实验四 花粉采集及生命力的测定
榆叶梅花粉采集、贮藏及生活力测定
榆叶梅花粉采集、贮藏及生活力测定专业： --班级： --学号： ----------姓名： ------榆叶梅花粉采集、贮藏及生活力测定--（-------------------------------------------）摘要：以榆叶梅花粉为试材，分别采集中部枝条上部、中部、下部的花粉,利用碘-碘化钾染色法对花粉生活力进行测定，并研究了不同贮藏条件对花粉萌发的影响。
关键词：榆叶梅,花粉,生活力, 贮藏引言花粉在有性繁殖中传递着雄性亲本的遗传信息。
在农业和林业的常规育种中,为了进行人工辅助授粉或杂交授粉,需要早期采集和贮存花粉。
尤其是在杂交育种工作中,研究花粉的生活力和育性是必不可少的基础性工作。
保存花粉的活力是解决亲本花期不一致或远距离杂交的主要途径。
花粉生活力的鉴定是采集和贮存花粉必须的检测内容。
不同类群植物花粉在自然条件下的寿命、花粉的适宜贮存、营养条件以及花粉生活力的适宜测定方法均有所差异[1],这些差异对于研究花粉贮藏期间控制花粉生活力、花粉-柱头间的相互作用、品种改良与育种操作、基因库的保持、不亲和性与受精关系、生理调节对花粉萌发的影响以及基因流等均有重要的实践意义。
掌握适宜的培养、贮存方法及生活力检测的方法对于提高植物育种效率具有较高的实际应用价值。
榆叶梅为蔷薇科梅属落叶灌木,为园林中应用最广的灌木之一。
近年来,国内外对榆叶梅的研究主要集中在栽培、园林应用、病虫害防治等方面,对榆叶梅花粉生活力及其贮藏特性研究尚未见报道[2]。
为此,我们通过用染色法对榆叶梅花粉生活力进行了探讨,以便为榆叶梅的育种和引种提供理论依据。
1 试验方法和实验方案1.1试验方法花粉的采集：首先采集齐齐哈尔大学学生公寓14#楼下的榆叶梅，选择其中部的枝条，分别采取枝条的上、中、下三部位的刚开放不久的花朵花粉，将收集好的花粉带到实验室，进行分组处理，具体方法为收集3个实验组的花粉，标记好植物品种名称、采集日期、地点、贮藏条件后统一编号。
花粉生命力的测定与形态观察
实验三花粉生命力的测定与形态观察花期不遇，给杂交工作造成困难，有的树木和园林植物可通过催延花期解决，有的则不得不进行花粉贮藏，为此我们必须掌握花粉贮藏的原理与技术。
为了避免杂交工作失误，在使用远地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉生命力进行鉴定，以便对杂交成果进行分析与研究。
一、实验目的掌握了解花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法及原理。
二、实验材料芙蓉花的花粉。
三、仪器及药品载玻片、盖玻片、标签、标记笔、显微镜、蔗糖、蒸馏水、联苯胺、 -萘酚、酒精、碳酸钠、过氧化氢、琼脂。
四、实验原理在园艺植物有性杂交工作中，常因杂交亲本间花期不遇，或父本植株栽在异处(地)而必须预先收集花粉。
花粉贮藏在低温(0～4℃)、干燥(相对湿度0～40％)、黑暗的环境下，代谢降低，可以较长时间地保持花粉生活力，但其贮藏期长短对花粉生活力的影响因品种而不同。
在授粉之前，对贮藏的或外地采来的花粉必须预先测定花粉的生活力，以确定哪些花粉不能用于杂交，这对取得杂交效果有直接影响。
一是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。
此法的缺点是需时间较长，且实验结果易受气候条件的影响；二是将待测粉受到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微镜下检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生命力；三是在培养基上进行花粉的人工萌发，检查待测花粉萌发率的高低。
将花粉播种在特定的培养基上，并在一定的环境条件下来测定其发芽能力的方法。
培养基常用蔗糖、琼脂(1％)和蒸馏水配制而成。
不同植物的花粉，对蔗糖浓度要求不同，如柑桔花粉要求25％左右，苹果和梨10～15％，桃10％左右为宜。
蔗糖浓度高低可调节培养基的渗透压，以防止花粉在培养基上破裂。
培养基以微酸性为宜，一般在pH5.2～6之间。
发芽温度在20～25℃左右，并需要空气和湿度，为了促进花粉发芽，在培养基中还可加入少量的硼酸和维生素B1。
利用花粉发芽试验测定花粉生活力是一种直接的测定方法，其结果也最可靠，但操作较麻烦，要有一定设备和一定时间。
花粉的形态观察及生活力测定
