临床病理学：肿瘤病理的分子检测
重视临床病理诊断中的分子检测要点
（ 本文编辑：常秀青）
ห้องสมุดไป่ตู้
［５］ Ｍｏｃｈ Ｈ， Ｈｕｍｐｈｒｅｙ ＰＡ， Ｕｌｂｒｉｇｈｔ ＴＭ， ｅｔ ａｌ．ＷＨＯ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｕｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｕｒｉｎａｒｙ ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ ｍａｌｅ ｇｅｎｉｔａｌ ｏｒｇａｎ ［ Ｍ ］ ． Ｌｙｏｎ： ＩＡＲＣ Ｐｒｅｓｓ， ２０１６．
ＤＯＩ：１０．３７６０ ／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．０５２９－５８０７．２０１７．０１．００１ 作者单位：１００７３０ 中国医学科学院 北 京 协 和 医 学 院 北 京 协 和
医 院 病 理 科 ，万Ｅ －方ｍａｉ数ｌ ：ｘ据ｈｂｌｋ ＠１６３ ．ｃｏｍ
缺。 不少新的类型也经分子检测的开展而不断涌现 出来，如二次打击性淋巴瘤、三次打击性淋巴瘤等。 不了解这些分子知识，将很难胜任现代病理诊断的 任务，也很难满足临床治疗及患者的需求，因此，作 为现代病理人，应充分认识到分子检测在我们常规 病理诊断中的重要性和紧迫性，认识到时代的进步 对我们提出的新要求，我们应认真学习分子检测的 理论和技术，并扎实开展起来，切实满足临床和患者 的需求，攻坚克难，努力把我国的病理事业推向满足 时代要求的新阶段。
［６］ Ｌｏｕｉｓ ＤＮ， Ｏｈｇａｋｉ Ｈ， Ｗｉｅｓｔｌｅｒ ＯＤ， ｅｔ ａｌ． Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｕｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ［ Ｍ］ ．Ｌｙｏｎ： ＩＡＲＣ Ｐｒｅｓｓ， ２０１６．
［３］ 刘彤华．分子诊断技术的规范化是结果准确的保证［ Ｊ］ ．中华 病理 学 杂 志， ２０１２， ４１ （ ９ ） ： ５７７－５７８．ＤＯＩ： １０．３７６０ ／ｃｍａ．ｊ． ｉｓｓｎ．０５２９ －５８０７ ．２０１２ ．０９ ．００１ ．
临床最常用的病理学研究方法
临床最常用的病理学研究方法
临床最常用的病理学研究方法包括组织学检查、免疫组化、分子病理学和电镜检查等。
组织学检查是病理学中最常用的方法之一。
它通过显微镜观察组织和细胞的形态学变化，以诊断和评估疾病的发生和发展。
组织学检查通常使用染色技术，如常规的血液染色、克罗姆氏染色、偏心染色和免疫组织化学染色等。
免疫组化是在组织学检查的基础上，使用抗体与特定抗原相互作用来检测和定位细胞或组织中的特定分子。
这种方法可以识别特定抗原，例如肿瘤标记物或免疫球蛋白等，从而帮助医生诊断疾病类型和预测疾病的预后。
分子病理学是一种通过分析细胞和组织中的分子改变来诊断疾病的
方法。
它使用一系列的实验技术，如聚合酶链反应（PCR）、核酸杂交和基因测序等，来检测和分析DNA、RNA和蛋白质的变化。
分子病理学在肿瘤学中应用广泛，可以帮助确定肿瘤的分型、预后和治疗方案。
电镜检查是一种高分辨率显微镜技术，可以观察细胞和组织的超微结构。
它可以揭示细胞器的形态和排列，以及细胞内的病理变化。
电镜检查在研究一些罕见的疾病、细胞内的代谢异常以及病毒感染中起着
重要的作用。
除了上述方法，还有许多其他的病理学研究方法，如流式细胞术、细胞遗传学和细胞培养等，这些方法在不同的临床情况下有其特定的应用。
综合利用这些病理学研究方法，可以提供准确的疾病诊断和预后评估，为临床医生制定个体化的治疗方案提供重要依据。
