是否月经，应该检查6项，以防止误诊（根据P 数据可以大概判断月经周期时段）。 月经稀发及闭经者，如尿妊娠试验阴性、阴道B超检查双侧卵巢无≥10mm卵泡，EM 厚度﹤5mm，也可做为基础状态。 基础性激素化验单应该这样看：基础LH和FSH正常值为5～10IU/L，基础E2正常值为25～50pg/ml（这3项结果不能看化验单上的参考值，要按这个标准）；PRL、T可以对照该医院化验单参考值，P正常值见后。 二、性激素检查的临床意义 （一）FSH和LH：基础值为5～10IU/L 正常月经周期中，卵泡早期(月经2~3天)血FSH、LH均维持在低水平，排卵前迅速升高，LH高达基础值的3~8倍，可达160IU/L甚更高，而FSH只有基础值的2倍左右，很少﹥30IU/L，排卵后FSH、LH迅速回到卵泡期水平。监测卵泡早期的FSH、LH水平，可以初步判断性腺轴功能。FSH在判断卵巢潜能方面比LH更有价值。 1、卵巢功能衰竭：基础FSH﹥40IU/L、LH升高或﹥40IU/L，为高促性腺激素（Gn）闭经，即卵巢功能衰竭；如发生于40岁以前，称为卵巢早衰（POF）。 2、基础FSH和LH均﹤5IU/L为低Gn闭经，提示下丘脑或垂体功能减退，而二者的区别需借助促性腺激素释放激素（GnRH）试验。 3、卵巢储备功能不良（DOR）：基础FSH/LH﹥2～3.6提示DOR（FSH可以在正常范围），是卵巢功能不良的早期表现，往往提示患者对超排卵（COH）反应不佳，应及时调整COH方案和Gn的剂量以提高卵巢的反应性，获得理想的妊娠率。因为FSH/LH升高仅仅反映了DOR，而非受孕能力下降，一旦获得排卵时期，仍能获得理想的妊娠率。 4、基础FSH﹥12IU/L，下周期复查，连续﹥12IU/L提示DOR。 5、多囊卵巢综合征（PCOS）：基础LH/FSH﹥2～3，可作为诊断PCOS的主要指标(基础LH水平﹥10IU/L即为升高，或LH维持正常水平，而基础FSH相对低水平，就形成了
基于斑马鱼的模式生物的关于人类疾病的最新研究进展
基于斑马鱼的模式生物的关于人类疾病的最新研究进展 摘要：作为一种理想的生物实验模型，斑马鱼在生物学和人类疾病发面有着广泛的科研价值。参考以斑马鱼物生物模型所得的实验研究对于人类疾病的防治有重要的借鉴意义。 关键词：斑马鱼，模式生物，人类疾病 正文： 随着现代生物科学的不断发展，传统的以单一生物模型为研究模板的方式已经不能 满足日益丰富的研究内容，越来越多的生物学研究开始转向以模式生物为研究对象。由于 模式生物的基因在进化的保守性以及遗传密码的通用性，模式生物为其他的实验生物提供 了良好的实验模板，因此，选择合适的模式生物可以使实验祈祷事半功倍的效果。[1] 就目前所用于科学实验的模式生物而言，主要有果蝇，大肠杆菌，斑马鱼，小鼠， 酵母菌和拟南芥等。其中，斑马鱼以其容易捕获，易于饲养，生长周期短，繁殖能力强， 基因组与人类有高度保守性，使得斑马鱼及其胚胎在模式生物研究领域起着不可替代的重 要作用[2]。早在1981年，在Oregon带血的著名遗传学家Streisinger等就在Nature杂志 上发表了第一篇关于斑马鱼的科研论文。自此之后，斑马鱼就开始广泛的运用于发育与遗 传毒理学、生物学、医学、环境毒理学和药物研发等多个领域。[3]在这里主要介绍斑马鱼 及其胚胎在人类疾病模型构建中的研究应用。 一、关于造血疾病的模型研究 斑马鱼血小板和人类的有所差异，主要为带有稀疏细胞质巨大细胞核的有核细胞。但在电镜下表面较为光滑，染色质细密，较易于观察。不过最主要的是两者在生理功能上 具有某些相似性，包括血小板的黏附、激活聚集和释放反应等。