花粉的形态观察及⽣活⼒测定实验⼀花粉贮藏及花粉⽣活⼒的测定花期不遇给杂交⼯作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进⾏花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。
为了避免杂交⼯作失误，在使⽤外地寄来的花粉或经过⼀段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的⽣活⼒进⾏检测，以便对杂交结果进⾏分析与研究。
因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉⽣活⼒测定的原理和技术⼀、实验⽬的掌握花粉贮藏及花粉⽣命⼒鉴定的⽅法和原理。
⼆、实验材料百合、⾦鱼草、菊花等花粉。
三、仪器及药品显微镜、载玻⽚、盖玻⽚、镊⼦、解剖针、吸⽔纸、TTC（2.3.5—氯化三苯基四唑）、KI-I2、蓝墨⽔。
四、实验原理花粉在低温（ 0 ～ 2 ℃）、⼲燥、⿊暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从⽽延长花粉的寿命。
花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其⽣活⼒密切相关，因此可以利⽤花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性⾼低、淀粉的含量以及在⼈⼯培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉⽣活⼒⾼低的标准。
鉴定花粉⽣活⼒的⽅法很多，概括起来主要有如下⼏种：1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。
此法最准确，但需时较长，且实验结果易受⽓候条件的影响。
也可在授粉后隔⼀定时间切下柱头，在显微镜下压⽚检查花粉的萌发情况，根据萌发率的⾼低来鉴定花粉的⽣活⼒。
2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的⼤⼩、形状、⾊泽等）判断花粉的⽣活⼒，即形态正常的花粉有⽣活⼒，⽽⼀些⼩的、皱缩的、畸形的花粉不具有⽣活⼒。
此法简便易⾏但准确性差，⼀般只⽤于测定新鲜花粉的⽣活⼒。
3 ．染⾊观察法1 ）碘－碘化钾染⾊法：以碘－碘化钾溶液（ 0.3g 碘＋ 1.3g 碘化钾溶于 100ml 蒸馏⽔）染⾊后于显微镜下观察，花粉被染成蓝⾊者表⽰具有⽣活⼒，花粉呈黄褐⾊者不具有⽣活⼒。
2 ） TTC 染⾊法：使⽤TTC测定花粉⽣命⼒的原理，主要是⽆⾊药液进⼊花粉遇到活组织⾥的脱氢酶，接受氢离⼦，还原成红⾊三苯基甲腊TTF，还原结果使有⽣命⼒的花粉染上红⾊，死花粉不着⾊；花粉⽣活⼒强弱有异，染⾊深浅也有不同。
育种技术实验
实验一花粉生命力测定目的在经过一段时间储藏的花粉或使用远地花粉时,则必须测定,便于杂交成果的分析与研究。
通过实验, 要求学生掌握花粉生命力测定的方法。
药品及用具测微尺、显微镜、毛笔、载玻片、盖玻片、恒温箱、玻璃铅笔、蔗糖、蒸馏水、硼酸液、联苯胺、苯酚、酒精、碳酸钠、过氧化氢、琼脂。
方法步骤1、方法可分三类: 间接法、直接法、染色法。
2、直接法（1）原理（2）将花粉直接在清洁的同种植物的柱头上, 并且作好隔离工作, 然后观察其雌花之发育, 如果胚珠能够正常发育成种子, 则说明花粉具有生命力,否则, 就没有生命力。
（3）步骤第一步: 将花粉直接授在清洁的同种另一植株花的柱头上, 并作好隔离。
隔1--3天采集已授过粉的柱头, 固定于开水或F.A.A液中。
第二步：染色剂的配置:配置1%苯胺兰溶液、配置0.5%苯胺兰乳酸酚。
A．染色镜检3、花柱固定在开水中, 并于水中煮烂, 而后放在1%苯胺兰水溶液或0.5%苯胺兰乳酚中染色24小时,把花柱撕开,盖上盖玻片,用大姆指轻压。
镜检,若花粉具有生命力,即可观察到花粉管伸入柱头组织,若花粉不具生命力,即无花粉管伸入柱头组织.4、间接法（1）原理（2）借人为创造的特定条件使花粉萌发, 鉴定花粉生命力。
（3）硼酸液培养法配置10、50PPM的硼酸溶液。
用毛笔取少量花粉播入已盛硼酸的清洁小瓶并加盖, 放入恒温箱内培养。
5、取出小瓶充分摇动均匀, 用吸管吸一滴于载玻片凹槽内, 迅速盖上盖玻片固定花粉粒, 然后至于显微镜下观察。
6、观察2-----4个载玻片, 每凹面随机观察5个视野计算发芽率。