分子病理学诊断技术在肿瘤学中的应用
分子病理学诊断技术在肿瘤学中的应用肿瘤学是研究肿瘤发生、发展、转移及治疗的学科。
肿瘤的发生是由于基因突变、多种环境因素和生活方式等因素综合作用的结果。
分子病理学诊断技术作为一种快速、灵敏、准确的新技术，不仅可以对基因突变的检测、肿瘤细胞的分子特征和表达谱进行研究，还可以对肿瘤的预后和治疗反应进行评估。
本文将从分子病理学诊断技术的概念、技术方法、应用及发展前景等方面详细介绍其在肿瘤学中的应用。
一、分子病理学诊断技术的概念分子病理学诊断技术是指通过对肿瘤组织或体液中的一些分子标志物进行检测，以辅助肿瘤诊断和治疗的技术。
分子标志物包括基因、蛋白质、酶、免疫学指标和肿瘤相关遗传学变异等。
这些分子标志物的表达谱可以显示肿瘤细胞的状态及其分化水平，同时也可以显示肿瘤细胞的分子特征和病理类型，从而提高对肿瘤的鉴别诊断和早期诊断准确率。
分子病理学诊断技术还可以对肿瘤分子靶点进行评估，提供个性化治疗的方案。
二、分子病理学诊断技术的技术方法分子病理学诊断技术的技术方法主要包括基因检测、蛋白质检测、免疫组化和肿瘤标志物检测等。
基因检测是指通过对肿瘤组织和体液中的基因序列进行检测，对肿瘤分子遗传学变异进行评估，并为后续的个性化治疗提供依据。
目前常用的基因检测技术包括荧光原位杂交（FISH）、多聚酶链式反应（PCR）和基因芯片等。
蛋白质检测是指通过对肿瘤组织中的蛋白质进行检测，以评估其表达及功能状态。
蛋白质检测技术包括质谱法、二维凝胶电泳和蛋白质芯片等。
免疫组化是指通过利用抗体与免疫性分子标志物相互作用的特异性来检测组织或细胞中特定的分子标志物。
免疫组化技术可以对肿瘤细胞的表面标志物和内部标志物进行研究，是肿瘤分子诊断中最常用的方法之一。
肿瘤标志物检测是指通过检测肿瘤组织或体液中的特异性分子标志物，评估肿瘤细胞的状态和肿瘤治疗反应。
如前列腺特异性抗原（PSA）用于前列腺癌的诊断和治疗监测；癌胚抗原（CEA）用于结直肠癌和胃癌的诊断和治疗监测等。
临床病理学：肿瘤病理的分子检测
ORR (%)
71.2 vs 47.3 84.6 vs 37.5 62.1 vs 32.2 73.7 vs 30.7
83 vs 36 58 vs 15 61 vs 22 66.9 vs 23.0
PFS (月)
9.8 vs 6.4 8.4 vs 6.7 9.6 vs 6.6 10.8 vs 5.4 13.1 vs 4.6 9.7 vs 5.2 11.1 vs 6.9 11.0 vs 5.6
ROS1 、 RET基因重排
ROS1重排见于2%肺肿瘤；少吸（<10包、年）/不吸 烟患者；年轻患者；腺癌。临床对克唑替尼敏感。 对EGFR TKIs不敏感。 RET基因融合见于1.3%肺癌，腺癌。
临床检测方法：FISH，RT-PCR
HER2在乳腺癌中…
HER2在乳腺癌中…
HER2扩增与肿瘤发生有关。肿瘤体积大 ,无病生存期 短 ,对CMF等方案耐药, 对蒽环类药物比较敏感,50% 患者为ER或PR阳性。
检测：定量PCR或测序。
ALK基因重排在NSCLC中…
发生率： 3-7% 临床特点： 少吸（<10包、年）/不吸烟
年轻患者 腺泡或印戒细胞癌
融合特点： 主要与EML4存在 至少9种融合方式，其他IFGALK, KIF5B-ALK 与其他癌基因变异不共存
靶向药物：克唑替尼
临床检测方法：FISH，增强免疫组化，RT-PCR
EXON
Genet Med 2009:11(1):21–34
胃肠道间质瘤与格列卫
c-kit/PDGFRA突变类型预测伊马替尼疗效，其中c-kit外显子11突变疗效最佳 PDGFRA D842V突变者对伊马替尼原发耐药。 检测方法：DNA测序
基因重排
临床诊断中的病理学与分子生物学相互关系解析