所以斑马鱼作为模式生物 研究血小板具有较强的可行性。Gregory等[4]通过将斑马鱼幼鱼暴露在FeCl3中，利用激光损伤的方法损伤血管壁，构建血管闭塞模型。发展了激光介导血栓形成的方法，并通过这 个方法来了解斑马鱼血小板功能的变化。Langenau等[5]将源于小鼠的c-myc基因与斑马鱼 胚胎的Rag2基因融合，再在这个基因的尾部连接上GFP基因，之后植入到斑体细胞，从而影响了造血细胞的的基因表达，建立了斑马鱼白血病模型。 二、关于神经系统疾病的模型研究 在斑马鱼关于人类神经系统的疾病研究主要指关于阿尔茨海默病(AD)，帕金森综合 症(PD)，亨廷顿舞蹈症(HD)以及肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)的疾病研究。
2003_53_EC壬基酚_CN
欧洲议会和欧盟理事会第2003/53/EC号指令 2003年6月18日 欧盟理事会第76/769/EEC号指令 《关于统一各成员国有关限制销售和使用某些危害物质及制品的法律法规和管理条例》的第26次修订 (壬基苯酚、壬基酚聚氧乙烯醚和水泥) 欧洲议会和欧盟理事会 注意到建立欧洲共同体的条约，特别是其中第95条， 注意到欧盟委员会的提案， 注意到欧洲经济与社会委员会的意见， 按照欧洲共同体条约第251条所制订的程序行事， 鉴于： 1)按照欧洲经济共同体（EEC）1993年3月23日发布的第793/93号理事会管理规程《关于现存物质 危害的评估和控制》，评估了壬基苯酚（NP）和壬基酚聚氧乙烯醚（NPE）对环境构成的危害。此次评估确认需要降低这些危害，并在2001年3月6-7日发表的意见当中，毒性、生态毒性及环境科学委员会（CSTEE）确认了这一结论。 2)在欧洲议会和欧盟理事会2000年10月23日发布的第2000/60/EC号指令《为共同体在水领域的行 事政策建立一个框架》中，壬基苯酚被归为“优先危害物质”一类。依照此指令的第16（6）条款，欧盟委员将提交控制提案，停止或逐步停止这些危害物质的排放、辐射和流失。 3)在2001年11月7日发布的第2001/838/EEC号委员会建议《关于危害物质风险降低策略和风险评 估结果》中，丙烯醛、硫酸二甲脂、4-壬基支链、甲基叔丁基醚这些有害物质被采纳到欧洲经济共同体第793/93号规程的框架中，并提出了对壬基苯酚和壬基酚聚氧乙烯醚的危害限制策略，特别建议对它们的销售和使用采取限制。 4)为了保护环境，欧盟委员会受邀考虑对理事会于1986年6月12日发布的第86/278/EEC号指令《关 于环境保护》进行修正，特别是对于土壤，当排放的污水被应用到农业当中，并考虑对浇灌到土地上的污水淤泥中的壬基苯酚和壬基酚聚氧乙烯醚建立浓度限值管制。 5)为了进一步保护环境，某些会导致壬基酚和壬基酚聚氧乙烯醚排放、辐射或流失到环境中的应用，对 这些用途和投放市场应予以禁止。然而，对农药和杀虫剂中相关的辅料的禁止，应当与当前经过国家授权的含有壬基酚聚氧乙烯醚作为辅料的农药和杀虫剂产品的有效性没有违背，这些农药和杀虫剂产品在此指令生效之前已经经过允许，除非是授权已经过期。 6)科学研究表明水泥制作过程中含有六价铬在某些情况下可能会产生过敏反应，如果长时间与皮肤直接
斑马鱼