7、染色法过氧化物酶测定法（1）原理（2）这是借助于测定花粉内过氧化氢酶活性强弱来确定花粉生命力的方法, 在活的花粉内过氧化氢酶存在, 它可以促进过氧化物放氧分解, 这些刚被放出来的活性氧容易使还原剂氧化, 在本实验中所用的无色的联苯胺和苯酚都是还原剂, 但它们被氧化后确表现红色或玫瑰红色, 如果花粉是活的, 那么这个反应很快, 则花粉都被染成红色或玫瑰红色, 如果花粉是死的, 则这一反应迟迟不能进行, 花粉也就保持原色。
实验：园艺植物花粉生活力测定
天竺葵柱头上的花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
蒂氏荚蒾花粉（灰色) 其中一个已开始萌发
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
勿忘草的花粉 最小的花粉粒之一，直径只有0.005毫米
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
花锦葵属植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
桦树的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
柳树花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
染色者为发育不良、生活力弱的花粉。观察3~4个视野，
五、方法步骤：
（三）花粉生活力试验
3.取另一载玻片，加少量同种待测花粉，然后在花
粉上滴试剂Ⅰ和试剂Ⅱ各一滴，仔细搅匀，盖上盖
玻片，用镊子轻轻压实。经3～4分钟后，放在显微
镜下检查。
有生活力的花粉呈红色或玫瑰色，无生活力的 花粉为黄色或无色，连续观察3～4个视野，分别记 录有生活力及无生活力的花粉数。
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
凤梨科植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
丁香花粉采集、贮藏及生活力测定
4.1不同品种丁香的花粉生活力不同
丁香品种间亲缘关系越近, 其花粉生命力的高低也接近[3]。所以
在杂交育种中, 应该选用生命力较高的丁香品种作为父本, 这样可以大大 提高授粉成功率, 从而进一步确保杂交的成功。 4.2不同采集部位的花粉生活力不同
采集部位越靠近花序上部花粉生活力越高，故应选用靠近花序上部 盛开较好的花粉进行杂交育种。
61/63
3 30/38 26/60 27/32
63/74 67/67 26/33
28/46 45/48 81.36
56/59
下 1 55/57 23/28 58/63 35/41 42/45 部 2 50/59 45/51 30/33 40/45 60/71 86.95
3 51/60 50/52 34/44 40/49 20/30
粉数
生活
种
力
类
（%）
1
2
3
4
5
上 1 11/12 8/9 32/33 12/14 13/18 部 2 12/20 14/16 29/38 8/20 29/37 73.80
3 25/42 9/12 13/16 10/14 6/12
白 中 1 54/71 35/46 2பைடு நூலகம்/27
丁 香
部
2
20/25
36/41
碘－碘化钾染色法。先称取0.3g碘和1.3g碘化钾溶于100ml的蒸馏 水中，即成碘－碘化钾溶液。取少量花粉振播到用棉球擦净的普通载玻
片上，然后加水一滴，使花粉散开，置于显微镜下观察不同的5个视 野，凡花粉粒被染成蓝色的表示具有生活力，呈黄褐色为缺少生活力的 花粉（遇碘变蓝是淀粉的特性）。
2实验方案
花粉活力测定
花粉活力测定
一、实验原理：
TTC染色法——TTC（2，3，5－三苯基氯化四氮唑）的氧化态是无色的，可被氢还原成不溶性的红色三苯甲潛（TTF）。
用TTC的水溶液浸泡花粉，使之渗入花粉内，如果花粉具有生命力，其中的脱氢酶就可以将TTC作为受氢体使之还原成为红色的TTF；如果花粉死亡便不能染色；花粉生命力衰退或部分丧失生活力则染色较浅或局部被染色。
因此，可以根据花粉染色的深浅程度可鉴定花粉的生命力。
二、实验仪器：载玻片、盖玻片、显微镜、镊子、毛笔、滤纸、培养皿、三角瓶、天平、烧杯、恒温箱、量筒、吸管
三、实验药品：0.5%TTC溶液、琼脂、硼酸、氯化钙、蒸馏水、蔗糖（浓度分别为5%、10%、15%、20%）
四、实验步骤：