临床诊断中的病理学与分子生物学相互关系解析在临床诊断过程中，病理学和分子生物学是两个密不可分的领域。
病理学通过研究组织和细胞的异常变化来诊断疾病，而分子生物学则通过研究基因和分子水平上的变化来诊断疾病。
两者相互结合，能够提供更准确的诊断结果和更精确的治疗方案。
首先，病理学在临床诊断中扮演着至关重要的角色。
病理学家通过对组织和细胞的异常变化进行研究和分析，可以确定疾病的类型、程度和预后。
例如，在肿瘤的诊断中，病理学家通过组织切片的观察，可以确定肿瘤的组织类型、分级和浸润深度，从而指导医生选择合适的治疗方案。
此外，病理学还能够帮助诊断某些特殊类型的疾病，如传染病的病原体鉴定和组织移植的配型。
然而，仅仅依靠病理学的诊断结果往往无法满足精确诊断的需求。
这时，分子生物学的应用就显得尤为重要。
分子生物学通过研究基因和分子水平上的变化，可以揭示疾病的发病机制和病理基础。
例如，许多遗传性疾病通过检测病人的基因突变来进行诊断。
此外，分子生物学还可以对药物的敏感性和抗药性进行预测，以指导个体化治疗。
通过分子生物学的分析，临床医生可以了解患者的基因信息，并根据个体差异来选择最有效的治疗方法。
病理学和分子生物学的结合，不仅可以提高诊断的准确性，还可以为定制化治疗提供重要依据。
举个例子，对于某些癌症患者，病理学可以确定肿瘤的类型和分级，而分子生物学可以检测肿瘤细胞中的特定基因突变。
根据这些信息，医生可以选择针对该基因突变的靶向治疗药物，提高疗效的同时减少不必要的毒副作用。
此外，对于临床试验和新药开发来说，病理学和分子生物学的结合也具有重要的意义。
病理学可以评估药物对肿瘤组织的影响，而分子生物学可以揭示药物作用的分子机制，从而为新药的研发提供理论指导。
总的来说，病理学和分子生物学在临床诊断中相互依存，相辅相成。
两者结合能够提供更全面、准确的疾病诊断和治疗方案，促进患者的康复和健康。
随着科学技术的不断进步和发展，病理学和分子生物学在临床应用中的地位将变得愈加重要，为医疗领域带来更大的发展和进步。
病理学中的分子诊断技术
病理学中的分子诊断技术随着科技的不断进步，病理学领域中的分子诊断技术也不断升级。
这些技术可以更快速、准确地分析人体疾病的发生和发展，为医生提供更科学、精准的诊断结果，为治疗疾病提供了更有效的指导，对提高临床效率、提高治疗成功率和降低医疗费用等方面都具有重要的意义。
分子诊断技术，是指通过对组织、细胞等样本中相关分子、细胞等方面的特定分析来确定疾病的诊断的一种技术。
分子诊断技术的原理是针对人体中某些分子的异常表达、突变等遗传变异状态进行诊断。
与传统的组织病理学诊断相比，分子诊断技术不但可以更准确的鉴定病灶位置、病理类型，也可以探测到一些传统组织学诊断不能确定的微小病灶或早期病灶。
同时，由于其分子水平的诊断原理，分子诊断技术还可以为各种其他疾病的早期预测和治疗提供重要参考。
近年来，病理学中的分子诊断技术不断向前发展，主要表现在以下几个方面：一、基于普通PCR技术的扩增技术PCR技术是最初被广泛应用的分子诊断技术，在病理学领域有着极为广泛的应用。
基于PCR技术的扩增技术可以针对某一位点进行扩增，指示目标染色体上是否出现对疾病有关的突变，以达到疾病的诊断和预测。
二、基于高通量测序技术（NGS）的分子诊断技术NGS 技术是一种非常先进的分子筛查技术。
现已广泛应用于诊断肿瘤和遗传疾病。
与传统PCR技术相比，NGS技术更为高效，可以在较短的时间内，同时对成百上千个位点进行检测，大大提高了分子诊断的准确性和速度。
三、基于免疫学特异性的分子检测技术基于免疫学的特异性分子检测技术，通过检测患者体液中对特定抗原的抗体水平，判断患者体内对特定疾病的免疫反应。
这种技术通常被用于血清学、免疫学等疾病的检测，如HIV、乙型肝炎、肝癌等的检测等等。
总之，随着分子生物学和基因组技术的不断发展，病理学中的分子诊断技术也不断升级。