新型模式动物斑马鱼在分子生物学和医学中的应用举例 摘要：斑马鱼由于其独特的生物学特性作为一种新型的模式动物在医学、分子生物学、发育生物学、环境监测和毒性检测等方面在国内外得到了广泛的应用。本文概述了其在分子生物学和医学中的具体应用两例，展示了其在实验动物学中诱人的发展前景。 关键词：斑马鱼、模式动物 斑马鱼(又名蓝条鱼、花条鱼、斑马担尼鱼，Brachydanio rerio)，鲤科，原产自印度、孟加拉国。体长为4-6cm。雌雄鉴别较容易，雄鱼的蓝色条纹偏黄，间以柠檬色条纹；雌鱼的蓝色条绞偏蓝而鲜艳，间以银灰色条纹，身体比雄鱼丰满粗壮，各鳍均比雄鱼短小。饲养容易，对水质要求不严，水质为中性，水温以22～26℃为宜。耐热性和耐寒性都很强，可在10℃以上的水中很好地生长，属低温低氧鱼。可与其他小型鱼混养，对食物不挑剔，各种动物性饲料，干饲料均可，很少患病。繁殖比较容易，繁殖水温以24℃为宜。每尾雌鱼每次产卵约300余粒，体型较大者有时可产上千粒。卵子体外受精，体外发育，胚胎发育同步且速度快，胚体透明。受精卵约经36h孵化，两天后仔鱼卵黄囊消失，可游动摄食。发育温度要求在25-31℃。幼鱼三个月可达性成熟。斑马鱼凭借自身优势，已成为理想的脊椎动物模型。 实例一：“绿色”胰岛β细胞发育转基因斑马鱼模型[1]。第一:克隆表达载体,挑选酶切鉴定后阳性的克隆作注射准备。第二：显微注射，即让外源性DNA片段进入斑马鱼基因组。第三：生殖系转基因系的筛选和建立，即蔡斯体视荧光显微镜下筛选胰岛位置特异性表达绿色荧光蛋白(GFP)的胚胎．建立生殖系稳定遗传的Fl代胰岛β细胞转基因斑马鱼系。第四：应用PCR和WISH证实为转基因斑马鱼系。第五：形态学观察，荧光显微镜下观察荧光标记并拍摄得到荧光标记物于胚胎侧面和背面的整体分布图。第六：应用化学遗传学方法破坏斑马鱼胰岛β细胞，模型建立。斑马鱼的应用为高通量筛选具有胰岛β细胞保护和再生作用的药物(包括中药、草药、小分子化台物等)提供了理想的动物疾病模型，为糖尿病这一核心病机的治疗带来了机会。 实例二：flk—GFP斑马鱼模型[2]，它是研究抗血管生成药物的理想动物模型。方法如下：成年flk一GFP转基因斑马鱼交配，产卵，待分裂至16—256细胞期时，将鱼卵随机置于96孔培养板(U底)中。实验组，每孔载入3个胚胎及鱼水(速溶海盐40 g加蒸镏水1000 mL)200μl，于4 hpf(hourpost fenilized,受精后小时数)时，自化合物库中加样，使加药后终浓度为10μmol·L-1；28℃培养箱中,培养至24 hpf；于倒置荧光显微镜下，观察flk—GFP转基因斑马鱼的血管生成情况。于同一培养板中，留出一列孔，不予加药，作为对照组。近年来随着肿瘤发病机制研究的不断深入，分子靶向药物的研究成为肿瘤治疗学研究的热点之一。血管生成抑制剂就是其中一类。斑马鱼通过血管芽的发育形成血管，与哺乳动物的血管形成途径需要相同的生物活性物质。flk—GFP转基因斑马鱼是一种在血管内皮细胞表面表达GFP的转基因动物，研究者可以在多孔板中观察斑马鱼胚胎的血管生成发育过程，从而能直接快速地筛选出影响血管形成过程和形状的化合物。因而，flk—GFP斑马鱼已成为研究血管生成独特的模式生物。 斑马鱼不仅在分子生物学和医学中得到广泛应用，在发育生物学、遗传学、毒性评价、胚胎毒性技术中都有应用[3]。如由于斑马鱼胚胎发育迅速、具有透光性，各器官正处于发育形成阶段，对水质污染和受压状态非常敏感，可用来监测水质的细微变化；能耐受的氧含量范围宽，所需溶液少，尤其适用于代谢物的检测；胚胎的急性毒性实验与成鱼具有很好的相关性，完全可以替代成鱼用于急性毒性检测；OECD也将斑马鱼胚胎检测技术列为测定和评价化学品毒性，尤其是致畸性的标准方法，并制定了详细的操作指南(OECDTG212)。此外，斑马鱼已经作为人类疾病研究模型，而且也被认为是人类基因组计划中功能染色体组研究的理想模型。以上综述可见，斑马鱼的发展前景是十分诱人的，它将在更宽广的领域得到更深入