TTC法：将采集到的花粉（虞美人、三色堇），取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC 溶液，搅匀后盖上盖玻片，并用清水做对照，置37℃恒温箱中，30min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
每片取3个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
五、实验结果：
TTC法：虞美人花粉活力——26.1%
三色堇花粉活力——23%
六、结果分析：
1、TTC法：三色堇花粉染色在30分钟时观察时基本没有染色，50分钟左右观察，才有明显染色的划分出现，原因可能是花粉对TTC的敏感度不同。
植物花粉生活力测定技术
1．测定花粉生活力的意义有哪些？ 2．分析在实验中出现的问题，并找出原因所在。 3．将四种方法的结果分别记载于表中，并比较结果是否一致，如不一致，分析其原因。Fra bibliotek表 1－6
供试 花粉收集 测定 第一视野
品种 日期 日期
第二视野
具有生活力 第三视野
的花粉%
备注
直接鉴定法
TTC 染色法
发芽测定法 形态鉴定法
1．外地采集来的花粉或杂交时父本花期早于母本时都要将花粉进行短暂贮藏； 2．自交或远缘杂交时，为了分析结实率或不结实原因时； 3．为了鉴定雄性不育系时； 4．了解某些杂交技术时，如测定花粉的刺激等作用，测定受精选择性等。 因此，要根据各种植物花粉的特点，采取适当的保存方法。花粉生活力的测定方法很多， 其中发芽试验手续较复杂，设备要求较高，需时也较长。为了简易而迅速的测定花粉生活力， 也常采用化学染色的方法，但是此法也有缺点，就是染上色的花粉不一定都具有生活力，因 为染上色的花粉中也包括了那些生活力弱不能正常发芽的花粉，所以一般常用而且较为可靠 的方法仍然是采用花粉发芽实验。要是要求不严格对新采集的花粉还有一个较简便的鉴定方 法——形态鉴定法。 本实验目的是学习花粉生活力测定的方法，进而研究花粉寿命长短与环境条件的关系， 以探求保存花粉的合适方法。
（2）TTC 溶液：称取 0.02～0.05 克（不同植物所用的量是不同的）的 TTC 溶解在 10ml 的磷酸缓冲液中，溶液配好后装入棕色滴瓶内，置入暗处，因氯化三苯基四唑有毒，操作时 要注意安全。
2．操作步骤： （1）取少量花粉放在载玻片上，并在花粉上滴上 1～2 滴配制液，用玻璃棒混合后盖上 盖玻片。 （2）将载玻片置于恒温箱中（35～40℃）约 15～20min。 （3）在显微镜（10×10）下观察：凡具有生活力的花粉呈红色，部分丧失生活力的呈 淡红色，无色的是死的和不育的花粉粒。 3．观察和测定结果：每片观察 3 个视野，并统计具有生活力花粉的百分率，填入表 1 －6。 （三）发芽测定法（培养基培养法） 1．培养基的配制 常用的花粉发芽培养基有液体和固体两种。以前者最为简便。本实验选用前者。其有效 成分主要有：蔗糖、硼酸、柠檬酸、赤霉素等。不同的植物所用的蔗糖培养液的浓度是不同 的，配制 3～30%的蔗糖培养液：在 100ml 水中，加糖 3～30g，加热溶解后，再加 0.1%硼 酸数滴。 2．制片 取双凹载玻片，滴 2 滴培养液于槽中，用解剖针挑少许花粉均匀撒于培养液的表面（注 意不必搅拌，以防花粉混于液体中因缺少空气而影响发芽，又因花粉深浅不一而在显微镜检 查时因光线折射而不易观察。）处理好后，放于一下部添有少量蒸馏水、内有两根玻璃棒的 培养皿中（注意不要使水没过载玻片），放到恒温为 25℃左右的恒温箱中或室内 2h。 3．镜检 将放置 2h 后的载玻片取出，放在显微镜下观察三个视野，统计总花粉数与发芽的花粉 数，然后计算比例，填入下面的表格中。 （四）形态鉴定法 对于新采集的花粉来说，还有一个更为简便的鉴定方法——形态鉴定法。将花粉用解剖 针播于一般载玻片上，然后直接放到显微镜下观察，根据形态特征，判断花粉的生活力状况， 一般来说，畸形、皱缩、小形化等均为无生活力花粉，而有光泽、饱满、具有本品种花粉典 型特征等性状的均为有生活力花粉。将观察的结果统计一下填写下表格。
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3 ．染色观察法 （3）氯化三苯基四氮唑（TTC）法 原理：凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程 中都有氧化还原反应，而无生活力的花粉则无此反 应，因此当TTC渗入有生活力的花粉时，花粉中的 脱氢酶在催化去氢过程中与TTC结合，使无色的 TTC变成三苯基甲（TTF）而呈红色。 步骤和方法：取少量花粉放在载玻片上，在花粉 上滴1～2滴TTC溶液，用镊子使其混匀后，盖上盖 玻片。将此载玻片上置于恒温箱中（35～40℃）约 15～20分钟，在显微镜（100倍）下观察。凡有生 活力的花粉粒呈红色，其次呈淡红色，失去生活力 的和不育的花粉粒表现无色。