这些技术的应用在肿瘤、代谢性疾病等方面已经被广泛应用。
随着技术的进一步优化和普及，病理学中的分子诊断技术对于更准确、更快速地诊断人体疾病、指导治疗等方面将会起到更为重要的作用。
肿瘤的分子病理学与诊断技术
肿瘤的分子病理学与诊断技术随着生命科学技术的不断发展，肿瘤的发生和治疗也得到了越来越多的关注。
肿瘤的分子病理学和诊断技术是现代肿瘤研究的重要组成部分。
本文将对肿瘤的分子病理学和诊断技术进行介绍和阐述，以期让人们了解到肿瘤分子病理学和诊断技术的最新进展和应用。
一、肿瘤的分子病理学肿瘤是一种多因素参与的疾病，发生的原因和机制极其复杂，常常涉及到多个基因和多个信号通路。
因此，肿瘤的病理学、分子生物学和遗传学等学科的交叉研究变得越来越重要。
而肿瘤的分子病理学正是这些交叉学科中的重要一环。
肿瘤的分子病理学主要是通过研究肿瘤细胞的分子遗传学和分子表型学特征，来揭示肿瘤的病理生理机制、分子分类和治疗的靶点。
在分子水平上，肿瘤分子病理学重点研究肿瘤相关基因、调控因子、信号转导通路等方面的分子变化。
这些研究对于肿瘤的早期预防、个体化治疗等方面起到了至关重要的作用。
二、肿瘤的诊断技术诊断是肿瘤治疗的第一步，精准的诊断技术对症治疗至关重要。
肿瘤的诊断技术主要包括影像学诊断、组织学检查和分子生物学方法诊断等。
1. 影像学诊断常见的影像学技术包括CT、MRI、PET等。
这些技术可以直观显示肿瘤的大小、形态、部位等，能够帮助医生做出最初的病变判断。
但是，由于肿瘤的病情复杂变化，影像学诊断不能够提供详细的病理信息和分子水平的信息，常常需要结合其它诊断手段。
2. 组织学检查组织学检查能够直接从肿瘤组织中获取更加精确的病理学信息，是肿瘤诊断的重要手段之一。
目前，通过肿瘤切片染色方法能够检测到肿瘤组织中的细胞类型、生长状态、血流情况、细胞周期等多个指标，为肿瘤精准诊断提供了重要信息。
3. 分子生物学方法诊断与组织学检查相比，分子生物学方法诊断有着更高的灵敏度和特异性，能够从肿瘤组织中检测到更多的分子信息。
目前，分子生物学方法诊断主要包括PCR、FISH、NGS等技术。
其中，PCR技术可以检测病毒DNA和RNA、基因突变等病理因子；FISH技术可以检测蛋白质表达水平、蛋白质重塑等指标；NGS技术可以全面检测肿瘤中的基因、突变、表达水平、CNV等信息。
分子病理学在肿瘤诊断中的应用
分子病理学在肿瘤诊断中的应用肿瘤是一种复杂的疾病，其发展和治疗常常需要准确的诊断。
分子病理学作为一种新兴的技术方法，在肿瘤诊断中扮演着重要的角色。
它通过研究肿瘤细胞的分子变化和信号传递，帮助医生们更准确地判断肿瘤类型、分级和预后，从而指导个体化的治疗方案制定。
本文将探讨分子病理学在肿瘤诊断中的应用。
一、基因突变检测基因突变是肿瘤发生和发展的重要因素。
通过分子病理学技术，可以对肿瘤细胞中常见的突变进行检测，如BRAF、KRAS和EGFR等。
这些突变在不同的肿瘤类型中有着不同的出现频率，并且与药物敏感性和抵抗性密切相关。
通过对肿瘤基因突变的检测，可以为选择靶向治疗药物提供指导，从而提高治疗效果。
二、染色体异常分析染色体异常是肿瘤发展的另一个重要特征。
通过分子病理学技术，可以对肿瘤细胞中的染色体异常进行分析，如染色体的断裂、缺失、重复和易位等。
这些异常往往与特定的肿瘤类型相关，并且在肿瘤的发生、转移以及预后等方面起着重要的作用。
通过染色体异常的分析，可以帮助医生更准确地确定肿瘤类型和分期，从而制定相应的治疗方案。
三、免疫组化检测免疫组化技术是一种常用的分子病理学检测方法。
通过对肿瘤标记物的检测，可以识别肿瘤细胞的特定蛋白表达情况，进而确定肿瘤类型和分级。
例如，对于乳腺癌的诊断，常用的免疫组化标记物包括雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人表皮生长因子受体2（HER2）等。
免疫组化检测在肿瘤诊断中具有很高的准确性和可操作性，已成为临床上常用的诊断手段之一。
四、肿瘤突变负荷检测肿瘤突变负荷是指肿瘤细胞中突变基因的数量和频率。
研究发现，肿瘤突变负荷与肿瘤的敏感性和预后密切相关。
通过分子病理学技术，可以对肿瘤细胞中的突变基因进行检测，并计算出肿瘤突变负荷的值。
根据肿瘤突变负荷的高低，可以对肿瘤的生物学行为和临床表现进行评估，为个体化治疗和预后评估提供参考。
综上所述，分子病理学在肿瘤诊断中具有重要的应用价值。
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HR PFS
0.48 0.61 0.49 0.30 0.16 0.37 0.58 0.28
Mok et al NEJM 2009, Lee et al WCLC 2009, Mitsudomi et al Lancet Oncology 2010, Maemondo NEJM 2010, Zhou et al ESMO 2010, Rosell Lancet Oncol 2012, Yang JC et al ASCO 2012, Wu YL et al ASCO 2013
肿瘤病理的分子检测
分子病理常用检测技术
Taqman-ARMS（与国际获批的技术相当） DNA测序（基因突变检测的金标准技术）
NGS FISH
2
相关的信号通路 ----PI3K-AKT (AKT) 信号通路
PTK=protein tyrosine kinase
相关的信号通路----Ras-Raf-MEK-ERK (MAPK)信号通路
耐药突变
敏感突变
EGபைடு நூலகம்R基因突变位 点靶向药物：易瑞沙，特罗凯
检测：定量PCR或测序。
八项随机研究奠定了EGFR-TKI在 EGFR突变阳性患者中的一线治疗地位
研究
IPASS First-SIGNAL WJTOG 3405 NEJGSG002 OPTIMAL EURTAC LUX-LUNG 3 LUX-LUNG 6
胃癌HER2异质性表达：
部位异质性：胃食管结合部癌(32%)高于胃体(20.9%) 类型异质性：肠型(32.1%)胃癌高于弥漫型胃癌(6%) 肿瘤组织内异质性
MSI/MMR：肠癌预后及5FU疗效预测
微卫星是一种短串联重复序列即DNA重复序列，以1～6个核苷酸为一个单位重复10～60次。 MSI （microsatellite instability，微卫星不稳定性）：由于重复单位的插入或缺失 而造成的微卫星长度的任何改变，出现新的微卫星等位基因。 MSI由MMR （mismatch repair，错配修复基因）缺陷造成。MMR基因（主要是MLH1、MSH2、 PMS2、MSH6）失去功能，导致不能修复DNA复制过程中出现的错配，进而产生MSI表型。 MSI-H（高度微卫星不稳定）见于90%的林奇综合征和10% ~15%的散发性结直肠癌1
检测：定量PCR或测序。
ALK基因重排在NSCLC中…
发生率： 3-7% 临床特点： 少吸（<10包、年）/不吸烟
年轻患者 腺泡或印戒细胞癌
融合特点： 主要与EML4存在 至少9种融合方式，其他IFGALK, KIF5B-ALK 与其他癌基因变异不共存
靶向药物：克唑替尼
临床检测方法：FISH，增强免疫组化，RT-PCR
EGFR history
JCO
20200303
标志小分子靶向药 物治疗时代到来
Prof. Richard of President of ASCO pointed out that “We now need to think about NSCLC as at least 2 distinct types of cancer”.