六、作业及思考题： １、按下表统计实验结果。 ２、绘一幅花粉粒发芽形态图。 染色法测定结果记载表
各视野中花粉粒数量及生活力
花 粉 来 源 平 均 其中 生 生 活 红 黄 活 力 色 色 力 (％)
其中 花 粉 生 红 黄 总 活 色 色 数 力
花 粉 总 数
其中
红 黄 鲜
培 养 基 法 测 定 结 果 记 载 表
花 粉 来 源
各视野中花粉粒数量及发芽率 培养 基浓 度 1 发芽数/ 总数 发芽 率 2 发芽数/ 总数 发芽 率 3 发芽数/ 总数 发芽 率 平均 生活 力(％)
0% 5% 贮 藏 10% 15% 20%
新 鲜
配制对二萘氧基联苯胺: a．0.2克联苯胺溶于100毫升50%的酒精溶液； b．0.15克a-萘酚溶于100毫升50%酒精溶液； c．0.25克的碳酸钠溶解在100毫升的蒸馏水中。 以上三种溶液分别放入棕色瓶中备用，使用 时将这三种溶液等量配成试剂Ⅰ，放入棕色滴瓶 中备用，在使用前准备好0.3%的过氧化氢水溶 液作为试剂Ⅱ。
２．花粉生活力的测定： （１）染色观察法 ——TTC 和KI染色法 ① 分别配制 TTC 和KI染色液各100ml，装入棕 色瓶中备用。 ② 制片：取少量花粉于载玻片上，滴入 1 ～ 2 滴 0.5 ％ TTC 或KI染色液，用镊子搅拌均匀，盖上 盖玻片，于 35 ～ 40℃ 条件下净置 15 ～ 20min 。 ③ 观察统计：在显微镜下观察三个不同的视野， 凡被TTC染成红色或玫瑰红的都是有生活力的花粉， 黄色或不着色者为没有生活力的花粉；被KI染成蓝色 者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力。
四、实验原理 花粉在低温（ 0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件 下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这 样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。 花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的 多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关， 因此可以利用花粉的形态观察、过氧化物酶、脱 氢酶的活性高低（呼吸）、淀粉的含量以及在人 工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活 力高低的标准。
月 季
（２）培养基发芽法 —— 固体培养基 ① 配制培养基：称取 1g 琼脂， 5g 蔗糖，量取 94ml 蒸馏水，装入烧杯， 加热使琼脂融化呈透明状（注意补充水 分，以保持培养基的浓度），即配成 5% 浓度的培养基。同法配制 10% 、 15% 、 20% 浓度的培养基。 ② 制片：用滴管吸取少量培养基，趁 热滴在载玻片的凹槽内，放置片刻，使 其凝固。
六、作业及思考题： 1.绘一幅花粉粒发芽形态图。 2.按下表统计实验结果。 TTC染色（KI染色）统计结果
各视野中花粉粒数量及生活力 花 粉 来 源 其中 花 粉 生 总 红 黄 活 数 色 色 力 花 粉 总 数 其中 红 黄 色 色 生 活 力 花 粉 总 数 其中 红 黄 色 色 生 活 力 平 均 生 活 力 ( ％)
鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如
下几种：
1 ．直接测定法 ： 将待测花粉直接授粉，然后统计 结实情况。此法最准确，但需时较长，且实验结果 易受气候条件的影响。也可在授粉后隔一定时间切 下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根 据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。
2 ．形态观察法