ORR (%)
71.2 vs 47.3 84.6 vs 37.5 62.1 vs 32.2 73.7 vs 30.7
83 vs 36 58 vs 15 61 vs 22 66.9 vs 23.0
PFS (月)
9.8 vs 6.4 8.4 vs 6.7 9.6 vs 6.6 10.8 vs 5.4 13.1 vs 4.6 9.7 vs 5.2 11.1 vs 6.9 11.0 vs 5.6
1. Expert Rev Gastroenterol Hepatol,2011,5(3):385-399.
MSI 结直肠癌的病理特征(散发性结直肠癌)
① 散发性结直肠癌多位于近端结肠，易伴发肠内或肠外其他 器官的多发性肿瘤
N (EGFR
m+)
261 42 172 224 154 173 308 364
EGFR突变类型
19Del/L858R + other (8%) 19Del/L858R 19Del/L858R
19Del/L858R + other (6%) 19Del/L858R 19Del/L858R
19Del/L858R + other (11%) 19Del/L858R + other
乳腺癌18–20%呈HER2过表达。过表达主要源于基因扩 增。应用FISH检测。
靶向药物Heceptin仅对HER2扩增的乳腺癌有效准确的 检测HER2有无扩增是临床应用Heceptin的绝对必要条 件，也是成功进行靶向治疗的前题和关键
胃癌基因表达和相关基因的突变
胃癌HER2阳性率10%～38% 胃癌EGFR表达阳性率42%-77.1%（IHC） EGFR基因热点位点突变罕见：0%-2.6% Kras突变率0-10% Braf突变率0-2.3% PIK3CA突变率 6%
ROS1 、 RET基因重排
ROS1重排见于2%肺肿瘤；少吸（<10包、年）/不吸 烟患者；年轻患者；腺癌。临床对克唑替尼敏感。 对EGFR TKIs不敏感。 RET基因融合见于1.3%肺癌，腺癌。
临床检测方法：FISH，RT-PCR
HER2在乳腺癌中…
HER2在乳腺癌中…
HER2扩增与肿瘤发生有关。肿瘤体积大 ,无病生存期 短 ,对CMF等方案耐药, 对蒽环类药物比较敏感,50% 患者为ER或PR阳性。
易瑞沙，特罗凯，凯米娜
EGFR-TKI获得性耐药两个主要原因
➢ MET扩增：克唑替尼， FISH
➢ T790M二次突变： AZD9291,PCR或测序
肺腺癌：基因指导的个体化治疗——药靶图
针对肺腺癌的靶向药物
凡德他尼 舒尼替尼 克唑替尼
阿法替尼
吉非替尼 厄洛替尼 阿法替尼
克唑替尼
瑞戈非尼？MEK抑制剂
KRAS基因突变
肺腺癌15–25%存在KRAS突变，肺鳞癌罕见。
KRAS突变在预测E-TKIs治疗效果或预后方面的作用并不一 致。G12C/G12V突变亚组的预后更好但E-TKIs治疗效果更 差，G12D/G12S突变亚组预后较差，但可从E-TKIs治疗中 获益。这些观察结果还有待进一步验证。2014 ASCO