直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品 种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、 色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的 花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形 的花粉不具有生活力。此法简便易行但准确
一、实验目的
掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。
二、实验材料 月季、百合、一串红、矮牵牛、油茶等植物的花粉。 三、仪器及药品 载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、毛笔、干燥器、小 指形管、标签、记号笔、显微镜、天平、烧杯、培 养皿、滴管、玻璃棒、量筒、电炉、石棉网、 冰箱； 凡士林、无水氯化钙、蔗糖、琼脂、蒸馏水、 硼酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、碘、碘化钾、氯 化二苯基四氮唑（ TTC ）。
4 ．培养基发芽法 在培养基上进行花粉的人工萌发， 鉴定待测花粉萌发率的高低。此法若 采用适宜的培养基能较精确地测定出
花粉的生活力，但不同植物的花粉萌
发条件存在较大的差异，所以很多时
候测定的结果也只是相对可靠。
五、实验步骤： １．花粉的贮藏 （１）将采集的花粉进行干燥（凉干或放入盛有 无水氯化钙的干燥器中干燥），一般以花粉不相 互黏结为度。 （２）将干燥的花粉装在指形管中（不要太多， 一般以五分之一体积或更少为宜），瓶口塞以纱 布，瓶外贴以标签，注明花粉种类、采收日期。 （３）将指形管放入无水氯化钙控制一定湿度的 干燥器中，干燥器置于0 ～ 2℃ 的冰箱内。
③ 播种花粉：将少量花粉均匀地撒播在 培养基上，注意不可过多，否则难以 观察。 ④培养：将制备好的片子放在垫有湿润 滤纸的培养皿内，于 20 ～ 22℃ 的温 箱中培养； ⑤观察：待花粉萌发后于显微镜下观察 并统计发芽率。观察时每片随机取三 个视野，统计花粉总数及发芽数，计 算平均萌发率（花粉总数不少于 100 粒）。
先将碘化钾溶于蒸馏水中，待全部溶解后再加
碘，振荡溶解。将此液保存在棕色玻璃瓶内。
性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。
3 ．染色观察法 （对二萘氧基联苯胺） （1）过氧化物酶测定法 原理：具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。 此酶能利用过氧化物使各种多酚及芳香族胺发生氧 化而产生颜色，依据颜色可知花粉有无活力。 步骤和方法：先在载玻片上加少量待测花粉，然 后在花粉上滴试剂Ⅰ和试剂Ⅱ各一滴，仔细搅匀， 盖上盖玻片，经3～4分钟后，再放在显微镜下检查， 有生活力的花粉呈红色或玫瑰色，无生活力的花粉 为黄色或无色，为了确定具有生活力的花粉百分率， 要连续观察3～5个视野，求其平均值，将观察结果 填入表内。
配制 TTC 染色液：
称取 0.5g TTC 溶于 100ml 磷酸盐缓冲液
中，装入棕色瓶备用。
磷酸盐缓冲液:100ml 蒸馏水中溶解 0.832g Na 2 HPO 4 · 2H
2 O 和 0.273g KH 2 PO 4 ， pH7.2
碘-碘化钾溶液配制方法 :
碘化钾3g；蒸馏水100ml；碘1g
3 ．染色观察法 （2）碘-碘化钾染色法 原理：正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花 粉则少。据此，可用化学物质染色，根据呈色反应 来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别。 通常正常花粉用I-KI染色后呈蓝色，而发育不良畸形 花粉则不积累淀粉，当I-KI染色时呈黄褐色。 步骤和方法：取花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏 水，用镊子使花粉散开，再加一滴I-KI溶液，盖上盖 玻片置于显微镜下观察，凡被染色呈蓝色表示具有 生活力，呈黄褐色者为发育不良生活力弱的花粉。
实验四 花粉贮藏及花粉 生活力的测定
花期不遇给杂交工作造成困难， 有的园林植物可通过调整花期来 解决，有的则不得不进行花粉贮 藏，或者从外地寄运花粉。为了 避免杂交工作失误，在使用外地 寄来的花粉或经过一段时间贮藏 的花粉之前，必须对花粉的生活 力进行检测，以便对杂交结果进 行分析与研究。因此我们必须掌 握花粉贮藏及花粉生活力测定的 原理和技术 。（为什么贮藏花 粉？）